PL186341B1 - Oligopeptyd, sposób oznaczania aktywności proteolitycznej wolnego antygenu swoistego dla prostaty wpróbce, sposób identyfikacji związków, hamującychaktywność proteolityczną antygenu swoistego dla prostaty, oraz koniugat użyteczny do leczenia raka prostaty - Google Patents

Oligopeptyd, sposób oznaczania aktywności proteolitycznej wolnego antygenu swoistego dla prostaty wpróbce, sposób identyfikacji związków, hamującychaktywność proteolityczną antygenu swoistego dla prostaty, oraz koniugat użyteczny do leczenia raka prostaty

Info

Publication number
PL186341B1
PL186341B1 PL95317872A PL31787295A PL186341B1 PL 186341 B1 PL186341 B1 PL 186341B1 PL 95317872 A PL95317872 A PL 95317872A PL 31787295 A PL31787295 A PL 31787295A PL 186341 B1 PL186341 B1 PL 186341B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
seq
amino acid
psa
cheese
type
Prior art date
Application number
PL95317872A
Other languages
English (en)
Other versions
PL317872A1 (en
Inventor
Deborah Defeo-Jones
Dong-Mei Feng
Victor M. Garsky
Raymond E. Jones
Allen I. Oliff
Original Assignee
Merck & Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US08/267,092 external-priority patent/US5599686A/en
Application filed by Merck & Co Inc filed Critical Merck & Co Inc
Publication of PL317872A1 publication Critical patent/PL317872A1/xx
Publication of PL186341B1 publication Critical patent/PL186341B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)

