CZ49199A3 - Způsob zjišťování stavu organismu stanovením peptidů - Google Patents

Způsob zjišťování stavu organismu stanovením peptidů Download PDF

Info

Publication number
CZ49199A3
CZ49199A3 CZ1999491A CZ49199A CZ49199A3 CZ 49199 A3 CZ49199 A3 CZ 49199A3 CZ 1999491 A CZ1999491 A CZ 1999491A CZ 49199 A CZ49199 A CZ 49199A CZ 49199 A3 CZ49199 A3 CZ 49199A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
molecular weight
organism
peptides
sample
low molecular
Prior art date
Application number
CZ1999491A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ294729B6 (cs
Inventor
Peter Schulz-Knappe
Michael Schrader
Hans-Georg Opitz
Wolf-Georg Forssmann
Original Assignee
Biovision Gmbh & Co. Kg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26028345&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ49199(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from DE1996132521 external-priority patent/DE19632521A1/de
Application filed by Biovision Gmbh & Co. Kg filed Critical Biovision Gmbh & Co. Kg
Publication of CZ49199A3 publication Critical patent/CZ49199A3/cs
Publication of CZ294729B6 publication Critical patent/CZ294729B6/cs

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6848—Methods of protein analysis involving mass spectrometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6842—Proteomic analysis of subsets of protein mixtures with reduced complexity, e.g. membrane proteins, phosphoproteins, organelle proteins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/24—Nuclear magnetic resonance, electron spin resonance or other spin effects or mass spectrometry
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
    • Y10T436/25375—Liberation or purification of sample or separation of material from a sample [e.g., filtering, centrifuging, etc.]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
    • Y10T436/25375—Liberation or purification of sample or separation of material from a sample [e.g., filtering, centrifuging, etc.]
    • Y10T436/255—Liberation or purification of sample or separation of material from a sample [e.g., filtering, centrifuging, etc.] including use of a solid sorbent, semipermeable membrane, or liquid extraction

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring And Recording Apparatus For Diagnosis (AREA)

