DD264924A5

DD264924A5 - Verfahren zur herstellung von pyrimidin-nucleosiden

Info

Publication number: DD264924A5
Application number: DD87310427A
Authority: DD
Inventors: Saad G Rahim; Dorothy J M Purifoy
Original assignee: ��@��@��@��k��
Priority date: 1986-12-15
Filing date: 1987-12-14
Publication date: 1989-02-15
Also published as: FI941523A7; EP0417560A1; NO167576B; MX9203216A; CS275402B6; CA1319143C; PL160322B1; CS916187A2; AU626041B2; PL269462A1; IL84810A0; LT2064B; JPH0378370B2; PH24104A; PL277927A1; CN87108265A; PH24870A; EP0272065A2; CS275398B2; EP0272065B1

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung bestimmter 5-substituierter Pyrimidin-nucleoside und pharmazeutisch vertraegliche Derivate davon, die fuer die Behandlung und Prophylaxe von Varicella-Zoster-Virus, Cytomegalovirus- und Epstein-Barr-Virus-Infektionen wirksam sind und eine niedrige Toxizitaet besitzen.

Description

-3- 264 924 Charskteristik der bekannten technischen Lötungen

Von den DNA-Viren ist die Herpes-Gruppe die Quelle der häufigsten Virenerkrankungen beim Menschan. Die Gruppe besteht aus Herpes-simplex-Virus (HSV), Varicella-Zoster (VZV), Cytomegalovirus (CMV) und Epstein-Barr-Virus (EBV). Varicella-Zoster-Virus (VZV) ist ein Herpes-Virus, der Windpocken und Gürtelrose verursacht. Windpocken ist die Primarerkrankung in einem Wirt ohne Immunität und bei kleinen Kindern gewöhnlich eine leichte Erkrankung, gekennzeichnet durch einen bl&schenförmigen Heutausschlag und Fieber. Gürtelrose oder Zoster ist die wiederkehrende Form dor Krankheit, welche bei Erwachsenen auftritt, c ie früher mit Varicella-Zoster-Virus infiziert wurden. Die klinischen Krankheitsäußerungen der Gürtelrose sind charakteristisch d r.ch Neuralgio und einen blaschenförmigen Hautausschlag, der halbseitig und dermatomal in der Verteilung ist. Die Ausbreitung der Entzündung kann zu Paralyse oder Krämpfen führen. Koma kann eintreten, wenn die Hirnhäute angegriffen werden. Bei Patienten mit Immundefekt kann sich VZV unter Hervorrufen von schwerer oder sogar tödlich verlaufender Krankheit ausbreiten. VZV ist von ernst zu nehmender Bedeutung bei Patienten, welche Immunosuppressiva für Transplantationszwocke oder zur Behandlung von maligner Neoplasie erhalten und ist eine ernst zu nehmende Komplikation bei AIDS-Patienten infolge ihres geschwächten Imrnunsystems.

Die Infektion mit CMV fühlt gemeinsam mit andnren Herpos-Viren zu einer lebenslangen Verbindung von Virus und Wirt und das Virus kann sich im Anschluß an eine Primärinfektion während einer Anzahl von Jahren ausbreiten. Klinischo Ergebnisse liegen im Bereich von Tod und schwerer Krankheit (Mikrozephalie, Hepatosplenomegalie, Gelbsucht, geistige Minderontwicklung) durch mangelndes Gedeihen, Empfindlichkeit für Brust- und Ohreninfektionen bis zu einem Fehlen von irgendeiner offensichtlichen Krankheitsschddigung. Eine CMV-Infaktion bei AIDS-Patienten ist dine überwiegende Ursache der Morbiditat, du sie bei 80% der erwachsenen Bevölkerung in einer latenten Form vorhanden ist und bei immunogefahrdeten Patienten reaktiviert werden kann.

Dos Epstein-Barr-Virus, (E BV) verursacht das Pfeiffer'sche Drüsenfieber (Mononucleosis infectiosa) und es wird auch angenommen, daß es dos verursachende Mittel von Nasenrachen-Krebs, immunoblastischem Lymphom, Burkitt's-Lymphom und Haar-Leukoplakie ist.

Die Aufmerksamkeit wurde bevorzugt auf Nucleosid-Analoga zur Behandlung von Herpds-Virus-Infektionen gerichtet. Eine Verbindung, ursprünglich von Intoresse als ein brauchbares Zwischenprodukt, ist 2'-Deoxy-5-ethinyluridin. dassen Synthese von Barr et al., (J. Chem. Soc. Parkin Trans. 111978), 1263) beschrieben wurde. Diese Verbindung wurde in vitro auf ihre antivirale Aktivität gegen Vaccinia und Herpes-simplex untersucht, beispielsweise wie dies von Wnlknr et al., (Nucleic Acid Res., Special Pub. No. 4,1978) und in der GB-PS 1601020 beschrieben wurde, jedoch zeigte sie keinerlei Effekt bei der Verwendung in der medizinischen Chemotherapie beim Menschen.

Die EPA-Anmeldung 86305297 beschreibt und beansprucht die Verwendung von 2'-Dioxy-5-ethinyluridin und seiner pharmazeutisch verträglichen Derivate bei der Behandlung odor der Prophylaxe von durch Cytomogalovirus (CMV) oder Varicella-Zoster-Virus (VZV) verursachte Virusinfektionen boim Menschen.

Ziel der Erfindung

Es war nun das Ziel und dio Autgebe der vorliegenden Erfindung, nach anderen zur Behandl jng von Herpes-Infektionen geeigneten Verbindungen mit herabgesetzter Toxizität zu suchen und Verfahren zu ihrer Herstellung zu schaffen.

Darlegung des Wesens der Erfindung

Im Verlaufe von Untersuchungen, die zu der vorliegenden Erfindung führten, wurde gefunden, daß bostimmte andere Pyrimidinnucleoside, gekennzeichnet durch die Anwesenheit einer ungesäf igten Gruppe in der B-Stellung, von besonderem Wert in der medizinischen Therapie, insbesondere bei der Behandlung von b, stimmten Virusinfektionen, wie weiter unten beschrieben, sind. Diese Verbindungen weisen auch den Vorteil auf, daß sie, wie festgestellt wurde, einen relativ niedrigen Toxizitätsgrad besitzen, wie dies in vitro durch Zellkultur-ToxizitA*8versuche bestimmt wurde.

Bestimmte 6-substitui(*rte Nucleoside, insbesondere 2'-Deoxy-5-ethinylcytidin, 2'-Deoxy-6-(1-propinyl)-uridin, 1-(ß-D-Arabinofuranosyll-ö-ethinyluracil, (1-(ß-D-arabinofuranosyl)-5-propynyluracil), 1(0 D-ArabinofuranosyD-B-ethinylcytosin, die nachfolgend in ihrer Verwendung zur Behandlung von VZV-, CMV- und EBV-Infektionen beschrieben werden, wurden früher in J. Med. Chem. (1983). 26 (5), 661-«66, J. Mod. Chem. (1933), 26 (9), 1252-1257, Antimicrobial Agents Chomother. (1980), 17 (β), 1030-1031, Nucleic Acids Symp. Ser. (1981)9,103-106 und Biochem. Pharmacol. (1983) 32(4), 726-729, beschrieben. Die vorstehend gi nannten Pyrimidinnucleoside können durch die nachstehende allgemeine Formel (I) wiedergegeben werden:

——R

(I)

..y

HO

worin X eine Vinylen- oder Ethinylen-Gruppe, R' eine Oxo- oder Imino-Gruppe, R¹ ein Wasserstoffatom, eine Ci-Alkyl-, eine verzweigte C^₄- odoi Cycloalkyl-Gruppe, z. B. lsopropyl oder Cyclopropyl, R¹ ein Wasserstoffatom oder eine Acyl-Gruppe, ζ. Β. einii C^AIkanoyl- oder Benzoyl-Gruppe, gegebenenfalls beispielsweise durch ein oder mohrere Halogen-, Alkyl-, Hydroxy- oder Alkoxy-Subttituenten substituiert und R⁴ ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxy-Gruppe bedeutet; vorausgesetzt, daß '

(a) falls jeder der Reste R¹, R¹ und R⁴ ein Wasserstoffatom bedeutet, R' keine Oxo-Gruppe ist, und

(b) fells X eine Vinylen-Gruppe ist und R² Wasserstoff bedeutet, R¹ eine Acyl-Gruppe bedeutet.

Es iat ersichtlich, daß die Verbindung der Formol (I), falls R' keine Acyl-Gruppe bedeutet, in ihrer tantomeren Form vorliegen Die oben erwähnten Pyrimidinnucleoside schließen ebenso auch die pharmazeutisch vertraglichen Derivate derartiger Verbindungen ein, d. h. irgendein pharmazeutisch vertragliches Salz, ein Ester, oder ein Salz · ' »r» derartigen Esters, oder

irgendeine andere Verbindung, welche nach Verabreichung an einen menschlichen Patler , fähig ist, den antiviral aktiven

Metabolit, oder einen Rest desselben (J akt oder indirekt) zu schaffen. Derartige Pyrimidinnucleoside und v.ren Derivate werden nachfolgend als die erfind· gtgemäß hergestellten Verbindungen

bezeichnet.

Bevorzugte Verbindungen der allgemeinen Formel (I) schließen solche ein, in welchen

(a) X eine Ethinylen-Gruppe bedeutet, insbesondere wenn R' ein Wasserstoffatom oder eine Methyl-Gruppe ist;

(b) R* ein Wasserstoffatom oder eine Benzoyl-Gruppe bedeutet; und/oder

(c) R⁴ ein Wasserstoff atom bedeutet, insbesondere wenn X eine Ethinyl-Gruppe und R' eine Methyl-Gruppe ist.

Die folgenden neuen Verbindungen sind, insbesondere wegen ihrer besonders wirksamen antiviralen Aktivität, insbesondere gegen VZV und in manchen Feilen gegen CMV, bevorzugte orfindungsgemäß hergestellte Verbindungen.

(a) 3-N-Benzoyl-2'-deoxy-5ethinyluridin

(b) 3-N-Benzoyl-2'-deoxy-5-proplnyluridin

(c) 2'- Deoxy-5-( 1 -proplnyD-cytidin

(d) 1 -(ß-D-Arablnof uranosyD-5-propinylcytosin.

