CZ5594A3

CZ5594A3 - Somatostatin polypeptides, process of their preparation and their utilization as medicaments

Info

Publication number: CZ5594A3
Application number: CZ9455A
Authority: CZ
Inventors: Rainer Dr Albert; Helmut Dr Macke
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1993-01-12
Filing date: 1994-01-11
Publication date: 1994-07-13
Also published as: EP0607103A2; FI940109L; EP0607103A3; IL108308A0; NO940080D0; SK2094A3; HUT66294A; JPH06234792A; CA2113121A1; FI940109A0; FI940109A7; NZ250653A; NO940080L; AU678778B2; KR940018397A; HU9400058D0; AU5309394A

Description

Vynález se týká polypeptidú, způsobu jejich výroby, farmaceutických přípravků, které je obsahují, a jejich použití jako léčiva, například pro ošetření nádorů pozitivních na receptor somatostatinu nebo jako zobrazovacích činidel pro diagnostiku in vivo.

Dosavadní stav techniky

GB-A-2,225,579 popisuje somatostatinové peptidy nesoucí alespoň jednu chelatotvornou skupinu, která může být značena pro diagnostické a terapeutické použití in vivo.. Tyto sloučeniny se mohou vázat na receptory somatostatinu, například exprimované nebo v nadměrné míře exprimované nádory nebo metastázami.

Podstata vynálezu ř|·

I i

Vynález se týká nových ligandů somatostatinových peptidů.,. _ nesouc í.ch__al.es.O.oň_ lednu., chelatot-vomou—skupinu—vybranou— ze souboru zahrnujícího bifunkční N₄-chelatotvornou skupinu vhodnou zejména pro značení pomocí technecia, rhodia, mědi, kobaltu nebo rhenia a bi funkční chelatotvornou skupinu na bázi kyseliny polyamino-polykarboxylové, zejména přizpůsobenou pro značení pomocí india nebo yttria, přičemž je tato chelatotvorná skupina navázána na aminoskupinu, která podstatně nenarušuje nebo nezabraňuje navázání takto modifikovaného peptidů na receptor. Chelatotvorná skupina může být navázána k somatostatinovému peptidů bud přímo nebo nepřímo prostřednictvím spojovací skupiny.

Vynález popisuje sloučeninu obecného vzorce I

X-HN-P (I) ve kterém

X představuje zbytek vybraný ze souboru zahrnujícího

a) chelatotvornou skupinu obecného vzorce X₂

ve kterém symboly R₂₁ az R₂₈ nezávisle na sobě představují vždy atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 atomu uhlíku nebo alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 atomů uhlíku substituovanou hydroxylovou skupinou, jeden ze symbolu R₂₉alkylovou skupinu a R₃₀ znamená atom vodíku, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo skupinu chránící aminoskupinu a druhý z

představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, s má hodnotu 2, 3 nebo 4, představuje dvojvaznou skupinu, a

Y_I znamená jednoduchou vazbu nebo spojovací skupinu, a

b) zbytek obecného vzorce X₂ [R^— CH, - R₂ - NH - Yj - <*₂>

ve kterém

R₁ představuje bifunkční chelatotvornou skupinu odvozenou od polyamino-polykarboxylové kyseliny nebo jejího anhydridu a nesoucí zbytek vzorce -CH₂-R₂-NH-Y₂ na terciárním atomu uhlíku

R₂ znamená alkylenovou skupinu obsahující 1 až 3 “á'tomý“uhrí'l<u 'ňebo^ópříĚýšrdď^ubštítuÓvanou' fenylenovou skupinu, a

Y₂ představuje karbonylovou skupinu nebo spojovací skupinu obsahující na jednom konci karbonylovou skupinu a na druhém konci methylenovou skupinu nebo na obou koncích karbonylovou skupinu, a

P-NH- znamená N-koncový zbytek somatostatinového peptidu obecného vzorce P-NH₂.

/1

Tyto sloučeniny jsou v textu dále označovány jako ligandy podle vynálezu.

Termín somatostatinový peptid” označuje v přírodě se vyskytující- somatostatin (tetradekapeptid.) a. jeho analogy nebo deriváty.

Termín deriváty nebo analogy, jak je zde používán, označuje libovolný cyklický polypeptid nebo polypeptid s přímým řetězcem odvozený od v přírodě se vyskytujícího tetradekapeptidu somatostatinu, ve kterém byla jedna nebo několik aminokyselinových jednotek vynechána nebo/a nahrazena jedním nebo několika aminokyselinovými zbytky nebo/a ve kterém byla jedna nebo několik funkčních skupin nahrazena jednou nebo několika jinými funkčními skupinami nebo/a byla jedna nebo několik skupin nahrazena jednou nebo několika jinými isosterickými skupinami. Obecně tento termín zahrnuje všechny modifikované deriváty nebo analogy v přírodě se vyskytujícího peptidů somatostatinu, které vykazují kvalitativně podobné účinky jako nemodifikovaný peptid somatóstatin, například se vážou na receptory somatostatinu.

Cyklické analogy somatostatinu, analogy somatostatinu s přemostěným kruhem a analogy somatostatinu s přímým řetězcem jsou známými sloučeninami. Tyto sloučeniny a jejich příprava je popsána v evropském patentu 29 579, 215 171, 203 031 a 214 872.

Výhodnými ligandy podle vynálezu . jsou sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém P-NH- představuje zbytek obecného vzorce (a)

CH -S-Y. ' ' Y, -S-CH, .........

I ^{2 la} t

-R-NH-CH-CO-B-C-Lys-E-NH-CH-CO-G (a) ve

R

Y_la

B

Λ----τ----c kterém představuj e

a) zbytek L- nebo D-fenylalaninu popřípadě substituovaný na kruhu atomem fluoru, atomem chloru, atomem bromu, nitroskupinou, aminoskupinou, hydroxylovou skupinou, alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo/a alkoxylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku,

b) zbytek v přírodě se vyskytující nebo v přírodě se nevyskytující alfa-aminokyseliny odlišný od zbytku definovaného výše pod bodem a) nebo zbytek odpovídající D-aminokyseliny, nebo

c) dipeptidový zbytek, ve kterém jsou jednotlivé aminokyselinové zbytky stejné nebo rozdílné a jsou vybrány ze zbytků definovaných výše pod bodem a) nebo/a

b) .

a Y_2a představují společně přímou vazbu nebo Y_:a a Y_2anezávisle na sobě znamenají vždy atom vodíku, představuje zbytek fenylalaninu popřípadě substituovaný na kruhu atomem halogenu, nitroskupinou, aminoskupinou, hydroxylovou skupinou, alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo/a alkoxylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku (včetně pentafluoralaninu)_, _nebo zbytek beta-naftylalaninu, ______________ znamená zbytek (L)-tryptofanu nebo (D)-tryptofanu popřípadě alfa-N-methylovaný a popřípadě substituovaný na benzenovém kruhu atomem halogenu, nitroskupinou, aminoskupinou, hydroxylovou skupinou, alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo/a alkoxylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku,

E představuje zbytek threoninu, šeřinu, valinu, fenylalaninu, isoleucinu nebo zbytek kyseliny aminoisomáselné nebo aminomáselné, a

G představuje skupinu obecného vzorce

kde

R₇ představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku

R_lo znamená atom vodíku nebo zbytek fyziologicky přijatelného, fyziologicky hydrolyžovatelného esteru,

R_n představuje atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, fenylovou skupinu nebo fenylalkylovou skupinu obsahující 7 až 10 atomů uhlíku,

R₁₂ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -CH{R_i3)-X₃, ·

R_n znamená hydroxymethýlovou skupinu nebo skupinu vzorce -(CH₂)₂-OH, -(CH₂)₃-OH Či -CH(CH₃)OH, nebo představuje substituent naváťz-a-ný - na·· atom·· alfa-uhlíku v přírodě se vyskytující nebo v přírodě se nevyskytující alfa-aminokyseliny (včetně vodíku) ,

X₃ představuje skupinu vzorce

-C00R₇, -CH₂OR_1o nebo -CO-N ^R15 kde

R₇ a R₁₀ mají shora uvedené významy

R₁₄ představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku a

R_1S znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, fenylovou skupinu nebo fenylalkylovou skupinu obsahující 7 až 10 atomu uhlíku·, a

R_1S představuje atom vodíku nebo hydroxylovou skupinu, s tou podmínkou, že pokud R₁₂ představuje skupinu vzorce -CH(R₁₃)-X₃, znamená R_n atom vodíku nebo methylovou skupinu, přičemž zbytky 3 a E jsou v L-konfiguraci a zbytky v poloze 2 a'7 ' j'sóu‘v' (L)- nebo (D)-konfiguraci.

Halogenem je výhodně fluor, chlor nebo jod, výhodněji *13 fluor.