Description

Oblast techniky
Předmětem předloženého vználezu je způsob zjišťování stavu organismu stanovením peptidů ve vzorku z organismu.
Dosavadní stav techniky
Pro zjišťování stavu organismu se používají různé analytické metody. Tak například při diagnostice vyšších organismů se u patalogických nálezů usiluje o nalezení příčin patologických změn, za účelem vyvinutí kauzální terapie. Dále je vyvíjena snaha seřazením genomů organismů a ustanovením genomů původního typu (Wildtyp-Genom) vyvinout referenční průměrný zdraavý organismus, aby bylo možno pomocí příslušné genové analýzy zjišťovat individuální odchylky, které mohou ukazovat na možný patogenní vývoj. Nevýhodou prvního metodického přístupu je, že nelze provádět diagnostiku bez příjímání hypotéz, neboť se provádí diagnóza, která je založena na předpokladech. Nevýhodou druhého způsobu je, že po dlouhou dobu není možné diagnostikovat důležité nebo dokonce všechny nemoci spojené s genetickkými dysfunkcemi. Další nevýhodou posledně uvedené metody může také být to, že mutace genu nevede nutně k vyjádření v příslušném fenotypu.
Podstata vynálezu « · I * · · · • ···· · · * ··· « · ♦ · · ···« · ·· · • · · ·♦· ·*· • · ·· ··
Bylo by tedy žádoucí poskytnout univerzálně použitelný diagnostický postup, který umožňuje vyhnout se popsaným nevýhodám a zejména provádět diagnostiku bez přijímání hypotéz. Diagnostický způsob by měl být kromě toho univerzálně použitelný, neměl by být omezen na více vyvinuté systémy, ale měl by být použitelný také pro zjišťování stavu nižších organismů. Měl by být snadno ustavitelný a proveditelný pomocí o sobě známých technik.
Cílem vynálezu je poskytnout takovýto způsob.
Tento technický problém je překvapivě vyřešen jednoduchým způsobem znaky nároku 1. Závislé nároky se týkají výhodných provedení způsobu podle vynálezu.
Způsob zjišťování stavu organismu podle vynálezu vychází z toho, že se vyšetřovanému organismu odebere vzorek. Vzorkem může být také celý organismus. Vzorek musí obsahovat nízkomolekulární peptidy, přičemž nevadí, když vedle nízkomolekulárních peptidů obsahuje také vysokomolekulární peptidy nebo proteiny. Nízkomolekulární peptidy se přitom podle vynálezu přímo zjišťují a charakterizují a slouží jako indikátor stavu organismu. Přitom je také možné přímým měřením zjišťovat jednotlivé peptidy nebo více peptidu nebo dokonce všechny nízkomolekulární peptidy, nacházející se ve vzorku a technicky měřitelné. Na rozdíl od obvyklých analytických nebo diagnostických metod, jako například gelové elektroforézy nebo dvoudimenzionální elektroforézy a například klinických diagnostických metod, se zde nevyšetřují vysokomolekulární struktury, jako například proteiny. Na rozdíl od známých diagnostických metod, jako například radioimonulogických zkoušek nebo jiných • » i ···· · · · · • *·>« · · φ ··· · ·<· ··· • · · · · · ··«· » ·· ♦· ·· ·· konkurenčních zkoušek pro měření peptidických hormonu a podobně, se podle vynálezu nízkomolekulární peptidy přímo technicky zjišťují, nikoliv nepřímo jako je tomu u uvedených metod. Jako referenční vzorek slouží rozdělení nízkomolekulárních peptidů v reprezentativním řezu de f i nováných kont ro1.
Při způsobu podle vynálezu mohou vyšetřované vzorky tkání nebo tekutin pocházet z organismu, jehož stav se vyšetřuje, nebo může být vzorkem organismus sám nebo jeho části. V případě vyšetřování nižších organismů s výhodou slouží jako vzorek organismus samotný. Jako nižší organismy přicházejí v úvahu zejména jednobuněčné, jako prokaryotické systémy nebo jednoduché eukaryotické systémy, například kvasinky nebo jiné mikroorganismy.
Podle vynálezu mohou nízkomolekulární peptidy, přicházející k měření, s výhodou molekulovou hmotnost nejvýše 30 000 Daltonů. Spodní mez není sama o sobě kritická, avšak tuto spodní mez nízkomolekulárních peptidů, zjišťovaných podle vynálezu, představují dipeptidy. Zvláště vhodné jsou molekulové hmotnosti nízkomolekulárních peptidů 100 až 10 000 Daltonů.
Je-li požadováno, například v důsledku změněného měřícího uspořádání, může být výhodné odstranit ze vzorku vysokomolekulární peptidy nebo proteiny jakož i jiné biopolymery, které mohou interferovat s měřením. To není třeba zejména tehdy, když použité měřící metody tyto peptidy s vyšší molekulovou hmotností nezachycují.
S výhodou se podle vynálezu pro zjišťování nízkomolekulárních peptidů používá hmotnové spektroskopie.
4 4 4 4 4 · 4 · · 9 • «·44 · · · 4·· 4 ··· 44«
I 4 · » · · •44 4 ·4 ·· ·· ··
Zcláště se přitom osvědčila takzvaná MALDI-metoda (Matrix Assisted Laser Desorpcion Ionization) hmotové spektroskopie. Používá-li se metoda hmotové spektrometrie, doporučuje se použít pro charakterizaci nízkomolekulárních peptidů data, stanivitelná hmotovou spektroskopií, jako například jejich molekulovou váhu. Je také možné, za jistých okolností, analyzovat jiné parametry, jako například náboj peptidu nebo charakteristický retenční čas na chromatografické koloně nebo fragmentový vzor nízkomolekulárního peptidu nebo kombinaci hmotnosti a náboje nízkomolekulárních peptidů.
Podle dalších otázek, které mohou být ještě spojeny se zjišťováním stavu organismu, může být výhodné vzorek rozdělit na více frakcí a pro zjištění stavu organismu analyzovat vzorky podle různých zadání nebo s různým technickým uspořádáním.
