CZ381096A3 - Oligopeptides, conjugates containing them and method of determining proteolytic efficiency of free antigen - Google Patents

Oligopeptides, conjugates containing them and method of determining proteolytic efficiency of free antigen Download PDF

Info

Publication number
CZ381096A3
CZ381096A3 CZ963810A CZ381096A CZ381096A3 CZ 381096 A3 CZ381096 A3 CZ 381096A3 CZ 963810 A CZ963810 A CZ 963810A CZ 381096 A CZ381096 A CZ 381096A CZ 381096 A3 CZ381096 A3 CZ 381096A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
string
type
chain
ser
amino acids
Prior art date
Application number
CZ963810A
Other languages
English (en)
Inventor
Deborah Defeo-Jones
Dong-Mei Feng
Victor M Garsky
Raymond E Jones
Allen I Oliff
Original Assignee
Merck & Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US08/267,092 external-priority patent/US5599686A/en
Application filed by Merck & Co Inc filed Critical Merck & Co Inc
Publication of CZ381096A3 publication Critical patent/CZ381096A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

Oblast techniky
Vynález se týká oligopeptidů, konjugátů těchto oligopeptidů, použitelných pro léčení zhoubných nádorů prostaty a způsobu stanovení proteolytické účinnosti volného antigenu, specifického pro prostatu, v daném vzorku.
Dosavadní stav techniky
V roce 1994 byl zhoubný nádor prostaty pravděpodobně diagnostikován u 200 000 mužů, přičemž 38 000 těchto mužů se pravděpodobně nevyléčí a choroba skončí úmrtím (Garnick. Μ. B, 1994;, The Dilemmas of Prostatě Cancer, Scientific American, duben, str. 72 - 81). To znamená, že zhoubný nádor prostaty je kromě kožních nádorů nejčastějším diagnostikovaným zhoubným nádorem u mužů v USA a druhou příčinou v pořadí úmrtí na zhoubné nádory, ihned za plicními nádory.
Antigen, specifický pro prostatu, PSA je glykoprotein s jednoduchým řetězcem s molekulovou hmotností 33 000, který je produkován téměř výlučně výstelkou lidské prostaty a vyskytuje se v množství 0,5 až 2,0 mg/ml v.e výměšku této žlázy, jak bylo popsáno v publikacích Nadji M., Taber S.
Z., Oastro A. a další, 1981, Cancer, 48, 1229, Papsidero L., Kuriyama M., Wang M. a další, 1981, JNCI, 66, 37, Qui
S. D., Young C. Y. F., Bihartz D. L. a další, 1990, J. Urol. 144, 1550, Wang M. C., Valenzuela L. A., Murphy G. P. a další, 1979, Invest. Urol., 17, 159. Jediná uhlohydrátová jednotka je připojena na zbytek asparaginu v poloze 45 a tvoří 2 až 3000 molekulové hmotnosti z celkové hmotnosti.
PSA je proteáza se specifičností, podobnou chymotrypsinu podle Christensson A., Laurell C. B., Lilja H., 1990,
Eur. J. Biochem., 194, 755 - 753. Bylo prokázáno, že PSA je enzymem, který rozpouští gelovou strukturu, vytvořenou při ejakulaci proteolýzou hlavních bílkovin gelu, Semenogelinu I a Semenogelinu II a také fibromectinu podle Lilja Η., 1985, J. Clin. Invest., 76, 1899, Lilja H, Oldbring J., Rannevik G. a další, 1987, J. Clin. Invest., 80, 281, McGree
R. S., Herr J. C., 1988, Biol. Reprod., 39, 499. Proteolýza gelovitých bílkovin prostřednictvím PSA má za následek tvorbu fragmentů Semenogelinu I v Semenogelinu II a fibronectinu, tyto fragmenty jsou rozpustné a současně dochází ke zkapalnění ejakulátu a uvolnění pohyblivých spermatozoí podle Lilja H., Laurell C. B., 1984, Scand. J. Clin. Lab. Invest., 44, 447, McGree R. S., Herr J. C., 1987, Biol. Reprod., 37, 431. Mimoto může PSA způsobit proteolytickou degradaci IGFBP-3 (faktoru, podobného insulinu a schopného vázat bílkovinu 3), což umožňuje IGF specificky stimulovat růst buněk, v nichž dochází k sekreci PSA'podle Cohen a další, 1992, J. Clin. Endo. a Meta., 75, 1046 - 1053.
PSA ve formě komplexu s alfa-l-antichymotrypsinem je převažující molekulovou formou PSA v séru a tvoří až 95 % prokázaného PSA v séru podle Christensson A., Bjórk R., Nilsson 0. a další, 1993, J. Urol., 150, 100 - 105, Lilja H., Christensson A., Dahlén U., 1991, Clin. Chem., 37, 16181625, Stenman U. H., Leinoven J., Alfthan H. a další, 1991, Cancer Res., 51, 222 - 226. Tkáň prostaty, a to normální, s benigní hyperplasií nebo zhoubně změněná stále převážně vylučuje zralou, enzymat ický úč innou formu PSA vzh1edem k tomu, že tato forma je nezbytná pro tvorbu komplexu s alfa-1-antichymotrypsinem podle Mast A. E., Enghild J. J., Pizzo
S. V. a další, 1991, Biochemistry, 30, 1723 - 1730, Perlmutte D. H., Glover G. I., Rivetna Μ., a další, 1990, Proč. Nati. Acad. Sci., USA 87, 3753 - 3757. V prostředí buněk, které v prostatě vylučují PSA patrně dochází ke zpracování a vylučování tohoto enzymu v jeho zralé, enzymaticky účinné formě bez tvorby komplexů s jakoukoliv inhibiční molekulou. PSA také vytváří stálé komplexy s alfa-2-makroglobulinem, při tvorbě komplexu však dochází k zapouzdření PSA a ztrátě epitopů .PSA,..takže význam tvorby tohoto komplexu in vivo je zcela nejasný, volný PSA~tvořP~3eň'malou-čársiďPSA— v-sé-TAfL .rtu., podle Christensson A., Bjor-k T., Nilsson 0. a další, 1993,
J. Urol., 150, 100 - 105, Lilja H. .^ČhrisťenšsbnŽTCTTíanrérrU. , 19oT/ ClTnT Chem.T^ -37h ^ISlS^^-^l^jSr^Veii-kost-formy^PSA..... v séru je obdobná· velikosti PSA v sekretu prostaty podle Lilja H.Christensson A., Dahlén -U.·, 1991, Clin. Cgem.,
37, 1618 - 1625, není však dosud známo, zda volnou formou PSA v séru může být zymogen, vnitřně rozštěpená neúčinná forma zralého PSA nebo zda běží o PSA s enzymatickou účinností. Je však nepravděpodobné, že by volný PSA v.séru měl enzymatickou účinnost vzhledem, k tomu, že v séru je přítomen velký, 100 až 1000 násobný^molární přebytek nezreagovaného alfa-l-antichymotrypsynu a alfa-2-makroglobulinu ve srovnání s prokázaným množství volné formy PSA s molekulovou hmotností 33 000 podle Christensson A., Bjork T.,
Nilsson 0. a další, 1993, J. Urol·., 150, 100 - 105, Lilja H., Christensson A., Dahlén U., 1991, Clin. Chem. 37,
1618 - 1525.
Stanovení PSA v séru je možno použít pro sledování průběhu léčení adenokarcinomu prostaty podle Duffy M. S., 1989, Ann. Clin, Biochem., 26, 379 - 387, Brawer Μ. K.,
^.a^-Lange^P=..=H.Í,^1989 ,_Urol. Suppl. , 5, 11-16, Hara M. a KimuraH., 1989, J. Lab.Clin. Med., 113, 541,.- 5^8, přestože i u benigní hýperplasi'e_prostaty-a~ po-chirurgickém..zákroku na prostatě bylo možno pozorovat zvýšené koncentrace PSA podle Lilja H., Christensson A., Dahlén U., 1991, Clin. Chem., 37, 1618 - 1625.Bylo také popsáno, že i metastázy zhoubných nádorů prostaty vylučují imunologicky reaktivní PSA vzhledem k tomu, že PSA je možno prokázat ve vysoké koncentraci i nemocných po vyjmutí prostaty v případě, že tito nemocní trpí metastázami podle Ford T. F., Butcher D. N., Masters R. W. a další, 1985, Brit. J. Urology, 57,
- 55. Je tedy možno předpokládat, že cytotoxické látky, e které by byly aktivovány proteolytickou účinností PSA by měly být specifické pro prostatické buňky a také pro meta? stázy, vylučující PSA.
Vynález· si klade za úkol navrhnout nové oligopeptidy, které by byly selektivně enzymaticky štěpeny účinným volným antigenem, specifickým pro prostatu, PSA.
i'·!“ ,
Vynalez si rovněž klade za úkol navrhnout kvantitativJ.
ní stanovení účinného PSA enzymatickým způsobem při použití ' Λ nových oligopeptidů.
Vynález si rovněž klade za úkol navrhnout nový prostředek, určený pro léčení zhoubných nádorů prostaty, obsahující nové oligopeptidy ve formě konjugátů s cytotoxickými látkami.
Tyto konjugáty by měly být použitelné zejména pro léčení zhoubných nádorů prostaty.
Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvoří oligopeptidy se sekvencí aminokyselin, která je rozpoznávána a selektivně proteolyticky štěpena volným antigenem, specifickým pro prostatu.
Bylo identifikováno několik míst štěpení, v nichž je semenogelin I selektivně proteolyticky štěpen volným PSA.
Dále budou popsány oligopeptidy, tvořené sekvencí aminokyselin, která je rovněž rozpoznávána a proteolyticky štěpena volným antigenem, specifickým pro prostatu, ťSA. ryto oiigopeptidy je možno využít pro stanovení volného PSA s proteooligopeptidy použít jako účinnou složku farmaceutických prostře dkuve Tormě' kbnjůi^Tů~^lů.'gd^pt'iaůT~Be~zrrámými--c y bo bo-=— ^xickýmř -látkami-r~:-Ty-to^f armaosutioké.aĚ.prostředky^hy,mměly\_být^ __ použitelné pro léčení zhoubných nádorů, prostaty.
«
Vynález, bude dále popsán v souvislosti s přiloženými výkresy.
Přehled obrázků na výkresech
Na obr. la a lb je znázorněna primární sekvence aminokyselin semenogelinu I (řetězec č. 1). Místa ;.pro proteolytické štěpení působením PSA (CS) jsou číslována podle relativní afinity místa vzhledem k hydrolýze PSA a bílkovinné fragmenty jsou číslovány‘postupně od :aminoterminálniho konce.
Na obr. 2 je znázorněna afinita syntetických oligopeptidů ke štěpení. Byla připravena řada těchto oligopeptidů, které pak byly štěpeny po různou dobu účinným volnýmPSA, Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2. ND ~ nebylo stanoveno.
Je použit systém označení aminokyselin jedním písmenem:
...A.=== A1a, Ξ-. Glu.G- Gly, H = His, I = Ile, K = Lys, L = Leu, N = Asn, Q = Gin, R = Arg, S = Ser, T = Thr, Y = Tyr.
Na obr. 3a a 3b je znázorněna afinita syntetických oligopeptidů ke štěpení. Oligopeptidy byly připraveny a štěpeny účinným volným PSA 4 hodiny. Bylo zaznamenáno.množství rozštěpeného oligopeptidů po této době v procentech. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 4.
Na obr. 4 je uvedena cytotoxicita neštěpitelných konjugátů oligopeptidu a doxorubicinu. Je znázorněna cytotoxicita doxorubicinu a konjugátu doxorubicinu, kovalentně vázaného na oligopeptid (sloučenina 12d), neobsahující místo štěpení pro volný PSA. ΙΟ^θ pro doxorubicin je 0,3 mikromol, kdežto acetylovaný, oligopeptidem modifikovaný doxorubicin má více než 300x nižší. Podle HPLC nebyl tento konjugát znečištěn nemodifikovaným doxorubicinem. Samotný oligopeptid byl zcela neúčinný, pokud jde o cytotoxicitu.
Na obr. .5 je znázorněna afinita oligopeptidu, konjugovaných s doxorubicinem ke štěpení volným PSA in vitro. Konjugáty byly připraveny a štěpeny účinným volným PSA celkem 4 hodiny. Je uvedeno množství konjugátu, rozštěpeného ¢,/ g, v oligopeptidu v -procentech. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 5.
Na obr. 6 je znázorněna afinita konjugátů oligopepti' ť dů s doxorubicinem v prostředí s obsahem buněk ke štěpení.
*4‘‘ '4i Konjugáty byly na 4 hodiny uvedeny do styku s buněčným pro1 středím, vystaveným působení buněk LNCaP, o nichž je známo, že vylučují volný PSA nebo buněk DuPRO, které tuto látku nevylučují. Je uvedeno množství konjugátu v procentech, které je v průběhu tohoto období enzymaticky rozštěpeno v oligopeptidové části. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 6.
i*
Na obr. 7 jsou uvedeny údaje o cytotoxicitě rozštěpitelných konjugátů oligopeptidů s doxorubičinem. Údaje v ta- ‘ bulce 7 shrnují cytotoxicitu konjugátů doxorubicinů, konjugovaného s oligopeptidem, který obsahuje místa působení volného PSA proti buněčné linii nádorových buněk, která vylučuje volný PSA, účinnost je uvedena jako IC5Q. Pro vybrané konjugáty je uvedena také cytotoxicita pro buněčnou linii DuPRO , jejíž buňky nevylučují volný PSA.
Nové oligopeptidy podle vynálezu jsou tedy specificky rozpoznávány volným antigenem, specifickým pro prostatu,.
PSA a mohou být tímto antigenem proteoiyticky stepeny. Tyto ol i g o p e p t i dy · z ah rnu j í - o ligomery.,; které . jsou _tvoř eny_nás^ledujícími sekvencemi aminokyselin:
a) AsnLysfleSerTyiGlniSer (řetězecč. 13
b) LysíieSerTyrGlníŠer (řetězsc č. 14),
c) GlyGluAsnGlyValGlnLys Asp ValSerGInXaaSeríIeTyrjSeiGlnThiGlu (řetězec č . 15) ,
d) GlyLysGlylleSerSerGlnTyríSerAsnThiGluGluArgLeu (řetězec Č. 2)',
e) AsnLysIleSerTyrTyrlSer
f) AsnLysAIaSerTyrGlniSer
g) SerTyrGlniSerSer
h) LysTyrOiniSerSer
i) hArgTyrGínjSerSer (řetězec č. 127), (řetězec č. 128),
(řetězec č. 129) ,
c s 140 ) a
(rctSZcC C O 1 A 1 > -u-Ti / 9
kde hArg znamená homoarginin a Xaa znamená jakoukoliv přírodninám inoky s e^ínuT^— — - — ~
V jednom z provedení vynálezu zahrnují oligopeptidy oligomery, které jsou tvořeny následujícími sekvencemi aminokyselin:
a) AsnLysUeSerTyrGlnlSerSer (řetězec δ.16),
b) AsnLysIleSerTyrGlnlSerAla (řetězec δ. 130),
c) AsnLysIleSerTyrGlnlSerSerSer (řetězec č. 17),
d) AlaAsnLysUeSerTyrGlnlSerSerSer (řetězec č. 18),
e) LysUeSerTyrGlniSerSerSerThrGlu (řetězec č. 19),
f) GlyGluAsnGly ValGlnLysAsp ViSerGlnArgSerlleTyrlSerGlnThiGlu (řetězec δ. 4),
g) GlyGluAsnGly V alGlnLysAsp ValSerGlnSerSerlleTyrlSerGlnThrGlu (řetězec δ. 5) ,
h) AlaAsnLysIleSerTyrTyrlSer (řetězec č.131),
i) AlaAsnLysAlaSerTyrGlnlSer (řetězec ě. 132),
j) SerTyrGlnlSerSeťThr
k) SerTyrGlniSerSerSer
l) LysTyrGlnlSerSerSer
m) hArgTyrGlnlSerSerSer
n) SerTyrGlnlSerSerLeu
(řetězec δ. 133),
(řetězec δ. 134) ,
(řetězec č, 142) ,
(řetězec δ. 143) a
(řetězec c. 135) .
Ve výhodném provedení vynálezu oligopeptidy zahrnují oligomery, tvořené následujícími sekvencemi aminokyselin
a) AsnLysfleSerTyrGln ISerSerSerThr (řetězec č. 10),
b) AlaAsnLysfleSerTyrGlniSerAIa (řetězec č. 136), _t (řetězec č. 3),
d) ‘‘AlaAsĚLÉysUeberiyrOlniSerSerSerTarGlu* -vrcxs
e) GlyGluAsnGlyVaiGiBLysAspValSerGInAraSerHeTyriSerGlnThiGk (řetězec'Č. 4),
f) AlaAsnLysUeSerTyrTyrlSerSer (řetězec č. 137),
g) AlaAsnLysIleSerTyrTyrlSerAlar (řetězec δ. 138),
h) AlaAsnLysAdaSerTyrGlníSerAla (řetězec č. 139),
i) -AlaSerTyrGInlSerSerLeu (řetězec· č. 94),
V dalším možném provedení vynálezu je oligopeptid tvořen oligomerem s následující sekvenci aminokyselin..
a) GlyArgLysAiaAsnLysUeSerTyrGlniŠerSerSerT
LeuHišTyrGlyGluAsnGly (řetězec c. 6).
ffATg .výraz oligomery^T^tvo řehe“šěkve rve r“amřrto ky se lín = -?ngmAná^v^průběhu^přihI.áškv^ol.igomerv_Q-:J. až^lOO. zbytcích aminokyselin, které obsahují v této sekvenci uvedené řetěz ce aminokyselin a které jsou proto proteolyticky štěpeny v tomto řetězci aminokyselin působením volného PSA. Například oligomer s následujícím řetězcem GlnLeuAspAsnLysfleSerTyrGlniSerSerSerThrHisGlnSerSer · (řetězec č. 20) obsahuje následující sekvenci aminokyselin
AsnLysfleSerTyrGlnlSerSerSerThr (řetězec č.-io) a spadá tedy do rozsahu vynálezu. Je samozřejmé, že oligomery tohoto typu nezahrnují semenogelin I a semenogelin II.
C-.