Abstract

1 . Oligopeptyd, o dlugosci od okolo 6 do okolo 100 aminokwasów, zawierajacy sekwencje aminokwa- sów rozpoznawana i selektywnie proteolitycznie rozszczepiana przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawana i rozszczepiana sekwencja aminokwasów jest: a) AsnLysIleSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.: 13), b) LysIleSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.: 14), c) GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnXaaSerIleTyr | SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 15), d) GlyLysGlylleSerSerGlnTyr l SerAsnThrGluGluArgLeu (Sekw. Nr Id.: 2), gdzie hArg oznacza homoarginine, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym. 13. Sposób oznaczania aktywnosci proteolitycznej wolnego antygenu swoistego dla prostaty w próbce, znamienny tym, ze obejmuje etapy: a) reakcji substratu, bedacego oligopeptydem o dlugosci od okolo 6 do okolo 100 aminokwasów, zawie- rajacym sekwencje aminokwasów rozpoznawana i selektywnie proteolitycznie rozszczepiana przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawana i rozszczepiana sekwencja aminokwasów jest. a) AsnLysIleSerTyrGln l Ser (Sekw. Nr Id.: 13), b) LysIleSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.: 14), c) GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnXaaSerDeTyr | SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 15), d) GlyLysGlylleSerSerGlnTyr | SerAsnThrGluGluArgLeu (Sekw. Nr Id.: 2), lub gdzie hArg oznacza homoarginine, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym, z próbka; 1 b) detekcji czy substrat zostal rozszczepiony PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku są oligopeptydy, o długości od około 6 do około 100 aminokwasów, zawierające sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w których sekwencją rozpoznawaną i rozszczepianą aminokwasów jest::
a) AsnLysIleSerTyrGln | Ser ^Ιι’. Nr Id.: 13),
b) LysIleSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.. 14),
c) GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnXaaSerIleTyr | SerGlnThrGlu (eekw.
Nr Id.: 15),
d) GlyLysGlylleSerSerGnTyr | SerAsnThrGluGluArgLku (SiOw. Nr Id.: 2),
e) AsnLysIleSkrTyrTyr | Ser (Seew. NrId.. 127)
f) AsnLysAlaSerTyrGln | Ser (Seek. Nr Id.. 128)
g) SerTyrGln | SerSer (Sełow. Nr Id.. 1229);
h) LysTyrGln | SerSer (Se!<w. Nr Id.. 140); i
i) hArgTyrGln | SerSer (Setow. Nr Id.. 141), gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym.
W odmianie wynalazku oligopeptydy obejmują oligomery, które zawierają sekwencję aminokwasów, wybraną z:
AsnLysIleSerTyrGln SerSer AsnLysIleSerTyrGln SerAla AsnLysIleSkrTyrGln SerSerSer AlaAsnLysIleSerTyrGln | SerSerSer LysIleSerTyrGln | SerSkrSerThrGlu (SeSw.NUId u 16), (Selcw.Nrrd. i 1100 (SekwNrld u 17), (SeSw.NI Id i:18), (SeSw.NI Id i:19),
GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnArgSedIleTyr | SerGlnThrGlu (Sekw Nd Id.: 4), GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnSkrSkrIleTyd | SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 5), AlaAsnLysIleSerTyrTyr | Ser (Sekw. Nr Id:131)1
Ala-As^LysAlaSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id:132),
SerTyrGln kerTyrGln
SkdSkdThd kedSkdSkd
LysTyrGln | SkrSkdSer hArgTyrGln | Serke-Ser SerTyrGln | SkdSkrLeu (SeSw.Nrld.l 3^33 (Sekw Nr Id. 134); i (Sekw Nr Id.l 427), (^c^I^. Nr Id. 1433, i (kekN. Nr Id.: 135).
186 341 (Sekev. Nr Idz 101, Ni- It^.. 1466) (SelSo.Nrld. a d), Sakw. Nr Id.: 11),
W szczególnie korzystnej postaci wynalazku oligopeptydy obejmują oligomery, zawierające sekwencję aminokwasów, wybraną z:
AsnLysIlreerTorGlπ | eerSegSegThe
AlaAsnLysIleSerTorGl^ | SerAla
AsπLysIleSerTyeGln | SareerSerTheGlb
AlaAsnLysIleSerTyeGln | SerSarSeeTheGlu
GlyGluAsnGloVatGlnLosAspValSegGlnAggSegIleTyr | SagGlnThrGlu (Sakw. Nr Id.: 4),
AlaAsnLysIlaSerTyeTyr SerSer (Sekw. Nr ld.. 117/
AlaAsnLysIleSarTorTyr SerAla (Sekw. Nr ld.. 113))
AlaAsπLosAtaSorTogGtr | SorAla Nr Id.. 119))
AlaSorTyrGln | SerSerLeu (SeSw. Nr Idz 94).
W następnej odmianie wynalazku oligopeptydy obejmują oligomery, które zawierają sekwencję aminokwasów, wybraną z:
GloAegLosAla.AsnLosIlaSerTorGln | SegSagSorThrGluGlbArgArgLeuHisTogGlyGlbAsnGly (Sekw. Nr Id.: 6).
Stosowano powyżej i w dalszej części opisu określenia „oligomery, któro zawierają sekwencję aminokwasów” oznacza oligomery o około 6 do 100 resztach αminokwαsomoch, któro zawierają w swojej sekwencji aminokwasów specyficzne opisane sokwencjo aminokwasów i któro są zatem rozszczepiano proteolitycznie przez wolny PSA wewnątrz opisanej sekwencji aminokwasów. Tak więc na przykład następujący oligomer:
GlπLebAspAsnLosIleSorTogGtr | SerSogeagThrHisGlnSerSar (Sekw. Nr Id.: 20) zawiera sekwencję aminokwasów·':
AsnLysΠoSorTyeGlr | eorSerSerThe (Sekw. Nr Id.: 10) i jost zatom objęty zakresom wynalazku. Jost zrozumiało, że takie ollgomery nic obej mują somonogoliny I i somonogolino II.
Jost także zrozumiało, że wynalazek obejmuje oligomery, w których aminokwas N-terminalny lub aminokwas C-terminalry albo oba to aminokwasy są zmodyfikowano. Do takich modyfikacji należą, alo bez ograniczenia do rich, acylowame grupy aminowej ra N-końcu i utworzenie amidu zastępującego kwas karboksylowy ra C-końcu. Dodanie takich ugrupowań możo być przeprowadzono podczas syntezo oligomeru w fazie stałej, tak więc przyłączenie C-terminalnogo aminokwasu do żywicy w fazie stałej możo być poprzez aminę, co po kwasowym od szczepieniu oligomeru od żywicy daje ugrupowanie amidowa. Zatom poniższo związki uważa się za „oligomery zawierająca sokwoncję aminokwasów” tak jak zdefiniowano powyżej i są ono podano tylko dla zilustrowania, a niejako ograniczenie:
AlαAsnLysCloSogTogGln | SoreogSorTheGlu-amid
Ac-AlaAsrLosIloS erT orGln Ac-AlaAsnLosIloSorTyrGlr Ac-AlaAsnLosIloSoeTyrGln An-AlaAsrLosIloSorTyrGlr Ac-AlaAsrLosIloSorTyrGlr Ac-AlαAsrLosIloSoeTyrGtr Ac-AlaAsrLysIloSoeTyrGlr Ac-AlaAsnLosIloSogTyrGln
SerSerSerThizLeu
SerSerSerrThGlu-amid
SerSerSerThrLcu-amid
ΒβοΑίΗΒεο'ΠηΟΙη-ίη^
SerSerLyyTThGlu-iHmd
SerSerThΓGlu-ankd
SeeSerGlπThrGlu-amie
SerAlaLyrThrGlu-amid
SerTłhGlu-amid
Ac-AtaAsrLosIloSoeToeGlr Ac-AlαAsnLysSogTorGlr | SogSorTheGlu-amid Ac-AlαAsnLysAlaeorTyrGlr | SorAlaeorThgGlu-amid Ac-AlaAsrGlbIloSorTogGlr | eogAlaeogThgGlb-amid (Sekw. Nr Id. (Sakw. Nr Id. (Sekw. Nr Id. (Sakw. Nr Id. (Sekw. Nr Id. (Sakw. Nr Id. (Sakw. Nr Id. (Sakw. Nr Id. (Sekw. Nr Id. (Sekw. Nr Id. (Sekw. Nr Id. (Sekw. Nr Id. (Sokm: Nr Id.
11),
700)
111)
70Χ
77\
74))
7^))
7^))
7^))
8)1)
82),
85\
85))
186 341
Ac-AsnLysIleSerTyrGln | SerSer-amid (Sekw. Nr Id.: 116
Ac-LysIleSerTyrGln | SerSer-amid (Seew. Nr I d: 88))
Ac-SerTyrGln l SereerThrGlu-amid (ScIw. Nr I d. 88))
Ac-AlaSerTyrGln | SerSerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id. D?
Ac-AlaAsnLysIleeerTyrTyr SerSereerThrGlu-amid (ScIw. Nr Id. Df
Ac-AlaAsnLysIleSerTyrTyr SerAlaSerThrGlu-amid (Sekw. Nrld.: 93Χ
Ac-AlaSerTyrGln | SerSerLeu-amid (Seew. Nr Id: 99))
Ac-AlaAsnSerTyrGln | SerSerSerThrGlu-amid (Seew. Nr Id. 99))
Ac-AlaSerTyrGln | SerSerSerThrGlu-amid (Seew. Nr Id. 996)
Ac-SerTyrGln | SerSerSerThrGlu-amid (Seew. Nr Id. 99))
Ac-AlaAsnLysAlaSerTyrGln | SerAlaSerCys-amid (Seew. Nr Id. 8^8)
Specjalista o zwykłych umiejętnościach z dziedziny chemii peptydów łatwo oceni, że niektóre aminokwasy w oligopeptydzie czynnym biologicznie mogą być zastąpione przez inne aminokwasy homologiczne, izosteryczne i/lub izoelektronowe przy zachowaniu w oligopeptydzie zmodyfikowanym czynności biologicznej peptydu pierwotnego. Poniżej przedstawiona lista substytucji aminokwasów jest ilustracyjna i nieograniczająca:
Aminokwas pierwotny Aminokwasty) aastepcry
Ala Gly
Arg Lys, omstyna
Asn Gin
Asp Glu
Glu Asp
Gln Asn
Gly Ala
Ile Va,i Lei,I Me, i Nle
Leu He i Va, i Mef Nte
Lys Arg, omitynn
Met Leu, Pc, Nie, Val
Ornityna Lys, Arg
Phe Tyr, Trp
Ser Thr
Thr Ser
Trp Phe, Tyr
Tyr Phe, Trp
Val Llu, Ile, Mee, Nie
Zatem, na przykład, poniższe oligopeptydy mogą być zsyntetyzowane technikami do-
brze znanymi osobom o zwykłych umiejętnościach w tej dziedzinie i oczekuje się, że będą one rozszczepiane proteolitycznie przez wolny PSA:
AsnArgIleSerTyrGln | Ser
AsnLysValSerTyrGln | Ser AsnLysMetSerTyrGln SerSer AsnLysLeuSerTyrGln SerSer AsnLysIleThrTyrGln SerSerSer
AsnLysIleSerPheGln AsnLysIleSerTrpGln AsnLysIleS erT yrAsn AsnLysIleS erT yrGln AsnLysIleSerTyrGln
SerSerSer
SerSerSerThr
SerSerSerThr
ThrSerSerThr
Ser (Seew.
(Sekw·.
(Sekw.
(Sekw.
(Sekw.
(Sekw.
(Sekw.
(Sekw.
(Sekw.
Nr Id. Nr Id. Nr Id. Nr Id. Nr Id. Nr Id. Nr Id. Nr Id. Nr Id. Nr Id.
21)
222
23)
24)
25)
26) 2T) 28) 2^) 30)
186 341
GlnLysIleSerTyrGln | SerSer AsnArgIleThrTyrGln | SerSerSer AsnArgIleSerPheGln AsnArgIleSerTrpGln AsnArgIleSerT yrGln AsnLysIleThrT yrGln AsnLysLeuSerTyrGln GlnLysLeuS erT yrGln AsnArgLeuSerTyrGln AsnLysValSerPheGln AsnArgValSerTrpGln
GlnLysValSerTyrGln | SerSerSerThr GlnLysIleSerTyrGln | ThrSerSerThr AsnLysIleSerTyrGln | SerSerSerThr
SerSerSerThr
SerSerSerThr
ThrSerSerThr
ThrSerSerThr
ThrSerSerThr
SerSerSerThr
ThrSerSerThr
SerSerSerThr
SerSerSerThr (Sekw . Nr Id: 31) (Selw: Nr Id: 32) (Sekw. Nr Id: 33) (Sekw. Nr Id: 35) (Sekw. Nr Id: 36) (Sekw. Nr Id: 37) (Sekw . Nr Id: 38) (Sekw . Nr Id: 39) (Sekw . Nr Id: 40) (Sekw . Nr Id: 41) (Sekw . Nr Id: 42) (Sekw. . Nr Id: 43) (Sekw. . Nr Id: 34) (Sekw . Nr Id: 44)
Podobnie następujące oligopeptydy mogą być zsyntetyzowane technikami dobrze znanymi osobom o zwykłych umiejętnościach w tej dziedzinie i oczekuje się, że będą one rozszczepiane proteolitycznie przez wolny PSA:
GlyGluGlnGlyValGlnLysAspVaISerGlnSerSerIleTyr | SerGlnThrGlu (Sekw.
Nr Id.: 45)
GlyGluAsnGlyLeuGlnLysAspValSerGlnSerSerIleTyr | SerGlnThrGlu (Sekw.
Nr Id.: 47)
GlyGluAsnGlyValAsnLysAspValSerGlnSerSerIleTyr | SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 48)
GlyGluAsnGlyValGlnArgAspV alSerGlnArgSerIleTyr GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnLysSerIleTyr GlyGluAsnGlyValGlnLysAspLeuSerGlnThrSerIleTyr
SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 49) SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 50) SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 51)
GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnSerSerIlePhe | SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 52)
ThrGlnThrGlu
ThrGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 53) (Sekw. Nr Id.: 54)
GlyGluAsnGlyValGlnLysAspMetSerGlnSerSerIleTyr GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnArgSerIleTyr
GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnSerSerIleTyrr | SerGlnSerGlu (Sekw. Nr Id.: 55) GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnArgSer.neTyr | SerAsnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 56)
GlyLysAlalleSerSerGlnTyr l SerAsnThrGluGluArgLeu
GlyArgGlylleSerSerGlnTyr GlyLysGlyIleThrSerGlnTyr GlyLysGlyIleS erThrGlnT yr GlyLysGlyIleSerSerAsnTyr AlaLysGlyIleSerSerGlnTyr . GlyLysGlyIleSerSerGlnPhe GlyLysGlyIleSerSerGlnTyr GlyLysGlyIleSerSerGlnTyr GlyLysGlyIleSerSerGlnTyr
S erAsnThrGluGluArgLeu SerAsnThrGluGluArgLeu SerAsnThrGluGluArgLeu S erAsnThrGluGluArgLeu S erAsnThrGluGluArgLeu S erAsnThrGluGluArgLeu ThrAsnThrGluGluArgLeu (Sekw. Nr Id. (Sekw. Nr Id. (Sekw. Nr Id. (Sekw. Nr Id. (Sekw. Nr Id. (Selkw. Nr I d. (Sekw. Nr Id. (Sekw. Nr Id. (Sekw. Nr Id.
57) 59) 66) 611 6 6) .3)
6)
65
58) , i
SerAsnSerGluGluArgLeu
SerAsnThrAspGluArgLeu (Sekw. Nr Id.: 46); i podobne.
Symbol „ | ” wstawiony do sekwencji aminokwasu wskazuje punkt w tej sekwencji, w którym oligopeptyd jest proteolitycznie rozszczepiany przez wolny PSA.
Oligopeptydy stanowiące przedmiot wynalazku mogą być włączone do środków terapeutycznych, stanowiących koniugaty oligopeptydów według wynalazku i znanych środków cytotoksycznych użytecznych w leczeniu raka prostaty.
186 341
Koniugctn tckie zcwiercją oligopeprydy według wynclenku zwiąnene kowelensyjnie bezpośrednio clbo poprzez łąsznik shemiszna ze środkiem sarotpksasznym i mogą być stosowcne do modafikowcnic dcnej odpowiedzi biologisznej. Środek satotpksasnna nie jest ogrcniszonn do klcsasznysh shemisznnsh środków tercpeutysćnash. Nc przykłcd środek sntotoksaszna może być bicłkiem lub polipeptydem posicdcjąsnm żądcną cktywność biologiszną. Do tckish bicłek ncleżą nc przykłcd toksyny, tckie jck ebrnnc, rnsync A, egzptoksyne pseudomoncs lub toksync dyfterytu, bicłkc, tckie jck snannik mcrtwisy guzc, α-interferon, β interferon, ynannik wzrostu nerwu, płytkowy yzynnik wzrostu, tkcnkown ektawctor plczminogenu lub modyfikctorn odpowiedzi biologisznej, tckie jck nc prnakłcd limfokiny, interleukinc-1 („IL-1”), interleukinc-2 („IL-2”), interleukinc-6 („IL-6”), sznnnik stymulująsy kolonićeyję mekrofcgów i grcnulosatów („GM-CSF) lub inne szynniki wzrostu.
Do kornastnash środków satotpksasnnysh ncleżą generalnie środki clkilująse, środki entaprplifercsajne, środki wiążąse tubulinę i podobne. Kornastnami klcscmi środków sytotokscyznash są nc prnakłed rodzinc leków entrcsnklinowysh, elkcloidy bcrwinkc, mitomasana, blepmcsana, nuklepćady sytotoksyszne, rodzinc leków pterydanpwysh, diynenn i podofi-lotoksyny. Sćyćególnie użnresnnami szłonkcmi tej klcsy są nc przakłed doksorubisyną, kerminpmysane, deunorubisyne, eminppteranc, metotreksct, metppterane, dishlprometoteeksct, mitomasync C, porfiepmayanc, 5-fluorourcsyl, 6-merkeptopurane, eeebinoncd satρncny, podpfilptoksane lub poshodne ppdpfilptoksany, tckie jck etopozyd lub fosforcn etopozadu, melfclcn, winblestane, winkrystane, leuroncdnnc, windezane, leuroćanc i podobne. Do innysh użatesnnash środków satptpksasznash ncleżą estremustcne, sispletync i syklpfosfemid. Spesjclistc w tej dniedninie może wprowcdzić modafikesje shemiszne do żądcnego związku w tym selu, cby recksje shemiszne tego związku były berdniej dogodne dlc selów wytwerzenic koniugctów według wynelenku.
Do grupy wysose kprzastnnsh środków satoroksysznash, z którymi możnc lądnc oligopeprada według wynclczku ncleżą leki o ncstępująsnsh wzpresh:
GRUPA METOTREKSATU O WZORZE (1):
R8
(1) w którym:
R12 ozncszc grupę cminową lub hydroksylową;
R7 ozncszc, wodór lub grupę metylową;
R8 ozncsće wodór, fluor, shlor, brom lub jod;
R9 ozncszc grupę hydroksylową lub ugrupowenLie, które dopełnic sól kwcsu kcrboksnlowego;
GRUPA MITOMYCYNY O WZORZE (2):
(2)
186 341 w którym: Rw oznacza wodór lub grupę metylową; GRUPA BLEOMYCYNY O WZORZE (3):
w którym R11 oznacza grupę hydroksylową, aminową, C,-C3alkilo-aminową, di(C3C3afkilo)aminową, C4-C6polimetyfeno-aminową, grupę o wzorze:
+
-nhch2ch2ch2s-ch3 ch3 lub grupę o wzorze:
NH
II
-nhch2ch2ch2ch2nh-c-nh2
MELFALAN O WZORZE (4):
6-MERKAPTOPURYNA O WZORZE (5):
(5)
186 341
ARABINOZYD CYTOZYNOWY O WZORZE (6):
PODOFILOTOKSYNY Q WZORZE (7):
(7) w którym R13 oznacza wodór lub grupę metylową;
R'1 oznacza grupę metylową lub tienylową; lub ich sole fosforanowe; GRUPA ALKALOIDÓW BARWINKA O WZORZE (8)
(8)
186 341 w którym:
R15 oznacza H, CH lub CHO gdy R17 i R18 są wzięte pojedynczo;
R18 oznacza H i jeden z R16 i R17 oznacza etyl a drugi H lub OH; gdy R'1 i R17 są wzięte razem z węglami, do których są przyłączone, tworzą pierścień oksirαnoNy, w którym to przypadku R'1 oznacza etyl;
R! oznacza wodór, (C1-C3alkil)-CO lub chloropodstawiony (Cl-C3αlyil)-CO DIFLUORONUKLEOZYDY O WZORZE (9):
F OH w którym: Rn oznacza zasadę o jednym z wzorów:
w których:
R„ oznacza wodór, metyl, brom, fluor, chlor lub jod;
R23 oznacza -OH lub -NH2;
R24 oznacza wodór, brom, chlor lub jod; lub
ANTYBIOTYK: ANTRACYKLINOWE O WZORZE (10):
(10)
186 341 w którym:
R1 oznacza- CH), -CH2OH, -CH2OCO(CH2)3CH) lub -CH2OCOCH(OC2H5)2;
R3 oznacza -OCH3, -OH lub -H;
R4 oznacza -NH2, -NHCOCF3, 4-morfolinyl, 3-cyjano-4-morfolinyl, 1piperydynyl, 4-metoksy-3-piperydynyl, benzyloaminę, dibenzyloaminę, cyjanometyfoaminę lub 1-cyjano-2-meioksyetyloaminę;
R5 oznacza -OH, -OTHP lub -H; i R6 oznacza -OH lub -H, pod warunkiem, że R6 nie jest -OH gdy R5jest -OH lub -OTHP.
CYKLOFOSFAMID (12)
Najbardziej korzystnymi lekami są opisane powyżej antybiotyki antracyklinowe o wzorze (10). Dla specjalisty w tej di^iedi^ii^ie orozumiałę d^^dzit^, że ton wzór strukturalny obejmuje związki, będące lekami lub leków, które uzyskały różne nazwy właściwe lub pospolite.
W następnym aspekcie przedmiotem wynalazku jest także sposób oznaczania aktywności proteolitycznej wolnego PSA w kompozycji.
Sposób oznaczania aktywności proteolitycznej wolnego antygenu swoistego dla prostaty w próbce zgodnie z wynalazkiem obejmuje etapy:
a) reakcji sebstratu, będącego dligopeolydem et 0^000 od około 6 do oko 1i 1Θ0 aminokwasów, zawierającym sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym sekwencją rozpoznawaną i rozszczepianą aminokwasów jest:
a) AsnEysIleSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.: 13),
b) LysIleSerTyrGln | Ser (Selkw. Nr Id.: 14),
c) GfyGloAunGfyValGfnLysAspValSesGfnXaaSerIleTyr | SerGlnTErGlu (Sekw.Nrld.: 15),
d) GfyLysGlyIleSesSerGlnTys | SerAsnT^GluGluArgLeu (Sekw. Nr Id.: 2),
e) AsnLysIfeSerTysTys | Ser (Selkw. Nr 1d.: 127)
f) AsnEysAlaSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.: 128), lub
g) SerTyrGln | SerSer (Sekw. Nr 1d.: 129),
h) LysTyrGłn | SerSer (Sekw. Nr 1d.: 140); lub
i) hArgTyrGln | SerSer (Sekw. Ni Id.: 141),
186 341 gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym, z próbką; i
b) detekcji czy substrat został rozszczepiony.
Korzystnie, etap detekcji czy substrat został rozszczepiony obejmuje analizę mieszaniny testowej za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej.
Jest to istotny aspekt wynalazku, jako żs taki układ testowy dostarcza możliwości ilościowego pomiaru ilości wolnego PSA obecnego w niektórych płynach fizjologicznych i tkankach. Taki test dostarcza nie tylko możliwości izolacji i oczyszczania wolnego PSA, als także jest podstawą do testów przesiewowych dla inhibitorów aktywności proteolitycznej wolnego PSA. Metoda testowa generalnie obejmuje oznaczenie zdolności kompozycji podejrzewanej o to, że zawiera aktywny enzymatycznie wolny PSA, do proteolitycznego rozszczepienia oligopeptydu.
Typowo, protokół testu prowadzi się po prostu stosując opisane powyżej oligopsptydy. Jednakże może okazać się, że korzystne jest skonstruowanie testu, w którym oligopsptyd zawierający miejsce rozszczepienia jest znakowany, tak że można zmierzyć występowanie takiego znacznika, na przykład znacznika radioaktywnego, zarówno w oligopeptydzie nierozszczspionym jak i w części oligopeptydu pozostającej po rozszczepieniu, zawierającej znacznik.
Przedmiotem wynalazku jest następnie sposób identyfikacji związków (określanych dalej jako związki-kandydaci), które będą hamować aktywność proteolityczną wolnego PSA. Należy liczyć się z tym, że ta technika przesiewowa okaże się użyteczna generalnie do identyfikacji każdego związku-kandydata, który będzie służyć do celów hamowania, niezależnie od tego, czy związek-kandydat ma strukturę białkową czy psptydową.
Zatem przedmiotem wynalazku jest także sposób identyfikacji związków, hamujących aktywność proteolityczną antygenu swoistego dla prostaty, który obejmuje:
a) reakcję substrasu, strd;ącebo oligopeptydem o długo rd c^d około 6 do okodo 10Θ aminokwasów, zawierającym sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym sekwencją rozpoznawaną i rozszczepianą aminokwasów jest:
u) AsnLysIleSerTyrGln | Ssr (Sekw . Nr fik : 131,
b) LysIleSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id: : 141,
c) GlyGluAsnGlyValGlnLysAspVulSerGlnXαaSerIlsTyr | SerGlnThrGlu (Sekw.Nr Id.: 15),
d) GlyLysGlyIleSerSsrGlnTyr | SerAsnThrGluGluArgLeu (Sekw. Nr Id.: 2),
s) AsnLysIlsSsrTyrTyr | Ssr (Sekw . Nr Id: : 127),
f) AsnLysAlaSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id: : 128), lub
g) SerTyrGln | SsrSsr (Sekw . Nr Id: : 129),
h) LysTyrGln | SerSer (Sdw . Nr Id: : 140); lub
i) hArgTyrGln | SerSer (Sekw. Nr Id.: 141), gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym, z wolnym antygenem swoistym dla prostaty w obecności testowanego związku; i
b) detekcjd czy subi^tKis został rozszczepżony, proy czym /dzlmść testowansgo związku do hamowania aktywności proteolitycznej antygenu swoistego dla prostaty jest wskazywana poprzez spadek rozszczepienia substratu w porównaniu z rozszczepinniem substratu w nieobecności testowansgo związku.
Korzystnie, etap detekcji czy substrat został rozszczepiony obejmuje analizę mieszaniny testowanej za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej.
Test przesiewowy dla kandydatów jest dość prosty do zestawienia i przeprowadzenia i jest w wielu aspektach pokrewny opisanemu powyżej testowi oznaczania aktywności proteolitycznej. Zatem po otrzymaniu relatywnie oczyszczonego preparaty wolnego PSA OoIziz
186 341 można po prostu zmieszać substancję testową z preparatem proteolitycznym, korzystnie w warunkach umożliwiających przeprowadzenie przez PSA jego funkcji rozszczepiającej, ale bez włączenia substancji hamującej. Zatem na przykład typowo można wprowadzić do mieszaniny pewną ilość znanego oligopeptydu, mającego miejsce rozszczepienia specyficzne w stosunku dla PSA, takiego jak oligopeptydy opisane powyżej. W ten sposób można zmierzyć zdolność substancji testowej do relatywnego zmniejszenia rozszczepienia oligopeptydu w obecności substancji testowej.
Zatem można zmierzyć lub w inny sposób oznaczyć aktywność wolnego PSA w nieobecności dodanej substancji testowej w stosunku do aktywności w obecności substancji testowej w celu oceny względnej zdolności hamującej substancji testowej.
Przedmiotem wynalazku jest także koniugat użyteczny do leczenia raka prostaty, zawierający środek cytotoksyczny wybrany z doksorubicyny i jej cytoksycznych pochodnych przyłączony poprzez wiązanie kowalencyjne lub łącznik chemiczny do oligopeptydu o długości od około 6 do około 100 aminokwasów, zawierającego sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawaną i rozszczepianą sekwencją aminokwasów jest:
a) AsnLysIleSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.:ł 31,
b) LysIleSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr 10/.141,
c) GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnXaaSerIleTyr | SerGlnThrGlu (Sekw.Nr Id.: 15),
d) GlyLysGlyIleSerSerGlnTyr | SerAsnThrGluGluArgLeu (Sekw. Nr Id.: 2),
e) AsnLysIleSerTyrTyr | Ser (Sekw. Nr rdz 1177
f) AsnLysAlaSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.. 118^ lub
