DE3123295C2

DE3123295C2 -

Info

Publication number: DE3123295C2
Application number: DE3123295A
Authority: DE
Inventors: Albert Sjoerdsma; Peter P. Cincinnati Ohio Us Mccann
Original assignee: Merrell Dow Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Aventis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1980-06-16
Filing date: 1981-06-12
Publication date: 1990-07-12
Also published as: DE3123295A1; AT377180B; IT1171380B; SE8103678L; ATA266581A; AU544990B2; ZA813953B; CH651206A5; IL63087A; SE460517B; JPH0432052B2; JPS5731613A; CA1174603A; FR2484255A1; AU7165481A; GB2078735B; IE811308L; DE3153623C2; IT8148684A0; NL194153B

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung gewisser α-substituierter Aminosäuren oder α-substituierter Amine zur Bekämpfung von Protozoen-Infektionen bei Tieren.

Polyamine sind in vieler Beziehung in Zusammenhang gebracht worden mit der Zellteilung. Man vermutet, daß die Beeinträchtigung der Biosynthese von Polyaminen durch Enzyminhibitoren eine Verringerung der Zellproliferation in Säugetieren verursacht. Obgleich die physiologische Rolle von Polyaminen noch nicht genau beschrieben worden ist, besteht Anlaß, anzunehmen, daß sie an Zellteilung und Wachstum beteiligt sind (vgl. H. G. Williams-Ashman et al., The Italien J. Biochem., 25, 5-32 [1976], A. Raina und J. Janne, Med. Biol., 53, 121-147 [1975], und D. H. Russell, Life Sciences, 13, 1635-1647 [1973]).

Polyamine sind außerdem dafür bekannt, daß sie wesentliche Wachstumsfaktoren für gewisse Mikroorganismen sind, wie beispielsweise für E. Coli, Enterobacter, Klebsielle, Staphylococcus aureus, C. cadaveris, Salmonella typhosa und Haemophilus parainfluenza. Es besteht Anlaß, anzunehmen, daß Polyamine im Zusammenhang stehen mit normalem und neoplastischem Säugetier-Zellwachstum, wobei eine Steigerung der Synthese und der Akkumulation von Polyaminen vorliegt, mit einem anschließenden Stimulus der Proliferation. Es ist außerdem bekannt, daß ein Zusammenhang zwischen Polyaminbildung und der Wirksamkeit der Decarboxylaseenzyme von Ornithin, S-Adenosylmethionen, Arginin und Lysin besteht. Der Ausdruck Polyamine umfaßt die Diamine Putrescin und die Polyamine Spermidin und Spermin. Putrescin ist das durch Ornithin-decarboxylase katalysierte Decarboxylierungsprodukt von Ornithin. Putrescinbildung kann außerdem durch Decarboxylierung von Arginin unter Bildung von Agmatin erfolgen, das unter Bildung von Putrescin und Harnstoff hydrolysiert wird. Arginin ist ebenfalls an der Ornithinbildung durch die Wirkung des Enzyms Arginase beteiligt. Bei der Aktivierung von Methionin durch das Enzym S-Adenosylmethioninsynthetase bildet sich S-Adenosylmethionin, das decarboxyliert wird. Der Propylaminanteil des aktivierten Methionins kann dann in Putrescin umgewandelt werden, um Spermidin zu bilden. Außerdem kann der Propylaminanteil in Spermidin unter Bildung von Spermin umgewandelt werden. Somit dient Putrescin als Vorstufe zu Spermidin und Spermin. Außerdem erwies sich Putrescin als Mittel mit einem ausgeprägten regulatorischen Effekt auf den biosynthetischen Weg von Polyamin. Außerdem erwies sich eine erhöhte Synthese von Putrescin als ein frühes Zeichen, daß ein Gewebe erneuten Wachstumprozessen unterliegt. Cadaverin, das ein Decarboxylierungsprodukt von Lysin ist, erwies sich als ein Mittel, das die Aktivität von S-Adenosylmethionindecarboxylase stimuliert und spielt außerdem eine wesentliche Rolle bei den Wachstumsprozessen vieler Mikroorganismen, beispielsweise H. parainfluenza.