Je také zřejmé, že vynález zahrnuje oligomery, v nichž je N-terminální nebo C-terminální aminokyselina modifikována nebo jsou modifikovány obě tyto aminokyseliny. Může jít například o acylaci aminoskupiny na N-terminálním zakončení nebo o tvorbu amidu na karboxylové kyselině na C-terminálním zakončení. Přidávání takových skupin je možno uskutečnit v průběhu syntézy oligomeru na pevné fázi, přidání C-terminálni aminokyseliny na pryskyřici jako pevné fázi je tedy možno uskutečnit s použitím aminu, čímž vznikne amidová skupina po odštěpeni oligomeru z pryskyřice působením kyseliny. Následující sloučeniny je tedy možno považovat za oligomery, obsahující sekvenci aminokyselin, tyto sloučeniny jsou uvedeny pouze pro ilustraci a nikoliv pro omezení rozsahu vynálezu.
AlaAsnLysUeSerTyrGlniSerSerSerThrGlu-amidi (řetězec č. 11) Ac-AlaAsnLysIIeSerTyrGlnlSerSerSerThiLeu (řetězec č. 70)
Ac-AlaAsnLysIleSerTyrGlniSerSerSerThrGlu-aiiiid Ac- AlaAsnLy slleS erT yrGInISerSerSerThrLeu-amid Ac-AlaAsnLysHeSerTyrGÍnlSerAlaSeťThrGlu-amid Ac-AlaAsnLysfleSerTyrGlniSerSerLysThrGlu-amidi (řetězec c (řetězec Č (řetězec č (řetězec Č
11)
70)
73)
74)
Ac-AlaAsnLysfleSerTyrGlniSerSerTnrGlu-amidí_________( řetězec 5. 75) „
Ac-AlaAsnLysUeSerTyrGlniSerSerGlnTnrGlu-aiiiidi (řetězec č- 78) Ac-AIaAsnLysUeSerTyrGIniSerAlaLysThrGlu-amid (řetězec č-r 79)
Ac-AlaAsnLysIIeSerTyrGlniSerThrGlu-amid (řetězec č. 81)_
Ac-AlaAsnLysSerTyrGIniSerSerThrGlu-amid- (řetezec č. 82) Ac-AlaAsnLysAlaSerTyrGlnlSerAlaSerThrGlu-aniid (řetězec S.84)
Ac-jUaAsnGlufleSerTyrGlnlSerAlaSerThrGlu-aimd (řetězec č. 85) Ac-AšnLysIleSerTyrGlnISerSer-amid (řetězec č. 16) Ac-LysUeSerTyrGlnlSerSer-amid (řetězec č. 86)
Ac-SerTyrGlnlSerSerThrGlu-amid (řetězec 6.-87 Ae-AlaSerTyrGlnÍSerSerThrGlu-amid (řetězec 6,-89) Ac-AlaAsnLysfleSerTyrTyrlSerSerSerrnrGlu-amidí (řetězec č. 92) ^^AcgAíaAsnteneSerZYfTyriSgAlaSerThrGla?amid.,^j(ře.těz.ec 93) Ac-AlaSerTyrGlnlSerSerLeu-amid (řetězec č. 34)'
-----Á~c^A4a-Asr.£gr^yTOg&^ (řetězec č. 35)_
-„A.c-AJ.aSerTyTGlniSerSerSerThrGlu-amid (řetězec č. 96)
Ae-SerTyrGInlSerSerSerThrGIu-amid (řetězec cA97)~
Ac-AlaAsnLysAlaSerTyrGiníSerAlaSerGys-amid (Setěžče c. os)
Odborníkům bude zřejmé, že některé aminokyseliny v biologicky účinném oligopeptidu je možno nahradit jinými homologními, isosterickými a/nebo isoelektronickými .amino• kyselinami, přičemž v modifikovaném oligopeptidu zůstává zachována jeho biologická účinnost. Jako příklad je možno uvést následující aminokyseliny, které mohou být nahrazeny určitými, rovněž uvedenými aminokyselinami. - >
Původní aminokyselina Aminokyselina po náhradě
Ala ' Arg ~
Asn
Asp
Glu
Gin
Gly ’ —- - Leu
Lys
Met
Omithin.
Phe ·
Ser
Gly
Lys, Omithin·
Gin Glu '
Aso
4»
Asn
......... Val, Leu, Met, Nle
Ile, Val, Met, Nle
Arg, Omithin Leu, Re, Nle, Val Lys, Arg Tyr, Trp Thr fa..
<
?·:
Thr Ser
Trp Phe, Tyr
Tyr Phe, Trp
Val Leu, fle, Met, Nle
Běžnými postupy je například možno syntetizovat následující oligopeptidy, u nichž je možno očekávat, že budou proteolyticky štěpeny volným PSA.
AsnArgUeSerTyrGlníSer (řetězec č. 2iů
AsnLys ValSerTyrGlniSer (řetězec č. 22)
AsnLysMetSerTyrGlnlSerSer (řetězec S. 23) AsnLysLeuSerTyrGlnISerSer (řetězec č. 24) AsnLysfleThrTyrGhiiSerSerSer (řetězec č. 25) AsnLysfleSerPheGlniSerSerSer (řetězec č. 26) AsnLysfleSerTrpGlnlSerSerSerThr (řetězec č. AsnLysfleSerTyrAsniSerSerSerThr AsnLysfleSerTyrGlnlThrSerSerThr AsnLysfleSerTyrGlníSer
GlnLysfleSerTyrGlníSerSer AsnArgfleThrTyrGlniSerSerSer AsnArgfleSerPheGlnlSerSerSerThr AsnArgfleSerTrpGlnlSerSerSerThr AsnArgfleSerTyrGlnlThrSerSerThr 'AsnLysfleThrTyrGlníThrSerSerThr AsnLysLeuSerTyrGlniThrSerSerThr GlnLysLeuSerT yrGlnlSerSerSerThr
AsnLys V alSerPheGlnlSerSerSerThr (řetězec (řetězec (řetězec (řetězec (řetězec (řetězec (řetězec (řetězec (řetězec (řetězec (řetězec (řetězec (řetězec
27)
28)
29)
30)
31)
32)
33)
35) .
36)
37)
38)
39)
40)
41)
AsnArgValSerTrpGlniSerSerSerThr (řetězec č.42)
GlnLysValSerTyrGlnlSerSerSerThr (řetězec č.43)
GlnLysfleSerTyrGlnlThrSerSerThr (řetězec č.34)
AsHLysfleSerTyrGlnlSerSerSerThr (řetězec č. 44).
Obdobně také následující oligopeptidy, které mohou být syntetizovány běžnými postupy budou proteolyticky št pěny volným PSA.
(řetězec č. 45),
GlýGIiLAsnGlyLsuGlnLysAspVdSerom&crSerSeTyrÍSerGln-ThfGlu/,ře těže c č · A”? y
GlyGniLAs^hGlyVaLAsnLys.AspValSerGlsSerSernsTyriSerGlnThiGlu (řetězec č, 48),
GlvGluAsnGlyValGlnArgAspValSerGlnArgSerileTyriSerGlnllirGlu (řetězec č. 49) ,
GlyGluAsnGly V alGlnLysAsp V alSerGlnLysSerHeTyriSerGlnThrGlu .( řetězec č . 50) ,
GlyGluAsnGlyValGlnLysAspLeuSerGInThrSerlleTyríSerGlnThrGlu (řetězec Č. 51) ,
GlyGluAsnGly V alGlnLysAsp V alSerGlnSerSerHePheiSerGlnThrGlu (řetězec č. 52),
GlyGluAsnGly V alGlnLys Asp V alSerGlnArgSerHeT yrlThrGlnThrGlu (řetězec č . 54) , (řetězec č. 55),
GlyGluAsnGly V alGlnLys Asp V aiSerGlnArgSerHeTyríSerAsnThrGlu (re tézec č. .56 ) ,
-GlyLysAlaDeSerSerGlnTyrlSerAsnThrGluGluArgLeu (řetězec S. 57),
GlyArgGlyHeSerSerGlnTyrlSerAsnThrGluGluArgLeu (řetězec č. 59),
GlyLysGlylleThrSerGlnTyrlSerAsnThrGluGluArgLeu (řetězec c. 60),
GlyLysGlylleSerThrGlnTyriSerAsnThrGluGIuArgLeu (řetězec č. 61),
GlyLysGIyneSerSerAsnTyrlSerAsnThrGluGluArgLeu (řetězec č. 62) ,
AlaLysGlyHeSerSerGInTyriSerAsnTIirGluGluArgLeu (řetězec č. 63),
GlyLysGlyQeSerSerGlnPhelSerAsnThrGluGluArgLeu (řetězec č. 64),
GlyLysGlyfleSerSerGlnTyriThrAsnThrGluGluArgLeu (řetězec č. 65), ,
GlyLysGlylleSerSerGlnTyrlSerAsnSerGluGluArgLeu ( řetězec č . 58) a
GlyLysGlyHeSerSerGlnTyrlSerAsnThrAspGluArgjLeu (řetězec č . 46 ) , a podobně.
Uložení symboluv]. u určité aminokyseliny označuje místo, v němž je sekvence aminokyselin v oligopeptidu pro.teolyticky štěpena volným PSA.
Vynález se rovněž týká způsobu stanovení proteolytické účinnosti volného PSA v prostředku. Jde o důležité provedení vynálezu vzhledem k tomu, že tímto stanovením je možno kvantitativně měřit množství volného PSA, přítomného v některých fyziologických tekutinách a tkáních. Zkouška tohoto typu také umožní sledovat izolaci a čištění volného PSA a současně je možno ji využít jako zkoušku na přítomnost “inhibitorů protěólýtické účinnosti volného PSA. Způsob obecně zahrnuje stanovení schopnosti prostředku, který pravděpodobně obsahuje enzymaticky účinný volný PSA, štěpit proteolyticky příslušný oligopeptid.
Zkouška se v běžných případech provádí při použití některého ze svrchu uvedených oligopeptidů. Může však být zvláště vhodné navrhnout zkoušku, při níž je oiigopeptid, obsahující místo štěpení označen, takže je možno měřit množství takového značení, například radioaktivního označení v nerozštěpeném oligopeptidu a také v té části oligoσβσ t řduT^kt e r á-p-o-r ozš^epahí^ob-s áhújeú ± otojo z naceni;,Vynález se dále tyKa schopných způscbit-únhibici
Předpokládá se - zs ^půsatrcr-yyhl-ad-áv-án-í—eio-uč-enixup r o t e o 1 v t i c k é jí č i η no s t i v o 1 n é tento postup bude použitelný obecně pro jakoukoliv sloučeninu k inhibičním účelům, bil kovinné nebo peptidylové povahy.
Podstatu vynálezu tedy rovněž tvoří způsob stanoveni schopnosti zkoumané látky způsobit inhibici proteo.lytické účinnosti volného PSA, postup spočívá v tom, že se
a) uvede do reakce substrát, tvořený sekvencí aminokyselin, obsahující místo, rozpoznávané a selektivně proteolyticky štěpené volným antigenem, specifickým pro prostatu, se specifickým antigenem, specifickým pro prostatu v přítomnosti zkoumané látky a stanoví se, zda substrát byl rozštěpen, což je známkou schopnosti zkoumané látky způsobit inhibici proteolytické účinnosti ántigehu, specifického pro prostatu, stanovení je možno uskutečnit určením poklesu rozštěpení substrátu ve srovnání se štěpením v nepříst omnosti zkoumané látky.
“2koú šT<šr^e“pr ovaRTí“ j eúno duc hým“ z p ůso b em—a—-j^e-v-mno h a«— směrech obdobná svrchu uvedené zkoušce pro stanovení proteolytické účinnosti. Po získání poměrně čistého vzorku volného PSA by mělo jednoduchým způsobem dojít ke smísení zkoumané látky s proteolytickým prostředkem, s výhodou za podmínek, při nichž by docházelo v nepřítomnosti zkoumaných látek k proteolytickému štěpení působením PSA. Bylo by například možno do směsi zařadit známé množství oligopeptidů se specifickým místem pro štěpení PSA, například některý ze svrchu uvedených oligopeptidů. Podle jeho štěpení by pak bylo možno měřit schopnost zkoumané látky snížit množství rozštěpeného oligopeptidů v přítomnosti této látky.
Může také být žádoucí stanovit účinnost volného PSA v nepřítomnosti zkoumané látky a vyjádřit ji ve vztahu k účinnosti v přítomnosti této látky.
Podstatu vynálezu tvoří rovněž nové farmaceutické prostředky, určené pro léčení zhoubných nádorů prostaty. Tyto prostředky obsahují oligopeptidy podle vynálezu, vázané kovalentně nebo přes chemický vazný řetězec na cytotoxickou látku. Takovou kombinaci oligopeptidů a cytotoxické látky je možno označit za konjugát. Cytotoxická účinnost cytotoxické látky je podstatně snížena nebo se neprojevuje v případě, že konjugát, v němž je tato látka vázána na oligopeptid se specifickým místem štěpení PSA je neporušený. Cytotoxická účinnost této látky se však podstatně zvýší nebo se navrátí až k původní účinnosti po proteolytickém rozštěpení vázaného oligopeptidů v místě štěpení. Velmi výhovným provedením je konjugát, v němž oligopeptid a popřípadě přítomný chemický vazný řetězec jsou zcela odděleny od cytotoxické látky proteolytickou účinností volného PSA a jakýmkoliv jiným proteolytickým enzymem v blízkosti tkáně za uvolnění nemodifikované cytotoxické látky do okolního prostředí.
Je zřejmé, že oligopeptidem podle vynálezu, konjugovaným s cytotoxickou látkou a vázaným přímo nebo přes chemický vazný řetězec na cytotoxickou látku nemusí být oligopeptid, vysoce rozpoznávaný volným PSA a okamžitě touto látkou proteolyticky štěpený. Volba oligopeptidů pro zařazení do farmaceutického prostředku se bude řídit jednak schopností volného PSA selektivně štěpit tento oligopeptid a cytotoxickou účinností cytotoxické látky se zbytkem konjugátu nebo v ideálním případě bez tohoto zbytku po rozštěpení konjugátu působením PSA.
že k^- -iiiCTá-t-v nortl p wnálezu ie možno použít k modifikaci dané biologické odpovědi, nemusí být cytotoxická 'látka omezena—naHciasické cherriické—latky-pcuz:
polypeptid s žádoucími biologickými vlastnostmi. Jako příklady takových bílkovin je možno uvést toxiny, jako abrin, ricin A, exotoxin Pseudomonas nebo toxin záškrtových bakterií a dále různé další faktory, jako faktor nekrosy nádorů, alfa-interferon, beta-interferon, růstové faktory pro nervovou tkáň, růstový faktor, odvozený od krevních destiček, Aktivátor plasminogenu a také látky, modifikující biologické reakce, jako jsou lymfokiny, interleukin-1, IL-1, interleukin 2, IL-2, interleukin-6, IL-6, faktor, stimulující tvorbu kolonií granulocytů a makrofágů, GM-CSF, faktor, stimulující tvorbu kolonií granulocytů, G-CSF a také různé další růstové faktory.
Výhodnými cytotoxickými látkami jsou obecně alkylační činidla, antiproliferativní látky, látky, schopné vazat tubulin a oodobně
Výhodnou skupinou fytotoxických látek je například anthracyklinová skupina látek, ucinne iatxy ceieui vinca, mitomyciny, bleomyciny, cytotoxické nukleosidy, pteridinové látky, diyneny a podophyllotoxiny. Zvláště vhodnými lá t k am i“z “ t ěc'h t o “ skup i n* -j s o do xo rub i c i-n v-=o ar mino my c-i.a-,—-—daunorubicin, aminopterin, methotrexát, methopterin, dichlormethotrexát, mitomycin C, porfiromycin, 5-fluorouracil, 6-merkaptopurin, cytosinarabinosid, podophyllotoxin nebo jeho deriváty, jako etoposid nebo etoposidfosfát, melphalan, vinblastin, vincristin, leurosidin, vindesin, leurosin a podobně. Další vhodné cytotoxické látky jsou estramustin, cisplatina a cyklofosfamid. Odborník snadno uskuteční chemické modifikace vhodných látek tak, aby bylo možno připravit konjugáty podle vynálezu.
Velmi výhodnou skupinou cytotoxických látek pro uvedené použití jsou sloučeniny s následujícími vzorci:
Methotrexatové deriváty obecného vzorce 1:
\ COR9 \y-CONHCHCH2CH2CO2H Ra (1) «»·.'
kde
R znamena aminoskupinu nebo hydroxyskupinu,
R znamená atom vodíku nebo methyl,
R znamená atom vodíku, fluoru, chloru, bromu nebo jodu, 9
R znamena hydroxyskupinu nebo skupinu, která vytváří sůl s karboxylovou kyselinou.
Mitomyciny obecného vzorce 2:
(2) kde
R10 znamená atom vodíku nebo methyl,
Bleomyciny obecného vzorce 3:
(3) kde _11 κ
znamená hydroxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu nebo dialkylaminoskupinu vždy o 1 až 3 atomech uhlíku v álkylových Částech, polymethyrenamrnO-skupirtu » poly‘m e t hy-lenom- s kup i no u „.0^.4 až., Β _ a t o me c h uh Lí ku,________
NH ii
-NHCH2CH2CH2S-CH3 ; · -NHCH2CH2CH2CH2NH-C-NH2 ;
CH3
Melphalan vzorce 4:
N(CH2CH2CI)2
Cytosinarabinosid vzorce 6:
(6)
Podofylotoxiny obecného vzorce 7:
kde znamená atom vodíku nebo methyl, znamená methyl nebo thienyl, nebo jejich fosfáty,
Alkaloidy z čeledi vinca obecného vzorce 8:
R1S
(8) kde znamená vodík, methyl nebo CHO v případe, že se význam >7 8
R“ a R uvádí jednotlivě,
X 3 1 β 1 7
R znamená atom vodíku a jeden ze symbolů R1 a R1 znamená ethyl a druhý atom vodíku nebo hydroxyskupinu,
18 nebo R a R společně tvoří s atomy, na něž jsou vázány oxiranový kruh a R znamená athyl,
1Q
R znamena atom vodíku, alkyl-CO o 1 až 3 atomech uhlíku v alkylové části, popřípadě substituovaný atomem chloru
Difluornukleosidy obecného vzorce 9:
kde
R znamená atom vodíku, methyl, atom bromu, fluoru, chloru nebo jodu,
R... znamená hydroxyskup inu nebo. aminoskupinu
R znamená atom vodxku, bromu, chloru nebo jodu,
An trscykxino vá'antiblo t ±ka;Avzo r c eiO :
(10) kde
C
_A
ΪΓ
znamená -CH, , -CH,OH, -cH,OCO( CH,) ,CH, nebo'
-CH2OCOCH(OC2Hg)?, znamená -QCH,, -OH nebo -H, •'•a* W znamená -NH2 , -NffCOČF^ , 4-mo=rforínyr7=3-lčýáňd^4-mdrf o 1 iny 1.,=1 -p: i per i d i ny l_4-me t ho xy-1 -p i o e ridiny1, _ _ .
benzylamin, dibenzylamin, kyanomethylamin nebo 1-kyano-2-methoxyethy1amin, znamená -OH, -OTHP nebo -Ha znamená -OH nebo -H za předpokladu, že vprípadě, že R5 je -OH nebo -OTHP, má R6 odlišný význam od -OH.