Besonders bevorzugt sind die Verbindungen (b) und (c), die eine kräftige anti-VZV-Aktivität besitzen. Außerdem werden die nachfolgend aufgeführten, gemlß der Erfindung hergestellten Verbindungen bevorzugt, insbesondere

wegen ihror besonders kräftigen antiviralen Aktivität, besonder» wegen VZV und in manchen Feilen gegen CMV und EBV.

M 2'-Deoxy-5ethinylcytidin

(f) 2'-Deoxy-6-(1-propinyl)-uridin

(g) MßD-Arablnofuranosyll-S-ethinylurecil (h) 1 -(ß-D-ArabinofuranosyU-S-propinyluracil (i) 1-(ß-D-Arablnofuranosyl)-6-othinylcytosin.

Insbesondere bevorzugt sind die Verbindungen (f) und (g) auf der Basis ihrer kräftigen anti-VZV-Aktivitat. Weitere neue, gemäft dem erfindungsgemeßen Verfahren hergestellte Verbindungen schließen ein:

(j) 1-(ß-D-Arabinofuranosyl)-3-N-bonzoyl-5-propinyluracil

(k) 1 (ß-DAraWnof uranosyl)-3-N-benzoyl-6-ethinyluracil

(I) 3NBenzoyl?'deoxy-5 vinylurldln

(m) 1 -(ß-D-Arabinof uranosyl)-3-N-benzoyl-5-vinyluracil.

Ebenso auch pharmazeutisch verträgliche Salze und Ester derartiger Verbindungen, Insbesondere das Diacetat der Verbindung (e), nämlich 2'-Deoxy-3°,6'-di-O-acetyl-6-ethinylcytidln. Die obigen Verbindungen haben alle eine besonders hohe Aktivität gegen VZV, während die Verbindungen (a) und (e) ebenfalls eine hohe Aktivität gegen CMV besitzen, während die Verbindung (g) eine besonders hohe Aktivität gegenüber EBV aufweist.

Beispiele der durch solche Herpes-Vlren, wie CMV-, VZV- und EBV-Infektlonen hervorgerufenen klinischen Zustände, die mit den gemäß dieser Erfindung erhaltenen pharmazeutischen Zubereitungen behandelt werden können, schließen die oben angegebenen ein.

Bevorzugte Mono- und Diester gemäß dor Erfindung umfassen Carbonsäureester, in welchen der nicht-Carbonyl-toil der Ester-Gruppe ausgewählt ist aus geradkettigem oder verzweigtkettigem Alkyl, Alkoxyalkyl (7. B. Methoxymethyl), Carboxyalkyl (z. B. Carhoxyethyl), Aralkyl (z. B. Benzyl), Aryloxyalkyl (z. B. Phenoxymethyl), Aryl (z. B. Phenyl, gegebenenfalls substituiert durch Halogen, C^-Alkyl oder Ci <-Alkoxy); Sulfonatester, wie beispielsweise Alkyl- oder Aralkylsulfonyl (z. B. Methansulfonyl); und Mono-, Di- oder Triphosphatester, die blockiert oder nicht blockiert sein können, Aminosäureester und Nitratester. Bezüglich dor vorstehend beschriebenen Ester sei gesagt, daß irgendwelche in derartigen Estern vorhandene Alkylanteile vorteilhafterweise 1 bis 18 Kohlenstoff atome, insbesondere 1 bis 4 Kohlenstoffatome enthalten, es cei denn, daß ausdrücklich etwas anderes angegeben ist. Irgendein in derartigen Estern vorhandener Arylanteil enthält vorteilhafterweise oine Phenyl-Gruppe. Irgendeine Bezugnahme auf eine beliebige der vorstehenden Verbindungen schließt ebenso auch eine Bezugnahme auf ein pharmazeutisch verträgliches Salz derselben ein.

Erfindungsgemäß hergestellte Salze, die guoigneterweise in dor Therapie eingesetzt werden könnon, schließen physiologisch vertragliche Basensalze ein. 7. B. solche Salze, die sich von einer geeigneten Base ableiten, wie beispielsweise Alkalimetall- (z. B. Natrium), Erdalkalimetall- (z.B. Magnesium) -salze, Ammonium- und NXi- (worin X Ci .«-Alkyl ist) -salze. Das Verfahren der vorliegenden Erfindung schafft ferner die nachfolgenden neuen Verbindungen, nämlich diejenigen der Formel (I)B: Eine Verbindung der Formel (DB:

HO' '

worin X eine Vinylen· oder Ethinylen-Gruppe, R¹ eine Oxo- oder Imino-Gruppe, R² Wasserstoff oder eine C, _rAlkyl- oder oiro verzweigte Cy₄- oder Cycloalkyl-Grupr.«, z. B. Isopropyl oder Cyclopropyl, R¹ ein Wasserstoffatom oder eine AcylGruppe, ζ Β. eine C, ₄Alkanoyl· oder Benzoyl-Grupiio, gegebenenfalls beispielsweise durch ein oder mehrore Halogen-, Alkyl-, Hydroxy- oder Alkoxy-SubstiUionten substiuiert und R⁴ ein Wassorstoffatom odor eine Hydroxy-Gruppe bedeutet, vorausgesetzt, dad (a) falls R' Imino ist, R³ Wasserstoff ur d R⁴ Wasserstoff oder Hydroxy bedeutet, -X-R' keino Vinyl-, Ethinyl- oder Propenyl-

Gruppeist; b) falls R' Oxo ist, R³ Wasserstoff und R⁴ Wasserstoff oder Hydroxy bedeutet, -X-R² keine Vinyl-, Ethinyl-, 1 -PropertyI-, 1 -

Propinyl-, 1-Butenyl-, 1-Butinyl- oder 3,3,3-Trimethyl-1-propinyl-G(uppe ist oder ein pharmazeutisch verträgliches Dorivüt

derselben.

Dio vorliegende Erfindung schließt forner eino Verbindung der Formol (I)B zur Verwendung in der medizinischen Human-Dm eifindungsgomäß hergestellten Vorbindungen können auf irgendeinem für den zu behandelnden Zustand geeigneten Wog verabreicht werden, wobei geeignete Wege orale, rektale, nasale, örtliche (einschließend bukka'e und sublingualo), vaginale und parenteral«) (einschließend subkutane, intramuskuläre, intravenöse, intradermele, intrathokale und epidurale) Verabreichung einschließen. Es ist ersichtlich, daß der bovorzugte Verabreichungsweg mit beispielsweise dem Zustand des Empfängers verlieren kann.

Für jode der oben angegebenen Brauchbarkeiten und Indikationen wird die benötigt» Menge des oin.'elnon aktiven Bestandteils von einer Anzahl von Faktoren abhängen, welche die Schwere des zu behandelnden 2'jstands und die Identität des Empfängers einschließen und letzten Endes nach Gutdünken des im Dienst befindlichen Arztes abhängen. Im allgemeinen wird jedoch für jede dioser Brauchbarkeiten und Indikationen eino geeignete wirksame Dosis im Bereich von 0,1 bis 25On,g pro Kilogramm Körpergewicht des Empfängers pro Tag liegen, vorzugsweise im Beroich von 1 bis 100mg pro Kilogramm Körpergewicht pro Tag und besonders bevorzugt im Beroich von 5 bis 30mg pro Kilogramm Körpergewicht pro Tag; eine optimale Dosis ist etwa 15 mg pro Kilogramm Körpergewicht pro Tag (allo Gewichte dos aktiven Bestandtoils sind auf die Stammverbindung bezogen, es sei denn, dall etwas anderes angegeben ist; für Salzo und Ester derselben werden die Zahlen proportional erhöht). Die gewünschte Dosi 1 kann, falls gewünscht, in Form von zwei, drei, vior oder mehr Subdosen in geeigneten Intervallen über den Tag verabreicht werden. O'ose Subdosen können in Einheitsdosis-Formen, beispielsweise mit einem Gehalt von 10 bis 1000 mg, bevorzugterweisf von 20 biet 500mg und besonders bevorzugt von 100 bis 400mg des aktiven Bestandteils pro Einheiisdosis-Form verabreicht werden.

Obwohl es möglich ist, daß die Verbindungen allein verabreicht werden können, wird es bevorzugt, sie als pharmazeutische Formuliorungon zu präsentieren. Die Formulierungen der vorliegenden Erfindung onthalter· zumindest einen aktiven Bestandteil, wio oben dofiniort, zusammen mit einem oder mehreren verträglichen Trägern dafür und gegebenenfalls endor« therapeutische Bestandteile. Der ode.* die Träger müssen .verträglich" in dem Sinne sein, daß sie mit den anderen Bestandteilen der Formulierung verträglich und für die Empfänger derselben nicht schädlich sind.

Die Formulierungen schließen diejenigen ein, die für orulo, rektalo, nesalo, örtlicho (einschließend bukkale und sublirtguale), vaginale odor parenterale (einschließend subkutane, intramuskuläre, intravenöse, intradermale, intrathekale und epidurale) Verabreichung geeignet sind. Die Formulierungen könnon gfloignelerweiso in Einhoitsdosis-Form präsentiert werden und nach

beliebigen Verfahren hergestellt sein, die dem Fachmann auf dem Gebiet der Pharmazie bekannt sind. Derartigo Methoden (schließen die Stufe des Vereinigens des aktiven Bestandteils mit dem Träger ein, der aus einem oder mehreren Hebenbestandteilen besteht. Im allgemeinen werden die Formulierungen durch gleichmäßiges und inniges Vereinigen des aktiven Bestandteils mit flüssigen Trägern oder feinzerteilten festen Trägern, oder beiden, hergestellt und anschließend, falls erforderlich, das "rodukt geformt.

orale Verabreichung geeignet sind, können a!s diskrete Einheiten, wie beispielsweise als Kapseln, Cachets oder Tabletten verabreicht werden, von denen jede eine vorherbestimmte Menge des aktivon Bestandteils enthält; als ein Pulver oder als G ranulat; als eine Lösung oder eine Suspension in einer wässerigen Flüssigkeit oder einer nicht-wäjserigen Flüssigkeit; oder als e ne flüssige Öl-in-Wasser-Emulsion odor a's oine flüssige Wasser-in-öl-Emulsion. Der aktive Bestandteil kann auch als Bolus, Latwerge oder als Paste dargeboten werden.

