DD158238A5 - Verfahren zur herstellung eines neuen inhibitors fuer das angiotensin umwandelnde enzym - Google Patents

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DD158238A5
DD158238A5 DD81228014A DD22801481A DD158238A5 DD 158238 A5 DD158238 A5 DD 158238A5 DD 81228014 A DD81228014 A DD 81228014A DD 22801481 A DD22801481 A DD 22801481A DD 158238 A5 DD158238 A5 DD 158238A5
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Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines Inhibitors fuer das Angiotensin umwandelnde Enzym zur Behandlung von Bluthochdruck. Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung eines neuen Inhibitors, der fuer alle Patienten, unabhaengig von der Verabreichungsform und ohne Nebenwirkungen zu verursachen, angewandt werden kann. Erfindungsgemaess werden als neue Inhibitoren Verbindungen der allgemeinen Formel hergestellt, worin R Wasserstoff, Formyl, Acetyl, Propanoyl, Butanoyl, Phenylacetyl, Phenylpropanoyl,Benzoyl, Cyclopentancarbonyl, tert.-Butyloxycarbonyl, Cyclopentancarbonyl-L-lysyl, Pyro-L-glutamyl-L-lysyl, L-Lysyl, L-Arginyl oder Pyro-L-glutamyl bedeutet, A L-Phenylalanyl (oder D,L-Phenylalanyl), D-Phenylalanyl, D,L-Alanyl, D-Alanyl, D,L-Tryptophyl, D,L-Tyrosyl, D-Tyrosyl, D,L-Isoleucyl, D-Isoleucyl, D,L-Leucyl, D-Leucyl, D,L-Histidyl, D-Histidyl, D,L-Valyl oder D-Valyl darstellt, R tief 1 fuer Wasserstoff oder Methyl steht, R tief 2 L-Prolin, L-3,4-Dehydroprolin, D,L-3,4-Dehydroprolin, L-3-Hydroxyprolin, L-4-Hydroxyprolin, L-Thiazolidin-4-carbonsaeure oder L-5-Oxo-prolin bedeutet und die Iminogruppe dieser Reste an die benachbarte Gruppe in Imidbindung geknuepft ist und n gleich O oder 1 ist und hierbei R tief 1 fuer Methyl steht, wenn n gleich O ist.

Description

22 80U 5
~~*~ Berlin, den 3.8.1981 AP C 07 C/228 014/5 (58 903 12)
Herstellungsverfahren für einen Inhibitor für Angiotensin umwandelndes Enzym
Anwendungsgebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Herstellen eines Inhibitors für das Angiotensin umwandelnde Enzym.
Die erfindungsgemäß hergestellte Verbindung -wird angewandt als Arzneimittel, insbesondere als antihypert^ensiv wirkendes Mittel zur Behandlung von Bluthochdruck,
Charakteristik der bekannten technischen Lösungen
Das Angiotensin umwandelnde Enzym, eine im folgenden als ACE bezeichnete Peptidyldipeptidhydrolase, spielt in der Physiologie der Hypertension eine zentrale Rolle und ist in der Lage, das die Aminosäuresequenz
AspArgValTyrlleHisProPheHis Leu
besitzende Decapepdid Angiotensin I durch Abspalten des eine endständige Carboxygruppe aufweisenden Restes HisLeu in das Octapepdid Angiotensin II überzuführen. Im folgenden werden für die Eeste verschiedener Aminosäuren und für andere Verbindungen folgende Symbole verwendet:
AIa = L-Alanin
Arg = L-Arginin
Asp =: L-Asparaginsäure
Boc = t-Butyloxycarbonyl
GIu = Glutaminsäure <Glu = pyro-L-Glutaminsäure (L-5-Oxo-prolin) GIy = Glycin
Hip si Hippursäure (Benzoylglycin)
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—2— 3.8 • 1981
AP C 07 C/228 014/5
(58 903 12)
His = L-Histidin
lie = L-Isoleucin
Leu - L-Leucin
Phe a L-Pheny!alanin
Pro a L-Prolin
Pro a Ii-3,4-Dehydroprolin
Ser a L-Serin
Trp a L-Tryptbphan
Tyr = L-Tyrosin
VaI = L-Valin
ACB = Angiotensin umwandelndes Enzym Hepes = N^-Hydroxyäthylpiperazin-N1^- ät hans ulf ons äure
Angiotensin I entsteht unter der Einwirkung des Enzyms .Renin, einer in Nieren oder anderen Körpergeweben und in Plasma anzutreffenden Endopeptidase, auf im Blutserum enthaltenes c\ -2-Globulin,
Der Blutdruck wird durch gewisse im Blut enthaltene Peptide beeinflußt. Eines dieser Peptide, das Angiotensin II, ist ein stark wirksamer Pressor, also ein den Blutdruck steigernder Stoffe Bas die Aminosäuresequenz ArgProProGlyPheSerProPheArg aufweisende Nonapeptid Bradykinin ist ein stark wirksamer Depressor, also ein den Blutdruck erniedrigender Stoff« Zusätzlich zur direkten Pressorwirkung besitzt das Angiotensin II auch eine die-Ausschüttung von Aldosteron steigernde Wirkung, wobei durch das Aldosteron ebenfalls der Druck erhöht wird, da Aldosteron extracelluläre Salze
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und Flüssigkeiten zurückhält. Algiotensin II ist im Blut normaler Menschen in meßbaren Mengen feststellbar und ist im Blut von renale Hypertension zeigenden Patienten in erhöhten Konzentrationen enthalten.
Die Aktivität des ACE ist sowohl im normalen Menschen als auch in an überhöhten Blutdruck leidenden Menschen, in der Regel in einer größeren Menge enthalten als sie zum Aufrechterhalten der beobachteten Pegel an Agiotensin II erforderlich ist Es wurde jedoch gefunden, daß bei an überhöhtem Blutdruck leide den Patienten durch Behandeln derselben mit ACE-Inhibitoren der Blutdruck stark abgesenkt werden kann /Gavras, I., et al., New Engl. J. Med. 291, 817 (1974^7-
ACE ist eine Pepdidyldipeptidhydrolase und katalysiert die Hydrolyse der vorletzten Peptidbindung am C-terminellen End verschiedener acylierter Tripeptide und größerer, eine nicht blockierte «^-Carboxygruppe aufweisender Polypeptide. Unter der Wirkung des ACE wird die vorletzte Peptidbindung am carboxy-ter miriellen Ende hydrolytisch abgespalten, wobei als Reaktionsprodukte ein Dipeptid und der entsprechende Rest des ursprüngliche Peptids erhalten wird.
Die Reaktionsfähigkeit des Enzyms hängt stark vom Subst ab. Zumindest eine der vom Stickstoff des Prolins gebildeten Pe tidbindungen wird überhaupt nicht hydrolysiert. Offensichtlich schwankt die Michaelis - Konstante (K ) vom Substrat zu Substra ~\ über mehrere Größenordnungen. Allgemeine Angaben über kinetisch Parameter von durch Enzyme katalysierten Reaktionen sind in Lehninger, A., Biochemistry, Worth Publishers, Inc., New York, 1970, Seiten 153-157, angegeben. Zahlreiche der als Inhibitoren für die enzymatische Umwandlung von Angiotensin I in Angiotensi bezeichneten Peptide sind letzten Endes nur Substrate mit einem drigeren Wert für K als Angiotensin I und sind daher zutreffen als konkurrenzierende Substrate zu bezeichnen. Beispiele für so konkurrenzierende Substrate sind unter anderem Bradykinin und d auch als SQ2O475 bezeichnete und die Aminosäuresequenz <GluLysT AlaPro besitzende Peptid BPP5 .
Ondetti hat in der US-PS 3 832 337 zahlreiche als ACE-I hibitoren brauchbare synthtische Peptidderivate angegeben.
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Die Rolle des ACE in der Pathogenese der Hypertension hat dazu geführt nach Inhibitoren für dieses Enzym zu suchen, die als antihypertensiv virkende Stoffe brauchbar sind (siehe beispielsweise US-PSen 3 891 616, 3 947 575, 4 052 511 und 4 053 651). Ein äußerst stark wirksamer und bei oraler Verabreichung eine höhe biologische Wirkung entfaltender Inhibitor ist das in der US-PS 4 046 889 angegebene und mit SQT4225 bezeichnete D-3-Mercapto-2-methylpropanoyl-L-prolin, welches auch von Cushman, D.W. et al., in Biochemistry 16, 5484, (1977), und von Ondetti, M. et al., in Science 196, 441 (1977) beschrieben
— 8
wird und einen I5Q-Wert von 2,3.10 molar besitzt. Der von Cushman et al. in der oben erwähnten Literaturstelle angegebene I50"* Wert stellt jene Inhibitorkonzentration dar, welche erforderlich, ist in einem das Substrat in einer wesentlich oberhalb K liegenden Konzentration enthaltenden normierten Versuchssystem das Enzym zu 50 % zu inhibieren. Die erhaltenen I5 -Werte sind dann direkt miteinander vergleichbar wenn alle die Reaktion beeinflußenden wesentlichen Faktoren wie die Enzym quelle und ihre Reinheit, das verwendete Substrat und dessen Konzentration und die Zusammensetzung des beim Versuchssystem verwendeten Puffers konstant sind. Alle im folgenden angegebenen Werte für 1^0 wurden im gleichen Versuchssystem und unter Verwendung des gleichen Enzyms (ACE aus menschlichem Urin) und bei einer etwa 1/2 K liegenden Konzentra-
tion des Substrats durchgeführt und sind deshalb unmittelbar miteinander vergleichbar, wenn auch Abweichungen von durch andere Autoren angegebenen Daten möglich sind. Derartige Abweichungen sind aus unbekannten Gründen in der Literatur feststellbar, wie sich beispielsweise aus den von Cushman, D.W., et al., in Experientia 29, 1032 (1973) und den von Dorer, .F.E., et al., in Biochim. Biophys. Äcta 429, 220 (1976) angegebenen Werten für I50 des BPPgn ergibt. Der Wirkungsmechanismus von SQ14225 wurde auf ein in Analogie zum besser bekannten verwandten Enzym Carboxypeptidase A entwickeltes Modell des Wirkungszentrums von ACE gegründet. Es wurde angenommen, daß dieses Wirkungszentrum einen die endständige Carboxygruppe des Substrats bindenden kationischen. Bereich und eine Tasche oder Spalte aufweist, welche die Seitenkette der C-terminellen Aminosäure bindet und den heterocyclischen Ring des endständigen Prolinrestes besonders stark bindet. Eine· ähnliche Tasche
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oder Spalte wurde auch für den vorletzten Aminosäurerest voraus gesetzt, wobei .auf Grund von veröffentlichten Daten eine ziemli strenge sterische Forderung erfüllt sein müßte, da die D-form des Inhibitors wesentlich stärker wirksam ist als dessen Stereo isomer oder dessen 3-Methylderivat und unsubstituierter Analoga Die im Inhibitor vorliegende und mutmaßlich an das nahe dem kat lytisch wirkenden Zentrum gelegene aktive Zentrum gelegene SuIf hydrylgruppe spielt bei der Inaktivierung des Enzyms durch den . bekanntermaßen für die katalytische Wirkung wesentlichen Zinkr eine zentrale Rolle. Am Sulfhydrylrest vorhandene Substituenten wie eine Methylgruppe oder eine S-Acetylgruppe verringerten die Wirksamkeit des Inhibitors beträchtlich (vgl. Cushman, D.W., et al., Biochemistry, oben).
In vitro durchgeführte Untersuchungen über den Reaktion mechanismus über welchen SQ14225 und dessen Analoga das ACE inh bieren, wurden durch die Instabilität dieser Moleküle unter Umgebungsbedingungen etwas gestört. Beispielsweise wurde festgestellt, daß eine frisch bereitete wässerige Lösung von SQ14225, welche beispielsweise 1 mg dieser Verbindung pro ml enthält, be. einem pH-Wert von etwa 8 beim Stehenlassen während 30 Minuten stark an Aktivität verliert und daß die Aktivität dieser Lösung bei noch längerem Stehenlassen weiterhin absinkt. Es wird angenommen, daß dieser Aktivitätsverlust hauptsächlich auf eine Dim< sierung des SQ14225 an den endständigen Sulfhydrylgruppen zurücJ
/~\ zuführen ist und hiebei ein als Inhibitor weitgehend unwirksame!
"* Disulfid entsteht. Da die freie Sulfhydrylgruppe stark reaktion; fähig ist und leicht zu polaren Säureresten wie einer Sulfongruj oder einer Sulfoxidgruppe oxidiert werden kann, kann der in vit] zu beobachtende Aktivitätsverlust von wässerigen Lösungen des SQ14225 während des Stehenlassens zum gewissen Teil als Folge zi mindest einer derartigen Oxidationsreaktion angesehen werden, ir Zuge derselben ein als Inhibitor für ACE im wesentlichen unwirksames SuIfon oder SuIfoxid entsteht.
Derzeit zur Verfügung stehende klinische Versuchsberichi über SQ14225, welches in einigen solcher Berichte unter dem Name "Captopril" aufscheint, geben Grund zu der Annahme, daß dieser Stoff im normalen Magen- und Darmtrakt der meisten Patienten hir
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-6- · 3.8,1981
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reichend stabil ist, um bei oraler Verabreichung als Inhibitor für AGE wirksam zu sein, Is ist jedoch noch nicht klar, ob SQ14225 bei einigen Patienten im wesentlichen unwirksam bleibt. Wegen der hohen Reaktionsfähigkeit der freien SuIfhydrylgruppen1 kann SQ14225 ohne weiteres mit Serum- oder Zeil— proteinen oder -peptiden oder mit anderen im Magen- oder Darmtrakt vorliegenden und eine freie Sulfhydry!gruppe aufweisenden Stoffen gemischte Disulfide bilden und zusätzlich auch Dimere im Zuge eines oxidativen Abbaus bilden· Ein 'durch Reaktion mit einem Protein entstandenes gemischtes Disulfid könnte antigenetisch wirken, und das Anstehen solcher Stoffe ist einigermaßen wahrscheinlich, da gelegentlich bei klinischer Anwendung allergische Reaktionen beobachtet wurden (vgl· Gavras, et al., New England J. Med. 298, 991 (I978))v Gegebenenfalls entstandene Disulfide und Abbauprodukte des SQ14225 sind bestenfalls als Inhibitoren größtenteils unwirksam. Es kann daher angenommen werden, daß in Abhängigkeit vom Verabreichungsweg und vom einzelnen Patien- , ten das Ansprechen auf'eine verabreichte Dosis an SQ14225 Schwankungen unterliegt« Darübeijhihaus können in zumindest einigen Patienten unerwünschte Nebeneffekte und Schwierigkeiten beim Versuch, eine wirksame Konzentration an Inhibitor im Körper aufrechtzuerhalten, auftreten.
Thioester werden insofern als äußerst reaktionsfähig angesehen als die Ihioesterbindung leicht gespalten wird und hierbei eine Sulfhydrylverbindung und eine Carbonsäure entsteht. Thioester werden deshalb häufig beim Acylieren unter milden Bedingungen als Zwischenprodukte eingesetzt. Derartige Gruppen, beispielsweise die Acetylthiogruppe, wurden deshalb auch bereits gemäß den .üS-PSen 3 832 337 und 4· C46
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vorgesehen. Es wird weiterhin angenommen, daß auch bei der Biosynthese von zyklischen Peptiden, z. B. Tyrocidin oder Gramicidin, S Thioester als Zwischenprodukte auftreten (vgl. Lipmann, F. in Accounts Chem. Res. 6, 361 (1973))·
Thioester, welche ACB stark inhibieren und bei oraler Ver-(~) abreichung anti-hypertensiv wirken, sind bereits in der Anmeldung APA 61 K/215 457 beschrieben worden.
Mit der Verbindung SQ 14225 verwandte Verbindungen sind bereits in den US-PSen 4 046 889, 4 052 511, 4 053 651, 4 113 715 und 4 154 840 beschrieben. Von besonderem Interesse sind die statt des 5gliedrigen heterozyklischen Prolinrings einen 4- oder öglied-
-s-
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drigen Ring aufweisenden Analoga der Verbindung SQ14225. Die Inhibitionswirkung solcher Analoga ist. jedoch nicht mit jener der Verbindung-SQ14225 verglichen. Es wird darüber berichtet, daß durch Austausch des L-Prolins gegen D-Prolin die Inhibitionswirkung von 3-Mercaptopropanoylaminosäuren drastisch verringert wird (Cushman, D.W., et al., oben).
Der sich beim Austauschen des Prolinrestes gegen den Rest des L-3,4-D.ehydroprolin- ergebende Effekt wurde bereits in verschiedenen Systemen untersucht. Wenn in 7-Stellung des Bradykinins L-3,4-ÄPro eingeführt wird, resultiert ein Bradykininderivat beträchtlich verringerter physiologischer Wirkung (vgl. Fisher, G-.H., et al., Arch. Biochem. Biophys. 189, 81 (1978). Andererseits wird beim Einführen von.L-3,4-APro in die 3-, 5-, 8- oder 9-Stellung des ACE-Inhibitors BPPg dessen Inhibitionswirkung erhöht (vgl. Fisher, G.H. et al., FEBS Letters -107, 273 (1979). Die Patentinhaberin hat in der älteren Anmeldung APA 61 K/215 bereits angegeben, daß die in dieser Anmeldung beschriebenen und den Rest A Pro aufweisende Verbindungen eine hohe Inhibitionswirkung besitzen und auch antihypertensiv wirken, jedoch kann derzeit noch kein Grund dafür angegeben werden, weshalb durch Ersatz des Prolins durch Pro verschiedene Effekte erzielt werden. In ähnlicher Weise besitzt man noch kein klares Bild über den Einfluß von an verschiedenen anderen Stellen eines ACE-Inhibitors an Stelle anderer Reste eingeführter anderer Prolinderivate oder Analoga.
Bisher ist der Einfluß'der an der linken Seite des Schwefelatoms von in der erwähnten älteren Anmeldung beschriebenen Thioesterverbindungen stehenden Aminosäure noch nicht bestimmt worden. Es wird angenommen, daß diese Aminosäure als zusätzliche Erkennungsstelle für das Enzym wirkt. Falls dies zutrifft, müßte erwartet werden, daß eine an dieser Stelle einen Aminosäurerest enthaltende Verbindung ein besserer Inhibitor wäre. Die Patentinhaberin hat gefunden, daß verschiedenste Aminosäuren wirksam sind und daß Hydroxyproline f Prolin-, L- und D,L-3,4-Dehydroprolin-, Thiazolidin-4-carbonsäure- und L-5-Oxo-prolin-derivate durchwegs stark antihypertensiv wirkende Stoffe sind und ACE stark inhibieren.
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-9- 3.8.1981
AP C 07 C/228 014/5 (58 903 12)
Zum Prioritätszeitpunkt der älteren Anmeldung APA 61/ 215 4-57 wurde angenommen, daß N-Benzoyl-L-phenylalanin gemäß den die Herstellung dieser Verbindung betreffenden Beispielen hergestellt worden sei, jedoch ergab sich später aus Fischer & Mooneyrat, Ber., 33,2383 (19OO), daß gemäß diesen Beispielen statt der L-Form die racemische D,L-Form herge- r-\ stellt morden ist. Bs konnte nunmehr festgestellt werden, daß alle 3 optischen Isomeren dieser Verbindung, u,zw. N-Benzoyl-DjL-phenylalanin, N-Benzoyl-L-phenylalanin und N-Benzoyl-D-phenylalanin, zum Herstellen von Inhibitoren für das Angiotensin umwandelnde Enzym brauchbar sind·
Zum Prioritätszeitpunkt der oben erwähnten älteren Anmeldung der Patentinhaberin wurde weiterhin angenommen, daß alle darin genannten Aminosäuren in L-Form vorliegen müßten, damit die hergestellten Verbindungen tatsächlichen Inhibitoren für ACE sind. Seither ist aber festgestellt worden, daß die B-Form und die D,L-Form dieser Aminosäuren ebenfalls für die Herstellung von Inhibitoren von ACE brauchbar sind.
Ziel der Erfindung
Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung eines neuen Inhibitors für Angiotensin umwandelndes Enzym, der für alle Patienten, unabhängig von der Verabreichungsform und ohne unerwünschte Nebenwirkungen zu verursachen, für die Behandlung von Bluthochdruck angewendet werden kann.
Darlegung des Wesens der Erfindung
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, neue Verbindungen, die als Inhibitoren für Angiotensin umwandelndes Enzym mit den gewünschten Eigenschaften wirken, und Verfahren zu ihrer Herstellung aufzufinden.
22 80 U 5
3.8.1981
AP C Ο? D/228 014/5 (58 903 12)
Erfind ungs ge maß werden neue Inhibitoren für ACE der allgermeinen Formel
0 E-A-S- (CH2)n -CH-C - E2
hergestellt, worin . "
E Wasserstoff, Formyl, Acetyl, Propanoyl, Butanoyl, Phenylacetyl, Phenylpropanoyl, Benzoyl, Cyclopentancarbonyl, tert.-Butyloxycarbonyl, Cyclopentancarbonyl-L-lysyl, Pyro-. L-glutamyl-L-lysyl, L-Lysyl, L-Arginyl oder Pyro-L-glutamyl bedeutet,
A L-Phenylalanyl (oder D,L-Phenylalanyl), B-Phenylalanyl, D,L-Alanyl, D-Alanyl, D,L-Tryptophyl, D^ryptophyl, DjL-Tyrosyl, D-Tyrosyl, D,L-Isoleucyl, D-Isoleucyl, D,L-Leucyl, D-Leacyl, D,.L-Histidyl, D-Histidyl, D,L-Valyl oder D-Valyl darstellt und die oL-Aminogruppe dieser Beste an E in Amidbindung geknüpft ist,
für Wasserstoff oder Methyl steht,
L~Prolin, L-3,4~Dehydroprolin, D,Ir-3f4-Dehydroprolin, Ir-3-Hydroxyprolin, L-4-Hydroxyprolin, L-Thiazolidin-4-carbonsäure oder L-5-Oxo-prolin bedeutet und die Imino.-gruppe dieser Reste an die benachbarte Gruppe „ in Imidbindung geknüpft ist und ~
2280 14 5
-*- 3.8.1981
AP C Qf? C/228 014/5 (58 903 12)
η gleich O oder 1 ist und hierbei R^ für Methyl steht, wenn η gleich O ist»
Alle diese Verbindungen sind Inhibitoren für ACB und bei oraler Verabreichung wirksame Anti-hypertensiva.
ί (J) Ausführungsbe ispiel
Die Erfindung wird im folgenden durch Beispiele näher er-
: läutert, welche einerseits die Herstellung der oben genannten
; Verbindungen erläutern und andererseits die therapeutische
Wirkung dieser Verbindungen veranschaulichen*
\ Beispiel 1: Bestimmung der Aktivität von AGE·
Für die meisten der im folgenden beschriebenen Versuche wurde "das Enzym in 0,05molaren Hepes-Puffer geprüft,'welcher einen pH-Wert von 8,0 besaß und an NaCl O,"Unolar und an Na2SO^ 0,75-niolar war. Als Substrat wurde Benzoyl-GlyHisLeu bei
ί J einer Endkonzentration von 1 · 10 -molar (Km <;sL2 · 10 -molar)
zusammen mit etwa 130 000 cpm ^H/Benzoyl-GlyHisLeu (25
' Ci/mmol) verwendet. Das Enzym wurde im obigen Puffer soweit
verdünnt, daß 40 /il des gepufferten Enzyms in der Lage waren, 13 % des Substrats bei 37 0C innerhalb 15 Minuten zu hydrolysieren. Zu Beginn des Versuchs wurden 40^uI an Enzym und 10 μΙ Puffer oder in Puffer gelöster Inhibitor 5 Minuten auf 37 0C gehalten, worauf die Reaktion durch Zusetzen von 50 ;ul Substrat eingeleitet und die Lösung 15 Minuten auf 37 0C gehalten wurde« Die Reaktion wurde sodann durch Zusetzen von 0,1 ml einer 0,1molaren HCl abgebrochen, worauf noch 1 ml Äthylacetat zugesetzt wurde. Die Mischung wurde in einem rotierenden Mischer gerührt und zwecks Phasentrennung kurz zentrifugiert.
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Ein aliquoter Anteil der Ithylacetatschicht, u.zw. 500 μΐ' vfurde in ein 10 ml Riafluor enthaltendes Szintillationszählrohr eingebracht. Zwecks Bestimmung der I^Q-Werte wurde die sich bei verschiedenen Inhibitorkonzentrationen ergebende Enzymaktivität mit der sich in Abwesenheit eines Inhibitors ergebenden Enzymaktivität verglichen» Beim Auswerten eines die Abhängigkeit der erzielten Inhibition in % von der Inhibitorkonzentration veranschaulichten Diagramms wurde der IcO-^ert erhalten. .
Beispiel 2: Herstellung von N-/3-(Benzoyl-L~phenylalanylthio)-2-D-methyl-propanoyl7-L-prolin
a. Herstellung von N-^3-(Boc-L-phenylalänylthio)-2-D-methyl prppanoy!/-L-prolin
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Eine Lösung von 133 mg (0,5 mmol) Boc-L-Phe-OH in 0,5 rr frisch destilierten Dimethylformamids (DMF) wurde in einem Gemisch aus Eis, Trockeneis und Aceton auf -2O°C gekühlt und danr einer Lösung von 87 mg (0,54 mmol) 1,1'-Carbonyldiimidazol in
1 ml DMF versetzt, worauf das erhaltene Gemisch 2 Stunden bei -10 C gerührt und dann bei einer Temperatur von -10 C mit einer: Gemisch aus 1,0 ml DMF, 119,5 mg (0,55 mmol) 2-D-Methyl-3-merca topropanoyl-L-prolin und 0,07 5 ml (0,55 mmol) N-Äthylmorpholin versetzt .und das nunmehr vorliegende Gemisch noch eine Stunde t -10 C gerührt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde sodann langsam auf Raumtemperatur erwärmt, worauf das Lösungsmittel in einem rotierenden Verdampfer abgedampft, der erhaltene Rückstand in 1 Äthylacetat aufgenommen und die erhaltene Lösung in einem Eisbe gekühlt wurde. Die so erhaltene Lösung wurde sodann 2-mal mit €
2 ml 1n~Zitronensäure und dann noch 2-mal mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, worauf die Äthylacetat enthaltende Phase über wasserfreiem MgSO. getrocknet und dann filtriert wurde. Vc Filtrat wurde sodann das Lösungsmittel in einem rotierenden Vei dämpfer abgedampft, worauf der hiebei erhaltene Rückstand in ei geringen Menge eines im Volumsverhältnis von 7:3 aus Isopropanc und Tetrahydrofuran bestehenden Lösungsmittelgemisches gelöst ν die erhaltene Lösung auf eine mit Sephadex LH-20 gefüllte Kolor (1,2 cm χ 99 cm) aufgegeben wurde, welche zuvor mit dem gleichen I mittel ins Gleichgewicht gebracht worden war. Beim Eluieren dei Kolonne wurden Fraktionen zu je 2,55 ml aufgefangen. Die Fraktj Nr. 31 bis 36 wurden miteinander vereinigt und in einem rotiere den Verdampfer vom Lösungsmittel befreit', worauf der erhaltene Rückstand erneut in dem erwähnten Gemisch aus Isopropanol und Tetrahydrofuran gelöst wurde. Die erhaltene Lösung wurde auf ej mit Sephadex G-10 gefüllte Kolonne (1,2 cm χ 9 8 cm) aufgegeben und mit dem gleichen Lösungsmittelgemisch entwickelt, wobei Fn tionen zu je 2,55 ml aufgefangen wurden. Die Fraktionen Nr. 19 23 wurden miteinander vereinigt und lieferten 165 mg der gewün: Verbindung. Beim Reinigen der mit Sephadex LH-20 erhaltenen NeI fraktionen wurden weitere 40 mg der gewünschten Verbindung erh< Die erhaltene Verbindung erwies sich bei der bei einem pH-Wert 5,0 durchgeführten Papierelektrophorese und bei der an Silicag« platten unter Verwendung von drei verschiedenen Lösungsmittel-
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systömen durchgeführten Dünnschichtchromatographie als einheitliche Substanz. Aminosäureanalyse: Phe,- qQ, Pro y. Qy.*
b. Herstellung von N~/3-(HCl*H-Ir-Phenylalanylthio)~2-D-me t hyl-prop;anoyl7-L-prolin
200 mg N-^5-(Boc-L-phenylalanylthio)-2-D-methylpropanoyl7-L-prolin und 0,2 ml Anisol wurden bei O 0C unter Rühren vermischt, worauf das erhaltene Gemisch mit 0,4 ml wasserfreier Trifluoressigsäure versetzt und die erhaltene Lösung bei Kaumtemperatur (etwa 22 0C) 45 Minuten gerührt wurde. Die ^rifluoressigsäure wurde sodann bei 30 0C in einem rotierenden Verdampfer abgedampft, worauf der erhaltene Bückstand mit 1 ml mit Chlorwasserstoff gesättigtem Ithylacetat versetzt wurde. Vom erhaltenen Gemisch wurde sodann überschüssiges HCI und Ithylacetat in einem rotierenden Verdampfer abgedampft, womit ein öliger Rückstand erhalten wurde. Dieser Rückstand wurde sodann in wasserfreiem Äthyläther aufgenommen, worauf das erhaltene' Gemisch eine Stunde bei 0 0C stehengelassen wurde. Der hierbei entstandene Feststoff wurde abfaltriert und mehrmals mit wasserfreiem Äther gewaschen. Der hierbei erhaltene Feststoff wurde in einem Vakuumexsiccator über WaOH und PpO,- getrocknet.
c. Herstellung von N-^3-(Benzoyl-L-phenylalanylthio)-2-D-methyl-propanoyl/-L-prolin
Eine Lösung von 93 mg (0,23 mmol) N-/3-(HCl*H-L-Phenylalanylthio)-2-D-methyl-propanoyl7-L-prolin in 0,5 ml über Na redestilliertem Dioxan wurde mit e.iner Lösung von 0,029 nü. (0,25 mmol)Benzoylchlorid in 0,099 ml (0,71 mmol) N-Äthylmorpholin vermischt, worauf das Reaktionsgemisch nach einer
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Umsetzungsdauer von 1 Stunde bei Kaumtemperatur nochmals mit 0,029 ml Benzoylchlorid und 0,034 ml N-Äthylmorpholin Versetzt wurde. Eine Stunde nach der weiteren Zugabe von ^enzoylchlorid wurde das Reaktionsgemisch mit 0,2 ml Bisessig versetzt, worauf das Lösungsmittel in einem rotierenden Verdampfer bei 35 0C abgedampft und das erhaltene Rohprodukt durch Verteilungschromatographie in einer mit Sephadex G-25, welches zuvor mit einem im Volumenverhältnis von 4:1:5 aus n-Butanol, Essigsäure und Wasser bestehenden Gemisch in Gleichgewicht gebracht worden war, gefüllten Kolonne von 1,2 cm Durchmesser und 97 cm Länge weiter gereinigt wurde· Die Probe wurde in einem Gemisch aus
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0,3 ml der unteren Phase und 0,3 ml der oberen' Phase gelöst. Das Eluieren der Kolonne wurde mit der oberen Phase begonnen, wobei Fraktionen zu je 2,75 ml aufgefangen'wurden. Die Fraktionen Nr. 16 bis 18 wurden miteinander vereinigt und dann in einem , rotierenden Verdampfer bei 37 C vom Lösungsmittel befreit, worauf das erhaltene Produkt auf eine mit mit Äthylacetat ins Gleichgewicht gebrachtem Silicagel gefüllte Kolonne von 1,2 cm Durchmesser und 9 8 cm Länge aufgegeben und die Kolonne mit dem gleichen Lösungsmittel entwickelt wurde, wobei Fraktionen zu je 5,15 ml aufgefangen wurden. Die Fraktionen Nr.. 46 bis 60 wurden miteinander vereingj: und lieferten 52,5 mg der gewünschten Verbindung. Diese Verbindung erwies sich bei der mit 2 Lösungsmittelsystemen durchgeführten Dünnschichtchromatographie als reine Substanz.
Beispiel 3: Herstellung von N-/3-(Benzoyl-D-phenylalanylthio).-2- -D-methyl-propanoyjT-L-prolin
a. Herstellung von N-/3-(HCl-H-D-Phenylalanylthio)-2-D-methyl- -propanoyJ/^-L-prolin
Eine Lösung von 531 mg (2mmol) Boc-D-phenylalanin in 3 ml redestilliertem Dimethylformamid (DMF) wurde auf -20 C gekühlt und kräftig gerührt und dann mit.einer auf -1O°C gekühltetvLösung von 34.1 mg 1 ,1 '-Carboriyldiimidazol (2,1 mmol) in 3 ml DMF versetzt, worauf das erhaltene Gemisch 2 Stunden bei -10 C gerührt und dann mit einer Lösung von 456 mg 2-D-Methyl-3-mercaptopropanoyl-L-prolin (2,1 mmol) in 2 ml DMF und 0,285 ml N-Äthylmorpholin (2,1 mmol) versetzt und das nunmehr vorliegende Reaktionsgemisch eine Stunde bei -10 C gerührt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde sodann langsam auf Raumtemperatur erwärmt, worauf das Lösungsmittel bei 35 C in einem rotierenden Verdampfer abgedampft und der hiebei erhaltene Rückstand in .25 ml Äthylacetat gelöst und die erhaltene Lösung mit 3 ml Wasser versetzt wurde. Das nunmehr vorliegende Gemisch wurde auf 0 C gekühlt und. dann mit 0,3 ml konzentrierter Salzsäure angesäuert. Die organische Phase wurde einmal mit kalter verdünnter Salzsäure, 3-mal mit Wasser und schließlich noch 3-mal mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, dann über wasserfreiem MgSO. getrocknet und schließlich filtriert. Durch Abdampfen des Lösungsmittels vom· Filtrat in einem rotierenden Verdampfer wurde ein öliger Rückstand erhalten, der in einer.mit Sephadex LH-20, wel-
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ches zuvor mit einem im Volumsverhältnis von 7;3 aus Isopropanol und Tetrahydrofuran bestehenden Lösungsmittelgemisch ins Gleichgewicht gebracht worden war, gefüllten Kolonne von 2,2 cm Durchmesser und 98 cm Länge gereinigt, wobei Fraktionen zu je 5,6 ml aufgefangen wurden. Die Fraktionen Nr. 34 bis 38 wurden miteinander vereinigt. Die Fraktionen Nr. 33, 39, 40 und 41 wurden ebenfalls miteinander vereinigt und vom Lösungsmittel be freit und dann erneut auf die mit Sephadex LH-2O gefüllte Kolon aufgegeben und nochmals chromatographiert. Die beim nochmaligen Chromatographieren erhaltenen Fraktionen Nr. 37 bis 40 wurden m den bei erstmaligen Chromatographieren erhaltenen Fraktionen Nr. 34 bis 38 vereinigt, worauf das ganze in einer mit Silicage welches zuvor mit Äthylacetat ins Gleichgewicht gebracht worden war, gefüllten Kolonne von 1,2 cm Durchmesser und 9 8 cm Länge chromatographiert wurde und hiebei Fraktionen zu je 5,0 ml aufgefangen wurden. Die Fraktionen Nr. 22 bis 29 wurden miteinander vereini und in einem rotierenden Verdampfer vom Lösungsmittel befreit, . worauf der erhaltene Rückstand in 1 ml, 0,5 ml Anisol enthalten wasserfreier Trifluoressigsäure gelöst wurde. Das Abspalten der Schutzgruppen verlief hiebei bei Raumtemperatur innerhalb 0,5 Stunden. Das Lösungsmittel wurde sodann in einem rotierenden Verdampfer bei 35°C abgedampft, worauf der erhaltene Rückstand in 1 ml mit Chlorwasserstoff gesättigten Äthylacetats gelöst un die hiebei erhaltene Lösung bei 0 C mit 5 ml wasserfreiem Äther ,—\ versetzt wurde. Hiebei entstand ein weißer Niederschlag der nac """ 1-stündigem Stehenlassen der Lösung bei 0 C abfiltriert und dan 5-mal mit Äther- gewaschen wurde. Das erhaltene Produkt wurde üb Nacht in einem Vakuum exsiccator über NaOH und P2 0S 9etrocknet. Di gewünschte Verbindung wurde in einer Menge von 381 mg erhalten.
b. Herstellung von N-/3-(Benzoyl-D-phenylalanylthio)-2-D-methyl
93 mg (0,23 mmol) des gemäß obiger Stufe a erhaltenen N-/3-(HCl·H-D-Phenylalanylthio)-^-D-Methyl-propanoylJ-L-prolins wurden mit 0,029 ml (0,25 mmol) Benzoylchlorid in 0,5 ml redest liertem wasserfreiem Dioxan (0°C) und 0,099 ml (0,71 mmol) N-Ät morpholin bei Raumtemperatur innerhalb 3 Stunden unter kräftige Rühren umgesetzt, worauf das Reaktionsgemisch mit 0,015 ml Benz
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chlorid und 0,018 ml N-Äthylmorpholin versetzt und dann noch 1 Stunde gerührt wurde. Das Lösungsmittel wurde sodann vom Reaktionsgemisch in einem rotierenden Verdampfer bei 30 C abgetrieben, worauf der erhaltene Rückstand in einer geringen Menge der oberen Phase und der unteren Phase eines im Volumsverhältnis von 4:1:5 aus n-Butanol, Essigsäure und Wasser bestehenden Lösungsmittelgemisches gelöst und die erhaltene Lösung auf eine mit Sephadex G-25 gefüllte und für die Verteilungschromatographie ins Gleichgewicht gebrachte Kolonne von 1,2 cm Durchmesser und 98 cm Länge aufgegeben wurde. Die Kolonne wurde mit der oberen Phase als bewegliche Phase entwickelt, wobei Fraktionen zu je 2,6 ml aufgefangen wurden. Die Fraktionen Nr. 15 bis 24 wurden miteinander vereinigt und in einem rotierenden Verdampfer vom Lösungsmittel befreit/ worauf der erhaltene Rückstand in einer geringen Menge an Äthylacetat gelöst und in einer mit Silicagel, welches zuvor mit Äthylacetat ins Gleichgewicht gebracht worden war, gefüllten Kolonne von 1,2 cm Durchmesser und 25 cm Länge unter Verwendung von Äthylacetat als Eluiermittel weiter gereinigt wurde, wobei Fraktionen zu je 5 ml aufgefangen wurden. Die den Hauptscheitel zeigenden Fraktionen wurden miteinander vereinigt und vom Lösungsmittel befreit. Der erhaltene Rückstand wurde durch Chromato-'graphieren in einer mit Sephadex LH-20, welches zuvor mit einem im Volumsverhältnis von 7:3 aus Isopropanol und Tetrahydrofuran bestehenden Lösungsmittelgemisches ins Gleichgewicht gebracht worden war, gefüllten Kolonne von 1,8 cm Durchmesser und 98 cm Länge weiter gereinigt, wobei Fraktionen zu je 5,7 ml aufgefangen wurden. Der gewünschte Stoff war in den Fraktionen Nr.'15 bis 18' enthalten und wurde in einer Menge von 9 8 mg erhalten und erwies sich bei der bei einem pH-Wert von 5,0 und einem pH-Wert von 2,0 durchgeführten Papierelektrophorese und bei der Dünnschichtchromatographie als reine Substanz.
Beispiel 4: Herstellung von N-/3-Benzoyl-D,L-phenylalanylthio)-2- -D-methyl-propanoylJT'-L-prolin
Wenn bei der durch die Beispiele 2 und 3 erläuterten Arbeitsweise ein zu gleichen Teilen aus Boc-D-phenylalanin und Boc-L-phenylalanin bestehendes Gemisch eingesetzt wurde, wurde N-/3-Benzoyl-D,L-phenylalanylthio)-2-D-methyl-propanoyl/-L-prolin erhalten.
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. Beispiel 5: Herstellung von N-(2-Benzoylphenylalanylthiopropani
-L-prolin und N-(3-Benzoylphenylalanylthiopropanoyl)-L-prolin • · " Diese beiden Verbindungen wurden dadurch· hergestellt, <
bei den Arbeitsweisen gemäß den obigen Beispielen 2 bis 4 2-Me] topropanoyl-L-prolin oder 3-Mercaptopropanoyl-L-prolin statt df 2-D-Methyl-3~mercaptopropanoyl-L-prolins eingesetzt und entwed< mit Boc-D-phenylalanin oder mit Boc-L-phenylalanin oder mit eir diese beiden Verbindungen zu gleichen Teilen enthaltenden Gemis umgesetzt wurde. ·
Die Mercaptoverbindungen können nach den in der älterer j Anmeldung APA 61 K/215 457 beschriebenen Methoden hergestellt - -.- werden. - —
Beispiel 6: Herstellung von L-3,4-Dehydroprolin-, D,L-3,4-Dehyd prolin-, L-3-Hydroxyprolin-, L-4-Hydroxyprolin- und L-thiazolid -4-carbonsäurederivaten
Diese Verbindungen können dadurch hergestellt werden, d bei den durch die obigen Beispiele 2 bis 5 erläuterten Arbeitsweisen die jeweils entsprechende Mercaptoverbindung eingesetzt in welcher statt des Restes von L-Prolin der Rest des L-3,4-Deh prolins, D,L-3,4-Dehydroprolins, L-3-Hydroxyprolins, L-4-Hxdrox prolins oder der L-Thiazolidin-4-carbonsäure vorliegt. .' Die erforderlichen Mercaptoverbindungen können nach den
Angaben in der älteren Anmeldung APA 61 K/215 457 hergestellt werden. .
w Beispiel 7: Herstellung von D-Alanyl-, D-Tryptophyl-, D-Tyrosyl· D-Isoleucyl-, D-Leucyl-, D-Histidyl- und D-Valylderivaten
Diese Verbindungen können dadurch hergestellt werden, d; bei den Arbeitsweisen gemäß den Beispielen "2, 5 und 6 Boc-D-alai Boc-D-tryphophan, Boc-D-tyrosin, Boc-D-isoleucin, Boc-D-leucin, Boc-D-histidin oder Boc-D-valin statt des Boc-D-phenylalanins e; gesetzt wird.
Beispiel 8: Herstellung von D,L-Alanyl-, D,L-Tryptophyl-, D,L- -Tyrosyl-, DjL-Isoleucyl-, D,L-Leucyl-, D,L-Histidyl- und D,L- -VaIyIderivaten
Bei Herstellung dieser Verbindungen wird bei den Arbeits weisen gemäß den Beispielen 4 bis 6 ein zu gleichen Teilen aus d
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Verbindungen Boc-D-A und Boc-L-A, worin A für Alanin, Tryptophan, · Tyrosin, Isoleucin, Leucin, Histidin oder Valin steht, statt des Boc-D-phenylalanins und des Boc-L-phenylalanins eingesetzt.
Beispiel 9: Wenn statt des in den Beispielen 2, 3 und 5 bis 8 eingesetzten Benzoylchlorids eine entsprechende andere Verbindung eingesetzt wurde, wurden beim Arbeiten nach an sich bekannten Methoden, beispielsweise beim Arbeiten nach den in der älteren Anmeldung APA 61 K/215 457. angegebenen Methoden, die entsprechenden Formyl-, Acetyl-, Prppanoyl-, Butanoyl-, Phenylacetyl-, Phenylpropanoyl-, Cyclopentancarbonyl-, Cyclopentancarbonyl-L-lysyl-, Pyro-L-glutamyl-L-lysyl-, L-lysyl-, L-arginyl- und Pyro-L-glutamylderivate erhalten.
Beispiel 10: Herstellung von N-^3-Benzoyl-L-phenylalanylthio)-2-.-methyl-propanoylT-L-S-oxo-prolin
10 mmol L-glutaminsäure und 11 mmol Methacrylsäurechlorid wurden in 3 5 ml 1 η-Natronlauge bei Raumtemperatur 60 min miteinander umgesetzt, worauf die Umsetzung durch Einstellen des pH-Wertes des Reaktionsgemisches mittels 2 n-HCl auf ungefähr ~2 beendet wurde. Das Reaktionsgemisch wurde 2-mal mit einem dem Volumen des Reaktionsgemisches gleichen Volumen an Äthylacetat extrahiert, worauf der erhaltene Extrakt in einem rotierenden Verdampfer auf ein kleines Volumen eingeengt, durch Zusetzen von Äthyläther zum Konzentrat die gewünschte Verbindung zum Kristallisieren gebracht und der entstandene Niederschlag abfiltriert wurde. 6 mmol der so erhaltenen Verbindung wurden in 25 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran zunächst 1 Stunde bei 0°C und dann über Nacht bei 4°C mit 6 mmol Cyclohexylcarbodiimid umgesetzt, worauf vom Reaktionsgemisch der entstandene Dicyclohexyharnstoff abfiltriert, vom erhaltenen FiI-trat das Lösungsmittel mit einem rotierenden Verdampfer abgetrieben, das in einer Menge von 5 mmol erhaltene Anhydrid in 3 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran und 6 ml wasserfreiem Äthyläther gelöst, die erhaltene Lösung mit einer Lösung von 5 mmol Dicyclohexylamin in 2 ml Äthyläther versetzt, durch Einstellen des pH-Wertes der erhaltenen Lösung auf 2,0 mittels 2 n-HCl aus dem erhaltenen Salz des Methacryloyl-L-5-oxö-prolins die Säure freigesetzt, aus dem erhaltenen Gemisch diese Säure mit Äthylacetat extrahiert,
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der erhaltene Extrakt zur Trockene eingedampft und der Rücksta aus einem Gemisch von Hexan und Äthylacetat umkristallisiert wurde. 3 mmol des-so hergestellten Methacryloyl-L-5-oxo-prolin wurden bei Rückflußtemperatur innerhalb einer Stunde mit 3 mmo Thioessigsäure zu 3-Acetylthio-2-methyl-propanoyl-L-5-oxo-prol umgesetzt, das sodann aus einem Gemisch aus·Äthylacetat und He: umkristallisiert wurde. Von so hergestellten 3-Acetylthio-2-me -propanoyl-L-5-oxo-prolin wurde die als Schutzgruppe vorliegen! Acetylgruppe mittels eines Anisol enthaltenden Gemisches aus flüssigem NH^ und Methanol abgespalten, worauf vom Reaktionsgemisch das Lösungsmittel mittels eines rotierenden Verdampfers '; getrieben, der erhaltene Rückstand in Äthylacetat gelöst, die < hialtene Lösung mit kalter verdünnter Salzsäure gewaschen und d< mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befrei1 der hiebei erhaltene Rückstand in 4 ml Dimethylformamid gelöst und die erhaltene Lösung mit 2 mmol 1-Hydroxybenzotriazol und 2 mmol des N-Hydroxy-succinididesters des Benzoyl-L-phenylalanJ versetzt wurde. Nachdem' im erhaltenen Gemisch die Umsetzung be Raumtemperatur während 48 Stunden ablaufen gelassen worden war, wurde vom Reaktibnsgemisch das Lösungsmittel mittels eines roti renden Verdampfers abgetrieben, der hiebei erhaltene Rückstand in einer geringen Menge an Äthylacetat gelöst, die erhaltene Lc sung mit kalter verdünnter HCl und dann noch mit gesättigter Kc salzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über MgSO. und dem A filtrieren des MgSO. mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit, worauf der erhaltene Rückstand in 0,5 ml Tetrahydrofuran gelöst und die erhaltene Lösung auf eine mit in Gleichgewicht gebrachtem Sephadex LH-20 gefüllte Kolonne von
2,5 cm Durchmesser und 100 cm Länge aufgegeben und die Kolonne : Tetrahydrofuran eluiert wurde. Von den die gewünschte Verbindun (durch ihre Absorption bei 280 nm erkennbar) enthaltenden Fraktionen des Eluats wurden miteinander vereinigt und in einem *rot renden Verdampfer im Hochvakuum vom Lösungsmittel befreit.
Beispiel 11: Die Inhibitorwirkung verschiedener der in der oben angegebenen Weise hergestellten Verbindungen wurde in vitro nacl den Angaben im Beispiel 1 bestimmt. Das Enzympräparat wurde nacl den Angaben von Ryan, J.W., et al in Tissue and Cell·10, 555 (1 <
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aus menschlichem Urin gewonnen. Die folgende Tabelle zeigt die IcQ-Werte für verschiedene Verbindungen. Der IrQ-Wert bedeutet jene Inhibitorkonzentration, welche erforderlich ist, das Enzym in einem das Substrat in einer beträchtlich unterhalb K liegenden
Menge enthaltenen normierten Versuchssystem zu 50 %'zu inhibieren
TABELLE
Verbindung
Beispiel 2 Beispiel 3
1,6 9
10 10
50
-8 molar -9 molar
-E.
1'. Inhibitor für das Angiotensin umwandelnde Enzym^der allgemeinen Formel
Il
R-A-S- (CH0) -CH-C-
2-n ,
worin
R Wasserstoff, Formyl, Acefc^l, Propanoyl, Butanoyl, Phenylacetyl, Phenylproparioyl, Ben^royl, Cyclopentancarbonyl, tert.- -Butyloxycarbonyl, CyclopenJ^ancarbonyl-L-lysyl, Pyro-L-glutamyl- -L-lysyl, L-Lysyl, L-Aroinyl oder Pyro-L-glutamyl bedeutet,
A L-Phenylalaiiyl (oder D ,L-Phenylalanyl) , D-Phenylalanyl, D,L-Alany, D-Alanyi; D,L-Tryptophyl, D-Tryptophyl, D,L-Tyrosyl, D-Tyrosyl, DjLr'isoleucyl, D-Isoleucyl, D,L-Leucyl, D-Leucyl, D,L-HistidyZ; D-Histidyl, D,L-Valyl oder D-Valyl darstellt und die c<-Aminogruppe dieser' .Reste an R in Amidbindung geknüpft ist, R1 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R2 L-Prolin, L-3,4-Dehydroprolin, D,L-3,4-Dehydroprolin, L-3-Hydroxyprolin, L-4-Hydroxyprolin, L-Thiazolidin-4-carbonsäure oder L-5-Oxo-prolin bedeutet- und die Iminogruppe dieser Reste an
die benanhharfp
-C-
id

Claims (3)

  1. 228014 5
    3.8.1981
    AP C Ο? C/228 014/5
    (58 903 12)
    Erfindungsanspruch
  2. 1. Verfahren zum Herstellen eines Inhibitor für das
    • Angiotensin umwandelnde Enzym der allgemeinen Formel
    0 R-A-S- (CH2)n -CH-(J-E2 (I),
    Yiorin
    R Wasserstoff, Formyl, Acetyl, Propanoyl, Butanoyl, Phenylacetyl, Phenylpropanoyl, Benzoyl, Cyclopentancarbonyl, tert.-Butyloxycarbonyl, Cyclopentancarbonyl-L-lysyl, Pyro-L-glutamyl-L-lysyl, L-Lysyl, L-Arginyl oder Pyro-L-glutamyl bedeutet,
    A L-Phenylalanyl (oder D,L-Phenylalanyl), D-Phenylalanyl, D,L-Alanyl, D-Alanyl, DjL-Tryptophyl, D-Sryptophyl, D,L-Tyrosyl, D-Tyrosyl, DjL-Isoleucyl, D-Isoleucyl, D',L-Leucyl, D-Leucyl, D,L-Histidyl, D-Histidyl, D,L-Valyl oder D-Valyl darstellt und die oc -Aminogruppe dieser Reste an R in Amidbindung geknüpft ist,
    2280U 5
    ' 3.8.1981
    · AP C 07 C/228 014/5 (58 903 12)
    Rj für Wasserstoff oder Methyl steht,
    L-Prolin, Ir-3,4-Dehydroprolin, D,L-3,4-Dehydroprolin, Ir-3-Hydroxyprolin, Χ-Λ-Hydroxyprolin, L-Thiazolidin-4— carbonsäure oder L-5-Oxo-prolin bedeutet und die Imino'gruppe dieser Reste an die benachbarte Gruppe „
    in Imidbindung geknüpft ist und
    η gleich O oder 1 ist und hierbei E^ für Methyl steht, wenn η gleich O ist,
    gekennzeichnet dadurch, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel ·
    (a) E-OH bzw. (b) E-A-OH,
    worin R und A die oben angegebene Bedeutung besitzen, mit einer Verbindung der allgemeinen Formel
    (a) HA-S-( CH2) ^CH-C-:
    (b) HS-(CH2)n-CH-C-E2
    worin A, E,,, E2 und η die .oben angegebene Bedeutung besitzen, vorzugsweise in Anwesenhe.it eines Kondensationsmittels, umgesetzt wird.
    22 80 14 5
    -25- 3.8.1981
    AP C 07 C/228 014/5 (58 903 12)
    Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß durch Wahl entsprechender Ausgangsstoffe und Verfahrensschritte eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin E.für Benzoyl, A für D-Phenylalanyl oder L-Phenylalanyl, E^ für Methyl und E2 für L-Prolin ,steht und η bleich 1 ist. _ .„,__
    3· Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet--dadurch, daß durch Wahl entsprechender Ausgangsstoffe und Verfahrensschritte eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin E für Wasserstoff, A für L-Phenylalanyl, E^ für Methyl und E2 für L-Prolin steht und η gleich 1 ist.
  3. 4. Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnst dadurch, daß
    durch Wahl entsprechender Ausgangsstoffe und Verfahrensschritte eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt wird, worin E für Wasserstoff, A für D-Phenylalänyl, R. für Methyl, E2 für L-Prolin steht und η gleich D 1 ist.
DD81228014A 1980-03-03 1981-03-03 Verfahren zur herstellung eines neuen inhibitors fuer das angiotensin umwandelnde enzym DD158238A5 (de)

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PT (1) PT70158A1 (de)
ZA (1) ZA803486B (de)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4692458A (en) * 1980-03-05 1987-09-08 University Of Miami Anti-hypertensive agents
JPS57209270A (en) * 1981-06-19 1982-12-22 Chugai Pharmaceut Co Ltd Proline derivative
DK110285A (da) * 1984-03-12 1985-09-13 Pfizer Polypeptider og polypeptidderivater indeholdende statin eller derivater deraf og farmaceutiske praeparater
US5025001A (en) * 1988-06-15 1991-06-18 Brigham And Women's Hospital S-nitroso derivatives of ACE inhibitors and the use thereof
US5187183A (en) * 1988-06-15 1993-02-16 Brigham & Women's Hospital S-nitroso derivatives of ACE inhibitors and the use thereof
US5356890A (en) * 1988-06-15 1994-10-18 Brigham And Women's Hospital S-nitroso derivatives of ace inhibitors and the use thereof
DE4010797A1 (de) * 1990-04-04 1991-10-10 Hoechst Ag Substituierte azole, verfahren zu deren herstellung, diese enthaltende mittel und deren verwendung
DE10115938A1 (de) * 2001-03-30 2002-10-10 Medigene Ag Ges Fuer Molekular Verfahren zur Herstellung von Oxirancarbonsäuren und Derivaten davon
US11229746B2 (en) 2006-06-22 2022-01-25 Excelsior Medical Corporation Antiseptic cap
US9259535B2 (en) 2006-06-22 2016-02-16 Excelsior Medical Corporation Antiseptic cap equipped syringe
US9078992B2 (en) 2008-10-27 2015-07-14 Pursuit Vascular, Inc. Medical device for applying antimicrobial to proximal end of catheter
US10166381B2 (en) 2011-05-23 2019-01-01 Excelsior Medical Corporation Antiseptic cap
CA2841832C (en) 2011-07-12 2019-06-04 Icu Medical, Inc. Device for delivery of antimicrobial agent into a trans-dermal catheter
AU2015252808B2 (en) 2014-05-02 2019-02-21 Excelsior Medical Corporation Strip package for antiseptic cap
AU2016262400B2 (en) 2015-05-08 2021-01-21 Icu Medical, Inc. Medical connectors configured to receive emitters of therapeutic agents
CA3040277C (en) 2016-10-14 2025-08-12 Icu Medical, Inc. DISINFECTANT CAPS FOR MEDICAL FITTINGS
WO2018204206A2 (en) 2017-05-01 2018-11-08 Icu Medical, Inc. Medical fluid connectors and methods for providing additives in medical fluid lines
EP3765123B1 (de) 2018-03-16 2026-07-15 ICU Medical, Inc. Desinfektionskappen für medizinische konnektoren
JP6600386B1 (ja) * 2018-07-06 2019-10-30 Ｋｙｂ株式会社 弁装置
US11541220B2 (en) 2018-11-07 2023-01-03 Icu Medical, Inc. Needleless connector with antimicrobial properties
US11400195B2 (en) 2018-11-07 2022-08-02 Icu Medical, Inc. Peritoneal dialysis transfer set with antimicrobial properties
US11534595B2 (en) 2018-11-07 2022-12-27 Icu Medical, Inc. Device for delivering an antimicrobial composition into an infusion device
US11541221B2 (en) 2018-11-07 2023-01-03 Icu Medical, Inc. Tubing set with antimicrobial properties
US11517732B2 (en) 2018-11-07 2022-12-06 Icu Medical, Inc. Syringe with antimicrobial properties
EP3883638A1 (de) 2018-11-21 2021-09-29 ICU Medical, Inc. Antimikrobielle vorrichtung mit einer kappe mit ring und einsatz
JP7888563B2 (ja) 2020-12-07 2026-07-13 アイシーユー・メディカル・インコーポレーテッド 医療用コネクタのためのキャップシステム、キャップと共に使用されるベース要素、及びベース要素上にキャップを保持するための方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3947575A (en) * 1969-06-30 1976-03-30 E. R. Squibb & Sons, Inc. Peptides as argiotensin converting enzyme inhibitors
US3832337A (en) * 1970-07-28 1974-08-27 Squibb & Sons Inc Peptide enzyme inhibitors
US3891616A (en) * 1974-04-17 1975-06-24 Squibb & Sons Inc Hypotensive {62 -homoaminoacid nonapeptides
US4046889A (en) * 1976-02-13 1977-09-06 E. R. Squibb & Sons, Inc. Azetidine-2-carboxylic acid derivatives
US4052511A (en) * 1976-02-13 1977-10-04 E. R. Squibb & Sons, Inc. Carboxyacylproline derivatives
US4053651A (en) * 1976-05-10 1977-10-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Compounds and method for alleviating angiotensin related hypertension
US4113715A (en) * 1977-01-17 1978-09-12 E. R. Squibb & Sons, Inc. Amino acid derivatives
GR73585B (de) * 1978-09-11 1984-03-26 Univ Miami

Also Published As

Publication number Publication date
PT70158A1 (en) 1982-03-01
EP0035383A1 (de) 1981-09-09
IL62203A (en) 1984-07-31
NZ194002A (en) 1982-12-21
US4692459A (en) 1987-09-15
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JPH03386B2 (de) 1991-01-07
DE3163812D1 (en) 1984-07-05
DK93081A (da) 1981-09-04
AU5922780A (en) 1981-09-10
JPS56164115A (en) 1981-12-17
AU534945B2 (en) 1984-02-23
ZA803486B (en) 1981-06-24
ATA97081A (de) 1987-07-15
FI76558C (fi) 1988-11-10
AT385038B (de) 1988-02-10
IE810460L (en) 1981-09-03
FI810663L (fi) 1981-09-04

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