Das Grundprinzip des Polyaminmetabolismus ist von Cohen, Science, 205, 964 (1979), beschrieben worden. Die offensichtlich einzigartige Rolle des Polyaminmetabolismus bei Trysanosomen und der Abhängigkeit von Trysanosomen von der Ornithindecarboxylase als eine Quelle von Putrescin stützt weiterhin die Beobachtungen, daß gewisse spezifische Ornithindecarboxylaseinhibitoren der Polyaminsynthese höchst wirksam bei der Inhibierung des Wachstums von Protozoen sind.

Es wurde gefunden, daß gewisse Verbindungen, die zur Klasse der ireversiblen Inhibitoren von Ornithindecarboxylase gehören, sich zur Inhibierung des Wachstums von Protozoen eignen. Außerdem erfolgt diese Inhibierung über ein weites Spektrum von Protozoen wie Glieder der Subphyla Sarcomastigophora und Sporozoa. Die nachstehend beschriebenen Verbindungen eignen sich besonders zur Inhibierung des Wachstums von Gliedern der Überklasse Mastigophora, insbesondere Trypanosoma brucei brucei und Glieder der Klasse Telosporea, insbesondere Eimeria tenella, Organismen, die Coccidiose in Geflügel verursachen.

Die erfindungsgemäß verwendbaren Verbindungen sind α- substituierte Amine oder α-substituierte α-Aminosäuren der allgemeinen Formel

worin R₁ Wasserstoff oder Carboxy, Y CH₂F, CHF₂, CF₃ oder C≡CH und Z H₂N-(CH₂)₃,

oder H₂N-CH₂CH=CH bedeuten sowie deren Salze und einzelne optische Isomeren, mit Ausnahme von Verbindungen, worin R₁ Wasserstoff und Z H₂N-(CH₂)₃ bedeuten sowie der Verbindungen, worin R₁ Wasserstoff und Z H₂N-CH₂-CH=CH bedeuten und der Verbindung, worin R₁ Wasserstoff, Z H₂N-CH(CH₃)-CH₂-CH₂ und Y CF₃ bedeuten.

Bei der in vivo-Verabreichung an Tiere, die aktive Protozoen-Infektionen aufweisen, können die Verbindungen der Formel (I) zur Behandlung solcher Tiere durch Inhibierung des weiteren Wachstums von Protozoen-Infektionen verwendet werden. Außerdem können die vorstehend beschriebenen Verbindungen prophylaktisch verabreicht werden, um das Auftreten solcher Protozoen-Infektionen zu verhindern.

In der allgemeinen Formel (I) bedeutet R₁ entweder Wasserstoff oder eine Carboxylgruppe. Wo das Symbol R₁ Wasserstoff ist, wird eine Klasse von α-substituierten Aminen beschrieben. Wo das Symbol R₁ die Carboxylgruppe ist, wird eine Klasse von α-substituierten α-Aminosäuren beschrieben.

Das Symbol Y stellt entweder eine acetylenische Gruppe oder eine fluorsubstituierte Methylgruppe dar. Die fluorsubstituierten Methylgruppen werden durch Monofluormethyl-, Difluormethyl- oder Trifluormethylreste dargestellt.

Das Symbol Z stellt entweder die 3-Aminopropylgruppe, die 3-Amino-3-methylpropylgruppe oder die 3-Amino-1-propylengruppe dar. Die gesättigten Gruppen, d. h. die 3-Aminopropylgruppe und die 3-Amino-3-methylpropylgruppe stellen die bevorzugten Seitenketten dar.

Gewisse Klassen von Diaminen sind von den erfindungsgemäß umfaßten Verbindungen ausgeschlossen:
Hierzu gehören α-substituierte Diamine, worin das Symbol Z die 3-Aminopropylgruppe oder die 3-Amino-1-propylengruppe ist und Y wie angegeben ist, d. h. diejenigen Verbindungen, die die allgemeinen Formeln

aufweisen, in denen Y die vorstehend genannte Bedeutung hat.

