CZ39994A3

CZ39994A3 - Synthetic aryl polyamines representing antagonists of excitation amino acid neurotransmitters, process of their preparation and use

Info

Publication number: CZ39994A3
Application number: CS94399A
Authority: CZ
Inventors: Nicholas Alex Saccomano; Robert Alfred Volkmann
Original assignee: Pfizer; Nps Pharma Inc
Priority date: 1991-08-23
Filing date: 1992-08-10
Publication date: 1994-11-16
Also published as: MX9204866A; FI940833A0; EP0641312A1; CA2114798A1; ZA926314B; WO1993004036A1; FI940833L; IL102835A0; PT100801A; FI940833A7; CN1069969A; JPH06505996A; HU9400503D0; BR9206403A; AU2426392A

Description

Oblast techniky

Vynález se týká skupiny arylových polyaminů a farmaceuticky přijatelných solí odvozených od těchto sloučenin, které představují antagonisty excitačních aminokyselinových neurotransmiterů. Tyto neurotransmitery působí na neuronové buňky různých organizmů, včetně bezobratlých a obratlovců. Polyaminové sloučeniny podle uvedeného vynálezu představují syntetické analogy určitých polyaminů, o kterých bylo zjištěno, že se nalézají v jedu pavouka Agelenopsis aperta. Do rozsahu uvedeného vynálezu rovněž náleží použití těchto polyaminů a jejich solí při antagonizování excitačních aminokyselinových neurotransmiterů. Tyto neurotransmitery mají schopnost působit na buňky, jako například na buňky nervového systému organizmu. Do rozsahu vynálezu rovněž náleží použití těchto polyaminů a jejich solí při léčení takových onemocnění a stavů, které jsou zprostředkovány excitačními aminokyselinovými neurotransmitery, a dále použití při kontrolování bezobratlého hmyzu. Do rozsahu vynálezu rovněž náleží prostředky obsahující uvedené polyaminy a soli odvozené od těchto sloučenin a dále způsoby přípravy uvedených polyaminů.

Dosavadní stav techniky

Z dosavadního stavu techniky je známo, že jed pavouka Agelenopsis aperta obsahuje přinejmenším dva toxiny, které působí na průchod vápníku vápníkovým kanálkem, viz. Jackson H. a kol., Soc. Neu. Sci. Abstr.

: 1078 (1987). V uvedené publikaci autoři popisují toxin, který je zde označen jako AG2 a jehož molekulová hmotnost je menší než 1000 daltonů, přičemž se předpokládá, že tento toxin potlačuje průchod vápníku uvedeným vápníkovým kanálkem v nejrůznějších tkáních.

Kromě toho z jiné publikace, viz. Jackson H. a kol., Soc. Neu, Sci. Abstr. 12 : 730 (1986), je známo, že jiný toxin z jedu pavouka Agelenopsis aperta obsahuje složku o molekulové hmotnosti asi 6000. 0 tomto toxinu se uvádí, že blokuje presynaptickou transmisi, přičemž se předpokládá, že tento toxin blokuje vápníkové kanálky v souvislosti s uvolňováním neurotransmiterů.

Některé polyaminy, o kterých bylo zjištěno, že se nachází v jedu pavouka Agelenopsis aperta, jsou uvedeny v patentu Spojených států amerických č. 5 037 846, který byl podán 28. dubna 1989 a jehož přihlašovatelem je stejný přihlašovatel jako u předmětného vynálezu. O těchto polyaminech a farmaceuticky přijatelných solích odvozených od těchto sloučenin se v tomto patentu uvádí, že představují blokátory excitačních aminokyselinových receptorů v buňkách, přičemž o jednom z těchto polyaminů, který je označován B_x, se zde uvádí, že rovněž představuje blokátor vápníkového kanálku.

Sloučeniny, které představují antagonisty excitačních aminokyselinových neurotransmiterů mají nejrůznější použití. Tyto antagonisty excitačních aminokyselinových neurotransmiterů jsou vhodné pro léčení různých stavů, jako jsou například mrtvice, cerebrální ischemie, neuronové degenerativní poruchy, jako je například Alzheimerova nemoc a epilepsie, a dále jako psychoterapeutika a pro jiné další nejrůznější účely, viz. například Excitatory Amino Acids In Health and Disease, D. Lodge, E., John Wiley and Sons Ltd., New York, NY 1988, kde uvedená publikace představuje pouze odkazový materiál. Kromě jiného jsou výše uvedené sloučeniny vhodné pro studium fyziologických pochodů v buňkách, například neuronových buňkách, a pro použití při kontrolování bezobratlého hmyzu.

Glutamát představuje hlavní excitační neurotransmiter v mozku savců. V posledním desetiletí zaznamenal vývoj farmakologie glutamátových receptorů značný pokrok, přičemž obrovským přínosem bylo zjištění, že tyto glutamátové receptory je možno rozlišit do několika podtypů. Předmětem intenzivního vědeckého zkoumání se stal zvláště podtyp glutamátového receptorů, který byl určen podle selektivního působení exogenního agonisty N-methyl-D-aspartátu (NMDA), neboť o těchto receptorech se předpokládá, že hrají roli v různých neurologických patologických pochodech, jako je mrtvice, epilepsie a neurodegenerativní pochody, jako je například Alzheimerova nemoc. V současné době existují dvě skupiny antagonistů NMDA receptorů, které byly v poslední době intenzivně zkoumány za pomoci klinicky vhodných léčiv. První skupinu tvoří konkurenční antagonisty, které zabraňují vazbě glutamátu na své receptorové místo. Tyto sloučeniny jsou charakterizovány jako vysoce polární sloučeniny, přičemž jako příklad těchto sloučenin je možno uvést fosfonátové sloučeniny AP7 a AP5. Tato vysoce polarizovaná struktura uvedených konkurenčních činidel znemožňuje jejich penetraci hematoencefalitickou bariérou a tím omezuje jejich terapeutickou použitelnost. Druhou skupinu antagonistů NMDA receptorů představují nekonkurenční antagonisty, které blokují funkci NMDA receptorů působením na iontový kanálek, jež je součástí NMDA receptorového komplexu. Do skupiny těchto sloučenin je možno zařadit látky MK-801 a fencyklidin (PCP).

Případné psychotomimetické účinky skupiny těchto sloučenin představují zřejmou nevýhodu pro tato známá léčiva, která fungují podle výše uvedeného mechanizmu.

V poslední době se předmětem zkoumání stala třetí skupina antagonistů, přičemž podnětem pro tyto výzkumy byla identifikace nových glutamátových antagonistů v jedech pavouků. V patentové přihlášce Spojených států amerických č. 554,311, která byla podána 17. července 1990, a v patentu Spojených států amerických č. 5 037 846, který byl přihlášen 31. července 1990, jsou popisovány sloučeniny s arylaminovou strukturou, které byly isolovány z jedu pavouka Agelenopsis aperta, přičemž tyto sloučeniny představují účinné specifické antagonisty NMDA receptorů u savců. Tyto arylaminové sloučeniny isolované z jedu pavouka Agelenopsis aperta představují kombinované struktury, které jsou tvořeny aromatickou kyselinou a polyaminovými segmenty spojenými navzájem amidovými vazbami. Některé aminové části v těchto polyaminových segmentech jsou v uvedených strukturách po funkční stránce ve formě N-hydroxyaminů nebo kvarterních amonných solí. Chemická struktura těchto arylaminových sloučenin je odlišná od výše uvedených standardních konkurenčních činidel, to znamená od výše uvedených sloučenin AP5 nebo AP7, a rovněž i od výše uvedené nekonkurenční sloučeniny

MK-801. Například polyaminová sloučenina AGEL 416, která je popisována ve výše uvedeném patentu Spojených států amerických č. 5 037 846, má následující strukturu :

Mechanizmus NMDA antagonistického působení těchto arylaminových sloučenin je rovněž odlišný od obou uvedených skupin, to znamená od uvedených konkurenčních činidel i sloučenin MK-801/PCP. Z výše uvedeného je tedy patrné, že uvedené arylaminové sloučeniny izolované z jedu pavouků představují novou skupinu antagonistických sloučenin na NMDA receptorech.

Přínos předmětného vynálezu tedy spočívá v tom, že nyní je možno tyto v přírodě se vyskytující sloučeniny připravit jinými metodami, než je izolování a čištění těchto látek z jedu pavouka Agelenopsis aperta, přičemž podobnými postupy je možno rovněž synteticky připravit analogické sloučeniny patřící do stejné skupiny látek, které se ovšem v přírodě nevyskytují.

Podstata vvnálezu

Vynález se týká skupiny syntetických arylových polyaminových sloučenin obecného vzorce :

R/CH^-CO-R' ve kterém znamená :

R pětičlenný až sedmičlenný karbocyklický systém nebo osmičlenný až jedenáctičlenný karbocyklický systém nebo libovolný z uvedených systémů substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující fluor, chlor, brom, hydroxyskupinu, alkylové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu CF₃, fenylovou skupinu, aminovou skupinu, alkylaminové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku a dialkylaminové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, m je 0 nebo 1,

R' představuje skupinu -[NH(CH₂)_n]_xNH₂, kde každé n nezávisle znamená 2 až 5, a x je 1 až 6.

Do rozsahu uvedeného vynálezu rovněž náleží sloučeniny obecného vzorce :

RýCH^-CO-R' nebo farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami odvozené od těchto sloučenin, ve kterém znamená :

R pětičlenný až sedmičlenný karbocyklický systém nebo osmičlenný až jedenáctičlenný karbocyklický systém nebo libovolný z uvedených systémů substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující fluor, chlor, brom, hydroxyskupinu, alkylové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu CF₃, fenylovou skupinu, aminovou skupinu, alkylaminové skupiny obsahující až 4 atomy uhlíku a dialkylaminové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, m je 0 nebo 1,

R' představuje skupinu :

[(CH₂)_nNH]_yH

-[NH(CH₂)_n]_xN\ [(CH₂)„NH]_zH kde každé n nezávisle představuje 2 až 5, x je 0 až 4, y a z. každý nezávisle představuje 1 až 5, přičemž součet x a větší hodnoty z y a z je 1 až 5.

R/CH^-CO-R' nebo farmaceuticky přijatelné adiční soli odvozené od těchto sloučenin, ve kterém znamená :

R' představuje skupinu :

(CH₂)_a[NH(CH₂)₅]_y^

-[NH(CH₂)_n]_xN\ N[(CH₂)_nNH]_zH (CH₂)_#[NH(CH₂)„]/ kde všechny a jsou stejné, přičemž mohou být v rozmezí 2 až 5, všechny b jsou stejné, přičemž mohou být v rozmezí 2 v faz 5, každé n je nezávisle v rozmezí od 2 do 5, x je v rozmezí od 0 do 3, všechny y jsou stejné, přičemž mohou být 0 nebo 1, z je v rozmezí od 0 do 3, a součet x + y + z je v rozmezí od 0 do 4.

Karbocyklické systémy podle uvedeného vynálezu mohou být nasycené, nenasycené nebo aromatické, přičemž ve výhodném provedení podle vynálezu jsou přítomny aromatické systémy. Pokud se týče monocyklických systémů potom jsou podle uvedeného vynálezu výhodné fenylové skupiny. Pokud se týče bicyklických systémů potom se může jednat o kondenzované systémy nebo můstkové systémy, přičemž ve výhodném provedení podle vynálezu jsou přítomny devítičlenné nebo desítičlenné .kondenzované systémy, jako například naftyl nebo inden. Z výše uvedených bicyklických systémů je zejména výhodný naftyl.

Ve výhodném provedení podle uvedeného vynálezu představuje zbytek R' takové skupiny, ve kterých x je 4 nebo 5 a každé n znamená nezávisle 3 nebo 4. Zejména výhodnými skupinami R' jsou skupiny -[NH(CH₂)₃]_SNH₂ a -[NH(CH₂)₃]₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NH₂.

