DD238395A1 - Verfahren zur selektiven fixierung von biologisch aktiven stoffen - Google Patents
Verfahren zur selektiven fixierung von biologisch aktiven stoffen Download PDFInfo
- Publication number
- DD238395A1 DD238395A1 DD27753285A DD27753285A DD238395A1 DD 238395 A1 DD238395 A1 DD 238395A1 DD 27753285 A DD27753285 A DD 27753285A DD 27753285 A DD27753285 A DD 27753285A DD 238395 A1 DD238395 A1 DD 238395A1
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- solid phase
- organic medium
- item
- biologically active
- liquid
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 239000013543 active substance Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 claims abstract 2
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 5
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims description 2
- 150000004292 cyclic ethers Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 229910001507 metal halide Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000005309 metal halides Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 abstract description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 abstract description 5
- 239000002773 nucleotide Chemical group 0.000 abstract description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 abstract description 5
- 108090000623 proteins and genes Chemical group 0.000 abstract description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 abstract description 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 abstract 1
- 239000013612 plasmid Chemical group 0.000 abstract 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 9
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N acetylacetone Chemical compound CC(=O)CC(C)=O YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Natural products CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 2
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- VIZORQUEIQEFRT-UHFFFAOYSA-N Diethyl adipate Chemical group CCOC(=O)CCCCC(=O)OCC VIZORQUEIQEFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 229920001744 Polyaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008049 diazo compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000010534 nucleophilic substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Es wird ein Verfahren zur selektiven Fixierung von Einzelkomponenten aus Gemischen biologisch aktiver Stoffe an Traegermaterialien zur Verfuegung gestellt, das darin besteht, dass die feste Phase mit der den biologisch aktiven Stoff oder das Stoffgemisch enthaltenden fluessigen Phase in Gegenwart eines fluessigen organischen Mediums in Kontakt gebracht wird oder dass nach Aufnahme des biologisch aktiven Stoffes oder des Stoffgemisches durch die feste Phase der Kontakt mit dem organischen Medium erfolgt. Das Verfahren kann vorteilhaft zur Trennung und Fixierung von Nukleinsaeuren, Nukleotiden, Proteinen, Plasmiden, Genfragmenten usw. aus Gemischen an feste Traeger angewendet werden.
Description
Die Erfindung betrifft ein Vefahren zur selektiven Fixierung von biologisch aktiven Stoffen an Trägermaterialien. Das Verfahren kann für analytische und präparative Aufgaben in der Molekularbiologie, Biochemie und Medizin angewandt werden.
Die Bindung von biologisch aktiven Stoffen (z. B. Proteine, Nukleinsäuren) an die verschiedendsten Träger ist bekannt, z. B.
werden mit Trihalogen-Triazinen aktivierte Trägermaterialien und makromolekulare Massen mit chemisch aktiven Füllstoffen in EP 0134025 beschrieben. Dabei konnten bisher die einzelnen Komponenten von Gemischen der unterschiedlichsten biologisch aktiven Stoffe (besonders wichtig bei Zellaufschlüssen) nur statistisch gleichberechtigt an den Träger gebunden werden. Hierbei wurden die Träger in wässrigen Lösungen in Kontakt mit den biologisch aktiven Stoffen gebracht und ausschließlich in wässrigen Lösungen weiter verarbeitet.
Oligonukleotide konnten bisher nicht an Träger dieser Art gebunden werden.
Nitrocellulose bindet nur Nukleinsäurefragmente größer als 50 Nukleotide. Die Fixierung längerer Fragmente erfolgt hierbei durch mehrstündiges Backen bei 800C.
Weiterhin ist bekannt, Oligonukleotide an Ionenaustauscher zu binden. Dabei kann keine Selektivität erreicht werden, (siehe z. B.
A. Rosenthal, S. Schwertner, V. Hahn, H. D. Hunger, Solidphase Methods für Sequencing of Nucleic Acids I. Simultaneous Sequencing of different Oligonucleotids Using a New, Mechanically Stable Anion-Exchange Paper, Nucleis Acid Research, Vol. 13, No.4, S. 1173-1184 (1985).