g) SerTyrGln | SerSer (Selw. Nr M.: US)))
h) LysTyrGln | SerSer (Sekw. Nr Id.. 140); lub
i) hArgTyrGln | SerSer (Sekw. Nr W: 1411, gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym.
W przypadku idealnym aktywność cytotoksyczną środka cytotoksycznego jest znacznie zmniejszona lub jej brak gdy oligopeptyd zawierający miejsce rozszczepienia proteolitycznego przez PSA jest związany bezpośrednio lub poprzez łącznik chemiczny ze środkiem cytotoksycznym i jest nienaruszony. Także idealnie aktywność cytotoksyczną środka cytotoksycznego znacznie wzrasta lub powraca do aktywności niemodyfikowanego środka cytotoksycznego po proteolitycznym rozszczepieniu przyłączonego oligopeptydu w miejscu rozszczepienia. Jakkolwiek nie jest to niezbędne dla praktycznej realizacji tego wynalazku, to najbardziej korzystną postacią tego aspektu wynalazku jest koniugat, w którym oligopeptyd i łącznik chemiczny, jeśli jest obecny, są odłączane od środka cytotoksycznego poprzez aktywność proteolityczną wolnego PSA i każdego innego natywnego enzymu proteolitycznego obecnego w pobliskiej tkance, uwalniając w ten sposób niemodyfikowany środek cytotoksyczny do otoczenia fizjologicznego w miejscu rozszczepienia proteolitycznego.
Należy rozumieć, że oligopeptyd według wynalazku, który jest sprzężony ze środkiem cytotoksycznym, czy to poprzez bezpośrednie wiązanie kowalencyjne czy to poprzez łącznik chemiczny, nie musi być oligopeptydem, który jest najlepiej rozpoznawany przez wolny PSA i najłatwiej rozszczepiany proteolitycznie przez wolny PSA. Zatem oligopeptyd wybrany do wprowadzenia do takiej kompozycji przeciwnowotworowej będzie wybrany zarówno z uwzględnieniem jego selektywnego proteolitycznego rozszczepienia przez wolny PSA jak i z uwzględnieniem aktywności cytotoksycznej koniugatu środek cytotoksyczny-reszta proteolityczna (lub, co jest sytuacją idealną, niemodyfikowanego środka cytotoksycznego), uzyskanego w wyniku takiego rozszczepienia.
Ponieważ koniugaty według wynalazku mogą być stosowane do modyfikowania danej odpowiedzi biologicznej, środek cytotoksyczny nie powinien być interpretowany jako ograni186 341 czony do klasycznych chemicznych środków terapeutycznych. Na przykład środek cototoksyczny może być białkiem lub polipoptydom posiadającym żądaną aktywność biologiczną. Na przykład środek cytotoksyczro możo być białkiem lub polipoptydom posiadającym żądaną aktywność biologiczną. Do takich białek należą na przykład toksyny, takio jak abryna, rycyna A, egzotoksyna psoudomoras lub toksyna dyfterytu, białka, takie jak czynnik martwicy guza, a-interferon, β-irtogforor, czynnik wzrostu nor-wu, płytkowy czynnik wzrostu, tkankowy aktywator plazmirogoru lub modyfikatory odpowiedzi biologicznej, takio jak na przykład limfpkiry, irtoglobkina-1 („IL-1”), intoeloukerα-2 („IL-2”), irtorlobkina-6 („IL-6”), czynnik stymulujący kolonizację makrofagów i grαnulocotóm („GM-CSF”) lub inno czynniki wzrostu.
Najbardziej korzystnymi pochodnymi daurorubicono są antybiotyki antracyklinowo o wzorze (10). Specjalista w toj dziedzinie może wprowadzić modyfikacjo chemiczno do żądanego związku w tym colu, aby reakcjo chemiczno togo związku były bardziej dogodno dla celów wytwarzania koniugatów według wynalazku.
Dla specjalisty w toj dziadzinie zrozumiało będzie, że ton wzór strukturalno obejmuje związki, będące lokami lub pochodnymi loków, któro uzyskały różno nazwy właściwo lub pospolito. Poniższa tabela 1 przedstawia grupę loków arteacyklinowoch szczególnie korzystnych do stosowania w wynalazku i ich nazwy własno lub pospolito.
ANTYBIOTYKI ANTRACYKLINOWE
w którym:
R1 oznacza-CH,, -CH2OH, -CH2OCOSCH2)3CHt lub
-CH2OCOCH(OC2H5)2;
R3 oznacza OCH,, -OH lub -H;
R4 oznacza -NH2, -NHCOCF3, 4-mogfoliryl, 3-cojaro-4-moefolirol, 1-piporodonol,
4-motoksy-1-pipoeydyrol, borzoloaminę, diborzyloaminę, cyjaromotyloamirę lub 1-cojano-2-metoksyotyloammę;
R5 oznacza -OH, -OTHP lub -H; i
R6 oznacza -OH lub -H, pod mαeurkiom, żo
R6 nie jost -OH gdy R)jost -OH lub -OTHP.
186 341
Tabela 1
Związek R1 R3 R4 R5 R6
Daunorubicyna’ cil OCH3 NH2 OH H
Doksorubicyna CH2OH OCH3 NH2 OH H
Detorubicyna CH2OCOCH(OC2H5)2 OCH3 NH2 OH H
Karminomycyna cil OH NH2 OH H
Iderubicyna CH3 H NH2 OH H
Epirubicyna ch2oh OCH3 nh2 OH OH
Esorubicyna ch2oh OCH3 NH2 H H
THP ch2oh OCH3 nh2 OTHP H
AD-32 CH2OCO(CH2)3CH3 OCH3 NHCOCF3 OH H
a „daunomycyna” jest alternatywną nazwą dla daunorubicyny b „adriamycyna” jest alternatywną nazwą dla doksorubicyny
Spośród związków przedstawionych w tabeli 1 najkorzystniejszym związkiem jest doksorubicyna^. Doksorubicyna (określana także jako „DOX) jest tą antracykliną o wzorze (10), w której R1 jest -CH2OH, Rjest -OCH3, jest -NH„ R5 jest -OH a R6 jest -H.
Oligopeptydy, podjednostki peptydowe i pochodne peptydów (określane także jako „peptydy”) według wynalazku mogą być ^^^zowa^ z będących ich składnikami aminokwasów na drodze zwykłych technik syntezy peptydów, korzystnie za pomocą technologii w fazie stałej. Następnie peptydy oczyszcza się za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami (HPLC).
Standartowe metody syntezy peptydów ujawniono na przykład w następujących pracach: Schroeder i in., „The Peptides”, vol. C, Academic Press 1965; Bodansky i in., „Peptide kyntbesis”, Interscience Publishers, 1966; McOmie (ed.) „Protectree Groups in Organie Chemistry”, Plenum Press, 1973; Barany i in., „The Peptides: Analysis, kynthesis, Biology” 2, rozdz. 1, Academic Press, 8980, oraz Stewart i in., „kolid Phase Peptide kynthesis”, wyd. drugie, Pieice Chemical Company, 8984: Zawartość tych publikacji jest włączona do niniejszego opisu jako odnośnik.
Koniugaty według wynalazku, które zawierają oligopeptyd zawierający miejsce rozszczepienia PSA i środek cytotoksyczny, mogą być zsyntktyzoNank podobnie za pomocą tech186 341 nik dobrze znanych w dziedzinie chemii medycznej. Na przykład, wolna grupa aminowa środka cytotoksycznego może być kowalencyjnie przyłączona do końca karboksylowego oligopeptydu z wytworzeniem wiązania amidowego. Podobnie wiązanie amidowe może być utworzone poprzez kowalencyjne związanie grupy aminowej oligopeptydu i grupy karboksylowej środka cytotoksycznego. Do tego celu można zastosować reagent taki jak kombinacja heksafluorofosforanu 2-(1H-benzotriazol-0-iIo)-1,3,3-tktranetylouronium (znanego jako HBtU) iwodzianu 1-hydroksybenzotriazolu (znanego jako HOBT), dicy-kloheksylokarbodiimid (DCC), N-etylo-N-(3-dimetyloammopropylo)-karbodiimid (EDC), difenylofosforyloazydek (DPPA), heksafluorofosforan benzotriazol-1-iloksy tns(dimetyloammo)fosfonium (BOP) oraz podobne.
Ponadto koniugat według wynalazku może być utworzony poprzez wiązanie niepeptydowe między miejscem rozszczepienia przez PSA a środkiem cytotoksycznym. Na przykład środek cytotoksyczny może być przyłączony kowalencyjnie do końca karboksylowego oligopeptydu poprzez grupę hydroksylową środka cytotoksycznego, tworząc w ten sposób wiązanie estrowe. W tym celu może być zastosowany reagent taki jak kombinacja HBTU i HOBT, kombinacja BOP i imidazolu, kombinacja DCC i D MAP oraz podobne. Kwas karboksylowy może być także aktywowany poprzez utworzenie estru nitrofenylowego lub podobnego i przereagowany w obecności DBU (1,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-enu.
Koniugat według wynalazku może być także wytworzony poprzez przyłączenie oligopeptydu do środka cytotoksycznego poprzez jednostkę łącznika. Do takich jednostek łącznika należy na przykład dirodnik biskarbonyloalkilowy, przez który grupa aminowa środka cytotoksycznego jest połączona z jednostką łącznika, tworząc wiązanie amidowe, a koniec aminowy oligopeptydu jest połączony z drugim końcem jednostki łącznika, także tworząc wiązanie amidowe. Możliwe są także inne jednostki łącznika, które są stabilne w środowisku fizjologicznym, gdy wolny PSA nie jest obecny, ale są rozszczepialne w wyniku rozszczepienia miejsca proteolitycznego rozszczepienia za pomocą PSA. Ponadto mogą być zastosowane jednostki łącznika, które po rozszczepieniu miejsca proteolitycznego za pomocą PSA pozostają przyłączone do środka cytotoksycznego, ale nie zmniejszają w sposób znaczący aktywności cytotoksycznej takiej pochodnej środka cytotoksycznego pozostałej po rozszczepieniu w porównaniu z niemodyfikowanym środkiem cytotoksycznym.
Dla specjalisty z tej dziedziny zrozumiałe będzie, że podczas syntezy związków według wynalazku może być potrzebne zabezpieczenie lub zablokowanie różnych grup funkcyjnych związków wyjściowych i związków pośrednich, podczas gdy żądana reakcja przeprowadzana jest na innych częściach cząsteczki. Po zakończeniu żądanych reakcji lub w dowolnym żądanym czasie, normalnie takie grupy zabezpieczające usuwa się, na przykład za pomocą środków hydrolitycznych lub uwodorniających. Takie etapy zabezpieczenia i odbezpieczenia są typowe w chemii organicznej. Specjalista odwołuje się w tym zakresie do książki Protective Groups in Organic Chemistry. McOmie, ed., Plenum Press, NY, NY (1973) oraz książki Protective Groups in Organie eynthesis: Greene, Ed., John Wiley & Sons, NY, NY (1981), w których zamieszczone są informacje o grupach ochronnych, które mogą być użyteczne w wytwarzaniu związków według wynalazku.
Jedynie przykładowo można wymienić jako użyteczne grupy zabezpieczające grupy aminowe na przykład grupy C,-C10 alkanoilowe, takie jak formyl, acetyl, dichloroacetyl, propionyl, heksanoil, 3,3-dietylo-heksanoil, γ-chlorobutyryl i podobne, grupy C,-Cw alkoksykarbonylowe i C5-C,5 aryloksykarbonylowe, takie jak tert-butoksykarbonyl, benzyloksy-karbonyl, alliloksykarbonyl, 4-nitrobenzyloksykarbonyl, fluorenometoksykarbonyl i cynnamoiloksykarbonyl; grupy chlorowco(C1-C11)alkoksykarbonylowe, takie jak 7,2,2-trichloroetoksykarbonyl i grupy C1-C1 aryloalkilowe i alkenylowe, takie jak benzyl, fenetyl, allil, trityl
186 341 i podobno. Innymi zwyklo stosowanymi grupami zabezpieczającymi grupy aminowe są grupy w formie onamin, otrzymywano z β-kotoostróm, takich jak acetom^ motylu lub otylu.
Do użytecznych grup zabezpieczających grupy karboksylowa należą na przykład grupo alkilowe C Cu» takio jak motyl, tort-butyl, decyl, chlorowco(C1-C11)alkilowe, takie jak 2,2,2-tginhlorootyl i 2-jodootyl, C)-C,1 aryloalkilowo, takio jak benzol, 4-motoksoborzyl, 4ritgpborzol, trifonylomoeyl, diforylomotol, Cl-C1)alkaroiloksymotylpwo, takie jak acotoksymotyl, propionoksymotol i podobno, oraz grupy takio jak fonacol, 4-nhlorowcoforacol, allil, dimotylpαllil, tri(C1-C3alkilo)silil, takio jak trimotylo silil, β-p-toluonpsulfonolootol, e-p-mtroforylρtipotol, 2,4,6-trimotyloborzol, β-motolptiootol, ftulimidomotol, 2,4-dimtrofonolosulfonyl, 2-nitrobonzhodgyl i grupy pokrewne.
Podobnie użytecznymi grapami zabezpieczającymi grapy hydroksylowo są na przykład grupy fogmylowa, chloroacotylowu benzylowa, borzhydrylowa, tritylowa, 4^™^^ zylowa, trimotolosililowa, fonanylowa, tort-butolomu, motoksomotylowu, totrαhydgopirarolowa i podobno.
Poniższo Schematy Reakcji ilustrują syntezę koriugutów według wynalazku w odmosioniu do korzystnej postaci oligopoptydu połączonego z antybiotykiem antgacoklinomom Soksprabicorą.
SCHEMAT REAKCJI I
OH
186 341
SCHEMAT REAKCJI II
OH
OH
186 341
SCHEMAT REAKCJI HI
OH
186 341
SCHEMAT REAKCJI IV
OH
186 341
SCHEMAT REAKCJI V
Zrozumiałe jest także, że mogą być także wytworzone koniugaty, w których N-koniec oligopeptydu według wynalazku jest przyłączony kowalencyjnie do jednego środka cytotoksycznego, takiego jak winblastyna, natomiast C-koniec jest jednocześnie przyłączony do innego środka cytotoksycznego, który jest tym samym lub innym środkiem cytotoksycznym, takim jak doksorubicyna. Taki policytotoksyczny koniugat może być korzystny w stosunku do koniugatu zawierającego tylko jeden środek cytotoksyczny.
186 341
Koniugat ofigopeptyd-środek cytotoksyczny według wynalazku, w którym korzystnym środkiem cytotoksycmym jest deksorubicyna może być opisany poniższym wzorem ogólnym I:
w którym: w którym:
XLjest nieobecny lub oznacza aminokwas wybrany spośród:
a) fenyloalaniny,
b) leucyny
c) waliny,
d) ieoleucyny,
e) (2-naftylo)alaniny,
f) cyklohdksyloαlaniny,
g) difenyloalaniny,
h) nerwaliny, i
j) norleucyny;
R oznacza wodór lub -(C=O)R'; a R1 oznacza C1-C6al0il lub aryl.
W korzystnej postaci powyższego koniugatu:
XLjest nieobecny lub oznacza aminokwas wybrany spośród:
a) leucyny,
b) ieoleucyny,
c) norleucyny, i
d) waliny; i
R oznacza acetyl, piwaloil lub benzoil.
Poniższe związki są szczególnymi przykładami koniugatów oligopeptyd-śsoee0 cytotoksyczny według wynalazku:
ch3o
186 341 gdzie X pzncsćc:
i?
H2N—AsnLysIleSerT yrGlnS er—C—
HjN—AsnLysneSąrTnrGlnSf—C— !—
H2N—AsnLysIleS erT yrGlnS erSerS er—C—
H2N—AsnLnsIleSąrTnrGlnSer^Se^i^^e^i^TTur—C—
H2N—AsnLysIleSerT yrGlnS erS erS erThrGlu—C— <}
H2N—AlcAsnLasIleSerTyrGlnSerSerSerTheGlu—C—
AsHN—AlcAsnLnsIleSerTarGlnSerSerSerThe—C—
AsHN—AleAsnLysIleSerTnrGlnSerSerSerTheLeu—C—
AsHN—AlcAsnLnsAlcSerTneGlnSeeAlcSeeTheLeu—C—· i
AsHN—AleAsnLnsAleSerTcrGlnSerAlcSerLeu—C—
AsHN—AleAsnLysAleS erT yrGlnS erS erS erLeu—C—
AsHN—AlcAsnLnsAlcSerTnrGlnSąrSerLąu—C—
AsHN—SerTyrGlnSerSerSerLeu—C— i
AsHN—hArgT yrGlnS erSerS erLeu—C—
AsHN—LysTnrGlnSerSąrSąrLąu—C— (Sekw. Nr kJ.: 13) (Sekw. Nr Id.: 16) (Sekw. Nr Id.: 17) (Sekw. Nr Id.: 10) (Sekw. Nr Id.: 3) (Sekw. Nr Id.: 11) (Sekw. Nr Id.: 117) (Sekw. Nr Id.: 70) (Sekw. Nr Id.: 118) (Sekw. Nr Id.: 119) (Sekw. Nr Id.: 120) (Sekw. Nr Id.: 121) (Sekw. Nr Id.: 144) (Sekw. Nr Id.: 145) (Sekw. Nr M.: 124) lub .86 341 —C—
Ίΐ
AcHN—LysTyrGlnSerSerNIe—C— (Sekw. Nr Id.: 146)
Ze stanu techniki dobrze wiadomo, i jest to zrozumiałe w przypadku niniejszego wynalazku, że peptydowe środki terapeutyczne takie jak koniugaty oligopeptyd-środek cytotoksyczny według wynalazku, korzystnie mają końcową grupę aminową podstawnika oligopeptydowego zabezpieczoną odpowiednią grupą zabezpieczającą, taką jak acetylowa, benzoilowa, piwaloilowa i podobne. Takie zabezpieczenie terminalnej grupy aminowej zmniejsza lub eliminuje degradację enzymatyczną takich peptydowych środków terapeutycznych przez egzogenne aminopeptydazy, które są obecne w osoczu krwi zwierząt ciepłokrwistych.
Schemat reakcji VI ilustruje wytwarzanie koniugatów oligopeptydów według wynalazku ze środkiem cytotoksycznym z grupy alkaloidów barwnika yinblastyną. Zilustrowano przyłączenie N-końca oligopeptydu do vinblastyny (S.P. Kandukuri i in., J. Med. Chem. 28:1079-1088 (2995)): Jednakże w wyniku sprzężenia C-końca oligopeptydu z innymi pozycjami i grupami funkcyjnymi viablastyny oczekiwane jest także uzyskanie związków użytecznych w leczeniu raka prostaty.
Zrozumiałe jest także, że mogą być także wytworzone koniugaty, w których N-koniec oligopeptydu według wynalazku jest przyłączony kowalencyjnie do jednego środka cytotoksycznego, takiego jak winblastyna, natomiast C-koniec jest jednocześnie przyłączony do innego środka cytotoksycznego, który jest tym samym lub innym środkiem cytotoksycznym, takim jak doksorubicyna. Taki policytotoksyczny koniugat może być korzystny w stosunku do koniugat u zawierającego tylko jeden środek cytotoksyczny.
SCHEMAT REAKCJI VI
N2H4, wrzenie, MeOH ->.
HONO
186 341
SCHEMAT REAKCJI VI — ciąg dalszo
I
CONH—oligopeptyd—C—NH2
Koniugato oligopoptyd-śgoSok cototoksoczno według wynalazku podaje się pacjentowi w formio kompozycji farmaceutycznoj, która zawiera koniugat o wzorze (I) oraz dopuszczalny farmaceutycznio nośnik, podłoża lub rozcieńczalnik. Stosowano tu określania „dopuszczalny farmaceutycznie odnosi się do tych środków, któro są użyteczno w lrczoniu lub diagnostyce zwierząt ciepłoki-wistych, na przykład ludzi, świń, koni, bydła, gryzoni, kotów lub innych ssaków, jak również ptaków i innych zwierząt ciopłokrwistych. Korzystnym sposobom podawania jost podawanie pozajelitowe, zwłaszcza drogą dożylną, domięśniowa, podskórną.
186 341 dootrzewnową lub dolimfatyczną. Takie preparaty mogą być wytworzone przy użyciu nośników, rozcieńczalników lub podłoży znanych specjalistom. W tym celu patrz na przykład Remington's Pharmaceutical Sciences, wyd. 16, 1980, Mack Publishing'Company, ed. Osol et al. Kompozycje takie mogą zawierać białka, takie jak białka osocza, na przykład ludzka albumina z osocza, bufory lub substancje buforujące, takie jak fosforany, inne sole lub elektrolity i podobne. Do odpowiednich rozcieńczalników należą na przykład jałowa woda, izotoniczna solanka, rozcieńczona wodna dekstro-za, alkohol NikloNodorotlenoNy lub mieszaniny takich alkoholi, na przykład gliceryna, glikol propylenowy, glikol polietylenowy i podobne. Kompozycje mogą zawierać konserwanty, takie jak alkohol fenetylowy, metylo- i propyloparabeny, timerosal i podobne. W razie potrzeby kompozycja może zawierać około 0,05 do około 0,20 procent Wagowych prokciNUtlkniacza) takiego jak pidosiadczyn sodu lub wodorosiadczyn sodu.
Kompozycję do podawania dożylnego korzystnie przygotowuje się w ten sposób, że ilość podawana pacjentowi wynosi od około 0,01 do około 1 g koniugatu. Korzystnie podawana ilość będzie w zakresie około 0,2 g do około 1 g koniugatu. Koniugaty według wynalazku są skuteczne w szerokim zakresie dawek, zależnie od takich czynników jak leczony stan chorobowy lub efekt biologiczny, który ma być modyfikowany, sposób podawania koniugatu, wiek, ciężar i stan pacjenta, jak również czynniki ustalane przez leczącego lekarza. Zatem ilość podawana danemu pacjentowi musi być ustalana indywidualnie'.
Dla specjalisty będzie widoczne, że jakkolwiek w poniższych przykładach podano specyficzne reagenty i warunki reakcji, to można dokonać modyfikacji, które uważa się za objęte wynalazkiem. Zatem poniższe preparaty i przykłady przedstawiono jedynie w celu dalszego zilustrowania wynalazku bez jego ograniczania.
Przykłady
Przykład 1
Identyfikacja miejsca rozszczepienia semenog^^ za pomocą PSA.
Upłynnieniu żelu nasiennego towarzyszy równoległa fragmentacja proteolityczna semenogeliny I [Lilja, H., Laurell, C.B., (1984), Scand. J. Clin. Lab. Inves. 44, 447-452]. Uważa się, że fragmentacja proteolityczna semenogeliny jest związana głównie z aktywnością proteolityczną antygenu swoistego dla prostaty [Lilja, H., (1985) J. Clin. Invest. 76, 1899-8900]: Wykorzystując opublikowaną sekwencję semenogeliny I [Lilja, H., Abrahamsson, P.A., Lundwall, A., (1989) J. of. Biol. Chem. 264, 8894-8900] (figura 1) zaprojektowaliśmy startery polimerazowej reakcji łańcuchowej w celu klonowania cDNA semenogeliny z dostępnej w handlu biblioteki cDNA prostaty (Clonetech, Pało Alto, CA). Oczyszczone cDNA semenog^^ umieszczono w bakteryjnym wektorze ekspresji pTAC [Linemeyer, D.L., Kelly, L.J., Minkę,
J.G., Gimknez-Gαllego, G., Desalvo, J. i Thomas, K.A., (1987) Bio/Technology 5, 960-965], cDNA skmknogkliny zaprojektowano tak, że epitop tubuliny umieszczono na karboksylowym końcu białka semenogeliny. Otrzymane przez ekspresję bakteryjną białko semenogeliny oczyszczono na kolumnie z przeciwciałem anty-tubulinowym. Oczyszczone białko semenogeliny I zmieszano z dostępnym w handlu antygenem swoistym dla prostaty (PSA) (York Biologicals Intemational, Stony Brook, NY) w stosunku molowym 100 do 1 (semknogklinα I/PSA) w 12 mM Tdis, pH 8,0, 25 mM NaCl, 0,5 mM CaCl2, i inkubowano przez różne okresy czasu. Substancję otrzymaną po inkubacji frakcjonowano za pomocą elektroforezy na żelu polikaryloamidowym i przeniesiono przez elektroforezę na papier filtracyjny ProBlott (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA) w buforze CAPS [Matsudaira, P., (1987) J. Biol. Chem. 252, 10035-10008]: Papier filtracyjny ProBlott zabarwiono błękitem Coomassie w celu identyfikacji nowych fragmentów białka skmknogkliny generowanych za pomocą PSA. Nowe fragmenty wycięto z filtra skalpelem i poddano oznaczeniu sekwencji. Po zidentyfikowaniu fragmentów proteolitycznych otrzymanych przez trawienie przez różne okresy czasu przeprowadzono reakcję trawienia. Powinowactwo PkA do 5 potencjał38
186 341 nych miejsc rozszczepienia w semenogelinie I było następujące: miejsce 349/350 > miejsce 375/376 > miejsce 289/290 = miejsce 3-)/3-6 > miejsce 159/-60. Względne powinowactwa otrzymano z intensywności plam błękitu Cooma.ssie dla każdego z fragmentów peptydowych generowanych przez PSA. Intensywności te miały przybliżone stosunki 3:1:0,6:0,3.
Przykład 2
Otrzymywanie oligopeptydów zawierających miejsca rozszczepienia przez PSA.
Oligopeptydy otrzymano przez syntezę w fazie stałej, stosując do wprowadzenia aminokwasów protokół podwójnego sprzęgania na zautomatyzowanym syntetyzerze peptydów Applied Biosystems model 430A.
Odbezpieczenie i usunięcie oligopeptydu z nośnika przeprowadzono przez działanie ciekłym kwasem fluorowodorowym. Oligopeptydy oczyszczono za pomocą preparatywnej wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami na kolumnach krzemionkowych C18, stosując gradient 0,1% wodny roztwór kwasu trifluorooctowdgo/acetenitsyl. Identyczność i jednorodność oligopeptydów potwierdzono przez analizę składu aminokwasów, cieczową chromatografię wysokociśnieniową i spektroskopię masową metodą bombardowania szybkimi atomami. Oligopeptydy otrzymane tą metodą przedstawiono na fig. 2.
Przykład 3
Ocena rozpoznawania oligopeptydów przez wolny PSA
Oligopeptydy otrzymane w sposób opisany w przykładzie 2 rozpuszczano pojedynczo w buforze do trawienia pSA (12 mM tris(hydroksy-metylo)aminometan pH 8,0, 25 mM NaCl, 0,5 mM CaCl2) i roztwór dodano do PSA w stosunku molowym 100 do 1. Reakcję zatrzymywano po różnych okresach czasu przez dodanie kwasu trifluorooctowego (TFA) do stężenia końcowego 1% (objętościowo/objętościowe). Zatrzymaną reakcję anαfidowane za pomocą HPLC na kolumnie C18 z odwróconymi fazami, stosując gradient wodny 0,1% roztwór TFA/acetonitryl. Wyniki tej oceny przedstawiono na figurze 2. Inne oligopeptydy otrzymane w sposób opisany w przykładzie 2 testowano za pomocą tego samego testu, przerywając reakcję po 4 godzinach. Wyniki tej oceny przedstawiono na figurze 3. W wyniku usunięcia reszty asparaginowej z końca aminowego oligopeptydu uzyskuje się znaczący spadek hydrolizy peptydu przez PSA, natomiast obecność reszty kwasu glutaminowego na końcu karboksylowym peptydu wydaje się nie mieć istotnego znaczenia, dla rozpoznawania przez PSA.
Przykład 4
Otrzymywanie nie ulegających rozszczepieniu koniug-tów ofigopeptyd-de0sosobicyna
