DK168323B1 - Anvendelse af visse pyrimidinnucleosider til fremstilling af et lægemiddel mod VZV-infektioner; hidtil ukendte pyrimidinnucleosider, sådanne forbindelser til anvendelse i human terapi samt fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne - Google Patents

Description

i UK Ί68323 Bl

Opfindelsen angår anvendelse af visse pyrimidin-nucleosider, samt farmaceutisk acceptable salte, estere og salte af sådanne estere deraf, til fremstilling af et lægemiddel til behandling af eller profylakse for in-5 fektioner med varicella zoster virus. Opfindelsen angår endvidere hidtil ukendte pyrimidinnucleosider samt farmaceutisk acceptable salte, estere og salte af sådanne estere deraf, disse forbindelser til anvendelse ved human terapi, anvendelse af forbindelserne til fremstil-10 ling af et lægemiddel til behandling af eller profylakse for infektioner med varicella zoster virus samt endelig en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne.

Blandt DNA vira er herpesgruppen kilden for de mest almindelige virale sygdomme hos mennesket. Gruppen 15 består af herpes simplex virus (HSV), varicella zoster (vzv), cytomegalovirus (CMV) og Epstein-Barr virus (EBV).

Varicella zoster virus (VZV) er en herpesvirus, der medfører skoldkopper og helvedesild. Skoldkopper er 20 den primære sygdom, forårsaget i en vært, der ikke har immunitet og er hos små børn sædvanligvis en mild sygdom, der er ejendommelig ved et blæret udslæt og feber. Helvedesild eller zoster er den tilbagevendende form for sygdommen, der forekommer hos voksne, der tidligere er 25 blevet inficeret med varicella zoster virus. De kliniske tegn på helvedesild er især neuralgi og et blæreag-tigt udslæt på huden, der er ensidigt, hvad angår fordelingen på huden. Hvis betændelsen spreder sig, kan det føre til paralyse eller kramper. Der kan forekomme 30 coma, hvis hjernehinderne bliver påvirket. Hos patienter med defekt immunsystem kan VZV spredes med alvorlig eller endog dødelig udgang. Man må tage VZV alvorligt, når det drejer sig om patienter, der modtager immunun-dertrykkende medikamenter på grund af transplantationer 35 eller til behandling af ondartet neoplasi, og det er en alvorlig komplikation hos AIDS-patienter på grund af deres svækkede immunsystem.

2 DK 168323 B1

Fra DK patentansøgning nr. 3265/86 (almindeligt tilgængelig 11. januar 1989) kendes anvendelse af 2'-desoxy-5-ethynyluridin og dets farmaceutisk acceptable derivater ved behandling af eller profylakse for humane 5 virusinfektioner, forårsaget af cytomegalovirus (CMV) eller varicella zoster virus (VZV).

Det er nu overraskende blevet fundet, at visse andre pyrimidinnucleosider med en umættet gruppe i 5-stillingen, er særligt værdifulde ved fremstilling af 10 lægemidler til behandling af VZV infektioner. Disse forbindelser har foruden en god anti-VZV-aktivitet endvidere en lav toksicitet, som bestemt ved toksicitetseksperimenter på cellekulturer in vitro.

Opfindelsen angår derfor anvendelsen af pyrimi-15 dinnucleosider, som repræsenteres ved følgende almene formel (I): R* 20 p 3 GeC-R2 — n γ (I) 25 V?

. OH

hvori 30 R1 betegner en oxo- eller iminogruppe; R2 betegner hydrogen eller en C1_2alkylgruppe; R3 betegner hydrogen eller en benzoylgruppe, eventuelt substitueret med én eller flere halogen-, alkyl-, hydroxy- eller alkoxysubstituenter; og 35 R4 betegner hydrogen eller en hydroxygruppe; eller et farmaceutisk acceptabelt salt, ester, eller 3 DK 168323 B1 salt af en sådan ester deraf, idet dog forbindelser undtages, hvor (a) R2, R3 og R4 hver for sig er hydrogen, og R1 er en oxogruppe, samt hvor 5 (b) R2 er methyl, R3 er hydrogen, R4 er hydroxy, og R1 er en oxogruppe, til fremstiling af et lægemiddel til behandling af eller profylakse for en infektion med varicella zoster virus.

Man bør bemærke, at forbindelser med formel (I) 10 kan eksistere på tautomer form, når R3 ikke betegner en acylgruppe.

De ovenfor nævnte pyrimidinnucleosider inkluderer som nævnt farmaceutisk acceptable derivater af sådanne forbindelser, dvs. et hvilket som helst farmaceutisk 15 acceptabelt salt, ester eller salt af en sådan ester, heraf.

Fortrinsvis anvendes forbindelser, hvor a) R2 betegner hydrogen eller en methylgruppe; b) R3 er. et hydrogenatom eller en benzoylgruppe; 20 og/eller c) R4 betegner hydrogen, og R2 betegner en methylgruppe, og især på grund af deres særlig kraftige anti- VZV-aktivitet 25 e) 21-desoxy-5-ethynylcytidin f) 2'-desoxy-5-(l-propynyl)uridin g) 1-(β-D-arabinofuranosyl)-5-ethynyluracil h) 1-(β-D-arabinofuranosyl)-5-ethynylcytosin; 30 samt blandt derivater deraf, især diacetatet af forbindelse e).

Særlig foretrukne er forbindelserne f) og g) på basis af deres kraftige anti-VZV aktivitet.

Visse 5-substituerede nucleosider, især 2'-des-35 oxy-5-ethynylcytidin, 2'-desoxy-5-(l-propynyl)uridin, 1-(β-D-arabinofuranosyl)-5-ethynyluracil, 1-(β-D-arabi- 4 DK 168323 B1 nofuranosyl)-5-(l-propynyl)uracil og l-(3-D-arabinofura-nosyl)-5-ethynylcytosin, er tidligere blevet beskrevet i J. Med. Chem. (1983), 26(5), 661-6, J. Med. Chem.

(1983), 26(9), 1262-7, Antimicrobial Agents Chemother, 5 (1980), 17(6), 1030-1, Nucleic Acids Syms. Ser. (1981) 9, 103-6 og Biochem Pharmacol, (1983) (32(4), 726-9 med måledata for anden antiviral aktivitet af varierende styrke.

Imidlertid er en gruppe nu opdagede pyrimidin-10 nucleosider med anti-VZV-aktivitet og lav toksicitet ikke nævnt i litteraturen, og disse hidtil ukendte pyrimi-dinnucleosider er ejendommelige ved, at de har den almene formel IB: 15 i ir C=C-R2

kJ

20 (I)B

OH

25 hvori R1 betegner en oxo- eller iminogruppe; R2 betegner hydrogen eller en C1_2alkylgruppe; R3 betegner hydrogen eller en benzoylgruppe, eventuelt 30 substitueret med én eller flere halogen-, alkyl-, hydroxy- eller alkoxysubstituenter; og R4 betegner hydrogen eller en hydroxygruppe; eller er et farmaceutisk acceptabelt salt, ester, eller salt af en sådan ester deraf, idet dog forbindelser und-35 tages, hvor (a) R1 er imino, R3 er hydrogen, og R2 er hydrogen; Η I “ · --- 5 DK 168323 B1 samt hvor (b) R1 er oxo og er hydrogen.

Af disse hidtil ukendte pyrimidinnucleosider foretrækkes ukendte nedennævnte forbindelser ifølge opfin-5 delsen, især på grund af deres kraftige anti-VZV-akti-vitet.

a) 3-N-benzoyl-2'-desoxy-5-ethynyluridin b) 3-N-benzoyl-2'-desoxy-5-(1-propynyl)(1-uridin 10 c) 2'-desoxy-5-(1-propynyl)cytidin d) 1-(β-D-arabinofuranosyl)-5-(l-propynyl)cyto-sin.

Særlig foretrukne forbindelser er b) og c), der 15 har vist sig at have kraftig anti-VZV-aktivitet.

Yderligere hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen inkluderer: i) 1-(β-D-arabinofuranosyl)-3-N-benzoyl-5-(l- 20 propynyl)uracil j) l-(β-D-arabinofuranosyl)-3-N-benzoyl-5-ethy-nyluracil

Endvidere farmaceutisk acceptable salte og estere 25 af sådanne forbindelser. De ovennævnte forbindelser har alle især høj aktivitet over for VZV. Det kan i øvrigt nævnes, at forbindelserne a) og e) også er højaktive over for CMV, og forbindelse g) især har høj aktivitet over for EBV.

30 Opfindelsen inkluderer yderligere: a) de hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen til anvendelse ved human terapi og b) anvendelse af en hidtil ukendt forbindelse ifølge 35 opfindelsen til fremstilling af et lægemiddel til anvendelse ved behandling af eller profylakse for 6 DK 168323 B1 en infektion med varicella zoster virus.