Eine Tablette kann durch Pressen oder Formen, gegebenenfalls mit einem oder mehreren Nebenbestandteilen, hergestellt werden. Preßtabletten können durch Verprosson in einer geeigneten Maschine des aktiven Bestandteils in einer frei-flioßenden Form, wie beispielsweise als Pulver oder Granulat, gegebenenfalls gemischt mit einem Bindemittel (z.B. Polyvinylpyrrolidon (Povidon), Gelatine, Hydroxypropylmethylcollulose), Gleitmittel, inertes Verdünnungsmittel, Konservierungsmittel, Sprengbzw. Verteilungsmiiiel (z.B. Natriumstärkeglykolat, vernetztes Povidon, vernetzte Natriumcarboxymethylcelluloso), grenzflächenaktive oder Dispergiermittel, hergestellt werden. Verformte Tabletten können durch Verformen einer Mischung der angefeucn,_u;en pulverif ierten Verbindung mit einem inerten flüssigen Verdünnungsmittel in einer geeigneten Mnschine hergestellt werden. Die Tablottcn können gegebenenfalls beschichtet oder gekerbt und so formulipri sein, daß sie eine langsame oder gesteuerte Freisetzung de* aktiven Bestandteils darin gewährleisten, wobei beispielsweis» Hydroxypropylmethylcel'.ulose in variierenden Mengen zur Gewährleistung des gewünschten Freisetz'"igsprofils verwendet wird.

Bei Infektionen des Auges oder linderer äußerer Gewebo, z. B. Mund und Haut, werden die Formu ierungen bevorzugterwuise als örtlich anzuwendende Salbe oder Creme aufgebracht, wulche den aktiven Bestandteil in einer Menge von beispielsweiso 0,075 bis 20% Gew./Cew., bevorzugtorweise von 0,2 bis 15% (iew./Gew. und ganz besonders bevorzugt von 0,5 bis 10% Gew./Gow. enthält. Bei einer Formulierung als Salbe könnon die aktiven Bestandteile zusammen mit entweder einer pareffinischen oder einer wiisser-mischbaren Salbenbasis verwendet werde i. Gegebenenfalls können die aktiven Bestandteil a in einer Creme mit einer Öl-in-Wassor-Cremebasis formuliert sein.

Falls gewünsch'., kann die wässerige Phase der Cremebasis bespielsweise zumindest 30% Gow./Gew. eines mehrwertigen Alkohols enthnlten, d. h. eines Alkohols mit zwei oder mc hroron Hydroxylgruppen, wie beispielsweise Propylenglykol, Buten-1,3-diol, Mannit, Sorbit, Glycerin und Polynthylenglykol, und Mischungen deiselben. Die örtlichen Formulierungen können wünschenswerterweise eine Verbindung enthalten, wek he die Absorption oder Penetration dos aktiven Bestandteils durch die Haut oder durch andere befallene Bereiche erhöht. Beispiele derartiger Verbindungen, wolcho die dermale Penetration erhöhen, schließen Dimethylsulfoxid und vorwandte Analoga ein.

Die ölige Phiise der Emuli ionen kann in bekannter Weise aus bekannten Bestandteilen zusammengesetzt sein. Ot /vohl diese Phase lediglich einen Emu Igator (sonst .ils Emulgiermittel bekannt) enthalten kann, enthält sie erwünschterwoise e ne Mischung von zumindest einem Emulgator mit einem Fett oder ein am öl, oder sowohl mit einem Fett und einem öl. Bevorz jgterweise ist ein hydrophiler Emulgator zusammen mit einem lipophilen Emulgator enthalten, der als Stabilisator wirkt. Es wird ebenfalls bevorzugt, daß sowohl ein Öl und ein Fett enthalten sind. Der oder die Emulgatoren, zusammen mit oder ohne Stabilisator bzw. Stabilisatoren bilden das se jonannte Emulgier wachs, und das Wachs zusammen mit dem Öl und/oder dem Fett vervollständigt die sogenannte Emulgiersalbenbasis, welche die ölig dispergierte Phase der Cremeformulierungen bildet. Geeignete Emulgiermittel und Emulsionsstabilisatoron für eine Verwendung in den Formulierungen schließen Tween 60, Span 80, Cetostearylalkohol, Myristylalkohol, Glycerylmonostearat und Natriumlaurylsulfat ein.

Die Auswahl geeigneter Öle oder Fette beruht auf der Erzielung der gewünschten kosmetischen Eigenschaften, da die Löslichkeit der aktivon Verbindung in den meisten wahrscheinlich zu verwendenden Ölen in pharmazeutischen Emulsiotisformulierun^en sehr gering ist. Demzufolge sollte die Creme bevorzugterweise ein nicht-fettiges, nicht-färbendes und waschbares mit einer geeigneten Konsistenz sein, damit ein Auslaufen bzw. Lecken aus Tuben oder anderen Behältern vermieden wird. Es können geradkettige oder verzweigtkettige, mono- oder dibasische Alkylester verwendet werden, wie beispielsweise Diisoadipat, IsocetylUearat, Propylenglykoldiester von Kokosnußfettsäuren, loopropylmyriutnt, Decyloleat, Isopropylpalmitat, Butyistearat, 2-Ethylhexylpalmitat oder eine Mischung von verzweigtkettigen Estern, die unter dem Namen Crodamol CAP bekannt sind, wobei dio letzten drei bevorzugte Ester sind. Diese können allein oder in Kombination verwendet werden, je nach den gewünschten Eigenschaften.

Andererseits können Fette und fettähnliche Substanzen mit hohem Schmelzpunkt (Lipids), wie beicpieisweise farbloses Weichparaffin und/oder flüssiges Paraffin oder andere Mineralöle einge' atzt werden.

Formulierungen, die für «ine örtliche Behandlung des Auges geeignet sind, enthalten Augentropfen, worin der aktive Bestandteil in einem geeigneten Träger, inoboeondere in einem wässerigen Lösungsmittel für den aktiven Bestandteil, gelöst oder suspendiert ist. Der aktive Bestandteil ist vorzugsweise In derartigen Formulierungen in einer Konzentration von 0,5 bis 20%, vorteilhafterweise von 0,5 bis 10%, und insbesondere von etwa 1,5% Gew./Gew. enthalten.

Formulierungen für oine örtliche Verabreichung in die Mundhöhle schließen Rautenpastillen ein, welche den aktiven Bestandteil in einer wohlschmeckendem Basis, gewöhnlich in Rohrzucker und Gummi arabicum oder Traganth enthalten; Pastillen enthalten den aktiven Bestandteil in einer inerten Basis, wie beispielsweise in Gelatine und Glycerin, oder in Rohrzucker und Gummi arabicum; und Mundwasser enthalten den aktiven Bestancüeil in einem geeigneten flüssigen Träger.

Formulierungen für rektele Verabreichung können als Suppositorium dargeboten werden mit einer geeigneten Base, enthaltend beispielsweise Kakaobutter oder ein Salicylat.

Für nasale Verabreichung geeignete Formulierungen, in welchen der Träger ein Feststoff ist, schließen ein grobes Pulver ein mit einer Teilchengröße von beispielsweise im Bereich von 20 bis 500pm (20 bis 500 Mikron), welches in der gleichen Weiso verabreicht wird, in weichet Schnupftabak genommen wird, d. h. du. cn rasche Inhalation durch den Nasengang aus einem Behälter mit dem Pulver, der dicht an die Nase gehalten wird. Geeignete Formulierungen, bei denen der Träger eine Flüssigkeit ist, zur Verabreichung als beispielsweise Nasenspray oder als Nasentropfen, schließen wässerige oder ölige Lösungen des aktiven Bestandteils ein.

Für vaginale Verabreichung geeignete Formulierungen können als Pessare, Tampons, Cremes, Gele, Pasten, Schäume oder Spray-Formulierungen dargeboten werden, enthaltend zusätzlich zu dem aktiven Bestandteil solche Träger, wie sie dem Fachmann bekannt sind und ihm geeignet erscheinen.

Geeignete Formulierungen für parentorale Verabreichung schließen wässerige und nicht-wässerige sterile Injektionslösungen ein, die Antioxidantien, Puffer, Bakteriostatika und gelöste Stoffe enthalten können, welche die Formulierung isotonisch mit dem Blut des vorgesehenen Empfängers machen; und wässerige und nicht-wässerige sterile Suspensionen, welche Suspendiermittel und Verdickungsmittel enthalten können. Die Formulierungen können in Einheitsdosis- oder Mehrfachdosis-Behältern dargeboten werden, beispielsweise in verschlossenen Ampullen und Phiolen, und sie können in einem gefriergetrockneten (lyuphilisierten) Zustand gelagert werden, was lediglich die Zugabe des sterilen flüssigen Traget s, beispielsweise von Wasser für Injektionen, unmittelbar vor der Verwendung erfordert. Sofort benötigte Injektionslösungen und Suspensionen können auf sterilen Pulvern, Granulates und Tabletten der oben beschriebenen Art hergestellt werde Bevorzugte Einheitsdosis-Formulierungen sind solche, welche eine Tagesdosis oder -einheit, eines Tagessubdosu, Me oben angegeben, oder einen geeigneten Bruchteil r^avon, von einem aktiven Bestandteil enthalten.

Es sei darauf hingewiesen, daß außer den Bestandteilen die oben besonders erwähnt wurden, die Formulierungen andere Mittel enthalteil können, die bezüglich des Typs der in Rede stehenden Foi mulierur.g herkömmlich sind und es können beispielsweise diejenigen, die für eine orale Verabreichung geeignet sind, Geschmacksmittel enthalten.

Die Verbindungen können c-rfindungsgemäß nach irgendeinem dem Fachmann zur Herstellung von gleichen oder ähnlichen Verbindungen bekannten Verfahren hergestellt werden, vgl. z. B. GB-PS 1601020 oder M. J. Robins und P. J. Barr, J. Orp. Chem. (1983) 48,1854-1862, und insbesondere die in don nachfolgenden Beispielen beschriebenen Verfahren. Das erf inriiingsgemäße Verfahren zur Herstellung der Vorbindungen besteht darin, daß man (A) eine Verbindung der Formel (Ii)

(H)

(worin R² die gleiche Bedeutung wie oben besitzt, X eine Ethinylen-Gruppe ist, Rl eine geschützte Hydroxy- oder AminoGruppe und M¹ eine Hydroxy-Schutzgruppe bedeutet) mit einer Verbindung der Formel (III)

(III).

