DD156805A5 - Verfahren zur herstellen anti-hypertensiv wirkender stoffe - Google Patents

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung antihypertensiv wirkender Verbindungen. Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung von neuen Verbindungen, die ohne Ausnahme fuer alle Patienten, unabhaengig von der Verabreichungsform und ohne irgendwelche Nebenwirkungen zu veranlassen, fuer die Behandlung von Bluthochdruck angewandt werden koennen. Erfindungsgemaess werden neue Verbindungen der allgemeinen Formel I hergestellt, worin beispielsweise bedeuten: R Wasserstoff, t-Butyloxycarbonyl, Cyclopentancarbonyl-L-Iysyl, u.a.;A Phenylalanyl, Tryptophyl, Tyrosyl, Glycyl, Isoleucyl u.a.;R tief 1 Wasserstoff oder Methyl;R tief 2 L-Prolin, L-3,4-Drehdroprolin, L-Thiazolidin-4-carbonsaeure, u.a.;wobei die Iminogruppe dieser Reste mit der Gruppe in Imidbindung geknuepft ist; R tief 3 eine saeuresensible Schutzgruppe fuer eine Aminogruppe, gegebenenfalls vorhandene freie Aminogruppe eines der obengenannten Reste; R tief 4 eine photosensible Schutzgruppe fuer eine Aminogruppe, gegebenenfalls in Resten der oben angegebenen Art vorhandene Aminogruppe; n ist 0 oder 1.

Description

Berlin» den 2*9,1981

Q ϊ / U ^ AP C 07 C/228 170/8

-Ί~ 58 934/18

Verfahren zum Herstellen anti-hypertensiv wirkender Stoffe Anwendungsgebiet, der Erfindung

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von neuen Verbindungen mit wertvollen pharmakologischen Eigenschaften^ insbesondere anti~hypertensiver Wirkung* Die erfindungsgemäS hergestellten Verbindungen werden angewandt als Arzneimittel©

Charakteristik der bekannten technischen L6sun3en'

Das Angiotensin umwandelnde Enzym (eine im folgenden als ACE bezeichnete Peptidyldipeptidhydrolase) spielt in der Physiologie Oberhöhten Blutdrucks eine zentrale Rolle und ist in der Lage,das Aminosäuresequenz

AspArgValTyrlleHisProPheHisLeu

besitzende Decapeptid Angiotensin I dadurch in ein Ocfepeptid, das Angiotensin II> überzuführen* daß es die Hydrolyse der vorletzten Peptidbindung im Angiotensin I katalysiert und damit den endständigen Carbonsäurerest HisLeu abspaltet*

Es werden folgende Symbole für verschiedene Reste Von Aminosäuren verwendet

ACE = Angiotensin umwandelndes Enzym

AIa = LWVLanin Arg « L^Arginin

Asp a L-Asparaginsäure

Boc β t»Butyloxycarbonyl

Bpoc .« 2»(4-Biphenyl)«2«propyloxycarbonyl

Bz - Benzoyl

Q 2_#9«1981

AP C 07 C/228 170/8 ~ 2 ~ 58 934/18

Cbo = Benzyloxycarbonyl

Ddz β N- e^|p£ «Dimethyl«^5«dimethyloxycarbonyl

GIy = Glycin

His = L-Histidin

lie = L,-»Isoleucin

Leu « L~>Leucin

Phe = L«°Phenylalanin

Ppoc = 2*«Phenylisopropyl oxycarbonyl

Pro a L^Prolin

A Pfo'» L«3_e:4~Dehydroprolin

Sa r = L- Serin

Trp = L»Tryptophan

Tyr = L-Tyrosin

VaI - L-VaIin

Angiotensin II ist ein stark wirksamer Pressor* also ein den Blutdruck erhöhender Stoff_e; und wirkt nicht nur blut~ druckerhöhendji sondern stimuliert auch die Ausschüttung von Aldosteroni das Retention extrazellulärer Salz© und Flüssigkeiten bewirkt'und damit den Blutdruck erhöht* Angiotensin II ist im Blut normaler Menschen in meßbarer Menge nachweisbar und findet sich im Blut von Patienten mit renaler Hypertension in erhöhter Konzentration*

Der Pegel der ACE-Wirkung ist in aer Regel sowohl in normalen Menschen als auch in an überhöhtem Blutdruck leidenden Manschen höher als er zum Aufrechterhalten der beobachteten Konzentration an Angiotensin II erforderlich ist^ jedoch wurde festgestellt, daß der Blutdruck von an überhöhtem Blutdruck leidenden Patienten durch Behandlung mit ACE»Inhibitoren TCavraSj I₁₀, et al,, New Engl* 0· Mad«, 291, 817 (1974)J beträchtlich verringert werden kann.

22817 0 8 ²·⁹·¹⁹⁸¹

fe. ^ ^ » w w APC 07 C/228 170/8

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Die Rolle von ACE in der Pathogenese von überhöhtem Blutdruck hat dazu geführt,solche Inhibitoren für dieses Enzym aufzufinden, welche antihypertensiv wirken können (vgl» beispielsweise die US-PSen 3 891 616, 3 947 575, 4 052 und 4 053 651)« Die Reaktionsfähigkeit von ACE schwankt in Abhängigkeit vom Substrat beträchtlich« Zahlreiche als Inhibitoren für die enzymatische Umwandlung von Angiotensin I in Angiotensin II bezeichnete Peptide besitzen aber eine niedrigere Michaelis-Konstante (K ) als Angiotensin I und sind daher zutreffender als konkurrenzierende Substrate zu bezeichnen,*

In der US-PS 3 832 337 sind zahlreiche synthetisch hergestellte Peptide beschrieben, welche als ACE-Inhibitoren wirken* Ein äußerst stark wirksamer und bei oraler Verabreichung hohe biologische Wirkung entfaltender Inhibitor ist das in der US-PS 4 046 889 und von Cushman* D_e W_# et al·; γ. in Biochemistry 16, 5484 (1977), und von Ondetti, M<» et al«-'£ in Science 196, 441 (1977) beschriebene und im folgenden als SQ14225 bezeichnete D-3-»Mercapto-2«methylpropanoyl-L-proiin«, Der Inhibitor SQ14225 besitzt einen I,__n~Wert von

—8

2v3 ♦ 10 molar, welcher gemäß der oben genannten Literaturstelle von Cushman et al» jene Inhibitorkonzentration ist« welche das Enzym unter normierten Versuchsbedingungen zu 50 % inhibiert, wenn bei dem Versuch eine wesentlich oberhalb K liegende Substratkonzentration aufrechterhalten wird«, Die I₅₀-Werte sind direkt miteinander vergleichbar, wenn alle die Reaktion wesentlich beeinflussenden Faktoren konstant gehalten werden* zu welchen die Enzymquelle und ihre Reinheit,,, das eingesetzte Substrat und dessen Konzentration und die Zusammensetzung des bei dem Versuch verwendeten Puffers gehören» Alle im folgenden angegebenen

I / U ö .-2.9.1981

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gQ wurden mit dem gleichen Versuchssystem und dem gleichen Enzym (ACE aus menschlichem Urin) und mit einem etwa yz K_m entsprechenden Substratpegel ermittelt und sind damit grundsätzlich vergleichbare

Der VVirkmodus von SQ14225 wurde auf ein in Analogie zum · besser bekannten verwandten Enzym Carboxypeptidase A beruhendes Modell des Wirkungszentrums des ACE gegründet. Das Wirkungszentrum soll voraussetzungsgemäß einen kationischen Bereich zum Abbinden der endständigen C_arboxygruppe des Substrats und eine Tasche bzw* einen Spalt zum Abbinden der Seitenkette der C-terminellen Aminosäure und zum besonders festen Binden des heterozyklischen Rings eines terminellen Prolinrestes aufweisen« In gleicher Weise wurde eine Tasche oder ein Spalt für den vorletzten Aminosäurerest vorausgesetzt, wobei auf Grund von veröffentlichten Daten eine ziemlich strenge sterische Forderung nahegelegt wird» da die D-Form des Inhibitors wesentlich stärker wirksam war als dessen Stereoisomer oder dessen 3~Methyl~derivat oder dessen unsubstituierte Analoga« Die im Inhibitor vorliegende SuIfhydrylgruppe, welche an den nahe dem katalytisch wirkenden Zentrum gelegenen aktiven Bereich gebunden sein dürfte_f spielt mutmaßlich eine zentrale Rolle bei der Inaktivierung des Enzyms durch Verknüpfung mit dem bekanntermaßen für die katalytische Wirkung wesentlichen Zinkrest, Substituenten an der SuIfhydrylgruppe_e beispielsweise eine Methylgruppe oder eine Acetylgruppe am S«-Atom_e verringern die Wirksamkeit des Inhibitors beträchtlich (vgl« Cushman_p D„ W«, et al,_f Biochemistry, oben)*

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In vitro durchgeführte Untersuchungen über den der Inhibierung des ACE durch SQ14225 und seinen Analoga zugrundeliegenden Wirkungsmechanismus wurden durch die Instabilität dieser Moleküle unter den Umgebungsbedingungen ziemlich gestört» Beispielsweise wurde beobachtet, daß eine frisch bereitete wäßrige Lösung von SQ14225, welche beispielsweise 1 mg SQ14225 pro ml enthält, bei einem pH-Wert von etwa 8 beim Stehenlassen während 30 Minuten einen starken Wirkungsabfall zeigt und die Wirksamkeit dieser Lösung bei noch längerem Stehenlassen immer weiter abfällt* Es wird angenommen, daß dieser Verlust an Wirksamkeit hauptsächlich durch eine an den endständigen Sulfhydrylgruppen ablaufende Dimerisierung bedingt ist, im Zuge derselben ein als Inhibitor im wesentlichen unwirksames Disulfid ent steht♦ Da die freie Sulfhydrylgruppe äußerst reaktionsfähig ist und leicht zu polaren Säureresten wie einer Sulfongruppe oder einer Sulfoxidgruppe oxydiert Werden kann, kann ein Grund für den in vitro beobachteten Wirkungsverlust von wäßrigen Lösungen von SQ14225 beim Stehen zum Teil eine Folge einer solchen Oxydationsreaktion oder mehrerer solcher Oxydationsreaktionen sein, im Zuge derselben ein nicht als Inhibitor für ACE geeignetes Sulfon oder SuIfoxid entsteht*

Derzeit für SQ14225 zur Verfügung stehende Versuchsberichte, in einigen derselben diese Verbindung als "Captopril" bezeichnet ist, besagen* daß diese Verbindung im normalen Magen- und Darmtrakt der meisten Patienten hinreichend stabil ist und bei oraler Verabreichung ein gut wirksamer Inhibitor für ACE ist» Es ist jedoch noch nicht klar, ob es nicht doch Patienten gibt, bei welchen SQ14225 im wesentlichen unwirksam bleibt. Wegen der hohen

29 Q 1 7 Ω 8 2_Φ9»1981

£, U V AP C 07 C/228 170/8

* ': - 6 - 58 934/18

Reaktionsfähigkeit der freien SuIfhydrylgruppen in SQ14225 kann diese Verbindung mit Serum« und Zellproteinen oder -peptiden oder mit anderen eine freie Sulfhydrylgruppe aufweisenden Substanzen im Magen- oder Darmkanal gemischte Disulfide zusätzlich zu Dimeren durch oxydativen Abbau bilden«*Ein gemischtes Disulfid mit einem Protein kann ein Antigen darstellen^ und es wurden auch schon gelegentlich klinisch allergische Reaktionen beobachtet (vgl, Gavras* et al«, New England ü, Med. 298, 991 (1978))* Allenfalls entstandene Disulfide und Oxydationsprodukte von SQ14225 können bestenfalls hur als Inhibitoren weitgehend unwirk~ same Stoffe darstellen«, Dementsprechend kann angenommen werden^ daß bei Verabreichung von SQ14225 das Ansprecheneinzelner Patienten auf die verabreichte Dosis von der Verabreichungsart und vom jeweiligen Patienten abhängig ist» Darüber hinaus können in zumindest einigen Patienten unerwünschte Nebeneffekte auftreten_t wobei es auch schwierig sein kann_s im Körper eine hinreichend wirksame Inhibitorkonzentration aufrechtzuerhalten«

Thioester werden allgemein als stark reaktionsfähig be= zeichnet^ da die Thioestergruppe leicht in einen Sulfhydryl« rest und in einen Carbonsäurerest gespalten wird« Thioester werden deshalb häufig als Zwischenprodukt für das Acylieren unter milden Bedingungen eingesetzt© Solche Gruppen, wie beispielsweise die Acetylthiogruppe_e wurden deshalb auch gemäß den US-PSsn 3 832 337 und 4 046 889 als Schutzgruppen vorgesehen« Es wird weiterhin angenommen^ daß Thioester auch als Zwischenprodukte bei der Biosynthese cyclischer Peptide., wie Tyrocidin oder Gramicidin S^^vgl» Lipmann, F« in Accounts Chem* Res« 6_β 361 (1973)3 auftreten»

jf| 2,9.1981

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Dem SQ14225 verwandte Verbindungen sind in den US-PSen 4 046 889, 4 052 511, 4 053 651, 4 113 715 und 4 154 840 beschrieben, wobei jene Analoga von S014225 von besonderem Interesse sind, in welchen der fünfgliedrige heterocyclische Ring des Prolins durch einen viergliedrigen oder sechsgliedrigen Ring ersetzt ist* Die Inhibitorwirkung solcher Analoga ist nicht mit jener des S014225 verglichen» Es ist weiterhin berichtet worden, daß beim Austausch des L-Prolinrestes gegen den D-Prolinrest die Inhibitorwirkung von 3-Mercaptopropanoyl«aminosäuren (Cushman, D, W_e et al,_t oben) drastisch verringert wird*

Bis zum derzeitigen Zeitpunkt ist der Einfluß der links vom Schwefelatom in Thioesterverbindungen stehenden Aminosäure noch nicht bestimmt worden. Es wird angenommen, daß diese Aminosäure als zusätzliche Erkennungsstelle für das Enzym wirkt, Falls dies zutrifft, wäre zu erwarten _t daß eine an dieser Stelle einen Aminosäurerest aufweisende Verbindung einen besseren Inhibitor darstellt,

ZJeI₁ der Erfindung

Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung von neuen antihypertensiv wirkenden Stoffen, die ohne Ausnahme von allen Patienten, unabhängig von der Verabreichungsform und ohne irgendwelche Nebenwirkungen zu veranlassen« für die Behandlung von Bluthochdruck angewendet werden können,

Darlegung des Wesens der Erfindung

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Verbindungen mit anti-hypertensiver Wirkung und Verfahren zu ihrer Herstellung aufzufinden.

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Die Patentinhaberin hat gefunden,, daß verschiedenste Aminosäuren wirksam sind und daß Hydroxyproline^ Prolin, L- und D,L.->3,4~dehydroprolin, Thiazolidin-^-carbonsäure und L-5-Oxo~prolin-derivate durchwegs antihypertensiv wirkende Stoffe mit hoher Inhibitorwirkung für ACE ergebene

Die vorliegende Erfindung bezieht sich nun auf ein Verfahren zum Herstellen von neuen Verbindungen der allgemeinen Formel '

R « A ~ S - (^CH ₂)_n "* ^CH - ^c - ^R2 (-¹)'··

R für Wasserstoff, Formyl, Acetyl, Propanoyl, Butanoyl, Phenylacetyl, Phenylpropanoyl, Benzoyl, Cyclopentancarbonyl, terte-Butyloxycarbonyl, Cyclopentancarbonyl-L-lysyl, Pyro-L-glutamyl-L-'lysylj L-Lysylj. L-Arginyl oder Pyro»L»glutamyl steht,

A für Phenylalanyle Alanyl, Tryptophyl_t Tyrosylj Isoleucyl» Leucyl, Glycyl, Histidyl oder Valyl steht und die ©«*- Arainogruppe dieser Reste an R in Amidbindung geknüpft ist,

R₁, Wasserstoff oder Methyl bedeutet,

R₂ für L-Prolitv L-3»^:4-Dehydroprolin, D_#L-3_i4-*Dehydroprolin_e L-3-Hydroxyprolin, L~4^Hydroxyprolin_e L-Thiazolidin-4- -carbonsäure oder L~5-Oxo~prolin steht und die Iminogruppe hiervon an die benachbarte Gruppe n in Imidbindung geknüpft ist.

22 81/0 8 2.9.1981

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η gleich ist 0 oder 1 und hierbei R^ für Methyl steht, wenn η gleich 1st 0 und, falls η gleich ist 1 und R₁ für Methyl steht, der Rest -CH₂ -CH« D-Konfiguration

besitzt« Diese Verbindungen sind Inhibitoren für ACE und bei oraler Verabreichung als Anti-Hypertensiva wirksam*

Für die im folgenden beschriebenen Ausführungsformen des erfindungsgemäßen Verfahrens sind die einzelnen Arbeitsschritte für den Fall erläutert,, daß in der herzustellenden Verbindung der allgemeinen Formel (I) R für Benzoyl, A für Phenylalanyl, R^ für Methyl und R₂ für L-Prolin steht und η gleich ist 1 und dementsprechend N^-fS-N^Benzoylphenylalanyl-thio)-2-D~methylpropanoyIj-L-prolin hergestellt wird, jedoch ist es offensichtlich, daß die anderen von der allgemeinen Formel (I) umfaßten Verbindungen in der gleichen Weise hergestellt werden können, wenn Ausgangsstoffe eingesetzt werden, in welchen statt der oben als Beispiel genannten Reste Reste mit jeweils einer der anderen angegebenen Bedeutungen für diese Reste verwendet werden» Beispielsweise kann bei allen der im folgenden beschriebenen Arbeitsweisen das L-Prolin durch L-3,4-Dehydroprolin, D,L-3_S4-Dehydroprolin, L-3-Hydroxyprolin_f L-4-Hydroxyprolin, L-Thiazolidin-4~carbonsäure oder L-5-Oxo-prolin ersetzt werden. In durchaus ähnlicher Weise kann statt des oben als Beispiel für A stehenden Phenylalanins irgendeine andere der oben für A angegebenen Aminosäuren stehen« Weitere erwünschte Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können, sofern im folgenden nichts anderes angegeben ist, hergestellt werden, wenn entsprechend andere Reste aufweisende Ausgangsstoffe eingesetzt werden*

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Bei verschiedenen der im folgenden beschriebenen Ausführungsforraen des erfindungsgemäßen Verfahrens^ bei welchen N^-R^-Thiophenylalanin* worin R- für H_t Bz, Boc oder Ddz steht, mit Methacrylsäure oder einem Hethacrylsäureester oder mit 3-Brom>«>2~methyl»»propionsäure zur 3-N^-R,-Phenylalanylthio«2~m6thyl-propionsäure oder zum entsprechenden Ester umgesetzt wird,' wird aus dem erhaltenen Isomerengemisch die 3«N^~R₃-Phenylalanylthio«2-D~niethylpropionsäure oder ihr Ester abgetrennt und dann mit L~Pro zur gewünschten Verbindung umgesetzt« Bei anderen Ausführungsformen des erfindungsgemäßen Verfahrens wird N^-R -Phenylalanin oder ein aktiver Ester dieser Verbindung, worin R- für Bz, Bpoc, Ddz steht, mit 3«~Mercapto~2-methylpropionsäure oder einem Ester hiervon zu 3-N⁸³^-R₄-Phenylalanylthio-2-methylpropionsäure oder einem Ester hiervon umgesetzt, worauf aus dem hierbei erhaltenen Isomerengemisch die 3-N^e4-«R_/,-Phenylalanylthio«2-D-methylpropionsäure oder ein Ester hiervon abgetrennt und mit L-Pro zur gewünschten Verbindung umgesetzt wird« Bei anderen Ausführungsformen des erfindungsgernäßen Verfahrens wird eine erhaltene 3-R₅~Thio-2-methylpropionsäure oder ein Ester hiervon, worin R für Cbo, Acetyl oder Amino steht_f in die Isomeren aufgespalten und die erhaltene 3-R_c-""1"^n:i-^o"°2-D-methylpropionsäure bzw. ihr Ester mit einer Verbindung der allgemeinen Formel R-A umgesetzt.

Die zum Herstellen von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) als Ausgangsstoff eingesetzte 3-ßenzoylthio-2-D-methylpropionsäure kann im Handel bezogen werden.

den

Bei/im folgenden beschriebenen Ausführungsformen des erfindungsgemäßen Verfahrens kann in den einen Kupplungs«

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schritt erfordernden Arbeitsstufen irgendeine übliche Kupplungsmethode verwendet w/erden« Beispiele für brauchbare Kupplungsmethoden sind das Arbeiten mit einem gejnischten Anhydrid (MA), das Arbeiten mit Dicyclohexylcarbodiimid (DCC), das Arbeiten mit einem Azid, das Arbeiten mit N-Äthyloxycarbonyl-2~äthyloxy~l,2~dihydro~ chinolin (EEDQ), das Arbeiten mit N-Isobutyloxycarbonyl-2-isobutyloxy~l,2~dihydrochinolin, das Arbeiten mit einem symmetrischen Anhydrid, das Arbeiten mit Woodward's Reagens K (N-Ä'thyl-5-phenylisoxazolium~3'-sulfonat) oder das Arbeiten mit Carbonyldiimidazol (CDI)₄, Eine Übersicht über diese Arbeitsmethoden findet sich in Methoden der Organischen Chemie (Houben~Weyl), Bd* XV, Teil II» S. 1 ff. (1974)*

In ähnlicher Weise ist es möglich, bei den im folgenden beschriebenen Ausführungsformen des erfindungsgemäßen Verfahrens eine erforderlichenfalls als Schutzgruppe für eine Aminogruppe verwendete t-Butyloxycarbonylgruppe (Boc) durch irgendeine mittels Säure abspaltbare Schutzgruppe für eine Aminogruppe, beispielsweise durch die 2-(4-Biphenyl)~2-p ropyloxyca rbonyl(Bpoc)-, 2-Phenylisop ropyloxyca rbonyl (Ppoc)-, Benzyloxycarbonyl(Cbo)gruppe oder eine andere mittels Säure abspaltbare N-Aralkyloxycarbonylgruppe zu ersetzen. Das Abspalten der Schutzgruppe kann in üblicher Weise mittels Trifluoressigsäure (TFA) in Anisol, HCl in Essigsäure, kalter Trifluormethansulfonsäure' oder flüssigem Ammoniak in Methanol vorgenommen werden,» Eine Zusammenfassung findet sich in Methoden der Organischen Chemie (Houben-VVeyl), Bd. XV, Teil I, S_# 376 ff> (1974)»

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I*

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird zunächst Ν**⁴-t« Butyl oxy carbonyl- .... phenylalanin (Soc-Phe) in Anwesenheit eines Kupplungsreagens in einem wasserfreien Medium mit Thiophenol zum N©k.»t»Butyloxycarbonyl-thiophenylalaninphenylester umgesetzt^ wobei zweckmäßig nach der MA-Methode in Äthylacetat gearbeitet wird» ' '·' '

Ira zweiten Arbeitsschritt wird die von Boc gebildete Schutzgruppe vom gemäß Stufe 1 erhaltenen Reaktionsprodukt mittels Trifluoressigsäure (TFA) und Anisol abgespalten* worauf die von der Schutzgruppe befreite Verbindung in Äthanol mit Chlorwasserstoff zum Hydrochlorid des Thio« phenylalaninphenylesters umgesetzt wird« Die Schutzgruppe kann auch mittels Chlorwasserstoff oder Bromwasserstoff in Essigsäure oder einem anderen organischen Lösungsmittel oder mittels Methansulfonsäure oder einer substituierten Methansulfonsäure abgespalten werden. Die so erhaltene Verbindung wird dann in einem Na^CO enthaltenden Gemisch aus Benzoylchlorid und Äthylacetat zum N^-Benzoyl« thiophenylalaninphenylester umgesetzte

In der dritten Arbeitsstufe wird die gemäß Stufe 2 hergestellte Verbindung in Äthanol und in Stickstoff als Schutzgas mit NaSH zum N^-Benzoyl-thiophenylalanin (Bz~Phe-SH) umgesetzt, wobei nach einer Abänderung der in Bull« Chenu Soc* Oap_e 38, 320 (1965) beschriebenen Methode gearbeitet wird«

Andererseits besteht auch die Möglichkeit, den gemäß Arbeitsstufe 1 erhaltenen Phenylester nach der in Stufe beschriebenen Arbeitsweise mit NaSH zu Boc~Phe~SH umzu-

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setzen oder Boc-Phe~SH durch Kuppeln von Boc-Phe mit H₂S nach der Mischanhydridmethode (MA-Methodej herzustellen fvgl, 3» Am_# Chem. Soc. 74, 4726 (1952)1, worauf nach der für· Arbeitsstufe 2 beschriebenen Arbeitsweise Benzoylthiophenylalanin (Bz-Phe-SH) hergestellt wird» Gemäß einer weiteren Möglichkeit kann Bz-Phe-SH auch durch Umsetzen von .Benzoylchlorid mit Phe in Anwesenheit von NaOH hergestellt und dann nach der Mischanhydridmethode £Vgl« α, Biol* Chem« 138_e 627 (1941)3 wit HgS gekuppelt werden.

In der vierten Arbeitsstufe wird die so hergestellte Thiosäure in Anwesenheit von Toluol mit Methacrylsäure erwärmt, womit 3-(N**⁴ -Benzoyl-phenylalanylthio)-2»methyl-propionsäure erhalten wird.

Aus dem in dieser Arbeitsstufe erhaltenen Geraisch wird sodann in der Arbeitsstufe 5 durch Kristallisieren» Flüssigkeitschromatographie, GegenstromverteilungV Ionenaustausch oder unter Verwendung anderer für das Aufspalten von Isomerengemischen verwendeter Reagenzien, wie 3-Nitro-D-tyrosinmethylester oder -hydrazid, 3-Nitro-D~tyrosinmethylester oder -hydrazid, d-(+)~$<~Methyl-benzylamin oder l-.(-)-,^-Methylbenzylamin, Chinin, (»)~Ephedrin oder N,N~Dicyclohexylamin, N^e^-(3-Benzoyl-phenylalanylthio)-2-D-methylpropionsäure hergestellt.

Die so erhaltene Säure wird sodann in der Arbeitsstufe 6 unter Verwendung der DCC- oder MA-Methode mit L-Prolin-t-Butylester zum N^-f3~(N«^-Benzoyl-phenylalanylthio)-2-D-methylpropanoyl7-L-prolin-t-butylester umgesetzt, der in einem Gemisch aus Anisol und Trifluoressigsäure zum NG^- £3~(N^-Benzoyl-phenylalanylthio)~2~D-methylpropanoylJ~L~

U L· U U W . AP C 07 C/228 170/8

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-prolin umgesetzt wird* Andererseits kann die gemäß Arbeits stufe 5 erhaltene Säur.e unter Verwendung der DCC-Methode

oder der MA-Methode mit Hydroxysuccinimid gekuppelt und

die erhaltene Verbindung mit L-Prolin zur gleichen Ver~ bindung umgesetzt werden* '

Die oben beschriebene Methode zum Herstellen von N^ (N^~ßenzoyl-phenylalanylthio)-2-D~.methylpropanoyl3 -L-prolin wird bevorzugt, da sie in der Regel eine hohe Ausbeute zu erzielen gestattet und die erhaltene Verbindung leicht kristallisierte

Darüber hinaus wird diese Methode deshalb bevorzugt, weil der Phenylalanylrest sowohl in reiner L~>Form als auch in reiner D-Form, aber auch in D_tL»Form erhalten werden kann und damit unter Verwendung von Boc-L-Phe oder Boc-D-Phe als Ausgangsstoff, N^⁴- Cs-CN^-Benzoyl-L-phenylalanylthio-2-D-methylpropanoyl3 ~L~prolin oder N^- ^-(N^-Benzoyl-D-phenylalanylthio)-2-D«methylpropanoyljJ-L-prolin oder unter Verwendung eines Gemisches von Boc~L~Phe und Boc-D-»Phe die DjL-Form erhalten werden kann«

Bei der oben beschriebenen Arbeitsstufe 4 kann die Acrylsäure bei der Herstellung des 3-Thio~propionsäurederivats durch Methacrylsäure ersetzt werden*

Falls das in Arbeitsstufe 1 eingesetzte Boc-Phe durch die entsprechende, den R-A aufweisende und gemäß der älteren Ahmeldung APA 61 K/215 457 oder gemäß der Anmeldung (US-Anmeldung Serial No* 121 188) hergestellte Verbindung ersetzt wird, kann beim Arbeiten nach den in den Arbeitsstufen 1 und 3 bis 6 angegebenen Methoden eine Verbindung erhalten werden^, die den gewünschten Rest R und. den. gewünschten Rest A enthält«

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^ ^ . AP C 07 C/223 170/8

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Entsprechend einer zweiten AusfQhrungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird 3~Benzoylthio-2-D~methylpropion-< säure mit 2~Methyl-propen in Anwesenheit von Schwefelsäure zum 3-Benzoylthio-2-D-methylpropionsäure-t~butylester umgesetzt.

In der zweiten Arbeitsstufe wird durch Abspalten der Benzoylgruppe nach üblichen,zum Abspalten von Schutzgruppen angewendeten Methoden, beispielsweise mittels Ammoniumhydroxid, flüssigem Ammoniak in Methanol oder Natriummethoxid in Methanol, 3-Mercapto°2-D~methylpropionsäure-tbutylester hergestellt.

In der Arbeitsstufe 3 wird die gemäß Arbeitsstufe 2 erhaltene Verbindung mit N^-Benzoylphenylalanin (ßz-Phe) unter Verwendung eines aktiven Esters, beispielsweise des N-Succinimidylesters, des p-Nitrophenylesters, des Pentachlorphenylesters und dgl», zum S-N^-Benzoylphenylalanylthio-2-D~methylpropionsäure-t-butylester umgesetzt*

Andererseits kann auch die in Arbeitsstufe 2 erhaltene Verbindung unter Verwendung einer mit geringem Racemisie«- rungsgrad ablaufenden Kupplungsmethode, beispielsweise nach der EEDQ-Iiethode, der Säureazid-Methode oder der DCC~Methode> unter Verwendung von die Racemisierung unterdrückenden Reagenzien, wie 1-Hydroxybenzotriazol, mit ßz-Phe zum 3-N·*-.Benzoylphenylalanylthio-2~D«-methylpropionsäure-tbutylester gekuppelt werden»

In der Arbeitsstufe 4 wird die als Schutzgruppe dienende t-Butylestergruppe von der gemäß Arbeitsstufe 3 erhaltenen Verbindung nach ähnlichen Methoden zum Abspalten von

17 0 S 2,9,1981

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Schutzgruppen abgespalten, womit S-N^-Benzoylphenylalanylthio~2-D«methylpropionsäure erhalten wird*

In Arbeitsstufe 5 wird die gemäß Arbeitsstufe 4 erhaltene Verbindung nach der DCC-Methode oder der MA-Methode mit N-Hydroxysuccinimid zum entsprechenden N-Succiniraidylester gekuppelt',' welcher dann mit L-Prolin zum Ν^-£3~(Ν®^« BenzQylphenylalanylthio)~2~D«methylpropanoyl3«L~prolin umgesetzt wird* Das N-Hydroxysuccinimid kann durch andere aktive Ester liefernde Verbindungen ersetzt werden, um andere brauchbare aktive Ester herzustellen. Andererseits kann die gemäß Arbeitsstufe 4 hergestellte Verbindung nach der DCC~ oder MA-Methode mit L~Prolin~t~butylester zum t-Butylester der gleichen Verbindung gekuppelt werden«

Falls Bz-L-Phe, 8z-0»Phe oder Bz~D,L~Phe als Ausgangsstoff eingesetzt wird, wird N^-^-CN^-Benzoyl-L-phenylalanylthio)->2-D-.methylpropanoyl3-L-prolin, N^ «Ü3-(N^ -Benzoyl-D«phenylalanylthio)~2-D~methyl-propanoyl3«L~prolin oder N^G4~C3-(N^'-Benzoyl~D_iL~phenylalanylthio)«2»D-riiethylpropanoylH-L~prolin erhalten, Bz-Phe kann nach den im vorliegenden Text beschriebenen Methoden hergestellt werden*

Falls das in Arbeitsstufe 3 eingesetzte Bz~Phe durch entsprechende, den Rest R-A enthaltende und gemäß der erwähnten älteren Anmeldung APA 61 K/215 457 oder (US-Anmeldung Serial No. 121 188) hergestellte Verbindungen ersetzt wird, wird beim Arbeiten nach den in den Arbeitsstufen 3 bis 5 angegebenen Arbeitsweisen eine Verbindung erhalten, welche den gewünschten Rest R und den gewünschten Rest A enthält*

228170 8

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2.9.1981.

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III»

Bei einer dritten bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird zunächst N^-Bpoc-Phe nach der DCC-Methode in Anwesenheit von l»Hydroxybenzotriazol oder nach der MA-Methode mit dem gemäß Methode II, Arbeitsstufen 1 und 2, hergestellten 3-Mercapto-2-D~methylpropionsäuret-butylester zum 3~N***-Bpoc«phenylalanylthio-2-D~methylpropionsäure-t-butylester gekuppelt.

In der zweiten Arbeitsstufe wird der gemäß Arbeitsstufe 1 hergestellte Ester von der Schutzgruppe befreit und 3~N^- Phenylalanylthio«2->D-methylpropionsäure~t-butylester erhalten.

In der dritten Arbeitsstufe wird die gemäß Arbeitsstufe 2 erhaltene Verbindung mit einem ßenzoylhalogenid, wie Benzoylchlorid oder Benzoylbromid,oder mit dem Benzotriazolyl-, p-Nitrophenyl-, o-Nitrophenyl-, 5-Norbornen-2,3~ dicarboximidyl-, Pentachlorphenyl- oder Pentafluorphenylester der Benzosäure zum S-N^-Benzoylphenylalanylthio-2-D-methylpropionsäure-t-butylester umgesetzt«

In der vierten Arbeitsstufe wird von der in der dritten Arbeitsstufe erhaltenen Verbindung die t-Butylestergruppe nach der im Abschnitt II, Stufe 4, beschriebenen Methode abgespalten,

In der fünfen Arbeitsstufe wird die gemäß Arbeitsstufe 4 erhaltene Verbindung in der im Abschnitt II, Stufe 5, beschriebenen Weise mit L-Prolin oder L-Prolin-t-butylester zum Nⁱ^-iT3-(N^e4-Benzoylphenylalanylthio)-2-D-methylpropanoyl3-!--prolin umgesetzte

/ / Q I / IJ O 2_β9*1981

AP C 07 C/228 170/8 - 18 - 58 934/18

Zwecks Herstellung einer den gewünschten Rest A aufweisenden Verbindung kann in Arbeitsstufe 1 statt der den Rest Phe aufweisenden Verbindung jede einen gewünschten anderen Rest A aufweisende Verbindung eingesetzt werden« An die gemäß Arbeitsstufe 2 erhaltene Verbindung kann jeder gewünschte andere Rest R gekuppelt werden, wenn in Arbeitsstufe 3 statt der als Rest R die Benzoylgruppe aufweisenden Kupplungsverbindung eine einen anderen Rest R aufweisende Kupplungsverbindung verwendet wird*

IV*

Bei einer vierten bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird zunächst N«4-t-Butyloxycarbonylphenylalanin in der im Abschnitt I, Stufe 1, beschriebenen Weise mit Thiophenol zum N ^-»t-Butyloxy carbonylthiophenylalaninphenylester gekuppelt«

In der zweiten Arbeitsstufe wird der so hergestellte Ester in Äthanol und in Stickstoffatmosphäre mit NaSiH zur entsprechenden Thiosäure* dem N^-t-Butyloxycarbonyl-thiophenylalaninV umgesetzt« Diese Thiosäure kann auch nach der im Abschnitt I beschriebenen Arbeitsweise durch Umsetzen von N^-t-Butyloxycarbonyl-phenylalanin mit H₂S hergestellt werden«.

In der Arbeitsstufe 3 wird diese Thiosäure durch Erhitzen mit Methacrylsäure in Toluol zur 3«(N^-t~Butyloxycarbonylphenylalanylthio)~2-methylpropionsäure umgesetzt*

In Arbeitastufe 4 wird die so hergestellte Verbindung in der im Abschnitt I, Stufe 5, beschriebenen Weise in ihre optischen Isomeren gespalten.

9 2,9·1981

Q AP C 07 C/228 170/8

- 19 - 58 934/18

In Arbeitsstufe 5 wird aus der so hergestellten Verbindung die Schutzgruppe mittels eines Gemisches aus Trifluoressigsäure und Anisol abgespalten, worauf die von uer Schutzgruppe befreite Verbindung mit Benzoylchlorid zur 3-(N⁶^- Benzoyl-phenylalanylthio)-2~>ü-methylpropionsäure umgesetzt wird, N«^-l^-.(N^- ~Benzoyl-phenylalanylthio)-2-D-methyl~ propanoyl^-L-prolin wird dann nach der im Abschnitt I, Stufe 6, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

Andererseits kann die in Stufe 4 erhaltene Verbindung nach der DCC- oder der MA-Methode mit L~Prolin~t«butylester gekuppelt und aus der erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe mittels Trifluoressigsäure und Anisol abgespalten werden, worauf die nunmehr erhaltene Verbindung mit Benzoylchlorid zur gewünschten Verbindung umgesetzt wird« Eine weitere Möglichkeit zum Herstellen der gewünschten Verbindung besteht darin, die gemäß Arbeitsstufe 4 hergestellte Verbindung nach der DCC- oder MA-Methode mit N-Hydroxysuccinimid zu kuppeln und die erhaltene Verbindung mit L-Prolin umzusetzen und anschließend aus der erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe abzuspalten und die von der Schutzgruppe befreite Verbindung in der zuvor beschriebenen Weise mit Benzoylchlorid umzusetzen«

Eine dritte Möglichkeit zum Herstellen der gewünschten Verbindung besteht darin, aus der gemäß Arbeitsstufe 2 erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe mittels Chlorwasserstoff in Essigsäure abzuspalten und das hierbei erhaltene Hydrochlorid von Phe-SH mit Methacrylsäure in der Wärme umzusetzen und das erhaltene Isomerengemisch in der für die Arbeitsstufen 3 und 4 angegebenen Weise in die einzelnen Isomeren aufzuspalten, worauf die erhaltene Verbindung

££ Ό I / U O , 2.9.1981

AP C 07 C/228 170/3 — 20 - 58 934/18

in Na₂CO mit ßenzoylchlorid umgesetzt wird«

In Arbeitsstufe 3 kann das 3-Thiopropionsäurederivat auch unter Verwendung von Methacrylsäure statt der Acrylsäure hergestellt werden. Das in Stufe 1 dieser Ausführungsform des Verfahrens eingesetzte Boc-Phe kann, wie bereits im Zusammenhang mit Abschnitt I angegeben worden ist, durch jede andere den gewünschten Rest R-A aufweisende Verbindung ersetzt werden*

Gemäß einer fünften bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird zunächst die Benzoylgruppe nach üblichen Methoden zum Abspalten von Schutzgruppen aus 3-Benzoylthio-2~D-methylpropionsäure abgespalten.

In der zweiten Stufe wird die gemäß Arbeitsstufe 1 erhaltene Verbindung nach der im Abschnitt II, Stufe 3, beschriebenen Arbeitsweise mit einem aktiven Ester von N^- Boc-Phe zur 3«N®ⁱ-ßoc-phenylalanylthio~2-D~methylpropion-» säure umgesetzt»

Das gemäß Arbeitsstufe 2 erhaltene Produkt wird in der dritten Arbeitsstufe unter Verwendung von Trifluoressigsäure (TFA) in Anisol zum TFA-SaIz der 3-Phenylalanylthio-2~D~methylpropionsäure umgesetzt«

In der vierten Arbeitsstufe wird die gemäß Stufe 3 erhaltene Verbindung in NaHCO^-Lösung mit Benzoylchlorid zur 3-N ©i> - Benzoyl~p he ny la la nylthio-2~D-me thy !propionsäure umgesetzt.

2_β9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 21 - 58 934/18

In der Arbeitestufe 5 wird nach den Angaben im Abschnitt II, Stufe 5, N^-p-iN^-BenzoylphenylalanylthioJ-a-D-methylpropanoylJ»L«prolin hergestellt*

In Stufe 2 kann statt des Phe jede beliebige andere den Rest A aufweisende Verbindung eingesetzt werden, wobei den gewünschten Rest A aufweisende Verbindungen erhalten werden*

In Stufe 3 kann bei Verwendung irgendeiner statt des Benzoylrestes einen anderen Rest R enthaltende Verbindung, statt des in Stufe 4 als Kupplungsmittel verwendeten Benzoylchlorids jede gewünschte den Rest R enthaltende Verbindung hergestellt werden*

VI.

Bei einer sechsten bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird 3-Mercapto-2-D-methylpropionsäure an N^-Bpoc-Phe unter Verwendung eines aktiven Esters entsprechend der im Abschnitt II, Stufe 3, beschriebenen Kupplungsmethode gekuppelt und hierbei 3-N*⁵*- Bpoc-phenylalanylthio~2-D-methylpropionsäure erhalten»

In der Arbeitsstufe 2 wird an die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung nach der DCC-Methode in Anwesenheit von 1-Hydroxybenzotriazol oder nach der MA-Methode L-Pro~tbutylester gekuppelt und hierbei N^-^S-iN^-Bpoc-phenylalany.lthio)-2-D-methylpropanoyl3-L-prolin-t-butylester erhalten»

In der Arbeitsstufe 3 wird die als Schutzgruppe vorliegende Bpoc-Gruppe mittels TFA abgespalten und hierbei das TFA-SaIz des N«^-|[3-Phenylalanylthio-2-D-methylpropanoylJ-L-prolin-t-butylesters erhalten«»

8 1 7 A O 2 9 1981

, AP C 07 C/228 170/8

~ 22 ~ 58 934/18

In der Arbeitsstufe 4 wird das gemäß Stufe 3 erhaltene Produkt nach der im Abschnitt V, Stufe 4, beschriebenen Methode mit Benzoylchlorid zum N^-fs-^N^-Benzoylphenylalm/lthio~2-D-methylpropanoyl3-L~prolin-t~butylester um~ gesetzt»

In der Arbeitsstufe 5 wird die als Schutzgruppe vorliegende t-Butylester~Gruppe nach üblichen Methoden zum Abspalten von Schutzgruppen abgespalten und hierbei Η^-£3-(Η^- Benzoylphenylalanylthio)-2~D-methylpropanoylJ~L~prolin erhalten.

In Stufe 1 kann Phe durch irgendeine andere den gewünschten Rest A enthaltende Verbindung ersetzt und hierbei eine den gewünschten Rest A enthaltende Verbindung der allgemeinen Formel (I) erhalten werden, Dede den gewünschten Rest R aufweisende Verbindung kann an die gemäß Stufe 3 erhaltene Verbindung gekuppelt werden, wenn in Stufe 4 eine statt des Benzoylrestes des Benzoylchlorids eine einen anderen Rest R aufweisende Kupplungsverbindung eingesetzt wird»

VII _β

Gemäß einer siebenten bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird die gemäß Abschnitt V, Stufe 2j hergestellte 3-N^-Boc~phenylalanylthio~2-D-methylpropionsäure unter Verwendung der DCC-Methode oder der MA-Methode mit N~Hydroxysuccinimid gekuppelt, worauf die erhaltene Verbindung in der im Abschnitt II, Stufe 5", beschriebenen Weise mit L-Pro zum U <&~£3~(N^-Boc~phenylalanylthio)-2~D~methylpropanoyll»L-prolin umgesetzt wird«

170

8 2-9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 23 - 58 934/18

In der Arbeitsstufe 2 wird das TFA-SaIz des N^-fS-alanylthio-2-D~methylpropanoy2j~L~prolins in der im Abschnitt V₄ Stufe 3, beschriebenen V/eise hergestellt»

In Arbeitsstufe 3 wird Benzoylchlorid in der im Abschnitt V, Stufe 4, beschriebenen Weise mit der gemäß Arbeitsstufe erhaltenen Verbindung zum N^-Z^-CN^-Benzoylphenylalanylthio)-2-D«methylpropanoyll~L-prolin umgesetzt·

In Stufe 1 kann jede andere den gewünschten Rest R aufweisende Verbindung statt Phe eingesetzt werden,· um den gewünschten Rest A enthaltende Verbindungen zu erhalten« In Stufe 3 kann das den Benzoylrest enthaltende und als Kupplungsmittel eingesetzte Benzoylchlorid durch irgendeine einen anderen Rest R statt des ßenzoylrestes aufweisende Verbindung ersetzt und diese Verbindung an die gemäß Stufe 2 erhaltene Verbindung gekuppelt werden«

Bei den Verfahren gemäß den Abschnitten III, V und VI ist es auch möglich, eine den Rest A, beispielsweise Phenylalanyl enthaltende Verbindung, mit dem in reiner L-Form oder D-Form oder in D,L-Form vorliegenden Rest A herzustellen» Wenn beispielsweise als Ausgangsstoff Bpoc-L-Phe oder Bpoc~D-Phe eingesetzt wird, wird N** »/^«(N^-Senzoyl-L-phenylalanylthio)-2-D-methylpropanoyl][-L-prolin oder N*^s>~£3-(N^ci~ßenzoyl-D-phenylalanylthio)~2-D-methYlpropanoylj-l—prolin erhalten« Falls ein Gemisch von Boc-L-Phe und Boc-D-Phe eingesetzt wird, wird die D,L-Form erhalten«

VIII.

Bei einer achten bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird Boc~Phe zunächst nach der MA-Methode mit Pentachlorphenol zum N^-t-Butyloxy-carbonyl-

ZZÖ.l / U .0 . 2,9.1981 ._:

AP C 07 C/228 170/8 -.24 - . 58 934/18

-phenylalanin-pentachlorphenylester (Voc-Phe-OPcp)- umgesetzt* Bei dieser Umsetzung kann statt des.-Pentachlorphenole Pentafluorphenol oder N-Hydroxysuccinimid eingesetzt v/erden» '

In der Arbeitsstufe 2 wird'dieser Ester mit Chlorwasserstoff oder Bromwasserstoff in Essigsäure zum Hydrochlorid oder Hydrobromid des Phe-Pentachlorpheny!esters umgesetzt·

In der Arbeitsstufe 3 wird das erhaltene Salz in Anwesenheit eines Gemisches aus ITatriumbicarbonat, Äthylacetat und Wasser mit Benzoylchlorid zum Bz-Phe-pentachlorphenylester (Bz-Phe-OPcp) umgesetzt,»

In der Arbeitsstufe 4 wird Bz-Phe-OPcp mit 3-Mercapto-2-methylpropionsäure zur 3-(H** -Benzoyl-phenylalanylthio)-2~methy!propionsäure umgesetzt, wobei irgendeines der bekannten Kupplungsmittel verwendet werden kann*

In A rbeitsstufe 5 wird die so hergestellte Verbindung unter Verwendung der oben angegebenen Reagenzien in ihre optischen Isomeren aufgespaltene

In der Arbeitsstufe 6 wird das abgetrennte Isomer, vorzugsweise unter Verwendung der DCC-Methode oder der MA-Methode, mit L-Prolin-t-butylester zum Ii^ -^-(M^-^-Benzoylphenylalanylthio)-2-D~methylpropanoylJ-L-prolin-t-butylester gekuppelt«

Der so hergestellte Ester wird schließlich in einer Mischung aus Anisol und TPA gelöst, um die gewünschte Verbindung herzustellen· -

228170 8 ²'⁹·¹⁹⁸¹

AP C 07 C/228 170/8 - 25 - 58 934/18

In Stufe 4 kann durch Ersetzen der 3-Mercapto-2~methyl~ propionsäure durch 3-Mercaptopropionsäure oder 2-Mercaptopropionsäure das 3-Thiopropionsäure- oder 2-Thiopropionsäure-Derivat hergestellt werden« In Stufe 1 dieses Verfahrens kann statt des Boc-Phe jede beliebige andere im Zus—ammenhang mit dem Verfahren gemäß Abschnitt I beschriebene, den Rest R-A aufweisende Verbindung eingesetzt werden· Um eine die gewünschten Reste R und A aufweisende Verbindung zu erhalten, werden die Stufen 2 und ausgelassen*

IX,

Gemäß einer bevorzugten neunten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird N^-Benzoyl-phenylalanin (Bz-Phe) nach der MA~Methode in Anwesenheit von HpS zum N^-Benzoyl-thiophenylalanin (Bz-Phe*-SH) umgesetzt.

In der zweiten Arbeitsstufe wird Bz~Phe-SH nach der im Abschnitt I, Stufe 4, beschriebenen Methode mit Methacrylsäure umgesetzt.

Das gemäß Stufe 2 erhaltene Produkt wird dann in der Arbeitsstufe 3 nach der im Abschnitt I, Stufe 5, beschriebenen Methode in die Isomeren aufgespalten«

In der Arbeitsstufe 4 wird das erhaltene Isomer mit L-Prolin-t-butylester gekuppelt, worauf die erhaltene Verbindung in TFA und Anisol gelöst wird, um die gewünschte Verbindung nach der im Abschnitt I, Stufe 6, beschriebenen Arbeitsweise zu erhalten. Die gemäß Stufe 3 erhaltene Verbindung kann aber auch nach der DCC~ oder MA-Methode mit

L· L· Ö / U O AP C 07 C/228 170/8

- 26 - 58 934/18

N-Hydroxysucciniraid gekuppelt und dann mit L-Prolin umgesetzt werden, womit die gleiche Verbindung erhalten wird»

In Stufe 1 dieses Verfahrens kann jede der im Zusammenhang mit Abschnitt I beschriebenen R - Α-Verbindungen statt des Bz~Phe eingesetzt werden» womit eine Verbindung erhalten wird, welche den gewünschten Rest R und den gewünschten Rest A enthalte In Stufe 2 kann die Methacrylsäure durch Acrylsäure ersetzt und damit das 3-Thiopropionsäurederivat hergestellt werden*

X.

Bei einer zehnten bevorzugten Ausführungsform des erfin-" dungsgemäßen Verfahrens wird zunächst Methacrylsäure mit N-Hydroxysuccinimid gekuppelt und die erhaltene Verbindung mit !-»Prolin zum 2-Methylpropenoyl~L-prolin umgesetzte

Andererseits kann auch Methacryloylchlorid mit-L-Prolin zum 2-Methylpropenoyl-L-prolin umgesetzt werden«

Eine weitere Alternative zur Arbeitsstufe 1 besteht darin_f Methacrylsäure mit L-Prolin-t-butylester nach der MA--Methode zum t-Butylester des 2-Methylpropenoyl-L~prolins zu kuppeln, welcher dann beim Abspalten der Schutzgruppe mit TFA 2-Methylpropenoyl-»L-prolin liefert«

In Arbeitsstufe 2 wird das gemäß irgendeiner dieser alternativen Methoden erhaltene 2-Methylpropenoyl-L-prolin in Anwesenheit von Toluol mit N^-Benzoyl-thiophenylalanin (Bz-Phe-SH) umgesetzt und hierbei die gewünschte Verbindung erhalten*

22 817 0 8 ²'⁹'¹⁹⁸¹

W AP C 07 C/228 170/8

- 27 - 58 934/18

In der obigen Arbeitsstufe 2 kann andererseits das 2-Methylpropenoyl-L-prolin durch den t-ButyXester /Jes 2~Methylpropenoyl-L-prolins ersetzt werden, wobei jedoch die dann erhaltene Verbindung durch Abspalten der Schutzgruppe mittels TFA in die gewünschte Verbindung übergeführt werden muß, .

In Stufe 1 kann zwecks Herstellung des 3-Thiopropionsäurederivats statt der Methacrylsäure Acrylsäure oder statt des Methacryloylchlorids Acryloylchlorid eingesetzt werden, womit das 3-Thiopropionsäurederivat erhalten wird« In Stufe 2 dieser Ausführungsform des Verfahrens kann Bz-Phe-SH gegen irgendeine andere gewünschte Verbindung der Formel R ~ A - SH eingesetzt werden, womit eine die gewünschten Reste R und A enthaltende Verbindung erhalten wird.

Xl/

Gemäß einer weiteren Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird ßenzoylchlorid in Natronlauge mit Phenylalanin zum N^-Benzoyl-phenylalanin (Bz-Phe) in der in 3« Biol. Chem. 138, 627 - 629 (1941) beschriebenen Weise umgesetzt»

In Arbeitsstufe 2 wird Thioessigsäure mit Methacrylsäure zur 3-Acetylthio-2-methylpropionsäure umgesetzt, die dann beim Auflösen in einem Gemisch aus Methanol und Ammoniak 3-Mercapto-2-methylpropionsäure liefert.

In Arbeitsstufe 3 wird das gemäß Stufe 1 erhaltene Bz-Phe nach der MA-Methode mit überschüssigem N-Hydroxysuccinimid umgesetzt und die erhaltene Verbindung mit der in Stufe 2

^v AP C 07 C/228 170/8

~ 28 - 58 934/18

erhaltenen 3~Mercapto-»2«-methylpropionsäure zur 3-Benzoyl"phenylalanylthio)«*2~methylpropionsäure umgesetzt.

In Arbeitsstufe 4 wird das gemäß Stufe 3 erhaltene Produkt nach irgendeiner der bekannten Methoden in die optischen Isomere gespalten«,

In der Arbeitsstufe 5 wird das gemäß Stufe 4 erhaltene Isomer nach der MA-Methode mit N-Hydroxysuccinimid umgesetzt, worauf das erhaltene Produkt mit L~Prolin zur gewünschten Verbindung umgesetzt wird«

In der oben beschriebenen Stufe 5 kann andererseits auch . statt des L-Prolins der t-Butylester des L-Prolins eingesetzt werden* in welchem Falle aus der erhaltenen Verbindung, beispielsweise mittels TFA in Anwesenheit von Anisol, die Schutzgruppe abgespalten werden muß_r um die gewünschte Verbindung zu erhalten*

In Stufe 2 dieser Ausführungsform des Verfahrens kann statt der Methacrylsäure Acrylsäure eingesetzt werden,, womit das 3-Thiopropionsäurederivat erhalten wird. In Stufe 3 kann statt der 3-Mercapto-2-methylpropionsäure auch 2~Mercapto~ propionsäure eingesetzt werden* womit das 2-Thiopropionsäurederivat erhalten wird« Das in Stufe 3 dieser Ausführungsform des Verfahrens eingesetzte Bz-Phe kann durch irgendeine andere der oben beschriebenen R ~ A-Verbindungen ersetzt werden, womit eine die gewünschten Reste R und A enthaltende Verbindung erhalten wird«

XII,

Bei dieser Ausführungsform des erfindungsgemäßen VerfahreB wird N^ -Benzoyl-phenylalanin (Bz»Phe) nach der MA-Methode

22817 0 8 2,9.198V

AP C 07 C/228 170/8 - 29 - 58 934/18

mit Thiophenol zum N^-Benzoyl-thiophenylalanin-phenylester umgesetzt·

Andererseits kann auch das gemäß dieser Stufe 1 eingesetzte Bz»Phe durch Boc-Phe ersetzt werden, in welchem Falle dann die Boc-Gruppe abgespalten und die erhaltene Verbindung in einem nachgeschalteten Arbeitsschritt mit Benzoylchlorid zum N«^-ßenzoyl-thiophenylalanin-phenylester umgesetzt werden muß·

Gemäß einer weiteren Alternative kann beim obigen Verfahrensschritt 1 beim Arbeiten nach der MA-Methode mit N«=Hydroxysuccinimid gearbeitet werden*

Im zweiten Arbeitsschritt wird die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung mit NaSH in der im Abschnitt I₁ Stufe 3» beschriebenen Methode zum N ^»-Benzoyl-thiophenylalanin umgesetzt.

Andererseits kann die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung in alkalischer Lösung mit H₂S zum N^-Benzoyl-thiophenylalanin umgesetzt werden£vgl. Naturwissenschaften, 40, 242 - 243 (1953)J.

In der dritten Arbeitsstufe wird die gemäß Stufe 2 erhal~ tene Verbindung mit überschüssiger Methacrylsäure zur 3~(N«ⁱ«-Benzoyl-phenylalanylthio)~2~methylpropionsäure umgesetzt*

In der Arbeitsstufe 4 wird die gemäß Stufe 3 erhaltene Verbindung nach irgendeiner der bekannten Methoden in die optischen Isomeren gespalten.

2.9*1981

AP e 07 C/228 170/8 30 - 58 934/18

In der Arbeitsstufe 5 wird das erhaltene optische Isomer mit N-Hydroxysuccinimid umgesetzt und die hierbei erhaltene Verbindung mit L-Prolin oder mit dem t~Butylester des L-Prolins in der im Abschnitt VI_t Stufe 5 und dessen alternative Stufen,, beschriebenen Weise umgesetzt*

In Stufe 3 kann die Methacrylsäure durch Acrylsäure ersetzt und hierbei das 3»Thiopropionsäurederivat erhalten werden· In Stufe 1 kann statt des Bz-Phe irgendeine der oben beschriebenen R » Α-Verbindungen eingesetzt und hierbei eine die gewünschten Gruppen R und A Enthaltende Verbindung erhalten werden«,

XIII,

Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird zunächst Boc-Phe mit Thiophenol in der im Abschnitt IV, Stufe l_t beschriebenen Methode Eiit Thiophenol zum N©£ -t-ßutyloxycarbonyl-thiophenylalanin» phenylester gekuppelt*

In der Arbeitsstufe 2 wird sodann äer erhaltene Phenylester in alkalischer Lösung nach der im Abschnitt IV, Stufe 2_# beschriebenen Methode mit NaSH oder H₃S zum Boc-Phe»SH umgesetzt«

In Arbeitsstufe 3 wird die gemäß Stufe 2 erhaltene Verbindung nach der im Abschnitt IV, Stufe 3, beschriebenen Methode mit überschüssiger Methacrylsäure zur 3-(N**-t-Butyloxycarbonyl-phenylalanylthio)-2~methy!propionsäure umgesetzt.

^ O O 1 «7 Π Q 2.9.1981

2281/U ο

* AP C 07 C/228 170/8

- 31 - 58 934/18

In der Arbeitsstufe 4 wird die gemäß Stufe 3 erhaltene Verbindung nach irgendeiner der bekannten Methoden, beispielsweise nach der im Abschnitt I, Stufe 5, beschriebenen Methode, in die Isomeren gespalten«

In Arbeitsstufe 5 wird das in Stufe 4 erhaltene Isomer •in Äthylacetat mit HCl umgesetzt, worauf die erhaltene Verbindung in einem Na₂CO enthaltenden Gemisch aus Äthylacetat und Wasser mit Benzoylchlorid zur S-fN^-Benzoylphenylalanylthio)-2~methylpropionsäure umgesetzt wird.

In Arbeitsstufe 6 wird die gemäß Stufe 5 erhaltene Verbindung nach der MA-Methode mit N-Hydroxysuccinimid umgesetzt* worauf die erhaltene Verbindung nach der im Abschnitt XI, Stufe 5 oder ihren Alternativen, beschriebenen Methode mit L-Prolin oder mit dem t-Butylester des L-Prolins umgesetzt wird, um die gewünschte Verbindung zu erhalten.

In Stufe 3 kann zwecks Herstellung des 3-Thiopropionsäurederivats statt der Methacrylsäure Acrylsäure eingesetzt werden. Statt des in Stufe 1 eingesetzten Boc-Phe kann irgendeine der oben beschriebenen R - Α-Verbindungen eingesetzt werden und dann, unter Wegfall von Stufe 5, eine die gewünschten Gruppen R und A aufweisende Verbindung erhalten werden;

XIV.

In der Arbeitsstufe 1 dieser Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird Phenylalanin mit einem Benzoylhalogenid, wie Benzoylchlorid oder Benzoylbromid, oder mit einem aktiven Benzoesäureester, wie dem N~ Succinimidyl-, p-Nitrophenyl-₈ o-Nitrophenyl-, Benzo-

"* . AP C 07 C/228 170/8

- 32 ~ 58 934/18

triazolyl-, 5-Norbornen-2_#3~dicarboximidyl-, Pentachlorphenyloder Pentafluorphenylester, zum Benzoylphenylalanin (Bz-Phe) gekuppelt»

In der Arbeitsstufe 2 wird das in Stufe 1 erhaltene Bz-Phe mit 3-sMercapto~2«methylpropionsäure zur 3-(N^ -ßenzoylphenylalanylthio)«2-methylpropionsäure gekuppelt.

In der Arbeitsstufe 3 wird das in Stufe 2 erhaltene Isomerengemisch nach irgendeiner der oben beschriebenen üblichen Methoden in die einzelnen Isomere aufgespalten«,

In der Arbeitsstufe 4 wird das erhaltene Isomer unter Verwendung der DCO oder der MA-Methode mit dem t-Butylester des L~Prolins zum N ⁸^-£3-(N ^«ßenzoyl-phenylalanylthio)~2« methylpropanoylJ-L-prolin-t-butylester gekuppelt, aus welchem dann durch Abspalten der Schutzgruppe mittels TFA in Anisol die gewünschte Verbindung hergestellt wird.

In Stufe 4 kann bei Verwendung von 3-Mercaptopropionsäure oder 2-Mercaptopropionsäure anstelle der 3~Mercapto-2» methylpropionsäure das 3-Thiopropionsäure- bzvv_e das 2-Thiopropionsäurederivat hergestellt werden. In Stufe 2 dieser Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens kann bei Verwendung irgendeiner anderen R .- A~Verbindung der oben genannten Art statt des Bz«Phe eine Verbindung hergestellt werden, welche die gewünschten Gruppen R und A enthält«

XV»

Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird zunächst N- cL_t e4-Dimethy 1-3 _a 5-

170

8 2,9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 33 - 58 934/18

dimethyloxybenzyloxycarbonyl-phenylalanin (Ddz~Phe) unter Verwendung der CDI-Methode in Anwesenheit von Triäthanolamin (TEA) mit 3-Mercapto«-2-methylpropionsäure zur 3-(Ddz« Phenylalanylthio)~2-methylpropionsäure gekuppelt« Als Schutzgruppen für die Aminogruppe können auch andere photosensible Schutzgruppen, wie die 6~Nitro~veratryloxy-.carbonyl- oder 2-Nitrobenzyloxycarbonylgruppe,statt Ddz verwendet werden.

In Arbeitsstufe 2 wird die in Stufe 1 erhaltene Verbindung nach irgendeiner der oben angegebenen bekannten Methoden in die einzelnen optischen Isomere aufgespalten,,

In der Arbeitsstufe 3 wird das in Stufe 2 erhaltene optische Isomer nach der DCC- oder der MA-Methode mit dem t«-Butylester des L-Prolins zum N^ - (^-(N^-Ddz-phenylalanylthio)-2-methyIpropanoylj-L-prolin-1-butylester gekuppelt»

In der Arbeitsstufe 4 wird aus der gemäß Stufe 3 erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe durch Bestrahlung abgespalten und hierbei N«^~f3-Phenylalanylthio-2-methylpropanoylJ-L-prolin-t-butylester erhalten.

In der Arbeitsstufe 5 wird die gemäß Stufe 4 erhaltene Verbindung mit irgendeinem der im Abschnitt XIV/ Stufe 1, beschriebenen und die Benzoylgruppe enthaltenden KupplungsreagpEfen zum N^-fs-CN^-Benzoyl-phenylalanylthio-2-methylpropanoyl3-L-prolin-t-butylester gekuppelt»

In der Arbeitsstufe 6 wird der in Stufe 5 erhaltene Ester durch Abspalten der Schutzgruppe mittels TFA in Anisol in die gewünschte Verbindung übergeführte

.7

8. 2,9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 34 - 58 934/18

Wenn in Stufe 1 statt der 3»Mercapto-2-methylpropionsäure 3-Mercaptopropionsäure bzw» 2-Mercaptopropionsäure eingesetzt wird, wird das entsprechende 3-Thiopropionsäure- bzw. 2~Thiopropionsäurederivat erhalten* In Stufe 1 kann statt des Phenylalanine irgendeine einen anderen Rest A aufweisende Verbindung eingesetzt und hierbei eine diesen anderen Rest A enthaltende Verbindung erhalten werden« An die in Stufe 4 erhaltene Verbindung kann irgendeine andere den gewünschten Rest R aufweisende Verbindung gekuppelt werden» wenn in Stufe 5 dieser Ausführungsform des erfindungsgernäßen Verfahrens statt der die Benzoylgruppe als Rest R enthaltenden Kupplungsverbindung irgendeine andere der im Abschnitt IX, Stufe 1, beschriebenen,, einen anderen Rest R aufweisenden Kupplungsverbindungen verwendet wird«

XVI,

Bei einer weiteren Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird 2~(4-Biphenyl)~2~propyloxycarbonyl-phenylalanin (Bpoc-Phe) in der im Abschnitt XV, Stufe 1, beschriebenen CDI-Methode mit 3-Mercapto-2-methylpropionsäure gekuppelt«, Bpoc kann durch 2-Phenylisopropylöxycarbonyl (Ppoc) oder irgendeine andere durch Säure abspaltbare N-Aralkyloxycarbonylgruppe als Schutzgruppe ersetzt werden»

In Arbeitsstufe 2 wird die gemäß Stufe 1 erhaltene 3-(N^- -Bpoc~phenylalanylthio)»2-fflethylpropionsäure nach irgendeiner bekannten Methode in die optischen Isomeren aufgespalten.

2.9,1981

* AP C 07 C/228 170/8

35 - 58 934/18

In Arbeitsstufe 3 wird das gemäß Stufe 2 erhaltene optische Isomer in der im Abschnitt XIV, Stufe 3, beschriebenen Weise mit L-Prolin-t-butylester zum Ν°^~£3-·(Ν ^-Bpocphenylalanylthio)~2~methylpropanoylJ-L~prolin~t-butylester gekuppelt.

In Arbeitsstufe 4 wird der gemäß Stufe 3 erhaltene Ester durch Abspalten der Schutzgruppe mittels TFA in Dichlormethan in den N^e^*-£3-^>(Phenylalanylthio)~2-methylpropanoyl3-L-prolin-t-butylester übergeführt·

In Arbeitsstufe 5 wird die gemäß Stufe 4 erhaltene Verbindung mit einer Benzoylverbindung, beispielsweise einer im Abschnitt XIV, Stufe 1, beschriebenen Verbindung, gekuppelt.

In Arbeitsstufe 6 wird die gemäß Stufe 5 erhaltene Verbin«· dung durch Abspalten der Schutzgruppe mittels TFA in Anisol in die gewünschte Verbindung übergeführt«

Wenn in Stufe 1 statt der 3-Mercapto-2-methylpropionsäure 3-Mercaptopropionsäure bzw« 2-Mercaptopropionsäure eingesetzt wird, wird das entsprechende 3-Thiopropionsäure- bzw, 2-Thiopropionsäurederivat erhalten. In Stufe 1 kann statt des Phenylalanine irgendeine andere den gewünschten Rest A enthaltende Verbindung eingesetzt und hierbei eine den gewünschten Rest A enthaltende Verbindung hergestellt werden. An die in Stufe 4 erhaltene Verbindung kann irgendeine andere den gewünschten Rest R aufweisende Verbindung gekuppelt werden* wenn in Stufe 5 dieser Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens statt der die Benzoylgruppe als Rest R enthaltenden Kupplungsverbindung irgend-

IJ 2,9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 36 - 5S 934/18

eine andere der im Abschnitt XIV, Stufe l_t beschriebenen, einen anderen Rest R aufweisenden Kupplungsverbindungen verwendet wird«

XVII,

Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird zunächst 3«Acetylthio~2-methyipropionsäure in Anwesenheit einer Sulfonsäure mit 2~Methylpropen zum 3»Acetylthio~2»methylprcpionsäure-»t~ butylester umgesetzt, worauf diese Verbindung durch Abspalten der Acetylgruppe in alkalischer Lösung in den 3-Mereapto-2«methyIpropionsäure-t«-butylester übergeführt wird β

In Arbeitsstufe 2 wird die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung nach irgendeiner der bekannten Kupplungsmethcden (das Halogenid ausgenommen) mit N^-Benzoyl-phenylalanin (Bz-Phe) zum 3»(N^-Benzoyl-phenylalanylthio)«2-methyl·» propionsäure-t-butyle-ster gekuppelt_β

In Arbeitsstufe 3 wird die gemäß Stufe 2 erhaltene Verbindung durch Abspalten der Schutzgruppe mittels TFA in Anisol in die 3~(Nⁱ^^>'-Benzoyl~phenylalanylthio)~2~ methylpropionsäure übergeführt *

In Arbeitsstufe 4 wird die gemäß Stufe 3 erhaltene Verbindung nach irgendeiner der oben beschriebenen bekannten Methoden in die optischen Isomeren aufgespalten.

In Arbeitsstufe 5 wird das gemäß Stufe 4 erhaltene optische Isomer mit dem t~Butylester des L~Prolins gekuppelt«

Q 2.9*1981

AP C 07 C/228 170/8 ~ 37 ~ 58 934/18

worauf vom erhaltenen Ester die Schutzgruppe in der im Abschnitt XIV, Stufe 4, beschriebenen Weise mittels TFA in Anisol abgespalten wird und hierbei die gewünschte Verbindung erhalten wird«

Wenn in Stufe 1 dieser Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens statt der 3~Acetylthio«2-methylpropionsäure 3-Acetylthiopropionsäure bzw. 2~Acetylthiopropionsäure eingesetzt wird, wird das entsprechende 3~Thiopropionsäure~ bzw* 2-Thiopropionsäurederivat erhalten« In Stufe 2 kann statt des Bz~Phe irgendeine andere der oben angegebenen R - Α-Verbindungen eingesetzt und hierbei eine Verbindung erhalten werden, welche die gewünschten Reste R und A aufweist«

XVIII«,

Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird zunächst 3-Acetylthio-2-methylpropionsäure mit 2-Methyl»propen zum 3-Acetylthio-2-methylpropionsäure-t-butylester umgesetzt, aus welchem dann in der in Abschnitt XVII, Stufe 1, beschriebenen Weise durch Abspalten der Acetylgruppe der 3~Mercapto-2~methylpropionsäure~t-butylester hergestellt wird_c

In Arbeitsstufe 2 wird der gemäß Stufe 1 erhaltene Ester mit einem durch Bpoc, Ppoc oder Ddz geschützten Phenylalanin zum entsprechend geschützten 3-(N^-Phenylalanylthio)-2-methylpropionsäure-t-butylester umgesetzt.

In Arbeitsstufe 3 wird der gemäß Stufe 2 erhaltene Ester durch Abspalten der Schutzgruppe, beispielsweise mittels

/ L O I / U Ο 2_β9_β1931

AP C 07 C/228 170/8 ~ 38 - 58 934/18

schwacher Säuren* zum 3~Phenylalanylthio-'2-methylpropionsäure-t~butylester umgesetzt«, Eine als Schutzgruppe vor« handene Ddz-Gruppe kann durch Bestrahlung, beispielsweise mittels Licht, abgespalten werden«

In der Arbeitsstufe 4 wird der gemäß Stufe 3 erhaltene Ester mit Benzoesäure zum 3~(N«^»Benzoyl-phenylalanylthio)-2~methylpropxonsäure«t-butylester gekuppelt. Statt der Benzoesäure kann hierbei irgendeine andere der im Abschnitt XIV, Stufe 1_ε angegebenen Benzoeverbindungen als Kupplungsverbindung eingesetzt werden«

In Arbeitsstufe 5 wird die in Stufe 4 erhaltene Verbindung durch Abspalten der Schutzgruppe mittels TFA in Anisol nach der im Abschnitt XVII, Stufe 3, beschriebenen Methode in 3~(N^«-»Benzoyl~phenylalanylthio)«-2~rnethylpropionsäure übergeführte _;

In Arbeitsstufe δ wird die gemäß Stufe 5 erhaltene Verbindung nach üblichen Methoden in die optischen Isomeren aufgespalten«

In Arbeitsstufe 7 wird das gemäß Sufe 6 erhaltene optische Isomer mit dem t~Butylester des L-Prolins gekuppelt und durch Abspalten der Schutzgruppe mittels TFA in Anisol in der im Abschnitt XIV_r Stufe 4, beschriebenen Weise in die gewünschte Verbindung übergeführt«

In den obigen Arbeitsschritten können die ßenzylester durch die entsprechenden t-Butylester ersetzt werden, wobei das Abspalten der Schutzgruppen mittels HBr in Essigsäure vorgenommen werden kann«

M 2.9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 39 - 58 934/18

Wenn in Stufe 1 3-Acetylthiopropionsäure bzw* 2-Acetyl» thiopropionsäure statt der 3-Acetylthio-2~rnethylpropionsäure eingesetzt wird, wird das entsprechende 3-Thiopropionsäure- bzw. 2-Thiopropionsäurederivat erhalten« In Stufe 2 kann statt des Phenylalanine irgendeine den gewünschten Rest A aufweisende Verbindung eingesetzt und hierbei eine den gewünschten Rest A enthaltende Verbindung erhalten werden. Wenn in Stufe 4 statt des als Rest R die Benzoylgruf)ρθ aufweisenden Kupplungsreagens irgendein einen anderen Rest R aufweisendes Kupplungsreagens mit der gemäß Stufe 3 erhaltenen Verbindung gekuppelt wird» kann ebenfalls eine den gewünschten Rest R enthaltende Verbindung erhalten werden,

XIX«,

Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird zunächst Ddz-Phe nach der DCC-Methode mit p-Nitrophenol zum N^-Ddz-phenylalanin~p~ nitrophenolester umgesetzt* Hierbei kann als Schutzgruppe statt der Ddz-Gruppe auch die Bpoc~_f Ppoc- oder Bz-Gruppe vorgesehen werden«, Statt der p-Nitrophenolestergruppe kann irgendeine andere aktive Estergruppe wie eine der im Abschnitt XlV, Stufe 1* erwähnten Estergruppen vorgesehen werden_e Der erhaltene N^~Ddz-phenylalanin~p-nitrophenolester wird sodann mit NaSH zum Ddz-Thiophenylalanin umgesetzt β

In Arbeitsstufe 2 wird das gemäß Stufe 1 erhaltene Produkt mit Methacrylsäure zur S-iN^ methylpropionsäure umgesetzt«

λ A A 4 Vjg ο ty? ..·. 29 1°81

^* AP C 07 C/228 170/8

- 40 - 58 934/18

In Arbeitsstufe 3 wird die gemäß Stufe 2 erhaltaie Säure nach üblichen Methoden in die optischen Isomeren aufgespaltet*

In Arbeitsstufe 4 wird das gemäß Stufe 3 erhaltene optische Isomer nach der im Abschnitt XV, Stufe 3, beschriebenen Methode mit L-Prolin-t-butylester zum N^-£3-(Ν^-Ddzphenylalanylthio«2«methylpropanoyljj~L-prolin~t~butylester gekuppelt«.

In Arbeitsstufe 5 wird der gemäß Stufe 4 erhaltene. Ester in der im Abschnitt XV, Stufe 4, beschriebenen Weise durch Bestrahlung von der Schutzgruppe befreit und hierbei in den N^ «"C3->Phenylalanylthio»2-rnethylpropanoylJ-L~prolin»tbutylester übergeführt.

In Arbeitsstufe δ wird die gemäß Stufe 5 erhaltene Verbindung mit irgendeiner der- im Abschnitt XIV, Stufe 1, erwähnten Benzoylverbindungen in der im Abschnitt XV, Stufe 5, beschriebenen Weise zum N®*· -fs-^N^-Benzoyl-phenylalanylthio)-2~meth\äpropanoylJ-L-prolin-t«butylester gekuppelt«

In Arbeitsstufe 7 wird der in Stufe 6 erhaltene Ester durch Abspalten der Schutzgruppe mittels TFA in Anisol in die gewünschte Verbindung übergeführt.

In Stufe 2 dieser Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens kann bei Verwendung von Acrylsäure statt der Methacrylsäure das entsprechende 3~Thiopropionsäurederivat hergestellt werden. In Stufe 1 kann das Phenylalanin durch irgendeine andere den gewünschten Rest A aufweisende Verbindung ersetzt und hierbei eine den gewünschten Rest A

28170

A 2.9,1981

^ AP C 07 C/228 170/8

- 41 - 58 934/18

enthaltende Verbindung erhalten werden, In Stufe 6 kann das als Rest R die Benzoylgruppe aufweisende Kupplungsreagens durch irgendein einen anderen Rest R aufweisendes Kupplungsreagens ersetzt werden, das mit der in Stufe 5 erhaltenen Verbindung gekuppelt wird,

XX,

Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird Methacrylsäure nach der DCC-Methode mit L~Prolin~t-butylester zum 2~Methylpropenoyl-L~prolin-t~butylester umgesetzt«

In Arbeitsstufe 2 wird Ddz-Phenylalanin nach der DCC-Methode mit p~Nitrophenol zum Ddz~Phenylalanin~p-nitrophenolester umgesetzt und der erhaltene Ester mit NaSH nach der im Abschnitt XIX, Stufe 1, beschriebenen Arbeitsweise zum Ddz-Thiophenylalanin umgesetzt.

In Ärbeitsstufe 3 wird die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung mit der gemäß Stufe 2 erhaltenen Verbindung zum N⁹^-[Z"(H⁰^ ~Ddz-phenylalanylthio-2-methylpropanoyl3~L-prolint-butylester umgesetzt.

In Arbeitsstufe 4 wird in der im Abschnitt XV, Stufe 4, beschriebenen Weise die gemäß Stufe 3 erhaltene Verbindung durch Abspalten der Schutzgruppe durch Bestrahlung in den N¹^ »^3-PhenylalanylthiO"-2-methylpropanoylJ -L-prolin-tbutylester übergeführt.

In Arbeitsstufe 5 wird die gemäß Stufe 4 erhaltene Verbindung mit irgendeiner der im Abschnitt XIX, Stufe 1, be-

JIa &a %β β # *=* W 2«9«1981

A? C 07 C/228 170/8 - 42 - 58 934/18

schriebenen Benzoylverbindungen in der im Abschnitt XV, Stufe S₉ beschriebenen ¥/eise zum ϋ^ίΛ"-£3-'(Ν ~Benzoyl~ phenylalanylthio)«'2-'methylpropanoyl]--L»prolin-t-butylester gekuppelt«

In Arbeitsstufe 6 wird, aus dem gemäß Stufe 5 erhaltenen Ester die Schutzgruppe mittels TPA in Anisol abgespalten*

In der Arbeitsstufe 7 wird die gemäß Stufe 6 erhaltene Verbindung nach, irgendeiner bekannten Methode in die optischen Isomeren, darunter das gewünschte Isomer, aufgespalten·

Wenn in Stufe 3 K^'-Ben ζ oyl-t hi ©phenylalanin statt des Ddz-ihiophenylalanins eingesetzt wird_f können die Stufen 4 und 5 entfallen«

In Stufe 1 dieser Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens kann Methacrylsäure durch Acrylsäure ersetzt und hierbei das Propenoyl-L-prolin~Derivat erhalten werden« In Stufe 2 kann statt des Phenylalanins irgendeine andere den gewünschten Rest A aufweisende Verbindungen eingesetzt und hierbei eine den gewünschten Rest A enthaltende Verbindung erhalten werden_e An die gemäß Stufe 4 erhaltene Verbindung kann statt der in Stufe 5 eingesetzten und als Rest R die Benzoylgruppe aufweisenden Kupplungsverbindung irgeneine einen anderen Rest R aufweisende Kupplungsverbindung: verwendet werden·

XXI«

Bei dieser Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird 3-Acetylthio~2~methylpropionsäurey vorzugsweise nach

H 2,9*1981

'" AP C 07 C/228 170/8

- 43 - 58 934/18

der DCC-Methode, mit L-Prolin-t-butylester zum N^«(3-Acetylthio-2-methylpropanoyl)~L-prolin-t-butylester gekuppelt.

In Arbeitsstufe 2 wird die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung in einer alkalischen Lösung, beispielsweise in •einem Gemisch aus Methanol und Ammoniak, gelöst und hierdurch in den N &£< *( 3~Mercapto~2-methylpropanoyl)~L-prolin~ t-butylester übergeführt«

In Stufe 3 wird das gemäß Stufe 2 erhaltene Isomerengemisch, beispielsweise unter Verweriung eines von einem Metallchelat gebildeten Komplexes, in die optischen Isomeren aufgespalten«

In Arbeitsstufe 4 wird das gemäß Stufe 3 erhaltene optische Isomer mit N^-Benzoyl-phenylalanin (Bz-Phe) zum Ν®^~£3-(Ν«£ ~Benzoyl-phenylalanylthio-2-D~methylpropanoyl3"L-prolin= t-butylester gekuppelt*

In Arbeitsstufe 5 wird die gemäß Stufe 4 erhaltene Verbindung durch Abspalten der Schutzgruppe mittels TFA in Anisol in der im Abschnitt XV, Stufe 6, beschriebenen Weise in die gewünschte Verbindung übergeführte

Wenn in Stufe 1 dieser Ausführungsform des erfintlungsgemäßen Verfahrens die 3-Acetylthio-2-methylpropionsäure durch 3-Acetylthiopropionsäure bzw« 2-Acetylthiopropionsäure ersetzt wird, wird das entsprechende 3-Thiopropionsäure- bzw* 2-Thiopropionsäurederivat erhalten« In Stufe kann das Bz-Phe durch irgendeine andere den gewünschten Rest R-A aufweisende Verbindung ersetzt und hierbei eine

L £> Xj * / U Q _Ap _c 07 c/228 170/8

- 44 - 58 934/18

die gewünschten Reste R und A enthaltende Verbindung erhalten werden_β

XXII.

Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird die gewünschte Verbindung durch übliche Festphasensynthese hergestellt fvgl, Advan, Enzymol. 32, 221 (1969)3, wobei für die feste Phase ein o-Nitrobenzylharz oder ein chlormethyliertes Harz verwendet werden kann»

In Arbeitsstufe 1 wird an das Harz Boc-Pro gekuppelt, worauf vom Prolinrest die Schutzgruppe unter Verwendung von TFA abgespalten wird.

In Arbeitsstufe 2 wird an den gemäß Stufe 1 erhaltenen Prolin-Harz-Komplex nach der DCC-Methode 3-(N*^-Benzoylphenylalanylthio)-2-D-methylpropionsäure gekuppelt»

In Stufe 3 wird die gewünschte Verbindung vom Harz abgespalten, wobei, falls ein o-Nitrobenzyl-Harz verwendet wurde, das Abspalten durch Bestrahlung vorgenommen wird, wogegen, falls ein chlormethyliertes Harz verwendet wurde, das Abspalten mittels HF vorgenommen wird«

Wenn in Stufe 2 3«R-A-.S-2-methylpropionsäure_i 2-R-A-S- -propionsäure oder 3-R-A-S-propionsäure statt der 3-(N⁰*- Benzoyl-phenylalanylthio)-2-D-methylpropionsäure verwendet wird, kann jede andere gewünschte Verbindung erhalten werden»

228 170 8 2-9*1981

AP C 07 C/228 170/8 - 45 - 58 934/18

Bei einer weiteren, nach der Festphasensynthese durchgeführten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird Boc-Pro an die feste Phase, beispielsweise einem o-NitrobenzylharZ| gekuppelt und dann die Schutzgruppe in der im Abschnitt XXII, Stufe 1, beschriebenen Weise abgespalten»

In Arbeitsstufe 2 wird an den in Stufe 1 erhaltenen Prolin-Harz-Komplex nach der DCC-Methode 3~Cbo~thio~2«*methyl~ propionsäure gekuppelt und dann die Acetylgruppe durch Behandeln des erhaltenen Produktes mit einer alkalischen Lösung, beispielsweise einem Gemisch aus Methanol und Ammoniak, abgespalten»

In Arbeitsstufe 3 wird an das gemäß Stufe 2 erhaltene Produkt geschütztes Phenylalanin gekuppelt, wobei als Schutzgruppe für das Phenylalanin ßoc, ßpoc_# Ppoc oder irgendeine andere säureabspaltbare Schutzgruppe in Frage kommt *

In Arbeitsstufe 4 wird aus der gemäß Stufe 3 erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe mittels TFA abgespalten.

In Arbeitsstufe 5 wird die gemäß Stufe 4 erhaltene Verbindung mit irgendeinem der im Abschnitt XV, Stufe 3, beschriebenen, die Benzoylgruppe enthaltenden Kupplungsreagenzien gekuppelt»

In Arbeitsstufe 6 wird das N^o&-£3<~(N^cL~B8nzoyl»phenylalanylthio)-2-methylpropanoylj-L-prolin in der im Abschnitt XXII, Stufe 3, beschriebenen Weise vom Harz abgespalten«

ZZBi / U 8 2,9*1981

AP C 07 C/228 17G/8 - 45 - 58 934/18

In Arbeitsstufe 7 wird aus dem gemäß Stufe 6 erhaltenen Isomerengemisch die gewünschte Verbindung unter Verwendung an sich bekannter Methoden isoliert«

In Stufe 3 kann statt des dort verwendeten geschützten Phenylalanine N^-ßenzoyl-phenylalanin eingesetzt werden, wobei dann die Stufen 4 und 5 entfallen können»

I:

Wenn in Stufe 2 3-Acetylthiopropionsäure oder 2-Acetyl« thiopropionsäure statt der 3»Acetylthio«2~methylpropionsäure eingesetzt wird, wird das entsprechende 3-Thiopropionsäure- bzw» 2~Thiopropionsäurederivat erhalten« In Stufe 3 kann statt des Phenylalanins irgendeine andere die gewünschte Gruppe A aufweisende Verbindung eingesetzt und hierbei eine die gewünschte Gruppe A enthaltende Verbindung erhalten werden« In Stufe 5 kann an die gemäß Stufe 4 erhaltene Verbindung statt des die Benzoylgruppe als Rest R enthaltenden Kupplungsreagens irgendein einen anderen Rest R enthaltendes Kupplungsreagens eingesetzt werden,

XXIV,

Bei dieser Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird zunächst Thiophenylalanin-phenylester,Hydrochloric im schwach alkalischen Medium mit HpS zum Thiophenylalanin*Hydrochlorid umgesetzt«

In Arbeitsstufe 2 wird das Thiophenylalanin*Hydrochlorid mit Methacrylsäure zum 3~Phenylalanylthio~2,~methylpropionsäure_eHydrochlorid umgesetzt«

8 2.9*1981

AP C 07 C/228 170/8 - 47 - 58 934/18

In Arbeitsstufe 3 wird das gemäß Stufe 2 erhaltene Isomerengemisch nach üblichen Methoden in die optischen Isomeren aufgespalten*

In Arbeitsstufe 4 wird das in Stufe 3 erhaltene optische Isomer mit irgendeinem der im Abschnitt XIV, Stufe 1, beschriebenen, als Rest R die Benzoylgruppe enthaltenden Kupplungsreagpxfea, beispielsweise dem N-Succinimidylester der Benzoesäure oder Benzoylchlorid, zur 3-(N^<5<"-Benzoylphenylalanylthio)-2~D-methylpropionsäure umgesetzte

In Arbeitsstufe 5 wird die gemäß Stufe 4 erhaltene Verbindung mit dem t-Butylester des L~Prolins gekuppelt und von der erhaltenen Verbindung in der im Abschnitt XIV, Stufe 4, beschriebenen Weise die Schutzgruppe mittels TFA in Anisol abgespalten, womit die gewünschte Verbindung erhalten wird.

Bei dieser Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens können gewünschtenfalls die Arbeitsstufen 3 und 4 miteinander vertauscht werden»

Wenn in Stufe 2 Acrylsäure statt der Methacrylsäure eingesetzt wird, wird das entsprechende 3-Thiopropionsäurederivat erhalten* In Stufe 1 kann statt des Phenylalanins irgendeine einen anderen Rest A aufweisende Verbindung eingesetzt und hierbei eine den gewünschten Rest A enthaltende Verbindung erhalten werden. In Stufe 4 kann an dis in Stufe 3 erhaltene Verbindung statt der als Rest R die Benzoylgruppe enthaltende Verbindung irgendein anderes eine andere Gruppe R enthaltendes Kupplungsreagens gekuppelt werden.

2.9,1981

0 8 ^{Ap c} °^{7 c}/²²⁸170/8

- 48 - 58 934/18

xxv.

Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des er» findungsgemäßen Verfahrens wird Benzoyl-thiophenylalanin (Bz-Phe-SH) mit 3»Brom-2-methylpropionsäure zur 3-(N^- Bsn2oyl~phenylalanylthio)~2-methylpropionsäure gekuppelt. Bei dieser Umsetzung kann statt des Bromderivats auch das Chlor-- oder Oodderivat eingesetzt werden.

In Arbeitsstufe 2 wird die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung mit dem t~Buiylester des L-Prolins gekuppelt und von der erhaltenen Verbindung in der im Abschnitt XIV, Stufe 4, beschriebenen Weise die Schutzgruppe mittels TFA in Anisol abgespalten.

Wenn in Stufe 1 3°Brompropionsäure bzw« 2-Brompropionsäure statt der 3-Brorn-2-methylpropionsäure eingesetzt wird, wird das entsprechende 3-Thiopropionsäure- bzw, 2-Thiopropionsäurederivat erhalten,» Falls in Stufe 1 R-A-SH statt des Bz-Phe-SH eingesetzt wird, können die die gewünschten Reste R und A enthaltenden Verbindungen erhalten werden«

XXVI«

Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird Benzyloxycarbonylmercaptan (Cbo-SH) mit Methacrylsäure zur 3-Benzyloxycarbonylthio-2-methylpropionsäure umgesetzt. Statt der Cbo-Gruppe kann als Schutzgruppe für eine Aminogruppe irgendeine andere durch Säure abspaltbare Schutzgruppe vorgesehen werden«,

In Arbeitsstufe 2 wird das gemäß Stufe 1 erhaltene Isomerengemisch unter Verwendung bekannter Methoden in die einzelnen Isomere aufgespalten«

/ U

2.9.198!

AP C 07 C/228 170/8 - 49 - 58 934/18

In Arbeitsstufe 3 wird das gemäß Stufe 2 erhaltene Isomer mit dem t-Butylester des L-Prolins, vorzugsweise nach der DCC-Methode, zum N ^e^«.(3-Benzoyloxycarbonylthio~2-D~methyl~ propanoyl)-L-prolin~t-butylester gekuppelt*

In Arbeitsstufe 4 wird aus der gemäß Stufe 3 erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe mittels HBr und TFA in Anisol abgespalten und so 3~Mercapto-2-D-methylpropanoyl~L~prolin hergestellt«

In Arbeitsstufe 5 wird die gemäß Stufe 4 hergestellte Verbindung mit N-Benzoyl-phenylaianin (Bz-Phe), vorzugsweise unter Verwendung eines aktiven Esters der letztgenannten Verbindung, zur gewünschten Verbindung umgesetzt.

Wenn in Stufe 1 Acrylsäure statt der Methacrylsäure eingesetzt wird, wird das entsprechende 3-Thiopropionsäurederivat erhalten* In Stufe 5 kann das ßz-Phe durch irgendeine andere den gewünschten Rest R-A enthaltende Verbindung ersetzt und hierbei eine die gewünschten Reste R und A enthaltende Verbindung erhalten werden»

XXVII₄.

Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird Thiophenylalanin_eHydrochlorid mit Methacrylsäure zum 3-Phenylalanylthio-2~;methylpropionsäure.Hydrochlorid umgesetzt»

In Arbeitsstufe 2 wird die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung in TFA mit Benzoylchlorid zur 3-(N^-Benzoylphenyl· alarylthio)-2-methylpropionsäure umgesetzt«

/ / R I / y IJ 2.9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 50 - 58 934/18

In Stufe 3 wird das gemäß Stufe 2 erhaltene Isomerengernisch nach irgendeiner der bekannten Methoden in die einzelnen optischen Isomeren aufgespalten«

In Arbeitsstufe 4 wird die gemäß Stufe 3 erhaltene optische aktive Verbindung mit dem t-Butylester des L~Prolins gekuppelt und aus der erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe in der im Abschnitt XIV, Stufe A₁ beschriebenen Weise mittels TFA in Anisol abgespalten, womit die gewünschte Verbindung erhalten wird*

In Stufe 1 kann Acrylsäure statt der Methacrylsäure eingesetzt und hierbei das entsprechende 3~Thiopropionsäurer derivat erhalten werden. In Stufe 1 kann statt des Thiophenylalanins auch jede andere Verbindung der Formel A-SH eingesetzt und hierbei eine den gewünschten Rest A enthaltende Verbindung erhalten werden. In Stufe 2 kann an die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung statt des als Rest R die Benzoylgruppe aufweisenden Reagens Benzoylchlorid irgendein einen anderen Rest R enthaltendes Kupplungsreagens eingesetzt werden»

XXVIII*

Bei einer weiteren Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird 3-Acetylthio™2~methylpropionsäure mit o-Nitrobenzylalkohol zum 3~Acetylthio~2«methylpropionsäureo-nitrobenzylester umgesetzte

In Arbeitsstufe 2 wird der gemäß Stufe 1 hergestellte Ester nach an sich bekannten Methoden in die einzelnen Isomeren aufgespalten.

70

¹J 2»9.1981

? AP C 07 C/228 170/8

- 51 - 58 934/18

In Arbeitsstufe 3 wird das gemäß Stufe 2 erhaltene optische Isomer durch Bestrahlung von der Schutzgruppe befreit und in 3~Acetylthio~2~D~methylpropionsäure übergeführt»

In Arbeitsstufe 4 wird die gemäß Stufe 3 hergestellte Verbindung mit dem t-Butylester des L-Prolins, vorzugsweise unter Verwendung der DCOMethode, zum N «^«(S-Acetylthio~2=D-methylpropanoyl)~L~prolin~t-butylester gekuppelt.

In Arbeitsstufe 5 wird durch Vermischen der gemäß Stufe 4 erhaltenen Verbindung mit einer alkalischen Lösung aus -Ammoniak, Methanol und Anisol der N^~(3~Mercapto-2-D-methylpropanoyl)-l_»prolin-t"butylester hergestellt.

In Arbeitsstufe 6 wird die gemäß Stufe 5 hergestellte Verbindung mit N^-Benzoyl-phenylalanin (Bz-Phe), vorzugsweise unter Verwendung eines aktiven Esters dieser Verbindung, gekuppelt und hierbei Ne^-£3~(N^e^~B8nzoyl*-phenylalanylthio)-2~D-.methylpropanoylJ«L-prolin-t~butylester erhalten. Bei dieser Umsetzung kann statt der Schutzgruppe Bz auch eine andere Schutzgruppe, beispielsweise Boc oder Cbo, verwendet werden«

In Arbeitsstufe 7 wird aus der gemäß Stufe 6 hergestellten Verbindung die Schutzgruppe, beispielsweise mittels TFA in Anisol, abgespalten und hierbei die gewünschte Verbindung erhalten.

Falls in Stufe 1 3-Acetylthiopropionsäure bzw* 2-Acetylthiopropionsäure statt der 3-Acetylthio~2~methylpropionsäure verwendet wird, wird das entsprechende 3-Thiopropionsäurebzw» 2-Thiopropionsäurederivat erhalten» In Stufe 6

77 K j /U Q ' 2,9,1981

AP C 07 C/228 170/8 -52 -. 58 934/18

kann statt des Bz«Phe irgendeine andere der oben angegebenen, den Rest R- A enthaltenden Verbindungen eingesetzt und hierbei eine die gewünschten Reste R und A enthaltende Verbindung erhalten werden»

XXIX_e

Bei einer weiteren Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird zunächst 3-Amino-2«raethylpropionsäure nach üblichen Methoden in die optischen Isomeren gespalten, um 3-Amino~2~D«niethylpropionsäure zu erhalten.

In Arbeitsstufe 2 wird sodann das gemäß Stufe 1 erhaltene optische Isomer mit Natriumnitrit in HBr zur 3~Brom~2»D~ ' methylpropionsäure umgesetzt» Zwecks Herstellung von 3-Chlor-2~D~methylpropionsäure kann andererseits auch HCl und HNO, eingesetzt werden. Andererseits kann auch 3»Hydroxy-2«methylpropionsäure mit PBr-, zur 3»Srom-2-methylpropionsäure umgesetzt werden,

In Arbeitsstufe 3 wird die gemäß Stufe 2 erhaltene Ver~ bindung mit N^»Benzoyl-thiophenylalanin (Bz«Phe~SH) zur 3~ (N©£ ~Benzoyl-phenylalanylthio)"2~D«-me thylprop ionsäure umgesetzt«

In Arbeitsstufe 4 wird die gemäß Stufe 3 erhaltene Verbindung mit dem t-Butylester des L-Prolins gekuppelt und die erhaltene Verbindung durch Abspalten der Schutzgruppe, beispielsweise mittels TFA in Anisol,, in der im Abschnitt XIV, Stufe 4, beschriebenen Weise in die gewünschte Verbindung übergeführt.

2 0 Q 1 7 Π ft 2.9,1981

L Ö S / U Ö AP C 07 C/228 170/8

- 53 - 58 934/18

In Stufe 2 kann 3-Aminopropionsäure bzw« 2»Aminopropion~ säure statt der 3~Amino~2«D~methylpropions£iure eingesetzt und hierbei das entsprechende 3-Thiopropionsäure- bzw. 2-Thiopropionsäurederivat erhalten werden« In Stufe 3 kann statt des Bz-Phe~SH irgendeine andere Verbindung der Formel R-A- SH eingesetzt und hierbei eine die gewünschten Reste R und A enthaltende Verbindung erhalten werden«

XXX·

Bei einer weiteren Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird zunächst 3~Amino~2~methylpropionsäure nach einer üblichen Methode, beispielsweise nach der im Abschnitt XXIX, Stufe 1, angegebenen Methode,in die optischen Isomeren gespalten, um 3~Amino-2-D-methylpropi.onsäure zu erhalten«

In Arbeitsstufe 2 wird die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung mit HBr in Natriumnitritlösung nach der im Abschnitt XXIX, Stufe 2, beschriebenen Weise zur 3~Brom~2-D« methylpropionsäure umgesetzt« :

In Arbeitsstufe 3 wird die gemäß Stufe 2 erhaltene Verbindung mit Thiobenzoesäure zur 3-Benzoylthio-2-D-methylpropionsäure umgesetzt« Statt der Thiobenzoesäure kann bei dieser ,Urnsetzung auch Thioessigsäure eingesetzt werden«

In Arbeitsstufe 4 wird die gemäß Stufe 3 erhaltene Verbindung in alkalischer Lösung, beispielsweise in einer Lösung von Ammoniak in Methanol, zur 3-Mercapto~2-D«methyl~ propionsäure umgesetzt«

I 2.9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 54 - 58 934/18

In Arbeitsstufe 5 wird N^-Benzoyl-phenylalanin (Bz«Phe) nach der MA-Methode mit N-Hydroxysucciniraid umgesetzt und die erhaltene Verbindung nach der im Abschnitt XI, Stufe 3, beschriebenen Arbeitsweise mit der gemäß Stufe 4 erhaltenen Verbindung zur 3»(N«£ »Benzoyl~phenylalanylthio)-2-D~ methylpropionsäure umgesetzt«

In Arbeitsstufe 6 wird die gemäß Stufe 5 erhaltene Verbindung nach der MA«*Methode mit N»Hydroxysuccinimid umgesetzt und durch Umsetzen der erhaltenen Verbindung nach der im Abschnitt XI₄, Stufe 5_t beschriebenen Methode mit L-Prolin die gewünschte Verbindung hergestellt*

Falls 3«*Aminopropionsäure bzw« 2-Aminopropionsäure statt der in Stufe 2 eingesetzten 3-Amino-2=D-methylpropionsäure eingesetzt wird, wird das entsprechende 3-Thiopropionsäure« bzw» 2-Thiopropionsäurederivat erhalten« In Stufe 5 kann statt des Bz-Phs irgendeine andere den Rest R - A enthaltende Verbindung eingesetzt und hierbei eine die ge~ wünschten Reste R und A enthaltende Verbindung erhalten werden«

Falls für die Methylseitenkette der 3-Mercapto-2»methyl~ propionsäuregruppe angegeben wird, daß sie in D-Konfiguration steht, so bedeutet dies, daß es sich um die S-Kon·» figuration handelt«

Erfindungsgemäße Verbindungen bilden mit verschiedensten anorganischen und organischen Basen Salze, die ebenfalls in dem Rahmen der vorliegenden Erfindung liegen« Solche Salze sind beispielsweise Ammoniumsalze, Alkalimetallsalze, wie Natrium- und Kaliumsalze (welche bevorzugt sind),

22 817 0 8 2.9.1931

AP C 07 C/228 170/8 - 55 - 58 934/18

Erdalkalimetallsalze, wie Calcium- und Magnesiumsalze, Salze mit organischen Basen, wie Dicyclohexylämin, Benzathin, N-Methyl-D-glucamin oder Hydrabamin, und Salze mit Aminosäuren, wie Arginin, Lysin und dgl. Die nichttoxischen, physiologisch annehmbaren Salze werden bevorzugt, obwohl auch andere Salze, beispielsweise das Dicyclohexylaminsalz, •bei dem durch die Beispiele erläuterten Isolieren bzw„ Reinigen der Verbindungen brauchbar sind.

Die Salze werden in üblicher Weise durch Umsetzen der freien Säure mit zumindest einem Äquivalent der entsprechenden Base hergestellt, wobei in einem Lösungsmittel gearbeitet werden kann, in welchem das entstehende Salz nur wenig löslich oder unlöslich ist, oder in Wasser gearbeitet werden kann und dann das Wasser durch Gefriertrocknen abgetrieben wird* Durch Umsetzen eines Salzes mit einer unlöslichen Säure wie einem in Η-Form vorliegenden Kationenaustauschharz, z» B«, einem Polystyrolsulfonsäureharz wie Dowex 50, oder mit einer wäßrigen Säure und Extrahieren des Reaktionsgemisches mit einem organischen Lösungsmittel, wie Äthylacetat, Dichlormethan oder dgl*, kann die Verbindung in Form des freien Salzes erhalten oder gewünschtenfalls ein anderes Salz hergestellt werden,

Ausführungsbeispiel

Das erfindungsgemäße Verfahren wird im folgenden durch Ausführungsbeispiele näher erläutert» In diesen Beispielen werden die verschiedenen Ausführungsformen des Verfahrens zum Herstellen von N^8Ä~£3-(N⁰^~Benzoyl-phenylalanylthio)-2-D-methylpropanoylJ-L-prolin beschrieben. In diesen Ausführungsbeispielen werden die miteinander umzusetzenden Stoffe in Moläquivalenten eingesetzt*

/üb .8.9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 55 - 58 934/18

Stufe 1: Herstellung von N^ea~t-Butyloxycarbonyl~L~thxophenylalanin-phenylester

Eine in einem Bad aus Eis, Trockeneis und Methanol auf -20 ⁰C gekühlte Lösung von 3,98 g 8oc~L»Phe in etwa 20 ml redestilliertem Äthanol wurde mit 2_f04 ml IWUhylmorpholin und dann·mit. 2,04 ml Isobutylchlorformat versetzt» worauf die erhaltene Lösung bei -15 C 3 min gerührt und dann mit 1,8 ml Thiophenol versetzt wurde,· worauf das erhaltene Gemisch 1,5 Stunden bei -=15 °C gerührt, dann langsam auf Raumtemperatur erwärmt und schließlich noch weitere 2 Stunden gerührt wurde* Das Reaktionsgemisch wurde sodann mit 2p ml Äthylacetat versetzt, worauf die organische Phase 3mal mit kaltem Wasser, 3mal mit kalter In-Zitronensäure, 3mal mit kalter gesättigter Kochsalzlösung, 3mal mit kalter In-NaHCO -Lösung und schließlich 3mal mit kalter gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO filtriert und dann in einem rotierenden Verdampfer vom Lösungsmittel befreit wurde» Der hierbei erhaltene Rückstand wurde aus einem Gemisch aus Benzol und Petroläther umkristallisiert und lieferte hierbei 3,68 g weißer Nadeln mit Fp = 113,5 bis 114,5 ⁰C Das IR«Spektrum, das NMR-Spektrum, die Elementaranalyse, die Papierelektrophorese und die Dünnschichtchromatographie zeigten, daß es sich bei der erhaltenen Verbindung um die herzustellende Verbindung handelt*

Stufe 2: Herstellung von N^-~8enzoyl~L»thiophenylalanin~ -phenylester

(i) 2 g der gemäß Stufe X erhaltenen Verbindung wurden zu 2,0 ml Anisol zugesetzt, worauf das erhaltene Gemisch in

*) O Q 1 Π Q Q 2,9.1981

^* AP C 07 C/228 170/8

- 57 - 58 934/18

einem Bad aus Eis und Aceton gekühlt wurde. Die N°^-Boc~ Gruppe wurde durch Rühren des mit 4 ml wasserfreier TFA versetzten Gemisches bei Raumtemperatur während 30 min abgespalten* Die TFA wurde sodann bei 30 ⁰C mittels eines rotierenden Verdampfers größtenteils abgetrieben» worauf der größte Teil der TFA und das Anisol mittels eines Verdampfers bei 30 C im Hochvakuum abgetrieben wurden, bis sich weiße Kristalle bildeten,

(ii) Dem erhaltenen Rückstand wurden 10 ml einer 5,7molaren Lösung von Chlorwasserstoff in Äthanol zugesetzt, worauf das erhaltene Gemisch 10 min bei Raumtemperatur gerührt und dann mit 15 ml wasserfreiem Äther versetzt wurde« Das erhaltene Gemisch wurde in einem Eisbad 30 min gekühlt und dann filtriert, worauf die abfiltrierten Kristalle mehrmals mit Äther gewaschen wurden« Die gewaschenen Kristalle wurden sodann über Nacht in einem Vakuumexsikkator über NaOH-Plätzchen und Ρ~0_Γ getrocknet, womit 1,03 g weißer Kristalle erhalten wurden, die sich bei 164,5 bis 165 ⁰C zersetzten«

(iii) 1,12 g der so erhaltenen Verbindung, dem Hydrochlorid des L-Thiophenylalanin-phenylesters, wurden unter kräftigem Rühren in 15 ml Äthylacetat suspendiert, worauf die erhaltene Suspension bei Raumtemperatur mit 0,45 ml Benzoylchlorid versetzt und das erhaltene Gemisch tropfenweise mit einer Lösung von 1,01 g Na₂CO in 10 ml Wasser versetzt und das nunmehr vorliegende Gemisch weitere 30 min kräftig gerührt wurde. Das erhaltene Gemisch wurde dann in einem Eisbad 30 min gekühlt und filtriert, worauf der Filterrück» stand 7mal mit kaltem Wasser, lrnal mit kaltem Äthylacetat und 2mal mit wasserfreiem Äther gewaschen und dann in einem

MJ 2*9*1981

AP C 07 C/228 170/8 - 58 - 58 934/18

Vakuumexsikkator über NaOH~Plätzchen und Po^c mehrere Stunden getrocknet wurde© Hierbei wurden 1,32 g weiße Kristalle erhalten, welche sich bei 182 bis 183 ⁰C zersetzten« Das IR-Spektrums, das NHR-Spektrumy die Elementaranalyse, die Papierelektrophorese und die Dünnschichtchromatographie der erhaltenen Verbindung zeigten» daß es sich um die oben genannte Verbindung handelt„ ί '

Stufe 3i Herstellung von N^-Benzoyl-L-thiophenylalanin

Durch eine Lösung von l'VOl g NaSH in 25 ml wasserfreiem Äthanol wurde bei einer Temperatur von 35 bis 40 ⁰C unter kräftigem Rühren Stickstoff hindurchgeleitet, worauf der erhaltenen Lösung 2,17 g der gemäß Stufe 2 hergestellten Verbindung innerhalb eines Zeitraumes von 15 min zugesetzt wurden^'· wobei die Temperatur des Reaktionsgemisches bis zur beendeten Zugabe auf etwa 20 C abfiel« Das erhaltene Gemisch wurde sodann noch l_e5 Stunden bei 20 C kräftig gerührt, worauf das Äthanol bei 32 ⁰C mittels eines rotierenden Verdampfers abgedampft, der hierbei erhaltene Rückstand mit 30 ml Wasser versetzt* die erhaltene Lösung in einem Eisbad gekühlt und dann mittels 50%iger H₂SO. bis auf einen pH-»Wert von 2 angesäuert und das angesäuerte Gemisch in einem Eisbad 30 min stehengelassen und dann filtriert wurde« Der hierbei erhaltene Filterrückstand wurde mehrmals mit kaltem Wasser gewaschen und dann über Nacht in einem Vakuumexsikkator über NaOH-Plätzchen und ^P2°5 9^etrocknet ^unc* schließlich aus dem Gemisch aus Benzol und Hexan umkristallisiert ^ womit l_e45 g weißer Nadeln erhalten wurden, die sich bei 108,5 bis 109,5 ⁰C zersetzten, Das IR-Spektrun», das NMR-Spektrum^ die Elementaranalyse^ die Papierelektrophorese und die Dünnschicht-

2281 7

^v 2*9»1981

AP C 07 C/228 170/8 - 59 - 58 934/18

Chromatographie2Bigten_f daß es sich bei der erhaltenen Verbindung um die oben genannte Verbindung handelt»

Stufe 4: Herstellung von S-CN^-Benzoyl-L-phenylalanylthio)-2-methylpropionsäure

Eine Suspension von 285 mg der gemäß Stufe 3 hergestellten Verbindung und 85_el pl Methacrylsäure in 2 ml Toluol wurde mehrere Stunden auf Rückflußtemperatur erhitzt,» bis die Reaktion laut Dünnschichtchromatogramm und Papierelektrophorese praktisch beendet war» Das erhaltene Gemisch wurde sodann über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen und dann mittels eines rotierenden Verdampfers bei 35 C im Hochvakuum vom Lösungsmittel befreit, worauf aer hierbei erhaltene ölige Rückstand kristallisiert und anschließend aus einem Gemisch aus Benzol und η-Hexan urnkristallisiert wurde« Auf diese Weise wurden 195 mg weiße Kristalle mit Fp = 120 bis 122₄5 ⁰C erhalten« Das IR«Spektrumy das NMR-Spektrum, die Elementaranalysey die Papierelektrophorese und das Dünnschichtchromatogramm dieser Verbindung zeigten, daß es sich um die oben genannte Verbindung handelt»

Stufe 5: Abspalten von 3-(N^-Benzoyl~L«-phenylalanylthio)-2-»D-methylpropionsäure vom erhaltenen Isomerengemisch

(A) Die gemäß Stufe 4 erhaltene Verbindung wurde'Wiederholt aus Benzol umkristallisiert_f um die oben genannte Verbindung zu erhalten. Wenn hierbei Kristalle der nach der im Abschnitt XXIX_f Stufen 1 bis 3* beschriebenen Arbeitsweise hergestellten Verbindung als Impfkristall© verwendet wurden» wurde die gewünschte Verbindung schneller und in höherer Ausbeute erhalten«,

22 81 7 U 8 ²·⁹·¹⁹⁸¹

^fe AP C 07 C/228 170/8

- 60 - 58 934/18

(B) Die gemäß Stufe 4 hergestellte Verbindung wurde in Benzol gelösti worauf die erhaltene Lösung mit 1 Äquivalent an Dicyclohexylamin versetzt,, das erhaltene Gemisch mehrere Stunden gerührt und über Nacht bei 4 ⁰C stehengelassen und schließlich filtriert wurde« Die hierbei als Filterrückstand erhaltenen Kristalle wurden gewaschen und dann in einem Vaküumexsikkator getrocknet und schließlich in einem Gemisch aus Wasser und Äth^iacetat gelöst* worauf das erhaltene Gemisch in einem Eisbad gekühlt und mit konzentrierter HCl auf einen pH-Wert von 2 angesäuert wurde* Die organische Phase des erhaltenen Gemisches wurde mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen mit MgSO und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit« Der hierbei erhaltene Rückstand wurde aus Benzol umkristallisiert_β

Stufe 6: Herstellung von thio)*=2-D»tnethyl-»propanoylJ«L-prolin

(A) (i) Eine in einem' Bad aus Eis und Aceton auf O ⁰C gekühlte Lösung von 2,5 mraol der gemäß Stufe 5 hergestellten Verbindung in 3 ml Dimethylformamid (DMF) wurde mit einer Lösung von 2>5 mmol DCC in 1*5 ml DMF versetzt, worauf das erhaltene Gemisch 5 min bei O ⁰C gerührt und dann mit einer Lösung von 2_f5 mmol L-Prolin~t«butylester in 1,5 ml DMF versetzt wurde« Das Reaktionsgemisch wurde sodann über Nacht bei 4 C gerührt und nach dem Verdünnen mit 10 ml Äthylacetat filtriert, worauf der Filterrückstand mit 20 ml Äthylacetat gewaschen wurde* Die miteinander ver einigten Äthylacetatfraktionen wurden in einem Tiefkühlschrank tiefgekühlt_s worauf die organische Phase 3mal mit gesättigter Kochsalzlösung, !mal mit kalter O₁I n~NaHCO,-

Q 2*9.1931

AP C 07 C/228 170/8 - 61 - 58 934/18

Lösung und 3mal mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen mit wasserfreiem MgSO. und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers im Hoch« vakuum vom Lösungsmittel befreit wurde, womit ein weißer Rückstand erhalten wurde« (ü) Der erhaltene Rückstand wurde in 4 ml Anisol gelöst _t worauf die Lösung mit 8 ml TFA versetzt und das erhaltene Geraisch bei Raumtemperatur 1,5 Stunden gerührt und dann im Hochvakuum mittels eines rotierenden Verdampfers von der TFA befreit wurde* Der hierbei erhaltene Rückstand wurde in 1 ml Tetrahydrofuran (THF) gelöst¹,, worauf die erhaltene Lösung chromatographiert wurde« Die die gewünschte Verbindung enthaltenden Fraktionen wurden zur Trockne eingedampft, worauf der erhaltene Rückstand in einer geringen Menge an Isopropanol gelöst und die erhaltene Lösung erneut chromatographiert wurde* Die die gewünschte Verbindung enthaltenden Fraktionen lieferten beim Eindampfen als Rückstand ein öl, das in THF gelöst wurde« Von der so erhaltenen Lösung wurde das THF in einem Stickstoffstrom abgedampft* Das Endprodukt wurde durch Abdampfen des restlichen Lösungsmittels im Hahvakuum mittels eines rotierenden Verdampfers erhalten*

(B) Eine kalte Lösung von 2^5 mmol DCC in DMF wurde tropfenweise bei O C einer Lösung von 2,5 mmol der gemäß Stufe hergestellten Verbindung und 2,5 mmol N-Hydroxysuccinimid in DMF zugesetzt, worauf das Reaktionsgemisch 30 min bei O ⁰C und dann über Nacht bei 4 ⁰C gerührt und anschließend durch. Filtrieren vom auskristallisierten Dicyclohexylharn*» stoff befreit und der Filterrückstand mit Äthylacetat gewaschen wurde» Das mit der Waschflüssigkeit vereinigte Filtrat wurde unter vermindertem Druck vom Lösungsmittel befreit, worauf der hierbei erhaltene Rückstand aus einem

Q 2.9,1981-

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Geraisch aus Benzol und Hexan umkristallisiert, die erhaltenen Kristalle in kaltem THF gelöst und die erhaltene Lösung mit einer kalten Lösung von 2,5 rnmol L»Pro und 2,5 mmol NaHCO-, in einem Gemisch aus THF und Wasser versetzt viurde» Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann bei 35 ⁰C mittels eines rotierenden Verdampfers vom THF befreit, worauf der erhaltene Rückstand in Wasser aufgenommen und das erhaltene Gemisch mittels festem NaHCO auf einen pH-Wert von 9 eingestellt wurde* Die wäßrige Phase wurde mit Äthylacetat extrahiert, dann in einem Eisbad gekühlt und anschließend mittels In-HCl in Anwesenheit von Äthylacetat auf einen pH-Wert von 2 angesäuert# Die vom erhaltenen Gemisch abgetrennte organische Phase wurde 2mal mit kaltem Wasser und 2mal mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO. und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit,Worauf der erhaltene Rückstand aus einem Gemisch aus Äther und Hexan urakristallisiert wurde, womit die oben genannte Verbindung erhalten wurde«,

Weitere Methoden zum Herstellen von N^-Benzoyl-L«»thio·» phenylalanin

(A) Zunächst wurde Boc«°L~thiophenylalanin»phenylester in der in Stufe 1 beschriebenen Weise hergestellt« Die Thiosäure Boc~L«thiophenylalanin wurde im wesentlichen nach der in Stufe 3 beschriebenen Arbeitsweise hergestellt« Diese Thiosäure kann auch durch Umsetzen äquimolarer Mengen von Boc~L-*Phe und H„S nach der in 0« Am* Chercu Soc_e 74, 4726 (1952) beschriebenen Mischanhydridmethode hergestellt werden» Die Thiosäure wird mit Chlorwasserstoff in Äthanol umge-

8 2.9.1981

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setzt* worauf die erhaltene Verbindung mit Benzoylchlorid oder einem aktiven Ester der Benzoesäure in der in Stufe beschriebenen Weise umgesetzt wird, womit die genannte Verbindung erhalten wird.

(B) N^-Benzoyl-L-Phe wird durch Umsetzen molarer Mengen von Benzoylchlorid und L-Phe in Natronlauge in der in Ο,Βϊο, Chem. 138_f 627 (1941) beschriebenen Weise hergestellte Die genannte Verbindung wird dann durch Umsetzen molarer Mengen von N^-Benzoyl-L-Phe und H„S im wesentlichen nach der in 3« Am* Chem« Soc_e 74, 4726 (1952) be~ schriebenen Mischanhydridmethode hergestellt*

Weitere Methoden zura Herstellen der 3-(N^«Benzoyl-L-phenylalanylthio)-2-D~methylpropionsäure

Nach der im Abschnitt IX, Stufen 1 und 2, beschriebenen Methode wurde Boc-L-Thiophenylalanin hergestellt« Das Hydrochlorid von L-Thiophenylalanin wurde durch Umsetzen von Boc-L-Thiophenylalanin mit HCl in Essigsäure unter Rühren bei Raumtemperatur hergestellt* Anschließend wurde wasserfreier Äther zugesetzt und das erhaltene Gemisch in einem Eisbad gekühlt. Die Lösung wurde sodann filtriert und mehrmals mit Äther gewaschen« Der Rückstand wurde über Nacht in einem Vakuumexsikkator über NaOH-Plätzchen und Pp⁰C getrocknet· Das erhaltene Produkt wurde in der in Stufe 4 beschriebenen Weise mit Methacrylsäure zum Hydrochlorid der 3~L-Phenylalanylthio~2-*methylpropionsäure umgesetzt. Diese Verbindung kann nach der in Stufe 5 beschriebenen Arbeitsweise in die optischen Isomeren aufgespalten werdenj worauf das gewünschte Isomer im wesentlichen nach der in Stufe 2 (iii) beschriebenen Arbeitsweise mit Benzoylchlorid

H 2„9₆1981

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umgesetzt wird, jedoch kann diese Verbindung auch unmittelbar im wesentlichen nach der in Stufe 2 (iii) beschriebenen Arbeitsweise mit Benzoylchlorid umgesetzt und dann das erhaltene Reaktiönsprodukt in die optischen Isomeren aufgespalten werden«,

Stufe 1: Herstellung von N^-Boc-L-thiophenylalanin-phenylester

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I; Stufe l_t beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

Stufe 2: Herstellung von U^ -Boc-oL-thiophenylalanin

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt^ daß die in Stufe 1 hergestellte Verbindung bei der im Abschnitt I, Stufe 3, beschriebenen Arbeitsweise statt des Ne4-Benzoyl-L-thiophenylalanin-phenylesters eingesetzt wurde« Diese Verbindung kann auch nach der in 3«, Am«, Chenu Soc» 74, 4726 (1952) beschriebenen Arbeitsweise hergestellt werden«

Stufe 3: Herstellung von 3-(N^-Boc«L«phenylalanylthio)~ 2~methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt» daß die gemäß Stufe 2 hergestellte Verbindung bei der im Abschnitt Ιγ Stufe Ag beschriebenen Arbeitsweise statt des N^-Benzoyl-L~thiophenylalanin$ eingesetzt wurde_e

M 2*9.1981

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Stufe 4: Abtrennen von 3-(N^~Boc~L~phenylalanylthio)-2~ D-rnethylpropionsäure vom Isomerengemisch

Diese Verbindung wurde aus dem gemäß Stufe 3 erhaltenen Produkt im wesentlichen nach der im Abschnitt I, Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt*

Stufe 5: Herstellung von alanylthio)~2-D~methylpropanoylJ-L-prolin

(A) Aus der gemäß Stufe 4 erhaltenen Verbindung wurde die Schutzgruppe mittels TFA in Anisol im wesentlichen nach der im Abschnitt I, Stufe 2 (i)_t beschriebenen Methode abgespalten, worauf die erhaltene Verbindung nach der im Abschnitt I₁ Stufe 2 (iii), beschriebenen Arbeitsweise mit Benzoylchlorid zur 3-(N^>->Benzoyl-L-phenylalanylthio)-2-D~methylpropionsäure umgesetzt wurde_e Die genannte Verbindung kann auch nach den im Abschnitt I, Stufe 6, be«» schriebenen Arbeitsweisen hergestellt werden»

(B) Wenn bei der im Abschnitt I, Stufe 6 (A), die gemäß Stufe 4 erhaltene Verbindung statt der 3-(N^-Benzoyl-L-phenylalanylthio)-2-D~methylpropionsäure eingesetzt wird, wird N<^~(3~L«Phenylalanylthio-2-D-methylpropanoyl)~L~ prolin erhalten, das dann beim Umsetzen mit Benzoylchlorid in der im Abschnitt I, Stufe 2 (iii)_tbeschriebenen Arbeitsweise die gewünschte Verbindung liefert*

Wenn andererseits bei der im Abschnitt I_e Stufe 6 (B), die gemäß Stufe 4 erhaltene Verbindung statt der 3~(N^~ Benzoyl-L~phenylalanylthio)~2-D~methylpropionsäure eingesetzt wird, wird N^^a-|r3-(N^Ea»Boc-L~phenylalanylthio)-»2-D-

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~>methylpropanoyr)~2~.prolin erhalten^ aus welchem dann nach der im Abschnitt I£ Stufe 2 (i)j beschriebenen Arbeitsweise die Schutzgruppe abgespalten wird^ worauf durch Umsetzen der erhaltenen Verbindung mit Benzoylchlorid nach der im Abschnitt I» Stufe 2 (iii)* beschriebenen Arbeitsweise die genannte Verbindung erhalten wird«

Stufe 1: Herstellung von N^-Cbo-L-phenylalanin-pentachlorphenylester

Eine in einem Bad aus Eis, Trockeneis und Methanol auf -20 ⁰C gekühlte Lösung von 15 mmol Cbo«L~Phe in etwa 60 ml redestilliertem Äthylacetat wurde zunächst mit 15 mmol N-Äthylraorpholin und dann mit 15 mmol Isobutyl« chlorformat versetzt;, worauf das erhaltene Gemisch mehrere Minuten bei -15 C gerührt und dann mit 15 mmol Pentachlorphenol versetzt wurde« Das nunmehr vorliegende Reaktionsgemisch wurde bei «15 ⁰C l'_t5 Stunden gerührt, dann langsam auf Raumtemperatur erwärmt und schließlich noch weitere 2 Stunden gerührt« Dem Reaktionsgemisch wurden sodann 100 ml Äthylacetat zugesetzt^ worauf das verdünnte Gemisch in einem Eisbad gekühlt wurde* Die erhaltene organische Phase wurde mehrmals mit kaltem Wasser, kalter gesättigter Kochsalzlösung, kalter In-NaHCO ~ Lösung und schließlich mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit« Durch Umkristallisieren des hierbei erhaltenen Rückstandes aus Äthylacetat wurde die genannte Verbindung mit Fp = 153,5 bis 154 C erhalten*

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Stufe 2: Herstellung des Hydrobromids des L-Phenylalaninpentachlorphenylesters

Die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung wurde in Essigsäure unter Rühren bei Raumtemperatur während 45 min mit Bromwasserstoff umgesetzt_e worauf das Reaktionsgemisch mit wasserfreiem Äther versetzt und das erhaltene Gemisch in einem Eisbad gekühlt wurde» Vom erhaltenen Gemisch wurde sodann der Niederschlag abfiltriert_f worauf der Filterrückstand mehrmals mit Äther gewaschen und dann über Nacht in einem Vakuumexsikkator über NaOH-Plätzchen und P/>0(- getrocknet wurde« Auf diese Weise wurde die genanm halten,

genannte Verbindung mit Fp = 178 bis 181 C (Zers©) erStufe 3: Herstellung des N^-Benzoyl^L-phenylalanin-penta-· chlorphenylesters

Wenn bei der im Abschnitt I, Stufe 2 (iii), beschriebenen Arbeitsweise das L-Thiophenylalanin durch die gemäß Stufe 2 hergestellte Verbindung ersetzt wurde, wurde die genannte Verbindung mit Fp = 161 bis 162 ⁰C erhalten*

Stufe 4: Herstellung von S-CN^-Benzoyl-L-phenylalanylthio)-2-methylpropionsäure

Eine mit N-Äthylmorpholin neutralisierte Lösung von 10 mmol 3~Mercapto~2»methylpropionsäure in Dioxan wurde mit einer Lösung von 10 mmol der gemäß Stufe 3 hergestellten Verbindung in redestilliertem Dioxan versetzt, worauf das Reaktionsgemisch bei Raumtemperatur gerührt wurde/ bis die Reaktion laut Dünnschichtchromatogramm abgeschlossen war«

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Das Lösungsmittel wurde sodann bei 30 C unter vermindertem Druck vom Reaktionsgemisch abdestilliert, worauf der erhaltene Rückstand in Äthylacetat aufgenommene das hierbei erhaltene Gemisch in einem Eisbad gekühlt und dann mit 0,In-HCl und anschließend mehrmals mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen wurde« Durch Abdampfen des Lösungsmittels von der über wasserfreiem MgSO getrockneten Lösung in einem rotierenden Verdampfer wurde die genannte Verbindung erhalten»

Stufe 5: Abtrennen von 3-('N®*~Benzoyl~L~phenylalanylthio)~ 2»D-»methylpropionsäure aus dem entsprechenden Isomeren« gemisch ·

Die genannte Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise erhalten*

Stufe 6: Herstellung von N⁶^-^3-(N^-Benzoyl-L-phenylalanylthio)~2-D~fiiethylpropanoylJ~L~prolin

Die genannte Verbindung wurde nach der im Abschnitt Iy Stufe 6 (A)g beschriebenen Arbeitsweise hergestellt«

IV, Stufe 1: Herstellung von N^~Benzoyl»=D_sL»thiophenylalanin

Diese Verbindung wurde im wesentlichen nach der in Ο«, Am„ Chem. Soc_e 74, 4725 (1952) beschriebenen Arbeitsweise durch Umsetzen äquimolarer Mengen von N^¹~3enzoyl~D_iL~Phe und HpS nach der Mischanhydridmethode hergestellt«

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Stufe 2: Herstellung von S-CN^ thio)~2«methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt I, Stufe 4, beschriebenen Arbeitsweise die gemäß Stufe 1 hergestellte Verbindung statt des .N^-Benzoyl-L-tbiophenylalanins eingesetzt wurde*

Stufe 3: Abtrennen von 3-(N⁶^«Benzoyl«D,L-phenylalanylthio)~2-D«methylpropionsäure aus dem entsprechenden Isomerengemisch

Diese Verbindung wurde im wesentlichen nach der im Abschnitt I, Stufe 5> beschriebenen Arbeitsweise hergestellt*

Stufe 4: Herstellung von N⁶^-Cz^(Ii^ -Benzoyl-D_tL~phenyl alanylthio)-2~D«methylpropanoylJ-L-prolin

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt I, Stufe 6, beschriebenen Arbeitsweise die gemäß Stufe 3 hergestellte Verbindung als Ausgangsstoff eingesetzt wurde»

Stufe 1: Herstellung von 2*»Methyl~>propenoyl-L-prolin

(i) Eine kalte Lösung von 5 mmol DCC in Dichlormethan wurde tropfenweise bei O C einem Gemisch aus 5 rnmol Methacrylsäure, 5 mmol N~Hydroxysuccinimid und Dichlormethan zügesetzt, worauf das Reaktionsgemisch 30 min bei O ⁰C und anschließend über Nacht bei 4 ⁰C gerührt, dann der aus-

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kristallisierte Dicyclohexylharnstoff vom Reaktionsgemisch abfiltriert und der Filterrückstand mit Äthylacetat gewaschen wurde« Das mit der Waschflüssigkeit vereinigte Filtrat wurde sodann unter vermindertem Druck vom Lösungsmittel befreit, worauf der erhaltene Rückstand aus einem Gemisch aus Benzol und Hexan umkristallisiert wurde. Die erhaltenen Kristalle wurden in kaltem THF gelöst, worauf die.· erhaltene Lösung einer kalten Lösung von 5 minol L-F'ro und 5 mrnol NaHCO.. in einem Gemisch aus THF und Wasser zugesetzt wurde* Das hierbei erhaltene Reaktionsgemischwurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann bei 35 ⁰C mittels eines rotierenden Verdampfers vom THF befreit. Dem hierbei als Rückstand verbliebenen Gemisch wurde Wasser zugesetzt, worauf der pH-Wert des erhaltenen Gemisches durch Zusetzen von festem NaHCO_ auf 9 eingestellt und die wäßrige Phase mit Äthylacetat extrahiert wurde* Die abgetrennte wäßrige Phase wurde in einem Eisbad gekühlt und dann mittels In-HCl in Anwesenheit von Äthylacetat auf einen pH-Wert von 2 angesäuert, worauf die organische Phase in kaltem Wasser und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen wurde« Die miteinander vereinigten organischen Phasen wurden nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO. und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit, worauf der erhaltene Rückstand aus einem Gemisch aus Äther und Hexan umkristallisiert wurde, womit die genannte Verbindung erhalten wurde,

(ii) Eine in einem Eisbad unter kräftigem Rühren gekühlte Lösung von 2,5 mmol L-Prolin in einer wäßrigen Natriumbicarbonatlösung wurde mit 2^5 mmol Methacryloylchlorid versetzt, worauf das erhaltene Gemisch zunächst zwei Stunden

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0 2.9.1981

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bei Raumtemperatur gerührt und dann mit Äther extrahiert wurde* Die hierbei erhaltene wäßrige Phase wurde mit In-HCl angesäuert und dann mit Äthylacetat extrahiert _t worauf der erhaltene Extrakt im Vakuum zur Trockne eingeengt wurde· Hierbei wurde als Rückstand die genannte Verbindung erhalten.

(iii) Eine in einem Bad aus Eis* Trockeneis und Methanol auf -20 ⁰C gekühlte Lösung von 2^5 mmol Methacrylsäure in redestilliertem Äthylacetat wurde zunächst mit 2*5 mmol N«»Äthylmorpholin und dann mit 2,5 mmol Isobutylchlorf ormat versetztV worauf die erhaltene Lösung mehrere Minuten bei 15 C gerührt und dann mit 2_e5 mmol L~Prolin»t~>butylester versetzt und das erhaltene Gsmisch bei -15 ⁰C 1,5 Stunden gerührt wurde,, Das Reaktionsgemisch wurde sodann langsam auf Raumtemperatur erwärmt und weitere zwei Stunden gerührt und dann mit Äthylacetat verdünnt, worauf das erhaltene Gemisch in einem Eisbad gekühlt und die vom erhaltenen Gemisch abgetrennte organische Phase mehrmals mit kaltem Wasser, kalter In-Zitronensäuree kalter gesättigter Kochsalzlösung, kalter ln~NaHCO_-Lösung und schließlich mit kalter gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO. und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit und aer hierbei erhaltene Rükstand aus einem Gemisch aus Benzol und Petroläther umkristallisiert wurde» Von der erhaltenen Verbindung wurde die t-Butylestergruppe im wesentlichen nach der im Abschnitt I-, Stufe 5 (A)_e beschriebenen Arbeitsweise abgespalten«

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ö AP C 07 C/228 170/8

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Stufe 2: Herstellung von alanylthio)-2-D«.methylpropanoylJ-'L-prolin

Wenn bei der Arbeitsweise gemäß Abschnitt I, Stufe 4, statt der Methacrylsäure die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung eingesetzt wurde, wurde das 2~D_sL~Methylpropanoyl~derivat erhalten, das beim Aufspalten in die optischen Isomeren durch mehrmaliges Umkristallisieren aus einem Gemisch von Methanol, Benzol und Äther oder durch Flüssigchroraatographie die genannte Verbindung lieferte» Anstelle der gemäß Stufe 1 hergestellten Verbindung kann auch der N^-2»Methyl~propenoyl~L-PrO"tbutylester verwendet werden» Nach dem Aufspalten des er-, haltgen Isomerengemisches in die optischen Isomeren wird durch Abspalten aer Schutzgruppe vom geeigneten optischen Isomer nach der in Stufe 1 beschriebenen Arbeitsweise die genannte Verbindung erhalten«

VI

Stufe 1: Herstellung von N^»-Benzoyl«L-phenylalanin

Diese Verbindung wird durch Umsetzen äquimolarer Mengen von Benzoylchlorid und L~Phe in Natronlauge erhalten, wenn im wesentlichen nach der in O₆ Biol_e Chem* 138, 627 (1941) beschriebenen Arbeitsweise vorgegangen wird.

Stufe 2: Herstellung von 3™Mercapto»2»methylpropionsäure

Ein Gemisch aus 50 g Thioessigsäure und 40,7 g Methacrylsäure wurde auf einem Wasserbad eine Stunde erwärmt und dann 18 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen« Nachdem

M - 2,9,1981

AP C 07 C/228 170/8 - 73 - 58 934/18

durch NMR-Spektroskopie festgestellt worden war, daß die Methacrylsäure zur Gänze umgesetzt worden ist, wurde das Reaktionsgemisch im Vakuum bis zur Trockne destilliert, wobei S-Acetylthio-^-methylpropionsäure mit einem Siedepunkt von 128_f5 bis 131 ⁰C aufgefangen wurde» 3,4 g dieser Verbindung wurden in einem Gemisch aus 10,5 ml Wasser und

6.4 ml konzentriertem Ammoniak gelöst, worauf das Reaktionsgemisch eine Stunde später mit Wasser verdünnt und das verdünnte Gemisch filtriert wurde« Das erhaltene Filtrat wurde mit Äthylacetat extrahiert und dann mit konzentrierter Salzsäure angesäuert, worauf das angesäuerte Gemisch mit Natriumchlorid gesättigt und dann nochmals mit Äthylacetat extrahiert wurde, Die miteinander vereinigten Äthylacetatextrakte wurden mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und lieferten beim Eindampfen zur Trockne die genannte Verbindung»

Stufe 3: Herstellung von 3-(N^-Benzoyl-L»phenylalanylthio)-2-methylpropionsäure

Eine in einem Bad aus Eis, Trockeneis und Methanol auf -20 C gekühlte Lösung von 25 mmol N^-Benzoyl-L-Phe in redestilliertem Äthylacetat wurde zunächst mit 25 mmol N-Äthylmorpholin und dann mit 25 mmol Isobutylchloroformat versetzt, worauf die erhaltene Lösung mehrere Minuten bei 15 ⁰C gerührt und dann mit 50 mmol N-Hydroxysuccdnimid versetzt wurde* Das erhaltene Reaktionsgemisch wurde

1.5 Stunden bei -15 C gerührt, dann langsam auf Raumtemperatur erwärmt und anschließend mit 25 mmol von mit N-Äthylmorpholin neutralisierter 3-Mercapto-2~methylpropionsäure versetzt, worauf das nunmehr vorliegende Reaktionsgemisch so lange gerührt wurde, bis laut Dünn-

2 2 81 7

^fe AP C 07 C/228 17o/8

- 74 - 58 934/18

schichtchromatogramm die Umsetzung beendet war» Das Reaktionsgemisch wurde sodann mit Äthylacetat versetzt^ worauf das erhaltene Gemisch in einem Eisbad gekühlt und mit In-HCl auf einen pH-Wert von 3 angesäuert wurde« Die vom erhaltenen Gemisch abgetrennte organische Phase wurde mehrmals mit kaltem Wasser und kalter gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO. und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit, worauf durch Umkristallisieren des erhaltenen Rückstandes aus einem Gemisch von Benzol und Petroläther die genannte Verbindung erhalten wurde#

Stufe 4: Abtrennen von thio)-2-Q-methylpropanoylJ-L-prolin vom Isomerengemisch

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise erhalten«

Stufe 5: Herstellung von N^¹-/3-(N^-ßenzoyl~L-phenylalanylthio)-2~D~methylpropanoyl3»L-prolin

Eine in einem Bad aus Eis, Trockeneis und Methanol auf -20 C gekühlte Lösung von 10 mmol der gemäß Stufe 4 hergestellten Verbindung in redestilliertem Äthylacetat Wurde mit 10 mmol N-Äthylmorpholin und dann noch mit 10 mmol Isobutylchlorformat versetzt, worauf das erhaltene Gemisch mehrere Minuten bei -15 ⁰C geruht und dann mit 10 mmol N-Hydroxysuccinimid versetzt» das erhaltene Reaktionsgemisch l_e5 Stunden bei -15 C gerührt», dann langsam auf Raumtemperatur erwärmt und anschließend zwei Stunden gerührt und schließlich mit Äthylacetat verdünnt„ das erhaltene

228170 8

£. £. U S *S V AP C 07 C/228 170/8

2,9.1981 AP C 07 < - 75 - 58 934/18

Gemisch in einem Bad aus Eis und Wasser gekühlt, die erhaltene organische Phase mehrmals mit kaltem Wasser, kalter In-NaHCO -Lösung und schließlich mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO. und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit und der erhaltene Rückstand aus einem Gemisch aus Benzol und Petroläther umkristallisiert wurde, womit der N-Hydroxysuccinimidester der 3-(N**·-Benzoyl-L-Phenylalanylthio)-2»D«methylpropionsäure erhalten wurde«. Eine Lösung dieser Verbindung in TRF wurde einer kalten Lösung von 10 mmol L-Pro in einem NaHCO₃ enthaltenden Gemisch von gleichen Volumsteilen THF und Wasser zugesetzt, worauf das erhaltene Gemisch über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann mit Äthylacetat versetzt, das nunmehr vorliegende Gemisch über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann mit Äthylacetat versetzt, das erhaltene Gemisch nach dem Kühlen in einem Bad aus Eis und Wasser mit kaltem Wasser, kalter In-Zitronensäure, kalter gesättigter Kochsalzlösung, kalter in~NaHCO «Lösung und schließlich mit kalter gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO. und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit und der hierbei erhaltene Rückstand aus einem Gemisch aus Äther und Hexan umkristallisiert wurde, womit die genannte Verbindung erhalten wurde.

Stufe 1: Herstellung von N^-Benzoyl-L-thiophenylalaninphenylester

Die genannte Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, Stufe 1, beschriebenen Methode dadurch hergestellt, daß das

c fc. vs ' - AP C 07 C/228 170/8

- 76 - ' · ' 58 934/18

gemäß der erwähnten Arbeitsweise eingesetzte Boc-U-Phe durch Benzoyl-L-phenyXalanin ersetzt wurde«

Stufe 2: Herstellung von N^-Benzoyl-L-thiophenylalanin

Diese Verbindung wurde aus der gemäß Stufe 1 hergestellten Verbindung nach der im Abschnitt I, Stufe 3, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt*

Stufe 3: Herstellung von 3-(N®^ -Benzoyl~L~phenylalanylthio)~ 2-methylpropionsäure ""

Diese Verbindung wurde aus der gemäß Stufe 2 hergestellten Verbindung nach der im Abschnitt I, Stufe 4_# beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

Stufe 4: Herstellung von 3-(N-Benzoyl~L-phenylalanylthio)~ 2-D-methylpropionsäure durch Aufspalten des entsprechenden Isomerengemisches , «

Die genannte Verbindung wurde nach der im Abschnitt I» Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt*

Stufe 5: Herstellung von N-£3~(N^Ä-Benzoyl-L-phenylalanylthio)~2~D~methylpropanoyl3~L~prolin

Diese Verbindung wurde aus der gemäß Stufe 4 hergestellten Verbindung nach der im Abschnitt XI, Stufe 5, beschriebenen Methode hergestellt.

8 2.9*1981

AP C 07 C/228 170/8 - 77 ~ 58 934/18

VIII.

Stufe 1: Herstellung von N^-Boc-L-thiophenylalaninphenylester

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, Stufe 1, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

Stufe 2: Herstellung von N^-Boc-L-thiophenylalanin

Die Verbindung wurde nach der im Abschnitt I/ Stufe 3_e beschriebenen Arbeitsweise hergestellt«

Stufe 3: Herstellung von 3-(N^~Boc-L»phenylalanylthio)~ 2-methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt IV, Stufe 3, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt«

Stufe 4: Herstellung von 3~(N^~Boc-L«phenylalanylthio)~ 2~D~methylpropionsäure durch Aufspalten des entsprechenden Isomerengemisches

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, Stufe 5_e beschriebenen Arbeitsweise hergestellt„

Stufe 5: Herstellung von 3-(N^-Benzoyl~L-phenylalanylthio) «2~D~methylpropionsäure

Wenn bei der im Abschnitt I, Stufe 2_Λ beschriebenen Arbeitsweise statt des N^-Boc-L-thiophenylalanins die gemäß Stufe 4 hergestellte Verbindung eingesetzt wurde, wurde die genannte Verbindung erhalten»

M 2„9 1981

AP C 07 C/228 170/8 - 78 « 58 934/18

Stufe 6: Herstellung von N ⁴^ » £3-(Ν⁶*¹ -Benzoyl-L-phenylalanyl t h io )-»2«D~met hylp ropanoylj ~L~p rol in

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt XI, Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt„>

Stufe 1: Herstellung von N^-Benzoyl-L-phenylalanin

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt XI₄ Stufe l_e beschriebenen Arbeitsweise hergestellt«

Stufe 2: Herstellung von 3~(N^-Benzoyl~>L»phenylalanylthio) 2«methylpropionsäure

Die Verbindung wurde nach der im Abschnitt XI, Stufe 3, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt, wobei eine Racemisierung ablaufen kann*

Stufe 3: Herstellung von 3~(N^-Ben2:oyl-L,-phenylalanylthio) 2~D~methylpropionsäure durch Aufspalten des entsprechenden Isomerengemisches

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

Stufe 4: Herstellung von U^ -£3-(N^~Benzoyl-L«-phenylalanylthio)»2-D-methylpropanoylJ»L~prolin

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, Stufe 6 (A), beschriebenen Arbeitsweise hergestellt*

Q 2.9,1981

^ AP C 07 C/228 170/8

- 79 ~ 58 934/18

Stufe 1: Herstellung von S-iN^-Ddz-L-phenylalanylthio)-^- methylpropionsäure

Eine in einem Bad aus Eis_e Trockeneis und Aceton auf -20 C gekühlte Lösung von 10 mmol des nach den Angaben in Liebigs Ann« Chern* 763, 162 (1972) oder von ßirr C«, in Peptide, 1972, Proc of the 12th Eur» Pept, Syrnp_ei Hanson,, Η_β und 3aknbke_s H« D*_s Ed,_f North-Holland Publishers«, S₄, 72 (1973) hergestellten Ddz~L-Phe in redestilliertem Dioxan wurde mit einer Lösung von 10 mmol Ifi-Dicarbonyldiifflidazol (CDI) versetzt, worauf die erhaltene Lösung bei -10 ⁰C zwei Stunden gerührt und dann mit einer zuvor mit N~Ä"thylmorpholin neutralisierten kalten Lösung von 10 mmol 3-Mercapto~2~methylpropionsäure in Dioxan versetzt, das Reaktionsgemisch bei «10 C bis laut Dünnschichtchromatogramrn abgeschlossener Umsetzung gerührt, dann langsam auf Raumtemperatur erwärmt und unter vermindertem Druck bei 30 ⁰C vom Lösungsmittel befreit, der hierbei erhaltene Rüclkstand mit Äthylacetat versetzt, das erhaltene Gemisch in einem Bad aus Eis und Wasser gekühlt und dann mit 0,In-HCl und anschließend mehrmals mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem Natriumsulfat und Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit wurde, womit die genannte Verbindung erhalten wurde*

Stufe 2: Herstellung von 3«(N^-Ddz-L-phenylalanylthio) 2-D-methylpropionsäure aus dem entsprechenden Isomerengemisch

Die genannte Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

H ' 2.9.198I '

* ' AP C 07 C/228 170/8

- 80 - 58 934/18

Stufe 3: Herstellung von thio)-~2~D«»methylpropanoylJJ-L~prolin-"t~butylester

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, S,tufe 6 (A) (i)# beschriebenen Arbeitsweise hergestellt» indem als Ausgangsstoff die gemäß Stufe 2 erhaltene Verbindung anstelle der 3->(N^~Benzoyl~L~phenylalanylthio)~2~D» methylpropionsäure eingesetzt wurde»

Stufe 4/ Herstellung von N^~/°3-(L«Phenyl-alanylthio)~ 2-D-methyIpropanoyl3-L«prolin-t«butylester

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß eine auf 20 C gekühlte Lösung der gemäß Stufe 3 hergestellten Verbindung in THF in einem Glasrohr 5 Stunden mit Licht der Wellenlänge 350 nm bestrahlt und dann von der erhaltenen Lösung das THF mittels eines rotierenden Verdampfers abgetrieben wurde.

Stufe 5: Herstellung von N^ alanylthio)-2~D-methylpropanoyl3~L-prolin«t-butylester

Diese Verbindung wurde aus der gemäß Stufe 4 hergestellten Verbindung nach der im Abschnitt I, Stufe 2 (iii), beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

Stufe 6: Herstellung von N®*-£3-(N^-Ben2oyl-L-phenyl-' alanylthio)-2~D-methylpropanoyrf-L~prolin

Diese Verbindung wurde durch Abspalten der t-Butylestergruppe aus der gemäß Stufe 5 hergestellten Verbindung nach der im Abschnitt I, Stufe 6 (A) (ii), beschriebenen Arbeits weise hergestellt*

M 2,9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 81 - 58 934/18

XI.

Stufe 1: Herstellung von 3-(N^-Bpoc-L-phenylalanylthio)-2»methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt V/ Stufe 1, statt des Ddz-L-Phe als Ausgangsstoff das nach den Angaben in HeIv. Chem« Acta 51, 614 (1968) hergestellte N^-Bpoc-L-Phe eingesetzt wurde»

Stufe 2: Herstellung von 3-(N^ ~Bρoc->L~ phenylalanyltbio)-· 2'~D.-.methylpropion5äure aus dem entsprechenden Isomerengemisch

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I* Stufe 5_e beschriebenen Arbeitsweise hergestellt«,

Stufe 3: Herstellung von thio)-2~D~methylpropanoylJ~L«-prolin~t«butyle3ter

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt _g daß bei der im Abschnitt I, Stufe 6 (A) (1),'/'statt der S-iN^-Benzoyl-L-phenylalanylthio)~2~D~methylpropionsäure die gemäß Stufe 2 hergestellte Verbindung als Ausgangsstoff eingesetzt wurde«

Stufe 4: Herstellung von N^e£»-*/*3-(L~phenylalanylthio)«2-.D-. methylpropanoylJ-L-prolin-t-butylester

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß eine Lösung der gemäß Stufe 3 hergestellten Verbindung in O_S5 % TFA enthaltendem Methylenchlorid 10 Minuten gerührt und vom Reaktionsgemisch die TFA und das Methylenchlorid mittels eines rotierenden Verdampfers abgedampft wurden.

f| Λ 0 2 9 1Q81

AP C 07 C/228 170/S ~ 82 - 58 934/18

Stufe 5: Herstellung von N^-fs-fN®⁴ »ßenzoyl-L-phenylalanylthio)~2-D-methylpropanoyl3-L~prolin~t-butylester

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt I_s Stufe 2 (iii), die gemäß Stufe 4 hergestellte Verbindung als Ausgangsstoff eingesetzt wurde*

Stufe 6: Herstellung von N^-^«(N^-Benzoyl-L-phenylalanylthio)-«2~D«methylpropanoylJ~L->.prolin

Diese Verbindung wurde aus der gemäß Stufe 5 hergestellten Verbindung durch Abspalten der t~Butylestergruppe nach der im Abschnitt I, Stufe 6 (A) (unbeschriebenen Arbeitsweise hergestellt«

XII,

Stufe 1: Herstellung von 3"Mercapto-2~methylpropionsäuret-butylester

Eine Lösung von 0,55 g 2*»Methylpropen in In-Schwefel sä ure wurde bei -10 C mit 0,62 g 3-Acetylthio«2«>methylpropionsaure versetzt, worauf das erhaltene Gemisch 30 Minuten gerührt und dann auf Raumtemperatur erwärmt wurde* womit 3~Acetylthio-2-methylpropionsäure«t-butylester erhalten wurde«, Eine Lösung dieser Verbindung in einem Gemisch aus Ammoniak und Wasser wurde eine Stunde nach ihrer Herstellung mit Wasser verdünnt und dann filtriert,, worauf das Filtrat mit Äthylacetat extrahiert und nach dem Ansäuern mit konzentrierter HCl und Sättigen mit NaCl 2mal mit Ä'thylacetat extrahiert wurde,, Die erhaltenen Extrakte wurden mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und

7 2 8 1 7 O 8 2.9,1981

AP C 07 C/228 170/8 - 83 - 58 934/18

lieferten beim anschließenden Eindampfen zur Trockne die genannte Verbindung«.

Stufe 2: Herstellung von 3~(N^-Benzoyl-L»phenylalanylthio)~ 2-methylpropionsäure~t-butylester

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt XIy Stufe 3," beschriebenen Arbeitsweise dadurch hergestellt, daß statt aer 3«Mercapfo~2-methylpropionsäure die gemäß Stufe 1 hergestellte Verbindung als Ausgangsstoff eingesetzt wurde»

Stufe 3: Herstellung von 3-(N'^«Benzoyl~L~phenylalanylthio)-2-methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde durch Abspalten der t«Butylester~ gruppe aus der gemäß Stufe 2 hergestellten Verbindung nach der im Abschnitt I₁ Stufe 6 (A) (ii), beschriebenen Arbeitsweise hergestellt«

Stufe 4: Herstellung von 3~(N^~Benzoyl~L~phenylalanylthio)~ 2-D-methylpropionsäure durch Aufspalten des entsprechenden Isomerengemisches

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I> Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

Stufe 5: Herstellung von N*^~£3~(Benzoyl~L-phenylalanylthio)' 2-D-methylpropanoylj-L-prolin

Die genannte Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, Stufe 6 (A), beschriebenen Arbeitsweise hergestellt*

2 0 O 1 7 fS P 2,9*3.981

£ O I / ^ ö AP C 07 C/223 170/8

- 84 - 58 934/18

XIII,

Stufe 1: Herstellung von 3-Mercapto-2-methylpropionsäuret-butylester

Die genannte Verbindung wurde nach der im Abschnitt XVII, Stufe I₁ beschriebenen Arbeitsweise hergestellt»

Stufe 2: Herstellung von ^«-(N^-Ppoc-L-phenylalanylthio)-2-methylpropionsäure-t-butylester

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt,; daß bei der im Abschnitt XV₁ Stufe 1, beschriebenen Arbeitsweise statt des N^^Ddz-L-Phe das nach den Angaben in Int« 3« Peptide Protein Res* 6, 111 (1974) hergestellte N^-Ppoc-L-Phe und statt der 3«Mercapto-»2-methylpropionsäure die gemäß Stufe 1 hergestellte Verbindung als Ausgangsstoffe eingesetzt wurden«

Stufe 3: Herstellung von 3~L~Phenylalanylthio~2-tnethyl~ propionsäure~t~butylester

Die Verbindung wurde dadurch hergestellt, daS eine Lösung der gemäß Stufe 2 hergestellten Verbindung in 0,5 % TFA enthaltendem Methylenchlorid 10 Minuten gerührt und vom Reaktionsgemisch die TFA und das Methylenchlorid mittels eines rotierenden Verdampfers abgedampft wurden*

Stufe 4: Herstellung von 3~(N^«-Benzoyl~L«phenylalanylthio)-2~methylpropionsäure-t-butylester

Diese Verbindung wurde durch Umsetzen von Benzoylchlorid mit der äquimolaren Menge der gemäß Stufe 3 hergestellten Verbindung in einem NaHCO.. enthaltenden Gemisch aus Äthylacetat und Wasser hergestellt« '

g 2*9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 85 - 58 934/18

Stufe 5: Herstellung von S-iN^ 2-methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde durch Abspalten der t-Butylester·· gruppe aus der gemäß Stufe 4 hergestellten Verbindung nach der im Abschnitt I, Stufe 6 (A) (ii)y beschriebenen Arbeitsweise hergestellt«

Stufe 6: Herstellung von 3-(N^ -ßenzoyl~L~phenylalanylthio) »2~D~methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt«

Stufe 7: Herstellung von N^-f3™(N^-ß3nzoyl~L~phenyl» alanylthio)'~-2-D-methylpropano_/lJ-L-prolin

Diese Verbindung wurde nach oer im Abschnitt I, Stufe 6 (A), beschriebenen Arbeitsweise hergestellt»

XIV, Stufe 1: Herstellung von N^-Ddz-L-thiophenylalanin

Eine in einem Bad aus Eis und Aceton auf O C gekühlte Lösung von 5 tnmol N^ ~Ddz-L~Phe in DMF wurde mit einer Lösung von 5 mmol DCC in DMF versetzt _t worauf das erhaltene Gemisch mehrere Minuten bei O C gerührt und dann mit einer Lösung von 5 mmol p~Nitrophenol in DMF versetzt wurde» Das Reaktionsgemisch wurde sodann über Nacht bei 4 ⁰C gerührt und dann mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit, worauf der erhaltene

2*9*1981

AP C 07 C/228 170/8 85 - 58 934/18

Rückstand mit Äthylacetat verdünnt _s das erhaltene Gemisch filtriert und der Filterrückstand mit Äthylacetat gewaschen, das mit der Waschflüssigkeit vereinigte FiItrat nach dem Kühlen in einem Kühlschrank 3mal mit kalter ln~NaHCO_~Lösung und anschließend 3mal mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO₄ und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers im Hochvakuum vom Lösungsmittel befreit und die aus dem erhaltenen Rückstand erhaltene Verbindung bei der im Abschnitt I, Stufe 3,. beschriebenen Arbeitsweise statt des Benzoyl-L-thiophenylalaninphenylesters als Ausgangsstoff eingesetzt wurde* Auf diese Weise wurde die genannte Verbindung erhalten, ·

Stufe 2: Herstellung von 3~(N^-Ddz-L»phenylalanylthio)-2-methylpropionsä ure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt I, Stufe A_t beschriebenen Arbeitsweise die gemäß Stufe 1 hergestellte Verbindung statt des N*^- Benzoyl-L^thiophenylalanins als Ausgangsstoff eingesetzt wu rde*

Stufe 3: Herstellung von 3-(N^-Ddz-L-phenylalanylthio)-2~D-methylpropionsäure durch Aufspalten des entsprechenden Isomerengemisches

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I₁ Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt»

Q ft 2.9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 87 - 58 934/18

Stufe 4: Herstellung von Ν^-^-ζΝ -Ddz-L-phenylalanylthio)»2-D-methylpropanoyl3-L-prolin~t«butylester

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt I, Stufe 6 (A) (i)* die gemäß Stufe 3 hergestellte Verbindung statt der 3~(N^-Benzoyl~L-phenylalanylthio)-2~D~methylpropionsäure als Ausgangsstoff eingesetzt wurde»

Stufe 5ί Herstellung von N«*· -/3-(L~phenylalanylthio)-2~D-ii!ethylpropanoylJ-L-prolin-t«butylester

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt XV, Stufe 4, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

Stufe 6: Herstellung von N^@4-£3-»(N<^-ßenzoyl~L-phenyl~ alanylthio)~2~D-methylpropanoyl3~L-prolin~t-butylester

Diese Verbindung wurde durch Umsetzen von Benzoylchlorid mit der äquimolaren Menge der gemäß Stufe 5 hergestellten Verbindung in einem NaHCO₃ enthaltenden Gemisch aus Äthylacetat, und Wasser hergestellt.

Stufe 7: Herstellung von N^ alanylthio)-2~D-methylpropanoylJ-L~prol±n

Diese Verbindung wurde durch Abspalten der t-Butylestergruppe aus der gemäß Stufe 6 erhaltenen Verbindung nach der im Abschnitt I, Stufe 6 (A) (ii), beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

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AP C 07 C/228 170/8 - 88 - 58 934/18

Stufe 1: Herstellung von 2«Methyl-propenoyl~L**prolin«tbutylester

Eine Lösung von 2 rnmol Methacrylsäure und 2 mmol L-Prolint~butylester in DMF wurde bei O C tropfenweise mit einer gekühlten Lösung von 2 mmol DCC in DMF versetzt, worauf das Reaktionsgemisch zunächst 30 Minuten und dann über Nacht bei 4 C gerührt und anschließend vom Reaktionsgemisch der auskristallisierte Dicyclohexylharnstoff abfiltriert und der Filterrückstand mit Äthylacetat gewaschen wurde* Durch Abdsstillieren des Lösungsmittels unter vermindertem Druck vom mit der Waschflüssigkeit vereinigten FiItrat und Umkristallisieren des hierbei erhaltenen Rückstandes aus einem Gemisch aus Benzol und Hexan wurde die genannte Verbindung erhalten«

Stufe 2: Herstellung von N^-Ddz-L-thiophenylalanin

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt XIX, Stufe l_t beschriebenen Arbeitsweise hergestellte

Stufe 3: Herstellung von N^Ä-f3~(N*-Ddz-L-phenylalanyl-· thio)~2~methylpropanoyl J-L-prolin-t-butylester

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I_t Stufe 4_t beschriebenen Arbeitsweise dadurch hergestellt, daß die gemäß Stufe 2 hergestellte Verbindung statt des Benzoyl-L^thiophenylalanins und die gemäß Stufe 1 hergestellte Verbindung statt äer Methacrylsäure als Ausgangsstoff eingesetzt wurde«

1/0 8 2.9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 89 - 58 934/18

Stufe 4: Herstellung von Ne^-CS-(L-phenylalanylthio)~2-methylpropanoylJ-L-prolin-t~butylester

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt XV, Stufe 4/ beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

Stufe 5: Herstellung von alanylthio)~2~methylpropanoylJ~L~prolin-t«butylester

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt XIX* Stufe 6, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt»

Stufe 6: Herstellung von N⁶* -./3-(N⁰* —Benzoyl~L~phenyl~ alanylthio)~2~methylpropanoylJ~L~prolin

Diese Verbindung wurde aus der gemäß Stufe 5 hergestellten Verbindung durch Abspalten der t-Butylestergruppe nach der im Abschnitt I₁ Stufe 6 (A) (ii), beschriebenen Arbeitsweise hergestellt«

Stufe 7: Herstellung von Ν^«£3~(Ν^ -Benzoyl-L~phenyl« alanylthio)~2~D~methylpropanoyl3~L~prolin

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt X_# Stufe 2y beschriebenen Arbeitsweise hergestellt« fr

XVI.

Stufe 1: Herstellung von 3*-Acetylthio~2<-niethylpropanoyl« L-prolin-t'-butylester

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der Arbeitsweise gemäß Abschnitt XX.. Stufe 1, statt der

7 7 R I 7 U Ö .2.9.1981

^* AP C 07 C/223 170/8

' - 90 - 58 934/18

Methacrylsäure 3-Acetylthio~2<~methylpropionsäure eingesetzt wurde*

Stufe 2ί Herstellung von 3-Mercapto-»2-methylpropanoyl~L·» prolin~t«butylester

Eine Lösung der gemäß Stufe 1 hergestellten Verbindung in einem Gemisch aus Methanol und konzentriertem Ammoniak wurde eine Stunde nach ihrer Herstellung mit Wasser verdünnt und filtriert, worauf das Filtrat mit ftthylacetat extrahiert und nach dem Ansäuern mit konzentrierter Salzsäure und dem Sättigen mit NaCl 2ma! mit Äthylacetat extrahiert wurde* Die zuletzt erhaltenen Äthylacetatextrakte wurden mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und lieferten beim Eindampfen zur Trockne die genannte Verbindung«

Stufe 3: Herstellung von 3~Mercapto-=2~D».methylpropanoyl~ L-»prolin~t-butylester

Die gemäß Stufe 2 hergestellte Verbindung wurde durch Flüssigchromatographie oder durch Herstellung eines Metallchelat-Komplexes hergestellt«

Stufe 4: Herstellung von N^-fs-CN^ alanylthio)«2»D~methylpropanoyl3-L~prolin-t~butylester

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß die gemäß Stufe 3 erhaltene Verbindung statt der 3~Mercapto~2-methylpropionsäure bei der im Abschnitt XI₄, Stufe 3_r beschriebenen Arbeitsweise als Ausgangsstoff eingesetzt wurde,

2 R 1 7 O B 2.9.1981

. Q I / V W AP C 07 C/228 170/8

- 91 - 58 934/18

Stufe 5: Herstellung von N^-|'3~(N^βäί-ßenzoyl-.L~phenylalanylΐhio)-2-D~methylpropanoylJ-L-·pro3.in

Diese Verbindung wurde durch Abspalten der t-Butylester« gruppe aus der gemäß Stufe 4 erhaltenen Verbindung nach der im Abschnitt I, Stufe 6 (A) (ii), beschriebenen Arbeitsweise hergestellt,

XVII _#

Bei dieser Arbeitsweise wurde in der für die Peptidsynthese üblichen Festphasentechnologie gearbeitet, die in Advan» Enzymol, 32, 221 (1969) allgemein beschrieben ist»

Stufe 1: Kuppeln von L-Pro an ein Festphasenharz

Nach üblichen Arbeitsmethoden wurde eine Lösung von N^- Boc~L-Pro in Äthylacetat in Anwesenheit von Diisopropyläthylamin an ein 3~Nitro-4~brommethylbenzylamidgruppen enthaltendes Festphasenharz gekuppelt, worauf überschüssiges N^-Boc«L-Pro durch aufeinanderfolgendes Waschen mit Äthylacetat» Methanol und Dichlorrnethan ent« fernt wurde. Das N^-Boc-L-Pro gebunden enthaltende Harz wunsi de sodann mit einer 25%igen Lösung von TFA in pro ml 1 mg · Indol enthaltendem Dichlormethan versetzt, womit die als Schutzgruppen vorliegenden Boc-Gruppen abgespalten wurden» Das Harz wurde sodann mit Dichlormethan gewaschen«

Stufe 2: Kuppeln von 3-(N*^-Benzoyl-L-phenylalanylthio)-2-D-methylpropionsäure an das gemäß Stufe 1 erhaltene Produkt

Eine Lösung von 3~(N^fe4-Benzoyl-L-phenylalanylthio)~2-D-

/ £ y j / y Q 2.9.1981

AP C 07 C/228170/8 - 92 - 58 934/18

rnethylpropionsäure und DCC in einem zu gleichen Volumsteilen aus DMF und Dichlormethan bestehenden Lösungsmittelgemisch wurde mit dem gemäß Stufe 1 erhaltenen Harz vermischt _t womit 3~(N^~Benzoyl-L-phenylalanylthio)~2~D» methylpropionsäure an den Prolinrest gekuppelt und ein

L-prolinrest an die o«-Nitrobenzylgruppen des Harzes ge» bunden enthaltendes Produkt erhalten wurde» Nicht umgesetzte Ausgangsstoffe wurden sodann aus dem H_arz durch aufeinanderfolgendes Waschen desselben mit Äthanol und Dichlormethan entfernt« Das erhaltene Produkt wurde in einem trockenen Stickstoffstrom getrocknet*

Stufe 3: Abspalten des N^(!si»/3~(N^eC-Benzoyl»L~phenylalanyl thio)-2-D-methylpropanoylJ-L"prolins vom Harz

Das gemäß Stufe 2 erhaltene Produkt wurde in Methanol nach den Angaben in O_e Arn, Chem« Soc« 97, 1575 (1975) mit Licht der Wellenlänge 350 nra bestrahlt, worauf die genannte Verbindung aus dem Harz mittels Äthylacetat heraus gewaschen und von der Waschflüssigkeit das Lösungsmittel mittels eines rotierenden Verdampfers abgedampft wurde. Auf diese Weise wurde die genannte Verbindung erhalten»

XVIII» Stufe 1: Kuppeln von L-Pro an ein Festphasenharz

L-Pro wurde nach der im Abschnitt XXII, Stufe l_a angegebenen Arbeitsweise an ein Festphasenharz gekuppelt»

228170

^ AP C 07 C/228 170/8

- 93 - 58 934/18

Stufe 2: Kuppeln von 3-Mercapto-2~methylpropionsäure an das gemäß Stufe 1 erhaltene Produkt

Wenn bei der. im Abschnitt XXII, Stufe 2_f beschriebenen Arbeitsweise 3-Cbo-2-methylpropionsäure statt der 3-(N^- Benzoyl-L~phenylalanylthio)~2-D=methylpropionsäure einge-.setzt wurde, wurde diese Verbindung an das an das Harz gebundene L-Pro gekuppelt« Durch Vermischen des erhaltenen Produktes mit einer Lösung von TFA wurde die Cbo-Gruppe abgespalten, worauf das Harz aufeinanderfolgend mit Äthanol und Dichlormethan gewaschen wurde*

Stufe 3: Κμρρείη von L-Phe an das gemäß Stufe 2 erhaltene Produkt

Eine Lösung von N^-Boc-L-Phe und DCC in einem zu gleichen Volumsteilen aus DMF und Dichlormethan bestehenden Lösungsmittelgemisch wurde mit dem gemäß Stufe 2 erhaltenen Harz vermischt, womit N^-Boc-L-Phe an die Mercaptogruppe der an das Harz gebundenen Verbindung gekuppelt wurde« Überschüssige Reaktionsteilnehmer wurden sodann aus dem Harz mit Äthanol und anschließend mit Dichlormethan herausgewaschen,, Eine 25%ige Lösung von TFA in pro ml 1 mg Indol enthaltendem Dichlormethan wurde sodann mit dem Harz vermischt,' um die als Schutzgruppen vorliegenden Boc-Gruppen abzuspalten und hierbei ein N«^~(3~L~Phenylalanylthior2~ methylpropanoyl)~L-prolin gebunden enthaltendes Harz zu erhalten» Überschüssige TFA wurde sodann aus dem Harz mit Dichlormethan herausgewaschen»

2_β9_β1981

AP C 07 C/228 170/8 94 - 58 934/18

Stufe 4: Kuppeln des Benzoylrestes an das gemäß Stufe 3 erhaltene Produkt

Eine Lösung von Benzoylchlorid in 1 Äquivalent an TFA enthaltendem DMF wurde mit dem gemäß Stufe 3 erhaltenen Harz vermischt, womit die ßenzoylgruppe an die Aminogruppe des Phe gekuppelt wurde« Beim Herauswaschen überschüssiger Reaktionsteilnehmer aus dem Harz mit Äthanol und Dichlor» methan wurde ein N^~£3-(N^<^~.B8nzoyl~L~phenylalanylthio)«-2·» methylpropanoyl3~L»prolinreste gebunden enthaltendes Harz erhalten»

Stufe 5: Abspalten des N^-Zs-CN^ alanylthio)-2~methylpropanoylJ-L~prolins vom Harz

Diese Verbindung wurde vom Harz nach der im Abschnitt XXII, Stufe 3, beschriebenen Arbeitsweise abgespalten«

Stufe 6: Herstellung von N^-fs-Benzoyl-L-phenylalanylthio) -2-D-methylpropanoylJ-L-prolin durch Aufspalten des entsprechenden Isomerengemisches

Diese Verbindung wurde im wesentlichen nach der im Abschnitt Xg Stufe 2_f beschriebenen Arbeitsweise erhalten«

XIX« Stufe 1: Herstellung von L~Thiophenylalanin_eHydrochlorid

L~Tbiophenylalanin=sphenylester.Hydrochlorid wurde im wesentlichen nach der in Liebigs Ann« Chem« 576_# 104 (1952) beschriebenen Weise hergestellt«

H 2_#9«1981

AP C 07 C/228 170/8 - 95 - 58 934/18

Die genannte Verbindung wurde im wesentlichen nach der in Chem« Ber% 87, 1093 (1954) und Naturwissenschaften 40, (1953) beschriebenen Arbeitsweise hergestellt«

Stufe 2: Herstellung von 3~(L-Phenylalanylthio)~2~rnethyl~ propionsäure.Hydrochlorid

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt _t daß bei der im Abschnitt I, Stufe 4, beschriebenen Arbeitsweise L-Thiophenylalanin«Hydrochlorid statt des N-Benzoyl-L-thiophenylalanins als Ausgangsstoff eingesetzt wurde,

Stufe 3: Herstellung von 3~L-Phenylalanylthio~2-D~methyl~ propionsäure durch Aufspalten des entsprechenden Isomerengemisches

Die gemäß Stufe 2 hergestellte Verbindung wurde nach Abschnitt I₁ Stufe 5, oder durch Ionenaustauschchromatographie in die optischen Isomeren aufgespalten«,

Stufe 4: Herstellung von S-iN^-Benzoyl-L-phenylalanylthio) -2~D-methyIpropionsäure

Eine kalte Lösung von 10 mmol der gemäß Stufe 3 hergestellten Verbindung und 10 mmol NaHCO, in THF und Wasser wurde mit einer Lösung von 10 mmol des N-Succinimidylesters der Benzoesäure versetzt, worauf das erhaltene Reaktionsgemisch über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann bei 35 ⁰C mittels eines rotierenden Verdampfers vom THF ,befreit, das als Rückstand erhaltene Gemisch mit Wasser versetzt und mittels festem NaHCO auf einen pH-Wert von eingestellt, die hierbei erhaltene wäßrige Phase mit Äthyl-

P. 2.9.1981

U AP C 07 C/228 170/8

«- 96 - ' . 58 934/18

acetat extrahiert und nach dem Kühlen in einem Eisbad mittels ln~HCl in Anwesenheit von Äthylacetat auf einen pH-Wert von 2 angesäuert, die abgetrennte organische Phase 2mal mit kaltem Wasser und dann 2mal mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO. und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit und der hierbei erhaltene Rückstand aus einem Gemisch aus Äther und Hexan umkristallisiert wurde«. Auf diese Weise wurde die genannte Verbindung erhalten«,

Stufe 5: Herstellung von N^-^S-CN^-Benzoyl-L thio)-2-D-methylJ ~L-prolin

Diese. Verbindung wurde nach den Angaben im Abschnitt Stufe 6 (A), hergestellt«

Stufe 1: Herstellung von 3«(N^e*«Benzoyl~L~phenylalanyl~ thio)-2-D«methylpropionsäure

Eine in einem Eisbad gekühlte Lösung von 15 rnmol 3~Brom~2 methylpropionsäure in ln«Natronlauge wurde mit einem Gemisch aus 15 mmol N^-Benzoyl-L-thiophenylalanin,, KpCO und Wasser versetzt, worauf das erhaltene Gemisch über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und nach,dem Ansäuern mit konzentrierter Salzsäure mit Äthylacetat extrahiert, äer erhaltene Extrakt mit Wasser gewaschen, getrocknet und zur Trockne eingedampft und der erhaltene Rückstand nach der im Abschnitt 1, Stufe 5„ beschriebenen Arbeitsweise in die optischen Isomeren aufgespalten wurde, womit

7 0 8 2.9.1981

AP C 07 C/223 170/8 - 97 - 58 934/18

die genannte Verbindung erhalten wurde« Andererseits kann als Ausgangsstoff auch 3~BrOm~2~D~methylpropionsäure eingesetzt werden und damit die Notwendigkeit« ein Isomerengemisch aufspalten zu müssen, entfallen.

Stufe 2: Herstellung von N **"~[ζ-(Ν<£ ~ßenzoyl»L»phenylalanyl~ .thio)-2»D~rnethylpropanoy.ll-L~prolin

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt T_e Stufe 6 (A)_f beschriebenen Arbeitsweise hergestellt*

XVT

Stufe 1: Herstellung von 3~Benzyloxycarbonylthio~2~methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt I₁ Stufe 4, beschriebenen Arbeitsweise Benzyl-tnioformat statt des N^-ßenzoyl-L-thiophenylalanins einge~ setzt wurde*

Stufe 2: Herstellung von 3~Benzyloxycarbonylthio~2»"D~ methylpropionsäure durch Aufspalten des entsprechenden Isomerengemisches

Diese Verbindung wurde durch Aufspalten des gemäß Stufe 1 erhaltenen Isomerengemisches durch Kristallisieren eines Salzes oder durch Flüssigchromatographie hergestellt.

Stufe 3: Herstellung von N^-fs-iBenzyloxycarbonylthio)-2 D-methylpropanoyl|~L-prolin«t-butylester

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei derira Abschnitt I, Stufe 6 (A) (i),

2,9_β1981

AP C 07 C/228 170/8 98 - ' ' 58 934/18

beschriebenen Arbeitsweise die gemäß Stufe 2 hergestellte Verbindung statt der 3-(N^~Benzoyl«L~phenyl» alanylthio)~2~D~methylpropionsäure als Ausgangsstoff eingesetzt wurde«

Stufe 4: Herstellung von Nⁱ^-(3»Mercapto->2«D~methyl« ρropanoyl;»L~prolin

Diese Verbindung wurde dadurch hergestelltν daß die gemäß Stufe 3 hergestellte Verbindung in Anisol suspendiert und in Anwesenheit von Essigsäure bei Raumtemperatur unter Rühren 0,5 Stunden mit HBr umgesetzt, das erhaltene Gemisch mit Äthyläther versetzt und das erhaltene Gemisch eine Stunde auf O °C gehalten, der hierbei erhaltene Nieder-» schlag abfiltriert, mehrmals mit wasserfreiem Äther gewaschen und dann in einem Vakuumexsikkator über NaOH-Plätzchen und P_o0_ getrocknet wurde.

Stufe 5: Herstellung von Ν^-£3~Ν«^~( Benzoyl~L-phenyl™ alanylthio)-2«D~methylpropanoyl3«L-prolin

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt XI, Stufe 3, beschriebenen Arbeitsweise die gemäß Stufe 4 erhaltene Verbindung statt der 3-Mercapto-2-methylpropionsäure als Ausgangsstoff eingesetzt wurde«.

XXII.

Stufe 1: Herstellung von .3-L-Pheny!alanylthio-2~methylpropionsäure

N ^-Boc-L-Phe wurde unter Verwendung der Mischanhydridmethode nach der in D_e Am* ehem. Soc„ 74, 4725 (1952) be-

228170

M 2.9,1931

AP C 07 C/228 170/8 - 99 - 58 934/18

schriebenen Arbeitsweise mit der äquimolaren Menge an H₂S zum N^~Soc~L»thiophenylalanin umgesetzt, worauf die als Schutzgruppe vorliegende Boc-Gruppe nach der im Abschnitt I, Stufe 2 (i), beschriebenen Arbeitsweise abgespalten und anschließend die TFA und das Anisol vom Reaktionsgemisch vollständig abgetrieben wurden* Sodann wurde das erhaltene L-Thiophenylalanin bei der im Abschnitt I, Stufe 4_f beschriebenen Arbeitsweise statt des dort eingesetzten N-=Benzoyl~L~thiop<ehenylalanins als Ausgangsstoff eingesetzt und hierbei die genannte Verbindung erhalten,,

Stufe 2: Herstellung von 3~(N®^i:~Benzoyl~L.-"phenylalanylthio)~2-methylpropionsäure

Eine unter kräftigem Rühren hergestellte Suspension von 2 mmol der gemäß Stufe 1 hergestellten Verbindung in einem im Volumenverhältnis von 7 : 3 aus THF und Wasser bestehenden und 4 mmol NaHCO- enthaltenden Lösungsmittelgemisch wurde bei Raumtemperatur mit 2 mmol Benzoylchlorid versetzt, worauf das erhaltene Gemisch eine Stunde kräftig gerührt und dann mit Äthylacetat versetzt^ der pH~Wert des erhaltenen Gemisches mit In-HCl bei O ⁰C auf 2 einge« stellt, die hierbei entstandene organische Phase abgetrennt, mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über MgSO und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit und der hierbei erhaltene Rückstand mittels eines Gemisches aus Benzol und n~Hexan zur Kristallisation gebracht und anschließend aus dem gleichen Lösungsmittelgemisch umkristallisiert wurde« Hierbei wurde die genannte Verbindung in Form von weißen Kristallen erhalten*

M 2.9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 100 ~ 58 934/18

Stufe 3: Herstellung von 3»(N^»Benzoyl~L~phenylalanyi~ thio)~2~D~methylpropionsäure durch Aufspalten des entsprechenden Isomerengemisches

Die genannte Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, Stufe 5_t beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

Stufe 4: Herstellung von N^föi~£3~(N^<^~Benzoyl~L-.phenyl~ alanylthio)~2-D«=methylpropanoyl]|-L-prolin

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I, Stufe (A), beschriebenen Arbeitsweise hergestellt*

XXIII.

Stufe 1: Herstellung von 3-Acetylthio-2~methylpropionsäure-o-nitrobenzylester

Eine Lösung von 10 mmol o-Nitrobenzylalkohol in 2~Fluor« lV3,5-trinitrobenzol (FTNB) wurde bei Raumtemperatur unter Rühren mit einer Lösung von 10 mmol 3~Acetylthio~2~methylpropionsäure in FTNB versetzt, worauf das Reaktionsgemisch l_f5 Stunden gerührt und dann mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit wurde, womit die gewünschte Verbindung erhalten wurde_e

Stufe 2: Herstellung von 3~Acetylthio~2~D~methylpropion~ säure-o-nitrobenzylester durch Aufspalten des entsprechenden Isomerengemisches

Diese Verbindung wurde aus der gemäß Stufe 1 erhaltenen Verbindung durch Flüssigchromatographie hergestellt, womit die Isomeren voneinander getrennt wurden»

g 2.9.1981

^ AP C 07 C/228 170/8

~ 101 - 58 934/18

Stufe 3: Herstellung von S-Acetylthio-^-D-methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde aus der gemäß Stufe 2 erhaltenen Verbindung durch Bestrahlen mit Licht der Wellenlänge 350 nm in der in D„ Atn_e Chem_e Soc, 97_t 1575 (1975) beschriebenen Weise hergestellt«

Stufe 4: Herstellung von N^~(3°-Acetylthio-2-D-methyl~ propanoyl)»L-prolin^t-butylester

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt I/ Stufe 6 (A) (i)_f beschriebenen Arbeits~ weise die gemäß Stufe 3 hergestellte Verbindung statt der 3»(N ^-Benzoyl-L-phenylalanylthio)~2~D~methylpropionsäure als Ausgangsstoff eingesetzt wurde.

Stufe 5: Herstellung von N^ea-(3-Mercapto~2-D-.meth^,propanoyl) ~L»prolin-t~butylester

Die gemäß Stufe 4 hergestellte Verbindung wurde in einem Gemisch aus konzentriertem Ammoniak, Methanol und Anisol gelöst, worauf eine Stunde später das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgedampft und der hierbei erhaltene Rückstand aus einem Gemisch aus Benzol und Hexan,umkristallisiert wurde« Auf diese Weise wurde die genannte Verbindung erhalten.

Stufe 6: Herstellung von alanylthio)-2-D-methylpropanoylJ ~L«prolin~t~butylester

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der

8 1 / V O . 2.9.1981-

AP C 07 C/228 170/8 — 102 - 58 934/13

im Abschnitt XI, Stufe 3, beschriebenen Arbeitsweise die gemäß Stufe 5 hergestellte Verbindung statt des 3-Nercapto 2~D~methylpropanoyl-L~prolins als Ausgangsstoff eingesetzt wurde«, .

Stufe 7: Herstellung von N^ -fs-CN^ alanylthio)-2~D~methylpropanoyl3-L«prolin

Durch Abspalten der als Schutzgruppe vorliegenden t-Butylestergruppe aus der gemäß Stufe 6 hergestellten Verbindung nach der im Abschnitt I₁ Stufe 5 (A) (ii), beschriebenen Arbeitsweise wurde die genannte Verbindung erhalten,

XXIV,

Stufe 1: Herstellung von 3-Amino~2-D-nethylpropionsäure durch Aufspalten des entsprechenden Isomerengemisches

3~Amino-2-methylpropionsäure wurde nach der in 3« Biol* Chera« 235, 3283 (1961) beschriebenen Arbeitsweise in die etsprechenden optischen Isomeren aufgespalten»

Stufe 2: Herstellung von 3«Brom~2=D»methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß eine auf -5 C gekühlte Lösung der gemäß Stufe 1 erhaltenen Verbindung in Wasser mit wenig NaNO₂ und 48/oiger wäßriger Bromwasserstoff säure versetzt, das erhaltene Gemisch zunächst 30 Minuten gerührt und dann langsam auf Raumtemperatur erwärmt und anschließend mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit wurde«,

17 O 8 2,9,1981

AP C 07 C/228 170/8 - 103 - 58 934/18

Stufe 3: Herstellung von S-iN^-Banzoyl-L-phenylalanylthio) -2-D-methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt XXV, Stufe 1, beschriebenen Methode hergestellt.

Stufe 4: Herstellung von N^-/*3»(N^-Ben2oyl~L-phenylalanylthio)-2«D-methylpropanoylJ-L-prolin

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt I₄ Stufe 6 (A), beschriebenen Arbeitsweise hergestellt»

XXV.

Stufe 1: Herstellung von 3~Amino-2~D~rnethylpropionsäure durch Aufspalten des entsprechenden Isomerengemisches

Zwecks Herstellung dieser Verbindung wurde 3-Amino-2-methylpropionsäure nach der in 0» Biol, Chem* 235, 3283 (1961) beschriebenen Methode in die optischen Isomeren aufgespalten.

Stufe 2: Herstellung von 3»Brom-2~D~methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt XXIX, Stufe 2, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt.

Stufe·3: Herstellung von 3-Benzoylthio~2-D-methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt XXV, Stufe 1, beschriebenen Arbeitsweise Thiobenzoesäure statt des N~Benzoyl-L~thiophenylalanins als Ausgangsstoff eingesetzt wurde*

Q 2.9.19Sl

AP C 07 C/228 170/3 - 104 - ' . 58 934/18

Stufe 4: Herstellung von 3~Mercapto~2~D~methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde nach der.im Abschnitt XI, Stufe 2, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt«,

Stufe 5t Herstellung von 3-(N^-ßenzoyl-L-phenylalanylthio) „2-D-methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt XI, Stufe 3, beschriebenen Arbeitsweise unter Verwendung der gemäß Stufe 4 erhaltenen Verbindung als einen der Reaktiqnsteilnehmer hergestellt*

Stufe 6: Herstellung von N^-/3-(N*⁴-Benzoyl-L-phenylalanylthio )-2«D«aiethylpropanoyl3~L~prol in

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt XI, Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt*

"XXVI*

Stufe 1: Herstellung von 3-Benzoylthio~2»D-methylpropionsäure~t-butylester

Durch eine Lösung von 25 mmol 3~ßenzoylthio~2-»D-methyl-» propionsäure in 0,5 ml konzentrierter Schwefelsäure enthaltendem Dichlormet.han wurde' 60 Minuten Isobutylen hindurchgeleitetj worauf das Reaktionsgefäß verschlossen und die darin befindliche Lösung 16 Stunden gerührt wurde« Durch Extrahieren des Reaktionsgemisches mit Äther und Abdampfen des Lösungsmittels mittels eines rotierenden Verdampfers im Hochvakuum wurde die gewünschte Verbindung erhalten»

I 2,9_β1981

AP C 07 C/228 170/8 105 - 58 934/18

Stufe 2: Herstellung von 3-Mercapto~2~D-.methylpropionsäuret-butylester

Aus einer in Stickstoffatmosphäre hergestellten Lösung der gemäß Stufe 1 hergestellten Verbindung in methanolischem Ammoniak wurde eine Stunde nach Herstellung der Lösung das Lösungsmittel abgedampft, worauf der erhaltene Rückstand in Äther gelöst, die erhaltene Lösung in Eis gekühlt, mit 0,In-HCl und mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO. und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit und der erhaltene Rückstand im Vakuum destilliert wurde« Auf diese Weise wurde die genannte Verbindung erhalten*

Stufe 3: Herstellung von 3-(N^~Benzoyl~L~phenylalanylthio) •5f2~D-methväpropionsäure~t-butyiester

(A) (i) Herstellung des aktiven Esters:

Eine in einem Gemisch aus Eis, Trockeneis und Methanol auf -20 ⁰C gekühlte Lösung von 25 mmol des nach den Angaben von Carter et al_ei in O_e Biol, Chem«, 138, 627 (194I)₁ hergestellten N^-ßenzoyl-L-Phe wurde mit 25 mmol N~Äthyl~ morpholin und anschließend mit 25 mmol Isobutylchlorformat versetzt, worauf das erhaltene Gemisch bei «15 ⁰C mehrere Minuten gerührt und dann mit 50 mmol N-Hydroxysuccinimid versetzt und das erhaltene Reaktionsgernisch bei -15 ⁰C 1,5 Stunden gerührt wurde.

22 8 I / υ' 0. 2.9.1981

ΛΡ C 07 C/228 170/8 ~ 106 - 58 934/18

(ii) Aktivestermethode:

Das eben erhaltene Reaktionsgemisch wurde langsam auf Raumtemperatur erwärmt und dann mit 25 mmol des gemäß Stufe hergestellten 3-Me reap t o~2~D~me t hylp rop ion sä u re« t «»butyl es te rs versetzt, worauf das nunmehr vorliegende Gemisch bis zur laut Dünnschichtchrornatogramrn abgeschlossenen Umsetzung gerührt und dann mit Äthylacetat versetzt, das verdünnte Reaktionsgemisch auf einem Eisbad gekühlt und mit In-HCl auf einen pH-Wert von 3 angesäuert, die abgetrennte organische Phase mehrmals mit kaltem Wasser und kalter gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO und dem Filtrieren mittels eines · rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit und der hierbei erhaltene Rückstand aus einem Gemisch aus Benzol und Petroläther umkristallisiert wurde, womit die gewünschte Verbindung erhalten wurde*

(B) Eine Lösung von 25 mmol N^-Benzoyl-L-Phe in Tetrahydrofuran wurde unter Rühren mit 25,1 mmol EDDO versetzt, worauf das erhaltene:.Gemisch mit 25 mmol 3»Mercapto~2-D-methylpropionsäure~t«butylester versetzt und das erhaltene Gemisch bis laut Dünnschichtchromatografie abgeschlossener Umsetzung gerührt wurde» Das Reaktionsgemisch wurde sodann mittels eines rotierenden Verdampfers abgedampft, worauf der erhaltene Rückstand aus einem Gemisch aus Benzol und Petroläther umkristallisiert wurde«

Stufe 4: Herstellung von 3^(N^~Benzoyl«L~phenylalanylthio) ~2«D-methylpropionsäure

Die gemäß Stufe 3 hergestellte Verbindung wurde in 4 ml

AP C 07 C/228 170/3 - 107 - 58 934/18

Anisol suspendiert, worauf der Suspension 8 ml TFA zugesetzt und das erhaltene Gemisch 1,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt wurde» Durch Abdampfen der TFA und des Anisols vom erhaltenen Gemisch mittels eines rotierenden Verdampfers und dann im Hochvakuum über NaOH und P~O wurde die gewünschte Verbindung erhalten.

Stufe 5: Herstellung von N^<^~.£3~(Nⁱ^~Benzoyl~L--pheFiyl~ alanylthio)-2«D-methylpropanoylJ-L-prolin

Eine Lösung von 25 mmol der gemäß Stufe 4 erhaltenen Verbindung und 25 mmol N-Hydroxysuccinimid in DMF wurde bei O ⁰C tropfenweise mit einer kalten Lösung von 25 mmol DCC in Dimethylformamid (DMF) versetzt, worauf das Reaktionsgemisch 30 Minuten bei O ⁰C und anschließend über Nacht bei 4 ⁰C gerührt, dann vom Reaktionsgemisch der auskristallisierte Dicyclohexylharnstoff abfiltriert und mit Äthylacetat gewaschen, das mit der Waschflüssigkeit vereinigte Filtrat unter vermindertem Druck vom Lösungsmittel befreit und der erhaltene Rückstand aus einem Gemisch aus Benzol und Hexan umkristallisiert wurde* Sodann wurde eine kalte Lösung von 25 mmol L-Pro und 25 mmol NaHCO in einem Gemisch aus THF und Wasser mit einer kalten Lösung der erhaltenen Kristalle in THF versetzt, worauf das Reaktionsgemisch bei Raumtemperatur über Nacht gerührt, anschließend vom Reaktionsgemisch das THF bei 35 C mittels eines rotierenden Verdampfers abgedampft, der hierbei erhaltene Rückstand mit Wasser versetzt, das erhaltene Gemisch mittels festem NaHCO- auf einen pH-Wert von 9 eingestellt, die erhaltene wäßrige Phase mit Äthylacetat extrahiert, dann in einem Eisbad gekühlt und anschließend in Anwesenheit von Äthylacetat mittels In-HCl auf einen pH-Wert von 2 ange-

/ / Q I / U Ö 2_#9·1981

*°" AP C 07 C/228 170/8

. - 108 - 58 934/18

säuert, die vom erhaltenen Gemisch abgetrennte organische Phase 2mal mit kaltem Wasser und 2mal mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO. und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit und der hierbei erhaltene Rückstand in einem Gemisch aus Äther und Hexan umkristallisiert wurde«, Hierbei wurde die genannte Ver-» bindung erhalten«

(B) (i) Eine Lösung von 25 mmol der gemäß Stufe 4 erhaltenen Verbindung in Äthylacetat wurde in einem Gemisch aus Eis und Aceton auf O C gekühlt und dann unter Rühren innerhalb 5 Minuten bei O C mit einer Lösung von 25 mmol DCC in.Äthylacetat versetzt _s worauf die erhaltene Lösung mit einer Lösung von 25 mmol L-Prolin~t~butylester in Äthylacetat versetzt,; das erhaltene Reaktionsgemisch über Nacht bei 4 ⁰C gerührt und dann mit 10 ml Äthylacetat verdünnt, das verdünnte Gemisch filtriert und der hierbei verbliebene Filterrückstand mit 20 ml Äthylacetat gewaschen^ das mit der Waschflüssigkeit vereinigte FiItrat in einem Kühlschrank gekühlt, 3mal mit gesättigter Kochsalzlösungj Imal mit kalter 0,In-¹NaHCO -Lösung und 3mal mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über .wasserfreiem MgSO. und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers im Hochvakuum vorn Lösungs~ mittel befreit und der hierbei erhaltene weiße Rückstand weiterverarbeitet wurde«

(ii) Der erhaltene Rückstand wurde in 4 ml Anisol bei Raumtemperatur und unter Rühren während 1,5 Stunden mit 8 ml TFA umgesetzt _s worauf vom Reaktionsgemisch die TFA mittels eines rotierenden Verdampfers-im Hochvakuum abgetrieben,

L L Ό / U © 2.9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - 109 '- 58 934/18

der hierbei erhaltene Rückstand in 1 ml Tetrahydrofuran (THF) gelöst und die erhaltene Lesung chromatographiert wurde» Die die gewünschte Verbindung enthaltenden Fraktionen wurden zur Trockne eingedampft, worauf der erhaltene Rückstand in einer geringen Menge an Isopropanol gelöst und die erhaltene Lösung erneut chromatographiert wurde. Die die gewünschte Verbindung enthaltenden Fraktionen lieferten bei Eindampfen als Rückstand ein Öl, das in THF gelöst wurde, worauf von der erhaltenen Lösung das THF in einem Stickstoffst rom abgedampft wurde» Die gewünschte Verbindung wurde sodann durch Abdampfen restlichen Lösungsmittels mittels eines rotierenden Verdampfers im Hochvakuum erhalten«

XXVII.

Stufe 1: Herstellung von 3~(N«^~Bpoc~L-phenylalanylthio)-2-D-methylpropionsäure-t-butylester

-Bpoc-L-Phe wurde nach den Angaben von Sieber et al„_t in HeIv « Chem. Acta 51, 614 (1968), hergestellt. Der 3-Mercapto-2~D-methylpropionsäure-t~butylester wurde nach der im Abschnitt II, Stufen 1 und 2, beschriebenen Methode hergestellt. Die gewünschte Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei aer im Abschnitt II, Stufe 3 (A), N^-Bpoc-L-Phe statt des N^-Bz-L-Phe als Ausgangsstoff eingesetzt wurde.

Stufe 2: Herstellung des Trifluoracetats des 3~L-Phenyl~ alanylthio)<-2~D~methylpropionsäure~t~butylesters

Die gewünschte Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß

ί 2 8 17 ϋ if ²·⁹·¹⁹⁸¹

AP C 07 C/228 170/8 - 110 ~ 58 934/18

eine Lösung der gemäß Stufe 1 hergestellten Verbindung in 0-,5 % TFA enthaltendem Methylenchlorid 10. Minuten gerührt und dann vom Reaktionsgemisch das Methylenchlorid und "überschüssige TFA mittels eines rotierenden Verdampfers abgedampft wurden«

Stufe 3: Herstellung von 3-(N^-Benzoyl-L-phenylalanylthio) ~2~D~methylpropionsäure-t-«butyle3t6r

Eine unter kräftigem Rühren hergestellte Suspension von 15 mrnol der gemäß Stufe 2 erhaltenen Verbindung in Äthylacetat wurde bei Raumtemperatur mit 15 mmol Benzoylchlorid versetzt, worauf das erhaltene Gemisch tropfenweise mit einer Lösung von 32 mmol NaHCO., in Wasser versetzt, das erhaltene Gemisch weitere 30 Minuten kräftig gerührt, dann in einem Eisbad während 30 Minuten gekühlt und dann mit Äthylacetat verdünnt, das verdünnte Gemisch in einem Eisbad gekühlt und aufeinanderfolgend mit Wasser, In-Zitronensäure und noch mehrmals mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und nach dem Trocknen über wasserfreiem MgSO. und dem Filtrieren mittels eines rotierenden Verdampfers vom Lösungsmittel befreit wurde* Auf diese W_eise wurde die genannte Verbindung erhalten.

Stufe 4: Herstellung von 3-(N^-Benzoyl-L-phenylalanylthio)~2~D~methy!propionsäure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt _e daß aus der gemäß Stufe 3 erhaltenen Verbindung nach der im Abschnitt II, Stufe 4f beschriebenen Arbeitsweise die als Schutzgruppe vorliegende t-Butylgruppe abgespalten wurde»

B 2*9.1981

AP C 07 C/228 170/8 - Ill - 58 934/18

Stufe 5: Herstellung von Ν**~£3~(Ν^|5!4 ~Benzoyl~L-phenyl~ alanylthio)~2-D~methylpropanoyLj~L~prolin

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt II, Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt»

XXVIII₆ Stufe 1: Herstellung von 3~Mercapto~2~D-methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der in Abschnitt II, Stufe 2, beschriebenen Arbeitsweise als Ausgangsstoff 3~Benzoylthio«»2«D~methylpropionsäure statt ihres t-Butylesters eingesetzt wurde»

Stufe 2: Herstellung von 3~(N^e&-Boc~L~phenylalanylthio)~2-D-methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt II, Stufe 3 (A), N^-Boc-L-Phe statt N⁰^-Bz-L-Phe und die gemäß Stufe 1 erhaltene Verbindung statt des 3-Mercapto~2-D«methylpropionsäure~t~butylesters eingesetzt wurde»

Stufe 3: Herstellung des Trifluoracetats der 3-L-Phenyl~ alanylthio-2-D-methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß die in 4 ml Anisol suspendierte und gemäß Stufe 2 erhaltene Verbindung bei Raumtemperatur unter Rühren 1,5 Stunden mit 8 ml TFA umgesetzt und vom erhaltenen Reaktionsgemisch mittels eines rotierenden Verdampfers das Anisol und über-

? 2 8 1 / O 8 - ²·⁹·¹⁹⁸¹

^ ^ν AP C 07 C/228 170/8

~ 112 - 58 934/18

schüssige TFA abgedampft wurde_e

Stufe 4: Herstellung von S-fN^-Benzoyl-L-phenylalanyltKio) „2«D»methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt III, Stufe 3, beschriebenen Arbeitsweise die gemäß Stufe 3 erhaltene Verbindung statt des Trifluoracetats des 3~L~Phenylalanylthio~2-D~methylpropionsäure« t-butylesters eingesetzt wurde_e

Stufe 5: Herstellung von alanylthio)"2~D«methylpropanoyl5~L~prolin

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt II, Stufe 5, beschriebenen Arbeitsweise hergestellt*

XXIX*

Stufe 1: Herstellung v.on 3~(N^«Bpoc~L-phenylalanylthio)~ 2-D-methylpropionsäure

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt III, Stufe 1, beschriebenen Arbeitsweise die gemäß Abschnitt V, Stufe I_x hergestellte 3-Mercapto~2-D~ methylpropionsäure statt ihres t-Butylesters eingesetzt wurde«

Stufe 2: Herstellung des N^<sf~/3~(N^ei-Bpoc~L-phenylalanylthio)~2~D~methylpropanoylJ-L~prolin'-t-butylesters

Eine kalte Lösung von 10 mmol DCC in 10 mmol 1-Hydroxybenzofriazol enthaltendem DMF wurde tropfenweise mit einer

8 2,9.1981

^v AP C 07 C/228 170/8

~ 113 - 58 934/18

Lösung von 10 mmol der gemäß Stufe 1 hergestellten Verbindung und 10 mmol L~Prolin«t~butylester in-DMF versetzt, worauf das Reaktionsgemisch 30 Minuten bei O C und anschließend über Nacht bei 4 ⁰C gerührt, anschließend vom Reaktionsgemisch auskristallisierter Dicyclohexylharnstoff abfiltriert und der Filterrückstand mit Äthylacetat gewaschen, das mit der Waschflüssigkeit vereinigte FiItrat unter vermindertem Druck vom Lösungsmittel befreit und der hierbei erhaltene Rückstand aus einem Gemisch aus Äther und Hexan umkristallisiert wurde* Auf diese Weise wurde die genannte Verbindung erhalten«

Stufe 3: Herstellung des Trifluoracetats des N^-ß-L-Phenylalanylthio«2-D-methylpropanoyl3~L--prolin~t~butyl- esters

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt III, Stufe 2, beschriebenen Arbeitsweise die gemäß Stufe 2 hergestellte Verbindung statt des 3-(N^- Bpoc~L~phenylalanylthio)~2~D~methylpropionsäure~t*-butylesters als Ausgangsstoff eingesetzt wurde«

Stufe 4: Herstellung des N^-£3-(N^-Ben2oyl-L-phenylalanylthio)~2-D-methylpropanoylJ-L~prolin~t-butylesters

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt III, Stufe 3, beschriebenen Arbeitsweise die gemäß Stufe 3 hergestellte Verbindung statt des Trifluor» acetats des 3-L-Phenylalanylthio-2~D-methylpropionsäuret-butylesters eingesetzt wurde.

_{AP c 07} c/228 170/8 114 - 58 934/18

Stufe .5: Herstellung von N ^-^-(N^ alanylthio)-2-D-rnethylpropanoylJ«L~prolin

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt II, Stufe 5 (B) (υ)* beschriebenen Arbeitsweise hergestellt»

Stufe 1: Herstellung von. N^ei>~£3~"(r\!<^~Boc~L-phenylalanyl~ thiö)-2-D-methylpropanoylJ~L-prolin

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt II, Stufe 5 (A), beschriebenen Arbeitsweise nach der im Abschnitt V₁- Stufe 2, beschriebenen Arbeitsweise ·hergestellte 3-(N^-Boc~L-phenylalanylthio)-2-D-methylpropionsäure statt der 3-(N^-Ben2oyl~L-phenyl~ alanylthio)~2~D~methylpropionsäure als Ausgangsstoff eingesetzt wurde«

Stufe 2t Herstellung des Trifluoracetats des phenylalanylthio-2-D-methylpropanoylJ -L«-=prolins

Diese Verbindung wurde nach der im Abschnitt V₁ Stufe 3,-beschriebenen Arbeitsweise hergestellt«

Stufe 3,i Herstellung von alanylthio)-2-D«methylpropanoyl}-L-prolin

Diese Verbindung wurde dadurch hergestellt, daß bei der im Abschnitt III, Stufe 3, -beschriebenen Arbeitsweise die gemäß Stufe 2 erhaltene Verbindung statt des Trifluor acetats des 3-L-phenylalanylthio-2-D~methylpropionsäure~t butylesters eingesetzt wurde«

29 ß 1 7 Π R 2.9,1981

AP C 07 C/228 170/8 - 115 - 58 934/18

Die Erfindung wurde im Zusammenhang mit speziellen Ausführungsfomien beschrieben, jedoch können ohne den Rahmen oer Erfindung zu verlassen, zahlreiche Abänderungen getroffen werden»

Claims (4)

#% Λ Λ H r# ff 0) ο 9 AP C 07 C/228 170/8 - 116 - 58 934/18 Verfahren zum Herstellen einer neuen Verbindung dei~ allgemeinen Formel 0 ii R „ A - S- (cH2)n "CH-C-R2 (I), R- worin R Wasserstoff, t-*ButyloxycarbonyltCyclopentancarbonyl-L-lysyl, Pyro~L-glutamyl-L~lysyl, L~Lysyl, L~Arginyl, Pyro-L-glutamyl, oder R* darstellt und hierbei R* Formyl, Acetyl, Propanoyl, Butanoyl, Phenylacetyl, Phenylpropanoyl/ Benzoyl oder Cyclopentancarbonyl bedeutet, A für Phenylalanyl, Alanylt Tryptophylf Tyrosyl, Glycyl, Isoleucyl, Leucyl, Histidyl oder Valyl steht und die ©4 -Aminogruppe dieser Reste mit dem Rest R in Amidbindung verknüpft ist, R1 Wasserstoff oder Methyl bedeutet, R2 für L-Prolin, L-S^-Dehydroprolin* 0,1--3,4-Dehydroprolin, L-3-Hydroxyprolin, L~4-Hydroxyprolin, L~Thiazolidin-4~carbonsäure oder L-5-Oxo-prolin steht und hierbei die Iminogruppe · · η dieser Reste mit der Gruppe -C- in Imidbindung geknüpft ist und eine säuresensib] gruppe (einer allenfalls vorhandenen freien R„ eine säuresensible Schutzgruppe für eine Amino- 28170 S2e9,1981 AP C 07 C/228 170/8 - 117 - 58 934/18 Aminogruppe eines der oben genannten Reste) bedeutet, R. eine photosensible Schutzgruppe für eine Aminogruppe (eine allenfalls in Resten der oben angegebenen Art vorhandene Aminogruppe) darstellt, η gleich ist O oder 1 und hierbei, falls η gleich ist Ο,, R. Methyl bedeutet und, falls η gleich ist 1 und R. Methyl bedeutet, der Rest -CHp-CH- in D-Konfiguration steht, gekennzeichnet dadurch, daß I (A) eine Verbindung der Formel R-A mit einem Arylthiol oder einem Alkylthiol in Anwesenheit eines Kupplungsreagens umgesetzt wird und hierbeit falls in der herzustellenden Verbindung der allgemeinen Formel (1) R gleich.ist R* und A eine entweder in D-Form oder in L-Form vorliegende Aminosäure ist, in der eingesetzten Verbindung R - A(H) R für R_, steht und der folgende Verfahrensschritt (B) vorgenommen wird, (B) aus der in Stufe (A) erhaltenen Verbindung die von R gebildete Schutzgruppe abgespalten und der erhaltene A- S- aryl» oder -alkylester mit einem den Rest R* aufweisenden Kupplungsreagens umgesetzt wird, (C) die gemäß Stufe (A) oder (B) erhaltene Verbindung mit einem Alkalimetallhydrosulfid oder mit. H2S zu einer Verbindung der Formel R-A-SH umgesetzt wird, (D) die in Stufe (C) erhaltene Verbindung mit Acrylsäure oder mit Methacrylsäure zu einer Verbindung der Formel
1. ?1
   die im Rest -(CHg)-CH- D-Konfiguration besitzende Verbindung abgetrennt wird und

   (D) die gemäß Stufe (B) oder (C) erhaltene Verbindung mit dem Rest R₂ gekuppelt wird oder
2. 2* Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch^ daß durch Wahl entsprechender Ausgangsstoffe eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) hergestellt .wird, in welcher R für ßenzoyl, A für Phenylalanyl, R₁, für Methyl, Rp für L~>Prolin und η für 1 steht,

   3_S Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch* daß beim Arbeiten nach der Ausführungsform IV in Stufe (A) dann* wenn in der herzustellenden Verbindung (I) R für R*. steht und die Aminosäure D-Form oder L-Form .besitzt',

   ^J 2.9.1981

   AP C 07 C/228 170/8 - 143 ~ 58 934/18

   in der Verbindung R-A (R-AH) R für R, steht und die Schutzgruppe R-, von der Verbindung R-A-SH abgespalten wird und die erhaltene Verbindung A-SH (HA-SH) noch vor der Stufe (B) mit einem den Rest R¹ aufweisenden Kupplungsreagens umgesetzt wird»

   * ** 2,9.1981

   AP C 07 C/228 170/8 - 141 - 58 934/18

   2 8 1 7 U Q 2.9.1981

   AP C 07 C/228 170/8 - 137 ~ 58 934/18

   daß XXIII

   (A) eine Verbindung der Formel

   0 R„ O

   I« Il Cl

   H_C - C - S - (CH₀) - CH - C - OH mit o-Nitrobenzyl-

   2 817 0 8 2.9.1981

   AP C 07 C/228 170/8 - 127 - 58 934/18

   ?1

   die im Rest -(CH₂) -CH- D-Konfiguration besitzende

   ab
   Verbindung ^gespalten wird,

   (C) die gemäß Stufe (A) oder (B) erhaltene Verbindung mit dem Rost R₂ gekuppelt wird,

   (D) aus der gemäß Stufe (C) erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe R„ abgespalten wird und

   (E) die gemäß Stufe (D) erhaltene Verbindung mit einem den Rest R aufweisenden Kupplungsreagens umgesetzt wird oder

   daß XII

   (A) eine Verbindung der Formel

   O R. 0

   19 11 ta

   H₃C -C-S- (^CH ₂)_n - CH - C - OH mit. 2-Methylpropen umgesetzt und von der erhaltenen Verbindung die Acetylgruppe abgespalten wird,

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit einer Verbindung der Formel R-A (R- AH) zu einer Verbindung der Formel

   R₁ O ·

   I H

   R ... a - S- (^CH ₂)_n " ^CH ~ ^C "" ^0C^^CH3^3 ^um9^esetzt wird,

   (C) von der gemäß Stufe (B) erhaltenen Verbindung die t-Butylgruppe abgespalten wird, wobei, falls η gleich ist 1 und R. für Methyl steht, der folgende Verfahrensschritt

   (D) durchgeführt wird,

   *) *) O * 7" R 2*9*1981

   L· L· U * "'- "' _Ap _{c 07} Q/228 170/8

   - 128 - 58 934/18

   (D) aus einem gemäß Stufe (C) erhaltenen Isomerengemisch

   die im Rest -(CHp) -.CH - D-Konfiguration besitzende Verbindung abgespalten wird und

   (E) die gemäß Stufe (C) oder (D) erhaltene Verbindung mit dem Rest R₂ gekuppelt wird oder

   daß XIII

   (A) eine Verbindung der Formel

   0 R₁ 0

   HC -C-S- (CH₂) -CH-C- OH mit 2-Methylpropen umgesetzt und von der erhaltenen Verbindung die Acetylgruppe abgespalten wird,

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit einer Verbindung der Formel R-A (R- AH) zu einer Verbindung der Formel

   - R O
   Γ H

   R ~ A ~ S- (CH₀) - CH ~ C - O - C(CH-), mit der Be-.2'n ^v 3 3

   deutung von R^ oder R, für R umgesetzt'wird,

   (C) aus der gemäß Stufe (B) erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe R_v oder R^ abgespalten wird,

   (D) die gemäß Stufe (C) erhaltene Verbindung mit einem den Rest R aufweisenden Kupplungsreagens umgesetzt wird,

   (E) aus der gemäß Stufe (D) erhaltenen Verbindung die t-Butylgruppe abgespalten wird, wobei, falls η gleich

   17 ö 8 2.9.1981

   AP C 07 C/228 170/8 - 129 - 58 934/18

   ist 1 und R₁ für Methyl steht, der folgende Verfahrensschritt (F) durchgeführt

   (F) aus einem gemäß Stufe (E) erhaltenen Isomerengemisch

   die im Rest -(^CH2^n "" ^CH "° ^D~Konfiguration besitzende Verbindung abgetrennt wird und

   (G) die gemäß Stufe (E) oder (F) erhaltene Verbindung mit dem Rest R₂ gekuppelt wird oder

   daß XIV

   (A) eine Verbindung der Formel R - A (R- AH), worin R für R₃ oder R. steht, mit N~Hydroxysuccinimid, p-Nitrophenol, o-Nitrophenol, N-Hydroxybenzotriazol, Pentachlorphenol, Pentafluorphenol oder Ν-Hydroxy-5-norbornen«2,3-dicarboximid umgesetzt und die erhaltene Verbindung mit einem Alkalimetallhydrogensulfid oder mit H₂S zu einer Verbindung der Formel R-A- SH umgesetzt wird,

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit Acrylsäure oder mit Methacrylsäure zu einer Verbindung der Formel

   R₁ O

   r ii

   R-A- S- CH_p - CH-C- OH mit der Bedeutung von

   Wasserstoff oder Methyl für R₁ umgesetzt wird, wobei, falls η gleich ist- 1 und R₁ für Methyl steht, der folgende Verfahrensschritt (C) durchgeführt wird,

   (C) aus einem gemäß Stufe (B) erhaltenen Isomerengemisch

   j U 2_β9_β1981

   AP C 07 C/228 170/8 ~ 130 ~ 58 934/18

   die im Rest -CH^-CH«- D-Konfiguration besitzende Verbindung abgetrennt wird,

   (D) die gemäß Stufe (B) oder (C) erhaltene Verbindung mit Rp gekuppelt wird,

   (E) aus der gemäß Stufe (D) erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe R, oder R_A abgetrennt wird und

   (F) die gemäß Stufe (E) erhaltene Verbindung mit einem den Rest R aufweisenden Kupplungsreagens umgesetzt wird oder

   daß XV .

   (A) durch Kuppeln des Restes R_? an Acrylsäure oder Methacrylsäure eine Verbindung der Formel R₁ O

   = C - C - R₂ hergestellt wird,

   (B) eine Verbindung der Formel R-A (R ~ AH), worin R für R„ oder R^ steht, mit N-Hydroxysuccinimid^ p-Nitrophenol_s o-Nitrophenol, N-Hydroxybenzotriazol, N-Hydroxy-5~norbornen-2j3-dicarboximid_t? Pentachlorphenol oder Pentafluorphenol umgesetzt und die erhaltene Verbindung mit einem Alkalimetallhydrogensulfid oder mit H_?S zu einer Verbindung der Formel R-A- SH umgesetzt wird,

   (C) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit der gemäß Stufe (B) erhaltenen Verbindung umgesetzt wird,

   M 2,9·1981.

   AP C 07 C/228 170/8 - 131 - 58 934/18

   (D) aus der gemäß Stufe (C) erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe R, oder R₄ abgespalten wird,

   (E) die gemäß Stufe (D) erhaltene Verbindung mit einem den Rest R aufweisenden Kupplungsreagens zu einer Ver~ bindung der Formel .

   RO

   t 1 1!

   R-A- S- CH₂ ~ CH - C ~ R₂ mit der Bedeutung von

   Wasserstoff oder Methyl für R-, umgesetzt wird» wobei, falls R₁ für Methyl steht,' der folgende Verfahrensschritt (F) durchgeführt wird und

   (F) aus einem gemäß Stufe (E) erhaltenen Isomerengemisch

   die im Rest -CHg-CH-- D-Konfiguration'besitzende Verbindung abgespalten wird oder

   daß XVI

   (A) der Rest R₂ an eine Verbindung der Formel

   O R„ O . .

   (S ,1 H

   H₃C - C - S - (^CHp)_n -CH-C-OH gekuppelt wird,

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung durch Abspalten der Acetylgruppe in eine Verbindung der Formel

   R₁ O

   HS - (GH₂) - CH - C - R₂ mit der Bedeutung von Wasserstoff oder Methyl für R₁ übergeführt wird, tvobei, falls η gleich ist 1 und R. für Methyl steht, der folgende Verfahrensschritt (C) durchgeführt wird,

   ££ S I / U ö 2.9,1901

   AP C 07 C/228 170/8 - 132 « 58 934/18

   (C) aus einem gemäß Stufe (B) erhaltenen Isomerengemisch

   • r \

   die im Rest -(CHp) -CH- D-Konfiguration besitzende Verbindung abgespalten wird und

   (D) die gemäß Stufe (B) oder (C) erhaltene Verbindung mit einer Verbindung der Formel R-A (R-AH) umgesetzt wird oder

   daß XVIl

   (A) eine Verbindung der Formel R-. - R_? an ein mit dem Rest R₂ reaktionsfähiges Festphasenharz gekuppelt und vom erhaltenen Komplex die Schutzgruppe R abgespalten, wi rd_t

   (B) an den gemäß Stufe (A) erhaltenen Rp~Harz~Komplex eine Verbindung der Formel *

   R₁ O
   R-A- S - (CH₂) - CH - C - OH gekuppelt wird,

   (C) durch Spalten des gemäß Stufe (8) erhaltenen Komplexes eine Verbindung der Formel

   R„ O

   R-A- S - C^CH2^n" ^CH "" ^C " ^R2 ^{mit der Bedeutun}9 ^von Wasserstoff oder Methyl für R₁ hergestellt wird, wobei, falls η gleich ist 1 und R. für Methyl steht, der folgende Verfahrensschritt (D) durchgeführt wird, und

   (D) aus einem gemäß Stufe (C) erhaltenen Gemisch die im

   Rest -(CHp) -CH- D-Konfiguration aufweisende Verbindung abgespalten wird oder

   L· L Ö I / ü 8 2.9.1981

   AP C 07 C/228 170/8 - 133 ~ 58 934/18

   daß XVIII

   (A) eine Verbindung der Formel R, - R„ an ein mit dem Rest R-, reaktionsfähiges Festphasenharz gekuppelt und vom erhaltenen Komplex die Schutzgruppe R, abgespalten wird,

   (B) an den gemäß Stufe (A) erhaltenen R₂-Harz~Komplex eine Verbindung der Formel

   Fi- ?

   Cbo - S -. (CH₂) - CH - C - OH gekuppelt und vom erhaltenen Komplex die Schutzgruppe Cbo abgespalten wird,

   (C) an den gemäß Stufe (B) erhaltenen Komplex eine Verbindung der Formel R, - A (R_ - AH) gekuppelt wird,

   (D) vom gemäß Stufe (C) erhaltenen Komplex die Schutzgruppe R^ abgespalten wird,

   (E) an den gemäß Stufe (D) erhaltenen Komplex ein den Rest R aufweisendes Kupplungsreagens gekuppelt wird,

   (F) vom gemäß Stufe (E) erhaltenen Komplex die Verbindung der Formel .

   R „ a - S- (CH₂) - CH - C - R₂ mit der Bedeutung von

   fr -.; für

   Wasserstoff oder Methyl/R* abgespalten wird, wobei, falls η gleich ist 1 und R^ für Methyl steht, der folgende Verfahrensschritt (G) durchgeführt wird, und

   (G) aus einem gemäß Stufe (F) erhaltenen Isomerengemisch

   ^J _'. " ^V AP C 07 C/228 170/8

   - 134 - 58 934/18

   die im Rest -(CH₂) -CH- D<-Konfigurotion besitzende Vorbindung abgespalten wird oder
   daß XIX .

   (A) eine Verbindung der Formel A-thioester (HA-thioester) mit W_? S zu einer Verbindung der Formel A - SH (HA- SH)

   umgesetzt wird,

   (B) die gernäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit Acrylsäure oder mit Methacrylsäure zu einer Verbindung der Formel

   R₁ 0

   J¹ M

   A-S- CH₂ -CH-C- OH mit der Bedeutung von Wasserstoff oder Methyl für R ' umgesetzt wird, wobei, falls Rv für Methyl steht, der folgende Verfahrensschritt (C) durchgeführt wird,

   (C) aus einem gemäß Stufe (B) erhaltenen Isomerengemisch

   die im Rest -CH₂-CH- D~Konfiguration besitzende Verbindung abgespalten wird,

   (D) die gemäß Stufe (B) oder (C) erhaltene Verbindung mit einem den Rest R aufweisenden Kupplungsreagens umgesetzt wird und

   (E) die gemäß Stufe (D) erhaltene Verbindung mit dem Rest R₂ gekuppelt wird oder

   daß XX

   (A) eins Verbindung der Formel R-A- SH mit einer Ver-

   £ £ Q I / U Ό 2.9.1981"

   AP C 07 C/228 170/8 - 135 - 58 934/18

   R₁ ο ι¹ II

   bindung der Formel X - (CH₂)_n~CH - C - OH mit der Bedeutung von Brom, Chlor oder Ood für X umgesetzt wird,

   (B) durch Kuppeln des Restes R₂ an die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung eine Verbindung der Formel

   RO
   I 1 H

   R - A - S- (CH₂) -CH-C-R₂ mit der Bedeutung von Wasserstoff oder Methyl für R,. hergestellt wird, wobei, falls η gleich ist 1 und R für Methyl steht, der folgende Verfahrensschritt (C) durchgeführt wird und

   (C) aus einem gemäß Stufe (B) erhaltenen Isomerengemisch

   die im Rest -(ChU) - CH - D-Konfiguration besitzende Verbindung abgespalten wird oder
   daß XXI

   (A) eine Verbindung der Formel R^ - SH mit Acrylsäure oder Methacrylsäure zu einer Verbindung der Formel

   R. O

   R-S- CH₂ - CH - C - OH mit der Bedeutung von Wasserstoff oder Methyl für R^. umgesetzt wird, wobei, falls R₁ für Methyl steht, der folgende Verfahrensschritt (B) durchgeführt wird, -

   (B) aus einem gemäß Stufe (A) erhaltenen Isomerengemisch

   die im Rest -CFu - CH - D-Konfiguration besitzende Verbindung abgespalten wird,

   AP C 07 C/228 170/8 ~ 136 - 58 934/18

   (C) an die gemäß Stufe (A) oder (B) erhaltene Verbindung der Rest R_? gekuppelt wird,

   (D) von der gemäß Stufe (C) erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe R-, abgespalten wird und

   (E) die gemäß Stufe (D) erhaltene Verbindung mit einer Verbindung der allgemeinen Formel R - A (R- AH) umgesetzt wird oder

   da P- ^VVTT

   ß XXII

   (A) eins Verbindung der Formel A - SH (HA « SH) mit Acrylsäure oder Methacrylsäure umgesetzt wird/

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit einem den Rest R aufweisenden Kupplungsreagens zu einer Verbindung der allgemeinen Formel

   R, O
   |1 ff

   .R-A- S- CH₀ - ,CH- C - OH mit der Bedeutung von

   Wasserstoff oder Methyl für R₁ umgesetzt wird, wobei, falls R₁ für Methyl stehtV der folgende Verfahrens«= schritt (C) durchgeführt wird,

   (C) aus einem gemäß Stufe (B) erhaltenen Isoraerengeniisch

   die im Rest ~CH_O - CH - D~Konfiguration besitzende Verbindung abgespalten wird und

   (D) an die gemäß Stufe (D) oder (C) erhaltene Verbindung der Rest R₂ gekuppelt wird oder

   2,9*1981 AP C. 07 C/228 170/8 - 126 - 58 934/18

   (A) eine Verbindung der Formel R. - A (R - AH) mit einer

   R₁ O . i 1 m

   Verbindung der Formel HS - (Ci-L·) ' - CH - C - OH umge-

   setzt wird, wobei, falls η gleich ist 1 und R. für Methyl steht, der folgende Verfahrensschritt (B) durchgeführt wird,

   (B) aus einem gemäß Stufe (A) erhaltenen Isomerengemisch

   die im Rest -(CH₂) ~ CH - D-Konfiguration besitzende Verbindung abgetrennt wird,

   (C) die gernäß Stufe (A) oder (B) erhaltene Verbindung mit dem Rest Bp gekuppelt wird,

   (D) aus der gemäß Sufe (C) erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe R. durch Bestrahlung abgespalten wird und

   (E) die gemäS Stufe (D) erhaltene Verbindung mit einem den Rest R aufweisenden Kupplungsreagens umgesetzt wird oder

   daß XI

   (A) eine Verbindung der Formel R, - A (R - AH) mit

   RO einer Verbindung der Formel HS - (CH₂) - CH -C-OH umgesetzt vvird_f wobei, falls η gleich ist 1 und R. für Methyl steht, der folgende Verfahrensschritt (B) durchgeführt wird,

   (B) aus einem gemäß Stufe (A) erhaltenen Isomerengemisch

   2
   *~ AP C 07 C/228 170/8

   - 118 - 58 934/18

   i!

   R-A- S- CH₉ - CH - C - OH nit der Bedeutung von

   Wasserstoff oder Methyl für R/ umgesetzt wird, wobei, falls R₁ für Methyl steht, die folgende Verfahrensstufe (E) durchgeführt \\'±rd_e

   (E) aue dem gemäß Stufe (D) erhaltenen Isomerengemisch die im Rest ~CHp~>CH-« D-Konfiguration besitzende

   Verbindung abgespalten wird und

   (F) die in Stufe (D) oder (E) erhaltene Verbindung mit . dem Rest R₂ gekuppelt wird, oder

   daß II

   (A) eine Verbindung der Formel R - A(H) in Anwesenheit eines Kupplungsreagens mit einem Arylthiol oder einem Alkylthiol umgesetzt wird,

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit einem Alkalimetallhydrogensulfid oder mit H„S zu einer Verbindung der Formel R - A ~ SH umgesetzt wird»

   (C) die gemäß Stufe (B) erhaltene Verbindung mit Acrylsäure oder mit Methacrylsäure zu einer Verbindung der

   Ii

   Formel R - A - S- ChU - CH ~ C ~ OH mit der Bedeutung

   von Wasserstoff oder Methyl für R. umgesetzt wird, wobei, falls R₁ für Wasserstoff steht, Stufe (D) entfällt.

   J U 2,9,1981

   AP C 07 C/228 170/8 - 119 - 58 934/18

   (D) aus einem gemäß Stufe (C) erhaltenen Isomerengemisch die in der Gruppe -CHp-CH- D-Konfiguration besitzende

   Verbindung abgespalten wird,

   (E) die gemäß Stufe (C) oder (D) erhaltene Verbindung mit dem Rest Rp gekuppelt wird und

   (F) von der erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe R-, abgespalten und die erhaltene Verbindung mit einem den Rest R' enthaltenden Kupplungsreagens zu einer Verbindung der Formel

   O
   Il

   R* - A - S - ChL· - CH - C - OH umgesetzt wird, wenn

   ^ I

   ^Rl

   in der herzustellenden Verbindung (I) R gleich ist R* und A eine in D-Form oder L-Form vorliegende Aminosäure bedeutet und in der Verbindung R - A(H) R für R steht, oder .

   daß III

   (A) eine Verbindung der Formel R - A(H) mit Pentachlorphenol, Pentafluorphenol oder N-Hydroxysuccinimid umgesetzt wird, und hierbei, falls in der herzustellenden Verbindung (I) R für R* steht und A den Rest einer in D-Form oder L-Form vorliegenden Aminosäure bedeutet, in der Verbindung R- A(H) R für R-, steht und die folgenden Stufen (B) und (C) durchgeführt werden,

   2281 /U 8 ²·⁹·¹⁹³¹

   AP C 07 C/228 170/8 - 120 - 58 934/18

   (B) aus der gemäß Stufe (A) erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe R^ abgespalten wird,

   (C) die gemäß Stufe (B) erhaltene Verbindung mit einem einen Rest R," enthaltenden Kupplungsreagens umgesetzt wird j

   (D) die gemäß Stufe (A) oder (C) erhaltene Verbindung mit einer Verbindung der Formel

   HS - (Cl-U) ~ CH -C-OH umgesetzt wird, wobei, falls d η ,

   ^Rl

   η gleich ist 1 und R die Methylgruppe bedeutet, äer folgende Verfahrenssehritt (E) durchgeführt wird,

   (E) aus dem gemäß Stufe (D) erhaltenen Isomerengemisch die im Rest -(CH₂) -CH- D-Konfiguration besitzende

   Verbindung abgetrennt wird und

   (F) die gemäß Stufe (D) oder (E) erhaltene Verbindung mit dem Rest Rg gekuppelt wird oder daß IV

   (A) eine Verbindung der Formel R - A(H) mit H„S zu einer Verbindung der Formel R-A- SH umgesetzt wird,

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit Acrylsäure oder Methacrylsäure zu einer Verbindung der Formel

   U Q 2.9.1981

   AP C 07 C/228 170/8 - 121 - 58 934/18

   0 '

   It
   R « A - S- CH₉ - CH ~ C - OH mit der Bedeutung von

   ^Rl

   Wasserstoff oder Methyl für R₁ umgesetzt wird und, falls R₁ für Methyl steht, die folgende Verfahrensstufe (C) durchgeführt wird,

   (C) aus dem gemäß Stufe (B) erhaltenen Isomerengemisch die im Rest -CH₂-CH- D-Konfiguration besitzende Ver-

   ^Rl
   bindung abgespalten wird und

   (D) die gemäß Stufe (B) oder (C) erhaltene Verbindung mit dem Rest R₂ gekuppelt wird oder

   (A) der Rest R₂ an Acrylsäure, Methacrylsäure oder ein aktives Derivat hiervon gekuppelt und hierbei eine Verbindung der Formel

   O
   H₂C - C - C - R₂ mit der Bedeutung von Wasserstoff oder

   ^Rl
   Methyl für R₁ hergestellt wird,

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung ,mit einer Verbindung der Formel R - A ~ SH umgesetzt wird und, falls R₁ die Methylgruppe darstellt, der folgende Ver~ fahrensschritt (C) durchgeführt wird und

   Z Q I / U Ö 2,9,1981

   AP C 07 C/228 170/8 - 122 ~ 58 934/18

   (C) aus dem gernäß Stufe (B) erhaltenen Isomerengemisch die im Rest -CI-L-CH- D-Konfiguration besitzende Ver-

   bindung abgetrennt wird oder
   daß VI

   (A) A (HAH) mit einem den Rest R aufweisenden Kupplungsreagens zu einer Verbindung der Formel R - A (R - AH) umgesetzt wird,

   (B) Thioessigsäure mit Acrylsäure oder Methacrylsäure umgesetzt und vom erhaltenen'Produkt die Acetylgruppe abgespalten wird, ·

   (C) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit der gemäß Stufe (3) erhaltenen Verbindung zu einer Verbindung der Formel

   O
   η

   R-A- S- CH₂ -CH-C- OH mit der Bedeutung von

   Wasserstoff oder Methyl für R₁ umgesetzt wird, wobei, falls R₁ für Methyl steht, der Verfahrensschritt (D) durchgeführt wird,

   (D) aus dem gemäß Stufe (C) erhaltenen Isomerengemisch die im Rest -CH₂-CH- D-Konfiguration besitzende Ver-

   K

   bindung abgetrennt wird und

   (E) die gemäß Stufe (C) oder (D) erhaltene Verbindung mit dem Rest R₂ gekuppelt wird oder

   ö 2,9,1981

   AP C 07 C/228 170/8 ~ 123 - 58 934/18

   daß VII '

   (A) eine Verbindung der Formel R-A(R-A-H) in
   Anwesenheit einos Kupplungsreagens mit einem Arylthiol oder einem Alkylthiol umgesetzt wird, wobei,.- falls in der herzustellenden Verbindung (I) R für R^f und A für eine in D«-Form oder in L-Form vorliegende Aminosäure
   steht, in der Verbindung R-A R für R, steht, nach
   der Umsetzung des Thiols mit der Verbindung R-A die Schutzgruppe R-, vom Reaktionsprodukt abgesp_g^ten und
   die erhaltene Verbindung mit einem den Rest R' aufweisenden Kupplungsreagens umgesetzt wird/

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit einem Alkalimetallhydrogensulf id oder mit H₂S zu einer Ver«* bindung der Formel R-A-SH umgesetzt wird,

   (C) die gemäß Sufe (B) erhaltene Verbindung mit Acrylsäure oder mit Methacrylsäure zu einer Verbindung der Formel

   O
   H

   R-A- S- CHp - CH - C - OH mit der Bedeutung von

   Wasserstoff oder Methyl für R₁ umgesetzt wird, wobei, falls R», für Methyl steht _t die folgende Arbeitsstufe (D) durchgeführt wird,

   (D) aus einem gemäß Stufe (C) erhaltenen Isomerengemisch die im Rest -CH₂-CH- D-Konfiguration besitzende Ver-

   bindung abgetrennt wird und

   7 28 ι /U ö ²·⁹·¹³⁸¹

   ^fo AP C 07 C/228 170/8

   ~ 124 - 58 934/18

   (E) die gemäß Stufe (C) oder (D) erhaltene Verbindung mit R_? gekuppelt wird oder

   daß VIII

   (A) eine Verbindung der Formel R - A (R - AH) in Anwesenheit eines Kuppjungsreagens mit einem Arylthiol oder einem Alkylthiol umgesetzt wird,

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Vorbindung mit einem Alkalimetallhydrogensulfid oder mit HpS zu einer Verbindung der Formel R - A' « SH umgesetzt wird,

   (C) die gemäS Stufe (B) erhaltene Verbindung mit Acrylsäure oder mit Methacrylsäure zu einer Verbindung der Formel

   0
   Ii

   R „ A - S- CHo -CH-C-OH mit der Bedeutung von ^ I

   ^Rl

   Wasserstoff oder Methyl für R. umgesetzt wird, wobei, falls R^ für Methyl steht, der folgende Verfahrensschritt (D) durchgeführt wird,

   (D) aus einem gemäß Stufe (C) erhaltenen Isomerengemisch die im Rest -CH -CH- D~Konfiguration besitzende Ver-

   C. %

   bindung abgetrennt wird,

   (E) falls in der herzustellenden Verbindung (I) R für R* steht und A eine in D-Form oder in L «-Form vorliegende Aminosäure bedeutet und in der Verbindung R ~ A R für R-,

   J *# 2.9,1981

   AP C 07 C/228 170/8 - 125 - 58 934/18

   steht, von der erhaltenen Verbindung die·Schutzgruppe R₃ abgespalten und die erhaltene Verbindung mit einem die Benzoylgruppe aufweisenden Kupplungsreagens zu einer Verbindung der Formel

   R O

   i^x W '

   R_» - A - S - CH₂ - CH - C - OH und

   (F) die gemäß Stufe'(C), (D) oder (E) erhaltene Verbindung mit Rp gekuppelt wird oder

   daß IX

   (A) A (HAH) mit einem den Rest R aufweisenden Kupplungsreagens zu einer Verbindung der Formel R - A (R - AH) umgesetzt wird, .

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit einer Verbindung der Formel

   R₁ O
   HS - (CH₂) -CH-C-OH umgesetzt wird, wobei, falls

   η gleich ist 1 und R₁ für Methyl steht, die folgende Verfahrensstufe (C) durchgeführt wird«

   (C) aus einem gemäß Stufe (B) erhaltenen Isomerengemisch
3. 3"-£R(oder R," )-a3 t h io~2-D-met hylp rop ion sau re- t-butyl ester umgesetzt wird,

   (D) von der gemäß Stufe (C) erhaltenen Verbindung die t~Butylestergruppe abgespalten wird und

   (E) die gemäß Stufe (D) erhaltene Verbindung mit dem Rest Rp gekuppelt wird oder

   (AJ von 3~8enzoylthio~2~D-methylpropionsäure die Benzoylgruppe abgespalten wird^

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit einer Verbindung der Formel R - A (R_v - AH) zur 3~(R,-A)thio~ 2-D-methylpropionsäure umgesetzt wird,.

   (C) von dar gemäß Stufe (B) erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe R_ abgespalten wird und

   (D) die gemäß Stufe (C) erhaltene Verbindung mit einem den Rest "R oder R* enthaltenden Kupplungsreagens zur 3~fR(oder R')-Aj thio~2«D-methylpropionsäure umgesetzt wird und

   (E) die gemäß Stufe (D) erhaltene Verbindung mit dem Rest Rp gekuppelt wird oder

   daß XXX

   (A) 3~Mercapto~2~D~methylpropionsäure mit einer Verbindung der Formel R, ~ A (R « AH) zu einer 3~'(R₇-A)thio-2-D~methylpropionsäure umgesetzt wird_?

   AP C 07 C/228 170/8 - 142 - 58 934/13

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit dem Rest Rp gekuppelt wird,

   (C) von der gemäß Stufe (B) erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe R., abgespalten wird und

   (D) die gemäß Stufe (C) erhaltene Verbindung mit einem den Rest R oder R* enthaltenden Kupplungsreagens umgesetzt wird oder

   daß XXXI

   (A) eine 3<~(Rp«"A)thio™2-D«rnethylpropionsäure mit Rest Rp gekuppelt wird _t

   (B) von der gemäß Stufe (A) erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe R^ abgespalten wird und

   (C) die gernäß Stufe (B) erhaltene Verbindung mit einem den Rest R oder R^s aufweisenden Kupplungsreagens umgesetzt wirde

   3 2vn '

   alkohol zu einer Verbindung der Formol

   0 R. O

   H-C - C - S - (CHp) - CH - C « 0 - CHp-(O) mit der

   Bedeutung von Wasserstoff oder Methyl für R„ umgesetzt

   wird, wobei, falls η gleich ist 1 und R. für Methyl

   steht, der folgende Verfahrensschritt (B) durchgeführt wird,

   (B) aus einem gernäß Stufe (A) erhaltenen Isomerengemisch

   die im Rest -(CHpJ ~ CH - D-Konfiguration besitzende Verbindung abgespalten wird,

   (C) von der gemäß Stufe (A) oder (B) erhaltenen Verbindung die o-Nitrobenzylgruppe durch Bestrahlung abgespalten wird,

   (D) an die gemäß Stufe (C) erhaltene Verbindung der Rest R₂ gekuppelt wird,

   (E) von der gemäß Stufe (D) erhaltenen Verbindung die Acetylgruppe abgespalten wird und

   (F) die gemäß Stufe (E) erhaltene Verbindung mit einer Verbindung der Formel R - A (R ~ AH) umgesetzt wird oder

   fj ΐΙ 2_#9„198l

   AP C 07 C/228 170/8 - 138 - 58 934/18

   daß XXlV _{R 0}

   il η

   (A) eine Verbindung der Formel H„N - (Ci-L) « CH - C- OH

   mit der Bedeutung von Wasserstoff oder Methyl für R₁ mit einer Verbindung dor Formel HX mit aer Bedeutung von Brom oder Chlor für X zu einer Verbindung der Formel

   χ .. (CH₂) -CH-C - OH umgesetzt wird, wobei, falls η gleich ist 1 und R^ für Methyl steht, aus dem Ausgangsstoff vor dessen Umsetzung mit der Verbindung

   ?1

   H - X die im Rest ~(^cH₂)_n ~ ^CH - D-Konfiguration besitzende Verbindung abgespalten wird/

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit einer Verbindung der Formel R-A- SH umgesetzt wird und

   (C) die gemäß Stufe (B) erhaltene Verbindung mit dem Rest Rp gekuppelt wird oder

   daß XXV _{R 0} '

   Vl ti

   (A) eine Verbindung der Formel H₃N - (CH₂) -CH-C- OH mit der Bedeutung von Wasserstoff oder Methyl für R* mit einer Verbindung der-Formel H - X mit der Bedeutung von Brom oder Chlor für X zu einer Verbindung der Formel

   R„ O
   11 (C .

   X-- (CHg)_n - CH-C- OH umgesetzt wird,, wobei, falls η gleich ist 1 und R. für Methyl steht _t aus der als Ausgangsstoff eingesetzten Verbindung die im Rest R-

   fl . .

   -(CHp) - CH - D-Konfiguration besitzende Verbindung

   Ii 2.9,1981

   AP C 07 C/228 170/8 - 139 - 58 934/18

   vor Umsetzung mit der Verbindung H-X abgespalten wird,

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit Thiobenzoesäure oder Thioessigsäure umgesetzt wird,

   (C) von der gemäß Stufe (B) erhaltenen Verbindung die Benzoyl- oder Acetylgruppe abgespalten wird,

   (D) die gemäß Stufe (C) erhaltene Verbindung mit einer Verbindung der Formel R-A (R-AH) umgesetzt wird und

   (E) an die gemäß Stufe (D) erhaltene Verbindung der Rest R₂ gekuppelt wird oder

   daß XXVI _{R 0}

   (A) eine Verbindung der Formel HO - (CH_?) - CH - C - OH

   mit der Bedeutung von Wasserstoff oder Methyl für R₁ mit PBr_ zu einer Verbindung der Formel R „ O

   Br - (^CH2^n " ^CH ~ ^C ~ ^{0H um}9^esetzt wird, wobei, falls η gleich ist 1 und R₁ für Methyl steht, aus dem Ausgangsstoff noch vor Umsetzung mit PBr, die im Rest

   « (CH₂) - CH - D~Konfiguration besitzende Verbindung abgespalten wird,

   (B) die gemäß Stufe (A) erhaltene Verbindung mit einer Verbindung der Formel R-A-SH umgesetzt wird und

   (C) die gemäß Stufe (B) erhaltene Verbindung mit dem Rest R~ gekuppelt wird oder

   / U ö 2.9.1981

   AP C 07 C/228 170/8 - 140 - 58 934/18

   daß XXVlI

   (A) 3~ßenzoylihio~2~D«methylpropionsäure rcit 2-Methylpropen zum 3~8enzoylthiö~2~D~methylprcpionsäure-=tbu'tylester umgesetzt wird,

   (B) aus der gemäß Stufe (A) erhaltenen Verbindung die Benzoylgruppe abgespalten wird,

   (C) die gemäß Stufe (B) erhaltene Verbindung der Formel R-A oder R* -A (R-AH oder R* « AH) zum £R(oder R' )"AJ-fh io-2~D-methylprop ion sau re~t -butyl ester umge»« setzt wird ι

   (D) die t-Butylestergruppe aus der gemäß Stufe (C) erhaltenen Verbindung abgespalten wird und

   (E) die gemäß Stufe (D) erhaltene Verbindung mit dem Rest R₂ gekuppelt wird oder

   daß XXVIII

   (A) 3-Mercapto-2~D-methylpropionsäure-*t-butylester mit einer Verbindung der Formel R_ - A (R-, - AH) zu einer Verbindung der Formel 3~(R„ - A)thio-2~D-methylpropionsäure-t-butylester umgesetzt wi

   (B) von der gemäß Stufe (A) erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe R^ abgespalten wird,

   (C) die gemäß Stufe (B) erhaltene Verbindung mit einem den Rest R oder R.' aufweisenden Kupplungsreagens zum

   22817
4. 4_# Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch,, daß. beim Arbeiten nach der Ausführungsform VII in Stufe (B) dann; wenn in der herzustellenden Verbindung (I) R für R' steht und die Aminosäure D-Form oder L-Form besitzt,, in der Verbindung R-A (R-AH) R für R, steht und die . Schutzgruppe R von der Verbindung

   R- O
   Jl ti

   R „ A ~ S » ChU « CH - C - OH abgespalten wird und die gemäß Stufe (D) erhaltene Verbindung noch vor der Stufe (E) mit einem den Rest R₁ ¹ aufweisenden Kupplungsreagens umgesetzt wird_e