Pochodne de0sorubicyny przedstawione w tabeli 3 otrzymano za pomocą następującej ogólnej reakcji: Do mieszaniny deksosobicyny (Sigma) i odpowiadającego peptydu (otrzymanego przez syntezę w fazie stałej lub dostępnego w handlu (Sigma)) w DMSO dodano HBTU i HOBT oraz diieopsepyloetyleaminę i mieszano mieszaninę reakcyjną przez noc.
Surową mieszaninę reakcyjną oczyszczono bezpośrednio za pomocą preparatywnej HPLC z odwróconymi fazami na kolumnie C-18, stosując gradient 0,1% kwas triffuorooctewy (TFA) w acetenitrylu/0,10/o TFA w wodzie.
186 341
Tabela 3
ch2oh
OH ch3o o oh o
Związek R MS (jon macierzysty)
12a Ala-H 615
120 Ala-N-Ac 657
12c Ala-Ala-Ala-N-Ac 799,5
12d Ala-Szr-Ala-Gly-Thr-Pro-Gly-Ala-N-Ac (Sekw. Nr Id. 12) 1199
Przykład 5
Test cytotoksyczności in vitro peptydowych pochodnych doksoruOicyny
Cytotoksyczności nie ulegających rozszczepieniu koniugatów oliąopnptyd-doksorzOicyna, otrzymanych w sposób opisany w przykładzie 4, w stosunku do linii komórek, o których wiadomo, żn są zabijane przez niemodyfikowaną d6ksorubicyno, oceniano za pomocą testu Alamar Bluz. W szczególności hodowle komórek LNCaP raka prostaty, które są ludzkim przerzutowym rakiem prostaty izolowanym z biopsji igłowej węzła chłonnego (LNCaP.FGC: American Typz Culturn Collection ATCC CRL 1740) lub komórek DuPro w płytkach 96-stz0zinnbowych rozcieńczono pożywką zawierającą różnn stężenia danego k6nlugatz (końcowa objętość studzienki w płytce 200 μΐ). Komórki inkubowano przez 3 dni w 37°C, a następnie do studzienki dodawano 20 μΐ Alamar Bluz. Następnie komórki dalej iskubowaso i dokonano odczytu płytek testowych na czytniku ELISA EL-310 przy dwóch długościach fali 570 i 600 nm w 4 i 7 godzin po dodaniu Alamar Bluz. Następnie obliczano względną żywotność przy różnych stężeniach testowanego konlugatz w stosunku do hodowli kontrolnych (bzz b6nlugatu). Oceniano także cytotobsyczności niemodyfikowanej doksorzblcyny i ruzmodyfikowansgo oligopeptydu. Figura 3 przedstawia dane o dytotoksydzności dla reprezentatywnego związku (związek 12d).
Przykład 6
Ocena aktywnego enzymatycznie PSA z komórek LNCaP
Aktywność enzymatyczną wykazano przez iskzbowłnie osocza pozbawionego LNCaP (zatężonsgo około 200 krotnie) z rnkombinacyjnym białkiem semenogeliny I. Około 0,5 μg immunologicznie reaktywnego PSA w stężonej k6n0ycJonowaneJ pożywce [oznaczonej za pomocą testu ELISA HYBRIDTECH (Tandem E)] zmieszano z około 3 μΐ rekombinasyjseJ szminogeliny I i lskubowaso przez 4 godziny w 37°C. Po zakończeniu inkubacji strawioną mieszaninę analizowano za pomocą procedur Western biot. Wyniki wykazują, że oczyszczony
186 341
PSA z nasienia i PSA z pożywki kondycjonowanej LNCaP generują identyczne mapy proteolityczne rekombinacyjnego białka semenogeliny I. Zatem komórki LNCaP wytwarzają enzymatycznie aktywny PSA. LNCaP są rakotwórcze u nagich myszy i wytwarzają wykrywalne ilości cyrkulującego PSA.
Przykład 7
Otrzymywanie rozszczepialnych koniugatów oligopeptyd-doksorubicyna Pochodne doksorubicyny, w których oligopeptyd rozszczepiany proteolitycznie przez wolny PSA jest przyłączony kowalencyjnie do aminy z ugrupowania cukrowego doksorubicyny otrzymano stosując następującą reakcję ogólną: Do mieszaniny doksorubicyny (Sigma) i odpowiadającego peptydu (otrzymanego przez syntezę w fazie stałej w sposób opisany w przykładzie 2) w DMSO dodano HBTU i HOBT razem z diizopropyloetyloaminą i mieszano mieszaninę reakcyjną przez noc. Surową mieszaninę reakcyjną oczyszczano bezpośrednio za pomocą preparatywnej HPLC z odwróconymi fazami na kolumnie C-18, stosując 0,1% kwas trifluorooctowy (TFA) w acetonitrylu/0,1% TFA w gradiencie wodnym. Gdy peptyd zawierał reaktywne grupy aminowe, takie funkcje zabezpieczano w zwykły sposób jako addukt fluorenylometoksykarbonylowy, który po sprzęganiu z doksorubicyną usuwano działając aminą drugorzędową, taką jak piperydyna i podobne. Koniugaty według wynalazku mają wzór ogólny
i mogą być przedstawione jako ,,Ac-peptyd-DOX(3')”.
Koniugaty otrzymane tą metodą są zestawione w tabeli 5 na figurze 5.
Przykład 8
Ocena rozpoznawania koniugatów oligopeptyd-doksorubicyna przez wolny PSA Koniugaty otrzymane w sposób opisany w przykładzie 7 rozpuszczano pojedynczo w buforze do trawienia PSA (12 mM tris(hydroksymetylo)aminomktan pH 8,0, 25 mM NaCl, 0,5 mM CaCl2) i roztwór dodano do PSA w stosunku molowym 100 do 1. Reakcję zatrzymywano po różnych okresach czasu przez dodanie kwasu trifluorooctowego (TFA) do stężenia końcowego 1% (objętościowo/objętościowe): Zatrzymaną reakcję analizowano za pomocą HPLC na kolumnie C18 z odwróconymi fazami, stosując gradient wodny 0,1% roztwór TFA/acetonitryl. Wyniki tej oceny przedstawiono w tabeli 5 na figurze 5.
Przykład 9
Ocena rozszczepienia koniugatów oligopeptyd-doksorubicyna w pożywce kondycjonowanej komórkami.
Pozbawioną osocza, kondycjonowaną komórkami pożywkę MEM (ujemny wynik testu z czerwienią fenolową) zebrano po 3 dniach od dodania do pożywki linii komórkowych
186 341
LNCaP albo Dupro (przogotowuro w sposób opisany w J. Urologo, 146:915-919 (1991). Pożywkę zagęszczono 20-keotrio, stosując zagęszczacz AmicorFCentriprep™ wonirujący cząsteczki o ciężarze cząsteczkowym powyżej 10000. Pożywka kondocjoromαra LNCap zawierała wolno białko PSA w stężeniu średnio około 100 ng/ml, oznaczonym za pomocą zestawu immbrpdotoknojrogo Tandom®-E PSA (Hybritech®). W pożywce kprdonjonowaroj komórkami Dupro nio wykryto wolnego PSA.
Porcjo zagęszczonej kordycjonowanoj pożywki po 100 pl zmieszano z 35 pg koniugatu oligopoptyd-doksoIbbicora, otrzymanego w sposób opisany w przykładzie 7 i inkubowuro mieszaninę w 37°C przoz 0, 4 i 24 godziny. Reakcjo zatrzymano przez dodanie ZnCl2 (do stężenia końcowego 0,01 M) i analizowano za pomocą HPLC z odwróconymi fazami na kolbmruch C15, stosując gradient wodny 0,1% TFA/acotonitryl w colu oznaczenia procentu strawionego kpniugutu poptyd-środok cototoksyczny. Wyniki oznaczeń przedstawiono w tabeli 6 na figurze 6.
Przykład 10
Tost in vitro cytptoksyczrości poptydowych pochodnych doksOTubicono
Cytotoksyczności rozszczepialnych komugatów oligopoptod-doksprubicora, otrzymanych w sposób opisany w przykładzie 7, w stosunku do linii komórkowych, o których wiadomo, zo są zabijano przez doksorubiconę riomoSoflkomarą, oznaczano za pomocą tostu Alαmαg Bluo w sposób opisany w przykładzie 5. W szczególności hodowlo komórkowe komórek raka prostaty LNCap lub komórek DuPRO na płytkach 96-studzionkowoch rozciończurp pożywką zuwiogującą różno stężenia danego koniugatu (końcowa objętość studzienki 200 pl). Komórki irkbbpwuro przoz 3 dni w 37°C, do studzienki dodano 20 pl A^pui Bluo. Komórki dalej inkubomano, po czym płytki poddano odczytowi za pomocą czytnika ELISA EL-310 przy podwójnej długości fali 570 i 600 nm w 4 i 7 godzin po dodaniu Alamar Bluo. Następnie obliczono względną żywotność w procentach przy różnych stężeniach badanego komugatu w stosunku do hodowli kontrolnych (bez koriugutu): Cytotoksyczności koniugatów porównano także z cytotoksycznością niomodyfikowanoj doksoeubinoro i momodyfikowanego oligopoptydu, testowanych w tym samym toście. Wyniki togo tostu przedstawiono w tabeli 7 na figurze 7.
186 341
WYKAZ SEKWENCJI (1) INFORMACJE OGÓLNE:
(i) ZGIASZAJĄCY: DeFeo-Jones, Deborah Feng, Dong-Mei Garsky, Victor M.
Jones, Raymond E.
Oliff, Allen I.
(ii) TYTUŁ WYNALAZKU: Nowe peptydy (iii) LICZBA SEKWENCJI: 146 (iv) ADRES DO KORESPONDENCJI:
(A) ADRESAT: DAVID A. MUTHARD (B) ULICA: 126 E. Lincoln Avenue, P.O. Box 2000 (C) MIASTO: RAHWAY (D) STAN: NEW JERSEY (E) KRAJ: U.S.A.
(F) KOD: 07065 (v) POSTAĆ ODCZYTYWANA KOMPUTEROWO:
(A) RODZAJ NOŚNIKA: Dysk elastyczny (B) KOMPUTER: zgodny z IBM PC (C) SYSTEM OPERACYJNY: PC-DOS/MS-DOS (D) PROGRAM: Patentln wydanie #1.0, wersja #1.30 (vi) DANE O ZGŁOSZENIU:
(A) NUMER ZGŁOSZENIA:
(B) DATA ZGŁOSZENIA:
(C) KLASYFIKACJA:
(vii) INFORMACJA O PRZEDSTAWICIELU/AGENCIE:
(A) NAZWISKO: Muthard, David A.
(B) NUMER REJESTRACYJNY: 35,297 (C) NUMER REFERENCYJNY/NUMER AKT: 19235Y (viii) INFORMACJE o TELEKOJUNmAUJI:
(A) TELEFON: (980)594-3903 (B) TELEFAX: (908)594-4720 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 1 (i) CCARAKTERY5SYYA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 462 aminokwasy (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd
186 341 (iii) ΙΙΙΤ^ΟΤΓΙ^Τ'^ίΖΖΙΑΑ: NIE (iv) ANTY-SEN3: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 1
Met Lys Pro Asn Ile Ile Phe Val Leu Ser Leu Leu Leu Ile Leu Glu
1 5 10 15
Lys Gln Ala Ala Val Met Gly Gln Lys Gly Gly Ser Lys Gly Arg Leu
20 25 30
Pro Ser Glu Phe Ser Gln Phe Pro His Gly Gln Lys Gly Gln His Tyr
35 40 45
Ser Gly Gln Lys Gly Lys Gln Gln Thr Glu Ser Lys Gly Ser Phe Ser
50 55 60
Ile Gln Tyr Thr Tyr His Val Asp Ala Asn Asp His Asp Gln Ser Arg
65 70 75 80
Lys Ser Gln Gln Tyr Asp Leu Asn Ala Leu His Lys Thr Thr Lys Ser
85 90 95
Gln Arg His Leu Gly Gly Ser Gln Gln Leu Leu His Asn Lys Gln Glu
100 105 110
Gly Arg Asp His Asp Lys Ser Lys Gly His Phe His Arg Val Val Ile
115 120 125
His His Lys Gly Gly Lys Ala His Arg Gly Thr Gln Asn Pro Ser Gln
130 135 140
Asp Gln Gly Asn Ser Pro Ser Gly Lys Gly Ile Ser Ser Gln Tyr Ser
145 150 155 160
Asn Thr Glu Glu Arg Leu Trp Val His Gly Leu Ser Lys Glu Gln Thr
165 170 175
Ser Val Ser Gly Ala Gln Lys Gly Arg Lys Gln Gly Gly Ser Gln Ser
180 185 190
Ser Tyr Val Leu Gln Thr Glu Glu Leu Val Ala Asn Lys Gln Gln Arg
195 200 205
Glu Thr Lys Asn Ser His Gln Asn Lys Gly His Tyr Gln Asn Val Val
210 215 220
Glu Val Arg Glu Glu His Ser Ser Lys Val Gln Thr Ser Leu Cys Pro
225 230 235 240
Ala His Gln Asp Lys Leu Gln His Gly Ser Lys Asp Ile Phe Ser Thr
245 250 255
Gln Asp Glu Leu Leu Val Tyr Asn Lys Asn Gln His Gln Thr Lys Asn
260 265 270
Leu Asn Gln Asp Gln Gln His Gly Arg Lys Ala Asn Lys Ile Ser Tyr
275 280 285
Gln Ser Ser Ser Thr Glu Glu Arg Arg Leu His Tyr Gly Glu Asn Gly
290 295 300
Val Gln Lys Asp Val Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Ser Gln Thr Glu Glu
305 310 315 320
Lys Ala Gln Gly Lys Ser Gln Lys Gln Ile Thr Ile Pro Ser Gln Glu
325 330 335
Gln Glu His Ser Gln Lys Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser
340 345 350
186 341
Thr Glu Glu Arg 355 Arg Leu His Tyr Gly Glu 360 Asn Gly Val 365 Gln Lys Asp
Val Ser Gln Arg Ser Ile Tyr Ser Gln Thr Glu Lys Leu Val Ala Gly
370 375 380
Lys Ser Gln Ile Gln Ala Pro Asn Pro Lys Gln Glu Pro Trp His Gly
385 390 395 400
Glu Asn Ala Lys Gly Glu Ser Gly Gln Ser Thr Asn Arg Glu Gln Asp
405 410 415
Leu Leu Ser His Glu Gln Lys Gly Arg His Gln His Gly Ser His Gly
420 425 430
Gly Leu Asp Ile Val Ile Ile Glu Gln Glu Asp Asp Ser Asp Arg His
435 440 445
Leu Ala Gln His Leu Asn Asn Asp Arg Asn Pro Leu Phe Thr
450 455 460
(2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 2 (i) CffiARAKZERYSTYKA SSIKiENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TSP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) A.NTS—SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 2
Gly Lys Gly Ile Ser Ser Gln Tyr Ser Asn Thr Glu Glu Arg Leu 15 10 15 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 3 (i) OHARATERYSTYKA SEiKiENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 11 aminokwasów (B) TSP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS : NIE (v) RODZAJ FFAGGENTU: weemętrzny
186 341 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 3
Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu
10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID. : 4 (i) CPHARAKTERYS TYPKA SEPKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTTY-SENS: NIE (v) RODZAJ EFRAGMSNTU: weewiętrzny (Xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 4
Gly Glu Asn Gly Val Gln Lys Asp Val Ser Gln Arg Ser Ile Tyr 15 10 15
Ser Gln Thr Glu (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 5 ( i ) CPHARAKTERYSTYPKA SEPKίENCJI :
(A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ C^Z^Ą^^L^^CZZU: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FFGAGMENTU: weemętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 5
Gly Glu Asn Gly Val Gln Lys Asp Val Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Ser 15 10 15
Gln Thr Glu
186 341 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 6 (i) CIHARAKTERYSTYfKA SEEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 25 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZJJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) AdTY-SEN:: NIE (v) RODZCAJ FIRAGMENTU: wewnętrzny
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 6
Gly Arg Lys Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu Glu
1 5 10 15
Arg Arg Leu His Tyr Gly Glu Asn Gly
20 25
(2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 7
( i ) OHARAKTERYSTYIKA SEIKiEECCI:
(A) DŁUGOŚĆ: 8 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) AdTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FFRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 7:
Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 8 (i) CCHARAKTERYSTYPKA SEEKiENCJI: CA) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza
186 341 (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 8:
Ile Ser Tyr Gin Ser Ser Ser Thr Glu 1 5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 9:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 9:
Lys Ile Ser Tyr Gin Ser ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 10:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE
186 341 (v) RODZAJ FIRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 10:
Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 11:
(i) CCBARAKTERYSTYfKA SEtKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyci (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANITY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 11:
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 12 (i) CCHARAKTERYS TYPKA. SE^t^K^Et^(C.II:
(A) DŁUGOŚĆ: 8 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) TNTTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FIRA3MSNTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 12:
Ala Ser Ala Gly Thr Pro Gly Ala
5
186 341 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 13:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 13:
Asn Lys Ile Ser Tyr Gin Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 14:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 6 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 14:
Lys Ile Ser Tyr Gin Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 15:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa
186 341 (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (Lii) HIPOTETYCZM.: NI E (iv) ANTY-SE^^: NIE (v) RCOZZ^J JRCJMETZU: wewwęttznn (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: Peptyd (B) UMIEJSCOWIENIE 12 (D) INNE INFOIMN^E JI: /'Rwaga! „dowolny adinokwa s naturalny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 15:
Gly Glu Asn Gly Val Gln Lys Asp Val Ser Gln Xaa Ser Ile Tyr Ser 15 10 15
Gln Thr Glu (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 16:
(i) CHHJCJTETCTEETA SETKETCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 8 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTOYYCZNA : HE (iv) ANTT-SENE: NIE (v) RCPZCJ JRCJMETZO: wnemwttznn (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 16:
Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 17:
(i) CCHARAKTERYSTYK SETWETZJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TPIPLPGHA: liniowa
186 341 51 (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIOTTTTCCZNĄ : NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RROZAJ FRAGMENNU: wewnęttzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR IZ.: 17:
Jsn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR IZ.: 18:
(i) CCHARATTE^RYSTYA. SEEKWECJ^J:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) ROZZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIEOIEYYCCNA: HE (iv) ACTY-SECS: NIE (v) KREZZA SRAJMENCU: weweęttzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR IZ.: 18:
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser
10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR IZ.: 19 (i) CHAJAJAENYYSYYA SENAENCJJI (A) ZŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) ROZZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIEOIIEYYCZNA: HE (iv) JCTY-ENNS: NIE (v) RROZZ^A SRAJMENCU: wewwęttzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR IO.: 19:
186 341
Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 20:
(i) CHAJOGKΈROSEYKA SEKKENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 17 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: weewięttznn (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 20:
Gln Leu Asp Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr His Gln Ser 15 10 15
Ser (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 21:
(i) CHAJOJZEROSEYYA SSKWENCJJi (A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) ROOZAJ FROJGffiNTU: wwe^ęti^zr^n^ (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 21:
Asn Arg Ile Ser Tyr Gln Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 22
186 341 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (lii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 22:
Asn Lys Val Ser Tyr Gin Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 23 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 8 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 23:
Asn Lys Met Ser Tyr Gin Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 24:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 8 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa
186 341
(ii) RODZAJ CZĄSTECZKI : peptyd
iii) NIDENESCAZNA: HE
(iv) ANTY-SENS: NIE
(v) PRODZA SROJMENTE: wepeętyzny
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.
Asn Lys Leu Ser Tyr Gln Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 25:
(i) CHAROKTEROSSEKK SENTENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ:: 9 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIDETESYCZNA: ΝΣΕ (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RRODAJ SRRGMENTU: septyy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 25
Asn Lys Ile Thr Tyr Gln Ser Ser Ser 1 5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 26:
(i) CHAJRGTENOSSEYK SENTENCJI:
(Ą) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIDENTSYAZJA: NEE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny
186 341 55 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 26:
Asn Lys Ile Ser Phe Gln Ser Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 27:
(i) dHARACTERYSTYIK SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZU CZĄSTEC^: : peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) AdTY-SEN:: NIE (v) RODZAJ FFRAGIMENTU: weiwnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 27:
Asn Lys Ile Ser Trp Gln Ser Ser Ser Thr 1 5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 28:
(i) d-HARAKTERYSTYIKA SEEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZU CZĄSTEC^:: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) AdTY-SEN:: NIE (v) RODZAJ FFRAGMENTU: peptyd (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 28:
Asn Lys Ile Ser Tyr Asn Ser Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 29 (x) d-HARA\TERYSTYIKA. SEEKiENdI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów
186 341 (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TPPPLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPETETYCZNA : HE (iv) JZO,Y-STZJI NIE (v) RCOZCJ SRCJMETZU: wnwnwtrznn (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 29
Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Thr Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 30:
(i) CYAJRJTTTCTEOTA :ETWETZYI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminiknasó (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGU: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPETTTYCZNA : HE (iv) JNTY-ETNS: NIE (v) RCOZCJ SRRJMETZO: wnwnwtrznn (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 30
Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 31:
(l) CYHJRATTTCTSETA :ETWENZYI:
(A) DŁUGOŚĆ;: 8 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPETETCCZNA : HE
186 341 (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ weewiętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR H.: 31:
Gln Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR H.: 32:
(i) CίUAOAK[1ERYSTYYA SEIAJENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (ϋ) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAJGENCTU: weweΊętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR IO.: 32:
Asn Arg Ile Thr Tyr Gln Ser Ser Ser 1 5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR IO.: 33: (i) (i) CHΛJAJAERY5IYYAI SE3IA^Ή^ICCCvJ:::
(A) ZŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RCDZAJ FRAGMENTU: wewwletrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR IO.: 33:
Asn Arg Ile Ser Phe Gln Ser Ser Ser Thr 15 10
186 341 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 34:
( i) CIAARATΓERYSTY5TA SJ^IK^l^NCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJJ CZĄSTEC^KU : peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANJTY-SE1SS: NIE (v) RODZAJ nRAGMENTU: weiwaetrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 34:
Gln Lys Ile Ser Tyr Gln Thr Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 35 (i) CCAAAATΓERYSTY5TA ΞΕ^ΕΝΟ^ (A) DŁUGOŚĆ!: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJS CZĄSTECKKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ EFRAGMENTU: weewiętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 35:
Asn Arg Ile Ser Trp Gln Ser Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 3:
(i) CCHAAAKTERYSTY5TA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa
186 341 (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) NIDOEETYAZAA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) KRODZA FRR.JMENTU: weweętrznn (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 36:
Asn Arg Ile Ser Tyr Gln Thr Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 37:
( i ) CHAJOAZEROSEYKA FEKZENCJ I (A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) NIDOEETYAZGA : HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) KRODZA FROJGffiNTU: weweetrznn (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 37:
Asn Lys Ile Thr Tyr Gln Thr Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 38:
(i) CHHAOAZEROSEYKA FEKKENCJII (A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) NIDOIETYAZGA : HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) KRODZA FRR.JMENTU: Feweęttznn (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 38:
186 341
Asn Lys Leu Ser Tyr Gln Thr Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 39:
(i) Cl·HAOJITTERYSTYIKJ SEiKiENCJI:
(Α) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTE^H : peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) JNETY-SENI: NIE (v) RODZAJ FIR^t^lM^NTU: weemetrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: ENTW. NR ID.: 39
Gln Lys Leu Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 40:
(i) CίHGOGTTERYSTYIKJ SEiKiENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZJJ CZĄSTE^H: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FIOJGMENTU: weemętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 40
Asn Arg Leu Ser Tyr Gln Thr Ser Ser Thr 1 5 10' (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 41:
(i) CίHGOGCTERYSTYίKJ SEIKNENCJI:
(Α) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza
186 341 (D) TOPOLOGU: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZJA : HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RROZCJ SRCJGMTZO: wnwnwtrznn (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 41:
Asn Lys Val Ser Phe Gln Ser Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 42 (i) CHAJRJTETCTSETA SEIWETZJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (CC) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZJA: HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) PROZZA SRCJMETZO: wnwnwtrznw (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 42:
Asn Arg Val Ser Trp Gln Ser Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 43:
(i) CYAJCJTETCTEETA SEIWETZYII (A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA.: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPETETYCZJA: HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnetrzny
186 341 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR IO.: 43:
Gln Lys Val Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR d.: 44:
( i ) CϊHJRJAΓERYSTYYAJ SSIAtfENCJI:
(A) ZŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza d) TOPOLOGIA: liniowa (ii) CZĄSTEAAHI: peptyd dii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY —SENS: NIE (v) RODZAJ ^^04^10: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR IZ.: 44:
Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr
10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR IZ.: 45:
(i) SEIAJENCJH:
(A) ZŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECKKI: peptyd dii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ weewiętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR IO.: 45:
Gly Glu Glu Gly Val Gln Lys Asp Val Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Ser 15 10 15
Gln Thr Glu (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR IZ.: 46:
186 341 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNĄ: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 46:
Gly Lys Gly Ile Ser Ser Gln Tyr Ser Asn Thr Asp Glu Arg Leu 15 10 15 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 47:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 47:
Gly Glu Asn Gly Leu Gln Lys Asp Val Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Ser 15 10 15
Gln Thr Glu (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 48:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd
186 341 (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 48:
Gly Glu Asn Gly Val Asn Lys Asp Val Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Ser 15 10 15
Gln Thr Glu (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 49:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 49:
Gly Glu Asn Gly Val Gln Arg Asp Val Ser Gln Arg Ser Ile Tyr Ser 15 10 15
Gln Thr Glu (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 50:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE
186 341 (v) RODDAJ FFRAGffiNTU: weerniętrzny (ci) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 50:
Gly Glu Asn Gly Val Gln Lys Asp Val Ser Gln Lys Ser Ile Tyr Ser 15 10 15
Gln Thr Glu (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 51 (i) CH AARY A IKR Y ΒΕΚΐΑΕΝΟ JI:
(A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZU: peptyd (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODDAJ FmGffiNTU: wewnętrzny (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKN. NR ID.: 51:
Gly Glu Asn Gly Val Gln Lys Asp Leu Ser Gln Thr Ser Ile Tyr Ser 15 10 15
Gln Thr Glu (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.:
(i) CHHJOOGTENOSEYK.Λ SEiKiENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZU: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) J.NES-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 52
Gly Glu Asn Gly Val Gln Lys Asp Val Ser Gln Ser Ser Ile Phe Ser 15 10 15
186 341
Gln Thr Glu (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 53 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SETE. NR ID.: 53 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 54 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNYMI) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 54
Gly Glu Asn Gly Val Gln Lys Asp Val Ser Gln Arg Ser Ile Tyr Thr 15 10 15
Gln Thr Glu (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 55 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
186 341 (A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETCCCNA: ΝΣΕ (iv) ANTY-SENS: NIE (v) ROOZAJ FRAGGffiNTU: WEWECTRZCC (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 55
Gly Glu Asn Gly Val Gln Lys Asp Val Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Thr 15 10 15
Gln Thr Glu (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 5 6 (i) CHAJOJTEROrTYKA ί:!!!;?!:!! i (A) DŁUGOŚĆ: 19 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) NIPC^TETC^Z^N^i^A : NEE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) PRODZA EFRAMENIU: WETECTEOCC (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 56
Gly Glu Asn Gly Val Gln Lys Asp Val Ser Gln Arg Ser Ile Tyr Thr 15 10 15
Asn Thr Glu (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 57 (i) CHΑΑOJTEE.OTTETΑ 6ETKENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI:
186 341 (iii) NIDOIETCAZJA: HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) i^ODZA FROJMENTU: WEWNĘTROAY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 57
Gly Lys Ala Ile Ser Ser Gln Tyr Ser Asn Thr Glu Glu Arg Leu 15 10 15 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 58 (i) CΠARAKZT1ROSEYKA FEKWENCJII (A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) NIDOTEYYAZGA : HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) PRODZA FROJMENTU: WEWNĘTROAY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 58
Gly Lys Gly Ile Ser Ser Gln Tyr Ser Asn Ser Glu Glu Arg Leu 15 10 15 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 59 (i) CHAAOJZEROSEYKA FEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) NIDOEETYAZJA: HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) PRODZA FROJMENTU: WEWWĘTROAY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKN. NR ID.: 59
Gly Arg Gly Ile Ser Ser Gln Tyr Ser Asn Thr Glu Glu Arg Leu 15 10 15
186 341 (2) INFORMACJA 0 SEKWENCJI NR ID.: 60 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 60
Gly Lys Gly Ile Thr Ser Gln Tyr Ser Asn Thr Glu Glu Arg Leu 15 10 15 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 61 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 61
Gly Lys Gly Ile Ser Thr Gln Tyr Ser Asn Thr Glu Glu Arg Leu 15 10 15 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 62 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD
186 341 (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 62
Gly Lys Gly Ile Ser Ser Asn Tyr Ser Asn Thr Glu Glu Arg Leu 15 10 15 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 63 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 63
Ala Lys Gly Ile Ser Ser Gln Tyr Ser Asn Thr Glu Glu Arg Leu 15 10 15 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 64 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 64
Gly Lys Gly Ile Ser Ser Gln Phe Ser Asn Thr Glu Glu Arg Leu 15 10 15
186 341 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 65 (i) CIHJRJZTERYSTYIZJ SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZTYJ CZĄSTECZU: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SEN:: NIE (v) RODZAJ .ίΆοίΟΜΕΝΤυ: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 65
Gly Lys Gly Ile Ser Ser Gln Tyr Thr Asn Ser Glu Glu Arg Leu 15 10 15 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 66 (i) CCHARAKTERYSTYIU. SEIKWEZCJH:
(A) DŁUGOŚĆ: 15 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGU: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: : PEPTYD (iii) HHIOTTTYYZNJ: NIE (iv) ANTY-SEN:: NIE (v) RODZAJ FIRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OHS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 66
Gly Lys Gly Ile Ser Ser Gln Tyr Ser Asn Ser Glu Glu Arg Leu 15 10 15 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 67 (i) CίHJRAKTERYSTYϊKJ SEIKίENCJH:
(A) DŁUGOŚĆ: 25 aminokwasów (B) TYP: aminokwas
166 411 (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SETE. NR ID.: 67
Ser Gln Lys Ala Asn Lys He Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr G.lu 15 10 15
Glu Arg Arg Leu His Tyr Gly Glu Asn Gly
25 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 68 (i) CAAAATTEA5ST5KA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 8 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (Lii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SRTE. NR ID.: 68
Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 69 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE
186 341 73 (v) RODZAJ nR^i^l^^TU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 69
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 70 (i) CίHGOGTΓERYSTYIKJ SEEKNENC JI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZJJ CZĄSTECKU: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAOMENTU: WEWNĘTRZMY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 70
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 71 (i) CtHJOJTTERYSTYϊTJ SEiKiENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZJJ CZĄSTECZU: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SEN:: nie (v) RODZAJ F]EOJ3MiNTU: WEEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 71
Ala Asn Gly Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 72
186 341 (i) CίHARJ\TERYSTYYAJ SEKWENCJI:
(A) ZŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJJ CZĄSTSZKII : PEPTYD (Lii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) AdTY-SENS: NIE (v) RODZZA FiRAGIffiNTU:
(xi) OPIS SIAWINCJH: SEKW. NR H.: 72
Ala Asn Pro Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA o SEKWENCJI NR IZ.: 73 (i) CtHARA^TERYSTYIKA SEIKWENCJI:
(A) ZŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) R0DZAJJ CZĄSTECKK:: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FiRAGIMENTU: WEEWIĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR H.: 73
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ala Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR IL·.: 74 (i) CIHARACT ERYS TYPKA SEEKWENCJI:
(A) ZŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów
(B) TYP: aminokwas
(C) ILOŚĆ NICI: poj edyncza
(Z) TOPOLOGIA: liniowa
(li) ROZZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYZ
186 341 (iii) HIOOEETCCZNA: NEE (iv) ANTT-SENS: NIE (v) RROZAJ EFRAMEmU: WEWWCTOOAC (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 74
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Lys Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 75 (i) CJAJRJTEROSEOTA 4EKWEECJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 11 aminokwasów (B) TTP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTTD (iii) HIPOEOTJACNA : HE (iv) JCTT-EENE: NIE (v) ROOZAA EFΛJMHEΓI,U: WEWECTOOAN (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 75
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 76 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TTP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: ^P^D (iii) HIPOEETJCZNA: HE (iv) JCET-EΓNE: NIE (v) KRODZA EFRAMEniU WEWWCTOOAC (ix) CECHA::
186 341 (A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOWIENIE 5 (D) INNE INFORMACJE: /znacznik = d-seryna /uwaga = „nienaturalna konfiguracja aminokwasu (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 76
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu
10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 77 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (V) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOWIENIE 5 (D) INNE INFORMACJE: /znacznik = d-izoleucyna /uwaga = „nienaturalna konfiguracja stereochemiczna aminokwasu (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 77
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu
10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 78 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (in) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE
186 341 (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENC H: SEKW. NR ID.: 7 8
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Gln Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 79 (i) CHΑIOJ<TEEYTTYKΛ SFEKiENC JI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: mTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) Y-SENS: NIE (v) RODZAJ Ε^σ^ΙΚΤυ: WEWĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 79
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ala Lys Thr Glu
10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 80 (i) CtBARACTERYSTYYK. δε^ΕΝΟ JI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ EEOl·GMENΪϋ: WETEIĘTRZNY (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOWIENIE 5 (D) INNE INFOENNEJE: ORnAom:k = d-liiyna = „nienaturalna konfiguracja stereochemiczna aminokwasu /uwaga
186 341 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 80
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 81 (i) CϊHACJ<TERYSTYTKJ SFEKiENC JI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZK: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ASITY-SENS: NIE (v) RODZAJ ευΟΜΕΝΤυ: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCjI: SEKW. NR ID.: 81
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Thr Glu
10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 82 (i) CϊHJRJKTERYSTYϊZJ SEEK/ENC JI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZK! PEPTYD (iii) HHPOEEETCZNA: NIE (iv) ANY-SENS: NIE (v) RODZAJ FFR^C^IM^INTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 82
Ala Asn Lys Ser Tyr Gln Ser Ser Thr Glu
10 (i) CHJCAKTECTEETKJ SEKWENCJI:
(2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 83
186 341 (A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HPOTETYCZNA : HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ SROGMENTU: WENWNTEOH (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 83
Ala Asn Lys Ile Tyr Gln Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA o SEKWENCJI NR ID.: 84 (i) CHΛEAKTEEYSTYKA SENTENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: INITYD (iii) NIDENESYCZNA : HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) KRODZA SROGGENTU: WEEWN^l^^Z^Z^i' (xi) OPIS SEKWENCJI: ENKW. NR ID.: 84
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gln Ser Ala Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 85 (i) CϋHJOGTTNOSEEKT SENKENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: INPTYZ
186 341 (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 85
Ala Asn Glu Ile Ser Tyr Gln Ser Ala Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 86 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 86
Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 87 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 87
186 341
Ser Tyr Gln Ser Ser Thr Glu 1 5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR IO.: 88 (i) CPHARAKTERYS TYPKA SEIAίENCJI:
(A) ZŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) AdTY^E^;E]EI: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR IO.: 88
Ser Tyr Gln Ser Ser Thr Leu
5 (2) ICRORMACJJ O SEKWENCJI NR H.: 8 9 (i) CPHARAKTERYS TYPKA SEIKWENCJI:
(A) ZŁUGOŚĆ: 8 aminokwasów iB) TYP: aminokwas
C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) R0DZJJ CZĄSTECZKI:: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANiTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FίRJGIMINTU: WEWNĘTRZZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR IZ.: 89
Ala Ser Tyr Gln Ser Ser Thr Glu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR H.: 90 (i) CPHJΟAAΓERYSTYPAJ SEIKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Ώ) TOPOLOGIA: liniowa
186 341 (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ EEUGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 90
Glu Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 91 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 91
Ala Asn Glu Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 92 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (lii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY
186 341 83 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKE. NR ID.: 92
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Tyr Ser Ser Ser Thr Glu
10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 93 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: EEKE. NR ID.: 93
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Tyr Ser Ala Ser Thr Glu
10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 94 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW^. NR ID.: 94
Ala Ser Tyr Gln Ser Ser Leu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 95 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
186 341 (A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TTP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: IEPETD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) JNET-EECE: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZn (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 95
Ala Asn Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 96 (i) CHJOAKEERTETTKJ SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) TTK aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEIETD (iii) HIPOTETyCZNA: NIE (iv) JNTT-SECS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNA (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 96
Ala Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr Glu 1 5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 97 (i) JHARAKEERTSTTKJ SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 8 aminokwasów (B) TTP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: IEPETD (iii) HIPOTETyCZNA: NIE
186 341 (iv) ANSiTY-SENS: NIE (v) RODZAJ F]CJGMENEU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 97
Ser Tyr Gln Ser Ser Thr Glu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 98 (i) CćHJR7J\TERYSIYKΛ SEIKίENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 11 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZHI: PEPTYD (iii) HHPOETETCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ F]:CJGMTZTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 93
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gln Ser Ala Ser Cys 15 10 (2) INFORMACJĄ O SEKWENCJI NR ID.: 99 (i) CIHARAKTERYSTYΪZJ SSKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ): 5 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOIPLOGHA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTSZE^: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) AUTY-SENS: NIE (v) RODZAJ WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 99
Gln Ser Ser Thr Glu
5
186 341 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 100 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(Α) DŁUGOŚĆ: 6 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PNIEYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: EEKW. NR ID.: 100
Tyr Gln Ser Ser Thr Glu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 101 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 6 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: INPEYZ (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 101
Ser Gln Ser Ser Thr Glu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 102 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza
186 341 (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) NIDOIETYAZJA: HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 102
Ala Asn Lys Ile Ser Gln Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 103 (i) CHAGOGZEROSETKA :EEWEnCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 11 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (Lii) NIDOIETYAZAA: HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) R (ROD ZA FROJMENTU: FEWNĘĘROAY (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOWIENIE 3 (D) INNE INFORMACJE: /znadni: /Tnienik: r: Ina /uwaga = „ornityna (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 103
Ala Asn Xaa Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Thr Glu
10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 104 (i) CHAAAJZEnOSSYYZ. :SnZEnCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa
186 341 (ii) ROZZAJ CZĄSTECZKI: PIPTYL· (iii) HIEΟIEYYACJA : HE (iv) JCTY-ENNE: NIN (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOWIENIE 2 (Z) INNE INFOHCC.E JĘ: ORMA^nik z niznit :r /uwaga = „3,4-diihlorofenyloalnnina (v) PROZZA SRAJMENCU: kENNCTRZAN (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR IZ).: 104
Ser Xaa Gln Ser Ser Thr Glu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR H.: 105 (i) CHAAAAAENRYEYYA :SNKEICJJ:
(A) OŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z TOPOLOGIA: liniowa (ii) ROZZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYZ (iii) HIEOIEYYACJA : HE (iv) JCTY-SNNS: NIE (v) RCOHA SRAJMENCU: FENNCTRZAC (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOWIENII 2 (Z) INNE INFOHMC.EΙΗ Orma^eśk z ninnit :r:1μ /uwaga = „(3-pirydynylo)nlnninn (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKTO. NR IO.: 105
