DD266800A5 - Verfahren zur herstellung von methylendioxyphenanthren- und stilbenderivaten - Google Patents
Verfahren zur herstellung von methylendioxyphenanthren- und stilbenderivaten Download PDFInfo
- Publication number
- DD266800A5 DD266800A5 DD86293892A DD29389286A DD266800A5 DD 266800 A5 DD266800 A5 DD 266800A5 DD 86293892 A DD86293892 A DD 86293892A DD 29389286 A DD29389286 A DD 29389286A DD 266800 A5 DD266800 A5 DD 266800A5
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- formula
- compound
- acid
- stilbene
- preparation
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 6
- CRGUVRKKNCPOBB-UHFFFAOYSA-N naphtho[1,2-g][1,3]benzodioxole Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=C4OCOC4=C3C=CC2=C1 CRGUVRKKNCPOBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 27
- PJANXHGTPQOBST-UHFFFAOYSA-N stilbene Chemical class C=1C=CC=CC=1C=CC1=CC=CC=C1 PJANXHGTPQOBST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 claims abstract description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims abstract description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- SBLSLYIOUALDTC-UHFFFAOYSA-N stilbene;hydrobromide Chemical class Br.C=1C=CC=CC=1C=CC1=CC=CC=C1 SBLSLYIOUALDTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N N-Butyllithium Chemical compound [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N Stilbene Natural products C=1C=CC=CC=1/C=C/C1=CC=CC=C1 PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N 0.000 claims description 5
- 238000005661 deetherification reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 claims description 5
- 235000021286 stilbenes Nutrition 0.000 claims description 5
- PKZJLOCLABXVMC-UHFFFAOYSA-N 2-Methoxybenzaldehyde Chemical compound COC1=CC=CC=C1C=O PKZJLOCLABXVMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000004714 phosphonium salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 3
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 claims description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims description 2
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- JCEFFRUGDXUMOY-UHFFFAOYSA-N 5-(dibromomethyl)-1,3-benzodioxole Chemical compound BrC(Br)C1=CC=C2OCOC2=C1 JCEFFRUGDXUMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- DOBRDRYODQBAMW-UHFFFAOYSA-N copper(i) cyanide Chemical compound [Cu+].N#[C-] DOBRDRYODQBAMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 150000002828 nitro derivatives Chemical class 0.000 claims 1
- 125000001792 phenanthrenyl group Chemical class C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C=CC12)* 0.000 claims 1
- 239000003880 polar aprotic solvent Substances 0.000 claims 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 abstract description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 32
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 20
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 17
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 14
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 9
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 6
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 6
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 229920001021 polysulfide Polymers 0.000 description 5
- 239000005077 polysulfide Substances 0.000 description 5
- 150000008117 polysulfides Polymers 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 4
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 4
- YNPNZTXNASCQKK-UHFFFAOYSA-N phenanthrene Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=CC2=C1 YNPNZTXNASCQKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 3
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MGJDPQKVELOHMT-UHFFFAOYSA-N 2-(2-phenylethenyl)benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C=CC1=CC=CC=C1 MGJDPQKVELOHMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJNCXZZQNBKEJT-UHFFFAOYSA-N 8beta-hydroxymarrubiin Natural products O1C(=O)C2(C)CCCC3(C)C2C1CC(C)(O)C3(O)CCC=1C=COC=1 FJNCXZZQNBKEJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- QXKHYNVANLEOEG-UHFFFAOYSA-N Methoxsalen Chemical group C1=CC(=O)OC2=C1C=C1C=COC1=C2OC QXKHYNVANLEOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- LEKPFOXEZRZPGW-UHFFFAOYSA-N copper;dicyanide Chemical compound [Cu+2].N#[C-].N#[C-] LEKPFOXEZRZPGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 150000002987 phenanthrenes Chemical class 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- AOJFQRQNPXYVLM-UHFFFAOYSA-N pyridin-1-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=[NH+]C=C1 AOJFQRQNPXYVLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- ZYECOAILUNWEAL-NUDFZHEQSA-N (4z)-4-[[2-methoxy-5-(phenylcarbamoyl)phenyl]hydrazinylidene]-n-(3-nitrophenyl)-3-oxonaphthalene-2-carboxamide Chemical compound COC1=CC=C(C(=O)NC=2C=CC=CC=2)C=C1N\N=C(C1=CC=CC=C1C=1)/C(=O)C=1C(=O)NC1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 ZYECOAILUNWEAL-NUDFZHEQSA-N 0.000 description 1
- DUVJMSPTZMCSTQ-UHFFFAOYSA-N 2-ethoxybenzaldehyde Chemical compound CCOC1=CC=CC=C1C=O DUVJMSPTZMCSTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JBMKAUGHUNFTOL-UHFFFAOYSA-N Aldoclor Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC2=C1NC=NS2(=O)=O JBMKAUGHUNFTOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- GDKNPBXVVGYELK-UHFFFAOYSA-N CN(C=O)C.COC1=C(C=O)C=CC=C1 Chemical compound CN(C=O)C.COC1=C(C=O)C=CC=C1 GDKNPBXVVGYELK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910021594 Copper(II) fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000592251 Dioon Species 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010028400 Mutagenic effect Diseases 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHUIUXNAPJIDOG-UHFFFAOYSA-N Piperonol Chemical compound OCC1=CC=C2OCOC2=C1 BHUIUXNAPJIDOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 244000078856 Prunus padus Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000033809 Suppuration Diseases 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- YBCVMFKXIKNREZ-UHFFFAOYSA-N acoh acetic acid Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O YBCVMFKXIKNREZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000004996 alkyl benzenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000002158 anti-implantation Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- BBFQZRXNYIEMAW-UHFFFAOYSA-N aristolochic acid I Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C2=C(C(O)=O)C=C3OCOC3=C2C2=C1C(OC)=CC=C2 BBFQZRXNYIEMAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000078 claw Anatomy 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- GWFAVIIMQDUCRA-UHFFFAOYSA-L copper(ii) fluoride Chemical compound [F-].[F-].[Cu+2] GWFAVIIMQDUCRA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 229940074654 diuril Drugs 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000010931 ester hydrolysis Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- DLEDOFVPSDKWEF-UHFFFAOYSA-N lithium butane Chemical compound [Li+].CCC[CH2-] DLEDOFVPSDKWEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JILPJDVXYVTZDQ-UHFFFAOYSA-N lithium methoxide Chemical compound [Li+].[O-]C JILPJDVXYVTZDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 239000004466 pelleted feed Substances 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- JYZNTHFSWOVBAD-UHFFFAOYSA-N phenanthrene;hydrobromide Chemical compound Br.C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=CC2=C1 JYZNTHFSWOVBAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000015323 positive regulation of phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- ABMSPIUYLYKRLM-UHFFFAOYSA-N styrene hydrobromide Chemical compound Br.C=CC1=CC=CC=C1 ABMSPIUYLYKRLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940071127 thioglycolate Drugs 0.000 description 1
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L thiosulfate(2-) Chemical compound [O-]S([S-])(=O)=O DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- VLPFTAMPNXLGLX-UHFFFAOYSA-N trioctanoin Chemical compound CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC VLPFTAMPNXLGLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
- C07D317/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D317/70—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with ring systems containing two or more relevant rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
- C07D317/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D317/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
- C07D317/48—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring
- C07D317/62—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to atoms of the carbocyclic ring
- C07D317/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Methylendioxyphenanthren- und Stilbenderivaten. Erfindungsgemaess werden Verbindungen der allgemeinen Formel (I) hergestellt und deren pharmazeutisch vertraegliche Salze. In der Formel bedeuten: R1 ein H-Atom, Methoxy oder Ethoxy; R2 und R3 H-Atome oder zusammen eine aromatische C-C-Bindung. Formel (I)
Description
R1 für H oder OCH3 steht, mit einem Polysulfid zu einer Verbindung der Formel (I) denitriert und falls R1 für OCH3 steht, die OCH3-Gruppe gewünschtenfalls durch Ether-Spaltung in oine OH-Gruppe umwandelt.
DIo Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Methylendioxyphonaithren- und Stilbondorivaton und Arzneimittel, die diese Verbindungen enthalten.
Die erfindungsgemäß hergestellten Verbindungen besitzen wertvollo pharmakologische Eigenschaften, insbesondere Immunstimulierende Wirkung und sind geeignet zur Prophyl»xe und Therapie von Infektionskrankheiten.