Ziel der Erfindung ist es, ein Analyseverfahren für biologisch aktive Stoffe zur Verfügung stehen.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zu Grunde, ein Verfahren zur Verfugung zu stellen, daß die selektive Fixierung von Einzelkomponenten aus Gemischen biologisch aktiver Stoffe an Trägermaterialien erlaubt.
Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß die feste Phase mit der den biologisch aktiven Stoff oder das Stoffgemisch enthaltenden flüssigen Phase in Gegenwart eines flüssigen organischen Mediums in Kontakt gebracht wird, ode daß nach Aufnahme des biologisch aktiven Stoffes oder des Stoffgemisches durch die feste Phase der Kontakt mit dem organischen Medium erfolgt.
Biologisch aktive Stoffe im Sinne der Erfindung sind z. B. Proteine, Nucleinsäuren, Oligonucleotide, Nucleotide, Aminosäuren, Peptide, Plasmide, Genfragmente usw. Bei der Fixierung der biologisch aktiven Stoffe an Trägersysteme wurde gefunden, daß in Gegenwart organischer Lösungsmittel die einzelnen Verbindungsklassen in diesen organischen Lösungsmitteln bei der nucleophilen Substitution ein unterschiedliches Verhalten aufweisen. Dadurch können aus Gemischen biologisch aktiver Stoffe Einzelkomponenten selektiv zur Reaktion gebracht werden. Überraschend wurde gefunden, daß auf diesem Wege Oligonucleotide und Nucleotide selektiv aus Gemischen abgetrennt und fixiert werden können.
Als feste Phase sind in Wasser oder organischen Lösungsmitteln unlösliche anorganische oder organische niedermolekulare oder makromolekulare Stoffe oder deren Gemische geeignet, wobei diese Stoffe zur Ausbildung mindestens einer kovalenten Bindung zum biologisch aktiven Stoff in der Lage sind. Besonders geeignet als feste Phase sind Trägermaterialien, die aus synthetischen und/oder natürlichen Polymeren hergestellt werden und die vor ihrer Verwendung chemisch aktiviert werden. Eine solche Aktivierung kann mit Säurehalogeniden, Bromcyan, Di-oder Polyaldehyden, Diepoxiden, Diisocyanaten, Diazoverbindungen, Carbodiimiden usw. erfolgen.
Als besonders geeignet für das erfindungsgemäße Verfahren sind makromolekulare Massen, die aus einer makromolekularen Verbindung in einer Konzentration von 5-80 Vol.-%, einer makromolekularen Verbindung mit4,6-Dihalogen-1,3,5-triazin-Gruppierungen in einer Konzentration von 1-80 Vol.-%, aus 2,4,6-Trihalogen-1,3,5-Triazin in einer Konzentration von 0,5-50 Vol.-%, aus Metallhalogeniden in einer Konzentration bis zu 20 Vol.-%, ggf. puffernden Substanzen bis zu 5 Vol.-%, ggf. flüssigen Dispersionsmitteln und ggf. weiteren Zusatzstoffen bestehen. Ein Verfahren zur Herstellung solcher, für das erfindungsgemäße Verfahren besonders geeigneter fester Phasen, wird z.B. in der EP 134025 beschrieben (z.B. CCA-Papier). Die komplexe Zusammensetzung dieser Träger ist besonders für die selektive Fixierung einzelner Komponenten aus biologischen Stoffgemischen geeignet. ι
Als organische Lösungsmittel sind mit Wasser mischbare organische Stoffe geeignet. Diesen können bis zu 35 Vol.-% mit Wasser nichtmischbare organische Flüssigkeiten zugesetzt werden. Besonders geeignet für das erfindungsgemäße Verfahren sind als flüssiges organisches Medium polare Lösungsmittel wie Acetonitril, Dimethylsulfoxid, Dimethylformamid, Ethanol, Propanol usw.