Uvedené polyaminové sloučeniny podle uvedeného vynálezu a farmaceuticky přijatelné soli odvozené od těchto sloučenin představují antagonisty excitačních aminokyselinových neurotransmiterů. Tyto sloučeniny je tedy výhodné použít jako takové pro antagonizování excitačních aminokyselinových neurotransmiterů. Tyto polyaminové sloučeniny podle vynálezu je rovněž možno použít pro kontrolování bezobratlého hmyzu a pro léčení takových onemocnění a stavů u savců, které jsou zprostředkovány excitačními aminokyselinovými neurotransmitery. Dále jsou tyto polyaminové sloučeniny podle uvedeného vynálezu vhodné jako psychoterapeutika pro savce.

Do rozsahu uvedeného vynálezu rovněž náleží farmaceutické prostředky obsahující tyto výše uvedené polyaminové sloučeniny, způsoby aplikace těchto polyaminových sloučenin a způsoby přípravy těchto polyaminových sloučenin.

Schéma syntetické přípravy polyaminových sloučenin obecného vzorce :

je zobrazeno v reakčních schématech A až C, které následují.

Reakční schéma A

(I)

BOC (II)

BOC—N H

CN (III) [BOC]₂O ▼

BOC

BOC (IV)

H₂/Pd(OH)₂, HOAc ▼

BOC

BOC (VI) [BOC]₂O ▼

BOC BOC

BOC (VII)

H₂/Pd(OH)₂, HOAc

I

BOC BOC

(VIII)

Reakční schéma

B

(IX)

Reakční schéma c (IX) ₊ (VIII)

ZB (X) [BOC]₂O

V

BOC (XI) ▼

(XII)

NH,

Při provádění postupu podle výše uvedeného reakčního schéma A se polyaminová sloučenina vzorce IV, představující meziprodukt uvedeného procesu, připraví řadou postupných kroků, přičemž se vychází z diaminobutanu. Reakční podmínky vhodné k přípravě výše uvedeného meziproduktu vzorce VIII podle tohoto reakčního schématu A je možno nalézt v příkladu 5, v částech 1 až 7. V reakčním schématu B je ilustrován postup přípravy meziproduktu vzorce IX. Reakční podmínky vhodné k přípravě tohoto meziproduktu jsou uvedeny v příkladu 5, část 8. Příprava polyaminových sloučenin podle uvedeného vynálezu vzorce XII je ilustrována v reakčním schématu C. Reakční podmínky vhodné ke kondenzování meziproduktů vzorců VIII a IX a postupný sled reakčních kroků vedoucích k přípravě sloučeniny vzorce XII je ilustrován v příkladu 5, části 1 až 11.

Polyaminové sloučeniny podle uvedeného vynálezu reverzibilně antagonizují excitační aminokyselinové neurotransmitery, přičemž tyto neurotransmitery ovlivňují činnost buněk, jako například buněk nervového systému různých organizmů, včetně bezobratlích a obratlovců. Do rozsahu tohoto termínu obratlovci rovněž náleží savci. Termínem bezobratlí, použitým v tomto textu, se rovněž míní hmyz, ektoparazity a endoparazity.

Schopnost polyaminových sloučenin podle uvedeného vynálezu antagonizovat excitační aminokyselinové neurotransmitery je možno demonstrovat na jejich schopnosti blokovat zvýšení hladiny cGMP v mozečku neonatálních krys vyvolané N-methyl-D-aspartovou kyselinou (NMDA), přičemž se postupuje následujícím způsobem.

Mozečky deseti krys druhu Wistar, o stáří 8-14 dní, se rychle vyjmou a umístí se do Krebs/hydrogenuhličitanového pufru o hodnotě pH 7,4 a o teplotě 4 ’C, přičemž potom se tyto mozečky rozřežou na částečky o rozměrech

0,5 milimetru x 0,5 milimetru, k čemuž se použije Mcllwainova tkáňového skalpelu (The Nickle Laboratory Engineering Co., Gomshall, Surrey, Velká Británie). Takto připravené částečky mozečku se přemístí do 100 mililitrů Krebs/hydrogenuhličitanového pufru o teplotě 37 ’C, který se kontinuálně udržuje v rovnováze pomocí směsi kyslíku a oxidu uhličitého v poměru O₂/CO₂ 95 : 5. Tímto způsobem se částečky mozečku inkubují po dobu devadesáti minut, přičemž se třikrát vymění pufr. Potom se tento pufr dekantuje, tkáň se odstředí (odstřeďování se provádí po dobu 1 minuty při 3200 otáčkách za minutu) a oddělená tkáň se potom opětně suspenduje ve 20 mililitrech uvedeného Krebs/hydrogenuhličitanového pufru. Potom se oddělí alikvótní podíly o objemu 250 μΐ (což představuje přibližně 2 miligramy) a tyto podíly se umístí do mikrotrubic o objemu 1,5 mililitru. Do těchto trubic se přidá 10 μΐ testované sloučeniny ze zásobního roztoku, přičemž následuje přídavek 10 μΐ 2,5 mM roztoku NMDA za účelem zahájení reakce. Konečná koncentrace NMDA je 100 μΐ. Kontrolní vzorky neobsahují NMDA. Potom se tyto trubice inkubují po dobu jedné minuty při teplotě 37 ‘Ca protřepou se na vodní lázni, přičemž se v dalším postupu přidá 750 μΐ 50 mM roztoku Tris-Cl a dále 5 mM roztok EDTA k zastavení reakce. Potom se tyto trubice okamžitě umístí do lázně s vroucí vodou a zde se ponechají po dobu pěti minut. Obsah každé z těchto trubic se potom zpracuje působením ultrazvuku po dobu 15* sekund, přičemž se použije sondového ultrazvukového zařízení nastaveného na intenzitu nastavení tři. Potom se odebere deset mikrolitrů a stanoví se obsah proteinu, což se provede metodou podle Lowryho, Anal. Biochem. 100 : 201-220 (1979). Trubice se potom odstředí (odstřeďování probíhá po dobu 5 minut při 10000 g), odebere se 100 μΐ kapaliny nad usazeninou a stanoví se hladina cyklického GMP (cGMP), k čemuž se použije testu New England Nuclear (Boston, Massachusetts) cGMP RIA-test, přičemž se postupuje postupem podle návodu popsaného tímto dodavatelem. Hodnoty se uvádí jako pmoly cMGP vzniklé na miligram proteinu.

Kromě toho je možno schopnost polyaminových sloučenin podle uvedeného vynálezu antagonizovat excitační aminokyselinové neurotransmitery demonstrovat na jejich schopnosti blokovat zvýšenou hladinu volných vápenatých iontů [Ca²⁺]_i v cytosolu roztroušených granulovaných buněk malého mozku vyvolanou kombinací NMDA/glycin, přičemž se postupuje následujícím způsobem. Granulované buňky malého mozku se připraví z mozečku 8 dní starých krys (viz.

Wilkin, G.P. a kol., Brain Res : 115 : 181-199, 1976). Čtverečky (o ploše 1 cm²) Aclaru (Proplastics lne., 5033 Industrial Ave., Wall, NJ, 07719) se potáhnou poly-L-lysinem a umístí se do 12-jímkových misek obsahujících 1 mililitr roztoku Eagles Basal Medium. Výše uvedené buňky se disociují, přičemž do každé jímky obsahujícího čtverečky Aclar se umístí alikvotní podíly obsahující 6,25 . 10^s buněk. Po 24 hodinách po tomto naočkování se přidá cytosin-beta-D-arabinofuranosid (konečná koncentrace 10 μΜ). Tyto buňky se potom použijí pro fura2-analýzu, která se provede po 6, 7 a 8 dnech kultivace. Buňky navázané na Aclar čtverečky se přemístí do 12-jímkových misek obsahujících 1 mililitr 2 μΜ fura2/AM (Molecular Probes lne., Augene, OR) v pufru HEPES (obsahujícího 0,1 % bovinního sérového albuminu; 0,1 % dextrozy; pH 7,4; pufr neobsahuje hořčík). Tyto buňky se potom inkubují po dobu 40 minut při teplotě 37 *C, přičemž potom se tento pufr obsahující fura2/AM oddělí a nahradí se 1 mililitrem tohoto stejného pufru neobsahujícího fura2/AM. Do křemenné kyvety se potom umístí 2,0 mililitry předem ohřátého pufru (o teplotě 37 ’C). Do těchto kyvet se potom umístí buňky na Aclaru a tyto kyvety se vloží do termostatovaného držáku (teplota 37 ’C) vybaveného magnetickým míchadlem, přičemž fluorescence se změří pomocí fluoroscenčního spektrofotometru (Biomedical Instrument Group, University of Pennsylvania). Fluorescenční signál se ponechá stabilizovat po dobu asi 2 minut.

Zvýšení hladiny volného vápníku v cytosolu, což je reprezentováno zvýšením fluorescence, je vyvoláno přídavkem 50 μΜ NMDA a 1 μΜ glyc inu. V dalším postupu se do kyvety přidá 5 - 20 μΐ zásobního roztoku testované sloučeniny v solném roztoku s fosfátovým pufrem (PBS; pH 7,4) ve vhodné koncentraci. Kalibrace fluorescenčních signálů a korekce úniku fura2/AM se provedou podle standardní metody, viz. Grynkiewicz, G. a kol., J. Biol. Chem. 260 : 3440 (1985). Po dokončení každého testu se maximální fluorescenční hodnota (Fmax) určí přídavkem ionomycinu (35 μΜ) a minimální fluorescenční hodnota (Fmin) se určí následným přídavkem EGTA (12 mM) do vápenatého chelátu. Při provedení tohoto výše uvedeného postupu se schopnost předmětných sloučenin podle uvedeného vynálezu antagonizovat excitační aminokyselinové neurotransmitery zjistí podle poklesu fluorescence po přídavku těchto sloučenin.

Polyaminové sloučeniny podle uvedeného vynálezu jsou vhodné k antagonizování excitačních aminokyselinových receptorů jako takové. Jako takové jsou tyto polyaminové sloučeniny rovněž vhodné ke kontrolování bezobratlého hmyzu, při léčení nemocí zprostředkovaných excitačními amnokyselinovými neurotransmitery a pro léčení takových stavů u savců, jako jsou mrtvice, cerebrální ischemie, neuronové degenerativní poruchy, jako je například Alzheimerova nemoc a epilepsie. Tyto polyaminové sloučeniny podle uvedeného vynálezu jsou rovněž vhodné jako psychoterapeutika používaná u savců a kromě toho jsou vhodné pro studium fyziologických pochodů v buňkách, včetně buněk nervového systému, přičemž ovšem tímto není rozsah možného použití nijak omezen.

Do rozsahu uvedeného vynálezu rovněž náleží farmaceuticky přijatelné soli těchto polyaminových sloučenin podle vynálezu. Tyto soli se připraví metodami běžně známými z dosavadního stavu techniky pro odborníky pracující v daném oboru. Například je možno uvést, že adiční soli polyaminových sloučenin podle vynálezu s kyselinami je možno připravit běžnými postupy podle dosavadního stavu techniky. Výhodnými adičními solemi polyaminových sloučenin podle vynálezu s kyselinami jsou v tomto směru soli s kyselinou chlorovodíkovou a s kyselinou trifluoroctovou. Zejména jsou výhodné adiční soli sloučenin podle uvedeného vynálezu s kyselinou chlorovodíkovou.

Jestliže se tyto polyaminové sloučeniny podle vynálezu nebo farmaceuticky přijatelné soli odvozené od těchto sloučenin použijí k podávání savcům, potom je možno je podávat samotné nebo v kombinaci s farmaceuticky přijatelnou nosičovou látkou nebo ředidlem ve formě farmaceutického prostředku, jak je to běžné podle standardní praxe v tomto oboru. Tyto polyaminové sloučeniny nebo farmaceuticky přijatelné soli odvozené od těchto sloučenin je možno podávat perorálně nebo parenterálné. Mezi způsoby parenterálního podávání je možno zahrnout intravenózni podávání, intramuskulární podávání, intraperitoneální podávání, subkutánní podávání a místní aplikace.