Als immunostimuliorende Mittel bei Prophylaxe und Therapie von Infektionskrankheiten sind Aristolochiasäuren der Formel (II)
H2O
COOH
(M)
R » H, OCH.
bekannt, die eine phagozytosestelgernde und antivirlale Wirkung entfalten und die Heilerfolge bei Allgemoininfektionen erhöhen und auch erfolgreich zur Behandlung von Eiterungen und Geschwüren appliziert werden können. Bei pharmakologlschen Untersuchungen in höheren Dosisbereichen wurde jedoch kürzlich eine zellulüre Entartung am Vormagen bei der Ratte festgestellt, so daß In der Verabreichung dieser für die Behandlung an sich sehr wertvollen Wirkstoffe Zurückhaltung notwendig erscheint.
Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung neuer Verbindungen gleichor Wirkungsrichtung, welche die Nachteile bekannter Verbindungen nicht aufweisen.
Der Erfindung lic gt die Aufgabe zugrunde, neue Verbindungen mit den gewünschton Eigenschaften und Verfahren zu ihrer Herstellung auf;ufinden. Überraschenderweise wurde gefunden, daß die Verbindungen der allgemeinen Formol (I)
worin Ri ein H-Atom, Methoxy oder Ethoxy bedeutet und R2 und R3 für je ein H-Atom stehen oder zusammen eine aromatische
selbst bei sehr hoher Dosierung (gegenüber der in der Humantherapie üblichen Dosis von 1-1Opg/kg) bei Rauen (10mg/kg)weder makroskopisch noch histologisch Anzeichen einer Plattonepithelhyperplasie ergaben. Desgleichen wurden koinemutagenen Effekte festgestellt.
antivirale Wirkung entfalten.
507ff., bekannt, von dem berichtet wird, daß es in Dosen von 90mg/kg (beim Kaninchen) abortiv und von 60 mg/kg (bei der
6-Brom-piperonylbromid der Formel
- Br
mit Triphenylphosphin in oinem wasserfreien Lösungsmittel zu einem Phosphoniumsalz der Formel
Hi?C "
umsetzt,
letztere Verbindung mit Benzaldehyd', O-Methoxy-benzaldehyd oder ortho-Ethoxybenzaldehyd in Anwesenheit einer starken
.0
umsetzt,
worin P · für H, OCH3 oder OC2H6 steht,
dieses Stilbenbromid entweder mit einem Metallcyanid, insbesondere Kupforcyanid, in einem polaren oprotlschon Lösungsmittel, insbesondere In Dimethylformamid, in das entsprechende Nitril umwandelt und dieses durch Hydrolyse in eine Säure der Formel (I) überführt
oder obiges Stilbenbromid mit n-Butyllithium und Kohlendioxid in eine Sau.^ der Formel (I) überführt
oDlges Stilbenbromid durch UV-Bestrahlung in das Phenanthrenderivat der Formel
üborführt und diese Verbindung mit einem Metallcyanld oder mit n-Butylllthlum und Kohlensäure in dor oben erwähnten Weise in eine Säure der Formel (I) überführt, und gewünschtenfalls eine Verbindung der Formel (I), bei der Rt und OCH3-Gruppc bedeutet durch Ether-Spaltung in eine Verbindung umwandelt, bei der Ri Hydroxyl bedeutet
eine f\'troverbindung der Formel:
R1 für H oder OCH3 steht, mit einem Polysulf id zu einer Verbindung der Formel (I) donitriort und falls R, für OCH3 steht, die OCHrGruppe gewünschtenfalls durch Ether-Spaltung in eine OH-Gruppe umwandelt.
BoI der Bromlerung des Piperonylalkohols verwendet man als Nledrigalkylcarbonsäure vorzugsweise Essigsäure.
Bei der Herstellung des Phosphoniumsalzes verwendet man als wasserfreies Lösungsmittel z. B. Benzol oder ein Alkylbenzol, vorzugsweise Toluol oder Xylol.
Bei der Kondensation des Phosphoniumsalzes verwendet man als starke Base z. B. ein Alkalimetallalkoholat, vorzugsweise Lithium-Methylat. Das dadurch erhältliche Stilben liegt zu 85% in derZ-Form und zu 16% In der Ε-Form vor. Die beiden Isomeren sind durch Behandlung mit Diethylether zu trennen. Die trans-Vorbindung geht in das Ether über; die gewünschte cis-Verbindung bleibt ungelöst.
Bei der UV-Bestrahlung des Stilbenbromids arbeitet man z. B. in einem Lösungsmittelgemisch aus absolutem THF und absolutem Cyclohexan im Mischungsverhältnis z. B. 1:12 unter Zusatz von Jod und Zufuhr von Stickstoff.
Für die Denitrierung verwondet man als Polysulfid vorzugsweise Ammoniumpolysulfid in schwach alkalischer wäßriger Lösung.
Die 8-Methoxy- bzw. 8-Ethoxyphenanthrenvorbindung (R2 und R3 bilden zusammen eine aromatische C-C-Bindung; R1 steht für Methoxy oder Ethoxy) können durch Ether-Spaltung in die entsprechenden 8-Hydroxyverbindungen überführt werden, beispielsweise durch Hydrolyse mit Pyridinhydrochlorid.
Die erfindungsgemäßen Mittel dienen zur Steigerung der Infektabwohr. So bewirken sie eine signifikante Aktivierung der Phagozytose von Leukozyten. Die erfindungsgemäßen Mittel sind deshalb zur Behandlung von Allgemeininfektionen, z. B. durch Mykobakterien oder Pneumokokken, und zur Behandlung von lokalen Infektionen brauchbar. Die erfindungsgemäßen Mittel sind auch anwendbar, wenn eine Depression der Phagozytose vorliogt, beispielsweise nach Anwendung von Corticosteroiden oder Zytostatika Durch Anwendung der erfindungsgemäßen Mittel ist die Phagozytosedeprossion wieder normalisiorbar.
Darüber hinaus wurde eine antivirale Wirkung der erfindungsgemäßen Mittel gefunden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen wurden u.a. hinsichtlich ihrer makrophagenaktivierenden Wirkung untersucht. Als Parameter wurde din Stimulation von Monozyten und Makrophagen in der Bauchhöhle von Mäusen herangezogen.
Zur Darstellung einer gesteigerten chemotaktischen Einwanderung von Monozyten in die Bauchhöhle und die Differenzierung der Monozyten zu Makrophagen mit gesteigerter Fähigkeit zur Phagozytose ist eine intraperitoneale Applikation der Testsubstanz zweckmäßig.
Die Stimulation ist ein Prozeß, der eine bestimmte Zeit erfordert. Die Prüfung der Phagozytoseaktivität wurde daher als übliches pharmakologlsches Modell nach einer dreitägigen Vorbehandlung der Maust, mit den erfindungsgemäßen Verbindungen vorgenommen. In einigen Testgruppen wurde unmittelbar nach Substanzgabe die intraperitoneale Zellpopulation entnommen, um zu zeigen, daß die beobachtete Stimulation erst nach einer gewissen Inkubationszeit auftrat.
Substanzen und Materialien JIe zu prüfenden Substanzen wurden wäßrig gelöst 0,5 mg/ml und nach Bedarf verdünnt
NH4CI Tris-Puffer
NH4CI: 8,3 g/l
Tris[Tris-(hydroximethyl)- 4,119g/200mlpH = 7,65
amlnomethan):
Mischung: 1 Teil Tris + 9Teile NH4CI, auf pH 7,2 einstellen mit 2 N HCI
PBS/BSA
40,OgNaCI
1,OgKCI auf51 mit H2O auffüllen,
7,2 g Na2HPO4 x 2 H2O pH = 7,4
1,OgKH2PO4 + 0,2 g BSA = Albumin, Bovine (Sigma, No. A-9647) auf 100 ml PBS
«= Dulbecco's modified Eagle medium with L-Glutamlne ohne Phenolrot (Gibco, Cat No. 041-1885)
+ 5% FCS bzw. +5% FCS + 0,2% Heparin
= Foetales Kälberserum (Gibco, Cat No. 011-6290)
May-Grünwald-Lösung modifiziert (Merck, Art. 1424)
Hammelblut
Nr. 5,30.8.1984, MPI Freiburg
Antiserum
Anti-Hammelerythrozyten-Serum von Kaninchen Nr.308, IKA 468/6-11 Tage; 18.7.1C78, MPI Freiburg
Versuchstiere
Die Untersuchungen wurden mit 18 Wochen alten weiblichen Hybridmäusen (Balb/c x C57B16) F1 durchgeführt. Die Tiere wurden vor Beginn der Experimente 5 Tage lang an die l.aborbedingungen angepaßt. Sie erhielten pelletiertes Standardfutter für Ratten und Mäuse (Altromin Nr. 1324) und Leitungswasser ad libitum. Sie wurden mit einem Thioglycolat-Standard auf drei Makrophagenstimulierbarkeit geprüft und zeigten dabei gute Positiv-Reaktionen.