Ve zbytku obecného vzorce (a) jsou výhodné následující významy obecných symbolu, a to bud jednotlivě nebo v libovolné kombinaci nebo subkombinaci:

1.1. Pokud má R význam uvedený- v bodu a)·, představuje výhodně a’) zbytek L- nebo D-fenylalaninu nebo tyrosinu. Ještě výhodněji a') znamená zbytek L- nebo D-fenylalaninu.

1.2. Pokud má R význam uvedený v bodu b) nebo c) , je uvedený zbytek s výhodou lipofilní. Výhodnými zbytky z bodu b) jsou b') zbytky alfa-aminokyselin obsahující uhlovodíkový postranní řetězec, například alkylovou skupinu se třemi, výhodně se čtyřmi, nebo s více atomy uhlíku, například až se sedmi atomy uhlíku, nebo naftylmethylovou skupinu, nebo heteroarylový postranní řetězec, napříkld pyridylmethylovou- skupinu nebo indol-3-ylmethylovou skupinu, přičemž jsou tyto zbytky v L- nebo .D-konfiguraci. Výhodnými zbytky z bodu c) jsou dipeptidové · zbytky, ve kterých jsou jednotlivé aminokyselinové zbytky stejné nebo rozdílné a jsou vybrány ze zbytků definovaných výše pdo bodem a') a b') .

1.3. Nejvýhodněji má R význam uvedený jako a), zejména význam a').

2. B znamená B', kde B' představuje zbytek fenylalaninu nebo tyrosinu.

3. C znamená C‘, kde C představuje zbytek (D)-tryptofanu.

4. E znamená E‘, kde E' představuje zbytek šeřinu, valinu nebo threoninu, zejména threoninu.

5. G znamená G', kde G' představuje skupinu vzorce.........

/

-CO-N \

t zejména skupinu vzorce

-CO-N

^CH(8₁₃)-X₃ í

(v kterémžto případě R_u představuje atom vodíku nebo* methylovou skupinu). V posledně uvedeném případě je zbytek vzorce -CH(R₁₃)-X₃ výhodně v L-konfiguraci.

6.1. R_u výhodně znamneá atom vodíku.

6.2. Jako substituent navázaný na atom alfa-uhlíku v přírodě¹se vyskytující nebo v přírodě se nevyskytující aminokyseliny (t.j. vzorce H₂N-CH(R₁₃j-COOH) , představuje R₁₃ výhodně hydroxymethyl ovou skupinu, skupinu vzorce -CH(CH₃)-OH, -(CH₂)₂-OH či -(CH₂)₃-OH, isobutylovou skupinu, butylovou skupinu, naftylmethylovou skupinu nebo indol-3-ylmethyloyou __skupinu._ Zejména__ znamená hydroxymethylovou skupinu nebo skupinu vzorce __________ -CH(CH₃) -OH.................. -......- .................-...... ·

i.

6.3., X₃ představuje výhodně skupinu vzorce $5·

-CO-N ^R14 / ¹⁴ nebo -CH₂-OR₁₀, zejména vzorce -CH₂-OR₁₀, a R₁₀ znamená výhodně atom vodíku nebo esterový zbytek vybraný ze skupiny zahrnující formylovou skupinu, alkylkarbonylovou skupinu obsahující 2 až 12 atomu uhlíku, fenylkarbonylovou skupinu obsahující 8 až 12 atomu uhlíku a benzoylovou skupinu. Nej výhodně ji představuje R.. atom vodíku.

7. Y_u a Y_2a výhodně společně představují přímou vazbu.

Následující zbytky jsou příklady zbytku obecného vzorce (a) :

I I

-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol

I-1.

-(D)Phe-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH₂

I--1

-(D)Phe-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-TrpNH₂

.....i—-1

-(D)Trp-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH₂ i-:-1

-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH₂

-3-(2-Naphthyl)-(D)Ala-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH₂

1--^:'-1

-3-(2-Naphthy 1) - (D) Ala-Cys-Tyr- (D)Trp-Lys-Val-Cys- 3-Nal-NH₂ ,--- i

-3- (2-Naph tyl) - (D) Ala-Cy s- ^-Nal- (D)Trp-Lys-Val-Cy s-ThrNH₂

.....r~-.. :—....... .. i

-(D) Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-0-Nal-NH₂

LI

Dalšími výhodnými ligandy podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém P-NH- představuje zbytek vzorce (b) nebo (c)

-Cys-Phe-Phe-(D)-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys-ol ( b )

I [ ~Cys-His-His-Phe-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH (c)

Rozumí se, že skupina -Z-Y₁ v Xj je navázána na jeden, z: uhlíkových atomů skupiny -[CH,]_S místo atomu vodíku.

Ve zbytku obecného vzorce X_:, je alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku ve významu libovolného ze symbolů R₂₁ až R_2e výhodně alkylová skupina obsahující 1 až 3’ atomy uhlíku, zejména methylová skupina. Alkylovou skupinou,, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku substituovanou hydroxylovou·’ skupinou je výhodně alkylová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku substituovaná hydroxylovou skupinou, zejména hydroxymethylová skupina nebo hydroxyethylová skupina. Nejvýhodněji představuje každý ze symbolů R₂₁ až R₃₀ atom vodíku.

Příklady chránících skupin ve významu symbolu R₃₀ jsou

-----např rklad' uvedeny ’ v“’Pro tec'Ci v'e^_'Gřbůps'' irT Ořgáh'íč^— Sýňtfiěs i’š',

T. W. Greene, J. Wiley and Sons, New York (1981), 219 - 287,' například acylová skupina, jako je acetylová skupina, methoxysukcinilová skupina, hydroxysukcinilová skupina nebo benzoylová skupina popřípadě substituovaná na fenylovém kruhu například p-methoxykarbonylovou skupinou, p-methoxylovou skupinou nebo p-nitroskupinou; alkoxykarbonylová skupina, jako je terč.butyloxykařbonylová skupina; arylmethoxykarbo12 nylová skupina, jako je 9-fluorenylmethoxykarbonylová skupina nebo benzyloxykarbonylová skupina popřípadě substituovaná na fenylovém kruhu p-methoxylovou skupinou, p-nitroskupinou, atomem chloru v poloze para nebo m-fenylovou skupinou; arylmethylová skupina, jako je benzylová skupina popřípadě substituovaná na kruhu p-methoxylovou skupinou, p-nitroskupinou nebo atomem chloru v poloze para; nebo arvlsulfonylová skupina, jako je fenylsulfonylová skupina popřípadě substituovaná na kruhu p-methylovou skupinou nebo p-methoxylovou skupinou, nebo naftylsulfonylová skupina popřípadě substituovaná na kruhu například aminoskupinou nebo dialkylaminoskupinou obsahující v každé z alkylových částí 1 až 4 atomy uhlíku.

Výhodně představuje jeden ze symbolu R₂₉ a . R_3Q atom vodíku nebo methylovou skupinu, ještě výhodněji znamená každý ze symbolů R₂₉ a R₃₀ atom vodíku;.

P

Mezi příklady významů Symbolu Z patří zbytky obecného vzorce -(ZJ_t-Z₂, kde Z₃ představuje alkylenovou skupinu obsahující 1 až 6 atomů . uhlíku; , alkylenovou skupinu obsahující 1 až 6 atomů uhlíku navázanou na. atom uhlíku pomocí atomu kyslíku nebo skupiny -NH-; nebo skupinu vzorce (CH₂)_k-O-, kde k má hodnotu 0, 1, 2 nebo 3; t je číslo o hodnotě 0 nebo 1 a skupina ve významu symbolu Z₂ je odvozená od skupiny schopné reagovat s terminální aminoskupinou somatostatinového peptidů, v případě, že Y₃ představuje jednoduchou vazbu, nebo se sloučeninou poskytující skupinu Y_1Z v případě, že Y_t znamená spojovací skupinu, například od skupiny vzorce -NCS nebo karboxylové skupiny či jejího funkčního derivátu, například halogenidu, anhydridu nebo hydrazidu kyseliny.

Z s výhodou představuje skupinu odvoženou od skupiny vzorce

-CH

NCS, zejména pokud Y_: znamená jednoduchou vazbu.