V případě perorálniho aplikování polyaminových sloučenin podle vynálezu nebo farmaceuticky přijatelných solí odvozených od těchto sloučenin je možno tyto sloučeniny podávat například ve formě tablet nebo kapslí nebo ve formě vodného roztoku nebo suspenze. V případě tablet pro perorální aplikování je možno jako nosičových látek použít materiálů, které jsou běžně používány v podobných případech, jako jsou například laktóza a kukuřičný škrob, přičemž obvykle se v těchto případech používá rovněž přídavek maziv, jako je například stearát hořečnatý. V případě perorálniho podávání kapslí jsou vhodnými ředidly laktóza a sušený kukuřičný škrob. V případě, že se pro perorální aplikaci používá vodných suspenzí, potom se účinná látka kombinuje s emulgačními a suspendačními činidly. V případě potřeby je možno rovněž použít přídavku sladidla nebo vonné přísady.

V případě intramuskulárního, intraperitoneálního, subkutáního a intravenózního podávání se obvykle připravují sterilní roztoky obsahující účinnou látku, přičemž hodnota pH těchto roztoků se upraví na vhodnou hodnotu a přidá se pufr. V případě intravenózního aplikování se celková koncentrace rozpuštěných látek kontroluje takovým způsobem, aby byl připraven isotonický roztok.

Při použití polyaminových sloučenin podle uvedeného vynálezu nebo solí odvozených od těchto sloučenin u lidí je nutno, aby denní dávku stanovil ošetřující lékař. I přesto je ale možno uvést, že vhodná dávka této polyaminové sloučeniny se pohybuje v rozmezí od asi 1 do 30 miligramů/kilogram/den. Kromě toho je třeba poznamenat, že dávkované množství závisí na věku pacienta, na jeho hmotnosti a na reakci, která nastane u každého jednotlivého pacienta po podání této látky, a rovněž tak i na intenzitě symptomů vyskytujících se u pacienta a na účinnosti každé konkrétní podávané sloučeniny. Z výše uvedeného je patrné, že je možno rovněž použít i dávek, které leží mimo uvedené rozmezí, přičemž i tyto dávky spadají do rozsahu uvedeného vynálezu.

V případě, že se polyaminové sloučeniny podle uvedeného vynálezu nebo soli odvozené od těchto sloučenin použijí pro kontrolu bezobratlého hmyzu, potom se tyto sloučeniny aplikují na uvedený bezobratlý hmyz přímo nebo se aplikují do prostředí, ve kterém se tento hmyz vyskytuje. Například je možno uvedené sloučeniny podle vynálezu použít ve formě roztoků a tento roztok aplikovat postřikem přímo na uvedený bezobratlý hmyz. Množství sloučeniny nezbytné pro kontrolování daného bezobratlého hmyzu se bude měnit podle konkrétního druhu tohoto hmyzu a podle podmínek vyskytující se v daném prostředí, ve kterém se má tato látka aplikovat, přičemž toto množství stanoví osoba provádějící toto aplikování.

V případě, že se polyaminové sloučeniny podle uvedeného vynálezu nebo soli odvozené od těchto sloučenin použijí pro fyziologická studia buněk, potom se tyto sloučeniny aplikují na buňky běžně známými metodami používanými podle dosavadního stavu techniky. Například je možno tyto sloučeniny aplikovat na buňky ve vhodném fyziologickém pufru. V případě provádění těchto testů je vhodná koncentrace sloučenin podle uvedeného vynálezu asi 100 μΜ. Ovšem i zde je třeba poznamenat, že koncentrace uvedených sloučenin při provádění těchto testů může být značně větší nebo o mnoho menší než je uváděných 100 μΜ. Množství aplikované sloučeniny podle uvedeného vynálezu stanoví příslušný odborník v tomto oboru podle běžně známých metod.

Příklady provedení vynálezu

Sloučeniny podle uvedeného vynálezu a postupy jejich přípravy budou v dalším ilustrovány s pomocí konkrétních příkladů provedení, které mají pouze ilustrativní charakter a nijak neomezují rozsah tohoto vynálezu.

Typy postupů vyskytujících se v experimentální části :

(A) chránění sekundárního aminu pomocí di-terc.-butyldiuhličitanu;

(B) kyanoethylace primárního aminu;

(C) katalytická hydrogenace nitrilu na primární amin;

(D) reakce pro vytvoření amidové vazby;

(Dl dimethylaminopropyl, ethylkarbodiimid/ hydroxybenztriazol;

(D2) dicyklohexylkarbodiimid/hydroxybenztriazol;

(D3) dimethylaminopropyl, ethylkarbodiimid/ hydroxybenztriazol/triethylamin;

(D4) dicyklohexylkarbodiimid/hydroxysukcinimid;

(E) odstranění chránící skupiny z N-BOC substrátů pomocí kyseliny chlorovodíkové v dioxanu;

(F) odstranění chránící skupiny z N-BOC substrátů pomocí trifluoroctové kyseliny (TFA);

(G) alkyláce aminů pomocí N-BOC-3-brompropylaminu.

Příklad 1

Postup přípravy H₂N[ (CH₂)₃NH]_X polyaminového postranního řetězce.

Stupeň 1 - Postup typu B _► ^H:N\z/\/^NH\z^//\ (8)

Podle tohoto provedení bylo 103 gramů

1,3-diaminopropanu spojeno se 45 mililitry MeOH, což bylo provedeno při teplotě 4 ’C a za míchání. Potom byl do tohoto roztoku přidán akrylonitril (v množství 100 mililitrů, což je 81 gramů, neboli 1,1 ekvivalentu), přičemž tento přídavek byl proveden po kapkách za pomoci přidávací nálevky s tlakovým vyrovnávačem během 90 minut.

Po 3 hodinách byl odebrán podíl 500 miligramů a tento vzorek byl analyzován metodou ¹³C NMR, přičemž nebyl zaznamenán žádný 1,3-diaminopropan. Tento surový materiál, který obsahoval jako produkt aminonitrilovou sloučeninu (8), byl podroben destilačnímu zpracování za sníženého tlaku, přičemž v teplotním rozmezí od 100 do 125 *C byly odebrány tři frakce. Všechny tyto tři frakce byly dostatečně čisté k tomu, aby mohly být použity pro reakce s di-terc.-butyluhličitanem a následné chromatografické čištění na silikagelu.

³H NMR (250 MHz, CDClJ δ :

2,67	(t,	2H, 6,6 Hz),
2,28	(t,	2H, J=6,6 Hz),
1,05	(s,	3H);

2,54 - 2,43 (m, 4H),

1,37 (m, 2H, J=6,7 Hz), ¹³C NMR (63,1 MHz, CDC1₃ )δ :

118,8, 46,9, 44,9, 40,2,

33,4, 18,5.

Stupeň 2 - Postup typu A (8)

Boc Boc

Podle tohoto provedení byl k roztoku obsahujícímu aminonitrilovou sloučeninu (8) (v množství 23 gramů, což představuje 0,18 molu) v 500 mililitrech methylenchloridu při teplotě 0 ‘C přidán di-terc.-butyldiuhličitan (v množství 80 gramů, což je 0,36 molu, neboli ekvivalenty). Tato reakční směs byla potom promíchávána při teplotě okolí po dobu 16 hodin a potom byla zpracována dalším podílem di-terc.butyldiuhličitanu (v množství 8 gramů, což je 0,036 molu). Po promíchání této reakční směsi, které bylo prováděno po dobu dalších 4 hodin, byla takto získaná reakční směs promytá I N roztokem hydroxidu draselného KOH (v množství 2 x 60 mililitrů), sušena za pomoci uhličitanu draselného, zfiltrována a zkoncentrována za použití vakua. Takto získaný produkt byl potom přečištěn mžikovou chromatografickou metodou (silikagel;

20—> 100 % ethylacetát v hexanu jako eluční činidlo), čímž byl získán konečný produkt N-BOC-nitrilová sloučenina (9) ve formě čistého oleje.

Výtěžek : 14 gramů, což je 24 %.

*H NMR (250 MHz, CDClJ δ :

3,40	(t, 2H, 6,7 Hz),	3,28 (t, 2H, J=6,6 Hz),
3,05	(bs, 2H),	2,63 - 2,46 (m, 2H)
1,70	- 1,56 (m, 2H),	1,42 (s, 9H),
1,38	(s, 9H).
¹³C NMR (63,1 MHz, CDC1₃ )δ :
155,8	155,1, 118,5, 80,7,	78,9, 45,7, 44,4, 43,4,
32,4,	28,3, 28,2.
Stupeň 3 - Postup typu C

Boc Boc

Podle tohoto postupu byla N-BOC-nitrilová sloučenina (9) (v množství 49 gramů, což představuje 0,4 molu), dále 1000 mililitrů kyseliny octové a 20 gramů (20 % hydroxidu paladnatého Pd(OH)₂) Pd(OH)₂/C vloženy do Parrovy protřepávací nádoby o objemu 2,6 litru. Tato nádoba byla potom naplněna vodíkem a natlakována na 345 Pa a potom byla protřepávána po dobu 4 hodin. Takto získaná reakční směs byla potom zfiltrována na filtračním papíru 0,47 μ a zkoncentrována za použití vakua. Takto získaný zbytek byl potom rozpuštěn ve 1,5 litru dichlormethanu CH₂C1₂ a potom byl tento podíl promyt 1 N roztokem hydroxidu draselného KOH (2 podíly po 200 mililitrech). Bazické vrstvy byly potom extrahovány dichlormethanem CH₂C1₂ (v množství 400 mililitrů), přičemž dichlormethanové vrstvy byly spojeny a tento spojený podíl byl potom sušen za použití uhličitanu draselného K₂CO₃, zfiltrován a zkoncentrován za použití vakua, čímž byl získán požadovaný N-BOC-amin (11) ve formě čirého bezbarvého oleje.

Výtěžek : 43 gramů, což je 86 %.

^XH NMR (250 MHz, CDC1₃) δ :

3,28 - 3,12 (m, 2H),	3,11 - 3,00 (m, 4H),
2,64 (t, 2H, J=7Hz),	1,65 - 1,50 (m, 4H),
1,42 (s, 9H),	1,38 (s, 9H).
¹³C NMR (63,1 MHz, CDC1₃ )δ :
155,8, 79,3, 78,5, 44,0,	43,4, 39,2, 32,3,
28,5, 28,2.
Stupeň 4 - Postup typu B

Boc Boc (12)

Podle tohoto provedení bylo 38 gramů N-BOC aminové sloučeniny (11) (což odpovídá 0,114 molu) spojeno se 6,7 gramu akrylonitrilu (0,126 molu, což je 1,1 ekvivalentu) v 60 mililitrech methanolu a tato směs byla potom promíchávána po dobu 11 hodin. Použitá rozpouštědla byla odstraněna, čímž byla získána požadovaná nitrilová sloučenina (12) ve formě čirého bezbarvého oleje, který byl potom použit bez čištění pro další postup.

Výtěž	ek : 43 gramů, což	je
^lH NMR (250 MHz, CDC1₃)	δ :
3,18	(bs, 4H),
2,85	(t, 2H, J=6,6 Hz),
2,45	(t, 2H, J=6,7 Hz),
1/41	(s, 9H),
¹³C NM	[R (63,1 MHz, CDC1₃	)δ
155,9	, 118,6, 79,6,	78,
28,8,	28,3, 18,6.

100 %.