Foretrukne mono- og diestere ifølge opfindelsen inkluderer carboxylsyreestere, hvori ikke-carbonyIdelen 5 af estergruppen udvælges blandt ligekædede eller forgrenede alkyl, alkoxyalkyl (f.eks. methoxymethyl), carboxy-alkyl (f.eks. carboxyethyl), aralkyl (f.eks. benzyl), aryloxyalkyl (f.eks. phenoxymethyl), aryl (f.eks. phenyl, eventuelt substitueret med halogen, alkyl el- 10 ler C-l-4 alkoxy); sulfonatestere såsom alkyl- eller aralkylsulfonyl (f.eks. methansulfonyl); og mono-, dieller triphosphatestere, der kan eller ikke kan være blokerede; aminosyreestere og nitratestere. Hvad angår de ovenfor beskrevne estere vil en hvilken som helst al-15 kyldel, der er til stede i sådanne estere, medmindre andet nævnes, med fordel indeholde 1-18 carbonatomer, især 1-4 car-bonatomer. En hvilken som helst aryldel, der findes i sådanne estere, vil med fordel omfatte en phe-nylgruppe. En hvilken som helst referance til en hvilken 20 som helst af de ovenfor nævnte forbindelser skal også inkludere en reference til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

Salte ifølge opfindelsen, der med fordel kan anvendes terapeutisk, inkluderer fysiologisk acceptable 25 basesalte, dvs. sådanne der er afledt fra en passende base, såsom et alkalimetal (f.eks. natrium), jordalkali-metal (f.eks. magnesiumsalte), ammonium og NX+4 (hvori X er C1-4 alkylsalte).

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indgives ad 30 en hvilken som helst passende vej, afhængig af arten af sygdommen, der skal behandles, passende indgivelser inkluderer oral, rektal, nasal, topisk (deriblandt buccal og sublingual), vaginal og parenteral, (deriblandt subkutan, intramuskulær, intravenøs, intradermal, intrathe-35 cal og epidural). Man bør lægge mærke til, at den foretrukne indgivelsesmåde f.eks. kan variere med modtagerens almentilstand.

7 DK 168323 B1

Por hver af de ovenfor nævnte anvendelser og indikationer vil mængden af den nødvendige aktive ingrediens afhænge af en række faktorer, hvoriblandt alvoren af den sygdom, der skal behandles, og patientens karak-5 teristika, og det må være lægen, der til slut bestemmer størrelsen af dosis. Almindeligvis vil imidlertid for hver af disse anvendelser og indikationer en passende og effektiv dosis ligge i området 0,1-250 mg pr. kg kropsvægt af modtageren pr. dag, foretrukken 1-100 mg pr. kg 10 krops vægt pr. dag, og mest foretrukket i området 5-30 mg pr. kg kropsvægt pr. dag. En optimumdosis er ca. 15 mg pr. kg kropsvægt pr. dag (medmindre andet angives, beregnes alle vægtangivelser for aktiv ingrediens ud fra udgangsforbindelsen; for salte og estere deraf må man 15 forøge talværdien i forhold dertil). Den ønskede dosis kan eventuelt indgives som to, tre, fire eller flere underdoser, indgivet med passende intervaller i løbet af dagen. Disse kan indgives på enhedsdosisform, f.eks. med indhold af 10-1000 mg, foretrukken 20-500 mg, og 20 mest foretrukket 100-400 mg aktiv ingrediens pr. enhedsdosis .

Selv om det er muligt at indgive forbindelserne som sådan, foretrækkes det at indgive dem som farmaceutiske præparater. Sådanne præparater omfatter i det 25 mindste én aktiv ingrediens, som defineret ovenfor, sammen med én eller flere acceptable bærere derfor og eventuelt andre terapeutiske ingredienser. Bæreren eller bærerne må være acceptable, idet de må være forligelige med de andre ingredienser i præparatet og ikke være 30 skadelige for modtageren.

Præparaterne inkluderer sådanne, der er egnede til oral, rektal, nasal, topisk (deriblandt buccal og sublingual), vaginal eller parenteral (deriblandt subkutan, intramuskulær, intravenøs, intradermal, intrathecal 35 og epidural) indgivelse. Præparaterne foreligger bekvemt på enhedsdosisform og kan fremstilles ved en hvil- 8 DK 168323 B1 ken som helst fremgangsmåde ifølge kendt farmaceutisk teknik. Sådanne fremgangsmåder inkluderer, at man bringer den aktive ingrediens i forbindelse med bæreren, der indeholder en eller flere hjælpeingredienser. Alminde-5 ligvis fremstiller man præparaterne, idet man ensartet og grundigt bringer den aktive ingrediens i kontakt med væskeformige bærere eller finopdelte faste bærere eller begge og derefter, om nødvendigt, formgiver produktet.

Præparater,der er egnede til oral indgivelse, kan 10 foreligge som enkelte enheder, såsom kapsler, cachetter eller tabletter, der hver indeholder en forudbestemt mængde aktiv ingrediens; som et pulver eller granulat; som en opløsning eller suspension af en vandig væske eller en ikke vandig væske; eller som en olie-i-vand væ-15 skeemulsion eller en vand-i-olie væskeemulsion. Den aktive ingrediens kan også foreligge som en bolus, latvær-ge eller pasta.

Man kan fremstille en tablet ved sammenpresning eller støbning, eventuelt sammen med en eller flere 20 hjælpeingredienser. Pressede tabletter kan fremstilles, idet man i en passende maskine sammenpresser den aktive ingrediens på frit flydende form, såsom et pulver eller granulat, eventuelt blandet med et bindemiddel (f.eks. povidon, gelatine, hydroxypropylmethylcellulose), et 25 smøremiddel, inert fortynder, præserverende middel, sønderdelende middel (f.eks. natriumstivelseglycolat, tværbundet povidon, tværbundet natriumcarboxymethylcel-lulose), overfladeaktivt eller dispergerende middel.

Man kan fremstille støbte tabletter, idet man i en pas-30 sende maskine bearbejder en blanding af den pulveriserede forbindelse, fugtet med en inert væskeformig fortyn der. Man kan eventuelt overtrække tabletterne og forsyne dem med kærv, eller de kan fremstilles, så de tilve-jebringer langsom eller kontrolleret frigivelse af den 35 aktive ingrediens, idet man f.eks. anvender hydroxypropylmethylcellulose i varierende mængdeforhold til opnåelse af den ønskede frigivelsesprofil.

9 DK 168323 B1

Til infektioner i øjet eller andre ydre væv, såsom munden eller huden, anbringer man fortrinsvis præparaterne lokalt som en salve eller en creme, der indeholder den aktive ingrediens i f.eks. en andel på 0,075 -5 20% w/w, foretrukken 0,2-15% w/w og mest foretrukken 0,5-10% w/w. Når de aktive ingredienser indgår i en salve, kan man benytte enten en paraffinagtig eller en med vand blandbar salvebasis. Alternativt kan man lade de aktive ingredienser indgå i en creme med en olie-i-10 vand cremebasis.

Om ønsket kan den vandige fase i cremebasis inkludere f.eks. i det mindste 40% w/w af en polyvalent alkohol, dvs. en alkohol med to eller flere hydroxygrup-per, såsom propylenglycol, butan-1,3-diol, mannitol, 15 sorbitol, glycerol og polyethylenglycol og blandinger deraf. Formuleringer til lokal brug kan med fordel indeholde en forbindelse, der forstærker absorption eller gennemtrængning af den aktive ingrediens gennem huden eller andre påvirkede områder. Eksempler på sådanne 20 midler, der forstærker gennemtrængning gennem huden, inkluderer dimethylsulfoxid og beslægtede analoge forbindelser.

Oliefasen i emulsionerne kan opbygges af kendte ingredienser ved kendt teknik. Selv om denne fase blot 25 kan omfatte et emulsionsdannende middel (også kendt som en emulgator), omfatter den gerne en blanding af i det mindste én emulsionsdanner med et fedtstof eller en olie, eller både med et fedtstof og en olie. Det foretrækkes, at en hydrofil emulgator inkluderes sammen med 30 en lipofil emulgator, der fungerer som stabilisator.

Det foretrækkes også, at der både er olie og et fedtstof til stede. Sammen udgør emulgatoren el-ler emulgatorerne med eller uden stabilisator den såkaldte emulsifie-rende voks, og vokset sammen med olien eller fedtstoffet 35 danner den såkaldte emulsionsdannende salvebasis, der danner den disperse oliefase i cremepræparaterne.

10 DK 168323 B1

Emulgatorer og emulsionsstabilisatorer, der er egnet, inkluderer Tween® 60, Span® 80, cetostearylalko-hol, myristylalkohol, monostearat og natriumlaurylsul-fat.