(worin Y ein Halogenatom. |eder der Reste M² und M³ eine Hydroxy-Schutzgruppe und Rj ein Warserstoffatom oder eine geschützte Hydroxy-Gruppe ist) kondensiert; (B) eine Verbindung der Formel (IV)

(IV)

in welcher R¹, M², M³ und Rj die gleiche Bedeutung wie oben besitzen und Z eine austretende Gruppe ist, mit einer Verbindung umsetzt, die fähig ist, die erforderliche Gruppierung der Formel -X-R² (in welcher X Ethinylen i<nd R^J die gleiche Bedeutung wie oben besitzt) zur Bildung einer Verbindung der Formel (I), in welcher X Ethinylen und R³ Wasserstoff ist, zu schaffen; und

[ (C) eine Verbindung der Fovnel (V)

(worin Q eine geeignete austretende Gruppe X, R², M¹, M² und Ri die gleiche Bp jeutung wie oben besitzen) mit einem Mittel umsetzt, das zum Ersatz der Gruppe Q durch eine Amino-Gruppe dient; zur Bildung einer Verbindung, in welcher X Ethinylen und R³ Wasserstoff ist; und

gegebenenfalls anschließend oder gleichzeitig damit entweder eine oder beide der nachstehenden Behandlungsweisen in einer beliebigen gewünschten Reihenfolge durchführt; (i) Entfernung von irgendwelchen zurückgebliebenen Schutzgruppen;

(ii) im Falle daß dio resultierende Vorbindung eine Verbindung der Formel (I) ist, Umwandeln derselben in ein pharmazeutisch verträgliches Derivat davon, oder, falls die resultierende Verbindung ein pharmazeutisch verträgliches Derivat ist, Umwandeln derselben in ein davon verschiedenes pharmazeutisch verträgliches Derivat oder in eine Verbindung der Formel (I). Bezüglich des Verfahrens (A) können die Ausgangsmaterialien mit herkömmlichen Schutzgruppen geschützt sein, wie beispielsweise mit Acyl-Gruppen, z. B. Alkanoyl- oder Aroyl-Gruppen, wie z.B. p-Toluoyl- oder Trlalkylsilyl-Gruppen, wie beispielsweise die Trimethylsilyl-Gruppe, wobei die M'- und Rj-Schutzgruppen gev öhnlich Silyl-Schutzgruppen sind. Die Halogen-Gruppe Y des Zuckerrestes (Formel IHI]) ist gewöhnlich Chlor und die Reaktion wird in Gegenwart eines Lewissäure-Katalysators durchgeführt, beispielsweise in Gegenwart von Zinn(IV)-chlorid, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie beispielsweise in 1,2-Dlchlorethan. Die Stammverbindung kann dann im Anschluß an eine anomere Trennung durch Behandlung mit alkoholischer Base, wie beispielsweise Natriummethoxid in Methanol, erhalten werden. Das Verfahren ist auch von Barr et al., in J. Chem. Soc, Perkln 1 (1978), 1263ff., beschrieben.

Die Schutzgruppen können anschließend durch Säure· oder Basenhydrolyse entfernt werden, wobei Acyl-Gruppen vorteilhafterweise durch Basenhydrolyse und Silyl-Gruppen durch Säurehydrolyse entfernt werden. Bezüglich des Verfchrens (B) ist dies beispielsweise von M. J. Robins und P. J. Barr in J. Org. Chem. (1983), 48,1854ff. beschrieben. Ein 5-halogeniertes Nucleosid, wie beispielsweise 2'-Deoxy-5-iodouridin in einer geeignet geschützten Form, beispielsweise mit den oben beschriebenen Schutzgruppen, kann einer katalysierten Kupplungsreaktion unterworfen werden, beispielsweise mit einem Palladium-Katalysator, mit einem geeignet geschützten Acetylen, wie beispielsweise mit Trimethylsilylacetylen, in Gegenwart einer organischen Base, wie beispielsweise von Triethylamin und einem anderen Metall-Katalysator, beispielsweise einem Kupfer(l)-Salz, bei einer erhöhten Temperatur, wie beispielsweise bei SO⁰C, unter Bildung des geschützten acetylenischen Nucleoside. Ein bevorzugter Palladium-Katalysator ist Bis(triphenylphosphin)-palladium-dichlorid und ein bevorzugter Kupfer-Katalysator ist Kupfer(l)-iodid. Die Stamrnverbindung kann leicht durch Entfernung irgendwelcher Schutzgruppen erhalten werden, beispielsweise durch Behandlung mit alkoholischer Base, wie beispielsweise mit Natriummethoxid in Methanol.

In dem Verfahren (C) ist die austretende Gruppe Q vorteiihafterweise eine geeignet» Hoierocyclyl-Gruppe, vorteilhafterweise eine 1,2,4-Triazol-i-yl-Gruppe oder ein Halogen, z.B. eine Chlnr.rV-'ppü, «voDei die Entfernung der Gruppe Q geeigne'.erweise durch Behandeln der Verbindung der Formel (V) mit Ammoniak bewirkt wird.

Die Verbindung der Formel (V) kann beispielsweise durch Behandeln der entsprechenden 4-Oxoverbindung mit einem geeigneten funktionalisierenden Mittel hergestellt werden, das zur Einführung der austretenden Gruppe Q, beispielsweise durch Behandlung mit 1,2,4-Triazol, dient, geeigneterweise in Gegenwart eines kondensierenden Mittels, wie 4-Chlorphenylphosphodichloridat, z. B. in einem basischen Lösungsmittel, vorteilhafterweise Pyridin, oder durch Behandlung der 4-Oxoverbindung mit Thionylchlorid in Dimethylformamid.

Die oben erwähnten Ausgangsmaterialien können in herkömmlicher Weise aus bekannten Verbindungen hergestellt werden, wobei man Arbeitsweisen benutzt, die dem Fachmann bekannt sind und wie sie beispielsweise beschrieben sind in Nucleic Acid Chemistry: Improved New Synthetic Procedures, Methods and Techniques. Ed. L. B. Townsend und R.S.Tipson, Wiley lnterecience (1978) und Nucleoside Analogues: Chemistry, Biology and Medical Applications, Ed. R.T. Walker, E de Clercq and F.Eckstein, NATO Advanced Study Institute, Plenum Press (1979). Beispiele der Methoden für die Herstellung der Ausgangsmaterialier. sind weiter unten beschrieben.

Im Verfahren <A) kann die Verbindung der Formel (II), in welcher R² Wasserstoff und X Ethinylen Ist, beispielsweise durch Halogenieren von S-Acetylurecil mit oinem geeigneten Halogenierungsmittel, wie z. B. Phosphorylchlorid, in Gegenwart von Base unter Bild <jng oiner Vorbindung der allgemeinen Formel (Vl)

(Vl)

hergestellt werden, in welcher Y Halogen ist. Die Verbindung der Formel (Vl) kann dann weiter mit einer anorganischen Base, wie

beispielsweise mit wässerigem Kaliumhydroxid, behandelt werden und anschließend zur Herstellung der Verbindung der

Formel (II) geschützt werden.

Im Verfahren (B) kann die Vorbindung der Formel (IV), insbesondere worin Z ein Halogenatom, wie beispielsweise Iod und R⁴

eine geschützte Hydroxy-Gruppe bedeutet, beispielsweise r urch analoge Verfahren zu denjenigen von Schinazi et al., J. Med.

Chem., 1979,22 (20), 1273, hergestellt worden.

Die Verbindungen der Formal (I), in welcher X eino Vinylen-Gruppe bedeutet, kann aus entsprechenden Verbindungen

hergestellt werden, in welchen X eine Ethinylen-Gruppe bedeutet, beispielsweise durch katalytische Hydrierung unter

Verwendung eines geeigneten Katalysators, oeispielsweise eines Lindlar-Katalysators, vergiftet mit Chinolin, z.B. in einem

alkoholischen Lösungsmittel, wie Methane' oder Ethanol. Andere Verfahren zur Herstellung dieser Vinylen-Verbindungen

werden beispielsweise von S. G. Rahim et dl.. Nucleic Acids Research 1982 10(17), 5285, beschrieben.

Die Verbindungen der Formel (I), in welchen R³ eine Acyl-Gruppo bedeutet, können aus den entsprechenden Verbindungen

hergestellt werden, in welchen R³ ein Wasserstoff atom ist, beispielsweise durch selektiven Schutz der Hydroxy-Gruppen in dem

Zuckerrest, z. B. unter Verwendung von Trialkylsilyl-Gruppen, und anschließendem Acylieren der geschützten Verbindungen,

unter Verwendung von beispielsweise dem geeigneten Säurechlorid oder -anhydrid, vorteilhafterweise in Anwesenheit einer

Base, wie beispielsweise von Pyridin oder Triethylamin, die auch als Lösungsmittel für die Reaktion dienen kann. Die erhaltene

Acyi-Verbindung der Formel (I) kann dann erhalten werden, indem man die Schutzgruppen beseitigt, beispielsweise durch

Entfernung der Trialkylsilyl-Gruppe durch beispielsweise Behandlung mit einer Säure, wie Essigsäure.

Ester gemäß der Erfindung können in herkömmlicher Weise hergestellt werden, z. B. durch Behandlung der Stammverbindung

der Formel (I) oder eines Esters derselben (gegebenenfalls geschützt) mit einem geeigneten Veresterungs- bzw.

Umesterungsmittel, beispielsweise durch Behandlung von 2'-Deoxy-5-ethinyluridin mit einem geeigneten Säurehalogenid (z. B.

Säurechlorid) oder -anhydrid in Gegenwart einer Base, geeigneterweise von Pyridin, das ebenso auch als das Lösungsmittel

verwendet werden kann, wobei irgendwelche restlichen Schutzgruppen anschließend entfernt werden.

Gemäß der Erfindung können auch in herkömmlicher Weise Salze erhalten werden, beispielsweise durch Umsetzung der

Stammverbindung mit einer geeigneten Base unter Bildung des entsprechenden Basensdlzes. Andere Derivate der

erfindungsgemäß hergestellten Verbindungen können ebenso in herkömmlicher Weise erhalten werden.

Die nachfolgenden Beispie¹ j erläutern die Erfindung.