Estramustin vzorce 11·:
Cyklofosfamid vzorce 12:
,N(CH2CH2Ci)2
NH
Nejvýhodnějšími látkami z této skupiny jsou svrhchu popsaná anthracyklinová antibiotika obecného vzorce 10. Odborníkům bude zřejmé, že uvedený strukturní vzorec zahrnuje řadu látek a jejich derivátů, které jsou již v oboru nazvány určitými názvy. V následující tabulce 1 je uvedena řada antracyklinových látek spolu se svými názvy. Tyto látky jsou zvláště vhodné pro použití v konjugátech a ve farmaceutických prostředcích podle vynálezu.
m ti.
O
O
£)(N(N(N(S(N(S(NU
Sz Z Z Z Z Z Z Z Z (O un
C\J cti
E->
rn)O
U O Ξ o o o
CN x“s
V*, <*ί m m c**>
CN (J
O C>
O cm
O /·*. .·*»..·
X »e —, — X z=s z-\ w O v-/ gj gj
CN CN ΓΠ C*S CN CN CN
GJ
CN cn —4·*» _ _ _ _ _ _. _ _ ,v! r \ r\r\r\r\r\r\r\r\
UĚ.Í O O G> G> G^ G^ G^ « _ cti e A c
c <u >g □
o rH cn υ
o c
te •O .S e .Sž o -gLS = 5 S O o
T3 o
>» _ g e e .e O '5 ’ΰ .U c 2 15 ’ε Ξ 2 5 a. 2 « ·3 o 2Z Q tO —3 Ok. C/3 “
Q .3 « «
CL.
e« •H
O >>
c
O c
čti
Ό cti
C ><L)
Ό 'Cti >
'0 v
Cti +J 'Cti >
G >, ε
cti ♦rH íΌ cti
O cti
Ό c
><u
O 'Cti
Ό
Cti +J 'Cti
-v^—,>-Q '>, £>
c
X2
í.
o c
□
Cti
Ό c
•fH
G
Ή
X) ίΟ
X o
Ό
II II Cti· JO
Ze sloučenin, uvedených v tabulce 1 je nejvýhodnější látkou doxorubicin, uváděný také jako DOX. Jde o antracyklin „ 1 3 4 obecného vzorce 10, v nemz R je -CH_OH, R je -OCHq, R
6 ά J je -NH2, R je -OH a R je atom vodíku.
Oligopeptidy, podjednotky peptidů a peptidové deriváty (v průběhu přihlášky souhrnně označované jako peptidy) je možno syntetizovat z aminokyselin obvyklou syntézou peptidů, s výhodou technologií na pevné fázi. Výsledné peptidy se pak čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií, HPLC, v reverzní fázi.
Standardní postupy pro syntézu peptidů byly uvedeny napřílklad v následujících publikacích Schroeder a další,
The Peptides, sv. I, Academie Press, 1965, Bodansky a další, Peptide Synthesis, Interscience Publishers, 1966, McOmie (ed.), Protective Groups in Organic Chemistry, Plenům Press, 1973, Barany a další, The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, 2, kap. 1, Academie Press, 1980 a Stewart a další, Solid Phase Peptide Sybthesis, 2. vydání, Pierce Chemical Company, 1984.'
Konjugáty podle vynálezu, obsahující oligopeptidy s místem štěpení působením PSA a cytotoxickou látku mohou být připraveny rovněž způsoby, známými v lékařské chemii. Je například možno volnou aminoskupinu cytotoxické látky kovalentně vázat na oligopeptid na jeho karboxyterminálním konci za vzniku amidové vazby. Tutéž vazbu je možno vytvořit také vazbou aminoskupiny oligopeptidů s karboxylovou skupinou cytotoxických látek. Tyto reakce se obvykle provádějí s použitím příslušných činidel, například kombinace 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfátu, HBTU, a 1-hydroxybenzotriazolhydrátu HOBT, dicyklohexy1karbodiimidu, DCC, N-ethyl-N-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu, EDO, difenyIfosforylazidu, DPPA, benzotriazol-1________ zn
------t .
-yl-oxy-tris-(dimethylamino)fosfoniumhexafluorofosfátu, BOP a podobně.
Mimoto je možno, konjugátyvytvořit nepeptidylovou vazbou mezi specifickým místem štěpení působením PSA a cytotoxickou sloučeninou. Je například možno postupovat tak, že se cytotoxická sloučenina kovalentně váže na karboxyterminální zakončení oligopeptidu přes 'hydroxylovou* skupinu na cytotoxické sloučenině, čímž dochází k vytvoření esterové vazby. K tomuto účelu je možno použít příslušné reakční činidlo, například v kombinaci HBTU a HOBT, kombinaci BOP a imidazolu, kombinaci DCC a DMAP a podobně. Karboxylovou kyselinu je také možno aktivovat tvorbou nitrofenylesteru a podobně a uvést do reakce v přítomnosti DBU, 1,8-diazabicyklo/5,4,0/undec-7-enu.
Konjugáty podle vynálezu je možno vytvořit taká spojením oligopeptidů a cytotoxické sloučeniny přes vazný řetězec. Jednotky tohoto typu zahrnují například dikarbonylaikylové skupiny, přičemž aminoskupina cytotoxické sloučeniny je spojena se spojovacím řetězcem vytvořením amidové vazby a aminoterminální zakončení oligopeptidu je spojena s druhým koncem vazného řetězce rovněž za vytvořen amidové vazby. Je možno použít i jiné vazné jednotky podob ného typu za předpokladu, že jsou stálé ve fyziologickém prostředí, v němž se nenachází volný PSA, avšak k jejich -š t ě p e n í=d o ch áz í _v_p.ř. í s 1 u š né m„ š.t ě.p n é m=m í stě v přítomnosti PSA. Mimoto je možno využít také takové vazné řetězce, kte ré po rozštěpení specifického místa pro štěpení působením“ PSA zůstanou spojeny s cytotoxickou sloučeninou, avšak nesnižují významnějším způsobem cytotoxickou účinnost této látky, spojené s uvedeným zbytkem ve srovnání s účinností nemodifikované cytotoxické sloučeniny.
Odborníkům bude zřejmé, že v průběhu syntézy sloučenin podle vynálezu může být nezbytné chránit nebo blokovat různé reaktivní funkční skupiny na výchozích látkách a na meziproduktech, zatímco v jiné části molekuly jsou prováděny požadované reakce. Po ukončení těchto reakcí může být kdykoliv později ochranná skupina odstraněna například hydrolýzou nebo hydrogenolýzou. Použití těchto ochranných skupin, jejich zavádění i nejich odstranění je v oboru organické chemie běžné. Tyto postupy byly shrnuty například v publikaci Protective Groups in Organic Chemistry, McOmie, ed., Plenům Press, NY, NY (1973) a Protective Groups in Organic Synthesis, Greene,ed., John Wiley and Sons, NY, NY (1981). Podle těchto publikací je možno snadno zvolit ochranné skupiny, které budou vhodné pro použití při výrobě konjugátů podle vynálezu.
Jako příklad je možno uvést, že pro aminoskupinu jsou vhodnými ochrannými skupinami například alkanoylové skupiny ; o 1 až 10 atomech uhlíku, jako formyl, acetyl, dichloracetyl, propionyl, hexanoyl, 3,3-diethylhexanoyl, gamma-chlor<ii butyryl a podobně, dále alkoxykarbonylové skupiny o 1 až 10 atomech uhlíku v alkoxylové části a aryloxykarbonylové skupiny o 5 až 15 atomech uhlíku, jako terč.butoxykarbonyl, benzyloxykarbonyl, allyloxykarbonyl, 4-nitrobenzyloxykarbonyl, fluorenylmethyloxykarbonyl a cinnamoyloxykarbonyl, dále halogenalkoxykarbonylové skupiny o 1 až 10 atomech uhlíku v alkoxylové části, jako 2,2,2-trichlorethoxykarbonyl a arylalkylové skupiny o 1 až 15 atomech uhlíku a alkenylo-.vé skupiny, jako benzyl, fenethyl, allyl, tityl a podobně. Další běžně užívané ochranné skupiny pro aminoskupinu jsou skupiny, vytvářející enaminy a připravené s pomocí beta-ketoesterů, jako methylacetoacetát nebo ethylacetoacetát.
Použitelné ochranné skupiny pro karboxylovou skupinu zahrnují například alkylové skupiny o 1 až 10 atomech uhlíku,
-.. ... .....
jako methyl, terc.butyl nebo decyl, dále hálogenalkylové skupiny o 1 až 10 atomech uhlíku, jako 2,2,2-trichloretnyl a 2-jodethyl, arylalkylové skupiny o 5 až 15 atomech uhlíku,, jako benzyl, 4-me thoxybenzy1, 4-ni trobenzy 1, tri-
methyl, propionyloxymethyl a podobně a další skupiny, ja-
nylthioethyl,'2,4,6-trimethylbenzyl, beta-methylthioethy1, ftalimidomethyl, 2,4-dinitrofenylsulfenl, 2-nitrobenzhydryl a příbuzné sloučeniny.
Podobně mohou ochranné skupiny pro hydroxyskupinu zahrnovat například formyl, chloracetyl, benzyl, benzhydry, trityl, 4-nitrobenzylovou skupinu, trimethylsilylovou skupinu, fenacyl, terc.butyl, methoxymethyl, tetrahydropyranylovou skupinu a podobně.
Podle výhodného provedení, v němž je oligopepirid vázán na antracyklinové antibiotikum doxorubicin znázorňuji následující reakční schémata syntézu konjugátu podle vynálezu.
Reakční schéma I
OH
-ťř
- 31 Reakční schéma II
OH
Reakční schéma III
O OH O
Reakční schéma IV
OH
Reakční schéma V
HSX 11
-rú
O H L oligopeptid*
OH
- gc, Reakční schéma VI uvádí způsob výroby konjugátů oligopeptidů podle vynálezu nem ze skupiny alkaloidů s cytotoxickou látkou vinblastiČeledi vinca. Spojení N-terminál^n í ho konce ^oli go p e pjti du s likaci S. F. Kandukuri a 1088, 198S. Je však možno vinblastinem bylo popsáno v pubdalsi, j. wea. υηβικ·, «.o, ~ ~~ očekávat, že konjugace oligopept i— du v jiné poloze s funkčnímiskupinami vinblastinu ítenminální žákbčéhroríeopeptidu-“rovněž‘'-povede^kc.
lateK.
> , a
O Λ ΖΛ VM 1 T~* ν'-ΓΊ jer - « a- na 0-t VO1?^
Je rovněž zřejmé, že konjugáty je možno připravit také tak, že se N-terminální konec oligopeptidu podle vynálezu naváže kovalentně na jednu cytotoxickou sloučeninu, například vinblastin a C-zakončení se současně naváže na další cytotoxickou sloučeninu, stejnou nebo odlišnou, například na doxorubicin. Takový konjugát s více než jednou cytotoxickou látkou může poskytovat další výhody.
Reakční schéma VI
vinblastin
CO2CH3
CONH = oiigcpspíid - C = NH2
Konjugát podle vynálezu s obsahem oligopeptidů a cytotoxické sloučeniny, v němž je cytotoxickou sloučeninou výhodný doxirubicin, je možno popsat následujícím obecným vzorcem I
(I) kde oligopeptidem je oligopeptid, specificky rozpoznávaný volným antigenem, specifickým pro prostatu, PSA a schopný být proteolyticky rozštěpen účinností tohoto volného antigenu, X^ chybí nebo znamená aminokyselinu ze skupiny:
a) fenylalanin,
...... . b) leucin, ...... -- .
c) valin,
d) isoleucin,
e) (2-naftyl)alanin,
f) cyklohexylalanin,
g) difenylalanin,
h) norvalin nebo j) norleucin,
R znamená atom vodíku nebo -(0=0)13^, a
R^ znamená alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo aryl.
-39-- - —
Ve výhodném provedení konjugátu oligopeptidů a cytotoxické sloučeniny je oligopeptidem oligomer, který ob sáhuje sekvenci aminokyselin z následující skupiny:
a) AsnLysIleSerTyrGlniSer (řetězec č. 13),
b) LysUeSerTyrGlniSer (řetězec č. 14),
c) GlyGluAsnGlyVaiGlnLysAspValSerGlnXaaSerHeTyrÍSerGInTuiGlu.
(řetězec č- 15),
d) GlyLysGlyHeSerSerGlnTyrlSerAsnThrGluGluArgLeu (řetězec č. 2),
e) AsnLysIleSerTyrTyriSer
f) AsnLysAIaSerTyrGlniSer
g) SerTyrGlnlSerSer
h) hArgTyrGInlSerSer (řetězec č. 127), (řetězec č. 128) , (řetězec Č. 129) a (řetězec č. 141), kde Xaa znamená jakoukoliv přírodní aminokyselinu,
XT chybí nebo znamená aminokyselinu ze skupiny:
-------a)=Ieucin, ___b) isoleucin,
c) norleucin nebo
d) valin a
R znamená acetyl, pivaloyl nebo benzoyl.
40- Specifickými příklady konjugátu oligopeptidu a cytotoxické látky jsou následující sloučeniny:
kde X znamená:
II
H2N— AsnLyslleSerTyrGlnSer-c- (řetězec δ .13)
O
H2N—AsnLyslleSerTyrGInSerSer—Q— (řetězec c. 16),
H
H2N— AsnLyslleSerTyrGInSerSerSer —C- (retezec 6. 17),
H2N— AsnLyslIeSerTyrGInSerSerSerThr —C— (řetězec δ. 10),
H2N AsnLyslIeSerTyrGInSerSerSerThrGIU“C- (řetěuec Č. 3),
H2N—AlaAsnLyslleSerTyrGInSerSerSerThrGIu—C~(řetězec č. 11)
O
AcHN—AlaAsnLyslIeSerTyrGInSerSerSerThr—C — (řetězec δ. 117) O
AcHN—AlaAsnLysileSerTyrGInSerSerSerThrLeií-C— (řetězec δ. 70), O
AcHN—AlaAsnLysAlaSerTyrGlnSerAIaSerThrLett-c— (řetězec δ. 118)
- 41 η
II
AcHN—AlaAsnLysAlaSerTyrGinSerAlaSert.su—C — (řetězec č. 119), O Λ ... II
Aci-iN—AíaAsnLysAlaSerTyrGÍnSerSerSerLeu-C- (řetězec č. 120),
AcHN—AlaAsnLysAlaSerTyrGlnSerSerLeu—Č — (řetězec č. 121),
AcMM ' ' .^arTλιι«=/\
---.. .. W _ ( r*o +·2
AcHN— bArgTyrGlnSerSerSert.su—c
O
II
AcHN—LysTyrGJnSerSerSerteu—C —
O
II
AcHN—LysTyrGInSerSerNIe — C — (řetězec č. 145) (řetězec č. 124), (řetězec č. 146).
Peptidylové účinné Látky, jako jsou konjugátý' oligopeptidu a cytotoxické sloučeniny podle vynálezu, mají s výhodou .koncovou .aminoskupinu jakéhokoliv substituentu na oligopeptidu chráněnou vhodnou ochrannou skupinou, jako je acetyl, benzoyl, pivaloyl a podobně. Tato ochrana koncové aminoskupiny snižuje nebo vylučuje enzymatickou degradaci účinných látek tohoto typu působením exogenních “aminopeptidáz, které jsou běžně přítomné v krevním oběhu všech teplokrevných živočichů.
Konjugátý oligopeptidů a cytotoxické sloučeniny podle výft a rš2lí^ š é^ěnrochým“p o dáv aj i“ vé“f o rmě“ f armac e u t i c kýc h“p ro středků, které obsahují konjugát obecného vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič, pomocnou látku nebo ředidlo. Pod pojmem farmaceuticky přijatelný se rozumí takový nosič nebo pomocná látka, které mohou být beze škody použity k léčení nebo k diagnostickým účelům u teplokrevných živočichů, jako jsou člověk, kůň, vepř, Skot, myši, pes, kočka nebo jiní savci a také u ptáků a dalších teplokrevných zvířat. Výhodným způsobem podání je parenterální podání, zvláště nitrožilní, nitrosvalově, podkožní, intraperitoneální podání nebo podání do mízních cest. Farmaceutický prostředek je možno připravit při použití vhodných nosičů, ředidel a pomocných látek, které se v oboru běžně používají, souhrnné údaje byly uvedeny v publikaci Remington s Pharmaceutical Sciences, 16. vydání, 1980, Mack Publishing Company, ed.
Osol a další. Tyto prostředky mohou obsahovat bílkoviny, například bílkoviny séra, jako lidský sérový albumin, pufry, jako fosf-áty, další soli, elektrolyty a podobně·. Vhodným ředidlem může být například sterilní voda, isotonický roztok chloridu sodného, zředěný roztok dextrosy ve vodě, vícesytný alkohol nebo směs takových alkoholů, jako jsou glycerol, propylenglykol, polyethylenglykol a podobně. Prostředky mohou obsahovat také konzervační látky, jako fenethylalkohol, methylparaben, propylparaben, thimerosal a podobně. V případě potřeby je možno do prostředku přidávat ještě 0,05 až 0,20 % hmotnostních antioxidačního činidla, jako methahydrogensiřičitanu sodného nebo hydrogensiřičitanu sodného.