Jako organismus přicházejí zejména prokaryoty, eukaryoty, mnohobuněčné organismy, buňky z tkáňových kultur,buňky ze zvířat a lidí. Tak je podle vynálezu umožněno vyšetřovat stav geneticky změněných nebo transformovaných a/nebo upravených organismů. To může být výhodné zejména při kontrolních zkouškách transformovaných systémů pro zjištění, do jaké míry se v transformovaných organismech případně vyvinuly neočekávané nebo nežádoucí vlastnosti, například tím, že se tvoří peptidy, které ukazují ne nežádoucí nebo nečekané vlastnosti, jako například toxické vlastnosti.
Zejména může každá vědomá nebo nezáměrná manipulace (úprava) organismu jeho stav ovlivnit, ať je to v rámci podávání medikamentů, genové terapie, při infekcích, na pracovišti kontaktem s chemickými látkami, u pokusných • · « » « » · · · · ···· φ · · ·· · ··· • « ♦ · · » « ·««· * ·· ·· ·· ·* ·« * ··· zvířat, zejména transgenových zvířat a knock-out mutantů. Zejména při těchto pokusech se může kontrolovat, například prostřednictvím chronologického odběru vzorku z jednoho organismu před a v průběhu některého z výše uvedených opatření nebo prostřednictvím srovnání s neošetřenými kontrolními organismy, zda skutečně nastaly předpokládané, požadované změny ve stavu a zda kromě nich nebo místo nich nenastaly nepředpokládané, nežádoucí nebo také žádoucí změny, které se bez přijímání hypotéz zjišúují způsobem podle vynálezu.
Způsob podle vynálezu je tedy vhodný také například pro doplnění klinických studií, toxikologických vyšetřování při testování medikamentů všeho druhu, pro analýzu/zjišťování produktů odbourávání, pro identifikaci genových produktů.
Ve veterinární a humánní medicíně nabývá způsob podle vynálezu mimořádného významu tím, že umožňuje zjištění stavu příslušného organismu bez přijímání hypotéz. Neprovádí se tedy s předem přijatým názorem ověřovací test, nýbrž je možné opatřit správný celkový obraz stavu vyšetřovaného organismu. Způsob podle vynálezu, který je možné označit za diferenciální peptidový obraz, přitom vychází z toho, že ve zdravém organismu je přítomen určitý peptidový vzor, který může sloužit jako referenční standard. Jestliže se zaznamená peptidový stav individua a porovná se s referenčním vzorkem, získá se první známka možného patogenního stavu. Naleznou-li se odchylky, které zjištěné porovnáním s podobnými patogennními stavy z příslušných vzorků nemocných objektů, je možno přímo z analýzy identifikovat příslušnou nemoc prostřednictvím srovnání odchylek v peptidovém vzoru ze vzorku individua a přiřazením odchylek
I · » · ·*« ··· • · · «· · * » ···
Β * • ··· chorobnému obrazu příslušného onemocnění.
Podle vynálezu se přitom může postupovat zejména následovně. Pro výrobu referenčního vzorku se použijí nejprve ultrafiltráty z tělních tekutin a tkáňových extraktů. Při získávání peptidů a jejich rozdělení na frakce se získají například nízkomolekulární peptidové frakce. Charakterizace peptidových frakcí se může provádět napříkladě na základě retenčního chování a molekulární hmotnosti, které jsou stanovitelné pomocí chromatografie nebo hmotové spektroskopie. Použije-li se například ultrafiltrát pacientů, kteří trpí známým onemocněním, a srovná se s předem stanoveným spektrem zdravých referenčních objektů, je možné na základě odchylného vzoru přiřadit stavu peptidové směsi příslušné specifické onemocnění. Tento způsob se může použít také o sobě známým způsobem tak, že se například bezprostředně vyhodnocuje příslušný peptidový vzor indikující patogenní změny. V jednotlivém případě to dkonce může být peptid charakteristický pro příslušnou nemoc. Analyzuje-li se např. vzorek z jednoho pacienta vykazujícího určitý chorobný o příčině tohoto onemocnění, specifický peptid rovněž podrobit analýze podle vynálezu a při pozitivním výsledku sestavit příslušný plán terapie. Je samozřejmě možné, nejdříve pacientovi odebrat vzorek, způsobem podle vynálezu zaznamenat stav, a poté při stanovení přítomnosti odchylky ukazující na patogenní stav bud' prostřednictvím o sobě známých ověřovacích zkoušek provést kontrolních měření nebo provést kontrolní měření specifickým vyhodnocením indikátoru patogenního stavu.
obraz a existuje hypotéza je možno například tento
Peptidy se přitom mohou získávat způsobem odborníkovi známým, jako například ultrafiltrací příslušného výchozího »«« « · · · · · · · • ···· · « · ··· · ··* ·· • · · · · · · ·«·♦ « ·· ·· ·· ·· materiálu. Přitom se používají filtry s výstupní molekulární velikostí, která leží v oblasti pokryývané vynálezem, tedy mezi dipeptidy a maximálně 30 000 Daltony. Prostřednictvím vhodné volby příslušné membrány je možno volit také určité frakce molekulové hmotnosti.S výhodou se v rámci filtrace získává 0,2 ml až 50 1 filtrátu, který se případně hned po ukončení filtrace nastavuje zředěnou kyselinou solnou na hodnotu pH 2 až 4. Uvedená množství slouží zejména k vyšetřování nashromážděných referenčních vzorku zdravých peptidových markantů specifických pro nemoc pro vytvoření databanky peptidů.
vzorků, pro vytvoření objektů popř. pro určení
Peptidy přítomné ve filtrátu po ultrafiltraci se získávají adsorpcí na chromatografických materiálech, zejména kationtoměničích, jako například Fractogel, aniontoměničích, jako Fractogel TMAE a materiálech pro reverzní fázi, a následnou elucí s lineárními gradienty nebo stupňovitými gradienty. Pro další čištění se mohou popřípadě provádět další chromatograficé separace, zejména v reverzní fázi.