3,03	(m,	2H),
2,57	(t,	2H, J=6,7 Hz),
1,72	- 1	,53 (m, 4H),
1,38	(s,	9H) .
46,	3,	45,0, 43,9, 37,4,

Stupeň 5- Postup typu A (12)

Boc Boc Boc (13)

Podle tohoto postupu byl vzorek nitrilové sloučeniny (12) v množství 43 gramů (což je 0,114 molu) spojen s di-terc.butyldiuhličitanem (v množství 25,6 gramu, což představuje 0,120 mmolu, neboli 1,05 ekvivalentu) a dále bylo přidáno 350 mililitrů dichlormethanu CH₂Cl₂ o teplotě 0 ’C a tato reakčni směs byla potom promíchávána po dobu 9 hodin. Chromatografickou analýzou v tenké vrstvě (TLC) (EtOAc, KMnOj nebyl zjištěn žádný zbytkový výchozí materiál.. Takto získaná reakčni směs byla přečištěna stejným způsobem jako to bylo uvedeno

v případě N-BOC-nitrilové N-BOC-nitrilová sloučenina	sloučeniny (9). Požadovaná ...................... (13) byla získána ve formě .^d'^;
čirého bezbarvého oleje.
Výtěžek : 34 gramů, což je	63 %.	_____. .------. . -Γ-- ,.
^XH NMR (250 MHz, CDClJ 5 :		7 6 Λ S Z
3,45 (t, 2H, J=6,6 Hz),	3,39 - 2,97	(m, 8H),
2,68 - 2,46 (s, 2H),	1,82 - 1,56	(m, 4H),
1,44 (s, 18H),	1,87 (s, 9H;	1 . ' -
¹³C NMR (75,7 MHz, CDC1₃ ) δ		J
155,9, 80,5, 79,7, 78,9	, 46,5, 44,5	, 43,9, 37,6 , .

28,4, 28,3, 16,9.

Stupeň 6 - Postup typu C (13)-►

(14)

Podle tohoto provedení byla N-BOC-aminová sloučenina (14) připravena z N-BOC-nitrilové sloučeniny (13) stejným způsobem jako byla připravena N-BOC-aminová sloučenina (11) z N-BOC-nitrilové sloučeniny (9).

Výtěžek : 99 % (30 gramů).

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃) δ :
3,32 - 2,94 (m, 10H),	2,62 (t, 2H, J=6,7 Hz),
1,76 - 1,52 (m, 6H),	1,39 (s, 18 H),
1,37 (s, 9H),	1,25 (s, 2H).
¹³C NMR (63,1 MHz, CDC1₃ ) δ 155,5, 79,5, 79,3, 45,5	- 43,7, 39,1, 37,3, 32,3,

2ξ,3.

(15)

Stupeň 7 - Postup typu B (14)-►

Boc Boc Boc

Podle tohoto postupu byla nitrilová sloučenina (15) připravena z N-BOC-aminové sloučeniny (14) stejným způsobem jako byla nitrilová sloučenina (12) připravena z N-BOC-aminové sloučeniny (11).

Výtěžek : 90 %.
^XH NMR (300 MHz, CDC1₃)	δ :
3,29 - 3,02 (m, 14H),	2,86	(t,	2H, J=6,7	Hz),
2,57 (t, 2H, J=6,6 Hz),	2,46	(t,	2H, J=6,6	Hz),
1,72 - 1,57 (m, 6H),	1,41	(S,	9H),
1,40 (s, 9H),	1,39	(S,	9H).
¹³C NMR (75,7 MHz, CDC1₃	)δ :
155,5, 155,0, 118,7,	79,6, 79	,5,	46,7 - 46	,0,
45,2 - 43,3, 38,0 - 36	,9, 28,4,	18	,7.

Hodnoty ¹³C NMR (300 MHz, CDC1₃ ) nitrilová sloučeniny (15) nebyly rozlišitelné od nitrilové sloučeniny (12).

Stupeň 8 - Postup typu A

Boc Boc Boc Boc

Podle tohoto provedení byla N-BOC-nitrilová sloučenina (16) připravena z nitrilové sloučenina (15) podobným způsobem jako byla N-BOC-nitrilová sloučenina (13) připravena z nitrilové sloučeniny (12), přičemž produkt byl ve formě čirého bezbarvého oleje.

Výtěžek : 30 gramů, což je 87 %.

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃) 6 :

3,36 (t, 2H, J=6 Hz), 3,18 - 2,90 (m, 14H),

2,57 - 2,42 (m, 2H), 1,72 - 1,48 (m, 6H),

1,40 - 1,28 (m, 27H).

Stupeň 9 - Postup typu C

Boc Boc Boc Boc

Podle tohoto provedení byla N-BOC-aminová sloučenina (17) připravena z N-BOC-nitrilové sloučeniny (16) podobným způsobem jako byla N-BOC-aminová sloučenina (11) připravena z N-BOC-nitrilové sloučeniny (9).

Výtěžek : 2,61 gramu, což je	74 %	•
^XH NMR (250 MHz, CDClJ δ :
3,39 - 2,97 (m, 14H),	2,63	(t,	2H, J=6,6 Hz),
1,80 - 1,53 (m, 8H),	1,39	(s,	27H),
1,38 (s, 9H),	1,23	(S,	2H).

Stupeň 10 - Postup typu B (17)

Boc Boc Boc Boc

Podle tohoto provedení byla nitrilová sloučenina (18) připravena z N-BOC-aminové sloučeniny (17) stejným způsobem jako byla nitrilová sloučenina (12) připravena z N-BOC-aminové sloučeniny (11), přičemž takto připravená sloučenina byla použita pro další postup bez dalšího čištění.

Výtěžek : 1	9 gramů, což je	91 %.
^JH NMR (300	MHz, CDC1₃) δ :
3,24 - 2,94	(m, 14H),	2,87	(t,	2H, J~	6 Hz),
2,57 (t, 2H	, J-6 Hz),	2,47	(t,	2H, J-	6 Hz),
1,74 - 1,54	(m, 8H),	1,45	- 1	,36 (m,	36H).
Stupeň 11 -	Postup typu A

(18)

Boc Boc Boc Boc Boc (19)

Při provádění postupu podle tohoto provedeni byla N-BOC-nitrilová sloučenina (19) připravena z nitrilové sloučeniny (18) stejným způsobem jako byla N-BOC-nitrilová sloučenina (13) připravena Výtěžek : 16 gramů, což je ^XH NMR (250 MHZ, CDCl₃) δ :

3,43	(t,	2H, J=6,6 Hz),
2,62	- 2	,50 (m, 2H),
1,43	(s,	9H),
1,41	(s,	18H),

z nitrilové sloučeniny (12).

%.

3,28 - 3,02 (m, 16 H),

1,80 - 1,56 (m, 8H),

1,42 (s, 9H),

1,39 (s, 9H).

Stupeň 12 - Postup typu C (19)

Boc Boc Boc

Boc

NH₂ (20)

Podle tohoto provedení byla N-BOC-aminová sloučenina (20) připravena z N-BOC-nitrilové sloučeniny (19) stejným způsobem jako byla N-BOC-aminová sloučenina (11) připravena z N-BOC-nitrilové sloučeniny (9).

Výtěžek ; 17 gramů, což je 99 %.

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃) δ :

3,24 - 2,95 (m, 18 H), 2,6 (t, 2H, J~6H),

1,72 - 1,52 (m, 10 H), 1,42 - 1,32 (m, 45H).

Stupeň 13 - Postup typu B (20)

Boc Boc

CN (21)

Podle tohoto provedení byla nitrilová sloučenina (21) připravena z N-BOC-aminové sloučeniny (20) stejným způsobem jako byla nitrilová sloučenina (12) připravena z N-BOC-aminové sloučeniny (11).

Výtěžek : 99 %.

^XH NMR (250 MHz, CDC1₃) δ ;

3,32 - 3,03 (m, 16H), 2,91 (t, 2H, J=6,7 Hz),

2,61 (t, 2H, J-6 Hz), 2,51 (t, 2H, J=6,6 Hz),

1,82 - 1,57 (m, 10H),

1,43 (s, 9H).

Stupeň 14 - Postup typu A

1,44 (s, 36H),

J 1 ,, J 'J (21) •f·:

CN <22)

Podle tohoto provedení byla N-BOC-nitrilová sloučenina (22) připravena z nitrilové sloučeniny (21) stejným způsobem jako byla N-BOC-nitrilová sloučenina (13) připravena z nitrilové sloučeniny (12). Výtěžek 99 %.

^XH NMR (CDClj) δ :

3,45 ppm (t, 2H, J=6,6 Hz),	3,26 - 3,02 (m, 18H),
2,65 - 2,53 (m, 2H),	1,79 - 1,55 (m, 10H),
1,43 (s, 9H),	1,42 (s, 9H),
1,41 (s, 18H),	1,40 (s, 9H).
¹³C NMR {^XH} (250 MHZ, CDC1₃)	δ :
155,2, 79,3, 44,7, 28,3,	28,3, 28,2.

Stupeň 15 - Postup typu C (22)

Boc Boc Boc Boc Boc Boc

Podle tohoto provedení byla N-BOC-aminová sloučenina (23) připravena z N-*BOC-nitrilové sloučeniny (22) stejným způsobem jako byla N-BOC-aminová sloučenina (11) připravena z N-BOC-nitrilové sloučeniny (9).

Výtěžek : 8 gramů, což je 99 %.

^XH NMR (300 MHz, CDClJ δ :

3,32 - 2,98 (m, 22H), 2,65 (t, 2H, J=6,6 Hz),

1,78 - 1,53 (m, 12H), 1,41 (s, 54H),

1,40 (s, 9H).

Stupeň 16 - Postup typu B (23)

Boc Boc Boc Boc Boc Boc (24)

Podle tohoto provedení byla nitrilová sloučenina (24) připravena z N-BOC-aminové sloučeniny (23) stejným způsobem jako byla nitrilová sloučenina (12) připravena z N-BOC-aminové sloučeniny (11).

Výtěžek : 99 %.

^XH NMR (250 MHz, CDC1₃) δ :

3,32 - 3,04 (m, 22H),	2,90	(t,	2H, J=6,7	Hz),
2,61 (t, 2H, J~6 Hz),	2,53	(t,	2H, J=6,7	Hz),
1,82 - 1,57 (m, 12H),	1,44	(s,	45H),

1,43 (s, 9H).

Stupeň 17 - Postup typu A (24)

(25)

Podle tohoto provedení byla N-BOC-nitrilová sloučenina (25) připravena z nitrilové sloučeniny (24) stejným způsobem jako byla N-BOC-nitrilova sloučenina (13) připravena z nitrilové sloučeniny (12).

Výtěžek : 5,5 gramu, což je 74 %.

^XH NMR (250 MHz, CDC1₃) δ :

3,45 (t, 2H, J~6,7 Hz), 3,40 - 2,97 (m, 24H),

2,66 - 2,51 (m, 2H), 1,80 - 1,55 (m, 12H),

1,54 - 1,30 (s, 63H).

Stupeň 18 - Postup typu C (25)

Boc Boc Boc Boc Boc Boc Boc (26)

Podle tohoto provedení byla N-BOC-aminová sloučenina (26) připravena z N-BOC-nitrilové sloučeniny (25) stejným způsobem jako byla N-BOC-aminová sloučenina (11) připravena z N-BOC-nitrilové sloučeniny (9).

Výtěže]	k : 5,01 gramu,	což je	91 %.
^JH NMR	(250 MHz, CDClj)	δ :
3,30 -	2,97 (m, 26H),		2,60 (t, 2H, J=6 Hz),
1,81 -	1,57 (m, 14H),		1,53 - 1,28 (m, 63H).
*H NMR	(250 MHZ, CDClj)	δ :
155,2,	79,3, 44,7,	28,7,	28,4, 27,5.

Příklad

O 'ΝΗ'^Χ ^Χ'^/Ζ~^ν'ΝΗ'

NH

NH ,NH, ,NH_n

Fe

Zó\

Stupeň 1 : Vytvoření amidové vazby - Postup typu Dl.