Pro nitrožilní podání je možno farmaceutický prostředek s výhodou připravit tak, aby se množství, podané nemocnému pohybovalo v rozmezí 0,01 až 1 g konjugátu, s výhodou bude prostředek obsahovat 0,2 až 1 g konjugátu. Konjugáty podle vynálezu jsou účinné v širokém rozmezí dávek v závislosti na obvyklých faktorech, jako je onemocnění, které má být léčeno, nebo způsob podání konjugátu, věk, hmotnost a celkový stav nemocného a různé další faktory, které může zhodnotit nejlépe ošetřující lékař. Použité množství farmaceutického prostředku podle vynálezu je tedy nutno určit s ohledem na svrchu uvedené parametry v závislosti na potřebě jednotlivých nemocných.
Odborníkům bude zřejmé, že přestože v následujících příkladech jsou uvedeny různé reakční podmínky a různá reakční činidla, je možno navrhnout řadu modifikací, rovněž spadajících do rozsahu vynálezu. Následující příklady prok omezení jeho rozsahu.
Příklady provedenivynálezu'
Příklad i
V
Identifikace místa štěpení semenogelinu působením PSA
Zkapalnění šeminálního gelu probíhá souběžně s proteolitickým štěpením semenogelinu I podle Lilja H., Laurell C. B.·, 1984, Scand. J. Clin. Lab. Inves., 44, 447 - 452.
Je pravděpodobné, že proteolytická fragmentace semenogelinu je důsledkem proteolytické účinnosti PSA podle Lilja H, 1985, J. Clin. Invest., 76, 1899 - 1903. Při použití zveřejnění sekvence semenogelinu.I podle Lilja H, Abrahamsson P. A., Lundwall A., 1989, J. of Biol. Chem., 264, 1894 - 1900 (obr. 1), byly zkonstruovány primery pro PCR, aby bylo možno klonovat cDNA pro semenogelin při použití běžně dodávané banky cDŇA (Clonetech, Palo Alte, CA). čištěná cDNA semenogelinu byla uložena do bakteriálního vektoru pro expresi pTAC, popsaného v Linemeyer D. L., Kelly L. Ji, Minke J.G., Gimenez-Gallego G., DeSalvo J. a Thomas K. A., 1987, Bio/ /Technology, 5, 960 - 965. Přitom byla cDŇA semenogelinu zkonsťruována^takT že^epLtop^pro^tubulin^byl^uložen^na^^kar^ boxyterminální konec bílkoviny. Po bakteriální expresi byl semenogelin čištěn na sloupci s obsahem protilátky proti tubulinu. Čištěný semenogelin I byl pak smísen s běžně dodávaným PSA (York Biologicals International, Stony Brook, NY) v molárním poměru 100 : 1 (semenogelin I/PSA) ve 12 mM tris o pH 8,0 s 25 mM NaCl a 0,5 mM CaCl2 a směs se inkubuje po různou dobu. Pak se rozštěpený materiál podrobí frakcionaci elektroforézou na polyakrylamidovém gelu a po elektroforéze se přenese na filtrační papír ProBlott (Applied Biosystems, lne., Foster City, CA) v pufru CAPS podle Matsudaira P., 1987, J. Biol. Chem., 252, 10035 - 10038. Filtrační papír ProBlott se barví modří coomassie k identifikaci bílkovinných fragmentů semenogelinu I, vzniklých štěpením působením PSA. Nové fragmenty se oddělí z filtračního papíru skalpelem a jejich sekvence se analyzuje. Po identifikaci proteolytických fragmentů na základě různé řady štěpení se ještě provádí štěpná reakce 10 minut. Afinita PSA k 5 potenciálním místům štěpení v semenogelinu I byla stanovena takto: místo 349/350 i místo 375/375 imísto 289/290 = místo 316/316> místo 159/150. Relativní afinita byla odvozena z intenzity barvení modří coomassie v každém peptidovém fragmentu, vzniklém po štěpení PSA. Poměr untenzit byl přibližně 3:1:0:6: 0,3
Příklad 2
Příprava oligopeptidů s obsahem štěpnéhomísta pro PSA
Byly připraveny oligopeptidy syntézou na pevné fázi navázáním jednotlivých aminokyselin při použití automatického zařízení pro syntézu peptidů (Applied Biosystems model 430A). Odstranění ochranných skupin a odštěpení oligopeptidu z pryskyřice bylo provedeno roztokem kyseliny fluorovodíkové. Oligopeptidy byly čištěny vysokotlakou kapalinovou chromatografií v reverzní fázi na sloupci oxidu křemičitého C18 při použití gradientů směsi 0,1% vodné kyseliny trifluoroctové a acetonitrilu. Typ a homogenita oligopeptidů byly potvrzeny analýzou řetězce aminokyselin chromatograficky a hmotovým spektrem při bombardování rychlými atomy. Póly-—ts
-.řÍJgT.S
-sf- 45 - __ _ peptidy, které byly připraveny tímto způsobem, jsou znázorněny na obr. 2.
Příklad 3
Stanovení rozpoznávání oligopeptidů volným PSA
Oligopeptidy, připřavenépodie'prikTadú 2 bylý jednotlivé rozpuštěny v pufru- pro štěpení působením.PSA, to známe— - ná-12·- mM iris(hydroxymethyj)aminomethan o pH 8,0, 25 mM NaCl a 0,5 mM CaClL a roztok byl přidán k PSA v molárním poměru 100 : 1. Reakce se zastaví po různé reakční době přidáním kyseliny trifluoroctové TFA do konečného množství 1 % objemové. Reakční směs se pak realizuje pomocí HPLC v reverzní fázi na sloupci C18 při použití gradientu 0,1% vodného roztoku TFA a acetonitrilu. Výsledky jsou uvedeny na obr. 2. Další oligopeptidy, připravené způsobem podle příkladu 2 byly podrobeny stejným zkouškám, reakce však byla zastavena vždy po 4 hodinách. Výsledky tohoto stanovení jsou znázorněny na obr. 3. Odstraněnímasparaginového zbytku z aminoterminálního zakončení oligopeptidů dochází k podstatnému snížení hydrolýzy působením PSA, kdežto zbytek glutamové kyseliny na karboxyterminálním konci peptidu patrně není podstatný pro rozpoznání peptiďu PSA.
Příklad 4
Příprava neštěpitelnýchkonjugátu oligopeptidů a doxorubicinu
Deriváty doxorubicinu, uvedené v tabulce 3 byly připraveny následujícím obecným postupem: ke směsi doxorubicinu (Sigma) a odpovídajícího peptidu, připraveného na pevné fázi nebo běžně dodávaného (Sigma) v DMSO se přidá HBT'U a HOBT spolu s diisopropylethylaminem a reakční směs se míchá přes noc. Surová reakční směs se přímo čistí preparativní HPLC v reverzní fázi na sloupci C18 při použití gradientu 0,1% kyseliny trifluoroctové v acetonitrilu a 0,1% kyseliny trifluoroctové ve vodě.
Tabulka 3
sloučenina
MS Qion)
12a Ala-H 615
12b Ala-N-Ac 657
12c Ala-Ala-Ala-N-Ac 799.5
12d Ala-Ser-Ala-Gly-Thr-Pro-Gly-Ala-N-Ac 1199
! ' (řetězec č. 12).
—_47 _______
Příklad 5
Stanovení cytotoxicity peptidylových derivátů doxorubicinu .i n,..vitro
Cytotoxické účinky neštěpitelnýuh konjugátů olig<
tidu a doxorubicinu, připravených podle příkladu 4 proti buněčné linii, o níž je známo, že nemodlíikcvaný”dóxorubicin je pro ní velmi toxický, byly stanoveny zkouškou s pou:
tím aiamarove moGí'·!
Pu&tupuje 39 tak, z buněčná loiltura nádorových tíúněk prostaty LNCaP, jde o buňky lidského metastatickšho adenokarcinomu, izolované z bioptického vzorku mízní uzliny (LNCaP.FGC: American Type Culture Collextion, ATCC CRL 1740) nebo buněk DuPRO na plotně s 96 vyhloubeními zředí prostředím, které obsahuje různou koncentraci daného konjugátu, konečný objem jednoho vyhloubení je 200 mikrolitr Buněčný materiál se inkubuje 3 dny při teplotě 37 °'C- a pak se do každého vyhloubení přidá 20 mikrolitrů alamařové modři Buněčný materiál se dále inkubuje, plotny se odečítají na odečítacím zařízení (EL-310 ELISA) při vlnových délkách 570 a 600 nm po době 4 a 7 hodin po přidání alamařové modři. Pák se vypočítá relativní životnost pro jednotlivé vzorky s obsahem konjugátu ve srovnání se vzorky bez konjugátu v procentech. Stanoví se také cytotoxicity nemcdifikovaneno doxorubicinu a nemodifikovaného oligopeptidu, výsledky jsou uvedeny na obr. 3 pro sloučeninu 12d.
Příklad 6
Stanovení enzymaticky účinného PSA z buněk LNCaP
Enzymatická účinnost byla prokazována inkubací LNCaP v prostředí prostém séra (koncentrace přibližně 200x) s rekombinantním semenogelinem I. Přibližně 0,5 mikrogramů imunologicky aktivního PSA v koncentrovaném upraveném prostředí (Hybridtech (Tandem E) Elisa) se smísí s přibližně 3 mikrogramy rekombinantního semenogelinu I a směs se inkubuje 4 hodiny při teplotě 37 °C, Na konci inkubace se rozštěpená směs analyzuje při použití metody Western blot. Výsledky prokazují, že čištěný PSA z ejakulátu a PSA z prostředí s obsahem buněk LNCaP mají stejný proteolytický účinek na rekombinantní semenogelin I. To znamená, že buňky LNCaP, které vyvolávají nádory u bezsrstých myší a produkují poměrně vysoké hladiny PSA v krevním oběhu produkují PSA s enzymatickým účinkem.
Příklad 7 ..... .
-Příprava štěpitelných konjugátů oligopeptidů a doxorubicinu
Deriváty·doxorubicinu, na něž je vázán kovalentním způsobem olig-opeptid, štěpi-te-lný volným PSA a v nichž je oligopeptid vázán na aminoskupinu cukru v doxorubicinu byly připraveny následujícím obecným způsobem: ke směsi doxorubicinu (Sigma) a odpovídajícího peptidu, připraveného v pevné fázi podle příkladu 2 se v DMSO přidá HBTU a HOBT spolu s diisopropylethylaminem a reakční směs se míchá přes noc; Pak se surová reakční směs přímo čistí preparativní. HPLC na sloupci C18 v reverzní fázi při použití gradientu 0,1% TFA v acetonitrilu a 0,1% TFA ve vodě. V případě, že peptid nese reaktivní aminoskupiny, je zapotřebí tyto skupiny chránit ve formě f1uoreny1methy1oxykarbony1ového“ádičního produktu, ochranná skupina se po ukončení reakce odstraní působením sekundárního aminu, například piperidinu a podobně. Uvedené konjugáty mají struktur, kterou je možno vyjádřit obecným vzorcem _________ ..--- . ..____ - 49 - _ .-, ,
CHaO O OH o < ch2oh
OH
(O=C)peptid: (NH)
Ac a označit jako Ac-peptid-DOX O'). Konjugáty, připravené tímto způsobem jsou uvedeny v tabulce na obr. 5. _.ř
Příklad 8
Stanovení rozpoznávání konjugátů oligopeptidů a doxorunicinu volným PSA
Konjugáty, připravené způsobem podle příkladu 7 byly jednotlivě rozpuštěny v pufru pro štěpení PSA s obsahem 12 mM tris(hydroxymethy1)aminomethanu o pH 8,0 s 25 mM NaCl a0,5 mM CaCl^ a roztok se přidá k PSA v molárním poměru 100 : 1. Reakce se zastaví po různých dobách přidáním ky“še finy^tri.£'ϊμοroctov§“do“kdňě‘č néhb“nírro *2'árt v í“T“%“ o'b*je mo vé“ Pak se reakční směs analyzuje pomocí HPLC v reverzní fázi na sloupci C18 při použití gradientu 0,1% TFA ve vodě a acetonitrilu. Výsledky jsou uvedeny v tabulce na obr. 5.
Příklad 9
Stanovení štěpení konjugátů oligopeptidu a doxorubicinu v prostředí s obsahem buněk, které pak bylo od buněk odděleno
Prostředí MEMalfa, prosté séra a negativní na fenolovou červeň bylo odděleno tři dny po přidání k buněčné linii LNCaP nebo DuPro podle publikace J. Urology, 146, 915 - 919, 1991. Pak bylo prostředí 20x zahuštěno při použití koncentračního zařízení Amicon Centriprep , které současně oddělí látky do molekulové hmotnosti 10 000. Prostředí, které bylo ve styku s buněčnou linií LNCaP obsahovalo volný PSA v průměrném množství přibližně 100 mg/ml, koncentrace byla stanovéna balíčkem pro imunologické stanovení Tandem -EPSA (Hybritech) . V prostředí, které bylo ve styku s, druhou buněčnou linií nebylo možno volný PSA prokázat.
Podíly vždy 100 mikrolitrů koncentrovaného prostředí byly smíseny s 35 mikrogramy konjugátu oligopeptidu a doxorubicinu, připraveného podle příkladu 7 a směs byla inkubována při teplotě 37 °C po dobu 0, 4 a 24 hodin. Po této době byla reakce zastavena přidáním chloridu zinečnatého do konečné koncentrace 0,01 M a pak byla směs analyzována pomocí HPLC v reverzní fázi na sloupci C18 při použití gradientu 0,1% vodného roztoku TFA a acetonitrilu ke stanovení procentuálního množství rozštěpeného konjugátu peptidu a cytotoxické sloučeniny. Výsledky tohoto stanovení jsou uvedeny v tabulce na obr. 6. _ _ __
Příklad 10
Stanovení cytotoxicity peptidylových derivátů doxorubicinu in vitro
Cytotoxicita štěpitelných konjugátů oligopeptidu a doxorubicinu, připravených podle příkladu 7 proti buněčné linii, o níž je známo, že je citlivá na nemodifikovaný doxorubicin, byla prokazována zkouškou s alamarovou modří,
4- _ -ΐ i ,Sý-1 -fi r**1. Th ^**. /~i n - τ.Γ—7 c „ ·__Ριι^οΧιπ á_ 11 - - -nádoru prostaty LNCaP nebo buněk DuPro na plotnách s 96 vyhwub^ěnínri^byiy^^žřeďěny^prosoreaínr: R^teré^ccjsařrpvato různou7 b-Τ-» z·* <a y»+-v» o/-» η Izrsr·) íuaáfn Iz r\ ti m τ\r rsbi \Zvh1 nijhem iTV 1_ **w*.w·* w.*. — o — - — ý - -- ’—·~ j = ·_· · --------- - v - -3 une cny m & t e r x a .l· lzuhA\rp« γΤ-ί Hnv τλ >~· ή rv <_X U> W V G~í X X> X. »—XX XV kX Λ. —teplotě 37 VC a pak bylo přidáno 20 mikrolitrů alamarové modři. Pak byly buňky dále inkubovány, plotny byly odečteny na odečítacím zařízení EL-310 ELISA při vlnové délce 570 a 600 nm po době 4 a 7 hodin po přidání alamarové modři.
Pak byla vypočítána'životnost buněk po přidání různých koncentrací konjugátu v procentech ve srovnání s kontrolami bez přidání konjugátu. Cytotoxicitakonjugátu byla také srovnávána s cytotoxicitou nemodifikovaného doxorubicinu a nemodifikovaného peptidu. Výsledky těchto pokusů jsou uvedeny v tabulce na obr. 7.
Seznam řetězců
1) Obecné informace ii) Název vynálezu: Oligopeptidy, konjugáty s jejich obsahem a způsob stanovení proteolytické účinnosti volného antigenu iii) Počet řetězců: 146.
2) Informace o řetězci č. 1:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 462 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce : jednoduchý
D) topologie: lineární
.typ molekuly: peptid
. hypotetický: ne
iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 1:
Mec Lys 1 Pro Asn lie S lie Phe Val Leu Ser 10 Leu Leu Leu lie Leu 15 Glu
Lys Gin Ala Ala Val Mec Gly Gin Lys Gly Gly Ser Lys Gly Arg Leu
20 25 20
Pro Ser Glu Pha Ser 'Gin Phe Pro His Gly Gin Lys Giv Gin His Tyr
25 40 45
Ser Giv Gin Lys Gly Lys Gin Gin Thr Glu Ser Lys Gly Ser Pha Ser
SO 55 S0
lie Gin Tyr Thr Tyr His Val Asp Ala Asn Aso His Asp Gin Ser Arg
S5 70 75' 30
Lys Ser Gin Gin Tyr Asp Leu Asn Ala Leu His Lys Thr Thr Lys Ser
85 90 95
Gin Arg His Leu Gly Gly Ser Gin Gin Leu Leu His Asn Lys Gin Glu
100 105 110
Gly Arg Asn 115 His Asp Lys Ser Lys 120 Gly His Phe His Arg 125 Val Val Zle.