Dosierung und Applikation Die Substanzen wurden in wäßriger Lösung (0,5mg/ml) in den folgenden Dosen appliziert:
intraperitoneal: 20mcg/kg *
500mcg/kg B mg/kg
Die Verdünnung der Mutterlösung für die Applikation der verschiedenen Dosen bett ug bei 20mcg/kg 1 mcg/ml
500mcg/kg 25 mcg/ml
5 mg/kg 250 mcg/ml
davon jeweils 0,4 ml
Applikationsschema 1 Gruppe = 5 Mäuae
Vorbehandlung: a) 3 Applikationen an 3 aufeinanderfolgenden Tagen; am 4. Tag Gewinnung der Makrophagen. I)) Eine Applikation unmittelbar vor der Makrophagengewinnung.
Gewinnung der Mukrophagen-Zellsuspenslon und Phagozytose Testprinzip
Nach Applikation von immunologisch aktivierenden Substanzen werden in den Versuchstieren Makrophagen stimuliert unci Monozyten zur Differenzierung in Makrophagen veranlaßt. Die ausdifferenzierten, stimulierten Makrophagen sind auch nach Isolierung in der Luge, mit entsprechenden Antikörpern opsonierte Antigenstrukturen, in diesem Fall Hammelorythrozyten, in vitro zu phagozytioren. Die phagozytierten Erythrozyten sind mikroskopisch erkennbar.
Durchführung
Nach entsprechender Vorbehandlung werden die Mäuse durch Halswirbelfraktur getötet, Das Peritoneum wird freigelegt und 4 ml DMEM (5% foetales Kälberserum, 0,2% Heparin) werden intraperitoneals appliziert. Nach etwa 30see Massage werden 3 ml 7ell8uspension mit einer Spritze abgezogen und in einem Polypropylenröhrchen in ein Kältebad (O0C) gebracht'. Aus jeder Testgruppe wurde eine Maus zur Ermittlung der Zellkonzentration im Exsudat herangezogen; es wurde näherungsweise eine Konzentration um 4 x 106 Zellen/ml eingestellt.
Isolierung adhärenter Makrophagen:
Makrophagen und Monozyten werden aus der isolierten Zellpopulation dadurch selektiert, daß man sie auf Deckgläschon inkubiert; Makrophagen und Monozyten adhärieren hierbei, andere Zellen nicht. In Gewebekulturschalen mit 24 Näpfchen (Polystyrol, Fa. Costar) werden runde Dockgläschen gelegt und mit 0,25 ml DMEM (mit 5% foetalem Kälberserum) überschichtet.
Zur gleichmäßigen Verteilung der Zellen werden die Schalen auf oinon Schüttler gebracht, und in jodon Einsatz werden unter Schütteln (5min, etwa 200UPM) 0,25ml Zollsuspension pipettiert. Anschließend werden die Gewebekulturschalen 1 Stunde bei 370C und 8% CO2 im Brutschrank inkubiert. Nach der Inkubation werden die nicht adhärenten Zollen abgesaugt, danach zweimal mit 0,25ml DMEM (plus 5% foetales Kälberserum) gewaschen.
Opeonierun der Hammelerythrozyten:
1 ml Hammelblut wird zweimal mit 4 ml PBS/BSA gewaschen (Zentrifugieren, 10min, bei etwa 500xg). Das gewaschene Blut wird 1:50 mit PBS/BSA verdünnt. Das Antiserum gogen Hammelerythrozyten wird mit PBS/BSA 1:200 verdünnt. Verdünntes Hammelblut und verdünntes Antiserum wird 1:1 zusammengegeben und 1,5 Stunden unter schonendem Schütteln (etwa 80UPM) inkubiert.
Phagozytose:
In jedes Näpfchen der Gewebokulturschalen mit adhäronton Makrophagen auf den Deckgläschen wird 0,5ml opsonierte Erythrozytensuspeneion pipettiert. Die Schalen werden 20min bei 370C und 8% CO2 inkubiert. Danach worden die überschüssigen Erythrozyten abgesaugt und die Deckgläschen zweimal mit DMEM (0,5% FCS) gewaschen.
Zur Lyse nicht phagozytierter Erythrozyten werden diese mit jeweils 1 ml NH4CI-Trls-Puffor behandelt (es wurde eine Einwirkzeit von 3,75min als geeignet ermittelt). Noch Absaugen des Puffers wurden die Deckgläschen zweimal mit PBS/BSA gewaschen.
Nach Phagozytose werden Makrophagen nach Pappenheim noch einer kombinierten May-Grünwald-Giemsa-Mothode angefärbt. Die Färbung wird in den Näpfchen der Gewebekulturschalen ausgeführt.
— 5 min May-Grünwald konz., absaugen
— 3 min HjO bidest., mit H3PO4 min 85% auf pH7,0 eingestellt; absaugen
— 9 min Giesma-Lösung 1:40 verdünnt und vor Gebrauch filtriert; absaugen
— mit HjO dest. aus der Spritzflasche nachspülen
Die Zellkerne sind nach der Färbung rotviolett, das Zytoplasma helfblau. Die,phagozytierten Erythrozyten sind blaßrosa erkennbar. Nach Lufttrocknung werden die Mikroskop-Präparate mit „Eukitf auf Objektträgern festgeklebt (3 Präparate/Maus).
Von den drei Mikroskop-Präparaten einer Maus wurden zwei ausgezählt. Es wurde ein Zeiss-Mikroskop bei 10OOfacher Vergrößerung und ölimmersion verwendet. Das dritte Präparat wurde herangezogen, wenn das Ergebnis aus *wel Präparaten nicht eindeutig war. Pro Präparat wurden 300 Zellen gezählt und in Abhängigkeit von der Phagozytosoaktivität unterteilt in Klassen mit steigender Anzahl Erythrozyten/Makrophage.
| Klaue | Erythrozyten/Makrophage |
| 1 | 0 |
| 2 | 1 |
| 3 | 2 |
| 4 | 3 |
| 5 | 4 |
| 6 | 5 |
| 7 | β |
| 8 | 7 |
| 9 | 8 |
| 10 | 9 |
| 11 | 10 |
| 12 | 11-20» |
* FQr Berechnungen wurden angenommen, daß bei > 11 Erythrozyton/MPH die Verteilung In der Klause 12 einen Schwerpunkt um 12 Erythrozyten/Makrophage aufweist. Makrophagen der 12. Klasse traten relativ selten auf.
Die Auszählung der mikroskopischen Präparate wurde an einer Rechenanlage WANG LVP 2200 mit einem speziollen Eingabeprogramm ausgeführt, das die separate Erfassung dor Zählklassen erlaubte. Die Mittelung von Einzeldateien wurde mit dem Programm „MA1", die graphischen Darstellungen mit dem Programm „NPL" ausgeführt. Der Stimulationseffekt wurde für jede Testsubstanz und Dosis auf zwei Arten dargestellt:
1. Verteilung der Makrophagen auf die Klassen (Erythrozyten/Makrophage) in %, bezogen auf 300 Zellen als 100%. Hierbei gern auch die Anzahl der Makrophagen in die graphischo Darstellung ein, die keinen Erythrozyten phagozytiert hatten.
2. Verteilung der phagozytierten Erythrozyten (Anzahl der NPH in einer Klasse χ Anzahl der Ei ythrozyten/MPH) auf die Klassen in %, bezogen auf die Gesamtzahl der phagozytierten Erythrozyten als 100%. Hierbei bleibt die Zahl der Makrophagen, die keinen Erythrozyten phagozytiert hatten, unberücksichtigt.
Parameter Als Parameter der Makrophagenstimulation wurde die Steigerung dor Phagozytoseaktivität, ausgedrückt als Anzahl phagozytierter Erythrozyten pro Makrophage (= Klasse), betrachtet. Eine Stimulation zeigt sich in einer Abnahme der Makrophagen, die keine oder wenige Erythrozyten phagozytiort hatten und in einor Zunahme der Makrophagen mit mehroron Erythrozyten.
Ergebnisse MPH-Stlmulatlon durch 1-Carboxy-3,4-methylendioxy-8-methoxy-phQnanthren (ί.μ./: Abb.1: 3 x 20mcg/kgi.p.
MPH-Stimulation nach 3 Tagen (x ± SEM)
a) Verteilung von 300 Zellen auf die Klassen 1 bis 12 in %
b) Verteilung der phagozytierten Erythrozyten auf die Klassen 1 bis 12 in %
| I M X | 3ZENT | iuu - | /S |
| cn Ul | a. | 80 - | / · |
| Ul | Z HH | / "N^ . ^ | |
| U Ul MH | Ul <Λ | SO - | f ι ι ι ι ι f T ? |
| U CI | <C -J | - | |
| cc | Ul | 40 - | |
| Iu | £ | • - | |
| 20 - | |||
| u — | |||
10
12
KLfISSE
Tabelle: 3 χ 20mcg/kgi.p.