Insbesondere ausgeschlossen von den verbleibenden α-substituierten Diaminen sind die Species, worin Y die Trifluormethylgruppe darstellt. Somit ist Verbindung IV, 4-Methyl- 1-trifluormethyl-1,4-butandiamin besonders von den erfindungsgemäß verwendbaren Verbindungen ausgeschlossen

Eingeschlossen in die erfindungsgemäß verwendbaren Verbindungen sind α-substituierte Aminosäuren der Formeln

In Formeln (V), (VI) und (VII) besitzt Y die vorstehende Bedeutung.

Die erfindungsgemäß verwendbaren α-substituierten Amine lassen sich durch folgende allgemeine Formel darstellen

worin Y CH₂F, CHF₂ oder C≡CH bedeutet, jedoch im Falle der Diamine die CF₃-Gruppe ausschließt.

Beispiele für Salze der erfindungsgemäß verwendbaren Verbindungen sind nicht-toxische Säureadditionssalze mit anorganischen Säuren wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure und Phosphorsäure sowie organische Säuren, wie Methansulfonsäure, Salicylsäure, Maleinsäure, Malonsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Cyclaminsäure (cyclamic acid) und Ascorbinsäure. Eine bevorzugte Klasse von erfindungsgemäß verwendbaren Verbindungen sind diejenigen, in denen Y die Difluormethylgruppe bedeutet. Eine andere bevorzugte Klasse von Verbindungen ist diejenige, worin Z den 3-Aminopropyl- oder den 3-Amino-3-methylpropylrest bedeutet.

Außer den vorstehend genannten Salzen schließt der Ausdruck Salze diejenigen inneren Salze oder Zwitterionen der Verbindungen der Formel (I) ein, die amphoterer Natur sind. Außerdem, während die optische Konfiguration der hierin beschriebenen Verbindungen nicht besonders bezeichnet ist, soll darauf hingewiesen werden, daß das a-Kohlenstoffatom ein asymmetrisches Zentrum besitzt und daß einzelne optische Isomeren dieser Verbindungen existieren. Somit sind sowohl die d- und l-optischen Isomeren sowie die racemischen Gemische erfindungsgemäß mit eingeschlossen.

Lactambildung kann erfolgen, wenn R₁ die Carboxylgruppe und Z den 3-Aminopropylrest oder den 3-Amino-3-methylpropylrest bedeutet, wie durch nachstehende allgemeine Formel dargestellt wird.

In der obigen allgemeinen Formel hat Y vorstehende Bedeutung. Wo Z die 3-Amino-3-methylpropylgruppe bedeutet, kann die (CH₂)₃-Gruppe in Formel (IX) außerdem mit einer 3-Methylgruppe substituiert sein.

Beispiele für erfindungsgemäß verwendbare Verbindungen sind folgende:

2,5-Diamino-2-(fluormethyl)pentansäure,
2,5-Diamino-2-(difluormethyl)pentansäure,
2,5-Diamino-2-(trifluormethyl)pentansäure,
2,5-Diamino-2-(ethynyl)-pentansäure,
2,5-Diamino-2-fluormethyl-5-methylpentansäure,
2,5-Diamino-2-difluormethyl-5-methylpentansäure,
2,5-Diamino-2-trifluormethyl-5-methylpentansäure,
2,5-Diamino-2-ethynyl-5-methylpentansäure,
2,5-Diamino-2-fluormethyl-3-pentansäure,
2,5-Diamino-2-difluormethyl-3-pentansäure,
2,5-Diamino-2-trifluormethyl-3-pentansäure,
2,5-Diamino-2-ethynyl-3-pentansäure,
1-Fluormethyl-4-methyl-1,4-butandiamin und
1-Ethynyl-4-methyl-1,4-butandiamin.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel I, worin Z H₂N- (CH₂)₃, Y CH₂F, CHF₂ oder CF₃ und R₁ Carboxy ist, werden durch jeweilige Behandlung eines Esterderivats von Ornithin hergestellt, worin die Aminogruppen zweckmäßigerweise mit einer starken Base geschützt sind. Dieses wird mit einem geeigneten Halogenmethyl-halogenalkylierungsmittel in einem aprotischen Lösungsmittel umgesetzt und anschließend einer Säure- oder Basenhydrolyse unterworfen. Dies kann durch folgendes Reaktionsschema dargestellt werden.