Mezi příklady Y_t ve významu spojovací skupiny patří například zbytek vzoce (b)

-z₃-r₅-x₄- (b) kde 4,

Z₃ představuje dvojvaznou skupinu odvozenou od funkčního zbytku schopného kovalentně reagovat s funkčním zbytkem ze kterého je odvozena skupina označená Z ,

Z V¹

X₄ znamena dvojvaznou skupinu odvozenou od funkčního zbytku schopného kovalentně reagovat s koncovou aminoskupinou somatostatinového peptidu, a

R_s představuje alkylenovou skupinu obsahující 1 až 6 atomů uhlíku popřípadě přerušenou jedním ' nebo několika heteroatomy nebo zbytky vybranými ze skupiny zahrnující atom kyslíku, atom síry, karbonylovou skupinu, skupinu vzorce -NHCO-, 'Níálkylj' -CO“ obsahující v^-ál’kýTóvéČásti 1 až 4 atomy uhlíku, -NH- a -N(alkyl)- obsahující v alkylové částí 1 až 4 atomy uhlíku; alkylenovou skupinu obsahující 1 až 6 atomů uhlíku substituovanou hydroxylovou skupinou; alkenylenovou skupinu obsahující 2 až 6 atomů uhlíku; popřípadě substituovanou cykloalkylenovou skupinu, skupinu vzorce -CH-; nebo zbytek obecného vzorce (α,) I i n

....-, .

iA-’»)' •-Au ·*14

-(¾ )-

(ο_χ) kde symboly m' a n' nezávisle na sobě představují vždy číslo o hodnotě 0, 1, 2 nebo 3 kruh A je popřípadě substituován, a

R_s představuje zbytek jako je navázán na alfa-uhlíku v přírodě se vyskytující nebo v přírodě se nevyskytující alfa-aminokyseliny.

Příklady významu symbolu R₆ zahrnují například zbytky navázané na alfa-uhlíku aminokyselin Ala, Leu, Ile, Val, Nle, Lys nebo Orn.

Pokud symbol R_s znamená substituovanou cykloalkylenovou skupinu nebo představuje nebo obsahuje substituovaný kruh A, je výhodně substituován až třemi substituenty vybranými ze skupiny zahrnující atom halogenu, hydroxylovou skupinu, alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku a alkoxylovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku. Výhodně je cykloalkylenový zbytek nebo kruh A nesubstituován.

Symboly Z₃ a X₄ mohou nezávisle na sobě představovat například vždy karbonylovou skupinu nebo thiokarbonylovou skupinu. Z₃ múze představovat též například skupinu vzorce -NH-. Mezi vhodné příklady zbytku obecného vzorce (b) patří například sukcinylová skupina, zbytek beta-alaninu a dvojvazný zbytek odvozený od- 6--amino.kapronové kyseliny.,

Y_t výhodně představuje jednoduchou vazbu.

Ve zbytku obecného vzorce X₂ představuje Rj výhodně bifunkční chelatotvornou skupinu odvozenou od polyamino-polyoctové kyseliny nebo jejího anhydridu, například diethylentriamin-pentaoctová kyselina (DTPA), makrocyklická sloučenina jako je 1,4,7,10-tetraazacyklododekan-N,N',NN'''-tetraoctová kyselina (DOTA), 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan-N,N¹,N'',N¹¹¹-tetraoctová kyselina (TETA) nebo 1,4,7,10-tetraazacyklotridekan-N,N¹,N’',N' ''-tetraoctová kyselina (TRITA). Rj může být kromě zbytkem vzorce -CH₂-R₂-NH-Y₂ dále substituován například alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku.

Výhodněji R₃ představuje chelatotvornou skupinu odvozenou od DTPA, 4-methyl-DTPA nebo DOTA.

Pokud R₂ představuje substituovanou fenylenovou jc r’ý* skupinu, muže nést až tři substituenty vybrané ze skupiny zahrnující atom halogenu, hydroxylovou skupinu, alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku a alkoxylovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku. Výhodně R₂ představuje f nesubstituovanou fenylenovou skupinu. ’ $

Pokud Y₂ představuje spojovací skupinu, jak je uvedeno výše, může znamenat například skupinu vzorce -CO-CH₂-,

-CO-(CH₂)₂-, -Cří₂-CO-, -(CH₂)₂-CO-, nebo zbytek obecného vzorce <b’)

-CO-R_S-CO- (b¹) ve kterém má R₅ shora definovaný význam.

Vhodným příkladem zbytku obecného vzorce (b¹) je dikarbonylový zbytek dikarboxylové kyseliny, například sukcinylová skupina.

Ligandy podle vynálezu mohou existovat například ve volné formě nebo ve formě soli. Mezi soli patří adični soli s kyselinami, například s organickými kyselinami, polymerními kyselinami nebo anorganickými kyselinami, například hydrochloridy a acetáty.

Vynález též zahrnuje způsob výroby ligandů podle vynálezu, které lze vyrobit pomocí analogie známých způsobů.

Ligandy podle vynálezu lze vyrobit například tak, že se:

a) odstraní alespoň jedna chránící skupina přítomná ve sloučenině obecného vzorce I v chráněné formě, nebo že se

b) spolu spojí dvě peptidové jednotky pomocí amidické vazby, kdy každá z těchto jednotek obsahuje alespoň jednu aminokyselinu nebo aminoalkohol v chráněné nebo nechráněné formě, a jedna z nich obsahuje zbytek X, přičemž amidická vazba se vytvoří takovým způsobem, že se získá žádaná aminokyselinová sekvence, a poté se popřípadě uskuteční stupeň a) postupu, nebo že se

c) spolu spojí chelatotvorné Činidlo nesoucí popřípadě funkční zbytek schopný poskytnout Y₂ nebo spojovací skupinu Y_t, a žádaný somatostatinový peptid v chráněné nebo nechráněné formě, takovým způsobem, že se zbytek X naváže na koncovou aminoskupinu peptidu, a poté se popřípadě uskuteční stupeň a), nebo že se

d) spolu spojí chelatotvorné činidlo a žádaný somatostatinový peptid v chráněné nebo nechráněné formě, . přičemž tento peptid nese na své koncové aminoskupině funkční -zby-fe-ek schopný- .poskytnout skupinu. Ý, ..nebo spojovací skupinu Y_;, takovým způsobem, že se zbytek X naváže na koncovou aminoskupinu peptidu, a poté se popřípadě uskuteční stupeň a), nebo že se

e) odstraní funkční skupina nechráněného nebo chráněného peptidu nesoucího zbytek X nebo se přemění na jinou funkční skupinu tak, že se získá jiná nechráněná nebo chráněná sloučenina obecného vzorce I a v posledně uvedeném případě se uskuteční stupeň a) postupu, a takto získaný ligand se izoluje ve volné formě nebo ve formě soli.

Výše uvedené reakce lze provést analogicky se známými způsoby, například jak je popsáno v následujících příkladech. Kde je to v těchto reakcích požadováno, mohou se pro funkční skupiny, které se neúčastní rakce, použít chránící skupiny/’ které jsou vhodné pro použití v případě peptidu nebo * žádaných chelatotvorných skupin. Termín chránící skupina může též zahrnovat polymerní pryskyřici, která má funkční skupiny.

Peptidový fragment nesoucí zbytek X a používaný v bodě

b) lze připravit reakcí peptidového fragmentu obsahujícího alespoň jednu aminokyselinu v chráněné nebo nechráněné formě s chelatotvorným činidlem, jak je uvedeno v bodech c) nebo d) postupu.

Somatostatinový peptid nebo jeho fragment nebo aminokyselinu nesoucí funkční zbytek schopný poskytnout Y₂nebo Y_x pro použití jako výchozího materiálu v bodech b) nebo

d) postupu lze připravit reakcí peptidu, fragmentu nebo aminokyseliny____se sloučeninou... .poskytující.. .Y₂... nebo- Y₁₇- například s omega-aminokarboxylovou kyselinou, dikarboxylovou kyselinou nebo omega-formylkarboxylovou kyselinou, například s kyselinou vzorce NH₂-R₅-COOH, kyselinou jantarovou, kyselinou adipovou, kyselinou glyoxylovou nebo s jejich funkčním derivátem.

Chelatotvorné činidlo nesoucí funkční zbytek schopný poskytnout Y, nebo Y₁ používané jako výchozí materiál v bodě

b) nebo c) postupu lze připravit reakcí chelatotvorného činidla se sloučeninou poskytující Y₂ nebo Y_1Z například jak je uvedeno výše.

Sloučeniny, ve kterých Y₂ představuje karbonylovou skupinu, lze připravit za použití výchozích materiáu získaných pomocí reakce s fosgenem.

Funkčními deriváty karboxylových nebo diakrboxylových kyselin jsou míněny například anhydridy, halogenidy kyselin, estery atd.

V souladu s bodem e) postupu lze například sloučeninu obecného vzorce I, ve kterém každý ze symbolů Y₂ a Y₂představuje atom vodíku, oxidovat na sloučeninu obecného vzorce I, ve kterém Υ_Σ a Y₂ společně tvoří přímou vazbu.

Ligandy podle vynálezu ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelných solí jsou cenné sloučeniny. ‘ V souladu s dalším provedením vynálezu mohou ligandy podle vynálezu tvořit komplexy s nuklidem, například s nuklidem emitujícím záření gama, pozitronové záření, záření alfa nebo beta, nebo s nuklidy s Augerovými e'-kaskádami.