MPH-Stimulation nach 3 Tagen
a) Verteilung von 300 Zellen auf die Klassen 1 bis 12 in %
| 1 | Kl. | Maus | Maus | Maus | Maus | x-quer | SD | SE | MD | |
| η | 2 | 1 | 2 | 3 | 4 | 71,417 | 3,77 | 1,889 | 71,750 | |
| 3 | 1,00 | 7ß,67 | 71,33 | 06,50 | 72,17 | 16,292 | 3,056 | 1,528 | 16,250 | |
| 4 | 2,00 | 12,67 | 17,00 | 20,00 | 15,50 | 7,333 | 1,080 | 0,540 | 7,250 | |
| 3,00 | 6,83 | 6,17 | 8,67 | 7,67 | •^,875 | 0,644 | 0,322 | 2,917 | ||
| 4,00 | 2,17 | 3,33 | 3,50 | 2,50 | ||||||
Fortsetzung der Tabelle
| 6 | Kl. | Maus | Maus | Maus | Maus | 1 | Kl. | Maus | Maus | 0,0 | Maus | 0,0 | "«»US | 0,0 | x-quor | SD | SE | MD | |
| η | 6 | 1 | 2 | 3 | 4 | 2 | 1 | 2 | 34,8 | 3 | 37,5 | 4 | 31,2 | 1,167 | 0,408 | 0,204 | 1,167 | ||
| 7 | 5,00 | 0,67 | 1,67 | 1,17 | 1,17 | 3 | 1,00 | • 0,0 | 25,3 | 32,5 | 30,9 | 0,468 | 0,583 | 0,292 | .0,167 | ||||
| 8 | 6,00 | 1,33 | 0,17 | 0,17 | 0,17 | 4 | 2,00 | 20,5 | 20,5 | 19,7 | 15,1 | 0,260 | 0,215 | 0,108 | 0,250 | ||||
| 9 | 7,00 | 0,17 | 0,33 | 0,00 | 0,60 | 6 | 3,00 | 20,6 | 13,7 | 8,8 . | 9,4 | 0,042 | 0,C83 | 0,042 | 0,000 | ||||
| 10 | 8,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,17 | 6 | 4,00 | 13,6 | 1,7 | 1,6 | 1,7 | 0,042 | 0,083 | C,042 | 0,000 | ||||
| 11 | 9,00 | 0,17 | 0,00 | 0,00 | 0,00 · | 7 | 5,00 | t>,6 | 4,1 | 0,0 | 6,0 | 0,000 | 0,000 | 0,000 | 0,000 | ||||
| 12 | 10,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 8 | 6,00 | 13,9 | 0,0 | 0,0 | 2,3 | 0,125 | 0,160 | 0,080 | 0,083 | ||||
| 11,00 | 0,33 | 0,00 | 0,00 | 0,17 | 9 | 7,00 | 2,1 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,000 | 0,000 | 0,000 | 0,000 | |||||
| 12,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 10 | 8,00 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | |||||||||
| b) Verteilung der phagozytiorten Erythrozyten auf die Klassen 1 bis 12 in % | 11 | 9,00 | 2,8 | 0,0 | 0,0 | 3,4 | |||||||||||||
| 12 | 10,00 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | x-quer | SD | SE | MD | ||||||||||
| η | 11,00 | 7,0 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | |||||||||||||
| 12,00 | 0,0 | 32,50 | 4,77 | 2,38 | 33,01 | ||||||||||||||
| 29,30 | 3,14 | 1,57 | 29,72 | ||||||||||||||||
| 17,21 | 3,39 | 1,69 | 17,39 | ||||||||||||||||
| . 9,34 | 3,32 | 1,66 | 9,07 | ||||||||||||||||
| 4,72 | 6,14 · | 3,07 | 1,69 | ||||||||||||||||
| 3,06 | 2,60 | 1,30 | 3,09 | ||||||||||||||||
| 0,59 | 1,17 | 0,59 | 0,00 | ||||||||||||||||
| 0,70 | 1,39 | 0,70 | 0,00 | ||||||||||||||||
| 0,00 | 0,00 | O1OO | 0,00 | ||||||||||||||||
| 2,68 | 3 | 1,66 | 1,68 | ||||||||||||||||
| 0,00 | 0,00 | 0,00 · | 0,00 | ||||||||||||||||
Abb.2; 3 X 500mcg/kgi.p.
MPH-Stimulation nach 3 Tagen (x ± SEM)
a) Verteilung von 300 Zellen auf die Klassen 1 bis 12 in %
b) Verteilung der phagozytierten Erythrozyten auf die Klassen 1 bis 12 in %
80 -
Kl.ftSSE
a) Verteilung von 300 Zellen auf die Klassen 1 bis 12 in %
| 1 | Kl. | Maus | Maus | Maus | Maus | Maus | x-quor | SD | SE | MD | |
| η | 2 | 1 | ? | 3 | 4 | 5 | 53,667 | 5,775 | 2,583 | 52,833 | |
| 3 | 1,00 | 63,00 | 52,83 | 53,83 | 47,33 | 51,33 | 17,333 | 3,053 | 1,365 | 17,833 | |
| 4 | 2,00 | i3,00 | 19,67 | 20,50 | 17,83 | 15,67 | 12,267 | 2,893 | 1,294 | 12,167 | |
| 5 | 3,00 | 0.00 | 11,03 | 13,33 | 16,'OO | 12,17 | 6,667 | 1,523 | 0,681 | 6,000 | |
| β | 4,00 | 5,00 | 6,00 | 5,83 | 7,83 | 8,67 | 4,333 | 0,979 | 0,438 | 4,333 | |
| 7 | 5,00 | 4,33 | 3,83 | 3,00 | 5,00 | 6,50 | 2,433 | 0,630 | 0,282 | 2,667 | |
| 6 | 6,00 | 2,83 | 2,83 | 1,33 | 2,50 | 2,67 | 1,333 | 0,500 | 0,224 | 1,167 | |
| 9 | 7,00 | 1,17 | 1,33 | 0,83 | 1t17 | 2,17 | 0,633 | 0,183 | 0,082 | 0,500 | |
| 10 | 8,00 | 0,83 | 0,50 | 0,50 | 083 | 0,50 | 0,733 | 0,384 | 0,172 | 0,667 | |
| 11 | 9,00 | 1,17 | 0,67 | 0,17 | 1,00 | 0,67 | 0,100 | 0,149 | 0,067 | 0,000 | |
| 12 | 10,00 | 0,00 | 0,17 | 0,33 | 0,00 | 0,00 | 0,433 | 0,190 | 0,085 | 0,500 | |
| 11,00 | 0,67 | 0,33 | 0,17 | 0,50 | 0,50 | 0,067 | 0,091 | 0,041 | 0,000 | ||
| 12,00 | 0,00 | 0,00 | 0,17 | 0,00 | 0,17 | ||||||
b) Verteilung der phagozytierten Erythrozyten auf die Klassen 1 bis 12 in %
| 1 | Kl. | Maus | 0,0 | Maus | 0,0 | Maus | 0,0 | Maus | 0,0 | Maus | 0,0 | x-quer | SD | SE | MD | |
| η | 2 | 1 | 12,5 | 2 | 17,B | 3 | 20,3 | 4 | 13,5 | 6 | 11,9 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | |
| 3 | 1,00 | 15,3 | 21,0 | 26,4 | 24,3 | 18,5 | 15,13 | 3,60 | 1,61 | 13,54 | ||||||
| 4 | 2,00 | 14,4 | 16,0 | 17,3 | 17,8 | 19,8 | 21,11 | 4,41 | 1,97 | 21,04 | ||||||
| 5 | 3,00 | 16,6 | 13,6 | 11,9 | 15,2 | 16,7 | 17,0. | 2,02 | 0,90 | 17,30 | ||||||
| 6 | 4,00 | 13,6 | 12,6 | 6,6 | 9,5 | 10,1 | 14,80 | 2,07 | 0,93 | 15,19 | ||||||
| 7 | 5,00 | 6,7 | 7,1 | 4,9 | 6,3 | 9,9 | 10,48 | 2,75 | 1,23 | 10,14 | ||||||
| 8 | 6,00 | 5,6 | 3,1 | 3,5 | 4,4 | 2,7 | 6,79 | 1,95 | 0,87 | 6,71 | ||||||
| 9 | 7,00 | 8,9 | 4,/ | 1,3 | 6,1 | 4,1 | 3,85 | 1,17 | 0,52 | 3,46 | ||||||
| 10 | 8,00 | 0,0 | 1,3 | 3,0 | 0,0 | 0,0 | 5,03 | 2,79 | 1.25 | 4,74 | ||||||
| 11 | 9,00 | 6,4 | 3,0 . | 1,6 | 3,8 | 3,8 | 0,86 | 1,31 | 0,59 | 0,00 | ||||||
| 12 · | 10,00 | 0,0 | XO | 3,3 | 0,0 | 2,5 | 3,72 | 1,73 | 0,77 | 3,30 | ||||||
| 11,00 | 1,17 | 1,62 | 0,72 | 0,00 | ||||||||||||
| 12,00 |
Abb.3; 3 χ 5 mg/kg I. p.