Ser Xaa Gln Ser Ser Thr Glu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR IZ.: 106 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
186 341 (A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) : NEE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) KRODZA JROGCMTITU: WETEΓCĘEOCC (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 106
Ser Lys Gln Ser Ser Thr Glu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 107 (i) CCH.GOJTETYTTETΑ JETWETC JJZ:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) NIPETETYCZNA: NEE (iv) JCίEY-SENS: NIE (v) KRODZA WETEĘĘEONC (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 107
Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Leu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 108 (i) CHAJOJTEE.OTTETA JETWETCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (-ii) HIPOTETYCZNA: NIE
186 341 (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RRODZA kRAAGMKTU: WEREĘTRANY (ix) CECHU (A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIRJSCOEIRNIR 1 (D) INNE INFOWNAEJEn 0AnlocRIk = nieniturjIiu /uwaga = „kwas epsilon aminokapronowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SRTE. NR ID.: 108
Xaa Tyr Gln Ser Ser Ser Leu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI AR ID.: 109 (i) CHHARATERA5EY5A SERTERAΟC:
(A) DŁUGOŚĆ: 11 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (Lii) HIOORE5ΟCZAA : NEE (iv) AATY-SENS: NIE (v) RRODZA kRAlGMKTU: JERWATRANA (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOWIENIE 4 (D) INNE INFORMNE JEn OAnAΟCEI k = (znikkr jIiu /uwaga = „A-metyloieoleuiyla (xi) OPIS SEKWRACCI: SETE. AR ID.: 109
Ala Asn Lys Xaa Ser Tyr Gln Ser Ser Thr Glu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 110 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów
186 341 (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PNPTSD (iii) NIDENETYCZNA : NEE (iv) ANES-EENS: NIE (v) PRODZA SROJMENTU: WENWĘTEOAY (xi) OPIS SEKWENCJI: SNTE. NR ID.: 110
Ser Tyr Gln Ser Ser Thr Glu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 111 (i) CHAJOGTENOSEEKT SENKENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 6 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: INPTYD (iii) NIDENESYCZNA: HE (iv) ANEY-SENE: NIE (v) RODZAJ SROJMENTU: WENEĘTEOAY (xi) OPIS SEKWENCJI: ENTE. NR ID.: 111
Tyr Gln Ser Ser Thr Glu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 112 (i) CHAJOJTENOSEEKT SENKENCJII (A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: INPESD (iii) HIIOEETSCZNG: NIE
186 341 (iv) JNEY-E3E:ES: NIE (v) RODZAJ WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 112
Ser Tyr Lys Ser Ser Thr Glu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 113 (i) CCBACJTETYTEYTA SE^IK^ET^Z^vJEI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIIOTTTYYZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODDAJ :’ΕΑΥΜΞNTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 113
Ser Tyr Tyr Ser Ser Thr Glu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 114 (i) CffiACJTETCTEEΎKJ SEIKWINCJI:
(A) DŁUGOŚĆ;: 6 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) EOIOLOGHJ: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODDAJ Πυ^ΡΕΝΤυ: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 114
Ser Tyr Gln Ser Ser Leu
5
186 341 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 115 (i) Cl·ΰGOAZTERYSTYϊZJ SEIKffiNC JI:
(A) DŁUGOŚĆ: 6 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ □ZASILCKU: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FFOJGIMnNTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 115
Ser Tyr Gln Ser Ser leu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 116 (i) Cl·HGOAZTERYSTYBA SSiKiENCJI:
CA) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKA PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FIR^C^lM^l^TU: WEWNĘTRZNY (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOWIENIE 1 (D) INNE INFOFNNNCJE i /znacm: = niennkFr Flna /uwaga = „kwas 2,3-diaminopzopionowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 116
Xaa Tyr Gln Ser Ser Ser Leu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 117 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
CA) DŁUGOŚĆ: 11 aminokwasów
186 341 (B) TTP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPETD (iii) HIEOEOTYCZNA : HE (iv) ACTT-EENE: NIE (v) KRODZA FROJ^ffiNCU: WEΓWΓCĘT.OAY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 117
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Thr 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 118 (i) CCAJOJTTEOSTYTA 4EΓKJENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (B) TTP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: ^P^D (iii) HIEOEOTYAZNĄ: HE (iv) JCEY-SECS: NIE (v) KRODZA FROJMENCU: WEΓW;ίCĘOOAY (^ti) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 118
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gln Ser Ala Ser Thr Leu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 119 (i) CJHJOJTEROSEETA 4EΓKENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 11 aminokwasów (B) TTP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI:
(iii) HIIETETTCZCA: NIE
186 341 (iv) ANTY-SENS: nie (v) RROZAJ kRAJMMNCU: SΈNEĘTRZAY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. CR IZ.: 119
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gln Ser Ala Ser Leu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR IZ.: 120 ( i ) CCAJAJAENYYEYYA SEEAENCJJ :
(A) ZŁUGOŚĆ: 11 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) ZOZZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYZ (iii) HIEOEEYYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS; CIE (v) RaOHA kRAJMENTlU: WEEWCTRZZC (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKE,. CR IZ.: 120
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Leu 15 10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI CR IZ.: 121 (i) CHAJAJARNZYERYA SENKENCJI:
(A) ZŁUGOŚĆ: 10 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) ZOZZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYZ (iii) NIERTRYYCZNA: NIE (iv) ANTY-SECS: CIE (v) RaOHA kRAJMENTU: WENECTRZAY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEAEΓ. CO IZ.: 121
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gln Ser Ser Leu 15 10
186 341 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 122 (i) CHAJOΑTETOTTETA :ETWETCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPEYZ (iii) NIPETETYCCJA: NEE (iv) ACTY-SENS: NIE (v) KRODZA JROJGMTCE: JETECĘEOΑC (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOWIENIE 7 (D) INNE INFONCCEJE: PonGCIτI: z d-liuy:n:
/uwaga = „nienaturalna konfiguracja stereochemiczna aminokwasu (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 122
Ser Tyr Gln Ser Ser Thr Leu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 123 (i) CHHAOATETOTTEYA. :ETWETCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 11 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: IEITYD (iii) NIOEEETYCCJA : NEE (iv) JCEY-SENS: NNE (v) i^CODZA JRRJMETCE: JETWCĘEOAC (xi) OPNS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 123
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Ala Ser Ser Ser leu
10 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 124
186 341 ( i ) Cl·HJOGTΓERYSTYfTA SSNN'τΈNCJI i (A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJU CZĄSTE^U: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) AUTY-SEN: NIE (v) RODZAJ FIOJGMNNTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: ENTE. NR ID.:'l24
Lys Tyr Gln Ser Ser Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 125 (i) C1UJOATTERYSTYΪKJ εΒΙ^^ΕΝΟ JI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJJ CZĄSTECZU: PEPTYD (iii) HIIDTNEYCANA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FRAGMENTU: WEiEIĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: EETW. NR ID.: 125
Ser Tyr Gln Ser Ser Lys Leu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 126 (i) CίUJOGT[1ERYSTYίKA SEiKWSNC JI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NNCI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIIOEEESCZNA: NIE
186 341 (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RRODA^A JRΑΑMEKTU: WEREATRANA (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOWIENIE 7 (D) INNE INFOUN^CkE: /zraCJEjk = (^^(^^ucyns /uwaga = „nienaturalna konfiguracja stereochemiczna aminokwasu (xi) OPIS SRTWRNCCI: SEKE. NR ID.: 126
Ser Tyr Gln Ser Ser Lys Leu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 127 (i) CΟAAAlTERA5SY5W JEKTEKAΟC:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) NIOOEE5CCZlA: NEE (iv) AATY-SEAS: NIE (v) RRODZA kRAAMEKTU: WERWATRANA (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 127
Asn Lys Ile Ser Tyr Tyr Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKERNΟCI NR ID.: 128 (i) CΟAAAlTERA5SYKK JERTEKCJCI (A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) NIOORE5CCZAA : HE (iv) AAT5-EEAS: NIE
186 341 99 (v) RODZAJ FFUGMENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 128
Asn Lys Ala Ser Tyr Gln Ser 1 5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 129 (i) CίUACJZΓERYSTYY3J SEEKiENC JI:
(Α) DŁUGOŚĆ;: 5 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZJJ CZĄSTECZHI: PEPTYD (iii) HHPOTETYYZNJ: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FIRJGMENEU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 129
Ser Tyr Gln Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O STKWTZCAN NR ID.: 130 (i) CCBJRJZΓERYSTYIZJ SEIZra;NCAH:
(A) DŁUGOŚĆ: 8 aminokwasów (B) TYi?: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGU: liniowa (ii) RODZJJ CZĄSTECZHI: PEPTYD (iii) HIPOTEETCZNJ: NIE (iv) (v) RODZAJ ΕΐυαΜΕΝΤϋ: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 130
Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ala
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 131 (i) CHACAKTERYSETKJ SEKWENCJI:
100
186 341 (A) ZŁUGOŚĆ: 8 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Ό) TOPOLOGIA: liniowa (ii) ROZZAJ' CZĄSTECZKI: PEPTYZ (iii) NIERNRYYAZGA : NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RaOHA kRAGMENTR: WENWCTRZAY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NO IZ.: 131
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Tyr Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR IZ.: 132 (i) CHHAAAARNOYERYA :SEKWENCJ:
(A) ZŁUGOŚĆ: 8 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) ROZZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYZ (iii) HIERNRYCAZJA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RaOHA kRAGMENTR: WENEĘTRZAY (Xi) OPIS SEKWENCJI: EEAE. NO IZ.: 132
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gln ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NO IZ.: 133 (i) CHAJAAARNRYERYA SENAENCJJ:
(J) ZŁUGOŚĆ: 6 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) ROZZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYZ (iii) HIERNRYYAZGA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE
186 341
101 (v) RODZAJ FIOJGΪMnNTU: WEEWIĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 133
Ser Tyr Gln Ser Ser Thr
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 134 (i) Cl·HGOJZTERYSTYPZJ SS^iK^E^i^CJI:
CA) DŁUGOŚĆ: 6 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZNI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) NIE (v) RODZAJ FIRJG1EENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 134
Ser Tyr Gln Ser Ser Leu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 135 (i) CίHGOJZTERYSTYPZJ SEJK/ENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 6 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZU CZĄSTECZNI: PEPTYD (iii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANITY-SEN:: NIE (v) RODZAJ FIR(3M^1NT^: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 135
Ser Tyr Gln Ser Ser Leu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 136
102
186 341 ( i) Cl·HAOA<TERYSTYϊKJ SEKWENCJI :
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) TTP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (Lii) HIIOTEEYCZNA: NIE (iv) AUTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FIRiGENTU: WEWNĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 136
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser Ala 1 5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 137 (i) dHARAKTERYSTYBK. SEΓKEENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) TTP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKĘ PEPTYD (iii) HIIOEEEYJZNA: NIE (iv) TUTY-SENS: NIE (v) RODZAJ FPA.GGENTU': WEΓEIĘTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 137
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Tyr Ser Ser 1 5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 138 (i) CJHJRA<TERYSTYBA SEΓKEENCII:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) TTP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKA PEPTYD (iii) HIIOTETTCZNA: NIE
186 341
103 (iv) ^ΝΤΥ-ΥΕΝο: NIE (v) RODZAJ FIRiGCffiNTU: WEt-WiETRZIN (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 138
Ala Asn Lys Ile Ser Tyr Tyr Ser Ala 1 5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 139 (i) CHAAoA\zΈRO'STYYΆ JSTWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 9 aminokwasów (B) Tn: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ (-ii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ANITY-SENS: NNE (v) RC^DAJ FFRAGMICTU: WETECĘRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 139
Ala Asn Lys Ala Ser Tyr Gln Ser Ala 1 5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 140 (i) C(HΑOAKCERYSTYTA JSTKEE^NC^,^^:
(A) DŁUGOŚĆ: 5 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) ROZΑAΑ CZĄSTECZKI: IEPEYD
(.ii) HIPOTETYCZNA: NIE (iv) ACEY-SΞNS: NIE (v) RODZAJ FIOGGΈNTU: WEWENTRZNY (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 140
Lys Tyr Gln Ser Ser
5
104
186 341 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ND.: 141 (i) CHAAOATENOSEEKT : ENKENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 5 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPEYZ (iii) NIOENESYAZJA : HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) BODDZA : RAJMENTU: SENWĘTUOAY (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOWIENIE 1 (D) INNE INFORMACJE: /znacznik = homoarginina (xi) OPIS SEKWENCJI: ENTW. NR ID.: 141
Xaa Tyr Gln Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 142 (i) CHAGRJTENOSEEKT :ENKENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 6 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI:
(iii) NIOEEESYAZJA: HE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) I^DDZA :FAJMENTU: SENWĘTEOAY (xi) OPIS SEKWENCJI: SNTE. NR ID.: 142
Lys Tyr Gln Ser Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 143 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
186 341
105 (A) DŁUGOŚĆ: 6 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIA: liniowa (ii) ZOZZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYZ (iii) NPERERYYCZNA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) ROO^A SRAGMENTR: kENEĘTRZAC (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) JMIEJSCOWIENIN 1 (Z) INNE INFORMACJE: /znacznik = homoarginina (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NO IZ.: 143
Xaa Tyr Gln Ser Ser Ser
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NO IZ.: 14 :
(i) CHAJAAARnOYERYA SEEAENCJJ:
(J) ZŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (Z) TOPOLOGIGs liniowa (ii) ROZZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYZ (iii) HIERERYYAZJA: NIE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RZOHA kRAGMMNTR: kENWĘTRZAC (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. CR IZ.: 144
Ser Tyr Gln Ser Ser Ser Leu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NO IZ.: 145 (i) CHAAAJARNOYERYA :SEAEE0pA:
(A) ZŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza
106
186 341 (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (Lii) HIPOTETCCZAA : NEE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAA k RRlMERZR: WEREZTRACZ (ix) CECHA:
(A) NACEA/TLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOW|RNIR 1 (D) INNE INFORNACOA: CJna cz=ln = l.tkr srginj.na (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKE. NR ID.: 145
Xaa Tyr Gln Ser Ser Ser Leu
5 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI NR ID.: 146 (i) ΟAAAATTERYETYTl SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) ILOŚĆ NICI: pojedyncza (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: PEPTYD (iii) HIPOTETY^H: NEE (iv) ANTY-SENS: NIE (v) RODZAJ klFAGMERZU: kWl^TR^^ (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: peptyd (B) UMIEJSCOWIENIE 7 (D) INNE IAAERNAFOA: CJnacz=ln = ikk=Jnnnae (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW. NR ID.: 146
Lys Tyr Gln Ser Ser Ser Leu
5
186 341
186 341
1: MetLysProAsn11el IePheVoILeuSerLeuLeuLeul IeLeuG 1 uLysGIηΑΙαΑΙα 21: VoIMetGIyGInLysG I yGIySerLysGI yArgLeuProSerG I uPheSerG I nPhePro 41: HisGIyGInLysGIyGInHisTyrSerGIyGInLysGIylysGInGInThrGIuSerLys 61: GlySerPheSerl leGlnTyrThrTyrHisVolAspAlaAsnAspHisAspGlnSerArg 81: LysSerGInGInTyrAspLeuAsnAlaLeuHisLysThrThrLysSerGInArgHisleu 101: GlyGlySerGInGInleuLeuHisAsnLysGInGluGlyArgAspHisAspLysSerLys 121: GIyHisPheHisArgVaIVo111 eHisHisLysG IyGIyLysAloHisArgGIyThrGIn CS#5
141: AsnPr oSerG I nAspG I nG I yAsnSerProSerG I ylysG I y 11 eSerSerG i nTyr | Ser 161: AsnThrGluGluArgleuTrpValHisGlyLeuSerLysGluGlnThrSerValSerGly 181: AIaGInLysGIyArgLysGInGIyGIySerGInSerSerTyrVaILeuGInThrGIuGIu 201: LeuValAlaAsnLysGlnGlnArgGluThrLysAsnSerHisGlnAsnLysGlyHisTyr 221: GlnAsnValValGluValArgGluGluHisSerSerLysValGlnThrSerLeuCysPro 241: Al oHi sG I nAspLysLeuG I nHi sG I ySerLysAsp I lePheSerThrGI nAspG luleu 186 341
261: LeuVoITyrAsnLysAsnGInHisGInThrLysAsnLeuAsnGInAspGInGInHisGIy CS#3
281: ArgLysAlaAsnLysIleSerTyrGInJSerSerSerThrGluGluArgArgLeuHisTyr CS#4
301: GIyGIuAsnGIyVaIGInLysAspVaISerGInSerSer11eTyrSer|GinThrGIuGI u 321: LysAlaGInGIyLysSerGInLysGInileThrlIeProSerG1nGIuGInGIuHisSer CS#1
341: GlnLysAlaAsnLysIleSerTyrGln|SerSerSerThrGluGluArgArgLeuHisTyr CSf2
361: GIyGIuAsnGIyVaIGlnLysAspVaISerGInArgSerIIeTyrSer|GInThrGIuLys 381: LeuVaIAloGIyLysSerG1 η11eGInAloProAsnProLysGInGIuProTrpHisGIy 401: GluAsnAloLysGlyGluSerGlyGInSerThrAsnArgGIuGInAspLeuLeuSerHis ~ 421: GluGInLysGlyArgHisGInHisGlySerHisGlyGlyLeuAsplIeVa11leiieGlu 441: GlnGluAspAspSerAspArgHisLeuAlaGInHisLeuAsnAsnAspArgAsnProLeu 461: PheThr FIG.Ib
186 341
Procent hydrolizy peptydu
Czas inkubacji (godziny)
Peptyd 0.5 1 2 3 4 20
1. SYOSSSTE ND 0 ND 0 ND 0
2. ISYOSSSTE ND 0 ND 0 ND 0
3. KISYOSSSTE ND 10 ND 30 ND 90
4. NKISYOSSSTE ND 30 ND 70 ND 100
5. NKISYOSSST ND 20 30 ND ND 100
6. ANKISYOSSSTE 15 25 ND ND 80 100
7. ANKISYOSSS 4 6 16 30 45 ND
8. NKISYOSSS 2 6 22 44 55 ND
9. ANKISYOSS 1 ND 12 ND 39 ND
10 GRKANKISYOS- 20 50 ND ND 90 100
SSTEERRLHYGEN
G
FIG.2
186 341
Peptyd Sekw.Nr.Id Speptydu rozszczepionego
po 4 godzinach przez
PSm York
SEMENOGELIN (463 ao) 100 (30 min)
GRKANKISYO-SSSTEERRLHYGENG 6 100 (2 godz.)
SOKANKISYO-SSSTEERRLHYGENG 67 100 (3 godz.)
ANKISYO-SSSTE 11 98
ISYO-SSST 68 0
NKISYO-SSST 10 62
NKISYO-SSSTE 3 90
KISYO-SSSTE 9 49
SYO-SSSTE 7 0 (3 godz.)
ISYO-SSSTE 8 0
NKISYO-SSS 17 55
ANKISYO-SSS 18 45
ANKISYO-SS 69 39
ANKISYO-SSSTE-amide 11 43
Ac-ANK ISYO-SSSTL 70 57
Ac-ANKISYO-SSSTE-amide 11 40
Ac-ANKISYO-SSSTL-omide 70 46
Ac-ANGISYO-SSSTE-amide 71 0
Ac-ANPISYO-SSSTE-amide 72 0
Ac-ANKISYO-SASTE-omide 73 66
Ac-ANKISYO-SSKTE-amide 74 80
Ac-ANKISYO-SSTE-amide 75 44
Ac-ANKI(dS)YO-SSSTE-amide 76 9
Ac-ANK(dI)SYO-SSSTE-amide 77 0
Ac-ANKISYO-SSOTE-omide 78 55
Ac-ANKISYO-SAKTE-amide 79 80
Ac-AN(dK) ISYO-SSSTE-ami de 80 3
Ac-ANKISYO-STE-omide 81 28
Ac-ANKIYO-SSTE-omide 82 0
Ac-ANKSYO-SSTE-om i de 83 10
Ac-ANKASYO-SASTE-omide 84 98
Ac-ANEISYO-SASTE-omide 85 10
Ac-NKISYO-SS-am i de 16 30
Ac-KISYO-SS-ami de 86 15
Ac-SYQ-SSTE-amide 87 65
Ac-SYO-SSTL-acid 88 83
Ac-ASYO-SSTE-amide 89 68
Ac-EISYO-SSSTE-amide 90 0
Ac-ANEISYO-SSSTE-amide 91 0
Ac-ANKISYY-SSSTE-amide 92 73
Ac-ANKISYY-SASTE-omide 93 91
FIG.3a
186 341
Peptyd Liczba-L % peptydu rozszczepionego
po 4 qodz. przez PSA York
Ac-ASYO-SSL- fcwas 94 71
Ac-ANSYO-SSSTE-amid 95 28
Ac-ASYO-SSSTE- dmid 96 64
Ac-SYO-SSSTE- amid 97 50
Ac-ANKASYO-SASC- amid 98 78
Ac-O-SSTE- amid 99 0
Ac-YO-SSTE- amid 100 0
Ac-SO-SSTE- amid 101 0
Ac-ANKISO-SSTE- amid 102 0
AC-AN(ORN) ISYO-SSTE-amid 103 34
Ac-S(3PAL)O~SSTE- amid 104 4
Ac-S(3.4-C12F)O-SSTE- amid 105 6
Ac-SKO-SSTE- amid 106 0
Ac-SYO-SSTL-ł«*as 88 81
Ac-SYQ-SSSL-l™ąs 107 98
(e-ACA)-YG-SSSL- amid 108 0
ANK (N-Me-1) SYO-SSTE- «**·<* 109 0
SYO-SSTE- amid 110 0
HO(CH2)2CO-YQ-SSTE- amid 111 0
Ac-SYK-SSTE- amid 112 5
Ac-SYY-SSTE- amid 113 93
Ac-SYO-SSL-nhnh2 114 32
Ac-SYO-SSL- kwas 115 72
DAP-YO-SSSL- amid 116 0
FIG.3b
186 341
Η
U
U (d fi >1 □
•H
-Q fi
M
O
U
-X
O
Q
X
O
O <i <t co cn <£ <t O
Q_ Q_ O O
5<
DOdd^ONT χο-ίοπιοχ osou^omAz
Stężenie μΗ
186 341
Koniugat doKsorubicyny Sekw.Nr.Id. % peptydu rozszczepionego
po 4 godzinach J*SA York
Ac-ANKISYQ-SSST-OOX (3’) 117 20 (lhjfopróbka, nie pozostć
Ac-ANKISYG-SSSTHX)X (3’) 70 87
Ac-ANKASYQ-SASTL-OOX (3‘) 118 NA
Ac-ANKASYQ-SASL-DOX (3’) 119 100 t3 godz.)
Ac-ANKASYO-SSSL-OOX (3‘) 120 100 (3 godz.)
Ac-ANKASYQ-SSL-OOX (3‘) 121 91
Ac-SYO-SST(dL)-OOX (3’) 122 17
Ac-SYQ-SSSL-OOX (3‘) 107 95 (częściowo rozpuszczali
Ac-ANKASYA-SSSL-DOX (3’) 123 0
Ac-KYG-SSSL-DOX (3’) 124 98 (częściowo rozpuszczali
Ac-SYQ-SSKL-OOX (3’ 125 88
Ac-SYO-SSK(dL)-OOX (3 > 126 87
FIG.5
186 341
-r- Φ N U N W N 0 M (Q i •N 0 • N τ) 0 ΓΟ r*. Ol o
d a tn
Ό \i
0 Oł Tf
ft Φ o
Φ d 2
a 0 a
•r| 2
dP a 3
1 Φ
N
0 (0
63. A
m £ •
N >1 N
oi N Ό
0 i o 04 oo m
Ί a tn cn m CT> co
Ό 0 Cf
> tD
-P Φ a
a d 0
φ 0 u
o •H 2
dP a
• Ό
H
•
P Oł Ol o.
2 Ol 04 O
« a
A Φ
w
i>
d
►
0
•H
X) ~r*~) rO rO
3 *-*
P X X X <*7
0 o o
W X 9 _J 2 X Q
3 cn cn cn cn
Ή CZł cn tn — *
Λ ά Λ cn cn
·>- >~ >— cn
ί§ cn <c ά
X >-
d c-AN tn 1
s 1 o o <c
<c <c
CO o
Lł_
186 341
OT
N o
N
r« o
LlDepartament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz. Cena 6,00 zł.