In vorstehendem Reaktionsschema bedeutet Y FCH₂, F₂CH- oder F₃C-; R₂ ist ein niederer Alkylrest, R₃ ist Wasserstoff, Phenyl, eine gerade oder verzweigte Alkylgruppe; R₄ ist Phenyl oder eine gerade oder verzweigte Alkylgruppe; oder R₃ und R₄ können zusammen eine Alkylengruppe mit 5 bis 7 C-Atomen bilden. Z₁ bedeutet

R₅ und R₆ sind jeweils Phenyl, Benzyl oder eine Niederalkylgruppe; Z₂ ist H₂N(CH₂)₃-

Die Entfernung der Schutzgruppen des Amins und der Carbonsäurefunktion können in einer Stufe nach bekannten Methoden entfernt werden.

Die amingeschützten Esterderivate, d. h. Verbindung 1, werden auf allgemein bekannte Weise hergestellt.

Die Lactame der Verbindungen der allgemeinen Formel I, worin R₁ Carboxy ist, werden aus den entsprechenden Aminosäureestern der Formel

hergestellt, worin Y die in Formel I angegebene Bedeutung besitzt und R₇ eine gerade oder verzweigte Alkoxygruppe mit 1 bis 8 C-Atomen bedeutet. Die Lactame werden hergestellt durch Behandlung der Aminosäureester mit einer entsprechenden Base in einem geeigneten Lösungsmittel.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel I, worin Z

Y CH₂F, CHF₂ oder CF₃ und R₁ Carboxy bedeuten, werden nach Verfahren hergestellt, die den vorstehend beschriebenen Verfahren analog sind.

Verbindungen der allgemeinen Formel I, worin Z

oder H₂N-(CH₂)₃, Y C≡CH und R₁ Carboxy bedeuten, werden hergestellt durch Behandlung eines geeigneterweise geschützten Propargylaminderivats wie ein Silylderivat mit einer starken Base unter Bildung eines geschützten Propargylamincarbanion-Zwischenprodukts. Diese Carbanionzwischenprodukt wird mit einem Alkylierungsmittel der Formel R₈X umgesetzt, worin X ein Halogen wie Chlor oder Brom bedeutet und R₈ PhHC=N(CH₂)_n-, worin n die ganze Zahl 3 bedeutet, darstellt.

Das sich dabei bildende alkylierte geschützte Propargylaminderivat wird dann mit einer starken Base unter Bildung eines alkylierten geschützten Propargylamincarbanions behandelt. Das zweite Carbanion wird mit einem Acylierungsmittel umgesetzt, und die Schutzgruppen werden anschließend durch Säure- und Basenhydrolyse entfernt.

Geeignete Alkylierungsmittel, die sich in vorstehender Reaktion verwenden lassen, sind Halogenformiate wie Chlormethylformiat, Cyanogenbromid, Kohlendioxid, Phenylisocyanat und ähnlich bekannte Verbindungen.

Die Entfernung der Schutzgruppen erfolgt durch Behandlung mit einer wäßrigen Säure oder einer wäßrigen Base.

Die Ausgangsmaterialien für diese Verbindungen werden hergestellt durch Zugabe von Schutzgruppen an der Acetylenfunktion und der Stickstoff-Funktion von Propargylamin.

Verbindungen der Formel I, worin Z

Y CH₂F oder CHF₂ und R₁ Wasserstoff bedeuten, werden hergestellt durch Reduktion eines Ketons der Formel

zu den entsprechenden Alkoholen; in obiger Formel bedeuten

worin der Alkanoylrest 2 bis 5 C-Atome aufweist und gerade oder verzweigt ist, der Alkoxyrest 1 bis 4 C-Atome aufweist und gerade oder verzweigt ist, Y CH₂F oder CHF₂ und R₁₃ Methyl bedeuten.