Bevorzugt werden als flüssige organische Medien zyklische Ether, z. B. Tetrahydrofuran und Dioxan. Als Zeitpunkt für das Inkontaktbringen des organischen Mediums mit der festen Phase kommt prinzipiell jede Stufe einer Trennoperation mit biologisch aktiven Stoffen in Betracht. Besonders geeignet ist das erfindungsgemäße Verfahren bei Tüpfel- und Blottingverfahren. Bei diesen Verfahren kann das organische Medium mit der festen Phase vor oder während der Durchführung angewendet werden. Bevorzugt ist die Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens nach einem Tüpfeloder Blottingprozeß.
Vorteilhaft angewandt wird das erfindungsgemäße Verfahren zur Fixierung von Ribonukleinsäuren, Desoxiribonukleinsäuren oder Proteinen aus einem komplexen Gemisch biologisch aktiver Substanzen an feste Trägermaterialien. Besonders geeignet ist das erfindungsgemäße Verfahren zur Fixierung von Nukleinsäurefragmenten an Trägermaterialien, z. B. im genomischen Blotting. Hervorzuheben ist, daß es mit dem erfindungsgemäßen Verfahren erstmals möglich wird, aus komplexen Gemischen heraus Oligonukleotide selektiv an eine feste Phase, insbesondere an Flächenträger zu fixieren.
Ein nach Maxam und Gilbert-Technik 32P markiertes, gespaltenes Oligonukleotid (14 Nukleotide: d ACCTACCf5UGGTGGT) wurde in einem 20%igen Polyacrylamidgel, 7 M Harnstoff aufgetrennt (Sequenzgel) und das Gel zunächst autoradiographiert.
Danach wurde das Gel direkt auf der Glasplatte mit einem 0,1 M Phosphatpuffer pH 5,5 + 1 % Essigsäure befeuchtet und ebenfalls befeuchtetes CCA-Papier (EPO 134025) auf das Trenngel aufgelegt. Darüber wurde eine Schicht dickeres Filterpapier (FN 18) und ein Stapel Zellstoff gelegt und unter Beschwerung die Oligonukleotide auf das CCA-Papier übertragen (3 h, Raumtemperatur, Kontrolle mit Handcounter). Anschließend erfolgte die Fixierung der Oligonukleotide über Nacht in einem Dioxanbad (Raumtemperatur).
Nach der Fixierung wurde der Träger intensiv in einmal SSC 0,1% SDS bei 650C gewaschen. (1x SSC = 0,15M NaCI 0,015M Natriumeitrat).
Nach der Waschung sind in der Autoradiographie alle Banden sichtbar. Die Sequenz ist eindeutig lesbar. Durch das Verfahren konnten sämtliche Fragmente von 14 bis 1 Nukleotid fixiert werden.
Als Kontrolle mitgeführtes Filterpapier zeigt keinerlei Fixierung.
Das Verfahren wurde wie unter Beispiel 1 beschrieben durchgeführt. Anstelle Dioxan wurde Dimethylformamid eingesetzt. Die Sequenz ist auf CCA-Papier vollständig lesbar.
Beispiel 3 RNS-Tüpfeltest
Verschiedene Konzentrationen von tRNS (100,75,45,20,10,2 /xg/μΙ) wurden jeweils mit 32P markierter RNS (1 OOOcpm/μ,Ι) versetzt und auf CCA-Papier aufgetüpfelt (jeweils 1 μΙ).
Danach wurden die einzelnen Papierstreifen in verschiedenen Lösungsmitteln bei Raumtemperatur fixiert.
Ein nicht fixierter Streifen wurde als Kontrolle mitgeführt. Nach der Fixierung erfolgte eine Waschung der Streifen und eine Autoradiographie wie unter Beispiel 1 beschrieben. Als Lösungsmittel wurden verwendet: Ethanol, Formamid, Acetylaceton, Aceton, Adipinsäurediäthylether, Acetonitril, Dimethylsulfoxid, Dioxan/Xylol, Dioxan, Xylol, Dibutylether, Essigsäureäthylester, Dimethylformamid, 10% Ethanolamin, Tetrahydrofuran.