5 Valget af egnede olier eller fedtstoffer til præ paratet foretages på basis af opnåelse af passende kosmetiske egenskaber, siden opløseligheden af den aktive forbindelse i de fleste olier, der normalt anvendes i farmaceutiske emulsionspræparater, er meget lav. Cremen 10 skal foretrukket være et ikke-fedtet, ikke-plettende og afvaskeligt produkt med passende konsistens, så den ikke lækker fra tuber eller andre beholdere. Man kan benytte ligekædede eller forgrenede mono- eller dibasiske alkyl-estere, såsom di-isoadipat, isocetylstearat, propylen-15 glycol, diestere af fedtsyrer fra kokosnødolie, isopro-pylmyristat, decyloleat, isopropylpalmitat, butylstea-rat, 2-ethylpalmitat eller en blanding af forgrenede estere kendt som Crodamol CAP, de sidste tre er de foretrukne estere. Sådanne kan benyttes alene eller kombi-20 neret, afhængigt af de ønskede egenskaber. Man kan også anvende lipider med højt smeltepunkt, såsom hvid blød paraffin og/eller flydende paraffin eller andre mineralolier.

Præparater, egnede til topisk indgivelse til 25 øjet, inkluderer også øjendråber, hvori den aktive ingrediens er opløst eller suspenderet i en passende bærer, især et vandigt opløsningsmiddel til den aktive ingrediens. I sådanne præparater er den aktive ingrediens foretrukket til stede med en koncentration på 0,5-20%, 30 med fordel 0,5-10% og især ca. 1,5% w/w.

Præparater egent til topisk indgivelse i munden, inkluderer pastiller, hvor den aktive ingrediens findes i en aromatiseret basis, sædvanligvis sucrose og acacia eller tragant; pastiller med den aktive ingrediens i en 35 inert basis, såsom gelatine og glycerin, eller sucrose og acacia; og mundskyllemidler, der indeholder den aktive ingrediens i en passende vandig bærer.

Η I - ------- - 11 DK 168323 B1

Præparater til rektal indgivelse kan foreligge som stikpiller med en passende basis, der f.eks. omfatter cacaosmør eller salicylat.

Præparater, der er egnet til indgivelse i næsen, 5 hvori bæreren er på fast form, inkluderer et groft pulver med partikelstørrelse, f.eks. i området 20-500 mikron, der indgives på samme måde som snus, dvs. ved hurtig inhalation gennem næsen fra en beholder, der indeholder pulveret og holdes tæt op mod næsen. Passende 10 præparater, hvori bæreren er på væskeform, f.eks. næsespray eller næsedråber, inkluderer vandige eller olieag-tige opløsninger af den aktive ingrediens.

Præparater, der er egnede til vaginal indgivelse, kan foreligge som vagitorier, tamponer, cremer, geler, 15 pastaer, skum eller spray, der foruden den aktive ingrediens indeholder sådanne bærere, der er egnede ifølge kendt teknik.

Præparater, der er egnede til parenteral indgivelse, inkluderer vandige og ikke-vandige sterile injek-20 tionsopløsninger, der kan indeholde antioxidanter, puffere, bakteriostatiske midler og opløste stoffer, der gør præparatet isotonisk med blodet hos modtageren, og vandige og ikke-vandige suspensioner, der kan inkludere suspenderende midler og fortykkende midler. Formulerin-25 gerne kan foreligge i enhedsdosis- eller mangedosis-be-holdere, f.eks. i forseglede ampuller og småglas, og kan opbevares i frysetørret (lyofiliseret) tilstand, så man kun behøver at tilsætte steril væskeformig bærer, f. eks. vand til injektion umiddelbart før anvendelsen.

30 Man kan fremstille injektionsopløsninger og suspensioner til pludselig nødvendig anvendelse ud fra sterile pulvere og granulater og tabletter af den tidligere nævnte type.

Foretrukne enhedsdosispræparater er sådanne, der 35 indeholder en daglig dosis eller enhed, en daglig dosis som ovenfor beskrevet eller en passende brøkdel deraf af aktiv ingrediens.

12 DK 168323 B1

Man bør forstå, at foruden de ingredienser, der især er nævnt ovenfor, kan præparater inkludere andre midler, der er kendt i farmaceutisk teknik og er afhængig af typen af præparater, f.eks. kan præparater til 5 oral indgivelse indeholder smagsstoffer.

Forbindelserne i følge opfindelsen kan fremstilles ved en hvilken som helst fremgangsmåde ifølge kendt teknik til fremstilling af lignende forbindelser, se f. eks. UK patentskrift nr. 1 601 020, eller Robens M.J., 10 og Barr, P.J., J. Org. Chem. (1983), 48, 1854-1962, og især fremgangsmåderne, der beskrives i de nedenstående Eksempler.

Den foreliggende opfindelse tilvejebringer også en fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse 15 ifølge opfindelsen, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man; enten: A) kondenserer en forbindelse med den almene formel (II) 20 i* N ^VC^2 λ I (II) 25 (hvori R2 er som ovenfor defineret, R1a er en beskyttet hydroxy- eller aminogruppe, og M1 er en hydroxybeskyttende gruppe) med en forbindelse med 30 den almene formel (III):

L/IV I UUOCU lu* I

13 Y__J/ (111) OM3 (hvori Y betegner halogen, M2 og M3 er hver for sig en hydroxybeskyttende gruppe, og R4a er hy-10 drogen eller en beskyttet hydroxygruppe); eller (B) lader en forbindelse med den almene formel (IV):

Rl 15 HN'^^V'·'2

kJ

(IV) s 20 vi/ \r hvori

25 R1, Μ2, M3 og R4a er som ovenfor defineret, og Z

er en fraspaltelig gruppe, reagere med en forbindelse, der er i stand til at tilvejebringe den nødvendige -C=C-R2 gruppe (hvori R2 er som ovenfor defineret) til opnåelse af en forbindelse 30 med formel (I), hvori R3 er hydrogen; eller (C) lader en forbindelse med formel (V): 35 14 DK 168323 B1

Ml0 n/\, ,V)

V

10 0M

(hvori Q er en passende fraspaltelig gruppe, og R2, Μ1, M2 og R4a er som ovenfor defineret) reagere med et middel til ombytning af Q med en aminogruppe; til dannelse af en forbindelse, 15 hvori R3 er hydrogen; og eventuelt senere, eller samtidig hermed, udfører den ene eller begge af følgende operationer, i vilkårlig orden: i) fjerner eventuelt tilbageværende beskyttende 20 grupper; ii) når den dannede forbindelse er en forbindelse med formel (I)B, omdanner den til et farmaceutisk acceptabelt derivat (defineret som et salt, en ester eller et salt af en sådan ester) deraf, eller, når 25 den dannede forbindelse er et farmaceutisk accep tabelt derivat, omdanner den til et andet farmaceutisk acceptabelt derivat, eller til en forbindelse med formel (I)B.

Hvad angår fremgangsmåde A) kan man beskytte ud-30 gangsmaterialerne med passende beskyttende grupper, såsom acylgrupper, f.eks. alkanoyl eller aroylgrupper, såsom p-toluoyl, eller trialkylsilylgrupper, såsom tri-methylsilylgruppen, idet de grupper, der beskytter M1 og R1a, almindeligvis er silylbeskyttende grupper. Haloge-35 net Y i sukker residuen (formel (III) er normalt chlor, og man foretager reaktionen under tilstedeværelse af en DK 168323 Bl 15

Lewis-syrekatalysator, f.eks. stannichlorid, i et passende opløsningsmiddel, såsom 1,2-dichlorethan. Man kan derefter opnå udgangsforbindelsen efter anomer adskillelse ved behandling med en alkoholisk base, såsom na-5 triummethoxid i methanol. Denne fremgangsmåde beskrives også af Barr et al., i J. Chem. Soc. Perkin Trans 1 (1978), 1263 ff.

Man kan derefter fjerne de beskyttende grupper ved sur eller basisk hydrolyse, idet acylgrupper med 10 fordel fjernes ved basisk hydrolyse og silylgrupper ved sur hydrolyse.

Hvad angår fremgangsmåde B) gives der eksempler på denne i Robins, M.J., og Barr, P.J., i J. Org. Chem.

(1983), 48, 1854 ff. Man kan underkaste et 5-halogene- 15 ret nucleosid, såsom 2'-desoxy-5-ioduridin på passende beskyttet form, f.eks. med de ovenfor nævnte beskyttende grupper, en katalyseret koblingsreaktion, f.eks. med en palladiumkatalysator, med en passende beskyttet acetylen, såsom trimethylsilylacetylen under tilstedeværelse 20 af en organisk base, såsom triethylamin, og en anden metalkatalysator, f.eks. et kobber(I)salt, ved en forhøjet temperatur som 50°C, til opnåelse af det beskyttede ace-tylenholdige nucleosid. En foretrukken palladiumkatalysator er bis(triphenylphosphin)palladiumchlorid og en 25 foretrukken kobberkatalysator er cuproiodid. Udgangsforbindelsen kan uden videre opnås ved fjernelse af alle beskyttende grupper, f.eks. ved behandling med alkoholisk base såsom natriummethoxid i methanol.