Podle tohoto provedení bylo do jednohrdlové RBF-nádoby o objemu 50 mililitrů umístěno 0,19 gramů ferrocenkarboxylové kyseliny (což představuje 0,82 mmolu, neboli 1,1 ekvivalentu), dále 0,12 gramu hydroxybenzotriazolu (což je 0,89 mmolu, neboli 1,2 ekvivalentu), 0,17 gramu l-(3-dimethylaminopropyl)-3ethylkarbodiimidu (ve formě HCl soli; což představuje 0,90 mmolu, neboli 1,2 ekvivalentu) a 10 mililitrů dichlormethanu CH₂C1₂, což bylo provedeno za míchání a pod atmosférou suchého dusíku. Po 30 minutách bylo k tomuto roztoku přidáno 0,61 gramu N-BOC-aminové sloučeniny (27) (což odpovídá 0,75 mmolu, neboli 1,0 ekvivalent; viz. dále uvedený příklad 5a pro přípravu * této sloučeniny). Chromatografickou analýzou v tenké vrstvě (TLC)(2 x MeOH,

I₂) bylo zjištěno, že N-BOC-amidová sloučenina byla spotřebována během 2 hodin. Takto získaná reakční směs byla zředěna na celkový objem 400 mililitrů ethylesterem kyseliny octové EtOAc a potom byla promyta pufrem o pH 4 (2 x 25 mililitrů), dále 25 mililitry vody, IN roztokem hydroxidu draselného KOH (2 x 25 mililitrů), 25 mililitry vody a 50 mililitry solanky. Získaná ethylacetátové vrstva byla potom usušena síranem sodným Na₂SO₄, zfiltrována a použitá rozpouštědla byla odstraněna, přičemž tímto způsobem byl získán konečný produkt ve formě oranžového oleje.

Výtěžek : 712 miligramů, což je 93 %.

^XH NMR (250 MHZ, CDC1₃) δ :

4,78 (s, 2H), 4,32 (t, 2H, J=l,8 Hz),

4,19 (s, 5H), 3,45 - 3,04 (m, 20H),

1,83 - 1,59 (m, 12H), 1,50 (s, 9H),

1,45 (s, 18H), 1,44 (s, 9H),

1,43 (s, 9H).

Stupeň 2 : Odstranění chránící skupiny z polyaminové sloučeniny - Postup typu F.

Podle tohoto provedení byla kyselina trifluoroctové TFA (v množství 30 mililitrů) odplyněna za pomoci probublávání proudem suchého dusíku (za použití teflonové trubice), což bylo provedeno v jednohrdlové RBF-nádobě o objemu 100 mililitrů při teplotě 0 ‘C. Ferrocenkarboxamidpolyaminová sloučenina získaná shora uvedeným postupem podle stupně 1 (v množství 712 miligramů, což je 0,69 mmolu) byla rozpuštěna ve 2 mililitrech dichlormethanu CH₂C1₂ a potom byla přemístěna do výše uvedené promíchávané trifluoroctové kyseliny TFA se současným proplachem dichlormethanem CHjClj v množství 3x2 mililitry. Po 30 minutách byla ledová lázeň odstraněna a po dalších 30 minutách byla použitá rozpouštědla odstraněna za sníženého tlaku, přičemž potom bylo provedeno zpracování Hi-Vac. Zbytkový červenohnědý olej byl promíchán s diethyletherem Et₂O (v množství 3 x 30 mililitrů), přičemž takto vzniklá žlutá pevná látka byla oddělena za tlaku dusíku na fritě o porozitě B. Tato pevná látka byla potom opláchnuta etherem a zbytkový ether byl potom vypuzen tlakem dusíku, přičemž tímto způsobem byl získán požadovaný produkt ve formě pevné látky.

Výtěžek : 690 miligramů , což je 93 %.

^XH NMR (DMSO) δ :
4,71 (t, 2H, J=l,73 Hz),	4,38 (t, 2H, J~2 Hz)
4,15 (s, 5H),	3,28 - 3,21 (m, 2H),
3,03 - 2,81 (m, 18 H), 1,61 - 1,50 (m, 4H). ¹³C NMR (250 MHz, D₂O) :	2,04 - 1,72 (m, 8H),

177,3, 78,5, 76,1, 74,3, 49,7, 48,1, 47,3, 47,2,

47,1, 39,3, 38,8, 28,5, 26,5, 25,5, 25,4.

HPLC : (minimálně) 96,08 % čistota; kolona Novapak C18, 5 - 40 % CH₃CN/2 %/T.H₂O během 60 minut, stanoveno při 230 nm, eluční doba : 23,2 minut.

HRMS (FAB) :

(Μ + H) vypočteno pro C₂₇H₄₈N_eO : 529,3328845, nalezeno : 529,33172.

Příklad 3 o

N

Stupeň 1 : Vytvoření amidové vazby - Postup typu D3.

Podle tohoto postupu byla hydrochloridová sůl

2-pyridyloctové kyseliny (v množství 0,105 gramu, což představuje 0,60 mmolu, neboli 1,0 ekvivalent) spojena s 0,16 mililitru TEA (což představuje 1,15 mmolu, neboli 2 ekvivalenty) a 4 mililitry dichlormethanu CH₂C1₂. Po 10 minutách byl k této reakční směsi přidán DEC (v množství 0,12 gramu, což představuje 0,62 mmolu, neboli 1,0 ekvivalent) a 0,09 gramu HOBt (což je 0,66 mmolu, neboli

1,1 ekvivalentu), přičemž takto získaná reakční směs byla potom promíchávána po dobu 2 hodin. K takto vzniklé reakční směsi byla potom přidána N-BOC-aminová sloučenina (27) (v množství 0,44 gramu, což představuje 0,54 mmolu, neboli 0,9 ekvivalentu) a tato reakční směs byla potom promíchávána po dobu dalších 10 hodin. Chromatografickou analýzou v tenké vrstvě (TLC) (2 x MeOH, I₂) bylo zjištěno, že N-BOC-aminová sloučenina byla spotřebována. Reakční směs byla potom zředěna na objem 400 mililitrů ethylesterem kyseliny octové EtOAc, potom byla promyta 1 N roztokem hydroxidu draselného KOH (40 mililitrů), solankou (50 mililitrů) a potom byla usušena síranem hořečnatým MgSO₄. Takto získaný ethylacetátový roztok byl potom zfiltrován a použitá rozpouštědla byla odstraněna, čímž bylo získáno 0,4 gramu čistého zeleného oleje. Tento surový materiál byl potom chromatograficky zpracován na 10 gramech silikagelu, který byl suspendován v ethylesteru kyseliny octové EtOAc, přičemž jako elučního činidla bylo použito ethylesteru kyseliny octové. Vhodné frakce byly spojeny a použité rozpouštědlo bylo odstraněno, čímž byl získán konečný produkt ve formě čistého světle zeleného oleje.

Výtěžek : 0,20 gramu, což je 40 %.

*H NM	R (250 MHz,	CDC1₃)
8,59	- 8,52	(m,	^ΧΗ),
7,62	- 7,49	(m,	^XH),
3,78	(s, 2H)	9
1,80	- 1,56	(m,	12),

7,76 - 7,68	(m,	1H),
7,37 (d, ^ΧΗ,	J=8	Hz),
3,31 - 3,02	(m,	20H),
1,56 - 1,34	(m,	45H).

Podle tohoto postupu byla kyselina trifluoroctová (v množství 30 mililitrů) kontinuálním způsobem odplyňována proudem suchého dusíku, který byl probubláván touto kyselinou (prostřednictvím teflonové trubice), což bylo prováděno v jednohrdlové RBF-nádobě o objemu 100 mililitrů při teplotě místnosti. 2-Pyridylacetamidová sloučenina získaná podle shora uvedeného stupně 1 (v množství 180 gramů) byla rozpuštěna ve 2 mililitrech dichlormethanu CH₂C1₂ a potom byl tento roztok převeden do výše uvedené promíchávané trifluoroctové kyseliny TFA. Po 1 hodině bylo použité rozpouštědlo odstraněno za sníženého tlaku a získaný zbytek byl umístěn na Hi-Vac. Takto získaný zbytek byl potom smíchán s etherem (3 podíly po 30 mililitrech), čímž vznikla bílá pevná látka, která byla potom oddělena na fritě o porozitě B za použití natlakovaného dusíku. Zbytkový ether byl potom odstraněn působením dusíku pod tlakem. Tímto způsobem byl získán požadovaný produkt.

Výtěžek : 169 gramu, což je 91 %.

NMR (250 MHz, D₂0) δ :

8,48	(d, *H,	J=15 Hz)
7,51	- 7,47	(m, 2H),
3,32	(t, 2H,	. J~9 Hz),
2,17	- 1,98	(m, 2H),
1,81	- 1,69	(m, 4H).

7.98 (t, 1H, J=6 Hz), 3,86 (s, 2H),

3,17 - 2,96 (m, 18H),

1.98 - 1,81 (m, 2H),

Příklad

O

NH

NH .NH, .NH,

Stupeň 1 : Tvorba amidové vazby - Postup typu D4.

Podle tohoto provedení byla 4-bifenyloctová kyselina (v množství 53 gramů, což je 0,25 mmolu, neboli

1,2 ekvivalentu) spojena s 5 mililitry dichlormethanu CH₂C1₂ , 84 μΐ triethylaminu (což představuje 0,6 mmolu, neboli 3 ekvivalenty), 70 miligramy dicyklohexylkarbodiimidu (což představuje 0,34 mmolu, neboli 1,6 ekvivalentu), 11 miligramy hydroxysukcinimidu (což je 0,09 mmolu, 45 mol. %) a 175 miligramy

N-BOC-aminové sloučeniny (27) (což představuje 0,21 mmolu, neboli 1,0 ekvivalent). Chromatografickou analýzou v tenké vrstvě TLC (dva podíly MeOH; manganistan draselný KMnO₄) bylo zjištěno, že po 16 hodinách byla uvedená

N-BOC-aminová sloučenina spotřebována. Takto získaná reakční směs byla potom zředěna na objem 100 mililitrů za pomoci dichlormethanu CH₂C1₂ a potom byla promyta vodným 20 % roztokem hydroxidu amonného NH₄OH (dva podíly po 100 mililitrech). Získané bazické vrstvy byly extrahovány dichlormethanem CH₂C1₂ (tři podíly po 50 mililitrech), přičemž získané dichlormethanové frakce byly spojeny, tento spojený podíl byl potom promyt solankou (50 mililitrů), sušen uhličitanem draselným K₂CO₃, zfiltrován a použité rozpouštědlo bylo odstraněno, čímž bylo získáno 281 miligramů (výtěžek > 100 %) surového materiálu. Čistý produkt byl izolován mžikovou chromatografickou metodou na silikagelu (12 gramů silikagelu suspendováno v dichlormethanu CH₂C1₂, přičemž bylo použito elučního gradientu 0 - 10 % MeOH/CH₂Cl₂), a získaný produkt měl vzhled bílé, voskovité pevné látky.

Výtěžek : 190 gramů, což j ^XH NMR (250 MHz, CDC1₃) δ :

7.56 - 7,50 (m, 4H),

3.56 (s, 2H),

1,78 - 1,52 (m, 12H),

%.

7,43 - 7,28	(m,	5H),
3,26 - 2,98	(m,	20H),
1,48 - 1,36	(m,	45H) .

Podle tohoto postupu byla kyselina trifluoroctová (v množství 30 mililitrů) kontinuálně odplyňována pomocí proudu dusíku, který byl probubláván touto kyselinou při teplotě 0 *C (za pomoci teflonové trubice).

Bifenylacetaminová sloučenina získaná postupem podle shora uvedeného stupně 1 (v množství 150 miligramů, což je 0,15 mmolu) byla přidána ve formě suchého prášku k uvedené promíchávané kyselině trifluoroctová TFA. Po 40 minutách byla ledová lázeň odstraněna a po dalších 20 minutách byla odstraněna použitá rozpouštědla za sníženého tlaku, přičemž zbytek byl umístěn na Hi-Vac. Po 2 hodinách byl získaný červenohnědý olej smíchán s diethyletherem Et,0 (tři podíly po 30 mililitrech) a vzniklá bílá pevná látka byla oddělena pod tlakem dusíku na fritě o porozitě C. Takto získaná pevná látka byla rozpuštěna ve vodě, opláchnuta na fritě a vysušena vymražením, čímž byl získán požadovaný produkt ve formě bílé pevné látky.

Výtěžek : 136 miligramů, ^XH NMR (300 MHZ, D₂0) δ :

7,62 - 7,56 (m, 5H),

7,38 - 7,31 (m, 2H),

3,13 (t, 2H, J=6,7 Hz), 2,00 - 1,54 (m, 12H).

což je 99 %.