His His Lys Gly Gly Lys Ala His Arg Giy Thr Gin Asn Pro Ser Gin
130 135 140
Asp Gin. Gly Asn Ser Pro Ser Gly Lys Giy Ile Ser Ser Gin Tyr Ser
14S Glu ISO 153 ISO
Asn -Thr Glu Arg Leu Trp' Val His Gly Leu Ser Lys Glu Gin Thr
163 170 175
Ser Val Ser Gly Ala Gl~ Lys Gly Arg Lys Gin Gly Gly Ser Gin Ser
130 135 190
Ser Tyr Val Leu. Gin Thr Glu Glu Leu Val Ala Asn Lys Gin Gin Arg
195 200 205
Glu Thr Lys Asn Ser His Gin Asn Lys Gly His Tyr Gin Asn Val Val
210 21S 220
Glu Val Arg Glu Glu His Ser Ser Lys Val .Gin Thr Ser Leu Cys Pro
225 23 0 235 240
Ala His- Gin Asp Lys Leu Gin His Gly Ser Lvs Aso Zle Phe Ser Thr
245 250 255
Gin Asp Glu Leu Leu Val Tyr Asn Lys Asn Gin His Gin Thr Lys Asn
2S0 2S5 270
Leu Asn Gin . Asp Gin Gin His Gly Arg Lys Ala Asn Lvs Zle Ser
275 230 235
Gin Ser Ser Ser Thr Glu Glu Arg Arg Leu His Tyr Gly Glu Asn Gly
290 295 300
Val Gin Lys Asp Val Ser Gin Ser Ser Zle Tyr Ser :Gin Thr Glu Glu
305 310 315 320
Lys Ala Gin Gly Lys Ser Gin Lys Gin lis Thr Zle Prs Ser Gin Glu
325 330 335
. G ln ^GLu_His_Sar_.G ln=Ly s_Ala^Asn - Lys =-Ί 340 ' 345
350
-“Ťhr GliT Glu Arg Arg Leu His Tyr Gly Glu Asn Gly Val Gin' Lys Asp
3S5 3S0 365
Val Ser Gin Arg Ser Zle Tyr Ser Gin Thr Glu Lys Leu Val Ala Gly
370 375 330
Lys Ser Gin Zle Gin Ala Pro Asn Pro Lys Gin Glu Pro Trp His Gly
38S 390 395 400
Glu Asn Ala Lys Gly Glu Ser Gly Gin Ser .Thr Asn Arg Glu Gin Asp
405 410 415
Leu Leu Ser His Glu Gin Lys Gly Arg His Gin His Gly Ser His Gly
420 425 430
Gly Leu Aso Ile Val Zle Zle Glu Gin Glu Asp Asp Ser Asp Arg His
43 5 440 445
Leu Ala Gin His Leu Asn Asn Asp Arg Asn Pro Leu Phe Thr
450 455 460
2) Informace o řetězci c. 2:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 15 aminokyselin
3)typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý ' D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu:, ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 2
Glv Lys Gly Zle Ser Ser Gin Tvr Ser Asn Thr Glu Glu Arg Leu 1 ' ' . 5 10 15
2) Informace o řetězci č. 3:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 11 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní v™'-” xi) popis řetězce č. 3:
Asn Lys Ile Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr Glu i 5 10
2) Informace o řetězci č. 4:
i) vlastnosti řetězce:
.... J=_ . J... . T
-.....A) délka: 19-aminokyselin
B) typ: aminokyseliny ii) iii) iv)
v)
XÍ)
Gly 1
Gin
2) Informace o řetězci δ. 5:
i) vlastnosti řetězce:
— .-----: =_ A,)= d é Ik a: 2 5 ami n oky s e l-in= . ==
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární typ molekuly: peptid hypotetický: ne v opačném smyslu: ne typ fragmentu: vnitřní popis řetězce č. 4: „
Glu Asn Gly Val Gin Lys Asp Val Ser Gin Arg Ser Zle Tyr Ser 5 10 15
Thr Glu xi) popis řetězce č. 5:
Gly Glu Asn Gly Val Gin Lys Asp Val Ser Gin Ser Ser T1e Tv-’· Se·»· 1 s - 10 iS- Gin Thr Glu
2) Informace o řetězci č. 6:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 25 aminokyselin
B) typ.: -aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 6:
Gly Arg Lys Ala Asn Lys Zle Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr Glu Glu 1 5 10 15
Arg Arg Leu His Tyr Gly Glu Asn Gly 1
25
2) Informace o řetězci č. 7:
i) vlastnosti řetězce: ' ' '
A) délka: 3 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xx) popxs rerezcs c.
'SefíVr Gin Ser Seř^ Ser Thr Giu i S
2)_Infč'řmácě'o ~řětezei~č7 8 :
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 9 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny 0) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 8:
Zle Ser Tys Gin Ser Ser Ses· Ths Giu I 3
2) τr_formačeto’“řFtězc’!“č“9=:í™
-““iý“ v iraJs t rro'š't i“1 ř e těžce1:““ =—™
A) délka: 10 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid
- 58 iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 9:
Lys Zla Ser Tvr Gin Ser Ser Ser Thr 1 ' 5
2) Informace o řetězci č. 10:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin 3) typ: aminokyseliny C) typ řetězce: jednoduchý D) topologie: lineární
ií) typ molekuly: peptid
ii) hypotetický: ne
iv) v opačném smyslu: ne
V) typ fragmentu: vnitřní
Xi) popis řetězce č. 10:
Asn Lys Zle Ser Tyr Gin Ser Ser Ser 1 5
Glu
Thr
2) Informace o řetězci č. 11:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární
ii) typ molekuly: peptid
--59iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 11:
Ala Asn LvsIle Ser Tvr Gin Ser Ser Ser Thr Glu
- , _ -- ----- . - —- -1Q - . .
2) Informaceό řetězci č. 12:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 3 aminokyselin ' 3) typ:aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 12:
Ala Ser Ala Gly Thr Pro Gly Ala
2) Informace o řetězci č. 13:
Γ) vlast nosti~ ř ete ž ce“:
A) délka: 7 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitrní xi) popis řetězce č. 13:
Asn Lys Ile Ser Tyr Gin Ser 1 5
2) Informace o řetězci č. 14:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 6 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 14:
Lys Ile Ser Tyr Gin Ser 1 S
2) Informace o řetězci č. 15:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 19 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: lineární
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid ii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
V~-hyi-i -P-ra gmgntu : vnitřní' • / w JT v “ ~T 'W ix) vlastnost: ________
A)_ název,: peptid
3) coloha: 12 D) další informace
Xaa je jakákoliv aminokyselina r».< Krt o i. * ·—> **· · xi) popis řetězce č. 15:
- Glv Glu Asa Glv Val.Gla Lys. Asp Val Ser-Gin Xaa Ser tle Tyr Se: i * ‘ 5 10 15
Gin Thr Glu
2) Informace o řetězci č. 16:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 8 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: “lineami i i) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 15:
Asn Lvs Ile Ser Tyr Gin Ser Se: 1 .5
2) Informace o řetězci Č. 17:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 9 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 17:
Asn Lys Zle Ser Tyr Gin Ser -Ser Ser * 3
2) Informace o řetězci o. 18:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne . .. .
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 18:
Ala Asn Lys Zle Ser Tyr Gin Ser Ser Ser i .5 10
- 63, 2) Informace o řetězci č. 19:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
C) typ řetězce: jednoduchý ~D')“ to po Log ia :~li~neá.-rn 1——^-.= .ii) typ molekulyiii) hypoteticky: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 19:
Lvs Zla Ser Tvr Gin Ser Ser'Ser Thr Glu 5 10
2) Informace o řetezci Č. 20:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 17 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ· řetězce _jednoduchý 0) topologie': lineární ii) typ molekuly: peptid =1 ii) hypotetický^ne.
v—opačné m _ srny s lu:_ _np_
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 20:
Gin Leu Asn Asn Lys Zle Ser Tvr Gin Ser Ser ae: 1 '5 10
Thr His Gin Se: 15
Ser
2) Informace o řetězci č. 21:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní
..xi). popis řetězce č. 21:
Asn Arg Ile Ser Tyr Gin Ser 1 5
2) Informace o řetězci č. 22:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin B.) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 22:
tys val S„ Gln 5
2) Informace o řetězci č. 23:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 8 aminokyselin 3)_ ty pj aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý’
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: protein iiii hypotetický: ne
- ----- iv) v opačném -smyslu: ne ' · ' ' - - - — ' ..... —.....- ' '
v) typ. fragmentu: vnitřní
xi) popis řetězce č. 23: Asn Lvs Mec Ser Tyr Gin Ser Ser i S 2) Informace o řetězci č. 24:
i) vlastnosti řetězce: A) délka: 8 aminokyselin 3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce:' jednoduchý
D) topologie’: lineární ..................._ ...... . ... . ^...
ii) typ molekuly: peptid
iii) hypotetický: ne - ·· -
iv) v opačném smyslu: ne ··. · ··.. .
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 24: Asn Lys Leu Ser Tyr Gin Ser Ser i 5
2) Informace o řetězci č. 25:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 9 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne ·
v) typ fragmentu: vnitřní
......xi)- popis řetězce č. 25: Asn Lys Zle Thr Tyr Gin Ser Ser Se 1 . “
2) Informace o řetězci, č. 26:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka:, 9 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu:· ne ='
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 26:
Asn Lys Zle Ser Phe Gin Ser Ser Se 1 5 „ ............_ _____________ _____ -· 67 2) Informace o řetězci c. 27;
i) vlastnosti řetězce;
A) délka: 10 aminokyselin ^^^.^-^..Bj)^-~typ >Ť-aminokyselinyA,-z^· .. C) typ řetězce: jednoduchý ____Ji). topologie:_ lineární__ \ γίί/λΊ aIziiI \γ · τ) ΑΤΎΙΤ 3_ d
J,J,/ --VJ W· ------------k·: ·· .:
- iii) '·” w ·. ·· k τϊγυοχβ:.uxcxy · π§·
iv) v opačném smyslu: : ne
v) typ fragmentu: vnitřní
xi) popis řetězce č. 27:
Asn Lys· Ile Ser Trp Gin Ser Ser Ser
2) Informace ο řetězci č. 28:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny C) typ řetězce: jednoduchý n\ fnnniοσΐe: lineární ii) typ molekuly: peptid .—iii.).__hypotetický: ne _ =._ iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 28:
Asn Lvs II· Ser Tyr Asn Ser Ser Se I * S
2) Informace o řetězci č. 29:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 29:
Asn Lys Zle Ser Tyr Gin Thr ,3er Ser Thr 1 5 ' 10
2) Informace o řetězci č. 30:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne ,
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 30:
Asn Lvs Ile Ser Tyr Gin Ser I 5.
2) Informace o řetězci č. 31:
i) vlastnosti řetězce
A) délka: 8 aminokyselin ==^.^==,3) typ :. aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární _ i i) typ molekuly: joeptid__ iii) hypotetický^ ne iv) v opačném smyslu: ne ·
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 31:
Gin Lvs Zle Ser Tyr Gin Ser Ser i * S
2) Informace o řetězci č. 32:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 9 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly:-pepř ία — — iii) hypotetický: ne
JL v.)_-=v^o.p ačné m =smys 1 u := ne.
____________v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 32:
Asn Arg Zle Thr Tyr Gin Ser Ser 1 -S
2) Informace o řetězci č. 33:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární c
ii) typ molekuly: peptid te’ iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne . v) typ fragmentu: vnitřní
..... xi)- popis řetězce č. 33:.......... ~ • Asn Arg Ile Ser ?he Gin Ser Ser Ser Thr *- □ 10
2) Informace o řetězci č. 34:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid
I*1' iii) hypotetický: ne . . iv) v opačném smyslu: ne , . ·
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 34:
Gin ívs Ile Ser Tyr Gin Thr Ser Ser Thr 1 5 10
2) Informace o řetězci č. 35:
i) vlastnosti řetězce:
A)délka: 10 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: 0 iv) v -opačném smyslu:.. 0 ...
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce Č. 35:
Asn Arg Ile Ser Trp Gin Ser Ser Ser 5
2) Informace o řetězci č. 36:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
------ 0) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární“ ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: 0 iv) v opačném smyslu: 0
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 36:
Asn Arg Ile Ser Tyr Gin Thr Ser Se:
. 1 5
2) Informace o řetězci č. 37:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin 3) typ: aminokyseliny
0) typ řetězce D) topologie: : jednoduchý lineární
ii) typ molekuly: peptid
iii) hypotetický: ne
iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní
xi) popis řetězce č. 37:
Asn Lvs Ile Thr Tyr Gin Thr Ser Ser Thr 1*5 10
2) Informace o řetězci S. 38:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne xi) popis řetězce č. 38:
Asn Lvs Leu Ser Tvr Gin Thr Ser Ser Thr * 5 10
2) Informace o řetězci č. 39:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin - π— 3) typ:. aminokyseliny....... .....
C) typ řetězce: jednoduchý ,_JL). topologie: lineární_________________________......_.........
.....„ii) typ molekuly·-,, peotid. ^ .. .. _ iii). hypotetický: ne .... . .....
“ ivý v opachénf smyslu: né'
v) typ fragmentu: vnitřní xi).popis řetězce č. 39:
Gin Lvs Leu Ser Tvr Gin Ser ,3er Ser Thr 1 * .5 10
2) Informace o řetězci c. 40:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny C) typ řetězce: jednoduchý
.....D) topologie: lineární . .._ ii) typ molekuly: peptid ili) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 40:
Asn Arg Leu Ser Tyr Gin fhr Ser Ser Thr 1 5 10
2) Informace o řetězci č. 41:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 41:
Asn Cys Val Ser Phe Gin Ser Ser Ser Thr 1 5 10
2) Informace o řetězci č. 42:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin 3) typ: aminokyseliny C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární
Li) typ molekuly: peptid
iii) hypotetický: ne
i v) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu : vnitřní
xi) Popis řetězce č. 42:
Asn Arg Val Ser Trp Gin Ser Ser
2) Informace o řetězci Č. 43:
i) vlastnosti řetězce:
. A) délka: 10 aminokyselin ________
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární lij .'typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 43:
Gin Lys Val Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr 15 10
2.) Informace o řetězci č. 44:
i) vlastnosti řetězce:
— a) délka: 10 aminokyselin'· .......
B) typ: aminokyseliny C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární =£:yp_mo.lekulyj._peptid ______ l_ii)_hypotetický: ne_ ______ iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 44:
Asn Lys Ile Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr 1 5 10
2) Informace o řetězci c. 45:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 19 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 45:
GLv Giu Gin Glv Val Gin Lvs Asó Val Ser Gin Ser Ser lie Tyr S * s ' ’ 10 15
Gin Thr Giu
2) Informace o řetězci č. 45:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 15 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární
ii) typ molekuly: peptid
iii) hypotetický: ne
iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitnří
xi) popis řetězce č. 46:
Gly Lys Gly 1 τι a Ser Ser Gin T/r Ser Asn Thr As? Giu Arg Leu S ’ 10 I5
2) Informace o řetězci č. 47:
i) vlastnosti řetězce:
A \ -lilí__- 1O__„ -J__1_____, — λ; UClKd. J.3 čUIlAIiUK.y £>e i J.Í 1
3) typ:aminokyseliny rjt^lr^tCůrrtyp: řě tězce'::^. i ednoduohvr^-řt—^jf-gr^Lf-íř;'
D) topologie: lineární ii) typ molekuly ‘. peptid -..... . λ ,·1'ν — -4.41.ί..'.’ϊ- ”7“ ~ .H-i.'.“ “ ~ '3
XJ.17 ny ι_ιυ uc υ-1.1-1%. γ . ne.....- - - -·— ----------------’--- - -------------------iv) v opačném smyslu: ne
v) .typ frágmentu: vnitřní ...
xi) popis řetězce č. 47:
Gly Giu Asn Gly Leu Gin Lys Asn Val Ser .Gin Ser Ser Ile Tyr Ser
3 * ' ' 10 15
Gin Thr Glu
2) Informace o řetězci č. 48:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 19 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny...... - - -..... - - .....
C) typ řetězce.: jednoduchý. _
D) topologie: lineární ' ' . . - .......ii) typ molekuly: peptid
JH ). hynntatlr.ký^nft.
_ iv) v ooačném smyslu: ne . ... _____________. ________________
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 48:
Glv Glu Asn Gly Val Asn Lvs Asn Val Ser Gin Ser Ser Ile Tyr Ser * 5 10 L3
Gin Thr Glu
2) Informace o řetězci č. 49:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 19 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 49:
Gly Glu Asn Gly Val Gin Arg Aso Val Ser Gin Arg Ser Ile Tyr Ser 5
Gin Thr Glu
2) Informace o řetězci č. 50:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 19 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce Č. 50:
Gly Glu Asn Glv Val Gin Lvs Asn 1 5
Gin Thr Glu :ie Tyt Ser
Val Ser Gin Lys Ser 10 ·, in » V
- 79 ) Informace o řetězci č. 51:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 19 aminokyselin ...... ..3 ;-...-typ : aminoky se 1 iny-^-_--.--C) typ řetězce: jednoduchý =.. _Q.)_.tg.p.o.l.o.gl.e_L^lXne.ární—__....._............
í i Ί Z\rr\ mni 4»L^t t1 v ♦ Λ —-ýV ¢---.-- ř*·'- -,= —_ ----.111/ uypGtSvi€kyí ne . ;... . iv) . v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 51:
Oly Glu Asn Gly Val Gin Lys Asp Leu Ser Gin Thr Ser Ile Tyr Ser I *5 ' ' 10 15
Gin Tkr Glu
.) Informace o řetězci č. 52:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 19 aminokyselin 3 7 typ: aminokyse1iny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid ’ϊí i) hyp o t e t i cký: ne
Tv)“v“opáčKénr“smysTu: ríě “
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce S. 52:
Gly Glu Asn Gly Val Gin Lys Asp Val Ser Gin Ser Ser Ile Phe Ser
S 10 LS
Gin Thr Glu
2) Informace o řetězci č. 53:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 19 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní . ..xi) popis řetězce č. 53:
Gly Glu Asn Gly Val 1 ’ S
Gin Lys Asp Mec
Ser Gin Ser Ser 10
Ile Tv i
·. tn
Thr
Gin Thr Glu
2) Informace o řetězci č. 54:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 19 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 54:
Gly Glu Asn Gly Val Gin Lys Asp Val Ser Gin Arg Ser Ile Ty
1.5 . 10
Gin Thr Glu
- 81 — — -'Γ'Τ· ----- - — - ------ ------- · 2 i Informace o řetězci Č. 55:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 19 aminokyselin - 3) tyo: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekulv: peptid iii) hypotetický ne. .... . .. , . ..
iv) v opačném ^smyslu : ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 55:
Gly Glu Asn Gly Val Gin Lvs Asn Val Ser Gin. Ser Ser Ile Tyr Ser 1 5 10 '15
Gin Ser Glu
2) Informace o řetězci Č. 56:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 19 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C ) typ ře těžce : jednoduchý _ .......