Ausführungsbeispiele Beispiel 1 i

2'-Deoxy-5-propinyluridln J

(a) 2'-Deoxy-3',5'-dlO-p-toluoyl-ö-proplnyluridin j 3',5'-Di-O-p-toluoyl-2'-deoxy-5-iodcuridin (Can. J. Chem., 1982,60, Seite 554) (1,11g, 2,OmMoI), 30mg Kupfer(l)-io^id, 30mg ; BisUriphenylphosphinl-PalladiumdD-chlorid und 80ml trockenes Triethylamin wurden unter trockenem Stickstoff gerührt und ' gasförmiges Propin 15 Minuten lang durch die Mischung hindurchgeperlt. Die Mischung wurde dann gerührt und 3,0 Stunden auf 50⁰C erwärmt. Nach dem Abkühlen wurde der weiße Feststoff abfiltriert und in Dichlormethan aufgenommen. Die Lösung ' wurde mit 2 50-ml-Portionen einer 2%igen Dinatriumethylendiamintetraessigsäure gewaschen, getrocknet (MgSO.,) und eingedampft. Der Rückstand wurde aus Dichlormethan/Ethanol (1:2) umkristallisiert und man erhielt 0,63g (63%) der Titelverbindung in Form von weißen Kristallen, die bei 238°C bis 241 °C schmelzen. ;

(b) 2'-Deoxy-5-propinylurldin.Hemihydrat

Eine Lösung des Produktes von Stufe (a) (0,6g, 1,2mMol) in 18mlO,2molarem Natriummethoxidin Methanol (frisch hergestellt aus Natrium und Methanol) wurde bei Raumtemperatur 2,0 Stunden lang gerührt. Die Lösung wurde durch portionsweise

Zugabe von Dowex 50(H)-lonenaustauscherharz auf einen pH-Wert von 4 bis 5 angesäuert. Das Harz wurde abfiltriert und mit j

Methanol gewaschen. Das Filtrat wurde oingedampft und der Rückstand zwischen Wasser und Ether verteilt. Die wässerige |

Schicht wurde mit Ether gewaschen und anschließend eingedampft. Der Rückstand wurde mit Ethanol trituriert, der erhaltene !

Feststoff abfiltriert und mit Ether gewaschon. Man erhielt 0,18g (55%) der Titelverbindung mit einem Schmelzpunkt von 194⁰C '

l^!s196X. !

Analyse: ι

Berochnet: C52,36^CO, H6,49%, N 10,23%; j

Gefunden: C 52,35%, H 5,13%, N 10,23%. |

Beispiel 2

2'-Deoxy-3',5'-dl-O-acetyl-5-ethinylcytidin j

(a) S'.B'-DI-O-acetyl-a'-deoxv-o-ethinyluridln j

5-Ethinyl-2'-deoxyuridin (J. Med. Chem., 26 (B), 661-666, [1983]) (1,26g, 5,OmMoI), 10ml trockenes Pyridin und 1,22g J

Essigsäureanhydrid (12,OmMoI) wurden miteinander 20 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Die erhaltene klare Lösung !

wurde eingedampft und man erhielt einen sirupösen Rückstand, der bei gemeinsamem Eindampfen mit Ethanol einen weißen Feststoff lieferte. Die Umkristallisation aus Ethanol ergab 1,49g (92%) der Titelverbindung in Form weißer Kristalle mit einem Schmelzpunkt von 152°C bis 154°C.

(b) 1·(2'-Οβοχγ-3',6'-αΙ-0-8εο^Ι·β-0·Γΐοο(υΓ8ηο8νΙ)-5-οΐΚΙηνΙ-4-(1,2,4-ΐΗ8ΖθΙ·1-νΙ)-ρνΗΓηΙαΙη-2(1 H)-on

304mg des Produktes von Stufe (a) (304mg, 1 mMol), 207 mg 1,2,4-Triazol OmMoI), 3,0ml trockenes Pyridin und 352 mg p-Chlorphenylphosphodichloridot (1,5mMol) wurden miteinander bei der Raumtemperatur 7 Tage lang gerührt. Die erhaltene dunkle Lösung wurde eingedampft und das zurückbleibende braune Öl in Dichlormethan aufgenommen. Die Lösung wurde zweimal mit Wasser gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft. Man erhielt 380mg (88%) der Titelverbindung als blaßgelben Schaum, der in seiner Rohform in der nächsten Synthesestufe eingesetzt wurde.

(c) 2'-Deoxy-3',S'-di-O-acetyl-5-eth!nylcytidin.Hydrochlorid.Hemihydrat

Eine Lösung des Produktes von Stufe (b) (380mg, 0,98mMol) in 10ml Dioxan/880 Ammoniak (3:1) wurde bei Raumtemperatur 2,0 Stunden Ong gerührt und anschließend unter Bildung eines gummiartigen Rückstands eingedampft. Der Rückstand wurde in heißem Ethanol aufgenommen und mit einer gesättigten Lösung von Chlorwasserstoff in 2-Propanol angesäuert. Nach dem Abkühlen wurde das weiße kristalline Hydrochlorid abfiltriert, mit Ethanol und Ether gewaschen und im Vakuum über Phosphorpentoxid getrocknet. Man erhielt 130mg (35%) der Titelverbindung mit einem Zersetzungspunkt von 160°C bis 162⁰C. Analyse:

Berechnet: C 47,31%, H 5,03%, N 11,03%; Gefunden: C47,50%, H4,79%, N 11,04%.

Beispiel 3 2'-Deoxy-5-ethinylcytldin

Eine Lösung der Verbindung von Beispiel 2(c) (250mg, 0,66mMol) in 3,0ml Dioxan/880 Ammoniak/Wasser (3:2:1) wurde 24 Stunden lang bei Raumtemperatur ...uhrt. Es wurden weiter noch 1,0ml 880 Ammoniak zugesetzt und das Rühren weitere 4,0 Stunden fortgesetzt. Die Lösung wurde eingedampft und der Rückstand mit Ethanol gemeinsam eingedampft. Der Rückstand wurde mit Ethanol trituriert, der erhaltene Feststot abfiltriert und mit Ether gewaschen. Man erhielt 120mg (72%) der Titelverbindung mit einem Schmelzpunkt von 162° < bis 165⁰C. Umkristallisation aus Ethanol lieferte eine analytisch reine Probe mit einem Schmelzpunkt von 19O⁰C bis 193⁰C

Analyse:

Berbchnet: C52,58%, H5,22%, N 16,73%; Gefunden: C52,80%, H 5,20%, N 16,38%.

Beispiel 4 3-N-Benzoyl-2'-d9Oxy-5ethinyluridin

Zu einer gerührten Suspension von 2'-Deoxy-5-ethinyluridin (J. Med. Chem., 2615), 661-666, [1983)) (0,3g, 1,19mMol) in trockenem Acetonitril (8 ml) wurde unter Eiskühlung Chlortrimethylsilan (0,5 ml) und Triethylamin (0,85ml, 6,1 mMol) zugegeben und das ganze 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurde Benzoylchlorid (0,18ml, 1,54 mMol) zugegeben und die Mischung weitere 1,5 Stunden lang gerührt und filtriert. Das Filtrat wurde eingeengt, der Rückstand in Ethanol (10ml) gelöst und Eisessig (0,4g) zugegeben. Es wurde 0,5 Stunden lang gerührt, die Lösungsmittel eingedampft und der Rückstand durch Säulenchromatographie an Kieselgel gereinigt, wobei mit Methylenchlorid/Methanol (19:1) eluiert wurde. Man erhielt 0,2g (47% Ausbeute) der Titelverbindung mit einem Schmelzpunkt von 156°Cbis 157°C. Analyse:

Berechnet: C 60,70%, H4,49% , N 7,86%; Gefunden: C60,44%, H4,336%, N7,69%.

Beispiel 5 i-lß-D-ArablnofuranosyO-ö-ethlnyluracil

(a) O².2'-Anhydrourldin

Uridin (1 Og, 0,04 Mol) wurde in 20 ml warmem, trockenen Dimethylformamid gelöst und 11,4g Diphenylcarbonat (0,06 Mol) und 0,2g Natriumbicarbonat zugegeben. Die Lösung wurde gerührt und auf 150⁰C erhitzt, bis din Entwicklung von Kohlendioxid beendet war (angenähert 30 Minuten). Nach dem Abkühlen wurde die Lösung in 20üml Ether unter raschem Rühren eingegossen. Der erhaltene Feststoff wurde abfiltriert, mit Ether gewaschen und aus Methanol umkristallisiert. Man erhielt 7,2g (80%) der Titelverbindung in Form weißer Kristalle mit einem Schmelzpunkt von 235°C bis 24O⁰C.

(b) 1 -(ß-D-Arabinof uranosy D-uracil

Da j Produkt von Stufe (a) (7,0g, 0,03 Mol) wurde in 585 ml Ethanol/Wasser (1:1) gelöst und 41 ml 1 molares Natriumhydroxid zugegeben. Nach 2sl ündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde die Lösung auf einen pH-Wert von 4 bis 5 durch portionsweise Zugabe von Dowex !iO (H)-lonenaustauscherharz angesäuert. Das Harz wurde abfiltriert und mit 100 ml Ethanol/Wasser (1:1) gewaschen. Das Filtrat wurde zur Trockene eingedampft und der Rückstand aus Ethanol umkristallisiert. Man erhielt 5,51 g (75%) der ntelverbindung in Form weißer Kristalle mit einem Schmelzpunkt von 220°C bis 223°C.

(c) 1 -(ß-D-Arabinof uranosyl)-5-iodouracil

Das Produkt von Stufe (b) (3,0g, 12,3mMol), 3,0g Iod (11,8mMol), 15ml Chloroform und 30ml 1 molare Salpetersäure wurden heftig gerührt und miteinander 2,0 Stunden am Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen schied sich ein kristalliner Feststoff aus, der abfiltriert und sorgfältig mit Ether zur Entfernung von überschüssigem Iod gewaschen wurde. Der Festatoff wurde aus Wasser umkristallisiert und man erhielt 2,55g (56%) der Titelverbindung in Form weißer Kristalle mit einem Schmelzpunkt von 191⁰C bis 193°C(Zers.).

(d) S-lodo-i-U'.S'.S'-ni-O-p-toluoylß-D-arablnofuianosyO-uracil

Eine Lösung von p-Toluoylchlorid (2,76g, 17,85mMol) ir. 5,0ml Dichlormethan wurde tropfenweise bei O⁰C unter Rühren und unter trockenem Stickstoff zu 2,0g des Produktes von Stufe (c) (5,4rr.Mol) in 20ml trockenem Pyridin zugegeben. Die Losung wurde 5,0 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und anschließend zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde mit Methanol trituriert, der gebildete weiße Feststoff abfiltriert und mit Ether gewaschen. Man erhielt 2,61g (67%) der Titelverbindung mit einem Schmelzpunkt von 214⁰C bis 216⁰C.