7,4 (t, 2H, J=7,5 Hz) , 3,45 (s, 2H),

3,02 - 2,80 (m, 18H),

Příklad 5

Postup přípravy lH-indol-3-acetamid-N-(16-amino 4,8,13-triazahexadec-l-ylu).

Stupeň 1 :

NC^/Z^

H₂N

CN (I)

Podle tohoto provedení byla sloučenina I připravena z diaminobutanové sloučeniny a akrylonitrilu postupem podle : Yamamoto, Hisachi, J. Am. Chem. Soc. 103:6133 - 6136 (1981).

Stupeň 2 :

(I) (Π) ▼

BOC

CN (III)

Podle tohoto provedení byl k roztoku obsahujícímu N-kyanoethyl-1,4-diaminobutan (v. množství 6,44 gramu, což představuje 0,0457 molu) v acetonitrilu (200 mililitrů) pod atmosférou dusíku přidán KF/Celite (11 gramů), přičemž potom následoval přídavek N-(terc.-butoxykarbonyl)-3brompropylaminu (v množství 10,87 gramu, což je 0,0457 molu), přičemž tento přídavek byl prováděn po kapkách po dobu 7 hodin. Takto získaná reakční směs byla potom ponechávána promíchávat po dobu 16 hodin při teplotě okolí a potom byla zahřívána při teplotě 70 ’C po dobu 24 hodin. V další fázi byla získaná reakční směs ponechána ochladit, načež byla zfiltrována a zkoncentrována za použití vakua. Zbytek byl rozpuštěn v dichlormethanu CH₂C1₂ (200 mililitrů), potom byl tento podíl promyt 1 N roztokem hydroxidu sodného (100 mililitrů), usušen a zkoncentrován za použití vakua, čímž byl získán surový produkt, který byl zpracován chromatografickým způsobem na silikagelu (jako elučního činidla bylo použito směsi CH₂Cl₂/MeOH), čímž byla získána požadovaná aminová sloučenina III. Výtěžek : 3,32 gramu.

*H NMR (CDC1₃) δ :

1,19 - 1,59 (m,	17H),	2,42 (t, J=6,6 Hz, 2H),
2,44 - 2,58 (m,	6H),	2,82 (t, J=6,6 Hz, 2H),
3,08 (m, 2H),		5,22 (br s, 1H);
¹³C NMR (CDC1₃) δ
18,68, 27,70,	27,74,	28,42, 29,94, 39,16, 45,03,
47,68, 48,99,	49,65,	78,78, 118,75, 156,11;

HR FABMS : pozorováno (Μ + H) m/z = 299,2434, ^C15^H31^N4°2 (pož. 299,2447).

(III)

Stupeň 3 :

BOC—bJ H t

[BOC]₂O

BOC—N H

BOC

BOC (IV)

Podle tohoto postupu byla pod atmosférou dusíku rozpuštěna sloučenina vzorce III (v množství 4,7 gramu, což představuje 15,8 mmolů), připravená podle shora popsaného stupně 2, ve 150 mililitrech dichlormethanu. Potom bylo přidáno 7,56 gramu (což představuje 34,7 mmolů) di-terc.-butyldiuhličitanu a získaná reakční směs byla promíchávána po dobu přes noc při teplotě místnosti. Potom byla tato reakční směs zkoncentrována za použití vakua, načež byla zpracována chromatograf ickým způsobem na 400 gramech silikagelu, přičemž jako rozpouštědla bylo použito směsi ethylesteru kyseliny octové a hexanu v poměru 50 : 50. Jednotlivé frakce byly monitorovány metodou chromatografie v tenké vrstvě (TLC) za použití směsi ethylacetát/hexan v poměru 50 : 50. Podíly obsahující produkt vzorce IV byly spojeny a zkoncentrovány za použití vakua, čímž byl získán požadovaný produkt ve formě oleje.

Výtěžek : 7,9 gramu.

^XH NMR (CDC1₃) δ
1,20 - 1,59 (m,	33H),	2,55 (m, 2H),
3,01 - 3,37 (m,	8H),	3,39 (t, J=6,6 HZ,	2H),
5,25 (br s, IH)	• 1
¹³C NMR δ :
17,21, 25,73,	25,94,	28,22, 28,24, 28,27,	37,91,
43,78, 44,24,	46,60,	47,95, 78,96, 79,57,	80,44,

155,01, 155,75, 155,98;

HR FABMS : pozorováno (Μ + H) m/z = 499,3501, C₂₅H₄₈N₄O₆ (pož. 499,3496).

Stupeň 4 :

BOC

BOC BOC (IV) ▼

BOC

BOC (V)

Podle tohoto provedení bylo ke 125 mililitrům kyseliny octové pod atmosférou dusíku přidáno 7,85 gramu (což představuje 15,8 mmolů) sloučeniny vzorce IV, která byla připravena postupem popsaným ve výše uvedeném stupni 3, a dále 6,5 gramu Pd(OH)₂/uhlíku. Tato reakční směs byla potom hydrogenována při tlaku 345 kPa po dobu 2 hodin. Použitý katalyzátor byl potom odstraněn filtrací a filtrační koláč byl dobře promyt kyselinou octovou.

V další fázi byl získaný filtrát zkoncentrován, vložen do 250 mililitrů dichlormethanu, tento podíl byl promyt dvakrát 100 mililitry 1 N roztoku hydroxidu sodného NaOH a usušen uhličitanem draselným K₂CO₃. Získaný roztok byl potom zfiltrován a filtrát byl zkoncentrován za použití vakua, čímž byla získána požadovaná sloučenina vzorce V .

Výtěžek : 7,8 gramu.

^XH NMR (CDC1₃) δ :

1,24 - 1,59 (m, 35H), 2,14 (s, 2H),

2,61 (t, J=6,7 Hz, 2H), 2,98 - 3,14 (m, 10H),

5,22 (br s, ÍH);

¹³C NMR (CDC1₃) δ :

25,89, 28,42, 31,38, 32,36, 37,55, 38,95, 43,95,

46,65, 79,34, 79,48, 155,65, 156,03;

HR FABMS : pozorováno (Μ + H) m/z = 503,3 804,

C₂₅H₅₁N₄O_e (pož. m/z 503,3809).

Stupeň 5 :

(V) +

BOC

BOC (VI)

Podle tohoto provedení byla sloučenina vzorce V (v množství 7,15 gramu, což představuje 14,2 mmolů), která byla připravena podle shora uvedeného stupně 4, rozpuštěna pod atmosférou dusíku ve 150 mililitrech methanolu. Potom bylo přidáno 1,03 mililitru (což představuje 15,6 mmolů) akrylonitrilu a reakční směs byla promíchávána po dobu 72 hodin při teplotě místnosti. Takto získaná reakční směs byla potom zkoncentrována, a dále rozředěna a zkoncentrována celkem třikrát za pomoci dichlormethanu a potom bylo použité rozpouštědlo odstraněno stripováním za použití vakua, čímž byla získána požadovaná sloučenina vzorce VI ve formě oleje.

Výtěžek : 7,65 gramu.

*H NMR (CDC1₃) 5 :

1,26 - 1,73 (m, 36H),	2,44	(t, J=6,7 Hz,	2H),
2,54 (t, J=6,7 Hz, 2H),	2,83	(t, J=6,7 Hz,	2H),
3,00 - 3,16 (m, 10H),	5,24	(br s, 1H).
¹³C NMR (CDC1₃) δ:
18,64, 25,84, 28,09,	28,43, 28	1,74, 37,84,	44,18,
44,68, 45,14, 46,29,	46,73, 46	i,85, 49,70,	78,90,

79,29, 79,46, 118,52, 155,84, 155,98.

HR FABMS : pozorováno (Μ + H) m/z = 556,4064, C₂₈H₅₄N₅O₆ (pož. m/z 556,4074).

Stupeň 6 :

(VI) + [BOC]₂O -►

BOC BOC

BOC*

CN

BOC (VII)

Podle tohoto provedení byla sloučenina vzorce VI (v množství 6,45 gramu, což představuje 11,6 mmolů), která byla připravena postupem podle shora uvedeného stupně 5, rozpuštěna pod atmosférou dusíku ve 125 mililitrech dichlormethanu. K takto získanému roztoku bylo potom přidáno 2,6 gramu (což je 12 mmolů) di-t-butyldiuhličitanu, přičemž takto získaná reakční směs byla potom promíchávána po dobu přes noc při teplotě místnosti. Potom byla tato reakční směs zkoncentrována za použití vakua a zpracována chromatografickým způsobem na 400 gramech silikagelu za použití ethylesteru kyseliny octové a hexanu v poměru 50 : 50 jako elučního činidla. Frakce obsahující produkt byly spojeny a tento podíl byl zkoncentrován, čímž byl získán požadovaný produkt vzorce VIII ve formě oleje.

Výtěžek : 6,6 gramu. ^XH NMR (CDC1₃) δ:

1,26 -	1,73 (m,	44H),		3,	03 - 3,24	(m, 14H),
3,42 (t	, J=6,6	Hz, 2H),		5,	25 (br s,	1H) .
¹³C NMR	(CDC1₃)	δ :
17,20,	25,88,	27,83,	28,	12,	28,35,	28,45, 28,77,
37,87,	43,91,	44,20,	44,	77,	46,27,	46,88, 78,94,
79,42,	79,50,	80,54,	117	»91,	, 154,96,	155,44, 155,74,

155,99.

HR FABMS : pozorováno (Μ + H) m/z = 656,4579, ^C33^H62^N5°8 (pož. m/z 656,4598).

Stupeň 7 :

BOC BOC

I I

(VIII)

Podle tohoto postupu bylo ke 150 mililitrům kyseliny octové pod atmosférou dusíku přidáno 6,6 gramu (což představuje 10,1 mmolu) sloučeniny VII, která byla připravena podle shora uvedeného stupně 6, a dále 6 gramů směsi Pd(OH)₂)/uhlík. Tato reakční směs byla potom hydrogenována při tlaku 345 kPa po dobu 2 hodin. Použitý katalyzátor byl potom odstraněn odfiltrováním a filtrační koláč byl řádně promyt kyselinou octovou. Získaný filtrát byl zkoncentrován, zbytek byl vložen do 200 mililitrů dichlormethanu, tento podíl byl promyt dvakrát 100 mililitry 1 N roztoku hydroxidu sodného a usušen uhličitanem draselným K₂CO₃. V další fázi byl tento roztok zfiltrován a filtrát byl zkoncentrován za použití vakua, čímž byla získána požadovaná sloučenina vzorce VIII. Výtěžek : 6,5 gramu.

^XH NMR (CDClj) δ :

1,28 - 1,71 (m, 46H), 2,16 (br s, 2H),

2,65 (t, J=6,7 Hz, 2H), 3,01 - 3,18 (m, 14H),

5,24 (br s, ÍH);

¹³C NMR (CDClj) δ:

25,85, 27,66, 28,45, 28,76, 39,10, 44,21, 44,91,

46,80, 79,27, 79,46, 155,41, 155,67, 155,99.

HR FABMS : pozorováno (Μ + H) m/z = 660,4914,

C₃₃H₆₆N₅°8 (POŽ. m/z 660,4911).

Stupeň 8 :

O

H

Podle tohoto provedení bylo 1,75 gramu (což odpovídá 10 mmolům) indoloctové kyseliny, 1,15 gramů (což je 10 mmolů) N-hydroxysukcinimidu a 2,06 gramu (což je 10 mmolů) dicyklohexylkarbodiimidu, přidáno pod atmosférou dusíku ke 75 mililitrům tetrahydrofuranu. Takto připravená reakční směs byla potom promíchávána při teplotě místnosti, přičemž asi po 5 minutách vznikla sraženina. Potom byla asi po 1,5 hodině tato sraženina odstraněna odfiltrováním, přičemž filtrační koláč byl promyt 75 mililitry tetrahydrofuranu a dále byl tento koláč usušen, čímž bylo získáno 1,84 gramu produktu. Získané filtráty byly spojeny, přičemž tento spojený podíl byl zkoncentrován, vložen do ethylesteru kyseliny octové a zfiltrován, přičemž filtr byl promyt ethylesterem kyseliny octové. Získaný filtrát byl zkoncentrován za vzniku pěnového produktu. Tento pěnový produkt byl potom triturován se 75 mililitry diethyletheru, čímž byl získán tvrdý gumovitý produkt. Potom bylo přidáno asi 30 mililitrů ethylesteru kyseliny octové a potom následoval přídavek ethyletheru. Podíl pevného produktu byl oddělen odfiltrováním, promyt diethyletherem a usušen pod atmosférou dusíku, čímž bylo získáno 1,74 gramu produktu vzorce IX. Při provádění tohoto postupu bylo zjištěno, že je možno získat další podíl 0,47 gramu produktu zpracováním matečného louhu petroletherem.