MPH-Stimulation nach 3 Tagen (x ± SEM)
a) Verteilung von 300 Zellen auf dio Kiassen 1 bis 12 In %
E »ο Η
ν..
10
12
CLMSSE b) Vorteilung der phagozytl jrten F.rythrozyton auf die Klassen 1 bis 12 in %
ΐ 7- to H
Π γ—τ
8 8
12
Tabelle: 3x5 mg/kg i. p.
MPH-Stimulation nach 3 Tagen
a) Verteilung von 300 Zellen auf dio Klassen 1 bis 12 In %
| 1 | Kl. | Maus | Maus | Maus | Maus | Maus | x-quor | SD | SE | MD | |
| η | 2 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 55,500 | 8,149 | 3,644 | 52,167 | |
| 3 | 1,00 | 69,33 | 50,33 | 52,17 | 49,50 | 56,17 | 17,900 | 5,381 | 2,406 | 18,000 | |
| 4. | 2,00 | 9,83 | 16,17 | 18,00 | 23,33 | 22,17 | 11,500 | 2,389 | 1,068 | 11,500 | |
| 5 | 3,00 | 8,00 | 12,17 | 11,50 | 14,67 | 11,17 | 6,933 | 0,925 | 0,414 | 5,833 | |
| 6 | 4,00 | 4,83 | 7,17 | 5,83 | 6,50 | 5,33 | 3,933 | 1,539 | 0,688 | 3,000 | |
| 7 | 5,00 | 2,83 | 6,00 | 6,17 | 2,67 | 3,00 | 2,400 | 1,018 | 0,455 | 2,000 | |
| 8 | 6,00 | 2,00 | 2,33 | 4,17 | 1,83 | 1,67 | 1,067 | 0,990 | 0,443 | 0,667 | |
| 9 | 7,00 | 0,67 | 2,67 | 1,33 | 0,50 | 0,17 | 0,400 | 0,435 | 0,194 | 0,333 | |
| 10 | 8,00 | 0,67 | 1,00 | 0,00 | 0,33 | 0,00 | 0,600 | 0,435 | 0,194 | 0,667 | |
| 11 | 9,00 | 0,67 | 1,17 | 0,83 | 0,17 | 0,17 | 0,267 | 0,149 | 0,067 | 0,167 | |
| 12 | 10,00 | 0,33 | 0,17 | 0,50 | 0,17 | 0,17 | 0,233 | 0,253 | 0,113 | 0,167 | |
| 11,00 | 0,17 | 0,67 | 0,17 | 0,17 | 0,00 | 0,267 | 0,253 | 0,113 | 0,167 | ||
| 12,00 | 0,67 | 0,17 | 0,33 | 0,17 | 0,00 | ||||||
b) Verteilung der phagozytlerton Erythrozyten auf dio Klasson 1 bis 12 in %
Kl. Maus Maus Maus Maus Maus
η· 12 3 4 5
xquor
SD
SE
| 1 | 1,00 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| 2 | 2,00 | 10,6 | 11.4 | 14,1 | 22,2 | 26,2 | 16,88 | 6,94 | 3,10 | 14,12 |
| 3 | 3,00 | 17,1 | 17,2 | 18,0 | 27,9 | 26,4 | 21,32 | 6,35 | 2,39 | 16,04 |
| 4 | 4,00 | 15,6 | 1F,2 | 13,7 | 18,5 | 18,9 | 16,37 | 2,25 | 1,01 | 15,48 |
| 5 | 6,00 | 12,1 | 17,0 | 16,2 | 10,1 | '4,2 | 13,92 | 2,83 | 1,27 | 14,17 |
| 6 | 6,00 | 10,7 | 8,2 | 16,3 | 8,7 | 9,8 | 10,76 | 3,26 | 1,46 | 9,84 |
| 7 | 7,00 | 4,3 | 11,3 | 6,3 | 2,9 | 1,2 | 5,18 | 3,90 | 1,75 | 4,27 |
| 8 | 8,00 | 6,0 | 4,9 | 0,0 | 2,? | 0,0 | 2,43 | 2,43 | 1.11 | 2,22 |
| 9 | 9,00 | 5,7 | 0,6 | 5,2 | 1,3 | 1,6 | 4,07 | 2,47 | 1,11 | 5,23 |
| 10 | 10,00 | 3,2 | 1.1 | 3,5 | 1.4 | 1.8 | 2,20 | 1,10 | 0,49 | 1,77 |
| 11 | 11,00 | 1.8 | 4,7 | 1.3 | 1,6 | 0,0 | 1,88 | 1,73 | 0,77 | 1,58 |
| 12 | 12,00 | 14,2 | 2,4 | 5,2 | 3,2 | 0,0 | 5,00 | 5,49 | 2,46 | 3,17 |
Die Kontrollgruppen nach i.p. bzw. p.o. Gabe von phye. NaCI-Lösuny zeigen, daß die i. p. Applikation solbst bereits eine schwächt) Makrophagenaktivlerung bewirkt. Ein hoher Anteil Makrophagon hat zwei Erythrozyten phagozytiert, Ein Ansteigen der Makrophngon mit mehr als zwei Erythrozyten ist demnach als Substanzeffekt zu interpretieren, Die %-Summu der firythrozyton ab der 4. Klasse (Makrophagen mit 3 Erythrozyten und mohr) wurde daher zur Dosis in Relation gesetzt
Abb. 4: Abhängigkeit der %-Summo der Erythrozyten ab der 4. Klasse und darüber von der Dosis nach i. p. Gabe von 20mcg/kg, . 500mcg/kg und 5mg/kg. Dio Kontrolle liegt boi 45% ± 6% (x ± SEM). In der Abbildung ist der Boreich ± SEM und don Mittelwert durch die unterbrochene Linio angegebon.
SO -ι
►-* lü
Χ ft.
60 -
50
HO -
30
10
rrrrf— v 100
-i r TTT-; 1 r—ι ι ι ι ι η
1000 ' 10000
OQSIS iMCO/Kpl I.P./
Tabelle: Dosisabhängigknit der Makrophagen-Stimulation nach i. p. Gabe χ = Dosis (mcg/kg) y = %-Summe der phagozytierton Erythrozyten SEM = Standarderror of the moans
x-Werte
y-Werte
SE-Werte
20,0000
500,0000
5000,0000
38,2000 63,7600 61,8000
2,7800 3,3200 5,4200
Bewertung
Die Substanz bowirki eine Steigerung der Makrophagenaktivierung von 38% boi 20 mcg/kg auf 64% bei 500mcg/kg. Eine weitere Steigerung der Dosis; auf 5mg/kg führt zu einer geringfügigen Abschwächung '!er Stimulation. Die Makrophagonaktiviorung
verläuft im gewählten Dosisbereich nicht linear.
Die Testgruppe, die unmittelbar vor Makrophagengowinnung einmalig intraporitoneal appliziort wurde, demonstrierte, daß dio beobachteten Effekte* nur nach einer Inkubationszeit auftreten. Diosor Befund doutot darauf hin, daß die Substanz in vivo die für die Phagozytosestei(|orung verantwortlichen Mechanismen in Makrophagen induzierte.
-12- 266 800 Dieses deutet auf die folgenden Effekte:
1. Stimulation der Membranintornalislerungsrato
2. Steigerung der Fc-Rezeptorendlchte und/oder
3. Erhöhung der Mobilität der CSb-Rozoptoren.
Die anderen orfindungsgomäßen Verbindungen zoigon eine vergleichbare pharmokologischo Wirkung. Die Wirkung konnte mit anderen pharmakologlechen Modellen und klinisch bestätigt worden.