I fremgangsmåde C) er den fraspaltelige gruppe Q 30 med fordel en passende heterocyklisk gruppe, især en 1,2,4-triazol-l-ylgruppe eller et halogen, f.eks. chlor, og man fjerner passende gruppen Q ved behandling af forbindelsen med formel (V) med ammoniak.

Forbindelsen med formel (V) kan fremstilles f.

35 eks. ved behandling af den tilsvarende 4-oxoforbindelse med et passende funktionaliserende middel, der indfører 16 DK 168323 B1 den fraspaltelige gruppe Q, f.eks. ved behandling med 1,2,4-triazol, med fordel under tilstedeværelse af et kondenserende middel, såsom 4-chlorphenylphosphodichlor-idat, f.eks. i et basisk opløsningsmiddel, med fordel 5 pyridin, eller ved behandling af 4-oxoforbindelsen med thionylchlorid i dimethylformamid.

De ovenfor nævnte udgangsmaterialer kan fremstilles på konventionel måde ud fra kendte forbindelser, ved kendt teknik f.eks. som beskrevet i Nucleic Acid Chemi-10 stry: Improved New Synthetic Procedures, Methods and

Techniques. Ed. L.B. Townsend og R.S. Tipson, Wiley In-terscience (1978) og Nucleoside Analogues: Chemistry,

Biology and Medical Applications, Ed. R.T. Walter, E de Clercq og F. Eckstein, NATO Advanced Study Institute, 15 Plenum Press (1979). Eksempler på fremgangsmåder til fremstilling af udgangsmaterialer beskrives nedenfor.

I fremgangsmåde A) kan man f.eks. fremstille forbindelsen med formel (II), hvori R2 betegner hydrogen, ved halogenering af 5-acetyluracil med et passende 20 halogenerende middel, såsom phosphorylchlorid, under tilstedeværelse af en base til opnåelse af en forbindelse med formel (VI) X r 25 il (vi) 30 hvori Y betegner halogen. Man kan derefter viderebe-handle forbindelsen med formel (VI) med en uorganisk base, såsom vandig kaliumhydroxid, og derefter foretage en beskyttelse til opnåelse af en forbindelse med formel (II).

35 I fremgangsmåde B) kan man f.eks. fremstille forbindelsen med formel (IV), især når Z er halogen, så- DK 168323 B1 17 som iod, og R4a er en beskyttet hydroxygruppe, ved fremgangsmåder analoge til sådanne, der beskrives af Schinazi et al., Med. Chem. 1979, 22 (20) 1273.

Forbindelserne med formel (I) eller (I)B, hvori 5 R3 betegner en acylgruppe, kan fremstilles ud fra tilsvarende forbindelser, hvori R3 betegner hydrogen, f.eks. ved selektiv beskyttelse af hydroxygrupper i sukkerresten, f.eks. under anvendelse af trialkylsilylgrup-per, og en påfølgende acylering af den beskyttede for-10 bindelse, idet man f.eks. anvender et passende syrechlo-rid eller anhydrid, med fordel under tilstedeværelse af en base, såsom pyridin eller triethylamin, der også kan benyttes som opløsningsmiddel til reaktionen. Den resulterende acylforbindelse med formel (I) eller (I)B kan 15 opnås ved afbeskyttelse, f.eks. ved fjernelse af trial-kylsilylgrupper ved f. eks. behandling med en syre, såsom eddikesyre.

Estere ifølge opfindelsen kan fremstilles på konventionel måde, f.eks. ved behandling af udgangsforbin-20 delsen med formel (I) eller (I)B eller en ester deraf (eventuelt beskyttet) med et passende esterdannende eller transesterdannende middel, f.eks. ved behandling af 2'-desoxy-5-ethynyluridin med et passende syrehalogenid, (f. eks. chlorid) eller anhydrid under tilstedeværelse 25 af en base, bekvemt pyridin, der også kan benyttes som opløsningsmiddel, idet eventuelt tilbageblivende beskyttende grupper derefter fjernes.

Salte ifølge opfindelsen kan også fremstilles på konventionel måde, f.eks. ved reaktion af udgangsforbin-30 delsen, med en passende base til dannelse af det tilsvarende basesalt. Andre derivater ifølge opfindelsen kan også fremstilles på konventionel måde.

De følgende Eksempler illustrerer opfindelsen.

35 18

Eksempel 1 DK 168323 B1 2'-Desoxy-5-(1-propynyl)uridin 5 a) 21-Desoxy-31,51-di-O-p-toluoyl-5-(1-propynyl)uri-dln

Man holdt 3', 5'-di-0-p-toluoyl-21-desoxy-5-iod- uridln (Can. J. Chem., 1982, 60, side 554) 10 (l,llg, 2.0 mmol), 30 mg cuproiodid, 30 mg bis- (triphenylphosphin)palladium(II )chlorid og 80 ml vandfri triethylamin under omrøring under vandfri N2 og boblede propyngas gennem blandingen i 15 minutter. Derefter omrørte man blandingen ved 15 50°C i tre timer. Efter afkøling frafiltrerede man et fast hvidt bundfald, som man optog i di-chlormethan. Opløsningen blev vasket med 2 x 50 ml portioner af 2% dinatriumethylendiamintetraed-dikesyre, tørret (MgS04) og bortfordampet. Man 20 omkrystalliserede remanensen fra dichlormethan/ ethanol (1:2) til opnåelse af 0,63 g (63%) af titelforbindelsen som hvide krystaller med smp. 238 - 241°C.

25 b) 21-Desoxy-5-(1-propynyl)uridin,hemihydrat

Man holdt en opløsning af produktet fra trin a) (0,6 g, 1,2 mmol) i 18 ml 0,2 M natriummethoxid i methanol (frisk fremstillet af natrium og metha-30 nol) under omrøring ved stuetemperatur i to ti

mer, hvorefter man gjorde opløsningen sur til pH

4-5 ved portionsvis tilsætning af Dowex® 50(H) ionbytterharpiks. Man frafiltrerede harpiksen og vaskede med methanol. Filtratet blev inddampet, 35 og man fordelte remanensen mellem vand og ether.

Man vaskede det vandige lag med ether og inddam- 19 DK 168323 B1 pede det. Remanensen blev udrevet med ethanol, og den dannede faste stof frafiltreret og vasket med ether til opnåelse af 0,18 g (55%) af titelforbindelsen med smp. 194-196°C.

5 Analyse:

Beregnet: C 52,36 H 5,49 N 10,23

Pundet: 52,35 5,13 10,23.

Eksempel 2 10 31,51-di-O-Acetyl-21-desoxy-5-ethynylcytidin a) 31,51-di-0-Acetyl-5-ethynyluridin 15 Man holdt 5-ethynyl-2'-desoxyuridin (J. Med.

Chem., 26(5), 661-6 (1983)) (l,26g, 5,0 mmol), 10 ml vandfri pyridin og 1,22 g eddikesyreanhy-drid (12,0 mmol) under omrøring ved stuetemperatur i 20 timer, hvorefter man inddampede den dan- 20 nede klare opløsning til opnåelse af en sirupag tig remanens, der ved fornyet inddampning med ethanol gav et hvidt fast stof. Omkrystallisering fra ethanol gav 1,49 g (92%) af titelforbindelsen som hvide krystaller med smp. 152-154°C.

25 b) 1-(2'-Desoxy-31,5'-di'0'acetyl-p-D-ribofuranosyl) -5-ethynyl-4-(1,2,4-triazol-l-yl)pyrimidin-2(IH)-on_ 30 Man holdt 304 mg af produktet fra trin a) (304 mg, 1 mmol), 207 mg 1,2,4-triazol (3 mmol), 3,0 ml vandfri pyridin og 352 mg p-chlorphenylphos-phodichloridat (1,5 mmol) under omrøring ved stuetemperatur i syv dage. Man inddampede den 35 dannede mørke opløsning og optog den brune olie- agtige remanens i dichlormethan. Opløsningen 20 DK 168323 B1 blev vasket to gange med vand, tørret (MgS04) og inddampet til opnåelse af 380 mg (98%) af titelforbindelsen som et bleggult skum, der blev benyttet på råform i næste syntesetrin.

5 c) 2'-Desoxy-3',5'-di-O-acetyl-5-ethynylcytidin, hy- drochlorid, hemihydrat_

Man holdt en opløsning af produktet fra trin b) 10 (380 mg, 0,98 mmol) i 10 ml dioxan/880 ammoniak (3:1) under omrøring ved stuetemperatur i to timer, hvorved man inddampede til opnåelse af en gummiagtig remanens. Denne blev optaget i varm methanol og gjort sur med en mættet opløsning af 15 hydrogenchlorid i 2-propanol. Efter afkøling filtrerede man det hvide krystallinske hydro-chlorid fra, vaskede med ethanol og ether og tørrede under vakuum over phosphorpentaoxid til opnåelse af 130 mg (35%) af titelforbindelsen, der 20 undergik sønderdeling ved 160-162°C.