Die für diese Synthese geeigneten Ausgangsmaterialien der allgemeinen Formel (VI) werden nach bekannten Methoden hergestellt.

Die Hydrolyse zum Amin und die Entfernung jeglicher distaler Aminschutzgruppen erfolgt unter Verwendung einer starken Mineralsäure.

Die einzelnen optischen Isomeren der Verbindungen der Formel I, worin R₁ Carboxy oder Wasserstoff bedeutet, werden aufgespalten unter Verwendung von a (+)- oder (-)-Binaphthylphosphorsäuresalz nach dem Verfahren von R. Viterbo et al., Tetrahedron Letters, 48, 4617 (1971). Andere Spaltmittel wie (+)-Kampfer-10-sulfonsäure können ebenfalls verwendet werden. Wahlweise kann die Aufspaltung, wenn Z

oder H₂N(CH₂)_n bedeutet, über das Lactam dieser Verbindungen erfolgen. Die so aufgespaltenen Säuren und Amine lassen sich auf die gleiche Weise wie vorstehend für die racemischen Gemische beschrieben verwenden.

Die hier beschriebenen Verbindungen eignen sich zum Inhibieren des Wachstums von Protozoen in Tieren. Der Ausdruck "Tiere" umfaßt u. a. Säuger wie Mäuse, Ratten, Meerschweinchen, Kaninchen, Frettchen, Hunde, Katzen, Kühe, Pferde und Primaten einschließlich Menschen. Ebenfalls durch den Ausdruck Tiere umfaßt sind Fische und Geflügel. Der Ausdruck "Geflügel" umfaßt männliche und weibliche Vögel jeglicher Art, einschließlich Papageien und Kanarienvögel, umfaßt jedoch in der Hauptsache Geflügel, das kommerziell für Eier oder Fleisch gezüchtet wird. So soll der Ausdruck "Geflügel" insbesondere Hennen, Hähne, Hähnchen, Truthähne und Enten umfassen.

Der Ausdruck "Protozoen" umfaßt die Glieder der Subphyla Sarcomastigophora und Sporozoa des Phylums Protozoen. Insbesondere umfaßt der Ausdruck "Protozoen", wie er im vorstehenden verwendet wird, diejenige Gattung von Parasitenprotozoen, die für Menschen wichtig sind, weil sie entweder Krankheit in Menschen oder ihren Haustieren verursachen. Diese Gattungen finden sich zum größten Teil klassifiziert in der Oberklasse Mastigophora des Subphylums Sarcomastigophora und der Klasse Telesporea des Subphylums Sporozoa gemäß der Klassifizierung von Baker (1969). Zu den Beispielen von Gattungen dieser parasitischen Protozoen gehören Histomonas, Trypanosoma, Giardia, Trichomonas, Eimeria, Isopora, Toxoplasma und Plasmodium.

Ausgeschlossen von der Überklasse der Mastigophora ist der Genus Leishmania, von dem gewisse Species die Tropenkrankheit Leishmaniasis bei Menschen verursachen. Außerdem sind insbesondere von der Gattung Trypanosoma gemäß der Erfindung die Species Trypanosoma cruzi ausgeschlossen, die die Chargas-Krankheit im Menschen verursachen und die Species Trypanosoma lewisi. Die hier beschriebenen Verbindungen erwiesen sich als nicht besonders wirksam gegen diese Species.

Andererseits sind die Verbindungen der Formel I besonders geeignet zur Inhibierung des Wachstums von Trypanosoma brucei, der Erreger von Nagana, oder der Tsetse-Fliegen- Krankheit von Pferden und Rindvieh in Zentral-Afrika. Die hier beschriebenen Verbindungen sind außerdem beachtlich wirksam zur Inhibierung des Wachstums von Eimeria tenella, eine Species von Protozoen, die Coccidiose in Geflügel verursachen.