Beispiel 1: Herstellung von i-Carboxy-S^-mothylondloxy^'-methoxy-stilbon a) Darstellung von 6-Bromplppronylbromld
+ Br2
HOAo
CH2OH
CH2Br
(MG-152)
(MG-294)
In einem 1-1-3-Halsrundkolben, versehen mit Tropftrichter, Trockonrohr und Innenthermometer, wird Piporonylalkohol in Essigsäure vorgelegt und im Eisbad gekühlt. Zu diosor Lösung tropft man untor Rühren Brom, golöst in Essigsäure, langsam zu, so daß die Temperatur zwischen 15-250C bleibt. Das Reaktionsgemisch wird über Nacht stohongolassen, und die ausgefallenen Kristalle werden abgenutscht, mit Wasser gewaschen und aus Methanol umkristallisiort. Fp.:92-93°C Ausb.:174g,7B%
b) Darstellung dr.eTriphenylphospho'.\lumsalzes
,Ph)3P —
H0C
,0
-Br -CH2P(Ph)3Br'
(MG·-= 556)
;·; J-CH2Br
(MG = 29I)
Chemikalien: 6-Bromp'per >m /bromid 294g Triphenylphosphin 262g Toluol
In einem 3-1-3-Halsrundkolben, versehen mit Rückflußkühlor und KPG-Rühror, werden 6-Brompiperonylbromid und Triphenylphosphin vorgelegt und in absolutem Toluol unter Rühren gelöst. Das Reaktionsgemisch wird untor Rühren 2 Stunden erhitzt und 2". Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das gebildete Triphenylphosphoniumsalz wird abgeni'tscht, mit wenig Toluol gowasch jn und Im Exsikkator getrocknet, Ausbeute: 500g, 95%
o-
Br
CH2P(Ph)3Br
(MG-556)
CH3O-OHC
(MG= 136)
-^- OCH3 (MG -333)
Methanol (absolut) Trlphenylphosphoniumsnlz o-Anisaldehyd Dimethylformamid (absolut)
Kleingeschnittenes Lithium (0,98g, 0,14g atom) wird zu unter Stickstoff vorgelegtem absoluten Methanol (30ml) zugegoben. Nach Beendigung der Reaktion tropft man diese Lösung innerhalb von 2,5 Stunden in eine bei 90°C gerührte Lösung aus Triphenylphosphonlumsalz (76,96g, 0,14mol) und o-Anisaldohyd (17,U8g, 0.1?mol), gelöst in absolutem Dimethylformamid (200ml). Die Reaktionslösuno wird eine weitere Stunde boi 90°C gerührt. Nach Abkühlung auf Raumtemperatur wird das Reaktionsgemisch in Wasser (700ml) eingegossen und der Niederschlag abfiltriert und getrocknet. Das gotorcknete Produkt wird im Soxhlett mit Petrolether (30 bis 5O0C) extrahiert, bis der Rückstand in dor Hülse kein Stilben mehr enthält (DC; Kieselgel; CH2CI2). Der Petrolethor wird unter Vakuum eingeengt und der Rückstand (64,82g Gemisch) aus Ethanol umkristallisert. (Hierdurch wird der größte Teil der Verunreinigung bzw. des nicht umgesetzten Produktes abgotronnt.) ^ Der ausgefallene Niederschlag (31,13g) wird In Ether (300ml) aufgeschlämmt und 2 Stunden gekocht (= Trennung dos eis· und trans-Gemisches). Nach Abkühlung wird der Feststoff abfiltriert und getrocknet. Ausbeute: 23,87 g (52%) reine Cis-Verbindung — geprüft durch DC, NMR
d) Herstellung von 1-Cyano<M-methylendloxy-2'-methoxy-stilbon
Cu (CN)/DMR^
OCHr
(MG= 33 ι) I (MG= 277)
Eine Mischung aus dem vorgetrockneten Stilbenbromid (3g), KupferflU-cyanld (4g) und Dimethylformamid (30ml) wird für 8-12h unter Rückfluß gekocht, bis kein Bromid im DC (Dichlormethan-Petrolother [1:2)) mehr nachweisbar ist. Nach Abkühlung wird das Reaktionsgemisch in eine Lösung von Elsen(lll)-chlorid (4g), HCI (1 ml) und Wasser (10ml) gegeben und das Reaktionsgemisch auf 70°C für 20 Minuten gehalten. (Abzug: HCN-Entwickiungl). Danach wird das abgekühlte Reaktionsgemisch mit Chloroform (5 χ 40ml) extrahiert, mit Wasser (2 χ 20 ml) gewaschen und über Calciumchlorid getrocknet. Nach Entfernung des Lösungsmittels wird der Rückstand aus Ethanol umkristallisiert. Ausbeute: 2,0g (70%)
| e) Hydrolyse H^oH | ι / ^OCH3 | Stilbeniiäurenitril gemäß Formel NaOH | H2CC ι | Ü | (MG | /COOH |
| de» Nitrile zum Endprodukt ^^γ-' CN \.^'\ NaOIi I \ | (MG= 2 77) | > | ί | ^pCH3 | ||
| C | Chemikalien: | j | = 296) | |||
Stilbensäureniiril (1 g) wird in möglichst wenig Ethanol (30 bin 50ml) unter Erwärmen gelöst und mit Natriumhydroxidlosung versetzt (10g in 15ml H2O). Das Reaktionsgemsich wird unter kräftigem Rückfluß gekocht, bis das DC (Ether) kein Cyanid mehr nachweist (18-2Oh). Das Ethanol wird unter Vakuum abgezogen und zu dem Rückstand Wasser (50-10OmI) zugegeben. Die wäßrige Phase wird mit Ethei (2 x 30ml) extrahiert und mit 6N HCI neutralisiert. Der ausfallende flockige Niederschlag bleibt meist als Kolloid in der Lösung. Die Lösung wird kurz erwärmt und 24 Stunden stehengelassen.
Df» koagulierte Niederschlag wird abgonutscht und aus Ethanol umkristallisert. Ausbouto: 0,53g (60%)
Herstellung von i-Carboxy-ä^-methylendloxy-ä'-mothoxy-stllben durch Umwandlung des Stllbenbromlds In die Stilbensaure
s Br
>' OCH3
1 . n-BuLi:/Ether
2. CO2
3. HCl
Chemikalien: StilbenbromiclgomäßFormel 17,44g(0,05mol) n-Bull (1,55 molar) 40 ml (0,061 mol)
Ether 180ml
Das Stilbenbromid wird in absolutem Ether gelöst und unter Stickstoff auf -720C gekühlt. In diese Reaktionslösung wird vorsichtig n-Buli eingespritzt und nach Zugabe innerhalb von 1 h auf Raumtemperatur erwärmt. Die Lösung wird dann sofort auf festes COj gegeben, über Nacht reagieren lassen. Nach Zugabe von Wasser und der Phasentrennung wird die wäßrige Phase mit Ether (2 x 100ml) extrahiert. DIo vereinigten wäßrigen Phasen werden im Eisbad gekühlt und mit konzentrierter HCI angesäuert.
Der ausgefallene Niederschlag wird abgenutscht und mit viel Wasser neutralgewaschen, Nach 2- bis 3moligem Aufkochen mit Wasser (zur Entfernung von Buttersäure, die aus n-Buli stammt) wird das Rohprodukt aus
EtOH/H2O umkristallislort.
Ausbeute: 9,16g (58,7%) Fp.: 199,50C
Das entsprechende Stilbenbromid kpnn gemäß Beispiel 1, Stufen a bis c, erhalten werden.