Analyse:

Beregnet: C 47,31 H 5,03 N 11,03

Fundet: 47,50 4,79 11,04.

25 Eksempel 3 21-Desoxy-5-ethynylcytidin

Man holdt en opløsning af forbindelsen fra Eksem-30 pel 2(c) (250 mg, 0,66 mmol) i 3,0 ml dioxan/880 ammoniak/vand (3:2:1) under omrøring ved stuetemperatur i 24 timer, hvorefter man tilsatte yderligere 1,0 ml 880 ammoniak og fortsatte omrøringen i fire timer. Man inddampede opløsningen og 35 inddampede remanensen sammen med ethanol. Den nye remanens blev udrevet med ethanol, og man 21

LMV 1000^.0 O I

frafiltrerede det dannede faste stof og vaskede det med ether til opnåelse af 120 mg (72%) af titelforbindelsen, der smeltede ved 162-165°C. Omkrystallisering fra ethanol gav en analytisk ren 5 prøve med smp. 190-193°C.

Analyse:

Beregnet: C 52,58 H 5,22 N 16,73

Pundet: 52,80 5,20 16,38.

10 Eksempel 4 3-N-Benzoyl-21-desoxy-5-ethynyluridin

Til en omrørt opslæmning af 2'-desoxy-5-ethynyl-15 uridin (J. Med. Chem., 26(5), 661-6, (1983)) (0,3 g, 1,19 mmol) i vandfri acetonitril (8 ml) og chlortrimethylsilan (0,5 ml) satte man under isafkøling triethylamin (0,85 ml, 6,1 mmol), og man holdt hele blandingen under omrøring ved stuetem-20 peratur i to timer. Man tilsatte benzoylchlorid (0,18 ml, 1,54 mmol) og holdt blandingen under omrøring i yderligere 1½ time, hvorefter man filtrerede. Man indkoncentrerede filtratet, opløste remanensen i ethanol (10 ml) og tilsatte iseddi-25 kesyre (0,4 g). Efter omrøring i en halv time bortfordampede man opløsningsmidlerne og rensede remanensen ved søjlechromatografi på silicagel med methylenchlorid/methanol (19:1) som elue-ringsmiddel til opnåelse af titelforbindelsen 0,2 30 g (47%) med smp. 156-157°C.

Analyse:

Beregnet: C 60,70 H 4,49 N 7,86

Fundet: 60,44 4,33 7,69.

35 22

Eksempel 5 DK 168323 B1 1-(β-D-Arabinofuranosyl)-5-ethynyluracil 5 a) O2,21-Anhydrouridin

Man opløste uridin (10 g, 0,04 mmol) i 20 ml varm vandfri dimethylformamid og tilsatte 11,4 g di-phenylcarbonat (0,06 m) og 0,2 g natriumbicarbo-10 nat. Opløsningen blev holdt under omrøring og opvarmning til 150°C indtil efter ca. 30 minutter udvikling af carbondioxid ophørte. Derefter afkølede man opløsningen og udhældte den i 200 ml ether under hurtig omrøring. Det dannede stof 15 blev frafiltreret, vasket med ether og omkrystal liseret fra methanol til opnåelse af 7,2 g (80%) af titelforbindelsen som hvide krystaller med smp. 235-240°C.

20 b) 1-(3-D-Arabinofuranosyl)uracil

Man opløste produktet fra trin a) (7,0 g, 0,03 mol) i 585 ml ethanol/vand (1:1) og tilsatte 41 ml 1 M natriumhydroxid. Efter omrøring i to ti-25 mer ved stuetemperatur gjorde man opløsningen sur til pH 4-5 ved portions vis tilsætning af Dowex® 50(H) ionbytterharpiks. Man frafiltrerede har piksen og vaskede med 100 ml ethanol/vand. Filtratet blev inddampet til tørhed, og man omkry-30 stalliserede remanensen fra ethanol til opnåelse af 5,51 g (75%) af titelforbindelsen som hvide krystaller med smp. 220-223°C.

35 23 DK 168323 B1 c) 1-(β-D-Arabinofuranosyl)-5-ioduracil

Man holdt produktet fra trin b) (3,0 g, 12,3 mmol), 3,0 g iod (11,8 mmol), 15 ml chloroform 5 og 30 ml 1 M salpetersyre under kraftig omrøring og tilbagesvaling i to timer. Efter afkøling dannedes et krystallinsk fast stof, som blev frafiltreret og vasket grundigt med ether til fjernelse af overskydende iod. Man omkrystalliserede 10 det faste stof fra vand til opnåelse til 2,55 g (56%) af titelforbindelsen som hvide krystaller med smp. 191-193°C (sonderdeling).

d) 5—lod—1—(21.31,5 * -tri-O-p-toluoyl-p-D-arabinofu- 15 ranosyl)uracil_

Man satte en opløsning af p-toluoylchlorid (2,76 g, 17,85 mmol) i 5,0 ml dichlormethan dråbevis ved 0°C og omrøring under vandfri N2 til 2,0 g 20 af produktet fra trin c) (5,4 mmol) i 20 ml vand fri pyridin. Opløsningen blev holdt under omrøring ved stuetemperatur i fem timer, hvorefter man inddampede til tørhed. Remanensen blev udrevet med methanol, og det dannede hvide stof fra-25 filtreret og vasket med ether til opnåelse af 2,61 g (67%) af titelforbindelsen med smp. 214 -216°C.

e) 5-Trimethylsilylethynyl-l-(2',3',5'-tri-O-p-tolu- 30 oyl-Q-D-arabinofuranosyl)uracil_

Man holdt produktet fra trin d) (1,45 g, 2 mmol), 30 mg cuproiodid, 30 mg bis(triphenylphos-phin)palladium(II)chlorid, 80 ml vandfri triethy-35 lamin og 0,6 g trimethylsilylacetylen (6 mmol) under omrøring ved 50°C under en vandfri N2 at- DK 168323 B1 24 mosfære i tre timer. Den afkølede suspension blev inddampet til tørhed, og man optog den mørke remanens i dichlormethan. Man vaskede opløsningen i rækkefølge med 2 x 50 ml portioner af 2% 5 vandig dinatriumethylendiamintetraeddikesyre og 50 ml vand. Man tørrede opløsningen (MgS04) og inddampede, hvorefter man omkrystalliserede remanensen fra ethanol. Titelforbindelsen blev opnået som hvide krystaller, 1,03 g (82%) med smp.

10 197-199°C.

f) 1-(β-D-Arabinofuranosyl)-5-ethynyluracil

Man holdt en opløsning af produktet fra trin e) 15 (1,0 g, 1,59 mmol) i 30 ml 0,2 M natriummethoxid i methanol (frisk fremstillet ud fra natrium og methanol) under omrøring ved stuetemperatur i tre timer, hvorefter man gjorde sur til pH 4-5 ved portionsvis tilsætning af Dowex® 50(H) ionbytter-20 harpiks. Man frafiltrerede harpiksen og vaskede grundigt med methanol, hvorefter man inddampede filtratet til tørhed og fordelte remanensen mellem vand og ether. Det vandige lag blev vasket med ether, hvorefter det blev inddampet til tør-25 hed. Man inddampede remanensen med to portioner ethanol, hvorefter man udrev med ethanol.

Man frafiltrerede det dannede faste stof og vaskede med ether til opnåelse af 0,30 g (70%) af titelforbindelsen, der sønderdeltes over 200°C.

30 Analyse:

Beregnet: C 49,25 H 4,51 N 10,45

Fundet: 49,40 4,71 10,29.

35 25

Eksempel 6 DK 168323 B1 5-Ethynyl-l- (2' , 3', 5' -tri-O-acetyl-p-D-arabinofuranosyl) -uracil_ 5

Man holdt produktet fra Eksempel 5(f) (0,35 g, 1,3 mmol), 2,0 ml vandfri pyridin og 0,48 g eddikesyre-anhydrid (4,7 mmol) under omrøring sammen ved stuetemperatur i 16 timer, hvorefter man inddampede den dannede 10 klare opløsning til tørhed og inddampede remanensen sammen med ethanol. Omkrystallisering fra ethanol gav 0,4 g (89%) af titelfiorbindelsen som bleggule kubiske krystaller med smp. 174-176°C.

Analyse: 15 Beregnet: C 51,78 H 4,60 N 7,10

Pundet: 52,06 4,43 7,05.