Claims (35)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Oligopeptyd, o długości od około 6 do około 100 aminokwasów, zawierający sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawaną i rozszczepianą sekwencją aminokwasów jest:
    a) AsnLysIleSerTyrGln | Ser SSekw . Nr Id. : 13),
    b) LysIleSerTyrGln | Ser (Sekw . Nr M. : 14),
    c) GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnXaaSerIleTyr | SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 15),
    d) GlyLysGlylleSerSerGlnTyr | SerAsnThrGluGluArgLeu (Sekw. Nr Id.: 2), gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym.
  2. 2. Oligopeptyd według zastrz. 1, w którym sekwencją aminokwasów jest:
    AsnLysIleSerTyrGln
    AsnLysIleSerTyrGln
    SerSer
    SerSerSer
    SSkw. . ΝγΜ. : 16), SSkwv .NrM:: 17), (Sekw. Nr Id.: 18),
    AlaAsnLysIleSerTyrGln | SerSerSer LysIleSerTyrGln | SerSerSerThrGlu (Sekw. Nr Id.: 19), GlyGluAsnGlyValGlnLysAspVaISsrGlnArgSsrIleTyr | SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 4), GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnSerSerIlsTyr | SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 5).
  3. 3. Oligopeptyd według zastrz. 1, w którym sekwencją aminokwasów jest:
    AsnLysIleSerTyrGln
    AsnLysIleSerTyrGln
    SerSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 10),
    SerSerSerThiGlu (Sekw. Nr Id.: 3),
    AlaAsnLysIlsSerTyrGln | SerSerSerThrGlu (Sekw. Nr Id.: 11), GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSsrGlnArgSsrIleTyr | SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 4).
  4. 4. Oligopeptyd według zastrz. 1, w którym sekwencją aminokwasów jest: GlyArgLysAlaAsnLysIlsSerTyGln | SsrSerSerThrGluGluArgArgLeuHisTyrGlyGlu
    AsnGly (Sekw. Nr Id.: 6).
  5. 5. Oligopeptyd według zastrz. 1, wybrany z:
    AsnArgIleSerTyrGln |Ser (Sekw. Nr Id.: 21)
    AsnLysValSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.: 22)
    AsnLysMetSerTyrGln
    AsnLysLeuSerTyrGln
    SerSer (Sekw. Nr Id.: 23) _ , SerSer (Sekw. Nr Id.: 24)
    AsnLysIleThrTyrGln | SerSerSer (Sekw. Nr Id.: 25) AsnLysIleSerPheGln | SerSerSer (Sekw. Nr Id.: 26) AsnLysIleSeiTrpGln | SerSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 27) AsnLysIleSerTyrAsn | SerSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 28)
    AsnLysIleSerTyrGln
    AsnLysIleSerTyrGln
    GlnLysIleSerTyrGln
    ThrSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 29) Ser (Sekw. Nr Id.: 30)
    SerSer (Sekw. Nr Id.: 31)
    AsnArglleThrTyrGln | SerSerSer (Sekw. Nr Id.: 32)
    186 341
    AsnArglleSerPheGln
    AsnArglleSerTrpGln
    AsnArglleSerTyrGIn
    AsnLysIleThrTyrGln
    AsnLysLeuS erT yrGln
    GlnLysLeuSerTyrGln
    AsnArgLeuSerTyrGln
    AsnLysV alSerPheGln
    AsnArgValSerTrpGln
    SerSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 33)
    SerSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 35)
    ThrSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 36)
    ThrSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 37)
    ThrSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 38)
    SerSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 39)
    ThrSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 40)
    SerSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 41)
    SerSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 42)
    GlnLysValSerTyrGln | SerSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 43)
    GlnLysIleSerTyrGln | ThrSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 34) lub AsnLysIleSerTyrGln | SerSerSerThr (Sekw. Nr Id.: 44).
  6. 6. Oligopeptyd według zastrz. 1, którym jest:
    AlaAsnLysIleSerTyrGln | SerSerSerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 11)
    Ac-AlaAsnLysIleSerTyrGln | SerSerSerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 11)
    Ac-AsnLysIleSerTyrGln | SerSer-amid (Sekw. Nr Id.: 16).
  7. 7. Oligopeptyd według zastrz. 1, w którym sekwencją aminokwasów jest:
    AsnLysIleSerTyrGln | SerAla (Sekw. Nr- It^.: 130),
    AlaAsnLysIleSerTyrGln | SerAla (Sekw. Nr- Id.. 136).
  8. 8. Oligopeptyd, o długości od około 6 do około 100 aminokwasów, zawierający sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawaną i rozszczepianą sekwencją aminokwasów jest:
    e) AsnLysIleSerTyrTyr | Ser (Sekw. Nit Id.. 127)
    f) AsnLysAlaSerTyrGln ] Ser (Sekw. Nr Id.. 122), lub
    g) SerTyrGln | SerSer (Sekw. Nr Id.. 129), gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym.
  9. 9. Oligopeptyd według zastrz. 8, w którym sekwencją aminokwasów jest:
    AlaSerTyrGln | SerSerLeu AlaAsnLysIleSerTyrTyr | Ser AlaAsnLysAlaSerTyrGln | Ser
    SerTyrGln
    SerTyrGln
    SerTyrGln
    SerSerThr
    SerSerSer
    SerSerLeu (Se!kv. Nr Id.. 94), (Sebw.NrId.. 131), (Setaw Nr Id.. 132), (Sekw. Nr Id.. 133), (Se!kv. Nr Id.. 134), (Sełkw.NrId.. 135),
  10. 10. Oligopeptyd według zastrz. 8, którym jest:
    Ac-AlaAsnLysneSerTyrGln Ac-AlaAsnLysneSerTyrGln Ac-AlaAsnLysIleSerT yrGln Ac-AlaAsnLysIleSerTyrGln Ac-AlaAsnLysIleS erT yrGln Ac-Al aAsnLysIleS erT yrGln Ac-AlaAsnLysIleSerTyrGln Ac-AlaAsnLysIleSerTyrGln eerSerSerThrLeu (Sekw. Nr Id.: 70) SerSerSerThrLeu-amid (Sekw. Nr Id.: 70) SerAlaSerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 73) SerSerLysThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 74) SerSerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 75) SerSerGlnThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 78) SerAlaLysThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 79) _ _ SerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 81)
    Ac-AlaAsnLysSerTyrGln | SerSerThrGlu-armd (Sekw. Nr Id.: 82) Ac-AlaAsnLysAlaSerTyrGln | SerAlaSerThiGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 84) Ac-AlaAsnGluneSerTyrGln | SerAlaSerThiGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 85) Ac-LysIleSerTyrGln | SerSer-amid (Sekw. Nr Id.: 86)
    186 341
    Ac-SerTyrGln | SerSerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 87) Ac-AlaSerTyrGln l SerSerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 89)
    Ac-AlaAsnLysIleSerTyrTyr
    Ac-AlaAsnLysIleSerTyrTyr
    SerSerSerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 92) SerAlaSerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 93) Ac-AlaSerTyrGln | SerSerLeu-amid (Sekw. Nr Id.: 94)
    Ac-AlaAsnSerTyrGln | SerSerSerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 95)
    Ac-AlaSerTyrGln | SerSerSerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 96)
    Ac-SerTyrGln | SerSerSerThrGlu-amid (Sekw. Nr Id.: 97) lub
    Ac-AlaAsnLysAlaSerTyrGln | SerAlaSerCys-amid (Sekw. Nr Id.: 98).
  11. 11. Oligopeptyd, o długości od około 6 do około 100 aminokwasów,zawierający sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawaną i rozszczepianą, sekwencją aminokwasów jest:
    h) LysTyrGln | SerSer (Sełcw. Nr Id.: 140); lub
    i) hArgTyrGln | SerSer (Selkw Nr Id.: 141), gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym.
  12. 12. Oligopeptyd według zastrz. 11, w którym sekwencją aminokwasów jest:
    LysTyrGln l SerSerSer (Selkw Nr Id.: 142), lub hArgTyrGln | SerSerSer (Sekw. Nr Id.: 143).
  13. 13. Sposób oznaczania aktywności proteolitycznej wolnego antygenu swoistego dla prostaty w próbce, znamienny tym, że obejmuje etapy:
    a) reakcji substratu, będącego oligopeptydem o długości od około 6 do około 100 aminokwasów, zawierającym sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawaną i rozszczepianą sekwencją aminokwasów jest:
    a) AsnLysIleSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.: 13),
    b) LysIleSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.: 14),
    c) GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlnXaaSerIleTyr | SerGlnThrGlu (Sekw.Nr Id.: 15),
    d) GlyLysGlylleSerSerGlnTyr | SerAsnThrGluGluArgLeu (Sekw. Nr Id.: 2), lub gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym, z próbką; i
    b) detekcji czy substrat został rozszczepiony.
  14. 14. Sposób według zastrz. 13, znamienny tym, że etap detekcji czy substrat został rozszczepiony obejmuje analizę mieszaniny testowej za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej.
  15. 15. Sposób oznaczania aktywności proteolitycznej wolnego antygenu swoistego dla prostaty w próbce, znamienny tym, że obejmuje etapy:
    a) reakcji substratu, będącego oligopeptydem o długości od około 6 do około 100 aminokwasów, zawierającym sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawaną i rozszczepianą sekwencją aminokwasów jest:
    e) AsnLysIleSerTyrTyr | Ser (Sekw. Nr Id.: 122)
    f) AsnLysAlaSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.: 128), lub
    g) SerTyrGln | SerSer (Sekw. Nr Id.: 129), lub gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym, z próbką; i
    b) detekcji czy substrat został rozszczepiony.
    186 341
  16. 16. Sposób według zastrz. 15, znamienny tym, że etap detekcji czy substrat został rozszczepiony obejmuje analizę mieszaniny testowej za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej.
  17. 17. Sposób oznaczania aktywności proteolitycznej wolnego antygenu swoistego dla prostaty w próbce, znamienny tym, że obejmuje etapy:
    a) reakcji substratu, będącego oligopeptydem o długości od około 6 dookoło 100 aminokwasów, zawierającym sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawaną i rozszczepianą sekwencją aminokwasów jest:
    h) LysTyrGln | SerSer
    i) hArgTyrGln SerSer (Sekw. Nr Id.: 140); lub (Sekw. Nr Id.: 141), gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym, z próbką; i
    b) detekcji czy substrat został rozszczepiony.
  18. 18. Sposób według zastrz. 17, znamienny tym, że etap detekcji czy substrat został rozszczepiony obejmuje analizę mieszaniny testowej za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej.
  19. 19. Sposób identyfikacji związków, hamujących aktywność proteolityczną antygenu swoistego dla prostaty, znamienny tym, że obejmuje:
    a) reakcję substratu, będącego oligopeptydem o długości od około 6 do około 100 aminokwasów, zawierającym sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawaną i rozszczepianą sekwencją aminokwasów jest:
    a) AsnLysIleSerTyrGln | Ser (Sekw. Ni- Id.: 13),
    b) LysIleSerTyrGln | Ser (Selkw. Nr Id.: 14),
    c) GlyGluAsnGlyValGlnLysAspValSerGlhXaaSerIleTyr | SerGlnThrGlu (Sekw.Nr Id.: 15),
    d) GlyLysGlylleSerSerGlnTyr | SerAsnThrGluGluArgLeu (Sekw. Nr Id.: 2), lub gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym, z wolnym antygenem swoistym dla prostaty w obecności testowanego związku; i
    b) detekcję czy substrat został rozszczepiony, przy czym zdolność testowanego związku do hamowania aktywności proteolitycznej antygenu swoistego dla prostaty jest wskazywana poprzez spadek rozszczepienia substratu w porównaniu z rozszczepieniem substratu w nieobecności testowanego związku.
  20. 20. Sposób według zastrz. 19, znamienny tym, że etap detekcji czy substrat został rozszczepiony obejmuje analizę mieszaniny testowanej za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej.
  21. 21. Sposób identyfikacji związków, hamujących aktywność proteolityczną antygenu swoistego dla prostaty, znamienny tym, że obejmuje:
    a) reakcję substratu, będącego oligopeptydem o długości od około 6 do około 100 aminokwasów, zawierającym sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawaną i rozszczepianą sekwencją aminokwasów jest:
    e) AsnLysIleSerTyrTyr | Ser
    f) AsnLysAlaSerTyrGln | Ser
    g) SerTyrGln | SerSer (Sekw. Nr Id: 122) (Sekw. Nr Id: 128), lub (Sekw. Nr Id: 129), gdzie hArg oznacza, homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym, z wolnym antygenem swoistym dla prostaty w obecności testowanego związku; i
    b) detekcję etą substrat został rozszczepiony, przy czyni zdolność testowanego związku do hcmowcnic aktywności prorąolitysnnąj cntygąnu swoistego dlc prostoty jest wskazywane poprzez spcdek ronsćsćąpiąnic substrctu w porówncniu z roćsćsnąpiąniąm substrctu w niąobąsnośsi rąsrowenągo związku.
  22. 22. Sposób wądług zcstrz. 21, znamienny tym, żą etcp dąteksji szy substrct zostcł rozszyząpionn obąjmują cnclizę miąsneninn rąsrowcnąj zc pomocą wnsokosprcwnąj shromctogrcfii siąynowej.
  23. 23. Sposób idąntyfikcsji związków, hcmująsnsh cktywność prorąolitnszną cntygąnu swoistągo dlc prostoty, znamienny tym, żą obejmują:
    c) recksję substrctu, będąsego oligopeptydem o długośsi od około 6 do około 100 cminokwcsów, zawiąrąjąyam sekwensję cminokwcsów ronpozncweną i selektywnie proteolitysznie ronszszepieltą przez wolnn cntygen swoisty dlc prostoty, w którnm rozpozncwcną i rpćsćsćepianą sekwensją cminpkwesów jest:
    h) LnsTnrGln | SerSer (Sekw. Nr Id.: 140); lub
    i) hArgTnrGln | SerSer (Sekw. Nr Id.: 141), gdzie hArg onncsne hpmoergininę, c Xcc jest dowolnnm cminokwcsem μΙ^^ζο, z wolnam cntygenem swoistym dlc prostoty w obeynośyi restowcnego związku; i
    b) deteksję sza substrct zostcł ronszyzepipnn, przy szam zdolność testowenego związku do hcmowcnic ektywnośyi prpteolityynnej entygenu swoistego dlc prostoty jest wskenawenc poprzez spcdek eoćszsćepienic substrctu w porówncniu z rozszyzepieniem substrctu w nieobeynpśyi testowcnego związku.
  24. 24. Sposób według zcstn. 23, znamienny tym, że etcp deteksji szy substrct zostcł rozsnynepionc obejmuje cnclizę mieszcniny testowcnej zc pomosą wysokosprcwnej shromctografii sieszowej.
  25. 25 Koniugct użyreszny do leszenic rckc prostoty, zcwiercjąsy środek satotpksnsćna wybrcny z doksorubisyny i jej sytpksaynnysh poshodnysh prnałąsnony poprzez wiązanie kowclensajne lub łąsznik shemiszny do oligopeptydu o długośsi od około 6 do około 100 cminokwcsów, zcwiercjąsego sekwensję eminokwcsów rozpozncwcną i selektywnie proteolitysznie rozszszepicną przez wolny cntygen swoisty dlc prostoty, w którym ronpozncweną i rozszsćepianą sekwensją cminokwcsów jest:
    c) AsnLysneSerTnrGln | Ser (Sekw. Nr Id.: 13),
    b) LyslleSerTyrGln | Ser (Sekw. Nr Id.: 14),
    s) GlyGluAsnGlnVelGlnLysAspVelSerGlnXecSerIleTcr | SerGlnThrGlu (Sekw. Nr Id.: 15),
    d) GlcLysGtylleSerSerGlnTye | SeeAsnThrGluGluAegLeu (Sekw. Nr Id.: 2), gdzie hArg ozncsne homocrgininę, c Xee jest dowolnym cminokwcsem ncturclnym.
  26. 26. K^-^tiiug^^t według zcstlzZ: 25 o wzorn I:
    I
    186 341 w którym:
    XLjest nieobecny lub oznacza aminokwas wybrany spośród:
    a) fenyloalaniny,
    b) leucyny
    c) waliny,
    d) izoleucyny,
    e) (2-naftylo)alaniny,
    f) cykloheksyloalaniny,
    g) difenyloalaniny,
    h) norwaliny, i
    j) norleucyny;
    R oznacza wodór lub -(C=O)R'; a
    R1 oznacza C,-C6alkil lub aryl.
  27. 27. Koniugat według zastrz. 26, w którym:
    XLjest nieobecny lub oznacza aminokwas wybrany spośród:
    a) leucyny,
    b) izoleucyny,
    c) norleucyny, i
    d) waliny; i
    R oznacza acetyl, piwaloil lub benzoil.
  28. 28. Koniugat według zastrz. 25, wybrany z:
    gdzie X oznacza:
    H2N—AsnLysIleS erT yrGlnS er—C
    H2N—AsnLysIleSerTyrGlnSerSer—CH2N—AsnLysIleSerT yrGlnSerSerSer—C—
    H2N—AsnLysIleSerTyrGlnSerSerSerThr—C— (Sekw. Nr Id.: 13) (Sekw. Nr Id.: 166 (Sekw. Nr Id.: 17) (Sekw. Nr Id.: 10) i
    186 34
    H2N—AsnLysIleSerTyrGlnSerSereerThrGlu—C—
    H2N—AlaAsnLysIleSerTyrGlnSerSerSerThrGlu—C(Sekw. Nr Id.: 3) (Sekw.Nr Id.: 11)
  29. 29. Koniugat użyteczny do leczenia raka prostaty, zawierający środek cytotoksyczny wybrany z doksorubicyny i jej cytoksycznych pochodnych przyłączony poprzez wiązanie kowalencyjne lub łącznik chemiczny do oligopeptydu o długości od około 6 do około 100 aminokwasów, zawierającego sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawaną i rozszczepianą sekwem^cią aminokwasów jest:
    e) AsnLysCleeerTyrTyr | Ser SSekw. Nr Id. : 1277)
    f) AsnLysAlaSerTyrGln | Ser SSelw. i Nr dł: : 128,, lub
    g) SerTyrGln | SerSer ee>ekw . Nr Μ.: 129,, gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym.
  30. 30. Koniugat według zastrz. 29 o wzorze I:
    w którym:
    XLjest nieobecny lub oznacza aminokwas wybrany spośród:
    a) fenyloalaniny,
    b) leucyny
    c) waliny,
    d) izoleucyny,
    e) (2-naftylo)alaniny,
    f) cykloheksyloalaniny,
    g) difenyloalaniny,
    h) norwaliny, i
    j) norleucyny;
    R oznacza wodór lub -(C=O)R'; a
    R1 oznacza C,-C6alkil lub aryl.
  31. 31. Koniugat według zusIrz. 30, w którym:
    XL jest nieobecny lub oznacza aminokwas wybrany spośród: z) leucyny,
    b) izoleucyny,
    c) norleucyny, i
    d) waliny; i
    R oznacza acetyl, piwaloil lub benzoil.
    186 341
  32. 32. Koniugat według zastrz. 30, wybrany z:
    gdzie X oznacza:
    AcHN — AlaAsnLysIleS^r^TyrG^I^^S^i^S^^i^S^^r^Tłr-C —
    II
    AcHN — AlaAsnLysIleSerTyrGInSerSerSerThrLeu— C — (Sekw. Nr Id.: 70) (Sekw. Nr W.: 117)
    AcHN — AlaAsnLy^sA^l^aS^i^Tjr^G^ta^S^^i^A^l^aS^^Ił^L^^u— C — (Sekw. Nr Id.: 118)
    AcHN — AlaAsnLysAlaSerTyrGlnSsrAlaSerLeu — C
    AcHN — AlaAsnLysAlaSerTyrGlnSsrSerSerLsu — C ϋ (Sekw. Nr Id.: 119) (Sekw. Nr Id.: 120) ii
    AcHN—LysT yrGlnS erSerS erLeu-C(Sekw. Nr Id.: 124)
    186 341
  33. 34. Koniugat użyteczny do leczenia raka prostaty, zawierający środek cytotoksyczny wybrany z doksorubicyny i jej cytoksycznych pochodnych przyłączony poprzez wiązanie kowalencyjne lub łącznik chemiczny do oligopeptydu o długości od około 6 do około 100 aminokwasów, zawierającego sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, w którym rozpoznawaną i rozszczepianą sekwencją aminokwasów jest:
    h) LysTyrGln | SerSer (Seew. Nr Id.: 144)) lub
    i) hArgTyrGln | SerSer (Sekw. Ikr Id.: Ml) , gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem naturalnym.
  34. 35. Koniugat według zastrz. 34 o wzorze I:
    w którym:
    Xl jest nieobecny lub oznacza aminokwas wybrany spośród:
    a) fenyloalaniny,
    b) leucyny,
    c) waliny,
    d) izoleucyny,
    e) (2-naftylo)alaniny,
    f) cykloheksyloalaniny,
    g) difenyloalaniny,
    h) norwaliny, i
    j) norleucyny;
    R oznacza wodór lub -(C=O)R4 a Ri oznacza Ci-C6alkil lub aryl.
  35. 36. Koniugat wetiług wasin/. 3a,w którym oligopeptydjest oligomerem, który zawiera sekwencję aminokwasów wybraną z:
    hAegTorGln | SerSer (eokw. Nr Id.: 141), gdzie hArg oznacza homoargininę, a Xaa jest dowolnym aminokwasem nuturalnom;
    XLjest nieobecny lub oznacza aminokwas wybrany spośród:
    a) laucyry,
    b) izola^ony,
    c) rprlebnyπy, i
    d) walmy; i
    R oznacza, acetyl, p^atoil lub benzoil.
    186 341 ł-^OH
    AcHN—SerTyrGlnSerSerSei — _c~ i
    AcHN—hArgTyrGlnSerSerSerLeu—C— lub
    AcHN—LysTyrGlnSerSerNle—C— (Sekw. Nr Id.: 144) (Sekw.Nr Id. : 145) (Sekw. Nr Id.: 146)
    Niniejszy wynalazek dotyczy nowych oligopeptydów, zawierających sekwencję aminokwasów rozpoznawaną i selektywnie proteolitycznie rozszczepianą przez wolny antygen swoisty dla prostaty, sposobu oznaczania aktywności proteolitycznej wolnego antygenu swoistego dla prostaty w próbce, sposobu identyfikacji związków, hamujących aktywność proteolityczną antygenu swoistego dla prostaty, w których to sposobach wykorzystuje się nowe oligopeptydy, oraz koniugatów nowych oligopeptydów z doksorubicyną i jej cytotoksycznymi pochodnymi, użytecznych do leczenia raka prostaty.
    Oczekuje się, że w roku 1994 rak gruczołu prostaty zostanie zdiagnozowany u 200000 mężczyzn w Stanach Zjednoczonych, a 38000 mężczyzn umrze na tę chorobę (patrz M.B. Gamick, The Dilemmas of Prostate Cancer, Scientific American, Kwiecień: 72-81, 1994). Tak więc rak prostaty jest najczęściej diagnozowaną złośliwą chorobą nowotworową (poza rakami skóry) u mężczyzn w USA i drugą z głównych przyczyn śmierci z powodu raka (poza rakiem płuc) w tej grupie.
    Antygen swoisty dla prostaty (prostate specific antigen- PSA) jest glikoproteiną o pojedynczym łańcuchu o masie cząsteczkowej 33 kDa, wytwarzaną prawie wyłącznie przez nabłonek prostaty ludzkiej i występującą w ludzkim płynie nasiennym w poziomach od 0,5 do 2,0 mg/ml (Nadji, M., Taber, S.Z., Castro, A. i in., (1981), Cancer 48:1229; Papsidero, L., Kuruiyama, M., Wang, M., i in., (1981), JNCI 66:37; Qui, S.D., Young, C.Y.F., Bihartz, D.L., i tn., (1990), J. Urol. 144:1550; Wang, M.C., Valenzuela, L.A., Murphy, G.P., i in., (1979), Invest. Urol. 17:159). Pojedyncza jednostka węglowodanowa jest przyłączona do reszty aspa12
    186 341 raginowej numer 4) i odpowiada za 2 do ) kDa łącznej masy cząsteczkowej. PSA jest proteazą o specyficzności chymotrypsyno-podobnej (Chris-tensson, A., Laurell, C.B., Lilja, H. (1990) Eur. J. Biochem 194:755-763). Wykazano, że głównie PSA jest odpowiedzialny za rozpuszczanie struktury żelowej, tworzącej się podczas ejakulacji poprzez proteolizę najważniejszych białek w żelu utrzymującym spermę, semenogeliny I i semenogeliny II oraz fibronektyny (Lilja, H. (1985). J. Clin. Invest 76:1899; Lilja, H., Oldbring, J., Rannevik, G., i in., (1987), J. Clin. Invest. 80:281; McGee, R.S., Herr, J.C. (1988). Biol. Reprod. 39:499). Przebiegająca z udziałem PSA proteoliza białek tworzących żel generuje kilka rozpuszczalnych fragmentów semenogeliny I i semenogeliny II i rozpuszczalne fragmenty fibronektyny z jednoczesnym upłynnieniem ejakulatu i uwolnieniem progresywnie ruchomych plemników (Lilja, H., Laurell, C.B. (1984), Scand. J. Clin. Lab. Invest. 44:447; McGee, R.S., Herr, J.C., (1987), Biol. Reprod. 37:431). Ponadto PSA może proteolitycznie degradować IGFBP-3 (białko 3 wiążące insulino-podobny czynnik wzrostu), umożliwiając IGF specyficzne stymulowanie wzrostu komórek wydzielających PSA (Cohen i in., (1992) J. Clin.Endo. & Meta 75:1046-1053).
    PSA skompleksowany z alfa-1 antychymotrypsyną jest przeważającą formą cząsteczkową PSA z osocza i może odpowiadać za do 95% PSA wykrywanego w osoczu (Christensson, A., Bjork, T., Nilsson, O., i in., (1993) J. Uroi. 150:100-105; Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991) Clin. Chem. 37:1618-1625; Stenman, U.H., Leinoven, J., Alfthan, H., i in. (1991) Cancer Res. 51:222-226). Tkanka prostaty (tkanka normalna, łagodna przerostowa lub złośliwa) uwalnia głównie dojrzałą, enzymatycznie aktywną formę PSA, jako że forma ta jest wymagana do tworzenia kompleksu z alfa-1 antychymotrypsyną (Mast, A.E., Enghild, J.J., Pizzo, S.V., i in. (1991) Biochemistry 30:1723-1730; Perlmutter, D.H., Glover, G.J., Rivetna, M., i in. (1990) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87:3753-3757). Zatem uważa się, że PSA jest przetwarzany w mikrootoczeniu wydzielających PSA komórek prostaty i wydzielany w swojej dojrzałej i aktywnej enzymatycznie formie, nie skompleksowanej z żadną z cząsteczek hamujących. PSA tworzy także stabilne kompleksy z alfa-2-makroglobubną, ale ponieważ skutkiem tego jest okapsułkowanie PSA i całkowita utrata epitopów PSA, znaczenie tego kompleksu in vivo nie jest jasne. Wolna, nieskompleksowana forma PSA stanowi główną frakcję PSA w osoczu (Christensson, A., Bjork, T., Nilsson, O. i in. (1993) J. Uroi. 150:100105; Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991) Clin. Chem. 37:1618-1625). Wielkość tej formy PSA z osocza jest podobna do wielkości PSA z płynu nasiennego (Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991) Clin. Chem. 37:1618-1625), ale nie jest dotychczas wiadomo, czy wolna forma PSA z osocza jest proenzymem, rozszczepioną wewnętrznie nieaktywną formą dojrzałego PSA czy też PSA wykazującym aktywność enzymatyczną. Jednakże wydaje się nieprawdopodobne, aby wolna forma PSA z osocza wykazywała aktywność enzymatyczną ponieważ w osoczu występuje znaczny nadmiar (100 do 1000-krotny) nieprzereagowanej alfa-1 antychymotrypsyny jak również alfa-2 makroglobuliny w porównaniu z wykrywanymi w osoczu poziomami wolnej formy PSA o wielkości 33 kDa (Christensson, A., Bjork, T., Nilsson, O. i in. (1993) J.Urol. 150:100-105; Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991) Clin. Chem. 37:1618-1625).
    Pomiary PSA w osoczu są użyteczne dla monitorowania leczenia gruczolakoraka prostaty (Duffy, M.S. (1989) Ann. Clin. Biochem. 26:379-387; Brawer, M. K. i Lange, P.H. (1989) Uroi. Suppl. 5:11-16; Hara, M. i Kimura, H. (1989) J. Lab. Clin. Med. 113:541-548), chociaż donoszono także o ponadnormalnych stężeniach PSA w osoczu w łagodnym przeroście prostaty i w następstwie chirurgicznego urazu prostaty (Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991) Clin. Chem. 37:1618-1625). Wiadomo jest także, że przerzuty raka prostaty wydzielają reaktywne immunologicznie PSA, ponieważ PSA jest wykrywalne w wysokich stężeniach u pacjentów po wycięciu prostaty z rozległymi przerzutami raka prostaty (Ford,
    186 341
    T.F., Butcher, D.N., Masters, R.W., i in. (1985) Brit. J. Urology 57:50-55). Zatem związek cytotoksyczny, który mógłby być aktywowany przez proteolityczną aktywność PSA powinien być specyficzny w stosunku do komórek prostaty, jak również specyficzny dla wydzielających PSA przerzutów raka prostaty.
    Tak więc celem wynalazku jest dostarczenie nowych oligopeptydów, które są selektywnie enzymatycznie rozszczepiane przez aktywny wolny antygen swoisty dla prostaty (PSA).
    Celem wynalazku jest także dostarczenie testu ilościowego do aktywnego enzymatycznie PSA, zawierającego te nowe oligopeptydy.
    Następnie celem wynalazku jest dostarczenie nowej kompozycji przeciwnowotworowej, użytecznej w leczeniu raka prostaty, która zawiera te nowe oligopeptydy w połączeniu ze środkiem cytotoksycznym.
    Podsumowanie wynalazku
    Zidentyfikowano kilka punktów rozszczepienia, w których semsnogelina I jest selektywnie rozszczepiana proteolitycznie przez wolny PSA. Opisano oligopeptydy, które zawierają sekwencje aminokwasów, rozpoznawane i rozszczepiane proteolitycznie przez wolny antygen swoisty dla prostaty (PSA). Takie oligopeptydy są użyteczne w testach, które mogą oznaczać aktywność proteazy wolnego PSA in vitro i in vivo. Ponadto oligopeptydy takie mogą być włączone do środków terapeutycznych, stanowiących koniugaty takich oligopeptydów i znanych środków cytotoksycznych i użytecznych w leczeniu raka prostaty.
    Krótki opis Figur rysunku
    FIGURY 1a i 1b: Pierwszorzędowa sekwencja aminokwasów semenogeliny I:
    Przedstawiono pisrwszorzędową sekwencję aminokwasów semenogeliny I (Sekw. Nr Id.: 1). Pokazano miejsca rozszczepienia proteolitycznego przez PSA („CS”) (ponumerowane w kolejności względnego powinowactwa miejsca w stosunku do hydrolizy przez PSA), a fragmenty białka ponumerowano kolejno poczynając od końca aminowego.
    FIGURA 2: Powinowactwo oligopeptydów syntetycznych w stosunku do rozszczepienia:
    Sporządzono zagnieżdżony zestaw oligopeptydów syntetycznych i trawiono oligopeptydy przez różne czasy aktywnym enzymatycznie wolnym PSA. Rezultaty przedstawiono w tabeli 2.
    ND = nie oznaczono. Zastosowano jednoliterowy kod dla aminokwasów: A=Ala, E=Glu, G=Gly, H=His, I=I1s, K=Lys, L=Leu, N=Asn, Q=Gln, R=Arg, S=Ser, T=Thr, Y=Tyr.
    FIGURY 3a i 3b: Powinowactwo oligopeptydów syntetycznych w stosunku do rozszczepienia:
    Sporządzono oligopeptydy syntetyczne i trawiono je aktywnym enzymatycznie wolnym PSA przez cztery (4) godziny. Podano procent oligopeptydu rozszczepionego w tym okresie czasu. Rezultaty przedstawiono w tabeli 4.
    FIGURA 4: Dane o cytotoksyczności nierozszczepialnych koniugatów oligopeptyddoksorubicyna
    Dane z tej figury pokazują porównawczo cytotoksyczność doksorubicyny i koniugatu doksorubicyny kowalencyjnie związanej z oligopsptydsm (związek 12d), który nie zawiera miejsca proteolitycznego rozszczepienia wolnym PSA. IC50 dla doksorubicyny wynosi 0,3 μΜ, natomiast doksorubicyna modyfikowana acstylowanym oligopsptydsm ma IC50 zmniejszone ponad 300-krotnis. Koniugat ten nis ma wykrywalnego za pomocą HPLC zanieczyszczenia nismodyfikowaną doksorubicyną. Sam oligopeptyd nie ma wykrywalnej aktywności zabijającej komórki.
    FIGURA 5: Powinowactwo oligopeptydów sprzężonych z doksorubicyną na rozszczepienie wolnym PSA in vitro.
    186 341
    Sporządzono koniugaty olisopeptyd-doysorubicyna i trawiono koniugaty enzymatycznie aktywnym wolnym PSA przez cztery (4) godziny. Podano procent koniugatu rozszczepionego enzymatycznie do oligopeptydu w tym okresie czasu. Wyniki przedstawiono w tabeli 5.
    FIGURA 6: Powinowactwo oligopeptydów sprzężonych z doksorubicyną na rozszczepienie w kondycjonow^an^ej pożywce komórkowej.
    Koniugaty oligopeptyd-doksorubicyna poddano reakcji przez cztery (4) godziny z pożywką do hodowli komórkowych, którą kondycjonowano przez ekspozycję na komórki LNCaP (o których wiadomo, że wydzielają wolny PSA) lub komórki DuPRO (które nie wydzielają wolnego PSA). Podano procent koniugatu rozszczepionego w tym czasie do oligopeptydu. Wyniki przedstawiono w tabeli 6.
    FIGURA 7: Dane o cytotoksyczności rozszczepialnych koniugatów oligopeptyddoksorubicyna.
    Dane z tabeli 7 przedstawiają cytotoksyczność (jako IC50) koniugatów doksorubicyny związanych kowalencyjnie z oligopeptydem, który zawiera miejsce rozszczepienia proteolitycznego wolnym PSA w stosunku do linii komórkowej raka wydzielającego wolny PSA. Dla wybranych koniugatów pokazano także cytotoksyczność koniugatu w stosunku do linii komórkowej (DuPRO), nie wydzielającej wolnego PSA.
PL95317872A 1994-06-28 1995-06-07 Oligopeptyd, sposób oznaczania aktywności proteolitycznej wolnego antygenu swoistego dla prostaty wpróbce, sposób identyfikacji związków, hamującychaktywność proteolityczną antygenu swoistego dla prostaty, oraz koniugat użyteczny do leczenia raka prostaty PL186341B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/267,092 US5599686A (en) 1994-06-28 1994-06-28 Peptides
US40483395A 1995-03-15 1995-03-15
PCT/US1995/008156 WO1996000503A1 (en) 1994-06-28 1995-06-07 Novel peptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL317872A1 PL317872A1 (en) 1997-04-28
PL186341B1 true PL186341B1 (pl) 2003-12-31