Zjištění peptidových frakcí se s výhodou provádí prostřednictvím hmotové spektrometrie, zejména MALDI-MS (matrix assisted laser desorption ionisation mass spectrometry) nebo ESI-MS (electro spray ionisation-MS). To jsou metody použitelné k analýze peptidů. Přitom se s výhodou pracuje s on-line připojením kapilární separace v reverzní fázi a hmotové spektrometrie (LC-MS spojení). Ze získaných dat se sestaví vícedimenzionální tabulky podle retenčního chování, molekulové hmotnosti a intenzity signálu jako výhodných hlavních parametrů. Mohou se však zjišťovat také jiné veličiny, měřitelné uvedenými metodami.
a a a ·« a«a a a « a a · ι · · » a * • ····«· a ··· • · · a a ···· a ·· · ·
Data o pacientech se známým základním onemocněním, získaná výše uvedenými kroky, se porovnávají se stejným způsobem získanými daty zdravé rferenční populace. Přitom se se stanoví jak kvalitativní změny (např. vznik nového peptidu nebo chybění peptidu), tak i kvantitativní změny (zvětšený popřípadě zmenšený výskyt jednotlivých peptidů). Tyto srovnávací analýzou definované cíle mohou být, je-li třeba, vyčištěny a identifikovány prostřednictvím metod chemie peptidu odborníkovi známých. Získané sekvenční informace se pak mohou porovnat s databankou proteinů a nukleových kyselin, lakož i následně s literárními daty. Relevance těchto peptidů vzhledem k vyšetřovanému onemocnění je ověřena funkcionálními studiemi a pozorováním na vhodných skupinách pacientů.
Příklady provedení
Příklad 1
Použití tělních tekutin, zde: krevní filtát (hemofiltrát, HF)
1. Získávání HF
HF se získává při arterio-vonózní nebo veno-venózní hemofiltraci technikami odborníkovi známými u vybraných pacientů nebo zkušebních objektů. Získávání HF se provádí způsobem, jaký se v zásadě provádí rutinně u pacientů s chronicky nemocnými ledvinami. Přes arteriální odvod a venózní přívod (arterio-venózní HF) nebo venózní odvod a venózní přívod (veno-venózní HF) se ktev pacientů vede s • · » · ·· ·♦· • · ·« ·· » 9 · · · · · * »··»«· « ··· « · ♦ » · «··· · ·· ·· podporou hemofiltrátového přístroje (např. Hemoprozessor, Sartorius, Gottingen; AK 10 HFM, Gambro, Hechingen) přes (např. Hemoflow F 60 nebo Hemoflow HF 80 S, Bad Homburg; Hemoflow FH 77 H a Hemoflow
HF 88 H, Gambro), který má výstupní molekulární velikost naž asi 30 kDa. Objem filtrátu odebraný pacientovi se substituuje roztokem elektrolytu (např. SH 01, SH 05, SH 22, SH 29, Schiwa, Glandorf).
hemofiltr Fresenius,
V rámci předloženého vynálezu se provádí diagnostická hemofiltrace s cílem získat od pacienta v průběhu hemofilttrace 1 až 30 1 HF. Hemofiltrát se pro zamezení proteolýzy ihned upraví zředěnou kyselinou (např. 1M HCI) na hodnotu pH mezi 2 a 4 a ochladí se na 4 °C.
2. Získávání HF-peptidů a separace na frakce
2.1. Extrakce peptidů stupňovitou elucí
1 hemofiltrátu se zředí deionizovanou vodou na vodivost 6 mS/cm a pomocí kyseliny solné se nastaví pH na 2,7. Hemofiltrát se pak uvede na chromatografickou kolonu. Po navázání HF-peptidú se navázané peptidy eluují při odstupňovaném pH. Přitom se použije 7 pufru s narůstajícím pH.
Chromatografické podmínky:
průtok při zachycování: 100 ml/min průtok při eluování: 30 ml/min detekce: 214, 280 nm kolona: Vantage (Amicon, Witten) 6 cm průměr x 7 cm plnící výška * 4 4 ·
444 444
4
44 • · 4 fr 4444 i * ♦ · • 4 444 • · 4
4· 44 náplňový materiál: Fraktogel TSK SP 650 M (Merck, Darmstadt) zařízení: BioCAD 250, Perspektivě Biosystems, WiesbadenNordenstadt.
puf r PH tlumící látka molarita
eluční pufr l 3,6 kyselina citrónová 0,1
eluční pufr 2 4,5 kyselina octová 0,1
eluční pufr 3 5,0 kyselina jablečná 0,1
eluční pufr 4 5,6 kyselina jantarová 0,1
eluční pufr 5 6,6 dihydrofosforečnan sodný 0,1
eluční pufr 6 7,4 fosforečnan sodný 0,1
eluční pufr 7 9,0 uhličitan amonný 0,1
Eluáty 1-7 se odděleně sbírají.
2.2. Druhá chromatografická separace
Eluáty 1 až 7 se podrobí chromatografií na koloně s reverzní fází.
Chromatografické podmínky:
průtok při zachycování: 10 ml/min průtok při eluování: 4 ml/min detekce: 214 nm kolona: ocelová kolona pro HPCL, 1 cm průměr x 12,5 cm plnící výška náplňový materiál: Source RPC 15 μτη (Pharmacia, Freiburg) zařízení: BioCAD, Perspektivě Biosystems, WiesbadenNordenstadt.
·»· *·*· ···· • ··« * · * ··· · ··· ··· • · · · · · · «··· · ·· ·· ·· ·
Eluát se sbírá ve 4ml frakcích.
3. Mapování peptidových frakcí
3.1.
Alikvotní množství množství frakcí získaných v 2.2. vnese do kapilární kolony pro reverzní fázi a gradientně se eluuje. Detekce se provádí pomocí UV-detektoru a on-line pomocí elektrospray-hmotového spektrometru.
Chromatografické podmínky:
průtok při zachycování: 20 ml/min průtok při eluování: 20 ml/min detekce: 220 nm kolona: C18 AQS, 3 μτη, 12 0 A, 1 mm průměr, 10 cm délka (YMC, Schermbeck) zařízení: ABI 140 B Duál solvent Delivery System pufr A: 0,06% kyselina trifluoroctová ve vodě pufr B: 80% acetonitril v A gradient: 0 % B až 100 % B běhen 90 min
On-line hmotová spektrometrie:
API III s elktrospray-intrface (Perkin-Elmer, Weitrestadt) pozitivní iontový mod měřící rozsah: m/z 300 až 2390 scanovací doba: 7 s scanovací okno: 0,25 m/z