Eksempel 7 20 21-Desoxy-5-(1-propynyl)cytidin a) 21-Desoxy-31,51-di-O-acetyl-5-(1-propynyl)uridin

Man satte 0,8 ml eddikesyreanhydrid til en opløs-25 ning af 2'-desoxy-5-(1-propynyl)uridin fra Ek sempel 1(b) (1 g, 3,76 mmol) i 10 ml vandfri pyridin. Blandingen blev holdt under omrøring ved stuetemperatur i 16 timer, hvorefter man inddampede til tørhed til opnåelse af et skumagtigt 30 fast stof. Omkrystallisering fra ethanol gav 0,98 g (75%) af titelforbindelsen med smp. 148-149°C. Analyse:

Beregnet: C 54,86 H 5,143 N 8,00

Pundet: 54,82 5,114 7,805.

35 DK 168323 B1 26 b) 1-(2-Desoxy-3,5-di-0-acetyl-p-D-ribofuranosyl)-5-(1-propynyl)-4-(1,2,4-triazol-l-yl)pyrimidin- 2(IH)-on 5 Man satte p-Chlorphenylphosphodichloridat (0,76 g, 3,10 mmol) til en opløsning af produktet fra trin a) (0,7 g, 2 mmol) og 0,45 g 1,2,4-triazol (6,5 mmol) i 20 ml vandfri pyridin. Opløsningen blev holdt under omrøring under vandfri N2 ved 10 stuetemperatur i to dage, hvorefter den blev ind dampet til tørhed. Den dannede olie blev elueret på en silicagelsøjle med ethylacetat til opnåelse af 0,33 g udgangsmateriale og 0,2 g (44% baseret på 0,4 g udgangsmateriale) af titelforbindelsen, 15 der yderligere nedbrydes ved henstand ved stue temperatur. Man foretog ikke yderligere rensning men benyttede den i næste trin.

c) 21-Desoxy-5-(l-propynyl)cytidin 20

Man opløste råproduktet fra trin b) (0,2 g, 0,5 mmol) i 5 ml Dioxan/880NH3/H20 (3:2:1) og lod blandingen henstå ved stuetemperatur i 16 timer, hvorefter man inddampede den til tørhed og ind- 25 dampede remanensen sammen med ethanol. Det dan nede hvide faste stof blev omkrystalliseret fra ethanol til opnåelse af 0,04 g (30%) af rent produkt ved sønderdeling ved 195-200°C.

Analyse: 30 Beregnet: C 54,34 H 5,60 N 15,85

Fundet: 54,19 5,550 15,33.

35 27

Eksempel 8 DK 168323 B1 1(β-D-Arabinofuranosyl)-5-(1-propynyl)cytosin 5 a) 5-Iod-l-(2,3,5-tri-0-acetyl^-D-arabinofuranosyl) uracil_

Man satte eddikesyreanhydrid (1,04 ml, 11 mmol) til en opløsning af 1 g l-O-D-arabinofuranosyl) 10 -5-ioduracil fra Eksempel 5(c) (2,7 mmol) i 10 ml vandfri pyridin. Efter omrøring i tre timer ved stuetemperatur bortfordampede man opløsningsmidlet og inddampede remanensen sammen med CH2 -Cl2 adskillige gange. Remanensen blev udrevet 15 med ethanol, det faste stof blev frafiltreret og tørret til opnåelse af 1,25 g (93%) af titelforbindelsen med smp. 175-179°C.

b) 5-(l-Propynyl)-1-(2,3,5-tri-0-acetyl-p-D-arabino- 20 furanosyl)uracil_

Man holdt en suspension af produktet fra trin a) (1,16 g, 2,3 mmol), 35 mg cuproiodid og 35 mg bis (triphenylphosphin)palladium(IIJchlorid i 95 ml 25 vandfri triethylamin under omrøring under vandfri n2 i 15 minutter. Derefter gennemboblede man blandingen med propyngas i 15 minutter, og blandingen blev omrørt under en atmosfære af N2 ved 50°C i en time. Man filtrerede opløsningen og 30 inddampede filtratet til tørhed, hvorefter man optog remanensen i CH2C12 (30 ml), vaskede med 2 x 25 ml portioner af 2% vandig dinatriumethylen-diamintetraeddikesyre og 50 ml vand. Man tørrede den organiske opløsning (Na2S04) og inddampede, 35 hvorefter omkrystallisering af remanensen fra ethanol gav 0,38 g (40%) af titelforbindelsen med smp. 150-157 °C.

DK 168323 B1 28

Analyse:

Beregnet: C 52,94 H 4,902 N 6,863

Fundet: 52,86 4,827 6,784.

5 c) 5-(l-Propynyl)-l-(2,3,5-tri-0-acetyl-p-D-arabino- furanosyl)-4-(1,2,4-triazol-l-yl)pyrimidin-2(IH)— on_

Man satte p-Chlorphenylphosphodichloridat (10,5 10 ml) til en opløsning af produktet fra trin b) (0,5 g, 1,2 mmol) og 0,4 g 1,2,4-triazol i 10 ml vandfri pyridin. Man holdt opløsningen under omrøring ved stuetemperatur under en atmosfære af vandfri nitrogen i seks dage, hvorefter man ind-15 dampede til tørhed og fordelte remanensen mellem dichlormethan (30 ml) og vand (30 ml). Man vaskede det organiske lag med 25 ml vand, tørrede (Na2S04) og inddampede til opnåelse af 0,65 g råprodukt, der blev benyttet i næste syntesetrin.

20 d) 1-(β-D-Arabinofuranosyl)-5-(1-propynyl)cytosin

Man opløste råproduktet fra trin c) (0,65 g, 1,39 mmol) i 30 ml dioxan/880 NH3/H20 (3:2:1) 25 og lod opløsningen henstå ved stuetemperatur nat ten over, hvorefter man inddampede den til tørhed til opnåelse af en gul olie, der blev udrevet med ethanol til opnåelse af det rene produkt (0,22 g) med smp. 24l-243°C (sønderdeling).

30 Beregnet for C12H15N3O5, 0,7 H20

Beregnet: C 49,05 H 5,586 N 14,30%

Fundet: 49,28 5,32 13,95.

35 29

Eksempel 9 DK 168323 B1 3 N-Benzoyl-21-desoxy-5-(1-propynyl)uridin

5 Man satte vandfri triethylamin (1,1 ml) ved 0°C

til en omrørt opslæmning af 2'-desoxy-5-(1-propynyl)uri-din fra Eksempel 1 (b) (0,4 g, 1,5 mmol) og 0,54 g tri- methylsilylchlorid (4,97 mmol) i 10 ml vandfri acetoni-tril. Blandingen blev holdt under omrøring ved stuetem-10 peratur i 2½ time, hvorefter man tilsatte 0,3 ml ben-zoylchlorid og holdt opløsningen under yderligere omrøring i fem timer. Man frafiltrerede fast stof, inddam-pede filtratet til tørhed, optog remanensen i ethanol og tilsatte 0,4 g eddikesyre, hvorefter· man holdt blandin-15 gen under omrøring ved stuetemperatur i en halv time.

Man inddampede blandingen til tørhed og eluerede remanensen på silicagelsøjle med CH2Cl2/MeOH (9:1). Adskillige omkrystalliseringer fra vandig ethanol gav 0,14 g (25%) af produktet med smp. 137-40°C.

20 Beregnet for C19H18N206, 0,2 H20

Beregnet: C 60,96 H 4,920 N 7,489%

Fundet: 60,69 4,681 7,478%.

Eksempel 10 25 a) 5-Ethynyl-l-(2,3,5-tri-0-acetyl^-D-arabinofura- nosyl)-4-(1,2,4-triazol-l-yl)pyrimidin-2(IH)-on

Man holdt 5-Ethynyl-l-(2',3',51-tri-O-acetyl-β-30 D-arabinofuranosyl)uracil fra Eksempel 6 (0,6 g, 1,5 mmol), 1,2,4-triazol (0,33 g, 4,8 mmol) og p-chlorphenylphosphodichloridat (0,8 ml, 4,8 mmol) under omrøring sammen i vandfri pyridin (20 ml) i 72 timer. Man inddampede den dannede mørke 35 opløsning til tørhed og rensede remanensen ved søjlekromatografi på silica, idet man eluerede 30 DK 168323 B1 med ethylacetat/hexan (9:1) til opnåelse af et tilsynelandende ustabilt produkt (0,44 g), der blev benyttet på rå form i næste syntesetrin.

5 b) i-(β-p-arabinofuranosyl)-5-ethynylcytosin

Man holdt en opløsning af produktet fra trin a) (0,44 g, 0,9 mmol) i dioxan/880 ammoniak/vand (3:2:1) (12 ml) under omrøring ved stuetemperatur 10 i 48 timer, hvorefter man inddampede til opnåelse af en olie, der blev renset ved søjlekromatografi på silicagel, idet man eluerede med methanol/ methylenchlorid (1:4). Kombination af fraktioner, der indeholdt produktet, og inddampning gav 15 et fast stof, der blev omkrystalliseret fra etha nol til opnåelse af titelforbindelsen (0,03 g) med sønderdeling ved 223°C.

Analyse for C11H13N3°5' 0,3 H20 Beregnet: C 48,46 H 4,993 N 15,42% 20 Fundet: 48,22 4,889 14,99%.