Stupeň 9 :

(X)

N-BOC

H

Při provádění postupu podle tohoto provedení byla sloučenina vzorce VIII (v množství 0,33 gramu, což představuje 5 mmolů), která byla připravena podle shora uvedeného stupně 7, rozpuštěna pod atmosférou dusíku v 10 mililitrech dichlormethanu za současného promíchávání, přičemž potom bylo přidáno 0,136 gramu (což je 5 mmolů) sloučeniny vzorce IX, která byla připravena postupem podle shora uvedeného stupně 8. Tato reakční směs byla potom promíchávána po dobu přes noc při teplotě místnosti. Potom byla získaná reakční směs zředěna na objem 35 mililitrů dichlormethanem, promyta 10 mililitry 0,5 N roztoku hydroxidu sodného NaOH, usušena uhličitanem draselným K₂CO₃ a zkoncentrována. Vzniklý koncentrát byl zpracován chromatografickým způsobem na silikagelu, přičemž jako elučního činidla bylo použito směsi ethylesteru kyseliny octové a hexanu v poměru 4:1. Frakce obsahující produkt byly zkoncentrovány, čímž bylo získáno 0,37 gramu produktu ve formě bílé pěny obsahující sloučeninu vzorce X s určitým podílem přítomného ethylesteru kyseliny octové. Stupeň 10 :

(X) [BOC]₂O

H ,N

BOC

N-BOC

H

BOC (XI)

Při provádění postupu podle tohoto provedení byla sloučenina vzorce X (v množství 0,37 gramu, což představuje 0,45 mmolů), která byla připravena podle shora uvedeného stupně 9, rozpuštěna pod atmosférou dusíku v 10 mililitrech dichlormethanu. Potom bylo přidáno 0,218 gramu (což je 1 mmol) di-t-butyldiuhličitanu, přičemž následoval přídavek 12 mililitrů (což odpovídá 0,1 mmolu)

4-(N,N-dimethylamino)pyridinu. Tato reakční směs byla potom promíchávána při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny a potom byla ponechána stát po dobu přes noc. Tato reakční směs byla potom zpracována chromatografickým způsobem na silikagelu, přičemž bylo jako elučního činidla použito ethylesteru kyseliny octové a hexanu v poměru 4:1, frakce obsahující produkt byly zkoncentrovány, čímž byl získán produkt vzorce XI ve formě bílé pěny.

Výtěžek : 0,32 gramu.

Stupeň 11 ;

(XI)

(xii)

Při provádění postupu podle tohoto provedení byla sloučenina vzorce XI (v množství 0,32 gramu, což představuje 0,35 mmolů), která byla připravena podle shora uvedeného stupně 10, přidána pod atmosférou dusíku k 15 mililitrům kyseliny trifluoroctové a tato směs byla potom promíchávána po dobu 15 minut. Získaná reakční směs byla potom zkoncentrována za použití vakua a triturována diethyletherem, čímž byl získán požadovaný produkt ve formě bílého prásku.

Výtěžek : 0,30 gramu.

Analogickým způsobem jako je uvedeno shora byla připravena N-BOC-aminová sloučenina (27) následujícího vzorce :

Boc Boc

Po provedení postupu podle výše uvedených stupňů 1 až 7 se získá N-BOC-aminová sloučenina vzorce VIII.

Stupeň 8a :

(VIII)

Boc Boc (XIII)

Podle tohoto postupu byla nitrilová sloučenina vzorce XIII připravena z N-BOC-aminové sloučeniny VIII podobným způsobem jako byla nitrilová sloučenina VI připravena z N-BOC-aminové sloučeniny V (viz. příklad 5, stupeň 5).

Výtěžek : 1,00 gram, což je 93 %.

^XH NMR (CDClj) 5:

1,26 - 1,66 (m, 47H),

2,56 (t, J=6,7 Hz, 2H),

2,45 (t, J=6,6 Hz, 2H), 2,85 (t, J=6,6 HZ, 2H),

3,01 -	3,30 (m,	14H),	5,25 (br s,	- IH);
¹³C NMR	(CDClj)	δ :
18,68,	25,92,	28,46,	28,48, 37,49,	44,19,
45,16,	46,73,	78,93,	79,32, 79,44,	118,70
155,61,	156,04	•

44,88,

155,46,

HR FABMS : pozorováno (Μ + H) m/z = 713,5191,

C₃₆H₆₉N₆O₈ (pož. m/z 713,5177).

Stupeň 9a :

(XIII)

(XIV)

Podle tohoto provedení byla N-BOC-nitrilová sloučenina vzorce XIV připravena z nitrilové sloučeniny XIII za použití postupu A s chráněním aminové skupiny.

Stupeň 10a :

Podle tohoto provedení byla N-BOC-aminová sloučenina (27) připravena hydrogenací N-BOC-nitrilové sloučeniny XIV podobným způsobem jako byla připravena N-BOC-aminová sloučenina VIII z N-BOC-nitrilové sloučeniny VII (viz. stupeň 7 v tomto příkladu).

Příklady 6 a 7

Při provádění postupu podle těchto příkladů se vycházelo z polyaminové sloučeniny (20) a vhodné R-octové (v případě, že m = 1) nebo karboxylové (v případě, že m = 0) kyseliny, přičemž bylo použito postupu typu Dl, po kterém následoval postup typu F a připraveny byly sloučeniny vzorce :

R(CH₂)_nCO[NH(CH₂)₃]₅NH₂ . 5 TFA

Příklad	m	R
6	0	ferrocen
7	1	3-indol

Příklady 8 až 29

Při provádění postupů podle těchto příkladů se vycházelo z polyaminové sloučeniny (27) a vhodné R-octové nebo karboxylové kyseliny, přičemž byly připraveny sloučeniny následujících vzorců :

R(CH₂)_nCO[NH(CH₂ )₃]₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NH₂ . 5 HC1 (za použití postupu E) nebo

R(CH₂)„CO[NH(CH₂)₃]₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NH₂ . 5 TFA (za použití postupu F), přičemž bylo použito postupů uvedených v následující tabulce.

Příklad	m	R	Postupy
8	0	ferrocene	Dl, potom F
9	0	2-pyridin	D3, potom F
10	0	3-pyridin	D3, potom F
11	0	4-pyridin	D3, potom F
12	1	2-pyridin	D3, potom F
13	1	3-pyridin	D3, potom F
14	1	4-pyridin	D3, potom F
15	0	2-chinolin	Dl, potom F
16	0	3-chinolin	D2, potom F
17	1	3-indol	Dl, potom E
18	1	3-(5-hydroxyindol)	D2, potom F
19	1	3-(4-hydroxyindol)	D2, potom E
20	1	3-(5-bromindol)	D2, potom F
21	1	3-(4-fluorindol)	D2, potom F
22	0	2-(5-fluorindol)	D2, potom F
23	1	2-(5-fluorindol)	D2, potom F
24	1	3-(5-methoxyindol)	D2, potom F
25	0	2-chinoxalin	D2, potom F
26	0	hydroxychinon	D2, potom F
27	0	4-resorcinol	D2, potom F
28	1	p-bifenyl	D4, potom F
29	1	2-naftalen	D2, potom F

Příklady 30 a 31

Při provádění postupů podle těchto příkladů se vycházelo z polyaminové sloučeniny (17) a ze vhodné R-octové nebo karboxylové kyseliny, přičemž byly připraveny za'pomoci postupu Dl, po kterém následoval postup F, sloučeniny následujícího vzorce : R(CH₂)_aCO[NH(CH₂)₃]₄NH₂ . 4 TFA

Příklad	m	R
30	0	ferrocen
31	1	3-indol

Příklady 32 a 33

Při provádění postupů podle těchto příkladů se vycházelo z polyaminové sloučeniny (14) a ze vhodné R-octové nebo karboxylové kyseliny, přičemž byly připraveny za pomoci postupu Dl, po kterém následoval postup F, sloučeniny následujícího vzorce : R(CH₂)„CO[NH(CH₂)₃]₃NH₂ . 3 TFA

Příklad	m	R
32	0	ferrocen
33	1	3-indol

Příklady 34 a 35

Při provádění postupů podle těchto příkladů se vycházelo z polyaminové sloučeniny (11) a ze vhodné R-octové nebo karboxylové kyseliny, přičemž byly připraveny za pomoci postupu Dl, po kterém následoval postup F, sloučeniny následujícího vzorce : R(CH₂)_bCO[NH(CH₂)₃]₂NH₂ . 2 TFA

	Příklad	m	R
	34	0	ferrocen
	35	1	3-indol
P I	•íklady	36 a 37

Při provádění postupů podle těchto příkladů se

vycházelo z polyaminové sloučeniny (7) a ze vhodné R-octové nebo karboxylové kyseliny, přičemž byly připraveny za pomoci postupu Dl, po kterém následoval postup F, sloučeniny následujícího vzorce : R(CH₂)_bCONH(CH₂)₃NH₂ . TFA
	Příklad m	R
	36 0	ferrocen
	37 1	3-indol

Příklady 38 a 39

Při provádění postupů podle těchto příkladů se vycházelo z polyaminové sloučeniny (23) a ze vhodné R-octové nebo karboxylové kyseliny, přičemž byly připraveny za pomoci postupu Dl, po kterém následoval postup F, sloučeniny následujícího vzorce : R(CH₂)_nCO[NH(CH₂)₃]₆NH₂ . 6 TFA

Příklad	m	R
38	0	ferrocen
39	1	3-indol

Příklady 40 a 41

Při provádění postupů podle těchto příkladů se vycházelo z polyaminové sloučeniny (26) a ze vhodné R-octové nebo karboxylové kyseliny, přičemž byly připraveny za pomoci postupu Dl, po kterém následoval postup F, sloučeniny následujícího vzorce :

R (CH₂) _BC0 (NH (CH₂) ₃ ] ₇NH₂ . 7 TFA

Příklad	m	R
40	0	ferrocen
41	1	3-indol

Příklad

Stupeň 1 :

NC

nh₂

NHBoc

Podle tohoto provedení byl k roztoku obsahujícímu N-kyanoethyl-1,4-diaminobutan (v množství 6,44 gramu, což představuje 0,0457 molu) v acetonitrilu (200 mililitrů) pod atmosférou dusíku přidán KF/Celite (v množství 11 gramů), přičemž potom následoval přídavek

N-(terč.-butoxykarbonyl)-3-brompropylaminu (v množství 10,87 gramu, což představuje 0,0457 molu), který byl proveden po kapkách během intervalu 7 hodin. Takto získaná reakční směs byla potom promíchávána po dobu 16 hodin při teplotě okolí a potom byla zahřívána při teplotě 70 'C po dobu 24 hodin a nakonec byla ochlazena, zfiltrována a zkoncentrována za použití vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v dichlormethanu CH₂C1₂ (200 mililitrů), promyt 1 N roztokem hydroxidu sodného ŇaOH (100 mililitrů), usušen a zkoncentrován za použití vakua, čímž byl získán surový produkt, který byl zpracován chromatografickým způsobem na silikagelu (jako elučního činidla bylo použito směsi CH₂Cl₂/MeOH v poměru 9:1), čímž byl získán uvedený rozvětvený nitrilový produkt.

Výtěžek : 3,32 gramu.