a) Photochemische Umwandlung des Stllbender!vates In das entsprechende Phenanthrenderlvat
-Br
HoC
OCH-,
(MG ~333)
(MG-331)
Chemikalien: Stilbenbromid (cis-Verbindung) 1,2,3,4-Tretrahydro-9-fluorenon Cyclohexan Jod
cls-Stilbenbromld (3,3g, 0,01 mol) wird in absolutem 1,2,3,4-Tetrahydro-9-fluoronon (100ml) gelöst. Diese Lösung wird mit absolutem Cyclohoxun (1200ml) verdünnt und mit Jod (1,7 g) versetzt. Die Lösung wird unter Stickstoffeinleitung mit einer Labortäuchlampo mit Kühlrohr des Typs TQ150 (Hanau) 12 bis 14 Tage beleuchtet. Die Reaktion wird mit DC (CH2CI2/PE 30 bis 50°C C1:2) kontrolliert. Die organische Phase mit wäßriger Thiosulfat-Lösung (3 x 300ml) ausschütteln, um das überschübsige Jod zu entfernen. Nach dem Trocknen über MgSO* wird die organische Phase einrotiert. Das Rohprodukt wird au&Petrolether bei 60 bis 9O0C umkristallisiert
Ausbeute: 1,55g (47% der Theorie)
b) Herstellung von i-Cyano-S.^methylendloxy-e-methoxy-phonanthren aus dem Phonanthrenbromld Umwandlung des Phenanthrenuromids zum Nitril
-CN
-Br "- -
HoC
Cu (CN)/DMF/^
OCI-l·
OCH-
(MG =277)
(MG = 331)
Chemikalien: Phenanthrenbromid gemäß Formel Kupter;i!)cyaniil N,N-Dimethylformamid
Eine Mischung aus dem vorgotrockneten Phenanthrenbromid (3g), Kupfer(ll)-cyanid (4g) und Dimethylformamid (3OmI) wird für 8 bis 12 Sturden unter Rückfluß gekocht, bis kein Bromid im DC (Dichlormethan-Peirolether (1:2)) nachweisbar ist. Nach Abkühlung wird das Reaktionsgomisch in eine Lösung von Eisen(lll)-chlprid (4g), HCI (1 ml) und Wasser (1OmI) gegeben und das Reaktionsgemisch auf 70°C für 20min gehalten (Abzug: HCN-Entwicklungl). Danach wird das abgekühlte Reaktionsgemisch mit Chlorofotm(5 x 40ml)extrahiert,mitW<isser(2 χ 2OmI) gewaschen und über Calciumchlorid getr^rknot. Nach Entfernung des Lösungsmittels wird der Rückstand aus Ethanol umkristallisiert
Ausbeute: 2,0g (70%); Fp.: 215fC
c) hydrolyse des Phenanthrensfiurenitrlls zur PhenanthrensSure
CN j
,0-
COOH
NaOH
OCHn
(MG = 277)
Chemikalien: Phenanthrensäurenitril gemäß Formel NaOH
Phenantrensäurenitril (1 g) wird in möglichst wenig Ethanol (30 bis 50 ml) unter Erwärmen gelöst und mit Natriumhydroxidlösunrj versetzt (10g in 15ml H2O). Das Reaktionsgemisch wird unter kräftigem Rückfluß gekocht, bis des DC (Ether) kein Cyanid mehr nachweist (18 bis 20 Stunden). Das Ethanol wird un'or Vakuum abgezogen und zu dem Rückstand Wasser (50 bis 100ml) zugegeben. Die wäßrige Phase wird mit Ether (2 χ 30ml) extrahiert und mit 6N HCI neutralisiert. Der ausfallende flockige Niederschlag bleibt meist als Kolloid in der Lösung. Die Lösung wird kurz erwärmt und 24 Stunden stehengelassen.
Der koagulierte Niederschlag wird abgenutscht und aus Ethanol umkristallisiert
Ausbeute: 0,53g (50%)
1,0g 1-Carboxy-3,4-methylendioxy-8-methoxy-phonanthren wurde mit 2,0g Pyrldin-hydrochlorid im Ölbad bei 17O0C zum Schmelzen norracht und unter Begasung mit Stickstoff 1 Stunde auf dieser Temperatur gehalten. Nach dem Abkühlen wurde die erstarrte Masse mit 1015%iger HCI aufgenommen und 3x mit je 101 Chloroform extrahiort. Man vereinigte die Extrakte, wusch mit Wasser neutral und filtrierte zur Trocknung über silanislertes Filterpapier (WHATMAN 1 PS). Nach Abdampfen des Lösungsmittels bei 30cC am Rotationsverdampfer wurde das Gemisch1 aus Ausgangsmaterial und Hydrolysat zur Trennung verestert, indem mit einem Gemisch aus 2,51 Methanol und 0,11 konzentrierter H2SO1) 3 Stunden unter Rückfluß destilliert wurdo. Dann wurde In 10 ml Wasser eingegossen und die wäßrig-methanolische Phase 3 χ mit je 101 Diisopropylether ausgoschüttelt. Das organische Lösunosmittel wurde, nachdem mehrfach mit Wasser gewaschen worden war, mit 101 NaOH extrahiert, wobei der Methylester der 8-Methoxy-Verblndung in der organischen Schicht verblieb und die 8-Hydroxy-Verbindung unter
gleichzeitiger Esterhydrolyso in die wäßrige Phase überführt wurde. Nach Auswaschen mit frischem Diisopropylether wurde die alkalische Phase angesäuert und mehrfach mit Chloroform ausgeschüttelt.über Phasentronnpapior WHATMAN 1 PS getrocknet und das Lösungsmittel am Rotationsverdampfer abgezogen. i-Carboxy-S^-mothylendioxy-e-hydroxy-phonanthren blieb eis dünnschichtchromatographisch einheitliche Verbindung in fester Form zurück. Fluoreszenz: (MeOH; Xn,,,,, nm): Anregung: 261,302,318, 329,358,377 Emission: 386,402 Ausbeute: Ö,714g (75%)
5 g Aristolochiasäurelwerdenin 1 500 ml 1%iger wäßrlgor Natriumcarbonat-Lösung gelöst und anschließend in einem 5-l-Kolbon filtriert.
Zu dieser klaren Salzlösung fügt man 1 50GmI käufliche Ammoniumpolysulfid-Lösung hinzu. Das Roaktionsgemisch wird 2 Stunden boi Raumtemperatur (Abzugl)
gerührt und verschlossen über Nacht aufbewahrt. Im Anschluß daran gibt man 1500ml demin. Wasser hinzu und säuert tropfenweise unter Rühre/i mit etwa 550 ml konzentrierter Salzsäure das ReaktionegernlKoh nn. Das dabei entstehende Fällprodukt wird abfiltriert und mit Wasser
nachgewaschen. Die wäßrige Phase wird mit 1 500 ml Ethylacetat extrahiert. Dieses Ethylacetat setzt man zum Ausführen des Fällproduktes ein und wiederholtanschließend zweimal die Ausrührung mit |e
1 500 ml Ethylacetat. Die organischen Phasen worden vereinigt und zweimal mit je 500 ml Wasser gewaschen. Anschließend extrahiert man die Ethylacetat-Lösung viermal mit je 750 ml 2%lger wäßriger Natronlauge. Die organische Phase wird verworfen, die alkalisch-wäßrige Lösung mit konzentrierter
1000 ml Ethylacetat ausgeschüttelt. Die vereinigten organischen Phasen worden dreimal mit je
750 ml Wasser gewaschen. Die gewaschene organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und anschließend nach Filtration im Vakuum zur Trockne gezogen 'Badtemperatur etwa 30 0C). Ausbeute: 3,1 g Fp.:285°C(Zer8.) Zur Reinigung wird dio Substanz aus Ethylacetat umkristalllsiort.