Davon zeigen nur Dimethylformamid, Dioxan, Acetonitril und Ethanol für RNS an CCA-Papier fixierende Wirkung.
Essigsäurediäthylester, Tetrahydrofuran, Acetylaceton, Aceton verringern die RNS-Bindung unter den Normalwert.
Claims (8)
- Erfindungsanspruch:1. Verfahren zur selektiven Fixierung von biologisch aktiven Stoffen aus flüssiger Phase unter Verwendung einer festen Phase, gekennzeichnet dadurch, daß die feste Phase mit der den biologisch aktiven Stoff oder das Stoffgemisch enthaltenden flüssigen Phase in Gegenwart eines flüssigen organischen Mediums in Kontakt gebracht wird oder daß nach Aufnahme des biologisch aktiven Stoffes oder des Stoffgemisches durch die feste Phase der Kontakt mit dem organischen Medium erfolgt.
- 2. Verfahren nach Punkt !,gekennzeichnet dadurch, daß als feste Phase in Wasser oder organischen Lösungsmitteln unlösliche anorganische oder organische niedermolekulare oder makromolekulare Stoffe oder deren Gemische verwendet werden, die Gruppierungen enthalten, die mindestens eine kovalente Bindung zum biologisch aktiven Stoff ausbilden.
- 3. Verfahren nach Punkt 1 und 2, gekennzeichnet dadurch, daß als feste Phase eine makromolekulare Masse mit chemisch aktiven Füllstoffen verwendet wird, die aus— einer makromolekularen Verbindung in einer Konzentration von 5-80 Vol.-%.— aus einer makromolekularen Verbindung mit4,6-Dihalogen-1,3,5-triazin-Gruppierungen in einer Konzentration von 1-80 Vol.-%.— aus 2,4,6-Trihalogen-1,3,5-triazin in einer Konzentration von 0,5-50 Vol.-%.— aus Metallhalogeniden in einer Konzentration bis zu 20 Vol.-%.— gegebenfalls aus puffernden Substanzen bis zu 5 Vol.-%,— gegebenfalls aus einem flüssigen Dispersionsmittel und
gegebenfalls weiteren Zusatzmittelnbesteht. - 4. Verfahren nach Punkt 1-3, gekennzeichnet dadurch, daß als flüssiges organisches Medium ein oder mehrere mit Wasser mischbare Lösungsmittel verwendet werden, die bis zu 35 Vol.-% mit Wasser nicht mischbare Flüssigkeiten enthalten können.
- 5. Verfahren nach Punkt 1-5, gekennzeichnet dadurch, daß als flüssiges organisches Medium polare Lösungsmittel wie Acetonitril, Dimethylsulfoxid, Dimethylformamid und Ethanol verwendet werden.
- 6. Verfahren nach Punkt 1-5, gekennzeichnet dadurch, daß als flüssiges organisches Medium zyklische Ether wie Dioxan oder Tetrahydrofuran verwendet werden.
- 7. Verfahren nach Punkt 1-6, gekennzeichnet dadurch, daß das Inkontaktbringen des organischen Mediums mit der festen Phase vor oder während eines Tüpfel- oder Blottingverfahrens erfolgt.