Eine bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist somit die Verwendung dieser Verbindungen zur Inhibierung des Wachstums von Darmcoccidiose bei kommerziellem Geflügel. Die wirtschaftliche Bedeutung von Darmcoccidiose ist hochsignifikant. So betrug 1972 der geschätzte Verlust für die Geflügelindustrie in den USA aufgrund von Coccidiose- Infektionen etwa 47 Millionen Dollar. Aufgrund der rapiden Entwicklung von Arzneimittelresistenz der Coccidien und aufgrund der relativ hohen Toxizität einiger Arzneimittel, die zur Behandlung von Coccidiose verwendet werden, besteht ein Bedarf an wirksamen coccidiostatischen Mitteln, die nicht toxisch sind und gegenüber denen die Darmcoccidiose keine rapide Arzneimittelresistenz entwickelt.

Unter anderem sind die hier beschriebenen Verbindungen irreversible Inhibitoren von Ornithindecarboxylase und S-Adenoxylmethionindecarboxylase. Als irreversible Inhibitoren dieser Enzyme inhibieren diese Verbindungen die Polyaminbildung, die für die Protozoen-Zellteilung erforderlich sein kann. In jedem Falle ist die Praxis der vorliegenden Erfindung nicht an irgendeine bestimmte Art oder Theorie der Wirkung gebunden, wodurch die erfindungsgemäß verwendeten Verbindungen in der Lage sind, das Wachstum von Protozoen wirkungsvoll zu inhibieren.

Die Wirkung der Verbindungen der allgemeinen Formel I auf das Wachstum von Protozoen und insbesondere auf das Wachstum von Coccidien läßt sich unter Verwendung von Eimeria tenella und zwei Wochen alten männlichen weißen Leghorn- Hähnchen als Testtiere demonstrieren. Die Tiere wurden in Batterien gehalten, und die infizierten und nicht infizierten Tiere wurden in getrennten Räumen untergebracht, um die Aufrechterhaltung von coccidienfreien Tieren sicherzustellen. Jedes experimentell infizierte Tier erhielt 100 000 sporylierte Oocysten über die Magensonde. Die Testverbindung wurde in der entsprechenden gewünschten Dosis durch das Trinkwasser verabreicht, und arzneimittelfreie Maische wurde ad libitum zugesetzt. Um die Wirkung des Wirkstoffs auf E.-tenella-Infektionen zu beurteilen, wurden die Hähnchen mit Kohlendioxid getötet, obduziert, im allgemeinen am 5. Tag der Studie, und die Zökumschädigungen beurteilt.

Die Inhibierung von Protozoen-Wachstum kann außerdem unter Verwendung von Trypanosoma brucei brucei bestimmt werden, der der Erreger von Schweine-Trypanosomiasis (Nagana) in Afrika ist. Die verwandten Species Trypanosoma brucei rhodesiense und Trypanosoma brucei gambiense sind die Erreger für die afrikanische Schlafkrankheit bei Menschen.

Im allgemeinen wird die Arzneimittelwirksamkeit gegen bestehende Infektionen eines pleamorphen EATRO 110-Isolats von T. b. brucei bei Mäusen getestet. Die Testtiere werden 24 Stunden vor dem Testen mit 5×10⁵ Parasiten infiziert. Die so infizierten Kontrolltiere sterben im allgemeinen 5 Tage nach der Inokulierung. Die zu testenden Verbindungen werden über das Trinkwasser in unterschiedlichen Mengen an die Testtiere verabreicht. Tiere, die von der Infektion geheilt wurden, bleiben über 30 Tage nach dem Tod der Kontrolltiere parasitenfrei, wie durch eine Untersuchung von Blutabstrichen festgestellt wurde.