Claims (1)
- Patentanspruch:Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (I):COOHin der Ri ein Η-Atom, Methoxy oder Ethoxy bedeutet und R2, R3 für Η-Atome stehen oder zusammen eine aromatische C-C-Bindung bilden, wobei in diesem Falle R1 auch Hydroxyl bedeuten kann, und
deron pharmazeutisch verträgliche Salze, dadurch gekennzeichnet, daß man 6 Brompiperonylbromid der Formel0 —CH2Brmit Triphemylphosphin in einem wasserfreien Lösungsmittel zu einem Phosphoniumsalz dor FormelH2COH2P(Ph)3Brumsetzt, letztere Verbindung mit Benzaldehyd, O-Methoxybenzaldehyd oder ortho-Ethoxybenisldehyd in Anwesenheit einer starken Base zu einem Stilben der Formelumsfatzt, worin R1 für H, OCH3 oder OC2H5 steht, dieses Stilbenbromid entweder mit einemMetallcyanid, insbesondere Kupfercyanid, in einem polaren aprotischen Lösungsmittel, insbesondere in Dimethylformamid, in das entsprechende Nitril umwandelt und dieses durch Hydrolyse in eineSäure der Formel (I) überführt oder obiges Stilbenbromid mit n-Butyllithium und Kohlendioxid in einer Säure der Formel (I) überführtobiges Stilbenbromid durch UV-Bestrahlung in das Phenanthrenderivat der Formelüberf Jhrt und diese Verbindung mit einem Metallcyanid oder mit n-ButyPithium und Kohlensäure in der oben erwähnten Weise in eine Säure der Formel (I) überführt und gowünschtenfalls eine Verbindung der Formel (I), bei der Ri eine OCHs-Gruppe bedeutet durch Ether-Spaltung in eine Verbindung umwandelt, bei der R1 Hycjroxyl bedeuteteine Nitroverbindung der Formel:€00H
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853530718 DE3530718A1 (de) | 1985-08-28 | 1985-08-28 | Methylendioxyphenanthren- und -stilbenderivate, verfahren zur herstellung derselben und arzneimittel, die diese enthalten |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD266800A5 true DD266800A5 (de) | 1989-04-12 |
Family
ID=6279566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD86293892A DD266800A5 (de) | 1985-08-28 | 1986-08-27 | Verfahren zur herstellung von methylendioxyphenanthren- und stilbenderivaten |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4835178A (de) |
| JP (1) | JPS62167776A (de) |
| KR (1) | KR880000179B1 (de) |
| AR (1) | AR242568A1 (de) |
| AT (1) | AT398568B (de) |
| BE (1) | BE905340A (de) |
| CH (1) | CH673457A5 (de) |
| DD (1) | DD266800A5 (de) |
| DE (1) | DE3530718A1 (de) |
| DK (1) | DK168705B1 (de) |
| ES (1) | ES2001893A6 (de) |
| FI (1) | FI92396C (de) |
| FR (1) | FR2586681B1 (de) |
| GB (1) | GB2179347B (de) |
| HU (3) | HU202104B (de) |
| IE (1) | IE59239B1 (de) |
| IT (1) | IT1197467B (de) |
| LU (1) | LU86556A1 (de) |
| MX (2) | MX172917B (de) |
| NL (1) | NL8602127A (de) |
| NO (1) | NO863434L (de) |
| PL (2) | PL154026B1 (de) |
| PT (1) | PT83258B (de) |
| SE (1) | SE465153B (de) |
| SU (1) | SU1731053A3 (de) |
| YU (2) | YU44061B (de) |
| ZA (1) | ZA866487B (de) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2038573T1 (es) * | 1989-12-15 | 1993-08-01 | Pharma Mar, S.A. | Nuevos compuestos del tipo diterpeno. |
| DK0498095T3 (da) * | 1991-02-05 | 1995-06-19 | Merrell Dow Pharma | Sulfoniske stilbenderivater til behandling af virussygdomme |
| AU663925B2 (en) * | 1992-02-20 | 1995-10-26 | Aventisub Ii Inc. | Sulfonic acid derivatives in the treatment of viral diseases |
| US5334615A (en) * | 1992-12-17 | 1994-08-02 | Walles Wilhelm E | Oil with bactericidal and virucidal properties |
| US5739166A (en) * | 1994-11-29 | 1998-04-14 | G.D. Searle & Co. | Substituted terphenyl compounds for the treatment of inflammation |
| CN112778264B (zh) * | 2021-01-21 | 2023-09-15 | 江西农业大学 | 马兜铃次酸衍生物及其在制备抗炎药物中的应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4122092A (en) * | 1977-08-25 | 1978-10-24 | University Of Rochester | Total synthesis of (±)-picropodophyllone and (±)-4'-demethylpicropodophyllone |
| JPS57106677A (en) * | 1980-12-22 | 1982-07-02 | Kureha Chem Ind Co Ltd | N-(3,4-methylenedioxybenzylidene) aminomethylcyclohexane-carboxylic acid, and salt of said carboxylic acid |
-
1985
- 1985-08-28 DE DE19853530718 patent/DE3530718A1/de active Granted
-
1986
- 1986-08-08 AT AT0215186A patent/AT398568B/de not_active IP Right Cessation
- 1986-08-12 GB GB8619644A patent/GB2179347B/en not_active Expired
- 1986-08-13 FI FI863282A patent/FI92396C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-08-20 LU LU86556A patent/LU86556A1/de unknown
- 1986-08-20 AR AR86304988A patent/AR242568A1/es active
- 1986-08-21 NL NL8602127A patent/NL8602127A/nl not_active Application Discontinuation
- 1986-08-22 YU YU1475/86A patent/YU44061B/xx unknown
- 1986-08-25 CH CH3406/86A patent/CH673457A5/de not_active IP Right Cessation
- 1986-08-26 IT IT8621526A patent/IT1197467B/it active
- 1986-08-26 MX MX003550A patent/MX172917B/es unknown
- 1986-08-26 SE SE8603589A patent/SE465153B/sv not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 SU SU864028078A patent/SU1731053A3/ru active
- 1986-08-27 ZA ZA866487A patent/ZA866487B/xx unknown
- 1986-08-27 IE IE228886A patent/IE59239B1/en not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 ES ES8601409A patent/ES2001893A6/es not_active Expired
- 1986-08-27 HU HU895304A patent/HU202104B/hu not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 PL PL1986268178A patent/PL154026B1/pl unknown
- 1986-08-27 HU HU895304A patent/HU895304D0/hu not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 BE BE0/217092A patent/BE905340A/fr not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 HU HU863711A patent/HU199446B/hu not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 PT PT83258A patent/PT83258B/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 DK DK407586A patent/DK168705B1/da not_active IP Right Cessation
- 1986-08-27 FR FR868612129A patent/FR2586681B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1986-08-27 PL PL1986261196A patent/PL148757B1/pl unknown
- 1986-08-27 NO NO863434A patent/NO863434L/no unknown
- 1986-08-27 DD DD86293892A patent/DD266800A5/de not_active IP Right Cessation
- 1986-08-28 KR KR1019860007146A patent/KR880000179B1/ko not_active Expired
- 1986-08-28 JP JP61200261A patent/JPS62167776A/ja active Granted
-
1987
- 1987-06-19 YU YU1149/87A patent/YU43998B/xx unknown
-
1988
- 1988-03-22 US US07/171,695 patent/US4835178A/en not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-12-27 US US07/457,353 patent/US5024743A/en not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-01-27 MX MX9300436A patent/MX9300436A/es unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3901527A1 (de) | Alkylierte polyethyleniminderivate, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung als arzneimittel sowie pharmazeutische praeparate | |
| LU83945A1 (de) | Ammoniumsalz einer substituierten carbonsaeure,verfahren zu seiner herstellung,seine verwendung und pharmazeutische praeparate | |
| DE2212660A1 (de) | Binaphthylphosphorsaeuren und deren Verwendung als Trennmittel zur Trennung von Isomeren | |
| DD267490A5 (de) | Verfahren zur herstellung von wasserfreiem, kristallinem natriumsalz von 5-chlor-3-(2-thenoyl)-2-odindol-1-carboxamid | |
| EP0472501A2 (de) | Codeinsalz einer substituierten Carbonsäure, Verfahren zu seiner Herstellung, seine Verwendung und pharmazeutische Präparate | |
| DE2643936A1 (de) | Arzneimittel mit erythropoietischer wirksamkeit | |
| DD266800A5 (de) | Verfahren zur herstellung von methylendioxyphenanthren- und stilbenderivaten | |
| DE2449205C2 (de) | Substituierte Furylverbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel | |
| EP0004522B1 (de) | Neue dilignolähnliche Verbindungen, dilignolähnliche Verbindungen zur Verwendung bei der Behandlung von Lebererkrankungen sowie diese enthaltende pharmazeutische Präparate | |
| WO1982002889A1 (en) | Ammonium salts of a substituted carbonic acid,preparation method thereof,utilization and medicinal preparations containing them | |
| DE3623193A1 (de) | Neue verbindungen, diese enthaltende arzneimittel und verfahren zu deren herstellung | |
| DE3121175A1 (de) | Erythro-1,2,3-triphenyl-1-pentanon-derivate sowie verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als arzneimittel | |
| DE2259151A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines antibiotikum-derivates | |
| DE2351292C3 (de) | 2,10-Dichlor-6-äthoxycarbonyl-12-methyl-12H-dibenzo[d,g][1,3]dioxocin und Verfahren zu dessen Herstellung sowie diese Verbindung enthaltende Arzneimittel | |
| DE1493618A1 (de) | Cumarinderivate und ein Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| DE3231103A1 (de) | Salz einer pyrimidincarbonsaeureverbindung und verfahren zu seiner herstellung | |
| DE69612626T2 (de) | Hydrat-kristall und verfahren zu seiner herstellung | |
| DE3415666A1 (de) | Neue acylaminophenolderivate | |
| DE1620489A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von 7-Chlor-4[4-(2-hydroxyaethylamino)-1-methylbutylamino]-chinolin | |
| DD210042A5 (de) | Verfahren zur herstellung von (plus + minus)-zyanidan-3-ol-abkoemmlingen | |
| DE2235400C3 (de) | ^Chlor-S-sulfamoyl-anthranilsäuren, deren Salze, Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel | |
| DE2238260C3 (de) | Phosphorsäuremonoester von 5-(2-Dimethylaminoäthoxy)-carvacrol, Verfahren zu seiner Herstellung und diesen enthaltende Arzneimittel | |
| DE3611097A1 (de) | Neues, in 11-stellung substituiertes 5,11-dihydro-6h-pyrido(2,3-b)(1,4)benzodiazepin-6-on, verfahren zu seiner herstellung und diese verbindung enthaltende arzneimittel | |
| DE2114893A1 (de) | Neue basisch substituierte Thiolcarbamidsäure-alkylester und Verfahren zu deren Herstellung | |
| DE2403055A1 (de) | Pharmazeutisch verwendbare mischungen oder salze auf der grundlage von basischen chinolin-verbindungen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ENJ | Ceased due to non-payment of renewal fee |