- 8. Verfahren nach Punkt 1-6, gekennzeichnet dadurch, daß das Inkontaktbringen des organischen Mediums mit der festen Phase nach Tüpfel- oder Blottingverfahren erfolgt.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD27753285A DD238395A1 (de) | 1985-06-19 | 1985-06-19 | Verfahren zur selektiven fixierung von biologisch aktiven stoffen |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD27753285A DD238395A1 (de) | 1985-06-19 | 1985-06-19 | Verfahren zur selektiven fixierung von biologisch aktiven stoffen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD238395A1 true DD238395A1 (de) | 1986-08-20 |
Family
ID=5568744
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD27753285A DD238395A1 (de) | 1985-06-19 | 1985-06-19 | Verfahren zur selektiven fixierung von biologisch aktiven stoffen |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD238395A1 (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0455905A3 (en) * | 1990-05-11 | 1992-10-07 | Microprobe Corporation | Solid supports for nucleic acid hybridization assays and methods for covalently immobilizing oligonucleotides |
-
1985
- 1985-06-19 DD DD27753285A patent/DD238395A1/de not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0455905A3 (en) * | 1990-05-11 | 1992-10-07 | Microprobe Corporation | Solid supports for nucleic acid hybridization assays and methods for covalently immobilizing oligonucleotides |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE68919281T2 (de) | Ladungsmodifizierte hydrophobe Membranmaterialien und Verfahren zur Herstellung. | |
| DE3884016T2 (de) | Enzym-Immobilisierung und Bioaffinitätstrennungen mit Perfluorcarbon-Polymer-Trägern. | |
| DE69221980T2 (de) | Verfahren und vorrichtung zur bestimmung von dns-nukleotid-sequenzen | |
| DE69430909T2 (de) | Dns-sequenzbestimmung durch massenspektrometrie auf dem weg des abbaus mit exonuklease | |
| DE69433811T2 (de) | Dns - sequenzierung durch massenspektronomie | |
| DE69825496T2 (de) | Verfahren zur Erstellung von Arrays hoher Dichte | |
| DE3689954T2 (de) | Amplifiziertes hybridisierungstestverfahren. | |
| DE3043981C2 (de) | ||
| DE3750198T3 (de) | Hybridisierungssonden. | |
| DE60208278T2 (de) | System und Verfahren zum Testen von Nukleinsäuremolekülen | |
| DE3752178T2 (de) | Verfahren zum Nachweis HTLVI- und HTLVII-Viren mittels Hybridizierung | |
| DE69124897T2 (de) | Vorrichtung zur Gewinnung von durch Kapillarelektrophorese getrennten Proben auf einer Membran | |
| DE69032847T2 (de) | Hydrophobe Nukleinsäure-Sonde | |
| EP0120376B1 (de) | Verfahren zur Durchführung von Hybridisierungsreaktionen | |
| DE3301833A1 (de) | Verfahren zur simultanen synthese mehrerer oligonocleotide an fester phase | |
| DE502588T1 (de) | Verfahren zur Amplifizierung von Nukleinsäuresequenzen. | |
| DE69427333T2 (de) | Trockene Elemente, Testgeräte und-ausstattungen sowie Verfahren zum Bestimmen vn Peroxidasemarkieren Analyten mit Hilfe von Chemiluminescenz-Reagenzsystemen | |
| DE69624096T2 (de) | Verfahren zur reinigung kurzer nukleinsäuren | |
| EP0154246A1 (de) | Phasenträger für die Verteilungschromatographie von Makromolekülen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung | |
| DE3935098C2 (de) | Chromatographisches Trägermaterial sowie seine Verwendung in einem Verfahren zur chromatographischen Trennung von Nukleinsäuren | |
| DE3485811T2 (de) | Molekulare genetische sonde und verfahren zu ihrer herstellung, testmethode und satz in denen diese molekulare genetische sonde gebraucht wird. | |
| EP0664724B1 (de) | Verfahren für die gewinnung und die umpufferung und/oder einengung von gelösten makromolekülen eines makromolekülgemisches | |
| DD238395A1 (de) | Verfahren zur selektiven fixierung von biologisch aktiven stoffen | |
| DE3490085C2 (de) | Verfahren und Vorrichtung zum Spalten von Desoxyribonucleins{ure | |
| DE69935232T2 (de) | Produkt und Verfahren zum Auftrennen einer Probe, enthaltend genetisches Material aus mehreren Quellen, unter Verwendung eines festen Mediums |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ENJ | Ceased due to non-payment of renewal fee |