D) topologie: lineární íii) typ molekuly: peptid
------------- ------- ---- -------------------------------------------------- — -----------iii) hypotetický: ne v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 56:
Gly Glu Asn Gly Val Gin Lys Asp Val Ser Gin Arg Ser Ile Τ'/r Ser 1 5 - io lš
Asn Thr Glu í82
2) Informace o řetězci č. 57:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 15 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 57:
Glv Lvs Ala Zla Ser Ser Gin Tyr Ser Asn Thr Glu Glu Arg Leu 1 * * 5 10 -5
2) Informace o řetězci č. 58:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 15 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce D) topologie: : jednoduchý lineární
ii) typ molekuly: peptid
iii) hypotetický: ne
iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní
xi) popis řetězce č. 58:
Cly Lys Gly Ile Ser Ser Gin Tyr Ser Asn Ser Glu Glu Arg Leu
10 1S
832) Informace o řetězci č. 59:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 15 aminokyselin 3 j—ty p :—am lne ky s s ílíiy' -— ~
C) typ řetězce: jednoduchý ii) typ molekuly: peptid ' iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 59:
Glv Arg Gly Ile Ser Ser.Gin pyr Ser. Asn Thr-Giu Giu Arg Leu i * 5 10 15
2) Informace o řetězci č. 60:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 15 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
-------------C) typ řetězce: jednoduchý - -----------'--------D) ' topologie-: lineární1 ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne t
v)“typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 60:
Glv Lys Gly Ile Thr Ser Gin Τ'/r Ser Asn Thr Giu Giu Arg Leu i * 5 * 10 15
2) Informace o řetězci č. 61:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 15 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly:peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce 5. 61:
Gly Lys Gly Zle Ser Thr Gin Tyr Ser Asn Thr Giu Giu Arg Leu i * * . 5 ' 10 15
2) Informace o řetězci č. 62:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 15 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 62:
Gly Lys Gly Zle Ser Ser Asn Tyr Ser Asn Thr Glu Glu Arg Leu
10 15
2} Informace o řetězci Č. 63:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 15 aminokyselin ,,..... 3) t y p.: . am ino ky s e 1 iny. ...
c) typ řetězce: jednoduchý D) topologie: lineární______ ii) tvp. molekuly :_^oeptiA __ iii) hypotetický: ne„ 'iv) v'opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 63:
Ala llys. Gly Zle Ser Ser Gin Tyr Ser Asn Thr Glu Glu Arg Leu 1 * 5 '10 15
2) Informace o řetězci č. 64:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 15 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řeoězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne vj typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 64:
Gly Lys Gly Zle 1
Ser Ser Gin Phe Ser 5
Asn Thr Glu Glu Arg Leu 10 15
- 86 2) Informace o řetězci č. 65:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 15 aminokyselin t
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 55: ~ ' Gly Lys Gly Zle Ser Ser Gin Tyr Thr Asn Ser Glu Glu Arg Leu 1 5 ' 10 1S
2) Informace o řetězci, č. 65:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 15 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v .opačném .smyslu:^ ne .....„„„ : .........
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce Č. 56:
Gly Lys Gly Zle Ser Ser Gin Tvr Se,r Asn Ser Glu Glu Arg Leu
5 10 15 • - 87 2) Informace o řetězci c. 67:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 25 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny * ......... ...
C) typ řetězce: jednoduchý ____S) topologie: lineární ______________________ ii) typ molekulypeptid _ __. _ _ _ iii) hypotetickýna —iv)—v opačném smyslu: ne..... —......
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 67:
Ser Gin Lys Ala Asn Lys Zla Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr Glu Glu 1 3 10 .15
Arg Arg Leu His Tyr Glv Glu Asn Glv 20 25*
2) Informace o řetězci č. 68:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 8 aminokyselin
B) typ:, aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly:peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 68:
Ile Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr
5
2) Informace o řetězci č. 69:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 9 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid • iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní . xi) popis řetězce č . 69 :
Ala Asn Lys lie Ser Τ’/r Gin Ser Se'· i 5
2) Informace o řetězci č. 70:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne » -· iv)’ v opačném smyslu: ne · --v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 70:
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr Leu
10
2) Informace o řetězci č. 71:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin ··· ---· 3) -tyo : aminokyseliny C) typ řetězce: jednoduchý _ n) tosologís:.lineární—— ---———~ —i15 * typ- mole kul y- ep-t-i = iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: wnitřní xi) popis řetězce č.71:
Ala Asn Gly ile Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr = io
2) Informace o řetězci č. 72:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
--------------------C) typ ře těžce : jednoduchý...........~
Τ'..Λ 4= Λ — A t *- 2.-« - 2 * uupu-.LUg.te; i xAtíčtrtlJ.
ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 72:
Ala Asn Pro Ile Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr i 5 iq
2) Informace o řetězci č. 73:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
3) typ£ aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačnéři smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 73:
Ala Asn Lys Zle Ser Tyr Gin Ser Ala Ser Thr Glu - 5 10
2) Informace o řetězci č. 74:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární, ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne _ v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 74:
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gin Ser Ser Lys Thr Glu 1 S 10
I
-,91 2) Informace o řetězci č. 75 :
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 11 aminokyselin
B) _typ: aminokyseliny _ ____ ~ ' C) typ řetězce: jednoduchý :
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický:· ne ' 7
-- - iv) v opačném -smyslu: ne- --------- - ---------- -- - - ---------------v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 75:
Ala Asn Lvs Ile Ser Tvr Gin Ser Ser Thr Glu
5’ - 10
2) Informace o řetězci č. 75:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
--------------C) typ řetězce: jednoduchý-------- --------- —---------' D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne ““V^““typ^fragfnentuY_ vhrtřní“““ “ ix) vlastnost:
A) název: peptid
B) poloha: 5
D) další informace: d-serin = nepřírodní konfigurace aminokyseliny • -. 92 xi) Popis řetězce č. 76:
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr Glu 15 10
2) Informace o řetězci č. 77:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní ix) vlastnost:
A) název: peptid
B) poloha: 4
- D) další informace: d-isoleucin =. .nepřirodní kon gurace aminokyseliny xi) popis řetězce č. 77:
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr Glu 1 S 10
2) Informace o řetězci č. 78:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ií) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne n±í±v)y;typnf ragmerttu Ttivn-i-třn<····-···--··-····.-··’-··--·· xi) popis řetězce Č . 78 :_________________________
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr GinSer Ser Gin ThryGly _ _ __
2) Informace 'o* řetězci Č. 79: .
i) vlastnosti řetězce:
A) délka:.12 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) -popis řetězce č. 79:
Ala Asn Lys Ile Ser Tvr Gin Ser Ala Lys Thr Glu 1 5 10
2) Informace o řetězci č. 80:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý Ď) topologie: lineární
- 94 ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní ix) vlastnot:
A) název: peptid
3) poloha: 3
D) další informace: d-lysin - nepřírodní aminokyseliny xi) popis řetězce č. 80:
Ala Asn Lvs Xia Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr Glu 1 * 5 10
2) Informace o řetězci č. 81:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin 3) typ: aminokyseliny konfigurace
C) typ řetěze e: jednoduchý
D) topologie: lineární
ii) typ molekuly: peptid
iii) hypotetický: ne
iv) v opačném srny slu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 81:
Ala Asn Lys lie Ser Tyr Gin Ser Thr Glu _________,,.τ , , - 95 2) Informace ο řetězci č. 82:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin 3 )· typ iy aminokyseliny-—·^ -
C) typ řetězce: jednoduchý __. o.).. .top.Q-iocr_t lineární .......— . _ . —
ΐ ή ) T ..... — - _ J_ _· -3
Λ, a.-, -
- -s , . i i i) hypotetický: ne · — - · —
iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní
xi) popis řetězce č. 82:
Ala Asn Lys Ser Tyr Gin Ser Ser Thr Glu
i s ío
2) Informace o řetězci č. 83:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
-----------0) typ řetězce: jednoduchý ' • A r*. Λ, ?· Λ fT ί -λ » . I í··^ a *->«-> -Γ i-» / -w-j. i *5 . j.j»ncatUA ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném případě: ne
v)”typ fřagmentul vnitrní γι') η-ητΛ i ς λλ ♦Λ'τη λ X Q Ο ·
Λ. J. / jy j. Ο Ο .
Ala Asn Lys Zle Tyr Gin Ser Ser Thr Glu
5* 10
2) Informace o řetězci č. 84:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 34:
Ala Asn Lvs Ala Ser Tyr Gin. Ser Ala Ser Thr Glu 1 . ' 5 10
2) Informace o řetězci č. 85:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 85:
Ala Asn Glu Ile Ser Tyr Gin Ser Ala Ser Thr Glu
S 10
2) Informace o řetězci č. 86:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin ---·-..·····-—- 3) typ :- aminokyseliny-- C) typ řetězce: jednoduchý ___ =_DT). ..:t.Q.pQ._lo.g.i_e.4. -I-ine-á-mí—— * 4 Λ z. ·» w zJ ·*» — / w J b* J. š* j «Š? U J· '= λ» .^.iiij^hypofg Cicky; ně:·· --- ivj v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 86:
Lys Ile Ser Tyr Gin Ser Ser 1 3
2) Informace o řetězci č. 37:
i) vlastnosti rotszcs:
A) délka: 7 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny C) typ řetězce: jednoduchý □) topologie: Lineární ii) typ molekuly: peptid _____ iii.)__hypo tetický : ne iv) v opačném srny sluj ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 87:
Ser Tyr Gin Ser Ser Thr Glu
5
2) Informace o řetězci č. 88:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 88:
Ser Tyr Gin Ser Ser Thr Leu 1 3
2) Informace o řetězci Č. 89:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 8 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 89:
Ala Ser Tyr Gin Ser Ser Thr Glu i 5
Η·
2) Informace o řetězci č. 90:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
1·^ r»5 » <5 «r r nt r u j uy . cuuxi r\y o <5 axíij r· > 4—__,· byp L“'-CÓL7. jcuiiuuuuny
D) topologie: lineární ----ii) typ molekulypeptid ii) hypotetický: _ne __ _ _ iv) v opačaém smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 90:
Olu Ile -Ser Tyr, Gin Ser Ser Ser Thr Glu Y 5 10
2) Informace o řetězci č. 91:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jedhodúchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 91:
Ala Asn Glu Ile Ser Tyr Gin Ser Ser Ser
S 10
100
2) Informace o řetězci č. 92:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 92:
Ala Asn Lvs Ile Ser Τ'/r Tyr Ser Ser Ser Thr Glu 1 5 10
2) Informace o řetězci č. 93:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid „„ iii) hypotetický: ne . .______.
iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitrní xi) popis řetězce č. 93:
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Tyr Ser Ala Ser . Thr Glu
S 10 .______ -101 - ___
2) Informace o řetězci č. 94:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
C) typ řetězce: jednoduchý ' ii! typ 'molekuly ·, peptid ‘ ' iii) hypotetický: ne’ iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 94:
Ala Ser Tvr Gin Ser Ser Leu 3
2) Informace o řetězci č. 95:
i) · vlastnosti rřetězce :
A) délka: 10'aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie.: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne __ iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 95:
Ala Asn Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr Glu i 5 10
102
2) Informace o řetězci S. 96:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 9 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 96:
Ala Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr Glu 1 5
2) Informace o řetězci č. 97:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 8 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární
ii) typ molekuly: peptid
iii) hypotetický: ne
iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu : vnitřní
xi) popis řetězce č. 97:
Ser Tyr Gin Ser 1 Ser Ser Thr Glu S
_____- - 103 - - -2) Informace o řetězci č. 98:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 11 aminokyselin amino ky s βίτίηρ
C) typ řetězce: jednoduchý ·’ 'Γϊ :'D)-;7.tepologTišriríněař^i'^^ ii] typ moTekuly:“peptid™...... * iii) hypotetický: ne « !iV-.
iv) v opačném smyslu: ne.
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 98:
Axa Asn Lys Ala Ser Tyr Gin Ser Ala Ser Cys - 3 io
2) Informace o řetězci č. 99:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 5 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 99:
Gin Ser Ser Thr Glu 1 . 5
104
2) Informace o řetězci č. 100:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: δ aminokyselin
3) typ: aminokyseliny 0) typ řetězce: jednoduchý D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 100:
Τ’/r Gin Ser Ser Thr Glu 5
2) Informace o řetězci č. 101:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 6 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 101:
Ser Gin Ser Ser Thr Glu
- 105 2) Informace o řetězci č. 102:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin ____Π'.'Ι______..VI*3 ml·» .*·> X }>·· r“X X Ί- 4 ·-----------------*^-^7 w-i—«iirwi i«w·-rvy-c i i i iy-C) typ řetězce: jednoduchý “uλ %0’poi'og’ié“'r;iine“áTní^ ii,1 2 3 tvo molekulvT. óeótťď iii) ‘hypotetický': ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce ě. 102:
Ala Asn Lys lis Ser Gin Ser Ser Thr Glu 15 10
2) Informace o řetězci Č. 103:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 11 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny _ .
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: iineárníu) typ molekuly: peptid i_ii_)_ _hypotetický: ne ____________ iv) v opačném smyslu:.ne __
v) typ fragmentu: vnitřní ix) vlastnost:
*
A) název: peptid
B) poloha: 3
D) Další informace: nepřírodní ornithin
106 xi) popis řetězce č. 103:
Ala Asn Xaa Ile Ser Tyr Gin Ser Ser Thr Glu 13 10
2) Informace o řetězci č. 104:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní ix) vlastnost.:
A) název: peptid
3) poloha: 2
D) další informace: značení = nepřírodní 3,4-dichlor fenylalanin xi) popis řetězce č. 104:
Ser Xaa Gin Ser Ser Thr Glu 1 5
2) Informace o řetězci č. 105
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne v,' typ fragmentu: vnitřní ±x)' *vlastno-s t: ==-=-==-=-==--== ' A) název: nehtíH* ”
- ς~ — z- — ““ .i.,, π j -poiona7; 'c, . -i ·_* *!>-)—dal·» u“~Lni‘o rroac eτ zirac&nf -alanin
xi) popis řetězce č. 105:
Ser Xaa Gin Ser Ser Thr Glu
2) Informace o řetězci č. 105:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
3)- typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) t o p olegie: lineární ii)-typ molekuly: peptid
111) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní__ xi) popis řetězce č
105:
Se i
Lys Gin Se:
Ser Thr Glu 5
108
2) Informace o řetězci č. 107:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 107:
Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Leu 1 5
2) Informace o řetězci č. 108:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
B) . typ: aminokyseliny
C) typ řetězce D) topologie: : jednoduc lineární
ii) typ molekuly: protein
iii) hypotetický: ne
iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní
ix) vlastnost:
A) název: peptid
0) poloha: 1
D) nepřírodní kyselina ecsilon-aminokapronová
- 109 xi) popis řetězce č. 108:
Xaa Tvr Gin Ser Ser Ser Leu i 4 5
2) Informace o řetězci č. 109
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: ll aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
0) typ.řetězce: jednoduchý 0) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní ix) vlastnost:
A ) »·* « λ ** » i e\ / HO-^GV . ýCUUiU
3) poloha: 4
D) další. informace: značení = nepřírodní N-methylisoleucin xi) popis řetězce č. 109:
L**s aC&s Oln išjr ps?
2) Informace o řetěze i č. 110
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineárn.í
110 ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne vj typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 110:
Ser Tyr Gin Ser Ser Thr Giu i S
2) Informace o řetězci č. 111:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 6 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie:. Lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 111:
Tyr Gin Ser Ser Thr Giu 1 5
111
2) Informace o řetězci č. 112:
i) vlastnosti řetězce:
A L^dé 1 ka :--2/U am ino ky s eláne-- B) typ: aminokyseliny
θ) ,J?.yP Ě® tězc_e.:.„ j.e-dno_duchý-_.==^.-==-==-=-==___D) topologie: lineární
-. ii). typ molekul v: oeotid i 11)_h.ypo-tf* p 1 o uý-: ne____—— iv) v opačném smyslu: ne v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 112:
Ser Tyr Lys Ser Ser Thr Glu 1 =
2) Informace o řetězci č. 113:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny O typ řetězce: jednoduchý D) topologie; lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu; vn i t řn i xi) popis řetězce č. 113:
Ser Tyr Tyr Ser Ser Thr Glu 1 3
112
2) Informace o řetězci č. 114:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: S aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 114:
Ser Tyr Glr. Ser Ser Leu i 5
2) Informace o řetězci č. 115:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: δ aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 115:
2^*- Ser Ser Leu ' s
113
2) Informace o řetězci č. 116:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny '7~ t y p~řětšzceY jednoduchý’“’
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii)'hypotetický: ne v__opačném- srny st u - -ne *-----·——
v) typ fragmentu: vnitřní ix) vlastnost:
A) název: peptid
3) poloha: 1
D) další informace: značeni = nepřírodní kyselina 1,2-diaminopropionová xi) popis řetězce Č. 116:
Xaa Tyr Gin Ser Ser Ser Leu i 5
2) Informace o- řetězci č, 117:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 11 aminokyselin Bj^typc^aminoky sel-iny “““——
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární
ii) typ molekuly: peptid
iii) hypotetický: ne
iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní
xi) popis řetězce č. 117:
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr 1 5 10
114
2) Informace o řetězci č. 118
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 12 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce Č. 118:
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gin Ser Ala Ser Thr Leu i ' 5 10
2) Informace o řetězci č. 119:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 11 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne . , .....
iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 119:
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gin Ser Ala Ser Leu I 5 13
115 ·
2) Informace o řetězci ě. 120: i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 11 aminokyselin
C) typ řetězce: jednoduchý
-- ~ Ό;) top o 1 ogu'e'': -'ΠηβΗτή'ί'^ v~''' v™ i i) typ molekulý:“pép'tid ™“ iii) hypotetický: ně :iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 120:
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gin Ser Sej Ser Ί ' □ 10
2) Informace o řetězci Č. 121: i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 10 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
0) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne __ iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 121:
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gin Ser Ser Leu i ς
116
2) Informace o řetězci S. 122:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní ix) vlastnost:
A) název: peptid
3) poloha: 7
D) další. informace:. značení = nepřírodní konfigurace d-leucinu xi) popis řetězce č. 122:
Ser Tyr Gin Ser Ser Thr Leu 1 5
2) Informace o řetězci č. 123: i) vlastnosti řetězce:
..... A) délka: 11 aminokyselin .. ________ :
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní
- 117 - .....- .
xi) popis řetězce č. 123:
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Ala Ser Ser Ser Leu 15 10
T η τ' π o r> '-‘a řS « λ X 1 o λ · — - · — « - -wvkW kz vz k V UU i Uz « lí T .
i) vlastnosti řetězce:
A) délka:·-7 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ,řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid ii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 124;
Lys Tyr Gin Ser Ser Ser Ser
5
Informace o řetězci č. 125:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý ----- --- D) —t c p o 1 o g i e : - 1 i ne ár n i—— — ii) typ molekuly: peptid ii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 125:
Ser TZr Gln_Ser SerLys Leu
..........1 ........... 5
113
2) Informace o řetězci č. 125:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní ix) vlastnost:
A) název: peptid
3) poloha : /
D) další informace značení = nepřírodní konfigurace d-leucinu
xi) popis řetězce č. 125:
Ser Tvr Gin Ser Ser Lvs Leu 1 * 5
2) Informace o řetězci č. 127:
i) vlastnosti řetězce:
A) .délka: 7 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní
- 119 xi) popis řetězce č. 127:
Asn Lys Ile Ser Tyr Tvr Ser 1 5
2) Informace o řetězci č. 128:
~7· i) v i as rno s t i ’ řetězce : ~ ;
A) délka: 7 aminokyselin -* - ř) typ aminokyseliny ’ *· ^•CÚ^typr řetězce r jednoduchý D) topologie: ' Lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce, č. 128:
Asn Lys Ala Ser Tyr Gin Ser • _ * o
2) Informace o řetězci č. 129:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 5 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny G) typ řetězce: jednoduchý
-) —¢.o po To g te -: “T i neár nf— ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní
A
120 xi) popis řetězce č. 129:
Ser Tyr Gin Ser Ser 1 5
2) Informace o řetězci č. 130:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 8 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu:: vnitřní xi) popis řetězce.č. 130:
Asn Lvs Zle Ser Tyr Gin Ser Ala 1 * 5 .