V souladu s tím vynález popisuje též ligandy podle vynálezu, jak jsou definovány výše, které jsou v komplexu s nuklidem {zde označované jako cheláty podle vynálezu), ve volné formě nebo ve formě soli, jejich výrobu a jejich použití pro diagnostické a terapeutické ošetření in vivo.

Ligandy obecného vzorce I, ve kterém X představuje chelatotvornou skupinu X! výhodně tvoří komplexy s izotopem t-echnecia, rhodia-, mědi., kobaltu, nebo . rhenia,. například s ’^9mTc, ^mRe, ^mRe, ^:05Rh, ⁵⁷Co, ^S4Cu, nebo ⁶⁷Cu, výhodně s ^99mTc.. Ligandy obecného vzorce I, ve kterém X znamená’ chelatotvornou skupinu X₂ s výhodou tvoří komplexy s radiolanthanidem, zejména s ^11!In, ⁹⁰Y, ^U0La, ¹⁶¹Tb, ¹⁶⁹Er, ^m3i, ^!53Sm, ^S4Cu, ⁶⁷Cu, ²¹¹At, ^mAg, ³²P, ^5ICr, ^S7Ga, ⁷¹Ge, ¹⁶⁹Yb, výhodněji s nuklidem i·' emitujícím alfa nebo beta záření, ne jvýhodně ji s ⁹⁰Y.

Cheláty podle vynálezu lze připravit reakcí ligandu se sloučeninou poskytující odpovídající nuklid, například se solí kovu, výhodně se solí rozpustnou ve vodě. Reakci lze provádět pomocí analogie se známými postupy, například jak popsali D. E. Trontner, W. A. Válket, T. J. Hoffmann a kol.,

Int. J. Appl. Radiat. Isot. 1984, 35 (6), 467 - 70. Tc lze použít v oxidované formě, například jako ^99mTc-pertechnát, který muže tvořit komplexy za redukčních podmínek.

Výhodně se tvorba komplexu ligandu provádí při pH, při, ,λ kterém je ligand podle vynálezu stabilní. . 4

-t*Alternativně muže být nuklid dodán do roztoku jako '^? komplex s inermediárním chelatotvorným činidlem, například chelatotvorným činidlem, které tvoří chelátový komplex, který 4 zajišťuje rozpustnost nuklidu při fyziologickém pH ligandu,, ale který 'je méně termodynamicky stabilní než chelát. Jako. 4 příklady takových intermediárních chelatotvorných činidel lze uvést 4,5-dihydroxy-l,3-benzendisulfonovou kyselinu (Tiron), citrát, vinan a glukoheptonát. V případě takového postupu nuklid vyměňuje ligand.

Výše uvedené reakce lze účelně púrovádět za podmínek, ___________které., .umožňují., „vyhnout.- - se ....kontaminaci-—st-opam-i-· -kovu-.---Pro----------— -- snížení účinků stop kovu se výhodně využívá destilovaná “delonřzováná ' voda, ulťráčišta ' činidla,' radioaktivita bez ’ přidávání nosičů atd.

Cheláty podle vynálezu mohou existovat například ve volné formě nebo ve formě soli. Mezi soli patří adiční soli s kyselinami, například s organickými kyselinami, polymerními kyselinami nebo anorganickými kyselinami, například hydrochloridy a acetáty.

Cheláty podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelné soli vykazují farmaceutickou aktivitu, a j.so.u proto., užitečné bud jako zobrazovací činidla, například pro vizualizaci akumulace 'receptoru somatostatinu, například v případě nádoru a metastáz pozitivních na receptor somatostatin, zánětlivých chorob a poruch autoimunity vykazujících receptory somatostatinu, tuberkulosy nebo odmítnutí orgánu po transplantaci, v případě, že jsou v komplexu s nuklidem emitujícím gama záření nebo pozitronové záření, například s ^iuln, ^99mTc neo ⁶⁸Ga, nebo jako radiofarmaka pro in vivo ošetření nádorů a metastáz pozitivních na receptor somatostatin, v případě, že jsou v komplexu s nuklidem emitujícím alfa nebo beta záření, nebo s nuklidem s Augerovými e-kaskádami, například s ⁹⁰Y, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁸⁸Re, o čemž svědčí standardní testy.

Ligandy podle vynálezu a cheláty podle vynálezu zejména vykazují afinitu k receptorům somatostatinu, kterou lze stanovit při testování jejich vazby prováděném jak popsali J. C. Reubi, Life Sc. 36, 1829 (1985) a C. Bruns a kol. v Biochem. J., 265, 39 (1990).

Je pozorováno, Že cheláty podle vynálezu, zejména cheláty s ⁿⁱIn, ^S8Y, ⁹⁰Y nebo ^99l”Tc, se vážou s dobrou afinitou na receptory somatostatinu při hodnotách pK; přibližně od 8 do 11.

Afinitu chelátů podle vynálezu k receptorům somatostatinu lze též pozorovat pomocí testování in vivo, podle standardních způsobů testování, například jka je popsáno v G3-A-2 ;- 2-2-5-,-5·7·9 . Například-u -sloučeniny . .z .příkladu. .2 .do.chází k akumulaci v nádoru ve výši 1,9 + 0,4 % injikované dávky na g (η = 6) za 4 hodiny po injekci krysám s exokrinním nádorem pankreatu.

Po podání chelátu podle vynálezu, například chelátu s ^nlIn, ⁸⁶Y, nebo ^99mTc v dávce od 1 do 5 _zug / kg ligandu značeného 0,1 5 mCi nuklidu, výhodně 0,1 až 2 mCi, se stane místo nádoru detekovatelné společně s orgány, kde v podstatě probíhá exkrece. Cheláty, zejména- takové, ve kterých X znamená X₂, vykazují vysokou stabilitu v séru a vysokou akumulaci v nádorových tkáních ve srovnání s normálními orgány.

V souladu s tím vynález zahrnuje v řadě specifických nebo alternativních provedení též:

1. Použití chelátu podle vynálezu pro in vivo detekci akumulace receptoru somatostatinu v pacientovi a zaznamenání lokalizace receptoru na které se tento chelát zaměřuje.

Cheláty podle vynálezu pro použití při způsobu in vivo detekce podle vynálezu jsou cheláty, které jsou v komplexu s nuklidem emitujícím gama záření nebo pozitronové záření, zejména s techneciem, rheniem, indiem nebo mědí, výhodněji s ^99mTc, ^mIn nebo ^8fSY.

Cheláty podle vynálezu pro použití jako zobrazovacích činidel v bodě (1) lze podávat intraperitoneálně, nebo s výhodou intravenosně, například ve formě injikovatelných roztoků nebo suspenzí, výhodně v jediné injekci.

Vhodná dávka se samozřejmě., mění. v.....závislosti-, -na například ligandu. Vhodná dávka pro injekci se nachází v rozmezí, které umožní zobrazení pomocí fotoscannovacích postupů známých v oboru.

Cheláty podle vynálezu lze s výhodou podávat v dávce obsahující 0,1 až 50 mCi stabilně chelatovaného nuklidu, výhodně 0,1 až 30 mCi; výhodněji činí 2 až 30 mCi na _zumol ligandu, zejména v případě, že nuklidem je ^99r'Tc. Chelaty s ^H1In nebo ^B6Y lze podávat v dávce 0,1 až

... 10 mCi..

Uvedený rozsah dávky může být od 1 do 200 ,ug chelátu, například pokud X znamená X_t, značeného například 2 až 30 mCi ^99n,Tc, nebo 1 až 20 ,ug chelátu, například pokud X znamená X₂, značeného například 1 až 10 mCi ^ulIn nebo

Β6γ

Obohacení cheláty v místě akumulace receptoru somatostatinu lze sledovat odpovídajícími zobrazovacími technikami, například za použití zobrazovacích přístrojů nukleární medicíny, například scanneru, gama-kamery, rotační gama-kamery, PET, přičemž jsou tyto přístroje s výhodou napojeny na počítač. Cheláty podle vynálezu, zejména cheláty s ^lslTb, mohou být též užitečné v chirurgii nádorů pozitivních na receptor somatostatin řízené radioaktivitou.

Cheláty podle vynálezu s indiem nebo techneciem jsou v podstatě vylučovány ledvinami.

2. Použití chelátu podle vynálezu pro in vivo ošetření nádorů- a metastáz pozitivních na receptor somatostatin.

Cheláty podle vynálezu pro použití v in vivo ošetření podle vynálezu jsou cheláty v komplexu s nuklidem emitujícím alfa nebo beta záření nebo s nuklidem s Augerovými e’-kaskádami, například jak je popsáno výše, výhodně s ⁹⁰Y.

Dávky používané při terapeutickém využití vynálezu se · samozřejmě- -měn-í v-· závislosti .například., .na. konkrétní, ošetřované poruše, například objemu nádoru, konkrétním použitém chelátu a žádané terapii. Obecně se dávka vypočítá na základě distribuce radioaktivity do jednotlivých orgánu a pozorovaného cílového příjmu. Chelát emitující beta záření může být podáván několikrát během doby 1 až 3 týdnů. Jednotlivé dávky mohou být od 0,1 do 20 ,ug chelátu, například pokud X znamená X₂, značeného 10 až 40 mCi například ’°Y.

Uvedený rozsah dávky je od 0,1 do 20 ,ug chelátu, ve kterém X znamená X₂, značeného například 10 až 40 mCi ⁹⁰Y, nebo od 1 do 200 ,ug chelátu, ve kterém X znamená X_lř značeného například 0,1 až 1,5 mCi Re.

Cheláty podle vynálezu pro použití v bodě (2) lze podávat libovolnou běžnou cestou, zejména intraperitoneálně nebo intravenosně, například ve formě injikovatelných roztoků nebo suspenzí. Lze je též výhodně podávat pomocí infuze, například infuze od 30 do 60 minut. V závislosti na místě nádoru je lze podávat tak blízko k místu nádoru, jak je to možné, například pomocí katetru. Vybraný způsob podání může záviset na farmakokinetickém chování použitého chelátu a narychlosti vylučování.

Cheláty podle vynálezu lze podávat ve volné formě nebo ve farmaceuticky přijatelné formě. Takové soli lze připravit běžným způsobem a vykazují stejný druh aktivity jako volné sloučeniny.

_________Cheláty. ..podle vynálezu. .pro .použití— ve--způsobu· -podlevynálezu lze výhodně připravit (t.j. radioaktivně značit - žádaným-nukl-idem·)*·' krátce' před' podáním pacientovi

Cheláty podle vynálezu mohou být vhodné pro zobrazování nebo ošetřování nádorů, jako jsou nádory hypofýzy, gastroenteropankreatické nádory, nádory centrálního nervového systému, prsu, prostaty, nádory vaječníkú nebo tlustého střeva, malobuněčná rakovina plic, paragangliomy, rakovina ledvin, rakovina kůže, neuroblastorny, feochromocytorny, medulární nádory štítné žlázy, myelomy, lymfomy, Hodgkingova a ne-Hodkgkinsova nemoc, kostní nádory a jejich metastázy.

Podle dalšího -proveden-í--vynález popisuje, farmaceutický prostředek obsahující ligand nebo chelát podle vynálezu ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné soli, společně s jedním nebo několika farmaceuticky přijatelnými nosiči nebo ředidly. Takové prostředky lze vyrobit běžným způsobem.

Prostředek podle vynálezu může být též obsažen v oddělených baleních s návodem pro smíchání ligandu s žádaným nuklidem a pro podání výsledného chelátu. Může být též nabízen ve formě dvojitého balení, to jest jako jediný obal obsahující oddělené dávky ligandu a žádaného nuklidu s návodem pro jejich smíchání a pro. podání chelátu. V jednotkových dávkovačích formách může být přítomno ředidlo nebo nosič.

Hodnoty [a] _o ²⁰ v následujících příkladech jsou nekorigované. Používané zkratky mají následující význam:

Boc terc.butoxykarbonyl

Fmoc 9-fluorenylmethoxykarbony!

I-^--1

Oktreotid HDPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

I—

6-(p-isothiokyanatobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundecyl-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-C^s-Ťhr-ol .............

a) K roztoku 595 mg (497 _zumol) Fmoc-6-(p-isothiokyanatobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundekanu se přidá 515 mg (415 ,umol) epsilon-Fmoc-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-olu a 2 kapky triethylaminu. Po míchání při teplotě místnosti po dobu 24 hodin se žlutá suspenze podrobí chromatografií na silikagelu za použití směsi chloroformu a methanolu v poměru 97 : 3 jako elučního činidla. Lyofilizaci se získá bezbarvá pevná látka.

Hmotová spektroskopie (FAB) m/z (relativní intenzita}: 2439 <MH\ 25), 1343 (100).

R_£: 0,42 (silikagel, směs chloroformu a methanolu v poměru

9:1)

b) K 530 mg (217 _zumoi) výše získané sloučeniny se přidá 10 ml směsi piperidinu a dimethylformamidu (1 : 4, objem / objem) a směs se nechá stát při teplotě místnosti po dobu 45 minut. Po odstranění rozpouštědla a báze destilací ve vysokém vakuu se zbytek podrobí chromatografií na silikagelu. Nečistoty se odstraní směsí chloroform / methanol / kyselina octová / voda v poměru 7:4:1:1a nechráněná sloučenina

I se vymyje směsí chloroform / methanol / kyselina octová v poměru 5 : 8 : 3, Po odstranění solí pomocí kapalinové chromatografie· s vysokou rozlišovací schopností (HPLC) na koloně Spherisorb 5 _zum (roztok A: 1000 ml vody / 1 ml tř'i'fluoroctové* kyseliny;^’roztok B:~ 200 ml vody 7 800 ml acetonitrilu / 1 ml trifluoroctové kyseliny;_ lineární gradient od 95 % roztoku A do 5 % roztoku A během 20 minut) a lyofilizaci se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé soli s trifluoroctovou kyselinou.

Hmotová spektroskopie (FA3) m/z (relativní intenzita) : 1326 (MH\ 18), 872 (100)

R_e: 0,41 (silikagel, směs chloroform / methanol / kyselina octová vpoměru 5:-8:-3).

6-(p-isothiokyanatobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan používaný jako výchozí materiál lze připravit následovně:

a) 6-(p-nitrobenzyl)-1,4,8,ll-tetraaza-5,7-dioxoundekan

K roztoku 0,5 g diethyl-p-nitrobenzylmalonátu v 50 ml methanolu se najednou přidají 2 g čerstvě destilovaného ethylendiaminu a směs se zahřívá pod zpětným chladičem na 80 °C. Po 12 hodinách se směs nechá ochladit na teplotu místnosti. Výsledná kalná světle žlutá směs se umístí do chladničky, aby došlo ke krystalizací. Směs se zfiltruje. Čistění se provádí pomocí středotlaké chromatografie za použití silikagelu a jako mobilní fáze směsi isopropanolu a 25% hydroxidu amonného v poměru 8 : 2. Frakce o R_f 0,34 se odeberou. Po odpaření se získá sloučenina uvedená v názvu a) jako bíložlutá pevná látka.

Hmotová spektroskopie (FA3) (matrice: thioglycerin): MH⁺ 324

b) 6-(p-nitrobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan

Ke 480 mg 6-(4-nitrobenzyl)-1,4,8,ll-tetraaza-5,7-dioxoundekanu se přidá 30 ml IM roztoku boranu v tetrahydrofuranu a směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 60 hodin. Nadbytek diboranu se rozloží tak, že se k žlutému roztoku ochlazenému na 0 °C opatrně po kapkách přidá absolutní methanol. Reakční směs se několikrát odpaří s methanolem. Zbytek se převede do suspenze v absolutním ethanolu za použití ultrazvuku a poté se zfiltruje. Žlutým filtrátem se nechá po dobu 20 minut probublávat plynný chlorovodík. Výsledná sraženina se vyčistí na sloupci silikagelu za použití směsi chloroform / methanol / 25% hydroxid amonný v poměru 5 : 5 : 2. K získání hydrochloridu se nechá ethanolickým roztokem purifikovaného aminu probublávat plynný chlorovodík.

R_£: 0,36 (silikagel, směs chloroform / methanol / 25% hydroxid amonný v poměru 5 : 5 : 2)

Hmotová spektroskopie (FAB) m/z (relativní intenzita): 296 (MH⁺, 100) .

c) Fmoc-6-(p-nitrobenzyl) -1,4,8,11-tetraazaundekan

750 mg 6-(p-nitrobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundekanu.4HC1 i·?

se převede při teplotě místnosti do suspenze ve 45 ml dioxanu a 15 ml vody. Přidá se 5730 mg 9-fluorenylmethyl-sukcinimidyl-karbonátu a 1430 mg hydrogenuhličitanu sodného. Po míchání po dobu 2 hodin při teplotě místnosti se pH bezbarvé suspenze upraví na hodnotu 4 pomocí 2N kyseliny chlorovodíkové, a suspenze se lyofilizuje. Provede se chromatografie bezbarvé pevné látky na silikagelu za použití chloroformu. Výsledná látka se lyofilizuje.

R_f: 0,30 (silikagel, směs chloroformu a methanolu v poměru

100 : 1)

Hmotová spektroskopie (FAB) m/z (relativní intenzita): 1184

73)’,’’ 962' (MH^;-'Fmoc',^—ÍÓOT ' ’.................

d) Fmoc-6-(p-aminobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan

910 mg sloučeniny vyrobené ve stupni c) se rozpustí v 10 ml isopropylacetátu a naředí se 60 ml methanolu. K tomuto roztoku se po kapkách přidává voda (přibližně 4 ml), až se roztok zakalí. Pod atmosférou argonu se přidá 200 mg paladia na aktivovaném oxidu hlinitém (5 % paladia) a suspenze se zbaví vzduchu uváděním vodíku. Hydrogenace se provádí po dobu 1 hodiny při tlaku 101 kPa. Suspenze se poté zfiltruje přes vrstvu křemeliny, filtrát se zahustí, olejovitý zbytek se vyjme směsí dioxanu a vody a provede se lyofilizace. Pó vyčištění pomocí chromatografíe na silikagelu za použití chloroformu se produkt vyjme dioxanem a lyofilizuje se.

R_e: 0,13 (silikagel, směs chloroformu a methanolu v poměru

100 : 1)

Hmotová spektroskopie (FAB) m/z (relativní intenzita): 1154 (M\ 35), 932 (MH*-Fmoc, 100)

e) Fmoc-6-(p-isothiokyanatobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan

K dvoufázové směsi 640 mg sloučeniny vyrobené ve stupni

d) ve 4 ml tetrachlormethanu a 4 ml 3N kyseliny chlorovodíkové se přidá při teplotě místnosti 460 _zul thiofosgenuλ Oranžově zbarvená směs se míchá po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Po oddestilování rozpouštědla ve vysokém vakuu se olejovitý zbytek vyjme směsí dioxanu a vody a provede se lyofilizace. Výslednou světle žlutou pevnou látku lze použít bez dalšího čištění.

R_ř: 0,29 (silikagel, směs chloroformu a methanolu v poměru

100 ; 2)

Hmotová spektroskopie (FAB) m/z (relativní intenzita): 1196 (M⁺, 100), 974 (Mr-Fmoc, 84)

Příklad -2 ........... .........

Sloučenina z příkladu 1 značená ^99mTc

K 1 ml generátorového eluátu TcO^Na (vymytého po 3 hodinách) ve fyziologickém solném roztoku o radioaktivitě 30 - 45 mCi se přidá 1 ml roztoku vinanu (2,09 x 10’⁵ mol, pH = 7) , který se předtím zbaví vzduchu proudem dusíku, a 10 zul dihydrátu chloridu cínatého (1,49 x 10'⁸ mol) v O,1N kyselině chlorovodíkové. Poté se přidá 50 zug sloučeniny z příkladu 1 a výsledná směs se míchá. Pokud je to žádoucí, lze chelát vyčistit . na Hamiltonově ' koloně PRP-1 (organické polymery).

Příklad 3

[Tyr³-oktreotidJ

--------------_a.)__ .]_5.0 —mg------sukci-nyl—BPhe—epsHon—Fmoc-Lys⁵--Tyr^J-oktreotidu, 100 mg N,N,N',N^,',N^,'-pentakis(terc.butyl-karboxýmethyl)-1-t(4-amínofěnyí)methyl]diethylentriaminu, 35 mg dicyklohexylkarbodiimidu a 27 mg 1-hydroxybenzotriazolu se rozpustí ve 20 ml dimethylformamidu. Po 16 hodinách při teplotě místnosti se rozpouštědlo odstraní odpařením za sníženého tlaku. Vyčištěním na silikagelu 60 za použití směsi chloroform / methanol / 50% kyselina octová v poměru 8 / 2 / / 0,25 se získá N^N^W^N^-pentakisťterc.butyl-karboxymethyl) -1- [ (4-amido-sukcinyl-DPhe¹-Tyr³-epsílon-Fmoc-Lys⁵-oktreotid)benzyl]diethylentriamin v čisté formě.

b) Štěpení skupiny Fmoc na Lys⁵:

Na 100 mg sloučeniny vyrobené ve stupni a) se nechá působit 10 ml směsi dimethylformamidu a piperidinu v poměru 4/1 při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Následným odstraněním rozpouštědla {ve vysokém vakuu) a vyčištěním na silikagelu za použití směsí chloroform / methanol /50% kyselina octová s gradientem od 8 / 2 /0,25 do 7 / 4 / 2 se získá čistý a homogenní N,N,N’,N'',N''-pentakis(terč.butyl- kar boxyme t hy 1) -1- [ (4-amido-sukcinyl-DPhe¹-Tyr³-epsilon-Fmoc-Lys^s-oktreotid)benzyl]diethylentriamin.

c) Odstranění terč.butylových skupin:

mg koncového produktu ze stupně b) se- převede do suspenze ve 3 ml methylenchloridu. Po přidání 3 ml ethandithiolu v inertní atmosféře (pod argonem) se přidají 3 ml směsi kyseliny trifluoroctová a vody v poměru 95 : 5. PO 24 hodinách při pokojové teplotě se surová sloučenina uvedená v názvu vysráží přidáním 100 ml směsi diethyletheru a 3N kyseliny chlorovodíkové. Surový produkt se izoluje filtrací a vyčistí a odsolí se pomocí RP_ie-HPLC za použití směsi voda / acetonitr.il / trifluoroctová kyselina (pufr A: 100 / 0, 0,1 % trif luoroctové kyseliny, B : 200 / 800, 0,1 % trifluoroctové kyseliny, tlumivý systém s gradientem od 5 % do 95 % B během 20 minut), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu.

[a]_D ²⁰ = -17° (c = 1,0, rozpouštědlem je 95% kyselina octová)

MH’:' 1615 .....- - . . ........... ............

Výchozí materiály se připraví následovně:

d) epsilon-Fmoc-Lys^s-Tyr³-oktreotid:

5g Tyr³-oktreotid-acetátu se rozpustí ve 200 ml směsi dimethylformamidu a vody v poměru 3 / 1 a po přidání 5 g hydrogenuhličitanu sodného se přidá 1,6 g fluorenmethyloxykarbonyl-hydroxysukcinimidesteru {FmocHOSu). Po reakční době 1 hodina pod kontrolou pomocí chromatografie na tenké vrstvě (rozpouštědlovým systémem je směs chloroform / methanol / kyselina octová v poměru 8 / 2 / 0,25) se reakční směs naředí 800 ml 0,lN rožtoku hydroxidu sodného a extrahuje se směsí ethylacetátu a methanolu v poměru 9/1. Organické fáze se vysuší síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku.

Čištění se provádí za použití silikagelu 60 (Merck 9385) jako stacionární fáze a směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 9 / 10 jako elučního Činidla. Frakce s čistotou vyšší než 95 % (kontroluje se pomocí chromatografie na tenké vrstvě) se smísí a rozpouštědlo se odstraní odpařením.

[oc]_D ²⁰ = -18,7° (c = .0,5, rozpouštědlem je 95% kyselina octová)

e) sukcinyl-DPhe¹-epsilon-Fmoc-Lys⁵-Tyr³-oktreotíd:

Ve 100 ml směsi vody a dioxanu v poměru 3/2 obsahující 1 ml triethylaminu se rozpustí 600 mg epsilon-Fmoc-Tyr³-oktreotidu. Po přidání 100 mg anhydridu kyseliny jantarové se reakční směs nechá stát při teplotě místnosti po dobu 3 až 4 hodin. Izolace sloučeniny . uvedené... v_ názvu.. .se______ provede pomocí sušení vymražením a následného vyčištění na sloupci silikagelu za použití směsi chloroform / methanol ί / 50% kyselina octová v poměru 9 / 1 / 0,125 jako elučního Činidla.

[ot]_D ²⁰ = -34° (c = 0,25, rozpouštědlem je 95% kyselina octová)

Opakováním postupu uvedeného v příkladu 3, ale za použití odpovídajících výchozích materiálů, lze připravit následující sloučeniny:

Příklad 4

MH⁺: 16.00 amorfní látka

Příklad 5

ÍTyť-oktreotid] [α]/° = -14,2° {c = 0,58, rozpouštědlem je 95% kyselina octová) MH‘: 1573

Příklad 6

O

Ca]_D ²⁰ = -10° (c = 0,25, rozpouštědlem je 95% kyselina octová) MH⁺: 1573

Příklad 7

HO

ΜΗ 1585

Příklad 30

MH⁺: 162 6 amorfní látka

Glyoxýl-DPhe^epsilon-Fmoc-Lys^Tyr^oktreotid používaný jako výchozí materiál v příkladu 5 lze připravit následovně:

620 mg epsilo-Fmoc-Lys⁵-Tyr³-oktreotidu se rozpustí v 50 ml směsi vody a dioxanu v poměru 1 / 3. Po přidání 70 mg kyseliny glyoxylové a 41 mg natriumkyanborohydridu se- pH reakční směsi upraví pomocí O,1N kyseliny chlorovodíkové na hodnotu 5 a směs se nechá stát přes noc při teplotě místnosti. Izolace sloučeniny uvedené v názvu se provede pomocí sušení vymražením a následného vyčištění na sloupci silikagelu za použití směsi chloroform / methanol / 50% kyselina octová s gradientem od 8 / 2 / 0,25 do 7 / 3 / 1 jako elučního činidla..

[α]/⁰ = -42° (c = 0,5, rozpouštědlem je 95% kyselina octová)

N,N,N¹,N ‘, N''-pentakis-terc.butyl-karboxymethy1-1-(4-amino-karboxymethylbenzyl)diethylentriamin používaný jako vydhózí^irtátěriál^^rpríkrádu*6Tze připravit následovně:

700 mg N,N,Ν',Ν'Ν''-pentakis-terc.butyl-karboxymethyl-1-(4-aminobenzyl)diethylentriaminu se rozpustí ve 25 ml směsi vody a dioxanu v poměru 1/2. Po přidání 103 mg monohydrátu kyseliny glyoxylové a 64 mg natriumkyanborohydridu se upraví pH reakční směsí pomocí O,1N kyseliny chlorovodíkové na hodnotu 5 a směs se nechá stát při teplotě místnosti po dobu 5 hodin. Izolace sloučeniny uvedené v názvu se provede pomocí sušení vymražením a následného vyčištění na sloupci silikagelu za použití směsi chloroform / methanol / / 50% kyselina octová s gradientem od 9 / 1 / 0,125 do 8 / / 2 / 0,25 jako elučního činidla.

Příklad 9

Sloučenina z. příkladu 3 značená ^lllIn

K 10 ,ul 0,lM roztoku octanu sodného o pH 4,0 se přidá

8,6 ,ul roztoku ^mInCl₃ (21 mCi / ml, v 0,01 - 0,03M kyselině chlorovodíkové) a 2 ,ul 0,lM roztoku hydroxidu sodného. Přidá se 1 ,ul ligandu (100 _zuM sloučeniny z příkladu 3 v 0,lM roz_t oku. .octanu.. so_dného._o __pH„. 4., .0.)______Získaný.. ..roztok - se—nechá— — stát při teplotě místnosti po dobu tří až čtyř minut pro dosažení úplného vytvoření ' komplexů. “Odebere Šé vzorek pro kontrolu kvality pomocí HPLC, která se provádí pro stanovení množství ^utIn, které vytvořilo komplex s konjugátem a ^11!ln přítomného ve formě komplexu s acetátem. Analýza pomocí HPLC se provádí na koloně C18 ,ubondapak (_zubondapak, ochranná známka, Waters) o rozměrech 3,4 x 300 mm za použití elučního systému tovřeného 20mM roztokem octanu amonného o pH 4,0 a lineárním gradientem acetonitrilu od 0 do 60 % při průtoku

1,2 ml / min. Obecně eluce probíhá tak, že se s Čelem rozpouštědla vymyje volné ^mIn a radioaktivně značený konjugát se vymyje za 9 - 11 minut. Radiochemická čistota činí typicky více než 99,5 %.

Příklad 10

Sloučenina z příkladu 3 značená ^8eY

Chelát značený ⁸⁸Y se připraví odpařením 0,02 ml roztoku ⁸⁸Y (5 mCi / ml, v 6M kyselině chlorovodíkové) k suchu pod zfiltrovaným vzduchem. Získaný zbytek se rozpustí ve 20 _zul 0,lM roztoku octanu sodného o pH 4,0 a přidá se 4,0 _zul 100_zuM roztoku sloučeniny z příkladu 3 v 0,lM octanu sodném (pH 4,0). Roztok se nechá stát při teplotě místnosti po dobu 3 až 15 minut pro dosažení úplné tvorby komplexů. Odebere se vzorek pro kontrolu kvality pomocí HPLC, která se provádí pro stanovení množství ⁸⁸Y, které vytvořilo komplex s konjugátem a ⁸⁸Y přítomného ve formě komplexu s acetátem, jak je popsáno v příkladu 9. Radiochemická čistota činí typicky více než 99,5 %.

Příklad 11

Sloučenina z příkladu 3 značená ⁹°Y

Chelát značený ⁹⁰Y se připraví přidáním 1 zul roztoku ⁹⁰Y {0,16 mCi, v 0,01M kyselině chlorovodíkové) k 11 zul 9_zuM roztoku sloučeniny z příkladu .3. .v D,1M. octanu . amonném (pH 5,0). Tento roztok se před použitím inkubuje po dobu 3 minut při pokojové teplotě. Odebere se vzorek pro kontrolu kvality pomocí HPLC, která se provádí pro stanovení množství ^{* 90}Y, které vytvořilo komplex s konjugátem a ⁹⁰Y přítomného ve formě komplexu s acetátem, jak je popsáno v příkladu 9. Radiochemická Čistota činí typicky více než 99,5 %.

Postupy značení uvedené v příkladech 9, 10 a 11 lze opakovat za použití sloučenin z výše uvedených příkladů 4 až 6 jako ligandů,. čímž se získají odpovídající cheláty s ^mIn,

88γ _a 90_γ ,

Příklad 12

Sloučenina z příkladu 7 značená ⁹⁰Y

Chelát značený ⁹°Y se připraví přidáním 10 ,ul roztoku ⁹⁰Y (0,6 mCi, v 0,04M kyselině chlorovodíkové) k 12 ,ul 20,uM roztoku sloučeniny z příkladu 7 v O,1M tetramethylamoniumacetátu s 0,1 % Ν,Ο-bis (trimethylsilyl)acetamidu (pH 6,0). Tento roztok se před použitím zahřívá po dobu 15 minut na 90 °C. Odebere se vzorek, který se před kontrolou kvality pomocí HPLC, která se provádí pro stanovení množstvu ^9aY, které se začlenilo do konjugátu, naředí 0,lM roztokem diethylentriamin-pentaoctové kyseliny (pH 6,0). Čistota radioaktivně značené sloučeniny činí typicky více než 99,5 % a radioaktivně 2naČená sloučenina je stabilní například po dobu šesti dnů při teplotě 4 °C.

Podobným postupem jako je uveden výše v příkladu_12_..lze. připravit komplex sloučeniny z příkladu 8 s ⁹⁰Y.

Claims

1. Sloučenina obecného vzorce I

X-HN-P (I) ve kterém

X představuje zbytek vybraný ze souboru zahrnujícího

a) chelatotvornou skupinu obecného vzorce X₃ ve kterém symboly R₂₁ až R₂₈ nezávisle na sobě představují vždy atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 atomů uhlíku substituovanou hydroxylovou skupinou, jeden ze symbolu R₂₉ a R₃₀ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 atomu uhlíku nebo skupinu chránící aminoskupinu a druhý představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu _Ί ··-- —-H - .. - ·->·—t -^_Ťr*··^-!·,, ' , |HH‘I riBit irtÍlilWffl) !!» WW¹ ll ·||*Μ· I ίΙί< ig lil obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, s má hodnotu 2, 3 nebo 4,

Z představuje dvojvaznou skupinu, a

Yj znamená jednoduchou vazbu nebo spojovací skupinu, a

b) zbytek obecného vzorce X₂ [_Rj4_ CH₂ - R₂ - NH - Y₂ - <X₂) ve kterém

Rj představuje bifunkční chelatotvornou skupinu odvozenou od polyamino-polykarboxylové kyseliny nebo jejího anhydridu a nesoucí zbytek vzorce -CH₂-R₂-NH-Y₂ na terciárním atomu uhlíku

R₂ znamená alkylenovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo popřípadě substituovanou feny’.....lenovou skupinu, a

Y, představuje karbonylovou ' skupinu nebo spojovací skupinu obsahující na jednom konci karbonylovou skupinu a na druhém konci methylenovou skupinu nebo na obou koncích karbonylovou skupinu, a

Ρ'ΝΗ- znamená N-koncový zbytek somatostatinového peptidu obecného vzorce P-NH₂ ve volné formě, ve formě soli nebo ve formě komplexu s nuklidem.

2. Sloučenina podle nároku 1, ve které P-NHpředstavuje zbytek obecného vzorce (a) «,-S-Y,. L.-^S-y^H2 _R_NH-CH-CO-B-C-Lys-E-NH-CH-CO-G (a) ve kterém

R představuje

b) ,

Y_?i . .a.. ,Υ_2λ představují společně přímou vazbu nebo Y_u a Υ·,/ nezávisle na sobě znamenají vždy atom vodíku,

3 představuje zbytek fenylalaninu popřípadě substituovaný na kruhu atomem halogenu, nitroskupinou, aminoskupinou, hydroxylovou skupinou, alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo/a alkoxylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku (včetně pentafluoralaninu), nebo zbytek beta-naftylalaninu,

C znamená zbytek (L)-tryptofanu nebo (D)-tryptofanu popřípadě alfa-N-methylovaný a popřípadě substituovaný na benzenovém kruhu atomem halogenu,, nitroskupinou, aminoskupinou, hydroxylovou skupinou, alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo/a alkoxylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku,

G představuje skupinu obecného vzorce kde

Rý ' '“představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku,

R₁₀ znamená atom vodíku nebo zbytek fyziologicky přijatelného, . fyziologicky hydrolyzovatelného esteru,

R,, znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo skupinu- vzorce -CH(R₁₃) -x₃,

Rj₃ znamená hydroxymethylovou skupinu nebo skupinu vzorce -(CH₂),-OH, -(CH₂)₃-OH či -CH(CH₃)OH, nebo představuje substituent navázaný na atom alfa-uhlíku v přírodě se vyskytující nebo v přírodě se nevyskytující alfa-aminokyseliny (včetně vodíku) ,

X₃ představuje skupinu vzorce

-COOR , -CH OR

7 2 10 nebo

-CO-N

R kde

R₇ a R₁₀ mají shora uvedené významy

R_1S znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, fenylovou skupinu nebo fenylalkylovou skupinu obsahující 7 až 10 atomů uhlíku, a ·?