Eksempel 11 21-Desoxv-5-ethvnyl-3-N-(p-toluoyl)uridin 25

Til en omrørt suspension af 21-desoxy-5-ethynyl-uridin (J. Med. Chem. 26(5), 661-6. (1983)) (0,4 g, 1,6 mmol) i vandfri acetonitril (15 ml) og chlortrimethylsi-lan (0,7 ml, 5,6 mmol) satte man under isafkøling tri-30 ethylamin (1,13 ml, 8,1 mmol), og man opretholdt omrøringen ved stuetemperatur i 2½ time. Toluoylchlorid (0,3 ml, 2,1 mmol) blev derefter tilsat, og blandingen blev filtreret efter yderligere syv timers omrøring, man inddampede filtratet til tørhed og opløste remanensen i 35 ethanol (20 ml). Man tilsatte iseddikesyre og holdt blandingen under omrøring i en halv time ved stuetem- 31 DK 168323 B1 peratur, hvorefter man bortfordampede opløsningsmidlet og fjernede rester af eddikesyre ved fælles fordampning med ethanol. Rensning af produktet ved tyktlags-silica-kromatografi under eluering med methanol/methylenchlorid 5 (1:24) fulgt af omkrystallisering fra methanol tilveje bragte titelforbindelsen (0,03 g) med smp. 176-179°C.

Analyse for C-^gH^g^Og, 0,2 E^OH:

Beregnet: C 61,37 H 5,08 N 7,36%

Fundet: 60,92 4,87 7,40%.

10

De følgende Eksempler illustrerer farmaceutiske præparater, hvori den aktive ingrediens er en forbindelse med formel (I) eller (I)B.

15 Eksempel A

Tablet

Aktiv ingrediens 100 mg 20 Lactose 200 mg

Stivelse 50 mg

Polyvinylpyrrolidon 5 mg

Magnesiumstearat 4 mg 359 mg 25

Man fremstiller tabletter fra de ovennævnte ingredienser ved vådgranulering og sammenpresning.

DK 168323 B1 32

Eksempel B Ophthalmisk opløsning 5 Aktiv ingrediens 0,5

Natriumchlorid, analytisk 0,9 g

Thiomersal 0,001 g

Renset vand til 100 ml pH tilpasset til 7,5 10

Eksempel C Tabletpræparater 15 De følgende præparater A og B blev fremstillet ved vådgranulering af ingredienserne med en opløsning af povidon, hvorefter man tilsatte magnesiumstearat og pressede.

20 Formulering A

mq/Tablet mq/Tablet (a) Aktiv ingrediens 250 250 25 (b) Lactose B.P. 210 26 (c) Povidon B.P. 15 9 (d) Natriumstivelsesglycollat 20 12 (e) Magnesiumstearat 5 3 500 300 DK 168323 B1 33

Formulering B

mq/Tablet mq/Tablet 5 (a) Aktiv ingrediens 250 250 (b) Lactose 150 (c) Avicel® PH 101 60 26 (d) Povidon B.P. 15 9 (e) Natriumstivelsesglycollat 20 12 10 (f) Magnesiums tear at 5 3 500 500

Formulering C

15 mg/Tablet

Aktiv ingrediens 100

Lactose 200

Stivelse 50 20 Povidon 5

Magnesiumstearat 4 359

De følgende præparater, D og E, blev fremstillet 25 ved direkte sammenpresning af de sammenblandede ingredienser. Lactosen i præparat E er af direkte kompressionstype.

Formulering D

30 mq/Kapsel

Aktiv ingrediens 250

Prægelatineret stivelse NF15 150 400 DK 168323 B1 34

Formulering E

mg/Kapsel 5 Aktiv ingrediens 250

Lactose 150

Avicel® 100 500

10 Formulering F

(Kontrolleret frigivelse)

Præparatet fremstilles ved vådgranulering af de 15 nedenfor givne ingredienser med en opløsning af povidon, hvorefter man tilsætter magnesiumstearat og presser.

mg/Tablet 20 (a) Aktiv ingrediens 500 (b) Hydroxypropylmethyl- cellulose 112 (Methocel® K4M Premium) 25 (c) Lactose B.P. 53 (d) Povidon B.P.C. 28 (e) Magnesiumstearat 7 700 30 Frigivelse af medikament finder sted over ca. 6-8 timer og var fuldstændig efter 12 timer, 35 DK 168323 B1 35

Eksempel D Kapselformuleringer

5 Formulering A

En kapselformulering fremstilles, idet man sammenblander ingredienserne fra formulering D i Eksempel C ovenfor og fylder dem i en todelt kapsel af hård gelati-10 ne. Formulering B (nedenfor) fremstilles på lignende måde.

mg/Kapsel 15 (a) Aktiv ingrediens 250 (b) Lactose B.P. 143 (c) Natriumstivelsesglycollat 25 (d) Magnesiumstearat 2 420 20

Formulering B

mg/Kapsel 25 (a) Aktiv ingrediens 250 (b) Lactose B.P. 143 (c) Natriumstivelsesglycollat 25 (d) Magnesiumstearat 2 420 30 36 DK 168323 B1

Formulering C

mg/Kapsel 5 (a) Aktiv ingrediens 250 (b) Macrogol 4000 BP 350 600

Man fremstiller disse kapsler ved at smelte 10 Macrogol 4000 BP, dispergere den aktive ingrediens i smelten og fylde smelten i todelte kapsler af hård gelatine.

15 Formulering D

mg/Kapsel

Aktiv ingrediens 250 20 Lecithin 100

Arachisolie 100 450

Man fremstiller kapslerne ved at dispergere den 25 aktive ingrediens i lecithin og arachisolie og fylde dispersionen i bløde, elastiske gelatinekapsler.

Formulering E

30 (Kapsel til kontrolleret frigivelse)

Man fremstiller den følgende formulering til kontrolleret frigivelse fra kapsler, idet man ekstruderer ingredienserne a, b og c på en ekstruder, hvoref-35 ter man af runder og tørrer ekstrudatet. Derefter overtrækker man de tørrede småpartikler med en membran til i t—r—^^^— ' ------ - - 37 DK 168323 B1 kontrolleret frigivelse (d) og fylder dem i todelte kapsler af hård gelatine.

mg/Kapsel 5 (a) Aktiv ingrediens 250 (b) Mikrokrystallinsk cellulose 125 (c) Lactose BP 125 (d) Ethylcellulose 13 10 513

Eksempel E

Formulering til injektion 15

Aktiv ingrediens 0,200 g

Steril, pyrogenfri phosphatpuffer (pH 7,0) 10 ml.

20 Man opløser den aktive ingrediens i det meste af phosphatpufferen (35-40°C), fylder op og filtrerer gennem et sterilt mikroporefilter i en steril 10 ml beholder af ravfarvet glas (type 1), som man forsegler sterilt med segl og oversegl.

25

Eksempel F

Intramuskulær inj ektion 30 Aktiv ingrediens 0,20 g

Benzylalkohol 0,10 g

Glycofurol 75 1,45 g

Vand til injektion g.s. til 3,00 ml.

35 Man opløser den aktive ingrediens i glycofurol.

Benzylalkohol tilsættes og opløses, og vand tilsættes 38 DK 168323 B1 til 3 ml. Blandingen filtreres derpå gennem et sterilt mikroporefilter og forsegles i sterile 3 ml glasbeholdere. (type 1).

5 Eksempel G

Sirupsuspension

Aktiv ingrediens 0.2500 g 10 Sorbitolopløsning 1.5000 g

Glycerol 2.0000 g

Dispersibel cellulose 0,0750 g

Natriumbenzoat 0,0050 g

Aroma, fersken 17.42.3169 0,0125 ml 15 Renset vand g.s. til 5.0000 ml.

Man opløser natriumbenzoat i en del af det rensede vand og tilsætter sorbitolopløsningen. Den aktive ingrediens tilsættes og dispergeres. I glycerolen di-20 spergeres fortykningsmidlet (dispersibel cellulsose). De to dispersioner blandes og der fyldes op til det nødvendige rumfang med renset vand. Man opnår en yderligere fortykning ved yderligere omrøring af suspensionen.

25 Eksempel H

Stikpiller mg/Stikpille 30

Aktiv ingrediens (63ym)1 250 Hårdfedt, BP (Witepsol® H15 -

Dynamit NoBel) 1770 2020 35

Den aktive ingrediens benyttes som et 39 DK 168323 B1 pulver, hvori i det mindste 90% af partiklerne er på 63 μπτ diameter eller mindre.