2) Informace o řetězci č. 131: i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 8 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 131:
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Tyr Ser τ 5
- 121
2) Informace o řetězci č. 132:
i) vlastnosti řetězce:
_ A) délka: 8 aminokyselin
....... “'3í~ťyp': amihckyseliňy
C) typ řetězce: jednoduchý Q) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid' iii) hypotetický: ne iv) v opačném .smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 132:
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gin Ser ' 1 5
2) Informace o řetězci č. 133: i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 6 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: Lineární ii) typ molekuly: peptid __iii) hypotetický: ne______ iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 133:
Ser Tyr Gin Ser Ser Thr
5
122
2) Informace o řetězci č. 134:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 5 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 134:
Ser Tyr Gin Ser Ser Leu 1 5
2) Informace o řetězci' č. 135:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 6 aminokyselin
3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne
Iv) v opačném smyslu: ne v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 135:
Ser Tyr Gin Ser Ser Leu
5
- 123 2) Popis řetězce S. 136: i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 9 aminokyselin
-3-)—-typ^-amfnokysed^ínv -- -·.
C) typ řetězce: jednoduchý
........ topologieunňeárřu-^i·~
- -ii) typ’ molekuly: peptíď ^^iliUhýpbteťickýVňe * ’ iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 136:
Ala Asn Lys Zla Ser Tyr Gin Ser Ala 1 5
2) Informace o řetězci č. 137: i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 9 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 137:
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Tyr Ser
3
124
2) Informace o řetězci č. 138:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 9 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: Lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce.č. 138:
Ala Asa Lys Zla Ser Tyr Tyr Ser Ala i - 5
2) Popis řetězce č. 139: i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 9 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 139:
Ala Asa Lys Ala Ser Tyr Gin 3er Ala i S
125 2) Informace o řetězci č. 140: i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 5 aminokyselin . BO^typ-:—amfno ky s edriny”----C) typ řetězce: jednoduchý 'D) topologref^hěařnf“^“ lij'typ molekuly: peptid ~ -iii)“ hypotetický”: ne iv) v opačném smyslu: ne v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 140:
Lys Tyr Gin Ser Ser 1 3
2) Informace o řetězci Č. 141:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 5 aminokyselin ---------3)—typ : aminokyseliny '-- ' ‘ - —' —
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid =i-liýi=hypo-tetický^mne,=~ ^^ix)^v^.©paGném^swy-s4-U4“-n-e— v) typ fragmentu: vnitřní ix) vlastnosti:
A) název: peptid
B) poloha: 1
D) další informace: značení = homoarginin
125 xi) popis řetězce č. 141:
Xaa Tyr Gin Ser Ser
2) Informace o řetězci č. 142:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 6 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní xi) popis řetězce č. 142:
Lvs Tvr Gin Ser Ser Ser 1* * · S
2) Informace o řetězci č. 143:
i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 5 aminokyselin - - .3) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní __________,. -...........___________________ __________ _______-127 - .............
ix) Vlastnosti:
A) název: peptid S) poloha: 1 —D.).-. dalš informace :-.-značení.,= homoarer i η i n------—. — xi) popis řetězce č, 143:
Xaa Tyr Gin Ser Ser Ser
2) Informace o řetězci č. 144:
i) vlastnosti řetězce:
_____L________v)
A) délka: 7 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řecězce: jednoduchý
D) topologie: lineární ii) typ molekuly: peptid
T i hlřr>ο +·λ * -ί — — / * i. J y w U C. u, au rwj . L IC iv) v opačném smyslu: ne typ_ fragmentu:
vnitřní xi) popis řetězce č. 144:
Ser Tvr Gin Ser Ser Ser Leu 1 * 5
2) Informace o řetězci č. 145: i) vlastnosti řetězce:
A) délka: 7 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární
128 ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitrní ix) vlastnost:
A) název: peptid
B) poloha: 1
D) další informace: značení xi) popis řetězce č. 145:
Xaa Tyr Gin Ser Ser Ser Leu 1 S
2) Informace o řetězci ,č. 146: i) vlastnosti řetězce.:
A) délka: 7 aminokyselin
B) typ: aminokyseliny
C) typ řetězce: jednoduchý
D) topologie: lineární, ii) typ molekuly: peptid iii) hypotetický: ne iv) v opačném smyslu: ne
v) typ fragmentu: vnitřní ix) vlastnosti:
A) název: peptid
3) poloha: 7
D) další informace: značení xi) popis řetězce č. 146:
Lys Tyr Gin Ser Ser Ser Leu 1 5 = homoarginin = norleucin
Zastupuje:

Claims (17)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY _ -f) 1'i'ťřnří<á Λ^νΗ.ν.'·_Λ'Κ<? '—Ú-. ... - — ~ g—’ ---------OvM cucx dniiuvKy 5bt3i3.il ’· rozpoznávanou a selektivně proteolyticky štěpenou volným -an-tcganem, 'Specifickým ' □ro'~proš’t”átu.l·“' T -'='~ -- ---- λ λ >?% aminokyselin volí ze skupiny
    a.) AsnLysfleSerTyrGlníSer (řetězec c. 13),
    b) LysfleSerTyrGInISer ( řetězec δ. 14),
    c) GlyGIuAsnGIyVaiGinLysAspVaiSerGIiiXaaSeffleTyríSerGInTniGIii ’(řetězec δ. 15) ,
    ά) GlyLysGIyfleSerSe^řlnTyrjSerAsnThiGÍuGIuArsLeu f r___ ~ ’ κ 4. <= C. c* i t
    I
    e) AsnLysfleSerTyrTyrjSer (řetězec δ. 127), xy A^SsL»ysÁiŠOfwT’iytOlílfiCT ζ?@·ίβ3βο 5- L
  2. 2S) f
    S) iyr^řlxijS^ritíf (^etzš^ec i oq
    n.) Lys i yiGintSeroer (řetězec δ. 140) a
    i) hArgTyrGIn(SerSer (řetězec δ·. I4i), kde ’nArg znamená 'nomcarginin a Xaa znamená jakoukoliv přírodní aminokyselinu.
    130
  3. 3. Oligopeptidy podle nároku 2, v nichž se sekvence aminokyselin volí ze skupiny
    a) AsnLysfleSerTyiGIniSerSer (řetězec č.is), « b) AsaLysKeSerTyrGIhiSexAia. (řetězec c. 130),.
    * c) A^nLysHeSerTyrGIaiSerSerSer (řetězec c. L7),
    d) AlaAsuLysUeSerTyrGIniSerSerSer (řetězec č. ia),
    e) LysHeSerTyrGIniSerSerSerThrGIa (řetězec č. 19),
    f) G< y fn π A sntn y V a i Gí π Γ. vs A sn V alS erGIn ArgS erHeTyriS črGInThrGIu. (řetězec č.
  4. 4),
    g) GlyGIiiAsnGlýVaiGIiiLysAsp VaíSerdnSerSerileTyriSexGiiiThrGIu . (řetězec č. 5),
    a) AlaAsnLysHeSerTyrTyriSer (řetězec c . 131') , i) AlaAsnLysAIaSerTyrGIiiiSer (řetězec č- 132), j) SerTyrCIníSerSerTar (řetězec c. 133), k) SerTyrGIníSerSerSer....... (řetězec č. 134), 1) LysTyrGInlSerSerSer (řetězec č. 142) , m) íiAxgTyrGIiiiSerSerSer (řetězec č. 143) a a) SerTyrGIníSerSerLtu (řetězec c. 135).
    - 131 4. Olxgopeptidy podle nároku 2, v nichž se sekvence aminokyselin volí ze skupiny • a.) ~Asní.vsHerrr( n?ť?-T»c Xym n).
    kΛ ,Α.Τχ Λ_~—Γ -ττ._.σ. v. CX—ie__A.I uy rxwu-uJiii-vcuJ.c^cii vtkJUiJQerřkW.
    (ř«tžsee; c . -136)
    c) AsnLvsneSerTvrfrTnlSé»^#
    d) AlaAsnLys3eSerTyrGlníSerSerSerThrGlu (řetězec δ. Ll),
    e) C-lyGIuAsnGIy VaiGlnLvsAsuVlÍSenGmArsSerileTvrfSerGInThrGiu (řetězec' δ. 4) ,
    f) AlaAsnLysHeSerTyrTyriSerSer
    g) AlaAsnLysHeSerTyrTyriSenAIa,
    h) AlaAsnLysAiaSerTyrGIatSerAla
    (řetězec δ- 137) (řetězec c · 133) (řetězec δ . 139)
    Íťlísskí. ·* «❖«&;?
    i) AíaSerTyrGIníSerSerLeu (řetězec δ. 94),
  5. 5, Oligopeptid podle nároku 2, se sekvencí aminokyselin
    a) GlyAr^LysAlaAsaLysHeSer i ytfjIdSerierSezTaiGluGluAr’' Ar^·
    -fcsutiiSr/t vjiyKjuinSaktty
    Třetezěc c. S).
    5. Qligopeptidy podle nároku 1, aminokyselin volí ze skupiny v nichž se sekvence
    132
    AsnArgileSerTyrGIniSer (řetězec č. 2iú
    AsnLysValSerT^iGlniSer (řetězec č. 22)
    AjnLysMerSerTyrGInlSerSer (řetězec 5. 23) AjnLysLeuSerTyrGIii ISerSer (řetězec č. 24)· AsuLysileThrTyrGIiiiSeSerSer (řetězec c- 25)
    AsnLysUeSerPheGIniSerSerSer (ře tězec c. 25) AsnLysHeSernpGIníSerSerSerThr {řetězec- s.. 27) AsrLysHeSerTyrAsiiiSerSerSerThr (řetězec S. 23) AsnLysHeSerTyrGlruThrSerSerThr (řetězec S. 29) AsnLysUeSerTyrGIniSer (řetězec c. 30) GinLysneSerTyrGIniSerSer (řetězec č. 31) AsnArgLeThrTyrGIniSerSerSer (řetězec č. 32) AsnArnHeSerTheGIniSerSerSerThr (řetězec c. 33) AsnArgQeSerTrpGIniSerS^erThr. (řetězec č. 35). AsiLArgLeSerTyrGMThrSerSerThr Č. 36)
    F'· .AsnLysHeThrTyrGIniThrSerSerTnr (řetězec č. 27) AsnLysLsuSerTyiGIniTarSerSerTíir (řetězec č. 33)· CmLysLzuSerTyrCIiiíSerSerSerThr (řetězec S. 39) AsnArgLcuSerTyrGIníTíirSerSerTar (řetězec c. 40) AsuLysVaiSerPheGIniSerSerSerThr (řetězec č. 4i)
    AjXLAxgVaiSerTipGInlSerSerSerTnr (řetězec S.42)
    GmLysVaiSerTyrGlniSerSerSerThr (řetězec c.43)
    GlnLysIIeSerTyrGInlThrSerSerThr (řetězec č.34)
    AjaLysLeSerTyrGInlSerSerSerThr (řetězec č. 44).
    t
  6. 7. Oligopeptidy podle nároku 1, v nichž se se aminokyselin volí ze skupin
    AixAsnLysHeSerTyrGmiSerSerSerThrGiu-aiiiiá' ’ (řetězec c. A g. A la A τη Γ.ysfleSgrTyrCTdSerSerSerThrLeu (řetězec č.
    A.c-ALaAsnLysLeSerTyrGldSerSerSerTntGlu-amici (řetězec A C. A la A CTÍ ysneSarTyrdníSerSerSerThrLeu-amíd (řetězec Ac-AJzAsnLysneSerTyrGIníSerAlaSerThrGlu-amiá (ře tězec Ac-ALaAsnLysfleSerTyrGIiúSerSerLysThrGÍu-ami<ii (řetězec Ac-ALaArnLysLeSerTyrGIniSerSer nzrGlu-amiá (řetězec ikvence
    11) _ 70)
    S. 11)
    C. 70)
    S. 73)
    S. 74)
    S. 75) •XT. .
    - 133 Ac-AJaA^ys£eSerT:/rGIníSerSerCmrnrGIu»ainiá (řetězec č·, 78) Ac-AiaA2sLysus3«^iyr3mÍSerAkLysrarGlu-amÍQ (řetězec čr 79) (řetězec č._ 81).
    Ac-AiaAsnLysoerTyrZ-inÍSsrSerThrC-Iii-aniiá- (řetězec 5. 82) Ac-AIaAsnLysAiaSerTyrGIniSerAlaSerThiGlu-amid (tězec č. 84)
    Ac-AlaAsaGluneSetTyTGluteerAIaSerThxGlu-amiá (řetězec c Ac-AšíLysile5^TyrCSffiSěně5>affiičí: (ř^tězecTc-. ~ϊα-)- -85)
    A. ^*._T 'i
    TrWlíf^' /4 al .......
    .86,1
    Ac-3éft yn Tmiňe^erljlLvjiu-iuyXw-i®1 *A^AItísrTyr®siSeí wÚáTXXíXwÁU» €£
    0.-85ΐ
    Ac-AlaAsaLysiIeSerryrTyrÍSerSerSerTlHGla-ainicir (řetezec c. 92) Ac-AlaAsiiLvsHeSerTyrryrÍSeiALaSerThrGIu-amid (řetezec c. 92)
    Ac-ALaSerTyrGiiiíSeTSčiLsu-anHd (řetězec č. 94) Ax-ALaAsnSerTytómiSerSerSerThiGIu-aiiiidí. (řetězec č. Ac-AlaSerr/rGluiSerSerSerThrGlii-ainid (řetězec S.
    Ac-SerTyrGIníSerSerSerThiGliL-amd· (řetezec S.
    Ac-AIaAs±ysAlaSeriyiG'míSerAIa5«Cys-2mid (řetězec
    95)
    96)
    97)
    3. Způsob szanovení proteolytické účinnosti volného antigenu, specifického pro prostatu, ve zkoumaném vzorku, vyznačující se tím, že se
    a)----------uvede do reakce - substrát, kterým je oligopeptid,--------:
    obsahující sekvenci aminokyselin, rozpoznávanou a selektivně proteolyticky štěpenou volným antigenenr specifickým pro prostatu, se zkoumaným vzorkem'a
    Jo )______P ro_káže= s e...-_zda_došIo„ke„šÍtěpenl_5ubst_rátu.
  7. 9 . Žpůšob^podíe nároku-87 v ý žna g—q-—j-f'~c—— se t í m, že se štěpení substrátu prokazuje analýzou reakční směsi pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie.
  8. 10. Způsob identifikace sloučenin, schopných způsobit inhibici proteolytického štěpení antigenem, specifickým pro prostatu, vyznačující se tím, že se
    134
    a) uvede do reakce substrát, tvořený sekvencí aminokyselin, obsahující místo, rozpoznávané a selektivně proteolyticky štěpené volným antigenem, specifickým pro prostatu, se specifickým antigenem, specifickým pro prostatu v přítomnosti zkoumané látky a
    b) . stanoví se, zda substrát byl rozštěpen, což je známkou schopnosti zkoumané látky způsobit inhibici proteolytické účinnosti antigenu, specifického pro prostatu, stanovení je možno uskutečnit určením poklesu rozštěpení substrátu ve srovnání se štěpením v nepřítomnosti zkoumané látky.
  9. 11, Způsob podle nároku 10, vyznačuj ící se t i m, že se štěpení substrátu prokazuje analýzou reakční směsi pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie.
  10. 12. Kónjugát., určený pro léčení zhoubných nádorů prostaty, tvořený'cytotoxickou látkou,.spojenou s oligopeptidem, obsahujícím sekvenci aminokyselin, rozpoznávanou a selektivně proteolyticky štěpenou volným antigenem, specifickým pro prostatu, přičemž vazba mezi cytotoxickou látkou a oligopeptidem je kovalentní vazba nebo vazba pomocí chemického vazného řetězce.
  11. 13.Kónjugát podle nároku 12, v němž se cytotoxická
    látka volí ze skupiny: a) •antracyklinová skupina látek, b) . účinné látky čeledi vinca, i c) mitomyciny, d) bleomyc iny, l· e) cytotoxické nukleosidy, f) pteridinové látky, 1 g) diyneny, • h) estramustin,
    <O
    XI
    Ν» .xi·
    135
    i) cyklofosfamid, a
    h) podophyllotoxiny.
    ___ ? 4 · JS?!1 JAS át podle nároku _ 12 v. němž se. cy to toxická—Tátka νοΓΓ ze skupiny f ~~ ——— ™
    a) . dpxorubic.i.n_:. . . _____
    b) carminomycin, o; daunórubic.in, ' ’ - .. ., - d)^- ^aminópterínj 'Λ*·* ” ’ ~ ”^5 methotrexat?
    f) methipterin,
    g) dichlormethotrexát,
    h) mitomycin C, i) porfiromycin,
    j) 5-fluorouracil, ,
    k) 5-merkaptopurin,
    l) cytosinarabinosid,
    m) podophyllotoxin,
    n) etoposid,
    o) etoposidfosfát,
    p) mekphalan,
    q) vinblastin,
    r) vineristiň,
    s) leurosidin, i
    t) vindesin,
    -X Λ
    1 1 Ί Oe+“V-»Qr*Mv<-.4--í—.