^XH NMR (CDC1₃) δ:

1,31 - 1,65 (m, 27H),	2,36 - 2,44 (m, 6H),
2,49 (t, J=6,6Hz, 2H),	2,61 (m, 2H),
2,90 (t, J=6,6HZ, 2H),	3,09 - 3,16 (m, 4H),
5,28 (br s, 2H);
¹³C NMR (CDC1₃) δ:
18,74, 24,60, 27,05,	27,96, 28,50, 39,52, 45,14,
49,07, 52,21, 53,76,	78,90, 118,79, 156,09.
HR FABMS : pozorováno	(Μ + H) m/z = 456,3549,

C₂₃H₄₆N₅O₄ (pož. m/z 456,3550).

Stupeň 2 :

NC

NHBoc

Podle tohoto postupu byl k roztoku obsahujícímu rozvětvenou aminovou sloučeninu připravenou podle shora uvedeného stupně 1 (v množství 150 miligramů, což představuje 0,33 mmolu) v dichlormethanu (5 mililitrů) pod atmosférou dusíku přidán di-terc.-butyldiuhličitan (v množství 78 gramů, což představuje 0,36 mmolu). Získaná reakční směs byla potom promíchávána po dobu přes noc, načež byla zkoncentrována za sníženého tlaku za vzniku surového produktu, který byl zpracován chromatografickým způsobem na silikagelu (jako elučního činidla bylo použito směsi CH₂Cl₂/MeOH v poměru 9:1), čímž byla získána požadovaná N-BOC-nitrilová sloučenina.

Výtěžek : 126 gramů, což je 69 %.

Stupeň 3 :

Boc

NHBoc

Podle tohoto provedení byla k roztoku obsahujícímu N-BOC-nitrilovou sloučeninu připravenou podle shora uvedeného stupně 2 (v množství 126 miligramů, což je 0,277 mmolu) přidána směs Pd(OH)₂/uhlík (v množství 200 miligramů), přičemž takto připravená reakční směs byla hydrogenována po dobu 2 hodin při tlaku vodíku 551,6 kPa, potom byla zfiltrována přes celit a zkoncentrována za použití vakua. Takto získaný surový produkt byl potom vložen do dichlormethanu (30 mililitrů) a tento podíl byl potom promyt 1 N roztokem hydroxidu sodného NaOH (dva podíly po 10 mililitrech), usušen uhličitanem draselným, zfiltrován a zkoncentrován za sníženého tlaku, čímž byla získána požadovaná N-BOC-aminová sloučenina

Výtěžek : 129 miligramů , což je 100 %.

Podle tohoto provedení byla N-BOC-aminová sloučenina, získaná podle shora uvedeného postupu ve stupni 3, v dichlormethanu (2 mililitry) spojena pod atmosférou dusíku s hydroxysukcinimidesterem indoloctové kyseliny (v množství 14,1 gramu, což představuje 0,05 mmolu). Takto získaná reakční směs byla potom promíchávána po dobu přes noc a potom byla zředěna dichlormethanem CH₂C1₂ (25 mililitrů). Organický extrakt byl potom usušen za pomoci uhličitanu draselného, zkoncentrován ve vakuu a zpracován chromatografickým způsobem na silikagelu (jako elučního činidla bylo použito směsi CH₂Cl₂/MeOH v poměru 9 : 1, a potom směsi CH₂Cl₂/MeOH/PrNH₂ v poměru 9 : 1 : 0,1), čímž byla získána požadovaná N-BOC-chráněná sloučenina

Výtěžek : 28 miligramů, což je 78 %.

Stupeň 5 :

Ν'

H

Podle tohoto postupu byla indolová sloučenina připravená postupem podle shora uvedeného stupně 4 (v množství 28 miligramů, což představuje 0,039 mmolu) rozpuštěna v kyselině trifluoroctové (3 mililitry) a potom byla tato reakční směs promíchávána po dobu 1 hodiny.

V dalším postupu byla tato reakční směs zkoncentrována za sníženého tlaku a triturována v diethyletheru, čímž byl získán požadovaný produkt.

Výtěžek : 19 miligramů, což je 56 %.

Příprava A

Podle tohoto postupu byl promíchán

3-brompropylamin.HBr (v množství 34,5 gramu, což je 157,6 mmolů) v 600 mililitrech Ν,Ν-dimethylformamidu. K tomuto roztoku bylo potom přidáno 34,4 gramu (což je 157,6 mmolů) di-terc.butyldiuhličitanu, přičemž potom následoval přídavek 32,3 mililitru (což předsavuje 236 mmolů) triethylaminu. Tímto způsobem se okamžitě vytvořila sraženina. Získaná reakční směs byla potom promíchávána po dobu přes noc. Potom byla tato reakční směs zředěna na « objem 1,5 litru ethylesterem kyseliny octové, promyta jednou 500 mililitry 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové, třikrát 500 mililitry vody, jednou solankou a potom byla usušena za pomoci síranu sodného Na₂SO₄. Po zkoncentrování byl takto získaný produkt chromatograficky zpracován na silikagelu (800 gramů) za použití směsi hexanu a ethylesteru kyseliny octové v poměru 4 : 1 jako elučního činidla, přičemž jednotlivé frakce byly monitorovány metodou chromatografie v tenké vrstvě TLC (KMnO₄/I₂).

Frakce obsahující produkt byly spojeny, spojený podíl byl zkoncentrován za použití vakua a potom byl tento podíl propláchnut dvakrát 50 mililitry dichlormethanu a vyčištěn za vysokého vakua, čímž byl získán požadovaný produkt.

Výtěžek : 25,8 gramu.

Claims

PATENTOVÉ

NÁROKY ro řx) rj z=. o C/x co -i

1. Způsob přípravy sloučenin obecného vzorce :

R-ÍCH^-CO-R’ ve kterém znamená ;

R pětičlenný až sedmičlenný karbocyklický systém nebo osmičlenný až jedenáctičlenný karbocyklický systém nebo libovolný z uvedených systémů substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující fluor, chlor, brom, hydroxyskupinu, alkylové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu CF₃, fenylovou skupinu, aminovou skupinu, alkylaminové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku a dialkylaminové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, m je 0 nebo 1,

R' představuje skupinu -[NH(CH₂)_n]_xNH₂, kde každé n nezávisle znamená 2 až 5, a x je 1 až 6, vyznačující se tím, že zahrnuje (a) reakci sloučeniny R se sloučeninou obecného vzorce :

BOC-NHÍCH^JNCBOCXCHyj, ₄N(B0C)H ve kterém znamená :

BOC t-butoxykarbonylovou skupinu, a

R, n a x mají stejný význam jako bylo uvedeno shora, v přítomnosti reakčního činidla na bázi karbodiimidu ve

ΊΟ spojení s katalyzátorem pro tvorbu amidové vazby v inertním reakčním rozpouštědle, a (b) odstranění t-butoxykarbonylové skupiny zpracováním s organickou nebo anorganickou kyselinou.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedené činidlo na bázi karbodiimidu se vybere ze souboru zahrnujícího dimethylaminopropyl, ethylkarbodiimid a dicyklohexylkarbodiimid a uvedený katalyzátor pro tvorbu amidové vazby se zvolí ze skupiny zahrnující hydroxybenzotriazol a hydroxysukcinimid.
3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že uvedeným inertním reakčním rozpouštědlem je dichlormethan a uvedenou organickou nebo anorganickou kyselinou je látka vybraná ze souboru zahrnujícího kyselinu trifluoroctovou a kyselinu chlorovodíkovou.
4. Způsob podle nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že v uvedených sloučeninách x je 5 a každé n nezávisle znamená 3 nebo 4.
5. Způsob podle některého z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že v uvedených sloučeninách R znamená fenylovou skupinu nebo fenylovou skupinu monosubstituovanou fluorem, chlorem, bromem nebo hydroxylovou skupinou OH nebo MeOH a m je 1.
6. Způsob podle některého z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že v uvedené sloučenině R' znamená skupinu - [ NH (CH₂) ₃ ] ₃NH (CH₂) ₄NH (CH₂) ₃NH₂.
7. Sloučenina obecného vzorce :

R/CH^-CO-R' nebo farmaceuticky přijetelné adiční soli s kyselinami odvozené od těchto sloučenin, ve kterém znamená :

R pětičlenný až sedmičlenný karbocyklický systém nebo osmičlenný až jedenáctičlenný karbocyklický systém nebo libovolný z uvedených systémů substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující fluor, chlor, brom, hydroxyskupinu, alkylové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu CF₃, fenylovou skupinu, aminovou skupinu, alkylaminové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku a dialkylaminové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, m je 0 nebo 1,

R' představuje skupinu -[NH(CH₂)_n]_xNH₂, kde každé n nezávisle znamená 2 až 5, a x je 1 až 6.
8. Sloučenina podle nároku 7, ve které x je 5 a každé n je nezávisle 3 nebo 4.
9. Sloučenina podle nároku 8, ve které R znamená fenylovou skupinu nebo fenylovou skupinu monosubstituovanou fluorem, chlorem, bromem, hydroxylovou skupinou OH nebo MeOH, a m je 1.
10. Sloučenina podle nároku 8, ve které R' znamená skupinu -[NH(CH₂)₃]₃NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NH₂.
11. Sloučenina obecného vzorce :

R-ÍCHjVCO-R' nebo farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami odvozené od těchto sloučenin, ve kterém znamená :

R pětičlenný až sedmičlenný karbocyklický systém nebo osmičlenný až jedenáctičlenný karbocyklický systém nebo libovolný z uvedených systémů substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující fluor, chlor, brom, hydroxyskupinu, alkylové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu CF₃, fenylovou skupinu, aminovou skupinu, alkylaminové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku a dialkylaminové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, m je 0 nebo 1,

R' představuje skupinu :

[(CH₂)_nNH]_yH

-[NH(CH₂)_n]_xN\ [(CH₂)_nNH]₂H kde každé n nezávisle představuje 2 až 5, x je O až 4, y a z každý nezávisle představuje 1 až 5, přičemž součet x a větší hodnoty z y a z je 1 až 5.
12. Sloučenina obecného vzorce :

R/CH^-CO-R' nebo farmaceuticky přijatelné adiční soli odvozené od těchto sloučenin, ve kterém znamená :

R pětičlenný až sedmičlenný karobcyklický systém nebo osmičlenný až jedenáctičlenný karbocyklický systém nebo libovolný z uvedených systémů substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující fluor, chlor, brom, hydroxyskupinu, alkylové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu CF₃, fenylovou skupinu, aminovou skupinu, alkylaminové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku a dialkylaminové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, m je 0 nebo 1,

R’ představuje skupinu :

/

-[NH(CH₂)_nl_xN\ (CH₂)_a[NH(CH₂)_b]y\

N[(CH₂)_nNHJ_zH (CH₂)_a[NH(CH₂)_b]/ kde všechny a jsou stejné, přičemž mohou být v rozmezí 2 až 5, všechny b jsou stejné, přičemž mohou být v rozmezí 2 v r· az 5, každé n je nezávisle v rozmezí od 2 do 5, x je v rozmezí od 0 do 3, všechny y jsou stejné, přičemž mohou být 0 nebo 1, z je v rozmezí od 0 do 3, a součet x + y + z je v rozmezí od 0 do 4.
13. Farmaceutický prostředek pro antagonizování excitačních aminokyselinových neurotransmiterů u savců, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 7 nebo farmaceuticky přijatelnou adiční sůl odvozenou od této sloučeniny v množství pro antagonizování excitačních aminokyselinovuch neurotransmiterů u savců a farmaceuticky přijatelnou nosičovou látku nebo ředidlo.
14. Farmaceutický prostředek pro antagonizování excitačních aminokyselinových neurotransmiterů u savců, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 13 nebo farmaceuticky přijatelnou adiční sůl odvozenou od této sloučeniny v množství pro antagonizování excitačních aminokyselinovuch neurotransmiterů u savců a farmaceuticky přijatelnou nosičovou látku nebo ředidlo.
15. Sloučenina podle nároku 7 pro přípravu léčiva k antagonizování excitačních aminokyselinových neurotransmiterů u savců.