Die hier beschriebenen Verbindungen werden in Mengen verwendet, die zur Inhibierung des Protozoenwachstums wirksam sind. Diese Mengen hängen natürlich von verschiedenen Faktoren ab, wie dem Typ und der Art der Protozoen-Infektion, der Wirksamkeit der spezifischen Verbindung, dem Alter, dem Geschlecht und der Species des zu behandelnden Tieres und davon, ob die Behandlung prophylaktisch oder therapeutisch erfolgen soll. Im allgemeinen lassen sich die hier beschriebenen Verbindungen oral oder parenteral in einer täglichen Dosis von 5 mg/kg bis 7 g/kg verabreichen. Vorzugsweise betragen die Dosen im Fall von Trypanosoma-Infektionen etwa 600 mg/kg bis 2 g/kg. Im Fall von Eimeria-Infektionen können die Dosen herabgesetzt werden und betragen von etwa 15 mg/kg bis etwa 1 g/kg.

Aufgrund der geringen Toxizität der hier beschriebenen Verbindungen lassen sich die Verbindungen ad libitum über das Trinkwasser des Testtiers bei der Behandlung von Coccidiose bei Geflügel sicher verabreichen. Im allgemeinen kann man sagen, daß sich Konzentrationen an Wirkstoff von etwa 0,01 bis etwa 2% eignen, in erster Linie in Abhängigkeit von der Art der zu behandelnden Protozoen-Infektion, ob prophylaktisch oder therapeutisch, der Schwere der Infektion und der Zeitspanne der Behandlung.

So kann beispielsweise die Verbindung 2-Difluormethyl- 2,5-diaminopentansäure wirksam an Hähnchen zur Behandlung von Coccidiose 1 Tag vor der Infektion als 2%ige Lösung verabreicht werden. Wahlweise kann eine prophylaktische Behandlung 8 Tage vor der Infektion angewandt werden unter Verwendung von Konzentrationen von nur 0,015% 2-Difluormethyl-2,5-diaminopentansäure im Trinkwasser von Hühnern. Vorzugsweise beträgt eine prophylaktische Konzentration von 0,06 bis 1,0%.

Diese prophylaktische Behandlung zur Inhibierung des Protozoen- Wachstums stellt einen der hauptsächlichsten Vorteile der Verwendung der hier beschriebenen Decarboxylaseinhibitoren dar. So wächst im Fall von Coccidien-Infektionen bei Hühnern beispielsweise Eimeria tenella intrazellular in den Epithel-Zellen des Zökums als ein trophozoites Stadium. Anschließend unterliegen diese Zellen einer Form von Mehrfach-Mitosis unter Bildung einer großen Anzahl von Merozoiten. Diese Merozoiten werden freigesetzt, wenn die Wirtszelle lysiert und dienen der extensiven Infektion von frischen Zellen. Das Ergebnis ist, daß die Wand des Zökums schwer beschädigt wird, was zu ernstem Blut- und Flüssigkeitsverlust und schließlich zum Tod führt. Außerdem werden während des Lebenszyklus von E. tenella resistente Oocysten produziert, die sich in den Darm der Hühner entleeren. Da Hühner kotfressend sind, breitet sich die Krankheit rapide durch Verunreinigung ihrer Nahrungsmittelzufuhr aus. Dementsprechend werden Coccidien- Infektionen, wenn sie auftreten, epidemisch behandelt mit massiven Dosen von gegenwärtig verfügbaren chemotherapeutischen Mitteln, die vornehmlich abtötende Mittel sind. Folglich werden heutzutage bei auftretenden Epidemien mit Medikamenten versetzte Nahrungsmittel routinemäßig verwendet, so daß alles kommerzielle Geflügel heutzutage fast konstant Medikamente enthält, um das Ausbrechen von Coccidiose zu verhindern.

Die Tatsache, daß die hier beschriebenen Decarboxylaseinhibitoren prophylaktisch verabreicht werden können, befähigt den Wirt, eine anschließende natürlich oder künstlich induzierte Infektion enzymatisch zu überstehen mit Hilfe eines inhibierenden Mechanismus und nicht mit Hilfe einer abtötenden Wirkung. Somit ist im Falle einer E.-tenella- Infektion die Infektion auf eine Weise beschränkt, die den Wirt befähigt, sich seinen eigenen Abwehrmechanismus zunutze zu machen. Die dabei entstehenden Antikörper, die mit Hilfe einer solchen gesteuerten Infektion produziert werden, dienen der weiteren permanenten Immunisierung des Wirtes gegenüber zukünftigen E.-tenella-Infektionen.