Zpracování dat se provádí pomocí softwaru McSpec nebo
AAA · * A A A · · * • AAAA A A A AAA » AAA AAA • AAAA A A • AAA A AA AA AA «·
MultiView (Perkin Elmer).
3.2. MALDI MS měření jednotlivých frakcí
Alikvotni množství frakcí získaných v 2.2. se měří s různými matricovými látkami např. s přídavkem L-(-)fukózy pomoc í MALDI-MS.
Z primárních dat se sestaví vícedimenzionální tabulka zahrnující scanovací číslo, intenzitu signálu a po výpočtu hmoty násobně nabitých iontů scanu.
4. Srovnávací analýza
4.1. Identifikace novýchpeptidú, chybějících peptidů nebo peptidů se značně změněným množsvím
Prostřednictvím srovnání datových sad získaných v 3.3., které je možno nazývat peptidovými mapami, se stanoví kvalitativní rozdíly. Ve vztahu ke kontrolám a vzorků se použijí pro srovnání jednotlivé datové sady nebo také skupiny datových sad.
4.2. Peptidová chemická charakterizace identifikovaných cílů se používá různých separačních technik
Ze získaných výchozích materiálů (např. velkopreparace hemofiltrátu) se identifikované cíle vyčistí v množství, která dovolují identifikaci. K tomu odborníkovi známých chromatografických (reverzní fáze, výměna iontů, vylučovací preparativní chromatografie, hydrofobni interakce atd.), které se obecně používají k separaci směsí peptidů. Po každé chromatografické separaci se ve frakcích pomocí ESI-MS, • ϊ · · • ·♦· ··· • · ·· ·· r * v · » » · • · · · · · · • ···» · · » ··· • · · · ·
MM I ·· ··
MALDI-MS nebo také LC-MS cíle znovu identifikují. Tyto postupy se při měnění chromatografických parametrů opakují tak často, až je k dispozici čistý produkt s požadovanou specifikací, tzn. retenčním časem a molekulovou hmotností. Potom následuje určení dílčí nebo úplné sekvence aminokyselin nebo vzoru fragmentu. Následně se provede porovnání se známými databankami (Swiss-Prot a EMBL-Peptid und Nucleinsaure-Databank) s cílem identifikace dílčí nebo úplné sekvence nebo vzoru fragmentu. Neexistuke-li záznam v databence, následuje zjištění primární struktury.
Příklad 2
Použití tělních tekutin, zde: ascitická tekutina
1. Získávání ascitické tekutiny jako extravaskulární (maligních tumorech,
Ascitická tekutina se tvoří exsudát při různých onemocněních poruchách jater atd.). V rámci předloženého způsobu se punkcí získá 10 ml až 10 1 ascitické tekutiny a poté se pro zamezení proteolýzy ihned pomocí zředěné kyseliny (např. 1M HCl) nastaví pH na 2,0 až 4,0 a ochladí se na 4 °C. Po ultrafiltraci přes membránu z triacetátu celulózy s výstupní molekulární velikostí 30 kDa (Sartocon-Mini-Apparatur, Sartorius) se filtrát dále použije jako zdroj peptidů.
2. Získávání peptidů z ascitické tekutiny a separace na frakce
2.1. Extrakce peptidů stupňovitou elucí
1 filtrátu ascitické tekutiny se nastaví na pH 2,0 a • ♦ · · ··· ··· v » • · · • ··*· » • * «··· · v v v • · · • · • · ·· ··· ·· • « ·· ·· separuje se na preperativni koloně s reverzní fází.
Chromatografické podmínky:
průtok při zachycování: 40 ml/min průtok při eluování: 40 ml/min detekce: 214, 280 nm kolona: Waters Kartuschensystem, 4,7 cm průměr, 30 cm plnící výšky náplňový materiál: Vydac RP-C18, 15-18 μπι zařízení: BioCAD, Perspektivě Biosystems, WiesbadenNordenstadt.
pufr A: 0,1% kyselina trifluoroctová ve vodě pufr B: 80% acetonitril v A gradient: 0 % B až 100 % B v 3000 ml
Eluát se shromažďuje v 50ml frakcích.
Další průběh charakterizace odpovídá příkladu 1.
Příklad 3
Použití tělních tekutin, zde: moč
1. Získávání moči
Moč se získá přímo katetrem nebo jako spontánní moč pacienta v množství 0,5 až 10 1 ascitické tekutiny a poté se pro zamezení proteolýzy ihned pomocí zředěné kyseliny (např. 1M HCI) nastaví pH na 2,0 až 4,0 a ochladí se na 4 °C. Po ultrafiltraci přes membránu z triacetátu celulózy s výstupní molekulární velikostí 30 kDa (Sartocon-Mini-Apparatur, Sartorius) se filtrát dále použije jako zdroj peptidů.
• · · · ♦ · · · • t ··· · ··· ··· fc t » · · fcfc ·· ·· ·♦ • · * • ···· • · ··«· ·
2. Získávání peptidů z moči a separace na frakce
2.1. Extrakce peptidů stupňovitou elucí
1 filtrátu moči se vodou zředí na vodivost 6 mS/cm nastaví se pH 2,7, Filtrát moči se poté uvede na chromatografickou kolonu. Po navázání peptidů se navázané peptidy eluují gradientem kuchyňské soli.
Chromatografické podmínky:
průtok při zachycování: 100 ml/min průtok při eluování: 30 ml/min detekce: 214, nm kolona: Vantage (Amicon, Witten) 6 cm průměr x 7 cm plnící výšky náplňový materiál: měrek Fraktogel TSK SP 650 M zařízení: BioCAD 250, Perspektivě Biosystems, WiesbadenNordenstadt.
pufr A: 50 mM NaH2P04 pH 3,0 pufr B: 1,5 M NaCl v A gradient: 0 % B až 100 % B v 2000 ml
Eluát se shromáždí v 10 nádobách po 200 ml.
2,2. Druhá chromatografická separace
Frakce se podrobí chromatografii na koloně s reverzní fází.
Chromatografické podmínky:
«·* · » · · · · • »··· · « · ··· » ··· * * · · · · · ···· · ·· ·· ·· ·· ··· průtok při zachycování: 10 ml/min průtok při eluování: 4 ml/min detekce: 214 nm kolona: ocelová kolona pro HPCL, 1 cm průměr x 12,5 cm plnící výšky náplňový materiál: Source RPC 15 gm zařízení: BioCAD, Perspektivě Biosystems, WiesbadenNordenstadt.
pufr A: 0,1% kyselina trifluoroctová ve vodě pufr B: 80% acetonitril v A gradient: 0 % B až 100 % B ve 200 ml
Eluát se sbírá ve 4 frakcích.
Další průběh charakterizace odpovídá příkladu 1.