(θ) 5Trimeihylsilylethlnyl-1-(2',3',5'-tr!Op-toluoyl ß-D-arabinofuranosyO-uractl Das Produkt von Stufe (d) (1,45g, 2mMol), 30mg Kupferiodid, 30mg Bis(triphenylphosphin)-Palladium(ll)-chlorid, 80ml trockenes Triethylamin und 0,6g Trimethylsilylacetylen (6mMol) wurden bei 5O⁰C unter einer trockenen Stickstoff-Atmosphäre 3,0 Stunden lang gerührt. Die abgekühlte Suspension wurde zur Trockene eingedampft und der dunkle Rückstand in Dichlormethan aufgenommen. Die Lösung wurde nacheinander mit 2 χ 50ml-Portionen von 2%iger wässeriger Dinatriumethylondiamintetraessigsäure und 50 ml Wasser gewaschen. Die Lösung wurde getrocknet (MgSO₄), eingedampft und der Rückstand aus Ethanol umkristallisiert. Man erhielt die Titelverbindung in Form weißer Kristalle; 1,03 g (32%); Schmelzpunkt bei197^cCbis199°C.

(f) 1-(ßD-Arablriofuranosyl)-5ethinyluracll

Eine Lösung des Produktes von Stufe (e) (1,0g, 1,59mMol) in 30ml 0,2molarem Natriummethoxid in Methanol (frisch hergestellt aus Natrium und Methanol) wurde bei Raumtemperatur 3 Stunden lang gerührt und anschließend durch portionsweise Zugabe von Dowex 50(H)-lonenaustauscherharz auf einen pH-Wert von 4 bis 5 angesäuert. Das Harz wurde abfiltriert und gut mit Methanol gewaschen. Das Filtmt wurde zur Trockene eingedampft und der Rückstand zwischen Wasser und Ether verteilt. Die wässerige Schicht wurde mit Ether gewaschen und anschließend zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde gemeinsam mit zwei Portionen Ethanol eingedampft und anschließend mit Ethanol trituriert.

Der erhaltene Feststoff wurde abfiltriert und mit Ether gewaschen. Man erhielt 0,30g (70%) der Titelverbindung, die sich oberhalb 200^cC zersetzte.

Analyse:

Berechnet: C49,25%, H4,51%, N 10,45%;

Gefunden: C49,40%, H4,71%, N 10,29%.

Beispiel β

5-Ethinyl-1-(2',3',5'-tri-O-ecetyl-ß-D-arabino(uranosyl)-uracil

Das Produkt von Beispiel 5(f) (0,35g, 1,3mMol), 2,0ml trockenes Pyridin und 0,48g Essigsäureanhydrid (4,7mMol) wurden miteinander bei Raumtemperatur 16 Stunden lang gerührt. Die erhaltene klare Lösung wurde zur Trockene eingedampft und der Rückstand mit Ethanol gemeinsam eingedampft. Umkristallisation aus Ethanol lieferte 0,4g (89%) der Titelverbindung in Form blaßgelber kubischer Kristalle, die einen Schmelzpunkt von 174⁰C bis 176°C hatten.

Analyse:

Berechnet: C51,78%, H-" 60%, N7,10%;

Gefunden: C 52,06%, H 4,43%, N 7,05%

Beispiel 7 2'-Deoxy-5-propinylcytldin

(a) 2'-Deoxy-3',5'-diOacetyl-5-propinyluridin

0,8ml Essigsäureanhydrid wurden zu einer Lösung von 2'-Deoxy-5-propinyluridin von Beispiel 1 (b) (1g, 3,76mMol) in 10ml trockenem Pyridin zugegeben. Die Mischung wurde 16 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, anschließend zur Trockene eingedampft und man erhielt einen schaumigen Feststoff. Die Umkristallisation aus Ethanol lieferte 0,98g (75%) der Titelverbindung mit einem Schmelzpunkt von 148°C bis 149°C

Analyse:

Berechnet: C 54,86%, H 5,143%, N 8,00%;

Gefunden: C54,82%, H5,114%, N7,805%.

(b) 1-(2-Deoxy-3,5di-O-acetyl-ß-D-ribofuranosyl)-5propinyl-4-(1,2,4-triazol-1yl)pyrimldln-2(1 H)-on p-Chlorphenylphosphodichloridat (0,76g, 3,1OmMoI) wurde zu einer Lösung des Produktes von Stute la; (0,7g, 2 mMol) und 0,45g 1,2,4-Triazol (6,5mMol) in 20ml trockenem Pyridin zugegeben. Die Lösung wurde unter trockenem Stickstoff bei Raumtemperatur 2 Tago lang gerührt und anschließend zur Trockene eingedampft. Das erhaltene Öl wurde an einer Kieselgel· Kolonne mit Ethylacetat eluiert und man erhielt 0,33g Ausgangsmaterial und 0,2g (44%, bezogen auf 0,4g Ausgangsmaterial) der Titelverbindung, welche sich beim Stehen bei Raumtemperatur !ersetzte. Diese wurde nicht gereinigt sondern in der nächsten Stufe eingesetzt.

(c) 2'-Deoxy-5-propinylcytldin

Das Rohprodukt von Stufe (b) (0,2g, 0,5 mMol) wurde in 5 ml Dioxan/880 Ammoniak/Wasser (3:2:1) gelöst und die Mischung bei Raumtemperatur 16 Stunden lang stehengelassen. Dann wurde zur Trockene eingedampft und der Rückstand gemeinsam mit Ethanol verdampft. Der erhaltene weiße Feststoff wurde aus Ethanol umkristallisiert und man erhielt 0,04g (30%) des reinen Produkts, das sich bei 1!)5°C bis 200X zersetzte

Analyse:

Berechnet: C54,34%, H 5,60%, N 15,85%;

Gefunden: C54,19%, H5,550%, N 15,33%.

Beispiel 8 i-lß-D-Artbinofuranosyll-ö-propinylcytosin

(a) S-lodo-1-(2,3,5-tri-O-ecetyl-P-D-arabinofuranosyl)-uracil

Zu einer Lösung von 1g 1-(ß-D-Arabinofuranosyl)-5-iodouracil von Beispiel 6(c) (2,7mMol) in 10m! trockenem Pyridin wurde Essigsäureanhydrid (1,04ml, 11 mMol) zugegeben. Nach 3stündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde das Lösungsmittel abgedai lpft und der Rückstand mehrere Male gemeinsam mit CH₂CI₂ eingedampft. Der Rückstand wurde mit Ethanol trituriert, der Feststoff abfiltriert und getrocknet. Man erhielt 1,25g (93%) der Titelverbindung mit einem Schmelzpunkt von 175^cCbis 179'C.

(b) 5Proplnyl-1-(2,3,5triOacotyl-pD«rablnofurano*yl)-uracll

Eino Suspension des Produktes von Stufe (a) (1,16g, 2,3mMol). 35mg KupferdHodid ι nd 35mg Bis(triphenylphosphin)-Palladium(ll)-chlorid in 95ml trockenem Triethylamin wurde untei trockenem Stickstoff 15 Minuten lang gerührt. Durch die Mischung wurde dann 15 Minuten lang gasförmiges Propin hindurchgeperlt und die Mischung unter einer Stickstoff otmciphäre bei 50 "C 1 Stunde lang gerührt. Die Losing wurde filtriert und das Filtrat zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurdo in CHvCI₂(30ml)aufgenommen,mit2 χ 25 ml-Portionen einer 2%igen wässerigen Dinairiumethylendiamintetiaessigsäure-Lösung und 50ml Wasser gewaschen. Die organische Lösung wurde gotrocknet (Na₂SO₄) und eingedampft. Umkristallisation des Rückstands aus Clhanol lieferte 0,38g (4OV₀) der Titelverbindung mit einem Schmelzpunkt von 150°C bis 157C. Anelyse:

Berechnet: C52,94%, H4,902%, N6,863%;

Gefunden: C52,86%, H4,827%, N6,784%.

(el 5Propinyl-1(2,3,5triOacetyip-D-arablnofurenotyl)-4-(1,2,4trleiol-1-yl)-pvrlmldln-2(1H)on p-ChlorphenylphosphodicHoridat (10,5ml) wurde zu einer Lösung des Produktes von Stufe (b) (0,5g, 1,2mMol) und 0,4g 1,2,4-Triazol in 10ml trockenem Pyridin zugegeben. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur unter einer trockenen Stickstoffatmosphäre 6 Tage lang gorührt und anschließend zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde zwischen Dichlormothan (30ml) und Wasser (30ml) verteilt. Die organische Schicht wurde mit 25ml Wasser gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und eingedampft. Man erhielt 0.65g Rohprodukt, das in der nächsten Synthesestufe verwendet wurde.

(d) 1-(ß-D-Arabinofuranosyl)-5-propiny !cytosin

Das Rohprodukt von Stufe (c) (0,65g, 1.39 rr. Mol) wurde in 30ml Dioxan/880 Ammoniak/Wasser (3:2:1 !gelöst und die Lösung über Nacht bei Raumtomperatur stehengeli ssen. Die Lösung wurdo zur Trockene eingedampft und man erhielt ein gelbos Öl, das mit Ethanol trituriert wurde, wodurch mm das reine Produkt (0,22g) mit einem Schmelzpunkt von 241⁰C bis 243'C !Zers.) erhielt.

Analyse für C₂H₁₅N₃O₅ 0,7H₂O:

Berechnet: C49,05%, H5,586%, N 14,30%;

Gefunden: C49,28%, H5,32%, N 13,95%.

Beispiel 9 3-N-BentOyl-2'-deoxy-5-proplnylurldin

Trockenes Triethylamin (1,1ml) wurde bei O⁰C tu einer gerührten Suspension von 2'-Deoxy-5-propinyluridin von Beispiel 1 (b) (0,4g, 1,5 mMol) und 0,54g Trimethylsilylchlorid (4,97 mMol) in 10ml trockenem Acetonitril zugegeben. Die Mischung wurde bei Raumtemperatur 2,5 Stunden lang gerührt, anschließend 0,3ml Benzoylchlorid zugegeben und das Rühren weitere 5 Stunden lang fortgesetzt. Es wurde ein Feststoff abfiltriert, da» Filtrat zur Trockene eingedampft, der Rückstand in Ethanol aufgenommen und 0,4g Essigsäure zugegeben und die Mischung bei Raumtemperatur 0,5 Stunde¹! lang gerührt. Die Mischung wurde zur Trockene eingedampft und der Rückstand an einer Kieselgel-Säule mit CH₁O₇ZMr JH (9:1) eluiert. Mehrere Umkristallisationen auswässerigem Ethanol liefp:>en 0,14g (25%) des Produktes mit oinem Schmelzpunkt von 137 X b's 14O⁰C. Analyse für C„H„N_;0, · 0,?H₂O:

Berechnet: C60,96%, H4,920%, N⁷,«»89%;

Gefunden: C 60,69%, H 4,681%, N 7,478%.