5 Man smelter en femtedel af Witepsol® Hl5 i en be holder med dampopvarmning ved højst 45°C. Man sigter den aktive ingrediens gennem en 200 ym sigte og sætter den til den smeltede base under sammenblanding, idet man benytter en silverson med et skærehoved, indtil man op- 10 når en ensartet dispersion. Idet man opretholder blandingen ved en temperatur på 45°C, sætter man resten af Witepsol Hl5 til suspensionen og blander til opnåelse af en homogen blanding. Hele suspensionen sigtes gennem en 250 ym sigte af rustfrit stål, og man lader den under 15 stadig omrøring afkøle til 40°C. Ved en temperatur på 38-40°C fylder man 2,02 g af blandingen i passende plast forme. Man lader stikpillerne afkøle heri til stuetemperatur.

Eksempel I

20

Vagitorier mg/vaqitorie 25 Aktiv ingrediens 63 ym 250

Anhydrat dextrose 380

Kartoffelstivelse 363

Magnesiumstearat 7 1000 30

Man sammenblander de ovennævnte ingredienser direkte og fremstiller vagitorier ved direkte sammenpresning af den opnåede blanding.

35 40 DK 168323 B1

Antiviral afprøvning og prøvning for toksicitet

Man analyserer human cytomegalovirus (HCMV) i enkeltlag af enten MRC5-celler, (human embryolungeceller 5 eller Detroit 532 celler (humane forhudsfibroblaster) i mangebrøndeplader. Man bestemmer aktiviteten af forbindelser ved plakreduktionsassay, hvori man inficerer et monolag af celler med en suspension af HCMV, hvorefter man overtrækker med nærende agarose som en gel til sik-10 ring af, at der ikke spredes virus gennem kulturen. Man inkorporerede en række koncentrationer af forbindelser med kendt koncentration i agaroselaget. Man udtrykte plaktallet ved hver koncentration som procentværdi i forhold til kontrollen og tegnede en dosis-responskurve.

15 Fra denne kurve bestemmes koncentrationen med 50% inhi-bering (IC50).

Varicella zoster virus (VZV) analyseres på MRC5 celler ved en tilsvarende fremgangsmåde som ved HCMV, idet man udelader agaroseoverlaget.

20 Man udfører et assay, hvorved virusproducerende celler (P3HR-1) udsættes for medikament i 14 dage, hvorefter man bestemmer genomkopierne af EBV pr. celle ved EBV specifik c-RNA-DNA hybridisering. Man analyserer Epstein Barr virus ved fremgangsmåden ifølge 25 Nonoyama & Pagano, beskrevet i Nature: New Biology Vol.

233,s. 103-104 (1971). IC50 værdien i resultaterne er den koncentration, der er nødvendig for at inhibere EBV genomet antal/celle med 50%.

Man bestemmer cellegiftigheden ved et inhibe-30 ringsassay for cellevækst. Man udsætter subkonfluente kulturer af Veroceller, dyrket på 96-brønd mikrotiter-plader for forskellige fortyndinger af medikament og bestemmer overlevelsen af celler dagligt på par af kulturer, idet man benytter optagelse af et tetrazoliumfar-35 vestof (MTT). Koncentrationen, der er nødvendig til en 50% inhibering af celleoverlevelse efter 96 timer, betegnes ccid50.

41 DK 168323 B1

Resultaterne ses i den følgende Tabel I.

TABEL

5 Eksempel IC50 (μΜ) lC50(yM) IC50(yM) CCID50(yM) VZV HCMV EBV efter 96 ________timer_ 1 1,0 >16 <50 >500 10 2 0,3/1,2 3/7 - >500 5 1,5 >20 < 0,1 >300 7 3,3 >20 - >300 9 2,2 28,5 - >500 15 Aktiviteten mod VZV blev for yderligere to om handlede forbindelser, nemlig (12) 2'-desoxy-3-(4-fluorbenzoyl)-5-prop-l-ynyluridin, og (13) 2'-desoxy-3-(4-methoxybenzoyl)-5-prop-l-ynyluridin, 20 bestemt som ovenfor beskrevet og sammenlignet med tilsvarende værdier for forbindelsen 2'-desoxy-5-ethynyl-uridin (EYdU), hvis virkning er beskrevet i dansk patentansøgning nr. 3265/86. Resultaterne ses i følgende Tabel il.

25 DK 168323 B1 42

Tabel II

Forbindelse IC50 0·^) CCID50 O1*1) _VZV_efter 96 timer 5 12 1,44 >100 13 4,8-12 >100 *EYdU_0,02_l_j_6_

Den langt lavere toksicitet for de omhandlede 10 forbindelser ses tydeligt af denne Tabel.

* Data fra Antiviral Chemistry & Chemotherapy 3 (1992), tabel 1, side 294.

Claims (9)

1. Anvendelse af et pyrimidinnucleosid med form- 5 len (I): *} /V, C=C-R2 Ό I (i) . V1 OH hvori R1 betegner en oxo- eller iminogruppe;

20 R2 betegner hydrogen eller en C-j^ alkyl gruppe; R3 betegner hydrogen eller en benzoylgruppe, eventuelt substitueret med én eller flere halogen-, alkyl-, hydroxy- eller alkoxysubstituenter; og R4 betegner hydrogen eller en hydroxygruppe; 25 eller et farmaceutisk acceptabelt salt, ester, eller salt af en sådan ester deraf, idet dog forbindelser undtages, hvor (a) R2, R3 og R4 hver for sig er hydrogen, og Rx er en oxogruppe, samt hvor 30 (b) R2 er methyl, R3 er hydrogen, R4 er hydroxy, og R1 er en oxogruppe; til fremstilling af et lægemiddel til behandling af eller profylakse for en infektion med varicella zoster virus.

2. Anvendelse ifølge krav 1, kendeteg net ved, at R2 betegner hydrogen eller methyl. DK 168323 B1

3. Pyrimidinnucleosid, kendetegnet ved, at det har formlen (I)B 'ί'.,Λγ fec-R2 S (I)B 10 «0_ λ 15 hvori R1 betegner en oxo- eller iminogruppe; R2 betegner hydrogen eller en C1_2alkylgruppe; R3 betegner hydrogen eller en benzoylgruppe, eventuelt substitueret med én eller flere halogen-, alkyl-, 20 hydroxy- eller alkoxysubstituenter; og R4 betegner hydrogen eller en hydroxygruppe; eller er et farmaceutisk acceptabelt salt, ester, eller salt af en sådan ester deraf, idet dog forbindelser undtages, hvor 25 (a) R1 er imino, R3 er hydrogen, og R2 er hydrogen; samt hvor (b) R1 er oxo, og R3 er hydrogen.

4. Pyrimidinnucleosid ifølge krav 3, kendetegnet ved, at R3 er hydrogen eller en benzoyl- 30 gruppe.

5. Pyrimidinnucleosid ifølge krav 3 eller 4 til anvendelse ved human terapi.

6. Anvendelse af et pyrimidinnucleosid ifølge krav 3 til fremstilling af et lægemiddel til behandling 35 af eller profylakse for en infektion med varicella zoster virus. DK 168323 B1

7. Fremgangsmåde til fremstilling af et pyrimi-dinnucleosid ifølge krav 3, kendetegnet ved, at man enten: A) kondenserer en forbindelse med den almene formel 5 (II)

10 I (II) A-'s,/ (hvori R2 er som ovenfor defineret, R3^ er en 15 beskyttet hydroxy- eller aminogruppe, og M1 er en hydroxybeskyttende gruppe) med en forbindelse med den almene formel (III): ” "!"W' Y V <*«> OM3 25 (hvori Y betegner halogen, M2 og M3 er hver for sig en hydroxybeskyttende gruppe, og R4a er hydrogen eller en beskyttet hydroxygruppe); eller (B) lader en forbindelse med den almene formel (IV): 30 DK 168323 B1 :O' . io b OM hvori R1, Μ2, M3 og R4a er som ovenfor defineret, og Z er en fraspaltelig gruppe, reagere med en for-15 bindelse, der er i stand til at tilvejebringe den nødvendige -C=C-R2 gruppe (hvori R2 er som ovenfor defineret) til opnåelse af en forbindelse med formel (I), hvori R3 er hydrogen; eller (C) lader en forbindelse med formel (V): 20 ?=C-R2 25. ft M°-L^>J (V) OM2 30 (hvori Q er en passende fraspaltelig gruppe, og R2, Μ1, M2 og R4a er som ovenfor defineret) reagere med et middel til ombytning af Q med en aminogruppe; til dannelse af en forbindelse, 35 hvori R3 er hydrogen; og eventuelt senere, eller samtidig hermed, udfører den DK 168323 B1 ene eller begge af følgende operationer, i vilkårlig orden: i) fjerner eventuelt tilbageværende beskyttende grupper; 5 ii) når den dannede forbindelse er en forbindelse med formel (l)B, omdanner den til et farmaceutisk acceptabelt derivat (defineret som et salt, en ester eller et salt af en sådan ester) deraf, eller, når den dannede forbindelse er et farmaceutisk accep-10 tabelt derivat, omdanner den til et andet farma ceutisk acceptabelt derivat, eller til en forbindelse med formel (I)B.