Claims (13)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Způsob zjišťování stavu organismu měřením peptidů ze vzorku z organismu, kterýžto vzorek obsahuje nízkomolekulární peptidy, jako indikátor stavu organismu, vyznačující se tím, že se přímo zjišťují a charakterizují nízkomolekulární peptidy, a porovnávají se s referenčním standardem.
  2. 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že vzorkem je tkáňový nebo tekutinový vzorek z organismu nebo organismus sám nebo jejich kombinace.
  3. 3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že nízkomolekulární peptidy použité pro měření mají molekulovou hmotnost nejvýše 30 000 Daltonů.
  4. 4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že nízkomolekulární peptidy použité pro měření mají molekulovou hmotnost alespoň takovou, která odpovídá dipeptidúm.
  5. 5. Způsob podle nároku 3 nebo 4, vyznačující se tím, že nízkomolekulární peptidy použité pro měření mají molekulovou hmotnost 100 až 10 000 Daltonů.
  6. 6. Způsob podle některého z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že před měřením nízkomolekulárních peptidů se vysokomolekulární peptidy odseparují nebo se neberou v úvahu při měření nebo vyhodnoceni vzorku.
    • · » * * * * » t · · • · · · · · · · · · · • ···* · · · ··· « *·· ··· • · · · · · · »«·* » ·· ·· ·· #·
  7. 7. Způsob podle některého vyznačující se tím, že zjišťování provádí hmotovou spektrometrií.
    z nároků 1 až 6, nízkomolekulárních se
  8. 8. Způsob podle některého z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že nízkomolekulární peptidy se charakterizují prostřednictvím měření molekulární hmotnosti.
  9. 9. Způsob podle některého z nároků 1 až 8, vyznačující se tím, že před měřením nízkomolekulárních peptidů se vzorek rozděluje na různé frakce a měření se provádí za různých podmínek.
  10. 10. Způsob podle některého z nároků 1 až 9, vyznačující se tím, že organismem jsou prokaryonty, eukaryonty, mnohobuněčné organismy, buňky z tkáňových kultur, buňky ze zvířat a lidí.
  11. 11. Způsob podle některého z nároků 1 až 10, vyznačující se tím, že vzorek pochází z geneticky změněných nebo transformovaných a/nebo upravených organismů.
  12. 12. Způsob podle některého z nároků 1 až 11, vyznačující se tím, že zjišťování stavu organismu se provádí pro vyšetření a záznam celkového stavu organismu, bez přijímání hypotéz, pro nalezení případných odchylek od referenčního stavu.
  13. 13. Způsob podle některého z nároků 1 až 11, vyznačující se tím, že zjišťování stavu transformovaných organismů se provádí pro vyšetření a záznam celkového stavu • · · ·
    Β · I «
    Β Β · ΒΒΒ Β • · * • · « • ···· t · ···· Β
    9 · · ·
    ΒΒΒ ΒΒΒ • Β
    ΒΒ ·Β organismu pro zjištění změn transformovaného organismu, bez přijímání hypotéz, pro zjištění výskytu peptidů spojených s transformací, kauzálně souvisejících se změnami látkové výměny.
CZ1999491A 1996-08-13 1997-08-13 Způsob in vitro zjišťování stavu organismu stanovením peptidů CZ294729B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE1996132521 DE19632521A1 (de) 1996-08-13 1996-08-13 Verfahren zur Gewinnung von Peptiden aus Köperflüssigkeiten und Geweben sowie Zellüberständen und zur Identifikation von krankheitsrelevanten Peptidmarkern
DE19725362 1997-06-16

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ49199A3 true CZ49199A3 (cs) 2000-04-12
CZ294729B6 CZ294729B6 (cs) 2005-03-16

Family

ID=26028345

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ1999491A CZ294729B6 (cs) 1996-08-13 1997-08-13 Způsob in vitro zjišťování stavu organismu stanovením peptidů

Country Status (16)

Country Link
US (1) US6875616B1 (cs)
EP (1) EP0922226B2 (cs)
JP (1) JP2001508864A (cs)
CN (1) CN1233326A (cs)
AT (1) ATE234469T1 (cs)
AU (1) AU720626B2 (cs)
CA (1) CA2263443C (cs)
CZ (1) CZ294729B6 (cs)
DE (1) DE59709517D1 (cs)
DK (1) DK0922226T3 (cs)
EA (1) EA001033B1 (cs)
ES (1) ES2191175T3 (cs)
IS (1) IS4971A (cs)
PL (1) PL186810B1 (cs)
PT (1) PT922226E (cs)
WO (1) WO1998007036A1 (cs)

Families Citing this family (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6936424B1 (en) 1999-11-16 2005-08-30 Matritech, Inc. Materials and methods for detection and treatment of breast cancer
DE10021737C2 (de) * 2000-05-04 2002-10-17 Hermann Haller Verfahren und Vorrichtung zur qualitativen und/oder quantitativen Bestimmung eines Protein- und/oder Peptidmusters einer Flüssigkeitsprobe, die dem menschlichen oder tierischen Körper entnommen wird
US6602855B2 (en) 2001-04-30 2003-08-05 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1449 daltons
US20040198950A1 (en) 2001-04-30 2004-10-07 George Jackowski Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1518 daltons
US6703366B2 (en) 2001-04-30 2004-03-09 George Jackowski Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1,896 daltons
US7008800B2 (en) 2001-04-30 2006-03-07 Artemis Proteomics, Ltd. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1077 daltons
US6627607B2 (en) 2001-04-30 2003-09-30 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1845 daltons
US6617308B2 (en) 2001-04-30 2003-09-09 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1865 daltons
US6627606B2 (en) 2001-04-30 2003-09-30 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1465 daltons
US20020160420A1 (en) * 2001-04-30 2002-10-31 George Jackowski Process for diagnosis of physiological conditions by characterization of proteomic materials
US6627608B2 (en) 2001-04-30 2003-09-30 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1206 daltons
US7314717B2 (en) 2001-04-30 2008-01-01 Nanogen Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1562 daltons
US6620786B2 (en) 2001-04-30 2003-09-16 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having molecular weight of 2937 daltons
US6890763B2 (en) 2001-04-30 2005-05-10 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1350 daltons
US7087435B2 (en) 2001-04-30 2006-08-08 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 2753 daltons
US6620787B2 (en) 2001-04-30 2003-09-16 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 2267 daltons
US6677303B2 (en) 2001-04-30 2004-01-13 Syn X Pharma Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1097 daltons
US6593298B2 (en) 2001-04-30 2003-07-15 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1690 daltons
US7294688B2 (en) 2001-04-30 2007-11-13 Nanogen Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1348 daltons
US20020160533A1 (en) 2001-04-30 2002-10-31 George Jackowski Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular of weight of 1525 daltons
US7015004B2 (en) 2001-11-23 2006-03-21 Syn X Pharma, Inc. Inter-alpha trypsin inhibitor biopolymer marker indicative of insulin resistance
US7049397B2 (en) 2001-04-30 2006-05-23 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1211 daltons
US6693080B2 (en) 2001-04-30 2004-02-17 Syn X Pharma Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1521 daltons
US6756476B2 (en) 2001-04-30 2004-06-29 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 2021 daltons
US6599877B2 (en) 2001-04-30 2003-07-29 Syn X Pharma, Inc. Biopolymer marker indicative of disease state having a molecular weight of 1020 daltons
DE10123711A1 (de) * 2001-05-15 2003-02-27 Wolfgang Altmeyer Verfahren zur Bestimmung der Herkunft biologischer Materialien
US7132244B2 (en) * 2001-11-21 2006-11-07 Syn X Pharma, Inc. Betaine/GABA transport protein biopolymer marker indicative of insulin resistance
US7179610B2 (en) 2001-11-23 2007-02-20 Nanogen Inc. Complement C3 precursor biopolymer markers indicative of insulin resistance
US7314762B2 (en) 2001-11-21 2008-01-01 Nanogen, Inc. Apolipoprotein biopolymer markers indicative of insulin resistance
US7179605B2 (en) 2001-11-23 2007-02-20 Nanogen Inc. Fibronectin precursor biopolymer markers indicative of alzheimer's disease
US7122327B2 (en) 2001-11-23 2006-10-17 Nanogen Inc. Biopolymer markers indicative of type II diabetes
US7135297B2 (en) 2001-11-23 2006-11-14 Nanogen Inc. Protein biopolymer markers indicative of insulin resistance
US7052849B2 (en) 2001-11-23 2006-05-30 Syn X Pharma, Inc. Protein biopolymer markers predictive of insulin resistance
US7097989B2 (en) 2001-11-23 2006-08-29 Syn X Pharma, Inc. Complement C3 precursor biopolymer markers predictive of type II diabetes
US7026129B2 (en) 2001-11-23 2006-04-11 Syn X Pharma, Inc. IG lambda biopolymer markers predictive of Alzheimers disease
US7074576B2 (en) 2001-11-23 2006-07-11 Syn X Pharma, Inc. Protein biopolymer markers indicative of alzheimer's disease
US20030100014A1 (en) * 2001-11-23 2003-05-29 George Jackowski Apolipoprotein biopolymer markers predictive of type II diabetes
AU2002336845A1 (en) * 2001-11-23 2003-06-10 Syn.X Pharma, Inc. Globin biopolymer markers indicative of insulin resistance
US7094549B2 (en) 2001-11-23 2006-08-22 Syn X Pharma, Inc. Fibronectin biopolymer marker indicative of insulin resistance
US6890722B2 (en) 2001-11-23 2005-05-10 Syn X Pharma, Inc. HP biopolymer markers predictive of insulin resistance
US7179606B2 (en) 2001-11-23 2007-02-20 Syn X Pharma, Inc. IG heavy chain, IG kappa, IG lambda biopolymer markers predictive of Alzheimer's disease
US7125678B2 (en) * 2001-11-23 2006-10-24 Nanogen, Inc. Protein biopolymer markers predictive of type II diabetes
JP2006522340A (ja) 2003-04-02 2006-09-28 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド 質量分析データの分析法
DE10341193A1 (de) * 2003-09-06 2005-03-31 Mosaiques Diagnostics And Therapeutics Ag Vorrichtung und Verfahren zur quantitativen Auswertung der in einer Körperflüssigkeitsprobe enthaltenden Polypeptide sowie Marker zur Erkennung von pathologischen Zuständen
US20090035797A1 (en) * 2004-10-15 2009-02-05 Hancock William S Detection of Disease Associated Proteolysis
WO2009016431A1 (en) * 2007-08-01 2009-02-05 Digilab, Inc. Sample preparation method and apparatus
CN102272601B (zh) * 2008-10-31 2014-09-17 生物梅里埃公司 采用鉴定剂分离和表征微生物的方法
CN102317789B (zh) * 2008-10-31 2014-08-27 生物梅里埃公司 利用质谱法分离、表征和/或鉴定微生物的方法
US10059975B2 (en) * 2008-10-31 2018-08-28 Biomerieux, Inc. Methods for the isolation and identification of microorganisms
ES2821376T3 (es) * 2012-03-30 2021-04-26 Bd Kiestra Bv Selección automática de microorganismos e identificación usando MALDI

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5537944A (en) * 1978-09-09 1980-03-17 Seiichi Shibata Diagnosis chemical and diagnosis method of kidney disease
WO1994002623A1 (en) * 1992-07-15 1994-02-03 University Of South Florida Blood levels of cck peptides relative to panic disorder treatment
US5492834A (en) * 1993-07-09 1996-02-20 Beckman Instruments, Inc. Method of sample preparation for urine protein analysis with capillary electrophoresis
DE4427531A1 (de) * 1994-08-04 1996-02-08 Forssmann Wolf Georg Humanes zirkulierendes beta-Defensin hBD-1
JP3579549B2 (ja) * 1995-10-24 2004-10-20 株式会社トクヤマ 糖尿病または糖尿病合併症用マーカーとしての使用

Also Published As

Publication number Publication date
AU720626B2 (en) 2000-06-08
AU4298897A (en) 1998-03-06
CA2263443C (en) 2004-03-30
DK0922226T3 (da) 2003-07-07
PL186810B1 (pl) 2004-02-27
EP0922226A1 (de) 1999-06-16
WO1998007036A1 (de) 1998-02-19
EP0922226B1 (de) 2003-03-12
EA001033B1 (ru) 2000-08-28
US6875616B1 (en) 2005-04-05
ATE234469T1 (de) 2003-03-15
PT922226E (pt) 2003-07-31
IS4971A (is) 1999-02-10
JP2001508864A (ja) 2001-07-03
DE59709517D1 (de) 2003-04-17
EA199900196A1 (ru) 1999-06-24
CA2263443A1 (en) 1998-02-19
ES2191175T3 (es) 2003-09-01
CZ294729B6 (cs) 2005-03-16
PL331612A1 (en) 1999-08-02
EP0922226B2 (de) 2008-06-25
CN1233326A (zh) 1999-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ49199A3 (cs) Způsob zjišťování stavu organismu stanovením peptidů
JP6596555B2 (ja) 癌療法を示すためのｓｒｍアッセイ
CA2823195C (en) Cmet protein srm/mrm assay
JP6670288B2 (ja) 化学療法標的に対するｓｒｍアッセイ
KR101645841B1 (ko) 인간 폐조직 병변의 지표가 되는 인간 혈청 내 단백질의 동정
JP6612414B2 (ja) Ｐｄ−ｌ１に対するｓｒｍアッセイ
EP3144394A1 (en) Truncated her2 srm/mrm assay
JP6081912B2 (ja) ｃ−Ｓｒｃ選択反応モニタリングアッセイ
CA2823337C (en) Her3 protein srm/mrm assay
JP2011058863A (ja) 慢性腎臓病判定用血清マーカー、及び、その検出方法、装置
US10718780B2 (en) SRM/MRM assay for the tyrosine-protein kinase receptor UFO(AXL) protein
KR20190080973A (ko) GTPase KRas 단백질(KRas)에 대한 SRM/MRM 검정
US12292450B2 (en) Examination method for dementia or risk thereof
KR20190095523A (ko) 세린/트레오닌-단백질 키나제 수용체 B-raf(BRAF)에 대한 SRM/MRM 검정
Stanley et al. Clinical proteomics and technologies to define and diagnose heart disease
KR102014694B1 (ko) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 8(cd30) 단백질에 대한 srm/mrm 검정
CN107923916A (zh) 成纤维细胞生长因子受体2（fgfr2）蛋白质的srm/mrm测定
US20190285647A1 (en) SRM/MRM Assays For CD56 And CHGA Proteins

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20080813