    '-“Z <· - 1· diílUO Lií i ,
    V.)__ r* i 0 + 7 _ — -------------- „ - ----------w) cyklofosfamid, a
    x) leurosin.
  12. 15. Konjugát podle nároku 12, v němž je cytotoxickou látkou doxorubicin nebo vinblastin nebo cytotoxické deriváty těchto látek.
    136
  13. 16. Konjugát podle nároku 12, v němž cytotoxíckou lát kou je doxorubicin nebo jeho cytotoxický derivát.
  14. 17. Konjugát podle nároku 16, obecného vzorce I
    C) kde oligopeptidem je oligopeptid, specificky rozpoznávaný volným antigenem, specifickým pro prostatu, PSA a schopný být pro teolyticky rozštěpen účinnosti tohoto volněno antigenu, X. chybí nebo znamená aminokyselinu ze skupiny:
    L,
    a) fanylalanin,
    b) Leucin, c) vaiin, ~.d) isoLeucin, -e) (2-naftyl)alanin. f) cyklohexylalanin, g) difeny lalani.n, ' h) norvaiin nebo j) norleucin,
    R znamená atom vodíku nebo -(C=O)R*, a
    R' znamená alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo aryL.
    ,- 137
  15. 18. Konjugát podle nároku 17 je oligomer s následující sekvenci v němž oligopeptidem aminokyselin:
    λ___.
    vsiíe-Tr?( retezec
    b) LysHe5erTyrGIsiSer (řetězec č. 14), íf-7\u.^iur,já^u * auctuwA^oemeiynčeíijíiiTíEťJIa (retezec c— 13),
    d) GxyLysGIyneSeáerGhiTyríSerAsiTfliGIuGÍiiArgLea (řetězec č. 2),
    e) AsuLysfleSerTyrTyríSer (řetězec č. 127),
    f) AsnLysAiaSerTyrGmiSer (řetězec č. 123),
    S) SerTyrGImSerSer (řetězec o. 129) a
    h) hAúgTyrCHaíScrSer (řetězec s. 141), kde-Xaa znamená jakoukoliv přirodní aminokyselinu,
    X- chybí nebo znamená aminokyselinu «ΐηιοΗγ·
    a) Leucin,
    b) iso Leucin’, I__^__cJ_no.Eleucin-; nebo— --------- — .===,^==^=====
    d) vaiin λ znamená acetyl, pivaloyl nebo benzoyl. hArg znamená homoarginin.
    138
  16. 19.
    Konjugát podle nároku 16 obecného vzorce kde
    X znamená:
    G
    Κ,Ν— AsnLysileSerTyrGInSer—C — (řetězec c ..13)
    C
    K2N—AsnLysileSerTyrGinSsrSsr—C- (řetězec c. 16),
    7 II - 7-x — AánLysíleSerTyrGlnSsrSerSer —G — (retezec c. 17), a
    K2N—AsnLysííeSerTyrGínSerSerSerTnr —G— (řetězec č. 10), í? . . ,
    M2N—AsnLyslIeSerTyrGínSerSerSerThrGIu —C“ (řetěuec c. 3), ~ 0 Z . II
    H2N—.AlaAsnLysUeSerTyTGtnSerSerSer i nrGíu —G — (řetězec č. ll)
    AcHN—AIaAsnjLysneSerTyrGlnSerSsrSerrnr—G- (řetězec 117) 0
    II „ __K
    AcHU—AlaAsnLysileSerTyrGinSerSerSerThrLsii-G— (řetězec c. 70j, O 11 AcHN—AJaAsnLysAlaSerTyrGtnSerAlaSerThrLee-G— (řetězec c- na;
    139
    A -ÍJ1 i *C,----η—AiaAsnLysAiašsrryrGInSsrAIaSertsu-Č- (řetězec č.
    Q
    II
    U9)„
    Ac.tN AlgAsnLysAjaSsrTyrGínSsrSsrSertsu.—C— (řetezec ě- 120) ;axu k t ·'-.....>i i?:
    G
    -II
    -rtu. ax ««esancyssígaeriyRšínt-srSerLsiř—H— /- - J v—iw=n—i (řetezec č. 121) r
    U ií
    AcHN—SerryrGlnSerSsrSsrt2u-=€ .. (řetězec c. 144) , aghím nArg ί yrGínSěfSerGsrihu—c '(řetězec' c. 145)7
    AcHN—uysíyrGínSsrSsrSsrúsu—G — (řetězec č. 124)
    O
    AcHN—LysTyrGínSsrSsfNIe —G — (řetězec č. 146)
  17. 20. Konjugát podle nároku 15 vzorce ZX:
    kde oligopeptidem je oligopeptid, specificky rozpoznávaný volným antigenem, specifickým pro prostatu, PSA a schopný proteolytického štěpeni tímto antigenem.
CZ963810A 1994-06-28 1995-06-07 Oligopeptides, conjugates containing them and method of determining proteolytic efficiency of free antigen CZ381096A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/267,092 US5599686A (en) 1994-06-28 1994-06-28 Peptides
US40483395A 1995-03-15 1995-03-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ381096A3 true CZ381096A3 (en) 1997-04-16

Family

ID=26952210

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ963810A CZ381096A3 (en) 1994-06-28 1995-06-07 Oligopeptides, conjugates containing them and method of determining proteolytic efficiency of free antigen

Country Status (26)

Country Link
US (1) US6143864A (cs)
EP (1) EP0771209B1 (cs)
JP (1) JPH10502619A (cs)
KR (1) KR100379351B1 (cs)
CN (1) CN1156964A (cs)
AT (1) ATE223224T1 (cs)
AU (1) AU689934B2 (cs)
BG (1) BG63453B1 (cs)
BR (1) BR9508151A (cs)
CA (1) CA2192957A1 (cs)
CZ (1) CZ381096A3 (cs)
DE (1) DE69528064T2 (cs)
DK (1) DK0771209T3 (cs)
ES (1) ES2182908T3 (cs)
FI (1) FI965225A7 (cs)
HU (1) HU220877B1 (cs)
MX (1) MX9700043A (cs)
NO (1) NO965592L (cs)
NZ (1) NZ290239A (cs)
PL (1) PL186341B1 (cs)
PT (1) PT771209E (cs)
RO (1) RO116198B1 (cs)
RU (1) RU2162855C2 (cs)
SK (1) SK164096A3 (cs)
UA (1) UA55371C2 (cs)
WO (1) WO1996000503A1 (cs)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5502037A (en) * 1993-07-09 1996-03-26 Neuromed Technologies, Inc. Pro-cytotoxic drug conjugates for anticancer therapy
US5866679A (en) * 1994-06-28 1999-02-02 Merck & Co., Inc. Peptides
DE69535665T2 (de) * 1994-08-19 2009-04-02 La Region Wallonne Konjugate enthaltend ein antitumorales mittel und deren verwendung
EP0855910A4 (en) * 1995-10-18 2000-07-05 Merck & Co Inc Conjugates that can be used to treat benign prostate hyperplasia
US5952294A (en) * 1996-07-31 1999-09-14 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Peptidyl prodrugs and methods of making and using the same
US5998362A (en) * 1996-09-12 1999-12-07 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US6177404B1 (en) 1996-10-15 2001-01-23 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of benign prostatic hyperplasia
HRP970566A2 (en) * 1996-10-30 1998-08-31 Jones Deborah Defeo Conjugates useful in the treatment of prostate canser
US5948750A (en) * 1996-10-30 1999-09-07 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US6426075B1 (en) 1996-11-06 2002-07-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Protease-activatable pseudomonas exotoxin A-like proproteins
US6545131B1 (en) 1997-05-19 2003-04-08 The Johns Hopkins University Tissue specific prodrug
US6504014B1 (en) 1997-05-19 2003-01-07 The John Hopkins University Tissue specific prodrug
WO1998052966A1 (en) 1997-05-19 1998-11-26 The Johns Hopkins University School Of Medecine Tissue specific prodrug
US6391305B1 (en) * 1997-09-10 2002-05-21 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
PL197006B1 (pl) * 1997-12-02 2008-02-29 Merck & Co Inc Koniugat do leczenia raka prostaty, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna i jej zastosowanie
JP2002505298A (ja) * 1998-03-05 2002-02-19 メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド 前立腺癌治療に有用な結合体
US6174858B1 (en) 1998-11-17 2001-01-16 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US7425541B2 (en) 1998-12-11 2008-09-16 Medarex, Inc. Enzyme-cleavable prodrug compounds
US6649587B1 (en) 1999-04-30 2003-11-18 Slil Biomedical Corporation Polyamine analog conjugates and quinone conjugates as therapies for cancers and prostate diseases
MXPA01011008A (es) 1999-04-30 2003-06-30 Slil Biomedical Corp Conjugados analogos de poliamina y conjugados de quinona novedosos como terapia para canceres y enfermedades de la prostata.
US6482943B1 (en) 1999-04-30 2002-11-19 Slil Biomedical Corporation Quinones as disease therapies
CA2386669A1 (en) * 1999-10-07 2001-04-12 Ciphergen Biosystems, Inc. Prostate cancer marker proteins
GB9924759D0 (en) 1999-10-19 1999-12-22 Merck Sharp & Dohme Process for preparing peptide intermediates
CZ20022998A3 (cs) 2000-03-15 2003-05-14 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Cílené antineoplastické léky a jejich terapeutické použití
AU2001266853B2 (en) 2000-06-14 2005-02-17 Medarex, Inc. Prodrug compounds with an oligopeptide having an isoleucine residue
AU2002235126A1 (en) 2000-11-08 2002-05-21 Slil Biomedical Corporation Novel polyamine analog-amino acid conjugates useful as anticancer agents
EP1219634A1 (en) * 2000-12-27 2002-07-03 Bayer Aktiengesellschaft Cytostatic-glycoconjugates having specifically cleavable peptidic linking units
WO2002081630A2 (en) * 2001-04-06 2002-10-17 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Use of semenogelin in the diagnosis, prognosis and treatment of cancer
PT1567641E (pt) * 2001-08-24 2012-08-21 Uvic Industry Partnerships Inc Proaerolisina contendo sequência de activação de proteases e métodos de uso para o tratamento do cancro da próstata
WO2003046180A2 (en) * 2001-11-28 2003-06-05 Genset S.A. Human cdnas and proteins and uses thereof
US7108976B2 (en) * 2002-06-17 2006-09-19 Affymetrix, Inc. Complexity management of genomic DNA by locus specific amplification
KR101026294B1 (ko) * 2002-10-31 2011-03-31 메타베이시스 테라퓨틱스, 인크. 1,3-프로판-1-아릴 디올의 신규 시클릭 포스페이트디에스테르 및 프로드럭 제조에서의 이들의 용도
AU2003280688A1 (en) * 2003-10-31 2005-05-19 Kurume University Combination therapy of peptide vaccination and estramustine treatment
ES2366380T3 (es) 2005-06-14 2011-10-19 Protox Therapeutics Incorporated Método para el tratamiento o prevención de hiperplasia prostática benigna utilizando proteínas formadoras de poros modificadas.
JP5278873B2 (ja) * 2008-05-14 2013-09-04 国立大学法人九州工業大学 癌診断用試薬
WO2010117768A1 (en) * 2009-04-10 2010-10-14 The Regents Of The University Of California Prostatitis-associated antigens and methods of use thereof
KR20110069618A (ko) * 2009-12-17 2011-06-23 주식회사 셀앤바이오 전립선암 진단용 키트 및 진단방법
AU2015217221A1 (en) 2014-02-13 2016-08-11 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Prodrug compounds and their uses
WO2016003812A1 (en) 2014-07-02 2016-01-07 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Prodrug compounds and uses therof
AU2019207625A1 (en) 2018-01-09 2020-07-30 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Acetal compounds and therapeutic uses thereof

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4296105A (en) * 1978-08-03 1981-10-20 Institut International De Pathologie Cellulaire Et Moleculaire Derivatives of doxorubicine, their preparation and use
US4277466A (en) * 1978-08-29 1981-07-07 Institut International De Pathologie Cellulaire Et Moleculaire Complexes of DNA and esters derived from daunorubicine, their preparation and use
US4446122A (en) * 1979-12-28 1984-05-01 Research Corporation Purified human prostate antigen
OA06421A (fr) * 1980-06-10 1981-09-30 Omnium Chimique Sa Procédé de préparation de dérivés N-(vinblastinoyl-23) d'acides aminés et de peptides.
DE3484691D1 (de) * 1983-04-29 1991-07-18 Omnichem Sa Konjugierte vinblastin-verbindungen und ihre derivate, verfahren zu ihrer herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen.
JPS6034997A (ja) * 1983-05-09 1985-02-22 ジヨージ、ジヨセフ、トダロ 生物学的活性ポリペプチド類
FR2546163B1 (fr) * 1983-05-16 1987-10-09 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives acyles hydrosolubles de peptides ou d'amino-acides, leur preparation et leur application
EP0126344A2 (en) * 1983-05-20 1984-11-28 Abbott Laboratories Tripeptide esters of therapeutic agents
FR2583983B1 (fr) * 1985-06-07 1988-05-27 Centre Nat Rech Scient Nouvelles prodrogues macromoleculaires hydrosolubles, leur preparation et leur utilisation comme medicaments notamment antitumoraux et antiparasitaires
EP0232693A3 (fr) * 1985-12-16 1988-04-06 La Region Wallonne Conjugués de la vinblastine et de ses dérivés, procédé pour leur préparation et compositions pharmaceutiques les contenant
FR2626882B1 (fr) * 1988-02-08 1991-11-08 Ire Celltarg Sa Conjugues de derives de vinca comportant une chaine detergente en position c-3
US5391723A (en) * 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
DE3930696A1 (de) * 1989-09-14 1991-03-28 Hoechst Ag Gallensaeurederivate, verfahren zu ihrer herstellung, verwendung als arzneimittel
US5220001A (en) * 1989-10-25 1993-06-15 Zaidan Hojim Biseibutsu Dong-A Pharm Co. Anthracycline glycoside derivatives
IT1241927B (it) * 1990-05-14 1994-02-01 Menarini Farma Ind 3'-deamino-4'-deossi-4'-amino-8-fluoroantra- cicline processi per la loro preparazione e composizioni farmaceutiche che le contengono
US5137877B1 (en) * 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
SE9002480D0 (sv) * 1990-07-23 1990-07-23 Hans Lilja Assay of free and complexed prostate-specific antigen
EP0513388A4 (en) * 1990-11-30 1993-06-30 Asahi Glass Company Ltd. Peptide with activity of inhibiting cancer cell infiltration, composite thereof, and cancer metastasis inhibitor
FR2678274A1 (fr) * 1991-06-25 1992-12-31 Medgenix Group Sa N-leucyl epirubicine application a titre de medicament antitumoral et procede de preparation.
US5288612A (en) * 1991-07-03 1994-02-22 The Scripps Research Institute Assay methods for detecting serum proteases, particularly activated protein C
US5622929A (en) * 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
DE4233152A1 (de) * 1992-10-02 1994-04-07 Behringwerke Ag Antikörper-Enzym-Konjugate zur Prodrug-Aktivierung
ES2191018T3 (es) * 1992-10-29 2003-09-01 Univ Jefferson Procedimiento para detectar micrometastasis de cancer de prostata.
WO1994020114A1 (en) * 1993-03-12 1994-09-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Anthracyclines with unusually high activity against cells resistant to doxorubicin and its analogs
GB9320191D0 (en) * 1993-09-30 1993-11-17 Univ Napier Compounds
AU699748B2 (en) * 1994-05-10 1998-12-10 Hybritech Incorporated Recombinant HK2 polypeptide
US5866679A (en) * 1994-06-28 1999-02-02 Merck & Co., Inc. Peptides
US5599686A (en) * 1994-06-28 1997-02-04 Merck & Co., Inc. Peptides
DE69535665T2 (de) * 1994-08-19 2009-04-02 La Region Wallonne Konjugate enthaltend ein antitumorales mittel und deren verwendung
AUPM769394A0 (en) * 1994-08-25 1994-09-15 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Assay for the detection of proteases

Also Published As

Publication number Publication date
DK0771209T3 (da) 2002-10-07
NO965592L (no) 1997-02-28
AU3092295A (en) 1996-01-25
EP0771209A2 (en) 1997-05-07
BR9508151A (pt) 1999-03-30
NZ290239A (en) 1998-11-25
UA55371C2 (uk) 2003-04-15
EP0771209B1 (en) 2002-09-04
PL186341B1 (pl) 2003-12-31
BG101077A (bg) 1998-02-27
FI965225L (fi) 1997-02-26
ATE223224T1 (de) 2002-09-15
HUT76350A (en) 1997-08-28
HU9603564D0 (en) 1997-02-28
BG63453B1 (bg) 2002-02-28
CA2192957A1 (en) 1996-01-11
SK164096A3 (en) 1997-06-04
DE69528064D1 (de) 2002-10-10
RU2162855C2 (ru) 2001-02-10
MX9700043A (es) 1997-04-30
KR100379351B1 (ko) 2003-10-30
EP0771209A4 (en) 2000-04-26
HK1009038A1 (en) 1999-07-02
KR970703780A (ko) 1997-08-09
DE69528064T2 (de) 2003-08-07
AU689934B2 (en) 1998-04-09
JPH10502619A (ja) 1998-03-10
CN1156964A (zh) 1997-08-13
ES2182908T3 (es) 2003-03-16
PL317872A1 (en) 1997-04-28
RO116198B1 (ro) 2000-11-30
US6143864A (en) 2000-11-07
NO965592D0 (no) 1996-12-27
FI965225A0 (fi) 1996-12-27
PT771209E (pt) 2002-12-31
HU220877B1 (en) 2002-06-29
FI965225A7 (fi) 1997-02-26
WO1996000503A1 (en) 1996-01-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ381096A3 (en) Oligopeptides, conjugates containing them and method of determining proteolytic efficiency of free antigen
US6130204A (en) Peptides
US5599686A (en) Peptides
US6177404B1 (en) Conjugates useful in the treatment of benign prostatic hyperplasia
US5948750A (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US6391305B1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU715632B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US5998362A (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU726434B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US20030232760A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU708475B2 (en) Conjugates useful in the treatment of benign prostatic hyperplasia
US20020115596A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU714288B2 (en) Novel peptides
HK1009038B (en) Novel peptides
CA2234763A1 (en) Conjugates useful in the treatment of benign prostatic hyperplasia
MXPA00005434A (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic