DD203052A5

DD203052A5 - Verfahren zur herstellung von 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxy-methyl)-guanin, dessen salzen und bestimmten benzylderivaten desselben

Info

Publication number: DD203052A5
Application number: DD82240075A
Authority: DD
Inventors: Julien P Verheyden; John C Martin
Original assignee: Syntex Inc
Priority date: 1981-05-21
Filing date: 1982-05-21
Publication date: 1983-10-12
Also published as: CS235044B2; IE53731B1; DE3266644D1; PL242100A1; PL242101A1; CS235018B2; HU188000B; NL930022I1; PH17975A; JPH04217983A; ES8404355A1; LU88334I2; AU572086B2; KR830010112A; US4355032B2; DK150304C; AR244227A1; ES512414A0; US4355032B1; ES8601204A1

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung v. 9-(1,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin der Formel I und dessen pharmazeutisch annehmbaren Salzen, z.B. durch Deacylierung von in N&exp2!-Stellung acylierten Derivaten von (I) oder Dearalkylierung von Derivaten von (I), in denen die freien Hydroxylgruppen des in 9-Stellung stehenden Restes benzyliert sind. (I) kann auch durch gleichzeitige Deacylierung und Dearalkylierung entsprechend substituierter Derivate hergestellt werden. Weiterhin betrifft die Erfindung die Herstellung von in N&exp2!-Stellung acylierten Derivaten von (I) und deren Salzen, bei der z.B. ein Derivat von (I), das in N&exp2!-Stellung acyliert ist und die Hydroxylgruppen des in 9-Stellung stehenden Restes benzyliert sind, dearalkyliert wird.

Description

240075 7

17-

Verfahren zur Herstellung von 9-(1,3-Dihydro:3cy-2-propo3ymethyl)-guanin, dessen Salzen und bestimmten Benzy!derivaten desselben /

Anwendungsgebiet der Erfindung

Die vorliegende Erfindung betrifft Verfahren zur Herstellung der neuen Verbindung 9-Ü,3-Dihydroxy-2-proposy-methyl)-guanin sowie deren pharmazeutisch annehmbarer Salze, Diese Verbindungen sind als antiviralβ Mittel wirksam. Die vorliegende Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung von Derivaten der genannten Verbindung, die in 1,3-Stellung benzyliert sind, und Zwischenprodukte zur Herstellung des 9-(1,3-Dihydroxy-2-propoxy-methyl)-guanins bzw. dessen Salzen darstellen.

Virusinfektionen sind weitverbreitet -und führen zu vielen verschiedenartigen Symptomen. Einige Virusinfektionen können leicht durch den Abwehrmechanismus des Körpers überwunden werden, während andere ernsthafteter Natur sind und zu permanenten Schäden, wie Blindheit, oder sogar zum Tode führen. Eine Virenfamilie, die erhebliche Infektionen verursachen kann, ist die Gruppe der Herpes-Viren.

Die derzeit zur Behandlung von VirusInfektionen verwendeten Arzneimittel sind in vielen Fällen unwirksam, oder, falls sie wirksam sind, werden sie in hohen und/oder ständigen Dosen benötigt, die ernste Nebenwirkungen und/ oder Toxizität ergeben. Es besteht daher das Bedürfnis nach einem wirksamen antiviralen Mittel, das in niedrigeren Dosen als die derzeit verfügbaren Arnze'imittel wirksam ist und damit die Gefahr möglicher Nebenwirkungen und Toxizität verringert. .

Die US PS 4 199 574 beschreibt Verbindungen der folgenden allgemeinen Formel ·

(A)

CHXCHCH-R⁵

¹ 6 I 3 ! 4 R^b R^JR⁴

1 in v/elcher X für Schwefel oder Sauerstoff steht, R Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Alkoxy, Azid, Thio, Alkyl"

2 thio, Amino, Alkylamino oder Dialkylamino bedeutet; R für Wasserstoff, Halogen, Alkylthio, Acylamino, Amino oder Azid steht; R für Wasserstoff, gerade- oder verzweigtkettiges oder cyclisches Alkyl, Hydroxyalkyl, Benzyloxyalkyl oder Phenyl steht; R ' für Viasserstoff, Hydroxy oder Alkyl steht; R für Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Alkyl,

Hydroxyalkyl, Benzyloxy, Benzoyloxy, Benzoyloxymethyl, Sulfamoyloxy, Phosphat, Carboxypropiamyloxy, gerade- oder verzweigtkettiges oder cyclisches Acyloxy mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, wie Acetoxy, oder eine substituierte Carbamoylgruppe der Formel NHCO-Z steht, wobei Z Alkyl, Aryl oder Aralkyl bedeutet, die gegebenenfalls durch einen oder mehrere Substituenten aus der Gruppe Sulfonyl, Anuno, Carbanoyl oder Halogen substituiert sein können; R für Wasserstoff oder Alkyl steht, mit der Bedingung daß - wenn X Sauerstoff bedeutet und R², R , R und R fjev/eils Wasserstoff bedeuten - R nicht Amino oder Methylamine ist, wenn R^ für Wasserstoff oder Hydroxy steht; weiter werden in der US PS die Salze der obigen Verbindungen beschrieben.,

Von der durch die obige Formel dargestellten Klasse von Verbindungen und deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen wird gesagt, daß sie eine antivirale Aktivität zeigen (vgl. auch Tetrahedron Letters 2_1_, 327-30 (1980)).

Ziel der Erfindung:

Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung v/eiterer wirksamer, noch unbekannter, antiviraler Arzneimittel.

Darlegung des Wesens der Erfindung:

Es wurde überraschenderweise gefunden, daß die Verbindung 9-(i,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin und deren Salze besonders aktive antivirale Mittel sind. Die selektive Aktivität dieser Verbindung. wird besonders deutlich, wenn man sie mit der strukturell ähnlichsten Verbindungen, die in der US PS k 199 574 beschrieben v/erden, in einer antiviralen Versuch vergleicht, der in Beispiel 5 genau beschrieben wird.

2Λ00 7 5 7

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 9-(i,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin der Formel

(I)

CH₀OCHCH₀OH 2 ι ^z

CH₂OH

und der pharmazeutisch annehmbaren Salze desselben, das dadurch gekennzeichnet ist, daß _man a) eine Verbindung der Formel

'.H₀OCHCH₀OH 2 ι 2

CH₂OH

in welcher R eine Acylgruppe PJ¹C ist, in der R" eine gerade oder verzweigte Kohlenwasserstoffkette mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen ist, deacyliert; oder

b) eine Verbindung der Formel

CH₂OCHCH₂OR¹

CH₂OR¹

in welcher R' eine Schutzgruppe, wie eine Benzylgruppe, ist, die gegebenenfalls mit 1 oder 2 AIkoxygruppen, in denen Alkyl wie oben definiert ist, vorzugsweise Methoxy, oder 1 oder 2 niedrigen Al.kylgruppen, wobei Alkyl eine gerade oder verzweigte Kohlenwasserstoffkette mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise Methyl, ist, sub- . stituiert ist, dearalkyliert; oder

c) eine Verbindung der Formel

HlK

(VIII)

CH₂OCHCH₂OR¹ CH₀OR¹

• Z

in welcher R und R' wie oben definiert sind, 10 dearylalkyliert und dea'cyliert; oder

d) 9-0,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin in ein pharmazeutisch annehmbares Salz umwandelt; oder

15 e) ein Salz des 9-0,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanins in 9-0 ,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin umwandelt; oder

f) ein Salz des 9-0,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-20 guanins in ein pharmazeutisch annehmbares Salz desselben umwandelt.

Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung einer 'Verbindung der Formel:

(IX)

CH₀OCHCH₀OH 2 , 2

CH₂OH 30

und der Salze derselben, in welchen R eine Acylgruppe _ΌΙΛ ist, in welcher R" eine gerade oder verzweigte Kohlenwasserstoffkette mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen ist, indem man 35 a) eine Verbindung der Formel ο

H CH₂OCHCH₂OR¹ CH₂OR¹

2A0075 7

in welcher R wie oben definiert ist und₍R' eine Schutzgruppe, z.B. Benzyl, ist, die gegebenenfalls mit 1 oder 2 Alkoxygruppen oder 1 oder 2 niedrigen Alkylgruppen substituiert sein kann, in welchen Alkyl eine gerade oder verzweigte Kohlenwasserstoffkette.mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen ist; oder

b) eine Verbindung der Formel (VIII) mit einer Lewis-Säure umsetzt; oder

c) eine Verbindung der Formel (VIII) mit Essigsäure umsetzt; oder

d) eine Verbindung der Formel (IX) in deren Salz umwandelt; oder

e) das Salz in die entsprechende freie Verbindung der Formel (IX) umwandelt. ~

Die Verbindungen der Formel (IX) dienen als Zwischenprodukte zur Herstellung der neuen Verbindungen (I), die durch Deacylierung von (IX) erhalten werden

Die pharmazeutischen Präparate, die als wesentlichen Bestandteil eine der neuen Verbindungen enthalten, können weiterhin noch andere, pharmazeutisch aktive Bestandteile derselben Indikation enthalten, und in den meisten Fällen, enthalten sie geeignete pharmazeutische Träger oder Streckmittel.

Zur Behandlung von VirusInfektionen wird eine erfindungsgemäße Verbindung oder ein Präparat, das diese enthält, verabreicht.

Die Verbindungen der obigen Formel (IX), in welcher R für-eine wie oben definierte Acylgruppe steht, dienen als Zwischenprodukte im Verfahren zur Herstellung der Verbindung der Formel I, in weichem sie in der unten beschriebenen Weise deacyliert werden.

Falls nicht anders angegeben, haben in der vorliegenden

24 0 0 7 5 7.

Anmeldung die folgenden Bezeichnungen die folgende Bedeutung:

"Pharmazeutisch annehmbare Salze" sind Salze mit der biologischen Wirksamkeit und den Eigenschaften der freien Verbindung, die nicht biologisch oder anderweitig unerwünscht sind- Die Salze können entweder Säure-Additionssalze oder anorganische Metallsalze, vorzugsweise Erdalkalimetallsalze, sein. Geeignete Säuren zur Salzbildung sind anorganische Säuren, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure usw., und organische Säuren, wie Trifluoressigsäure., ?4ethansulfonsäure, Ethansulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure usw.

Geeignete Basen zur Salzbildung sind organische Basen, anorganische Metallbasen, wie Kupfer- oder Silberbasen, und Alkalimetallbasen, wie Alkalimetallhydroxide, z.B. Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid usw.

Die erfindungsgemäß fc-»rgestellte Verbindung der obigen Formel (I) und deren pharmazeutisch annehmbare Salze . erhalten durch die Substitution des Guaninkernes durch die 1,3-DiIiydroxy-2-propoxymethylgruppe in 9-Stellung eine besonders hohe Wirksamkeit.

Die erfindungsgemäß hergestellte Verbindung der Formel (I) und deren pharmazeutisch annehmbare Salze zeigen eine hohe antivirale Wirksamkeit bei Verabreichung an Mens'ch und Tier, z.B. Kaltblüter, wie Fische, an Vögel, jedoch insbesondere an Menschen. So zeigen die erfindungsgemäß hergestellten Verbindungen z.B. eine ausgezeichnete Wirksamkeit gegen Herpes Simplex Virus I und II und verwandte Viren, wie Cytomegalovirus, Epstein-Barr-Virus und Varicella-Zoster-Virus.

Pharmazeutische Präparate für die Veterinär- und Humanmedizin, die eine erfindungsgemäß hergestellte Verbindung zum antiviralen Gebrauch enthalten, werden nach üblichen bekannten Verfahren hergestellt und können die

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üblichen "bekannten Hilfsmittel oder Träger enthalten. Ein allgemein anerkanntes Kompendium über diese Verfahren und Mittel ist "Remingston's Pharmaceutical Sciences" von E.W. Martin (Mark Publishing Co., 15- Auflage, 1975).

Pharmazeutische Präparate mit erfindungsgemäß hergestellten Bestandteilen können auch andere antiviral aktive Substanzen enthalten. Im allgemeinen kann das pharmazeutische Präparat 0,1 bis 90 Gew.-?o der aktiven Substanz enthalten.

Die erfindungsgemäß hergestellten Verbindungen können parenteral, z.B. durch intravenöse, intraperitoneale "oder intramuskuläre Injektion, oral, örtlich oder rektal verabreicht werden, was davon abhängt, ob das Präparat zur Behandlung innerer oder äußerlicher Virusinfektionen verwendet wird.

Für innere Infektionen werden die Präparate oral oder parenteral in Dosen, berechnet als freie Base, von etwa 0,1 bis 300 mg/kg, vorzugsweise 1,0 bis 30 mg/kg, Körpergewicht des Patienten verabreicht; beim Menschen können sie in Einzeldosisform ein- bis viermal täglich in einer Menge von 1 bis 250 mg pro Einzeldosis gegeben v/erden. Zur oralen Verabreichung können--feine Pulver oder Granulate verdünnende, dispergierende und/ oder oberflächenaktiven Mittel enthalten und als Arzneitrunk, in Wasser oder in einem Sirup vorliegen; weiter können sie als Kapseln oder Beutel in trockenem Zustand oder in einer nicht-wässrigen Lösung oderjSuspension vorliegen, wobei Suspendierungsmittel mitverwendet v/erden können; oder als Tabletten, wobei Binder und Schmiermittel mit verwendet v/erden können; oder als Suspension in Wasser oder einem Sirup. Falls erwünscht oder notwendig, können Aromamittel, Konservierungsmittel, Suspendierungs-

240075 7-

mittel, Verdickungsmittel oder Emulgatoren mitverwendet werden. Tabletten und Granulate werden bevorzugt; diese können überzogen sein.

Zur parenteralen Verabreichung oder zur Verabreichung als Tropfen, z.B. gegen Augeninfektionen, können die Verbindungen in wässriger Lösung in einer Konzentration von etwa 0,1 bis 10 %, vorzugsweise etwa 0,1 bis 7 ⁰Zo₁ dargereicht werden. Die Lösung kann Antioxidationsmittel, Puffer usw. enthalten.

Bei Infektionen des Auges oder anderer äußerer Gewebe, z.B. Mund und Haut, werden die Präparate vorzugsweise örtlich als Salbe, Creme, Aerosol.oder Pulver, vorzugsweise als Salbe oder Creme, auf den infizierten Körperteil des Patienten aufgebracht. Die Verbindungen können in einer Salbe, z.B. mit einer wasserlöslichen Salbengrundlage, oder in einer Creme, z.B. mit einer Öl-inWasser Cremegrundlage, in einer Konzentration von etwa 0,01 bis 10 %, vorzugsweise- 0,1 bis 7 %, und insbesondere etwa 0,5 %, Gew./Vol. dargereicht v/erden. Virale Infektionen des Auges, z.B. herpetische Keratitis, können auch durch ein Depotarzneimittel, wie es in der US PS 4 217 898 beschrieben wird, behandelt' werden.

PräOarate mit erfindungsgemäß hergestellten Verbindungen

Sausetieren, eignen sich auch zur Behandlung von^Vögeln, wie dünner und Truthähne, und Kaltblütern, wie Fische. Virusinfektionen bei Vögeln, wie New Castle Krankheit, Mareksche HJbrerlähmung, usw., werden durch erfindungsgemäß hergestellte Verbindungen nach den in der Veterinärmedizin üblichen Verfahren, z.B. Eintauchen der nicht geschlüften Eier in eine die Verbindung enthaltende Lösung, Injektion der Vögel mit dem die Verbindung enthaltenden Präparat oder Zugabe einer erfindungsgemäß hergestellten Verbin-

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- 10 ding zum Futter oder Trinkwasser, behandelt.

Fische in einem abgeschlossenen Raum, z.B. einem Becken, Aquarium oder Halterungstank, können ebenfalls gegen virale Infektionen durch herpesartige Viren, z.B. CCV (Channel Catfisch Virus), Herpes Virus Salomones, Nerka Virus usw., behandelt werden, indem man die Ver-

-lo bindung direkt in das Wasser des Beckens, Aquariums oder Tanks gibt oder in das Futter einverleibt.

Die genaue Art zur Verabreichung der erfindungsgemäß hergestellten Verbindungen und sie entteLtenden Präparate hängt selbstverständlich von den Bedürfnissen des zu behandelnden jeweiligen Patienten, der Art der Behandlung und auch vom Urteil des jeweiligen Behandlers ab.

Die Verbindungen der Formel (I) können nach dem folgenden 2c Reaktionsschema hergestellt werden, in welchem R eine Acyl gruppe _Rt,£ ist, in welcher R" eine gerade oder verzweigte Kohlenwasserstoffkette mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen ist und R' eine Schutzgruppe, z.B. eine Benzylgruppe, ist, die gegebenenfalls mit 1 oder 2 Alkoxygruppen, wobei'Alkyl eine gerade oder verzweigte Kohlenwasserstoffkette mit 1 bis k Kohlenstoffatomen ist, vorzugsweise Methoxy, oder mit 1 oder 2 niedrigen Alkylgruppen, wobei Alkyl wie oben definiert ist, vorzugsweise Methyl, substituiert sein kann.

240075

(II)

CH₂OR'

CH₂OR' (IV)

CH₀OR' OH

I CH₂

CH₂OR¹

(III) CH₀OR'

CH_nOCH₀OCCH₀ 2 2 π 3

CH₂OR' .(V)

HN'

(X)

CH₀OCHCH₀O-R' ι

CH₂OR'

(V)

N.

(VIII)

CH₂OR'

Il

RN

(IX)

-N

CH₀OCHCH₀OH CH₂OH

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CH_nOCHCH₀OH

Die Verbindung der Formel (III) wird hergestellt, indem man Epichlorhydrin (II) tropfenweise zu einer Lösung eines Alkalimetallsalzes, vorzugsweise des Natriumsalzes, von Benzylalkohol, v/ahlweise gemäß obiger Definition substituiert, in einem Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Hexamethylphosphoramid, Dimethylsulfoxid, SuIfolan, Tetrahydrofuran und Dioxan, bei einer Temperatur von etwa 0 bis 100⁰C, vorzugsweise etwa 15 bis 40⁰C, zufügt. Die Reaktionsmischung wird etwa 10 bis Stunden, vorzugsweise etwa 12 bis 18 Stunden, bei einer Temperatur von etwa 0 bis 100⁰C, vorzugsweise etwa 20 bis 50⁰C, gerührt.

Die Verbindung der Formel (III) wird zur Verbindung der Formel (IV) chlormethyliert, indem man trockenen gasförmigen Chlorwasserstoff in eine Lösung aus der Verbindung und Paraformaldehyd, gelöst in einem halogenieren Kohlenwasserstoff lösungsmittel, wie Dichlorethan, Chloroform, Dichlormethan und 1,1,2-Trichlorethan, die auf eine Temperatur von etwa 0 bis 25°C, vorzugsweise auf eine Temperatu von etwa 0⁰C, abgekühlt ist, einleitet. Der gasförmige Chlorwasserstoff wird innerhalb von 30 Minuten bis 3 Stunden, vorzugsweise innerhalb von 1 bis 2 Stunden, zugefügt, bis sich der Paraformaldehyd löst. Die Lösung wird etwa 12 bis 48 Stunden auf einer Temperatur von etwa 0 bis 10 C, vorzugsweise etwa 16 bis 24 Stunden auf einer Temperatur von etwa 0 bis 5°C, gehalten.

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Die Verbindung der Formel (V) wird hergestellt, indem man ein Alkalimetallacetat, wie Natriumacetat, mit einer Verbindung der Formel (IV), gelöst in einem Lösungsmittel', wie Dimethylformamid, Tetrahydrofuran, Dimethylacetamid, Hexamethylphosphoramid, Dirnethylsulfoxid, SuIfolan und Dioxan, bei einer Temperatur von etwa O bis 45 C, vorzugsweise von etwa O bis 25 C, umsetzt. Die Lösung wird etwa 5 bis etwa 24 Stunden, vorzugsweise etwa 10 bis etwa 18 Stunden, bei einer Temperatur von etwa 10 bis etwa 30 C, vorzugsweise etwa 15 bis 25°C, gerührt.

Die Verbindung der Formel (VII) wird hergestellt, indem is man Guanin (VI) mit einem Carbonsäureanhydrid mit 2 bis Kohlenstoffatomen, wie Essigsäureanhydrid, Buttersäureanhydrid, Valeriansäureanhydrid, Caprylsäureanhydrid, vorzugsweise Essigsäureanhydrid, etwa 10 bis 24 Stunde η** vorzugsweise etwa 12 bis 18 Stunden zum Rückfluß erhitzt. Ein Lösungsmittel braucht nicht verwendet zu werden.

Das N ,9-Diacylguanin der Formel (VII) wird mit der Verbindung der Formel (V) unter Bildung einer Verbindung der Formel (VIII) mit oder ohne ein Lösungsmittel, wie Dioxan, SuIfolan usw., in Anwesenheit einer katalytischen Menge einer Säure, wie Bis-(p-nitrophenyl)-phosphat, Toluolsulfonsäure, Methylphosphonsäure oder Dichloressigsäure , vorzugsweise Bis-(ρ-nitrophenyl)-phosphat, bei einer Temperatur von etwa 75 bis 20Q⁰C, vorzugsweise etwa 11Q-bis 180 C, umgesetzt. Die Reaktion erfolgt gewöhnlich unter.Vervendung von 0,8 bis 1,2 Mol Verbindung der Formel (V) pro Mol Verbindung der Formel (VII).

Die Schutzgruppen können beide gleichzeitig oder nacheinander entfernt werden, z.B. zuerst die eventuell substituierte .Benzylgruppe und dann die Acylgruppe oder zuerst die Acylgruppe und dann die eventuell substituierte Benzylgruppe.

24-0075 7- ι* -

Die Benzyl-Schutzgruppen (R¹) können .zuerst nach irgendeinem Verfahren, z.B. durch katalytische Hydrierung mit Lewis-Säuren oder Acetolyse unter Bildung der Verbindung der Formel (IX) aus der Verbindung der Formel (VIII) entfernt werden. Die katalytische Hydrierung erfolgt geöhnlich in Anwesenheit eines Hydrierungskatalysators, wie Palladium, Platin, Rhodium oder Nickel, auf einem Träger, v/ie Kohle, und in Anwesenheit eines inerten Lösungsmittels für die Verbindung der Formel (IX). Wasserstoff wird der Lösung bei einem Druck von etwa 2 bis 5,5 bar, zugefügt. Die Reaktionstemperatur liegt gewöhnlich zwischen 0 bis 50 C. Unter bevorzugten Bedingungen wird Palladium-auf-Kohle in einer Aufschlämmung zur Lösung der

is Verbindung von Formel (VIII) in einem Lösungsmittel, wie ein wässriger niedriger Alkylalkohol (wobei"Alkyl als gerader oder verzweigtkettiger Kohlenwasserstoff mit 1 bis k Kohlenstoffatomen definiert ist), vorzugsweise wässriges Methanol, zugefügt.

Die Verbindung der Formel (l) kann hergestellt werden, indem man die Verbindung (IX) durch Entfernung der Schutzgruppen R in an sich bekannter Weise deacyliert. Diese Entfernung kann unter solvolytischen Bedingungen durchgeführt werden, wodurch ein geeignetes Lösungsmittel die Aminofunktion in 2-Stellung des Guaninringsystems wiederherstellt. Diese Lösungsmittel sind z.B. Wasser oder niedrige Alkanole mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Die Solvolyse kann unter sauren oder basischen Bedingungen erfolgen. Die Reaktionstemperaturen liegen gewöhnlich zwischen 0 bis 5O⁰C, vorzugsweise 10 bis 30⁰C. Besonders bevorzugt wird der Bereich zwischen 15 bis 25⁰C. Die basische Solvolyse wird bevorzugt. Geeignete Basen sind z.B. Alkalihydroxide, Alkalicarbonate oder Ammoniak. Niedrige Alkanole sind die bevorzugten Lösungsmittel, insbesondere Methanol. Unter den bevorzugten Bedingungen wird eine Lösung der Verbindung von Formel (IX) und der Base etwa 1 bis 36 Stunden, vorzugsweise etwa 10 bis 2k Stunden, bei

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einer Temperatur von etwa 10 bis 30 C, vorzugsweise etwa 15 bis 25°C, gerührt.

Die Acyl-Schutzgruppe kann entsprechend den oben beschriebenen Bedingungen zuerst entfernt werden.

Die Benzyl-Schutzgruppen (R') können in an sich bekannter Weise nach irgendeinem Verfahren aus der Verbindung der Formel (X) entfernt werden, z.B. durch katalytische Hydrierung, Umsetzung mit Lewis-Säuren oder Acetolyse unter Bildung der Verbindung von Formel (i). Die katalytische Hydrierung erfolgt gewöhnlich in Anwesenheit eines Hydrierungskatalysators, wie Palladium, Platin, Rhodium

oder Nickel, auf einem Träger, wie Kohle, und in Anwesenheit eines inerten Lösungsmittels für die Verbindung der Formel (X). Wasserstoff wird der Lösung bei einem Druck von etwa 1 bis 14, vorzugsweise etwa 2 bis 5,5, bar zugefügt. Die Reaktionstemperatur liegt gewöhnlich zwischen 0 bis

ο '

50 C. Unter bevorzugten Bedingungen wird Falladium-auf-Kohle in einer Aufschlämmung zur Lösung der Verbindung von For- mel (X) in einem Lösungsmittel, wie ein wässriger niedriger Alkylalkohol, in welchem Alkyl als gerader oder verzweigtkettiger Kohlenwasserstoff mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen

definiert ist, vorzugsweise wässrigem Methanol, zugefügt.

Die Acyl- und Benzyl-Schutzgruppen können"'auch aus der Verbindung von Formel (VIII) in einer Stufe unter Bildung der Verbindung" von Formel (l) entfernt v/erden,

Die Verbindung der Formel (VIII) wird (Temperatur zwischen -25 und -40 C) in einer Lösung aus Natrium in flüssigem Ammoniak zum Rückfluß erhitzt, wobei Natrium in einem geringen Überschuß anwesend ist; zu dieser Lösung; ist

^w eine geringe Menge einer Protonenquelle, z.B. ein niedriger Alkylalkohol, in welchem Alkyl als gerader oder verzweigtkettiger Kohlenwasserstoff mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen definiert ist, vorzugsweise Ethanol oder Methanol,

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zugegeben worden. Der Ammoniak wird abgedampft und der Rückstand mit Ammoniumchlorid zur Bildung eines Rückstandes verrieben, der die Verbindung der Formel (I) ist.

Die pharmazeutisch annehmbaren Salze der Verbindung (I). v/erden hergestellt, indem man die Verbindung der Formel (I) mit einer geeigneten Base oder Säure gemäß obiger Dexinition umsetzt. Diese Umwandlung kann in einem Lösungsmittel erfolgen, wobei etwa stöchiometrische Äquivalente der Base oder Säure zur Verbindung der Formel (i) in einem geeigneten inerten Lösungsmittel bei einer Temperatur zwischen 0 und 5O⁰C zugefügt werden.

In ähnlicher Weise können die Verbindungen der Formel (i) aus Salzen der Verbindungen von Formel (I) freigesetzt v/erden, indem man ein stöchiometrisches Äquivalent einer Base zu einem Säureadditionssalz oder Säure zu einem Salz der Verbindung (I) mit einer Base in einem Lösungsmittel bei einer Temperatur zwischen 0 und 50 C zufügt.

Ein Salz der Verbindung von Formel (I) kann auch in ein pharmazeutisch annehmbares Salz der Formel (I) zB. durch übliche doppölte Umsetzung umgewandelt werden, wodurch das Anion oder Kation des Ausgangssalzes durch das pharmazeutisch annehmbare Anion oder Kation ersetzt wird, "; Die doppelte Umsetzung bedient sich gewöhnlich der Tatsache, daß sich das weniger lösliche Salz von dem stärker löslichen Salz bei einer Umsetzungsternperatur von 0 bis

o¹·

50⁰C abtrennt.

Ausführungsbeispiele .

(Die' Versuche beschreiben die Herstellung von Ausganssmaterialien. )

240075 7 . ₁₇

Versuch I

100 g Natriumhydrid (50 %ige Dispersion in Mineralöl; 2,08 •Mol) wurden zweimal mit 1 1 Hexan gewaschen und dann unter Stickstoff getrocknet. 1,5 1 trockenes Dimethylformamid wurden zugefügt und dann 400 ml Benzylalkohol mit solcher Geschwindigkeit zugegeben, daß die Temperatur unter 5O⁰C blieb. Die Zugabe erforderte 2 Stunden. 92,5 g (1 Mol) Epichlorhydrin wurden anschließend innerhalb einer halben Stunde unter Kühlen mit Eis eingetropft, um die Temperatur unter 4O⁰C zu halten. Dann wurde die Lösung 16 Stunden bei 21⁰C und anschließend-2 1/2 Stunden bei 50⁰C gerührt. Das Dimethylformamid wurde durch Abdampfen bei vermindertem Druck entfernt. Der ölige Rückstand wurde in 2,5 1 Diethyl ether gelöst. Die organische Lösung wurde mit 2 1 Wasser, 2 1 2-%iger Salzsäure, 2 1 1-%igem Natriumbicarbonat und 1 1 Kochsalzlösung gewaschen., über Natriumsulfat getrocknet und zu einem brauen Öl konzentriert. Nach Destillation erhielt man 147,8 g 1,3-Di-O-benzylglycerin (Kp. 170-180⁰C/ 1,3 mbar

Versuch II

Trockener gasförmiger Chlorwasserstoff wurde 1 1/2 Stunden

in eine Lösung "aus 15 g (55 Millimol) 1,3-Di-O-benzyl-.. glycerin aus Versuch I und 3,3 g (HO Millimol) Paraformaldehyd in 175 ml 1,2-Dichiorethan bei O⁰C eingeleitet.

Dann wurde die Lösung 21 Stunden bei 4⁰C in einem ver-- . schlosseren Kolben gelagert. Anschließend wurde die Lösung über Magnesiumsulfat unter Erwärmen auf 21⁰C getrocknet, filtriert und zu 17,5 g 1,3-Di-0-benzyl-2-0-chlormethylglycerin konzentriert.

Versuch III

Hg__z^

Zu einer Lösung aus 17,5 g (55 Millimol) 1,3-Di-O-benzyl-2-0-chlormethylglycerin aus Versuch II in 400 ml Dimethylformamid bei 0 C unter einem Trocknungsrohr wurden.β g Natriumacetat zugefügt. Dann wurde die Lösung aus 21 C

- 18 erwärmt und magnetisch 15 Stunden gerührt. Das" Lösungsmittel

- wurde durch Abdampfen unter vermindertem Druck entfernt und der ölige Rückstand in 454 g Diethylether gelöst. Die Etherlösung wurde einmal mit 750 ml Wasser, zweimal mit 250 ml Wasser und einmal mit 250 ml Kochsalzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und zu 19 g 2-0-Acetoxymethyl-1,3-di-O-benzylglycerin (Öl) konzentriert. Versuch IV

Herstellung_von_N_^9-DiacetYlguanin 20 g (0,132 Mol) Guanin wurden mit 300 ml Essigsäureanhydrid vermischt und die Mischung 16 Stunden zum Rückfluß erhitzt. Dann wurde die Mischung abgekühlt und das überschüssige Essigsäureanhydrid durch Abdampfen bei vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde aus-Dimethylsulfoxid umkristallisiert und lieferte 25,6 g N²,9-Diacetylguanin. Beispiel 1

A) Her_sjce_llung _vc_n JN^A_-cety_:l·-9_-J/}jJ>sJL prj^o_xymejfchyl )_-_guanin

15,61 g (66 Millimol) N ,9-Diacetylguanin aus Versuch IV, 19 g (55 Millimol) 2-0-Acetoxymethyl-1,3-di-0-benzylglycerin aus Versuch III und 0,5g Bis-(p-nitrophenyl)-phosphat wurden zusammen mit 150 ml Diethylether gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Abdampfen entfernt und der Rückstand in einem Ölbad von 175°C 11/2 Stunden unter einem Stickstoffstrom erhitzt. Kolonnenchromatographie unter Eluieren mit 1:9 Methanol/Methylenchlorid und anschließende Umkristallisation aus Ethylacetat lieferten 4,76 g N²-Acetyl-9-(1,3-dibenzyloxy-2-propoxymethyl)-guanin;

.30 F. 145-146⁰C.

3) Her.s.tellung._von JJL.-4cery_l-9-Cli_3-dihvdrqz^cv-2-propoxymethyl)-guanin

Zu einer Lösung aus 4,62 g (9,67 Millimol) N²-Acet3/l-9-(1,3-dibenzyloxy-2-propoxymethyl)-guanin in 150 ml Methanol plus 40 ml Wasser wurde 20-%iges Palladiumhydroxid-auf-Kohle als Aufschlämmung in 10 ml V/asser zugefügt. Die Mi-

;rvorrichtung bei etwa 4,1

schung wurde in einer Parr-Hydris

24 00 7 5 7 -^-

bar Wasserstoff 38 -Stunden hydriert, dann durch Celite filtriert und zu einem weißen Feststoff konzentriert. Durch Umkristallisation aus Methanol/Ethylacetat erhielt man 1,4 g N -Acetyl-9-0,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin F. 205-208⁰C.

Die Mutterlauge wurde mit 10 % Palladium-auf-Kohle (1g). in 150 ml Methanol plus 50 ml Wasser bei etwa 4,1 bar 47 ίο Stunden weiter reduziert. Die Gesamtausbeute an KT-Acetyl-9_(1 _f 3-dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin betrug 2,11 g.

C) Herstellung_von_9-(li3zDihYdroxy-2₌2i2E2yZ^I2§i^Y=)~

guanin 721,9 mg (2,4 Millimol) N²-Acetyl-9-O ,3-dihydrox;r-2-propoxymethyl)-guanin wurden mit 50 ml methanolischer Ammoniaklösung (mit Ammoniak bei O⁰C gesättigtes Methanol) 17 Stunden bei 21⁰C gerührt. Die Lösung wurde zu einem weißen Feststoff konzentriert und der Rückstand aus Methanol umkristallisiert; er lieferte 582,3 mg 9-(i,3-D!hydroxy-2-propoxymethyl)-guanin; F. 250 C u.Zers.

B. eispiel 2

9_(1₎3_Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin wurde in einer wässrigen, 1 Moläquivalent Natriumhydroxid enthaltenden Lösung gelöst. Dann wurde die Lösung lyophilisiert und .· lieferte das Natriumsalz von 9-(1 j3-DihycLroxy-2-propoxy-· methyl)-guanin als weißes Pulver.

Beispiel 3

.Das Natriumsalz von 9-0,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin wurde in einer Mindestmenge Wasser gelöst, und verdünnte Salzsäure wurde- zugefügt, um den pH Wert auf 7 einzustellen. Aus der Lösung kristallisierte 9-0,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin; F.' 250⁰C u.Zers.

3 e i s ρ i e. .1 4

Das. folgende Beispiel veranschaulicht die Herstellung re- -präsentativer pharmazeutischer Formulierungen, die eine aktive Verbindung der Formel (I) enthalten.

'24 00 7 b 7

Aktive Verbindung 0,2-2 g

Span 60 2 g

Tween 60 2 g

Mine ralöl 5 g

Petrolatum 10 g

Methylparaben 0,15 g

Propylparaben 0,05 g

butyliertes Hydroxyanisol 0,01 g

Wasser q.s. 100 ml

Alle obigen Bestandteile mit Ausnahme des Wassers- wurden gemischt . und unter Rühren ,auf 60°C erhitzt. Dann wurde unter heftigem Rühren eine ausreichende Wassermenge von 60°C zugefügt, um 100 g der Cremeformulierung zu ergeben, die dann auf Zimmertemperatur abgekühlt wurde.

Die folgende Formulierung ist zur intraperitonealen und intramuskulären Injektion geeignet.

Aktive Verbindung 0,5 g

Propylenglykol 20 g

Polyethylenglykol 20 g

Tween SO · 1g

0,9-%ige Kochsalzlösung q.s. 100 ml

Die aktive Verbindung wirde in Propylenglykol, Polyethylenglykol 400 und Tween SO' gelöst. Dann wurde unter Rühren' eine ausreichende Menge an O,9-/oiger Kochsalslösung zugefügt, um 100 ml der IP oder IM Lösung zu ergeben, die durch ein 0,2 Micron Membranfilter filtriert und unter sterilen Bedingungen verpackt wurde.

Die folgende Formulierung eignet sich zur intravenösen Injektion.

240075 7 ^ITT^

C. _i^V_il_FormtLlierung

aktive Verbindung 0,5

0,9-%ige Kochsalzlösung 100 g

Die aktive Verbindung wurde zu 100 ml 0,9-^iger Kochsalzlösung unter Rühren zugefügt, um 100 ml i.v. Lösung zu ergeben, die durch ein 0,2 Micron Membranfilter filtriert und unter sterilen Bedingungen verpackt wurde·

D. Tablettenformulierung

Gew.-Teile

aktive Verbindung 200

Magnesiumstearat 3

Stärke 30

Lactose 116

Polyvinylpyrrolidon .3

Die obigen Bestandteile wurden kombiniert und unter Verwendung von Methanol als Lösungsmittel granuliert. Dann wurde die Formulierung getrocknet und in einer geeigneten Tablettiermaschine zu Tabletten"geformt (die 200 mg aktive Verbindung enthielten).

Beispiel 5

Die außergewöhnliche antivirale Aktivität der neuen Verbindung wird durch die folgenden Testverfahren ve rans chauli cht:

Der Herpes simplex Virus 2, Stamm G, wurde zur Infektion in HEp-2-Zellkultüren hergestellt. Der Virus wurde 1 Stunde adsorbiert, frisches Medium wurde auf die Zellen gegeben, und diese wurden bei 35⁰C bebrütet, bis alle Zellen infiziert waren. Die Zellsuspension wurde bei -70 C eingefroren aufgetaut und zur Entfernung von Zellabfall zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit wurde aliquotiert und in

-o

gefrorenem Zustand bei -70⁰C bis zur Verwendung gelagert.

C rj

Sine 10 ' Verdünnung der überstehenden Flüssigkeit lieferte eine 50 % der Zellkultur infizierende Dosis - (CCID _Q

240075 7 - ₂₂ -

3 7 in HEp-2-Zellen, und eine 10 ' Verdünnung ergab eine zu 50 % lethale Reizung (LC_Rn) bei Mäusen.

Gruppen von 20 weiblichen Swiss Webster Mäusen (von 15 bis 17 g) wurden intraperitoneal unter Verwendung von 0,2 ml EMEM, der 10 LD™ Virus pro Maus enthielt, gereizt. Mäuse,

0 5 die mit 10 ' mehr oder weniger Virus als die 10 LD™ Reizung gereizt waren, dienten als Virulenzkontrolle um< sicherzustellen, daß das Modell richtig arbeitete.

Die Behandlung mit den Testverbindungen begann 6 Stunden nach der Reizung. Den in Gruppen zu je 20 Tieren geteilten Mäusen wurden die Verbindungen in Kochsalzlösung s.c. bei 5 mg/kg, 10 mg/kg und 20 mg/kg verabreicht. Eine Gruppe von 20 Mäusen wurde als Kontrolle verwendet und erhielt nur Kochsalzlösung s.c. Die Behandlung wurde 24, 48, 72 und 96 Stunden nach der Reizung wiederholt.

Testverbindungen waren die neue Verbindung und drei Verbindungen der US PS 4 199 574 mit Strukturen, die teilweise der neuen Verbindung ähnlich sind.

Testverbindung Dosis Überlebende_aus_20

mg/kg Tage_nach_Reliüng~

12 14 21·

unbehandelte Kontrolle

9-(1,3-Dibenzoxy-2-propoxymethyl)-adenin

0 2 1 1

0 2 0 1

0 2 0

30 9-(1,3-Dibenzoxy-2-propoxymethyl)-6-mercaptopurin

2 0 1

0 0 0

9-(1-Hydroxy-2-ethoxymethy1)-guanin

1 3 5

1 5 4

5· 10

15 19

1 4 13

20 19 18

14 18 15

240075 7

Bei den obigen Ergebnissen zeigt ein Vergleich zwischen der Anzahl der überlebenden Tiere, denen die neue Verbindung verabreicht wurde, und der Anzahl überlebender Tiere, denen die drei bekannten Verbindungen verabreicht worden waren, deutlich die merklich überlegene' antivirale Aktivität der neuen Verbindung.

Claims

240075 7 . 2, .

Kohlenstoffatomen, vorzugsweise Methyl,' ist, substituiert ist, dearalkyliert; oder

c) eine Verbindung der Formel

Jl _N

^ΗΝ!Γ"\ (VIII)

^K η CH₂OCHCH₂OR¹

CH₂OR¹

in welcher R und R' wie oben definiert sind, dearylalkyliert und deacyliert; oder

d) 9-0,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin in ein . pharmazeutisch annehmbares Salz umwandelt; oder

e) ein Salz des 9-0,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanins in 9-0,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin umwandelt; oder

f) ein Salz des 9-(1,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanins in ein pharmazeutisch annehmbares Salz desselben umwandelt.
2. Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß" man entsprechend den Stufen a), b), c) bzw. e) des Anspruchs 1 9-O,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin herstellt.
3. Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß

man

a) aus dem 9-(1,3-Dihydroxy-2-propoxymethyl)-guanin gemäß Anspruch 1, Stufe d), oder b) aus einem anderen Salz des 9-(1,3-Dihydroxy-2-prop-

oxymethyl)-guanin gemäß Anspruch 1, Stufe f) das Natriumsalz herstellt.