Family

ID=26952210

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL95317872A PL186341B1 (pl) 1994-06-28 1995-06-07 Oligopeptyd, sposób oznaczania aktywności proteolitycznej wolnego antygenu swoistego dla prostaty wpróbce, sposób identyfikacji związków, hamującychaktywność proteolityczną antygenu swoistego dla prostaty, oraz koniugat użyteczny do leczenia raka prostaty

Country Status (26)

Country Link
US (1) US6143864A (pl)
EP (1) EP0771209B1 (pl)
JP (1) JPH10502619A (pl)
KR (1) KR100379351B1 (pl)
CN (1) CN1156964A (pl)
AT (1) ATE223224T1 (pl)
AU (1) AU689934B2 (pl)
BG (1) BG63453B1 (pl)
BR (1) BR9508151A (pl)
CA (1) CA2192957A1 (pl)
CZ (1) CZ381096A3 (pl)
DE (1) DE69528064T2 (pl)
DK (1) DK0771209T3 (pl)
ES (1) ES2182908T3 (pl)
FI (1) FI965225A7 (pl)
HU (1) HU220877B1 (pl)
MX (1) MX9700043A (pl)
NO (1) NO965592L (pl)
NZ (1) NZ290239A (pl)
PL (1) PL186341B1 (pl)
PT (1) PT771209E (pl)
RO (1) RO116198B1 (pl)
RU (1) RU2162855C2 (pl)
SK (1) SK164096A3 (pl)
UA (1) UA55371C2 (pl)
WO (1) WO1996000503A1 (pl)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5502037A (en) * 1993-07-09 1996-03-26 Neuromed Technologies, Inc. Pro-cytotoxic drug conjugates for anticancer therapy
US5866679A (en) * 1994-06-28 1999-02-02 Merck & Co., Inc. Peptides
WO1996005863A1 (fr) * 1994-08-19 1996-02-29 La Region Wallonne Composes, composition pharmaceutique et dispositif de diagnostic les comprenant et leur utilisation
EP0855910A4 (en) * 1995-10-18 2000-07-05 Merck & Co Inc Conjugates that can be used to treat benign prostate hyperplasia
US5952294A (en) * 1996-07-31 1999-09-14 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Peptidyl prodrugs and methods of making and using the same
US5998362A (en) * 1996-09-12 1999-12-07 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US6177404B1 (en) 1996-10-15 2001-01-23 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of benign prostatic hyperplasia
HRP970566A2 (en) * 1996-10-30 1998-08-31 Jones Deborah Defeo Conjugates useful in the treatment of prostate canser
US5948750A (en) * 1996-10-30 1999-09-07 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
JP2001504334A (ja) 1996-11-06 2001-04-03 アメリカ合衆国 プロテアーゼ活性化可能なＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素Ａ様プロタンパク質
US6265540B1 (en) 1997-05-19 2001-07-24 The Johns Hopkins University School Of Medicine Tissue specific prodrug
US6504014B1 (en) 1997-05-19 2003-01-07 The John Hopkins University Tissue specific prodrug
US6545131B1 (en) 1997-05-19 2003-04-08 The Johns Hopkins University Tissue specific prodrug
US6391305B1 (en) * 1997-09-10 2002-05-21 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
ID24735A (id) * 1997-12-02 2000-08-03 Merck & Co Ltd Konjugat-konjugat yang berguna pada pengobatan kanker prostat
JP2002505298A (ja) * 1998-03-05 2002-02-19 メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド 前立腺癌治療に有用な結合体
US6174858B1 (en) 1998-11-17 2001-01-16 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US7425541B2 (en) 1998-12-11 2008-09-16 Medarex, Inc. Enzyme-cleavable prodrug compounds
US7312244B2 (en) 1999-04-30 2007-12-25 Cellgate, Inc. Polyamine analog-amino acid conjugates useful as anticancer agents
US6649587B1 (en) 1999-04-30 2003-11-18 Slil Biomedical Corporation Polyamine analog conjugates and quinone conjugates as therapies for cancers and prostate diseases
IL146126A0 (en) * 1999-04-30 2002-07-25 Slil Biomedical Corp Novel polyamine analog conjugates and quinone conjugates as therapies for cancers and prostate diseases
US6482943B1 (en) * 1999-04-30 2002-11-19 Slil Biomedical Corporation Quinones as disease therapies
WO2001025791A2 (en) * 1999-10-07 2001-04-12 Ciphergen Biosystems, Inc. Prostate cancer marker proteins
GB9924759D0 (en) 1999-10-19 1999-12-22 Merck Sharp & Dohme Process for preparing peptide intermediates
US6844318B2 (en) 2000-03-15 2005-01-18 Bristol Myers Squibb Pharma Company Peptidase-cleavable, targeted antineoplastic drugs and their therapeutic use
AU2001266853B2 (en) * 2000-06-14 2005-02-17 Medarex, Inc. Prodrug compounds with an oligopeptide having an isoleucine residue
EP1219634A1 (en) * 2000-12-27 2002-07-03 Bayer Aktiengesellschaft Cytostatic-glycoconjugates having specifically cleavable peptidic linking units
AU2002254524A1 (en) * 2001-04-06 2002-10-21 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health A Use of semenogelin in the diagnosis, prognosis and treatment of cancer
JP4319908B2 (ja) * 2001-08-24 2009-08-26 ユニバーシティ オブ ビクトリア イノベーション アンド ディベロップメント コーポレーション プロテアーゼ活性化配列を含むプロアエロリシンおよび前立腺癌の治療のための使用方法
US20050118586A1 (en) * 2001-11-28 2005-06-02 Stephane Bejanin Human cdnas and proteins and uses thereof
US7108976B2 (en) * 2002-06-17 2006-09-19 Affymetrix, Inc. Complexity management of genomic DNA by locus specific amplification
BR0315795A (pt) * 2002-10-31 2005-09-13 Metabasis Therapeutics Inc Pró-medicamentos de monofosfato de citarabina
WO2005041981A1 (en) * 2003-10-31 2005-05-12 Kurume University Combination therapy of peptide vaccination and estramustine treatment
ATE502954T1 (de) 2005-06-14 2011-04-15 Protox Therapeutics Inc Verfahren zur behandlung oder prävention gutartiger prostatahyperplasie unter verwendung modifizierter porenbildender proteine
JP5278873B2 (ja) * 2008-05-14 2013-09-04 国立大学法人九州工業大学 癌診断用試薬
US9046529B2 (en) 2009-04-10 2015-06-02 The Regents Of The University Of California Prostatitis-associated antigens and methods of use thereof
KR20110069618A (ko) * 2009-12-17 2011-06-23 주식회사 셀앤바이오 전립선암 진단용 키트 및 진단방법
AU2015217221A1 (en) 2014-02-13 2016-08-11 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Prodrug compounds and their uses
CN106687118A (zh) 2014-07-02 2017-05-17 配体药物公司 前药化合物及其用途
CA3087932A1 (en) 2018-01-09 2019-07-18 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Acetal compounds and therapeutic uses thereof

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4296105A (en) * 1978-08-03 1981-10-20 Institut International De Pathologie Cellulaire Et Moleculaire Derivatives of doxorubicine, their preparation and use
US4277466A (en) * 1978-08-29 1981-07-07 Institut International De Pathologie Cellulaire Et Moleculaire Complexes of DNA and esters derived from daunorubicine, their preparation and use
US4446122A (en) * 1979-12-28 1984-05-01 Research Corporation Purified human prostate antigen
OA06421A (fr) * 1980-06-10 1981-09-30 Omnium Chimique Sa Procédé de préparation de dérivés N-(vinblastinoyl-23) d'acides aminés et de peptides.
DE3484691D1 (de) * 1983-04-29 1991-07-18 Omnichem Sa Konjugierte vinblastin-verbindungen und ihre derivate, verfahren zu ihrer herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen.
JPS6034997A (ja) * 1983-05-09 1985-02-22 ジヨージ、ジヨセフ、トダロ 生物学的活性ポリペプチド類
FR2546163B1 (fr) * 1983-05-16 1987-10-09 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives acyles hydrosolubles de peptides ou d'amino-acides, leur preparation et leur application
EP0126344A2 (en) * 1983-05-20 1984-11-28 Abbott Laboratories Tripeptide esters of therapeutic agents
FR2583983B1 (fr) * 1985-06-07 1988-05-27 Centre Nat Rech Scient Nouvelles prodrogues macromoleculaires hydrosolubles, leur preparation et leur utilisation comme medicaments notamment antitumoraux et antiparasitaires
EP0232693A3 (fr) * 1985-12-16 1988-04-06 La Region Wallonne Conjugués de la vinblastine et de ses dérivés, procédé pour leur préparation et compositions pharmaceutiques les contenant
FR2626882B1 (fr) * 1988-02-08 1991-11-08 Ire Celltarg Sa Conjugues de derives de vinca comportant une chaine detergente en position c-3
US5391723A (en) * 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
DE3930696A1 (de) * 1989-09-14 1991-03-28 Hoechst Ag Gallensaeurederivate, verfahren zu ihrer herstellung, verwendung als arzneimittel
US5220001A (en) * 1989-10-25 1993-06-15 Zaidan Hojim Biseibutsu Dong-A Pharm Co. Anthracycline glycoside derivatives
US5137877B1 (en) * 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
IT1241927B (it) * 1990-05-14 1994-02-01 Menarini Farma Ind 3'-deamino-4'-deossi-4'-amino-8-fluoroantra- cicline processi per la loro preparazione e composizioni farmaceutiche che le contengono
SE9002480D0 (sv) * 1990-07-23 1990-07-23 Hans Lilja Assay of free and complexed prostate-specific antigen
CA2074945A1 (en) * 1990-11-30 1992-05-31 Atsushi Isoai Tumor cell invasion-inhibiting peptides, peptide complexes and cancer metastasis inhibitors
FR2678274A1 (fr) * 1991-06-25 1992-12-31 Medgenix Group Sa N-leucyl epirubicine application a titre de medicament antitumoral et procede de preparation.
US5288612A (en) * 1991-07-03 1994-02-22 The Scripps Research Institute Assay methods for detecting serum proteases, particularly activated protein C
US5622929A (en) * 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
DE4233152A1 (de) * 1992-10-02 1994-04-07 Behringwerke Ag Antikörper-Enzym-Konjugate zur Prodrug-Aktivierung
CA2148350A1 (en) * 1992-10-29 1994-05-11 Carlo Croce Methods of detecting micrometastasis of prostate cancer
AU6364094A (en) * 1993-03-12 1994-09-26 Board Of Regents, The University Of Texas System Anthracyclines with unusually high activity against cells resistant to doxorubicin and its analogs
GB9320191D0 (en) * 1993-09-30 1993-11-17 Univ Napier Compounds
WO1995030758A1 (en) * 1994-05-10 1995-11-16 Mayo Foundation For Medical Education And Research Recombinant hk2 polypeptide
US5866679A (en) * 1994-06-28 1999-02-02 Merck & Co., Inc. Peptides
US5599686A (en) * 1994-06-28 1997-02-04 Merck & Co., Inc. Peptides
WO1996005863A1 (fr) * 1994-08-19 1996-02-29 La Region Wallonne Composes, composition pharmaceutique et dispositif de diagnostic les comprenant et leur utilisation
AUPM769394A0 (en) * 1994-08-25 1994-09-15 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Assay for the detection of proteases

Also Published As

Publication number Publication date
EP0771209A2 (en) 1997-05-07
DE69528064D1 (de) 2002-10-10
FI965225L (fi) 1997-02-26
WO1996000503A1 (en) 1996-01-11
BR9508151A (pt) 1999-03-30
MX9700043A (es) 1997-04-30
PT771209E (pt) 2002-12-31
CN1156964A (zh) 1997-08-13
AU689934B2 (en) 1998-04-09
US6143864A (en) 2000-11-07
FI965225A7 (fi) 1997-02-26
KR970703780A (ko) 1997-08-09
HK1009038A1 (en) 1999-07-02
PL317872A1 (en) 1997-04-28
ATE223224T1 (de) 2002-09-15
FI965225A0 (fi) 1996-12-27
RU2162855C2 (ru) 2001-02-10
UA55371C2 (uk) 2003-04-15
DK0771209T3 (da) 2002-10-07
EP0771209B1 (en) 2002-09-04
BG63453B1 (bg) 2002-02-28
RO116198B1 (ro) 2000-11-30
ES2182908T3 (es) 2003-03-16
HU9603564D0 (en) 1997-02-28
NO965592L (no) 1997-02-28
NZ290239A (en) 1998-11-25
KR100379351B1 (ko) 2003-10-30
NO965592D0 (no) 1996-12-27
EP0771209A4 (en) 2000-04-26
CZ381096A3 (en) 1997-04-16
DE69528064T2 (de) 2003-08-07
HUT76350A (en) 1997-08-28
SK164096A3 (en) 1997-06-04
JPH10502619A (ja) 1998-03-10
HU220877B1 (en) 2002-06-29
BG101077A (bg) 1998-02-27
AU3092295A (en) 1996-01-25
CA2192957A1 (en) 1996-01-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL186341B1 (pl) Oligopeptyd, sposób oznaczania aktywności proteolitycznej wolnego antygenu swoistego dla prostaty wpróbce, sposób identyfikacji związków, hamującychaktywność proteolityczną antygenu swoistego dla prostaty, oraz koniugat użyteczny do leczenia raka prostaty
US5866679A (en) Peptides
US5599686A (en) Peptides
US5948750A (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US5962216A (en) Tumor-activated prodrug compounds and treatment
AU715632B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US6177404B1 (en) Conjugates useful in the treatment of benign prostatic hyperplasia
AU726434B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US20020103136A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US20030232760A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU708475B2 (en) Conjugates useful in the treatment of benign prostatic hyperplasia
US20020115596A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU714288B2 (en) Novel peptides
HK1009038B (en) Novel peptides
CA2234763A1 (en) Conjugates useful in the treatment of benign prostatic hyperplasia

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20090607