R,₆ představuje skupinu, atom vodíku nebo hydroxylovou s tou podmínkou, že pokud vzorce -CH(R₁₃)-X₃, znamená methylovou skupinu,

R_:2 představuje skupinu Rjj atom vodíku nebo přičemž zbytky B a E jsou v L-konfiguraci a zbytky v poloze 2 a 7 jsou v (L)- nebo (D)-konfiguraci, a zbývající obecné symboly mají shora uvedený význam.

3. Sloučenina podle nároku 2, ve které ve zbytku obecného vzorce (a) symbol G představuje skupinu vzorce

-CO-N ch(r₁₃)-x₃ kde

X, představuje skupinu vzorce

-CO-N nebo -CH,OR znamená hydroxymethylovou -(CH,),-OH, -(CHJ.-OH či skupinu, skupinu vzorce -CH{CH₃)OH, isobutylovou ' skupinu,’ bítfý lovou skupinu, “ 'na ítýImethylovou” skupinu nebo indol-3-ylmethylovou skupinu,

R_1Q, R_u, R_u a R₁₅ mají význam definovaný v nároku 2 a zbývající obecné symboly mají shora definovaný význam.

4. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 3, ve které X představuje skupinu X_: a' Y₃ znamená jednoduchou vazbu, a zbývající obecné symboly mají shora uvedený význam.

5. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 4, ve které X představuje skupinu X₂ a Y₂ znamená skupinu v2orce -COCK₂-, -CO(CK₂)₂-, -CK₂CO-, -(CH₂ 5 ₂-CO- nebo zbytek obecného vzorce (b¹)

-CO-R_S-CO- (b') ve kterém

R_s představuje alkylenovou skupinu obsahující 1 až 6 atomu uhlíku popřípadě přerušenou jedním nebo několika heteroatomy nebo zbytky vybranými ze skupiny zahrnující atom kyslíku, atom síry, karbonylovou skupinu, skupinu vzorce -NHCO-, N(alkyl)-CO- obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, -NH- a -N(alkyl)- obsahující v alkylové částí 1 až 4 atomy uhlíku; alkylenovou skupinu obsahující 1 až 6 atomu uhlíku substituovanou hydroxylovou skupinou; alkenylenovou skupinu obsahující 2 až 6 atomů uhlíku/ popřípadě substituovanou cykloalkylenovou skupinu, skupinu vzorce -CH-/ nebo zbytek obecného vzorce (aj I

-(CHj)

A' (α_χ) kde symboly m' a n' nezávisle na sobě představují vždy číslo o hodnotě 0, 1, 2 nebo 3, kruh A je popřípadě substituován, a

R₅ představuje zbytek jak/ je navázán na alfa-uhlíku v přírodě se vyskytující nebo v přírodě se nevyskytující alfa-aminokyseliny.

a zbývající obecné symboly mají shora uvedený význam.

6. 6-(p-isothiokyanatobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundecyl-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol,

R₄₀-CO-CH₂-CH₂-CO- [Tyr³-oktreotid] ,

R₄₀-CO-CH₂-CH₂-CO-oktreotid, t

R₄₀-CO-CH₂- [Tyr³-oktreotid] ,

R₄₀-CH₂-CO-[Tyr³-oktreotid] ,

R₄₁-CO-CH₂- [Tyr³-oktreotid] , a R₄₁-CO-CH₂-CH₂-CO- [Tyr³-oktreotid] , ve volné formě nebo ve formě soli, přičemž i

R₄₀ představuje skupinu vzorce (H0₂C-CH₂)₂-N-(CH₂)₂-N(CH₂C0₂H)-CH₂-CH-N(CH₂C0₂H)₂ a R₄₁ znamená skupinu vzorce

HO,CH C r 2 2 \ | ho₂ch₂c r—N N-Ln n—

Z L_JZ

CH,CO,H / ^z *

CH, ch₂co₂h

7. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že je v komplexu s nuklidem emitujícím záření alfa, beta či gama nebo pozitronové záření nebo s nuklidem s Augerovými e'-kaskádami.

.

8. Sloučenina podle nároku 7, vyznačující se t í m , Že X představuje skupinu X_: a zbývající obecné symboly mají shora uvedený význam a nuklid je vybrán ze skupiny zahrnující technecium, rhodium, měd, kobalt a rhenium.

9. Sloučenina podle nároku 7, vyznačující se t i m , že X představuje skupinu X₂ a zbývající obecné symboly mají shora uvedený význam a nuklid je vybrán ze skupiny zahrnující ^ulIn, ⁹⁰Y, ^l61Tb, ¹⁶⁹Eř, ¹⁴⁰La,. ²¹²3i, ^l53Sm, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ^mAt, ^mAg, ³²P, ⁵¹Cr, ⁶⁷Ga, ⁷¹Ge a ¹⁶⁹Yb.

10. 6-(p-isothiokyanatobenzyl)-1,4,8,11-tetraazaundecyl-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol značený ^99mTc, Rj₀-CO-CH₂-'CH₂-CO-'['Tyr³-oktreotiď3 -značený ^9aY,

R^-CO-CHj-CHj-CO-oktreotid značený ⁹⁰Y,

R₄₀-CO-CH₂-[Tyr³-oktreotid] značený ⁹⁰Y,

R₄₀-CH₂-CO-[Tyr^J-oktreotid] značený ⁹⁰Y,

R₄₁-CO-CH₂-[Tyr³-oktreotid] značený ⁹⁰Y, a

R₄₁-CO-CH₂-CH₂-CO-[Tyr³-oktreotid] značený ⁹⁰Y, ve volné formě nebo ve formě soli, přičemž obecné symboly R_4Q a R_4l mají význam definovaný v nároku 6.

11.· Způsob výroby sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, ve · volné formě, ve formě soli nebo ve formě komplexu s nuklidem, vyznačující se t í m , že se:

a) odstraní alespoň jedna chránící skupina přítomná ve sloučenině obecného vzorce I v chráněné formě,' nebo že se

c) spolu spojí chelatotvorné· _ činidlo^ nesoucí . popřípadě.. _ funkční zbytek schopný poskytnout Y₂ nebo spojovací

...... skupinu Y., a žádaný -sómatestatinový peptid v chráněné nebo nechráněné formě, takovým způsobem, že se zbytek X naváže na koncovou aminoskupinu peptidu, a poté se popřípadě uskuteční stupeň a), nebo že se

d) spolu spojí chelatotvorné činidlo a žádaný somatostatinový peptid v chráněné nebo nechráněné formě, přičemž tento peptid nese na své koncové aminoskupině funkční zbytek schopný poskytnout skupinu Y₂ nebo spojovací skupinu Y₁₍ takovým způsobem, že se zbytek X naváže na koncovou aminoskupinu peptidů, a poté se popřípadě uskuteční stupeň a), nebo že se I · Λ i

e} odstraní funkční skupina nechráněného nebo chráněného peptidů nesoucího zbytek X nebo se přemění na jinou ) funkční skupinu tak, že se získá jiná nechráněná nebo chráněná sloučenina obecného vzorce I a v posledně uvedeném případě se uskuteční stupeň a) postupu, a takto získaný ligand se izoluje ve volné formě, ve formě soli nebo ve formě komplexu s nuklidem.

12. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 10 ve volné formě, ve formě farmaceuticky přijatelné soli nebo ve formě komplexu s nuklidem, pro použití jako léčivo.

13. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 10 ve volné formě, ve formě farmaceuticky přijatelné soli nebo ve formě komplexu s nuklidem emitujícím záření gama nebo pozitronové záření, pro použití jako zobrazovací činidlo. _t

14. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 10 ve volné formě, ve formě farmaceuticky přijatelné soli nebo ve formě komplexu s nuklidem emitujícím záření alfa či beta nebo s nuklidem s Augerovými-e'-kaskádami, pro použití v ošetření · nádorů a metastáz pozitivních na receptor somatostatinu.

í t

15. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se tím, že obsahuje sloučeninu podle libovolného z nároků 1 až 10, ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné -soli nebo- ve-- formě·· komplexu .s. nuklidem,. _.y kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.