Beispiel 10 1-(P-D-Arablnofuranosyl)-5proplnylurncll

5PropinyM(2,3,5-tiiOacetylßD-arabinofuranosyl)uracil von Beispiel 8Ib) (0,3g, 0,73mMol! wurde in 20ml Dioxan/880 Ammoniak/Wasser (3:2:1) gelöst und bei Raumtemperatur 18 Stunden lang stohengelassen. Das Lösungsmittel wurde abgedampft, gemeinsam mit Ethanol eingedampft und die abschließende Umkristallisation des Rückstands aus Ethanol lieferte 0,17g der Titelvorbindung (82%) mit einem Schmelzpunkt von 225°C bis 227X. Analyse:

Berechnet: C51,06%, H4,964%, N9,93%;

Gefunden: C50,8%, H5,055%, M9,8%.

Beispiel 11

i-tß-DArabinofuranotyD-Sothlnylcytofin

(a) 6·Ε!ΗΙηνΙ·1·(2,3,δ-ηΐ·0·βοβίνΙ·β-0·Γβ6ΙηοίυΓβηο·νΙ!-4·|1,2,4-ΐΓΐβζοΙ·1-νΙ)-ρνΓΐπιΙαίη·2(1 H)-on

5-Ethinyl-1-(2',3',S'-tri-O-acetyl-ß-DerabinofuranosYl)-uracil von Beispiel 6 (0,6g, 1,5mMol), 1,2,4-Triazol (0,33 g, 4,8mMol) und p-Chlorphenylphosphodichloridat (0,8ml, 4,8ml) wurden zusammen in trockenem Pyridin (20ml) 72 Stunden lang gerührt. Die erhaltene dunkle I ösung wurde zur Trockene eingedampft und der Rückstand durch Säulenchromatographie an Kieselgel durch Eluieren mit Ethylacetat/Hexan (9:1) gereinigt und man erhielt ein offensichtlich unstabiles Produkt (0,44g), das in seiner Rohform in der nächsten Stufe der Synthese eingesetzt wurde.

(b) i-lß-D-ArsbinofuranosyD-S-ethinylcytosin

Eine Lösung des Produktes von Stufe (a) (0,44g, 0,9mMol) Dioxan/880 Ammoniak/Wasser (3' 2:1) (12 mi) wurde 48 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und anschließend eingedampft. Man erhielt ein Öl, das durch Säulenchromatographie an Kieselgel durch Eluieren mit Mothanol/Methylenchlorid (1:4) gereinigt wurde. Die Vereinigung der Produktfraktionen und Eindampfen lieferte einen Feststoff, der aus Ethanol umkristallisiert die Titelverbindung (0,03g) lieferte, die sich bei 223°C zersetzte. Analyse für CnH₁₃NaOs - 0,3H₂O:

Berechnet: C48,46%, H4,993%, N 15,42%;

Gefunden: C48,22%, H4,889%, N 14,99%.

Beispiel 12 2'-Dioxy-6-ethinyl-3-N-(p-toluoyl)uridin

Zu einer gerührten Suspension von 2'-Deoxy-5-eihinyluridin (J. Med. Chem., 26 (5), 661-666, (19831) (0,4g, 1,6mMol) in trockenem Acetonitril (15ml) und Chlortrimethyliilan (0,7ml, 5,6niMol) wurde unter Eiskühlung Triethylamin (1,13ml, 8,ImMoI) zugeguben und bei Raumtemperatur weitere 2,5 Stundon gerührt. Toluoylchlorid (0,3ml, 2,1 mMol) wurde anschließund zugegeben und nach weiterem Rühren von 7 Stunden wurde die Mischung filtriert, das Filtrat zur Trockene eingodampit und der Rückstand in Ethanol (20ml) gelöst. Dann wurde Eisessig zugegeben und das Lösungsmittel nach 0,5stündigem Rühren bei Raumtemperatur eingedampft und die restliche Essigsäure gemeinsam mit Ethanol abgedampft. Die Roinigung des Produktes durch Dickschicht-Kieselgelchromatographie unter Eluieren mit Methanol/Mothylenchlorid (1:24), gefolgt von Umkristallisation aus Methanol, lieferte die Titelverbindung (0,03g) mit oinom Schmelzpunkt von 176'C bis 179⁰C. Analyse für C₁₉H₁₁N₂O₁ 0,2EtOH:

Berechnet: C61,37%, H5,08%, N7,36%;

Gefunden: C60,92%, H4 87%, N7,40%.

Die nachfolgenden Beispiele erläutern pharmazeutische Formulierungen, in wulchen der aktive Bestandteil eine erfindungsgemäß hergestellte Verbindung der Formol (I) B ist.

Beispiel A: Tablette

Aktiver Bestandteil 100 mg

Lactose 200 mg

Stärke 50 mg

Polyvinylpyrrolidon 5mg

Maflnosiumstearat 4mg

359 mg

Aus den vorstehenden Bestandteilen werden Tabletten durch Naßgrenulation, geiolgt vr.n Vorpressen, hergestellt. Beispiele: OphthalmlicheLösung

Aktivor Bestandteil 0,5

Natriumchlorid, analytische Qualität 0,9 g

Thiomersel 0,001 g

Gereinigtes Wasser auf 100ml pH-Wert, eingestellt auf 7,5

Beispiel C: Tabletten-Formulierungen

Die folgenden Formulierungen A und B werden durch Naßgranulation der Bestandteile mit einor Lösung von Povidon, gofolgt von Zugabe von Magnesiumstearat und Vorpressen, erhalten.

Formulierung A

(a) Aktiver Bestandteil

(b) Lactose B. P.

(c) Povidon B. P.

(d) Natriumstarkeglykolat (θ) Maynesiumstearat

Formulierung B

(a) Aktiver Bestandteil

(b) Lactose

(c) AvicelPHIOI

(d) Povidon B. P.

(e) Natriumstarkefjlykolat

(f) MagnesiumMearat

Formulierung C

Aktiver Bestandteil

Lactose

Starke

Povidon

Magnesiumstearat

mg/Taölttto	mg/Tablette
250	250
210	2S
15	9
20	12
5	3
600	300
mg/Tablette	mg/Tablette
250	260
160	—
60	26
15	9
20	12
5	3
600	300
mg/Tabl«tt·
100
200
50
5
4
359

Dio folgonden Formulierungen, D und E, werden durch direkte Verdichtung der gemischten Bestandteile hergestellt. Die in der Formuliert ng C verwendete Lactose ist vom Direktverdichtungstyp.

Formull».'•ing O

	mg/Kapsel
Aktiver Bestandteil Vorgelatinisierte Stärke NF15	250 400
Formulierung E	mg/Kapsel
Aktiver Bestandteil Lactose Avicel	260 150

600

Formulierung F (Qeateuerte FreiseUungsformuliemng)

Die Formulierung wird durch Naßgranulation dor Bestandteile (unten) mit einer Lösung von Povidon, gefolgt von der Zupabe von Magnesiumstenrat, und Vorpressen, hergestellt.

	Aktiver Bestandteil	mg/Tablttte
(a)	Hydroxypropylmethylcellulose	600
(b)	Methocel K4M Premium)
	Lactose B. P.	112
(O	Povidon B. P. C.	63
(d)	Magnesiumsulfat	28
(e)	7

Die Freisetzung des Mittels findet über einen Zeitraum von etwa 6 bis 8 Stunden statt und war nach 12 Stunden beendet. Beispiel D: Kapsel-Formierungen Formulierung A

Eine Kapsel-Formulierung wird durch Vermischen der Bestandteile der Formulierung D im obigen Beispiel C und Füllen in eine zweiteilige Hartgelatind-Kapsel hergestellt. Die Formulierung B (unten) wird in einer ähnlichen Weise hergestellt.

Formulierung B

	mg/Kapsel
(a) Aktiver Bestandteil	250
(b) Lactose B. P.	143
(c) Natriumstärkeglykolat	25
(d) Magnesiumstenrat	2
	420

Formulierung C

mg/Kapsel

(a) Aktiver Bestandteil 250

(b) Macrogol4000BP 350

600

Die Kapseln werden durch Schmelzen des Maciogol 4000BP, Dispergieren dos aktiven Bestandteils in der Schmelze und Füllen der Schmelze in eine zweiteilige Hartgelatine-Kapsel, hergestellt.

Formulierung D

mg/Kapsel

Aktiver Bestandteil 250

Lecithin 100

Erdnußöl 100

460

Die Kapseln werden durch Dispergieren des aktiven Bestandteils in dem Lecithin und in dem Erdnußöl und Abfüllen der Dispersion in weiche elastische Gelatine-Kapseln hergestellt.

Formulierung E (Gesteuerte freisetzungskapsel)

Die folgende gesteuerte Freisetzungskapsel-Formulierung wird durch Extrudieren der Bestandteile (a), (b) und (c) unter Vorwundung eines Extruders, gefolgt von Überführen des Extrudats in Kügelchen und Trocknen, hergestellt. Die getrockneten Pellets werden denn mit der die Freisetzung steuernde Membran (d) beschichtet und in eine zweiteilige Hartgelatints-Kapsel abgefüllt.

mg/Kapsel

(a) Aktiver Bestandteil 250

(b) Mikrokristalline Cellulose 125

(c) Lactose IIP 126

(d) Fthylcelluloso _13

513

Beispiel E: Injizierbar· Formulierung

Aktiver Bestandteil 0,200 g

Steriler, pvrogenfreier Phosphatpuffer (pH 7,0) auf 10 ml

Der aktive ßestandteil wird in der Hauptmenge des Phosphatputfers (36X bis 40'C) gelöst, dann auf das Volumen aufgefüllt und durch einen sterilen Mikroporenfilter in eine sterile bernsteinfarbene lOml-Glaeph"¹"' "> (Typ 1) filtriert und mit sterilem Verschluß und Abdichtung versehen.

-16- 264 924· Bei»piel F: lntramutkullre Injektion

Aktiver Bestandteil	0,20 g
Benzylalkohol	0,10g
Glucofuro! 75	1,45 g
Wasser für Injektion q.s. auf	3,00 ml

Der aktive Bestandteil wird in dem Qlycofurol gelöst. Der Benzylalkohol wird anschließend zugegeben und gelöst und mit Wasser auf 3ml aufgefüllt Die Mischung wird dann durch ein steriles Mikroporenfilter filtriert und in sterile 3ml-Glasphiolen (Typ 1) abgefüllt und dieso verschlossen.

Beispiel O:

8lrup-Suspentlon	0,2600 g
Aktiver Bestandteil	1,500Ug
Sorbit-lösung	2,0000 g
Glycerin	0,0750 g
Dispersive Cellulose	0,0050 g
Natriumbenzoat
Geschmacksstoff, Pfirsich	0,0125n
17.42.3169

Gereinigtes Wanser q.s. auf 5,0000 ml

Das Natriumbenzoat wird in einem Teil des gereinigten Wassere gelöst und die Sorbit-Lösung zugegeben. Der aktive Bestandteil wird zugegeben und dispergiert. Das Verdickungsmittel (dispersible Cellulose) wird in dem Glycerin dispergiert. Die zwei Dispersionen werden gemischt und mit dem gereinigton Wasser auf das gewünschte Volumen aufgefüllt. Eine weitere Verdickung wird nach Bedarf durch Extraabscherung der Suspension erzielt.

Beispiel H: Suppositorium

mg/8upposHorium

Aktiver Bestandteil (63/im)· 250 Hartfett, BP (Witepsol H15

— Dynamit Nobel) 1770

2020

Ein Fünftel des Witepsol H16 wird in einer mit Dampfmantel verschonen Pfanne bei maximal 45°C geschmolzen. Der aktive Bestandteil wird durch ein 20(Vm-Sieb gesiebt und zu der geschmolzenen Basis unter Mischen, wobei ein mit einem Schneidkopf versehener „Silverson" verwendet wird, zugegeben, bis eine glatte Dispersion erreicht ist. Das rostliche Witepsol H15 wird unter Aufrechterhaltung des Mischene bei 45X zu der Suspension zugegeben und gerührt, um eine homogene Mischung sicherzustellen Die gesamte Suspension wird durch ein 250Mm-Sieb aus rostfreiem Stahl durchgepreßt und unter fortgesetztem Rühren auf 40⁰C abkühlen gelasson. Bei einer Temperatur von 38⁰C bis 4O⁰C wird die Mischung in geeignete Kunststoff-Formen abgefüllt. Man läßt die Suppositorien auf Raumtemperatur abkühlen.

Beispiel I: Pessere

mg/PesMr

Aktiver Bestandteil 63Mm 260 Wasserfreie Dextrose 380 Kartoffelsterke 383 Magnesiumstearat 7_

1000

Die obigen Bestandtolle werden direkt vermischt und die Pessare durch Direktverpressung der erhaltenen Mischung hergestellt. Antivirale und Toxlxitatsprüfung

Menschlicher Cytomegalovlrus (HCMV) wird in Monoschichten von entweder MRC& Zellen (menschliche Embryo-Lunge) oder Detroit 532-Zellen (menschliche Vorhaut-Fibroblasten) in Multiwell-Trögen untersucht. Die Aktivität der Verbindungen wird In dem PlaqueRedukti >itsasiay bestimmt, in welchem eine Zellen-Monoschicht mit einer Suspension von HCMV infiziert und dann mit Nahrstoff-Agarote in der Form eines Gels überschichtet wird, um sicherzustellen, daß keine Ausbreitung von Virus durch die Kultur erfolgt. Ein Bereich von Konzentrationen der Verbindung von bekannter Molerltat wurde In die Nflhrstoff-Agarose-Oberschicht inkorporiert. Die PlaqueZahlen von jeder Konzentration werden als Prozentsatz der Kontrolle angegeben und oine Dosis-Response-Kurve gezogen. Aus dieser Kurve wird die 50%ige inhibitorische Konzentration (IC₁₀) bestimmt.

Der aktive Bestandteil wird als Pulver elngeieUt, in welchem zumindest 90% dar Teilchen einen Durchmesser von 03jim oder kleiner aufweisen.

Varicella-Zoster-Virus (VZV) wird in MRC5-Zelien nach einor ähnlichen Methode wie die für HCMV bestimmt, wobei die Agarose-Obersrhicht weggelassen wird.

Ein Assay wurde durchgeführt, bei welchem Virus-produzierende Zellen (P3HR-1 i dem Mittel für 14 Tage ausgesetzt wurden, wonach die EBV-Genom-Kopien pro Zelle durch EBV-spezifische c- RNA-DNA-Hybridisierung bestimmt wurden. Epstein-Barr-Virus wird nach den Methoden von Nonoyama und Pagano untersucht, die in Nature: Now Biology Vol. 233, Seiten 103-104, (1971) beschrieben sind. Der in den Resultaten angegebene IC₅₀-We(I ist die Konzentration, welche erforderlich ist, um das EBV-Genom No/Zelle um 50% zu inhibieren.

Die Zelltoxizität wurde in einem Zallwacristumsinhibior ungsassay bestimmt. Subkonfluente Kulturen von Vero-Zellen, gezüchtet auf „96-well-Mikrotiter"-Schalen wurden verschiedenen Verdünnungen des Mittels ausgesetzt und die Lebensfähigkeit der Zellen täglich an Replikat-Kultiiren bestimmt, wobei die Aufnahme eines Tetrazoliumfarbstoffe (MTT) angewandt wurde. Die für eino 50%ige Inhibierung der Zeil-Lebensfähigkeit bei 96 Stunden orforderlicher Konzentration wird mit CCID₅₀ bezeichnet. Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle wiedergegeben.

Tabelle Beispiel

VZV

IC₆₀ (μΜ> HCMV

1,0

0,3/1 2 1,5 3,3 2,2

3/7 >20 >20 28,5

CCID₆₀ (μΜ)	IC_M (μΜ)
Bei 96 h	EBV
>500	<50
>500	—
>300	<0,1
>300
>500

Claims

Erfindungsansprüche:

worin X eine Vinylen- oder Ethinylen-Gruppe, R¹ eine Oxo- oder Imino-Gruppe, R² Wasserstoff, eine Ci-2-Alkyl- oder eine verzweigte Cj-4- oder Cycloalkyl-Gruppe, z. B. Isopropyl oder Cyclopropyl, R³ ein Wasserstoffatom oder eine Acyl-Gruppe, z. B. eine C^-Alkanoyl- oder Benzoyl-Gruppe, gegebenenfalls beispielsweise durch ein oder mehrere Halogen-, Alkyl-, Hydroxy- oder Alkoxy-Substituenten substituiert und R⁴ ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxy-Gruppe bedeutet, vorausgesetzt, daß

(a) falls R¹ Imino ist, R³ Wasserstoff und R⁴ Wasserstoff oder Hydroxy bedeutet,-X-R² keine Vinyl-, Ethinyl- oder Propenyl-Gruppe ist;

(b) falls R¹ Oxo ist, R³ Wasserstoff und R⁴ Wasserstoff oder Hydroxy bedeute,, -X-R² keine Vinyl-, Ethinyl-, 1-Propenyl-, 1-Propinyl-, 1-Butenyl-, 1-Butinyl- oder 3,3,3-Trimethyl-1-propinyl-Gruppe ist oder ein pharmazeutisch vertragliches Derivat derselben,

gekennzeichnet dadurch, daß man

(A) eine Verbindung der Formel (II) .1

X—R

(ID

(worin R² die gleiche Bedeutung wie oben besitzt, X eine Ethinylon-Gruppe ist, R] eine geschützte Hydroxy- oder Amino-Gruppe und M¹ eine Hydroxy-Schutzgruppe bedeutet) mit einer Verbindung der Formel III

(III)

(worin Y ein Halogenatom, jeder der Reste M² und M³ eine Hydroxy-Schutzgruppe und Rj ein Wasserstoffatom oder eine geschützte Hydroxy-Gruppe ist) kondensiert;

-2- 264 92«

(B) eine Verbindung der Formel (IV)

.1

(IV)

in welcher R¹, M², M³, Rj die gleiche Bedeutung wie oben besitzen und Z eine austretende Gruppe ist, mit einer Verbindung umsetzt, die fähig ist, die erforderliche Gruppierung der Formel -X-R² (in wc. jher X üthinylon und R² die gleiche Bedeutung wie oben besitzt) zur Bildung einer Verbindung der Formel (I)^B, in welcher X Ethinylen und R³ Wasserstoff ist, zu schaffen; oder

(C) eine Verbindung der Formel (V)

(V)

(worin Q eine geeignete austretende Gruppe und X, R², M¹, M² und Rj die gleiche Bedeutung wie oben besitzen) mit einem Mittel umsetzt, das zum Ersatz der Gruppe Q durch eine Amlno-Gruppe dient; zur Bildung einer Verbindung, in welcher X Ethinylen und R³ Wasserstoff ist; und gegebenenfalls anschließend oder gleichzeitig damit entweder eine oder beide der nachstehenden Behandlungeweisen in einer beliebigen gewünschten Reihenfolge durchführt: (i) Entfernung von irgendwelchen zurückgebliebenen Schutzgruppen: (ii) im Falle daß die resultierende Verbindung eine Verbindung der Formel (I)^B ist, Umwandeln derselben in ein pharmazeutisch verträgliches Derivat davon, oder, falls die resultierende Verbindung oin pharmazeutisch verträgliches Derivat ist, Umwandeln derselben in ein davon verschiedene pharmazeutisch verträgliches Derivat oder in eine Verbindung der Formel (I)⁰.

2. Verfahren nach Anspruch 1, gekennzeichnet dadurch, daß R³ Benzoyl, X Ethinyi, R² Methai und R¹ Oxo ist.

3. Verfahren nach Anspruch 1, gekennzeichnet dadurch, daß X Ethinyi, R² Methyl und R¹ amino ist.

4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man
2'-Dooxy-5-(1-propinyl)-cytidin und/oder
3-N-Benzoyl-2'-deoxy-5-propinyluridin
herstellt.