Die Arzneimittel, die sich besonders zur Prophylaxe oder Behandlung von Protozoen-Infektionen in Geflügel eignen, enthalten die vorstehend beschriebenen α-substituierten Amine oder die α-substituierten α-Aminosäuren in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger. Vorzugsweise werden die Antiprotozoen-Mittel hergestellt durch Vermischen des Wirkstoffes mit einem inerten Trägermaterial. Zu den typischen Trägern gehören Talk, Ton, Bimsstein, Kieselerde, Kreide, Diatomeenerde, Walnußschalenmehl und deren Äquivalente. Wahlweise können die Wirkstoffe mit einem kommerziellen Futter oder Vitamin- und Mineralvorgemisch, die speziell für Geflügel abgestellt sind, vermischt werden.

In den meisten Fällen wird eine konzentrierte wäßrige Lösung des Wirkstoffs bei der Behandlung von Coccidiose bei Geflügel verwendet. Die beschriebenen Verbindungen sind in den meisten Fällen stark löslich, insbesondere in Form ihrer Salze. Derartige Lösungen können vorteilhafterweise Konservierungsmittel enthalten, wie Parabene, Benzylalkohol, Phenol oder Thimerosal. Zusätzlich lassen sich isotonische Mittel, Zucker, Stabilisierungs- oder Puffermittel verwenden.

Nachstehende Beispiele erläutern die Herstellung der anmeldungsgemäß verwendbaren Wirkstoffe.

Herstellungsbeispiele Beispiel 1 2-Difluormethyl-2,5-diaminopentansäure

Unter Stickstoff wurde eine Lösung (500 ml) von 2 M Butyllithium in Hexan unter Rühren einer Lösung von 143,1 ml Diisopropylamin in 1,5 l Tetrahydrofuran bei -78°C zugesetzt, wonach 261 g (0,81 Mol) Ornithindibenzaldiminmethylester in 1,5 l Tetrahydrofuran zugesetzt wurden. Nach Beendigung der Zugabe erhöhte man die Reaktionstemperatur auf 40°C und hielt sie 3 Stunden lang zwischen 40 und 50°C und blies während dieser Zeit Chlordifluormethangas unter Rühren durch das Gemisch. Das Reaktionsgemisch wurde dann mit einer gesättigten Natriumchloridlösung behandelt. Das organische Material wurde mit Ether extrahiert und die Etherextrakte mehrere Male mit Natriumchloridlösungen gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt unter Bildung eines viskosen Öles. Das Öl wurde mit 1 N HCl (1,5 l) 3 Stunden lang gerührt, das Gemisch mehrere Male mit Chloroform extrahiert und die wäßrige Lösung zur Trockne eingeengt. Der ölige Rückstand wurde mit 12 N Salzsäure (1,5 l) 16 Stunden unter Rückfluß behandelt, die gekühlte Lösung durch Chloroformextraktion vorm Einengen geklärt, entfärbt (mit Holzkohle) und weiter auf etwa 750 ml eingeengt. Der pH-Wert der Lösung wurde durch Zugabe von Triethylamin auf 3,5 eingestellt, die Lösung nochmals mit Holzkohle vorm Einengen auf etwa 500 ml behandelt und mit 7 bis 8 l Aceton verdünnt. Das ausgefallene Produkt wurde abfiltriert und mit Ethanol gewaschen. Das Rohprodukt wurde durch Lösen in etwa 150 ml heißem Wasser und Behandlung der Lösung mit heißem Ethanol (450 ml) umkristallisiert. Beim Abkühlen schieden sich Kristalle von 2-Difluormethyl-2,5-diaminopentansäurehydrochloridmonohydrat ab, 71 g (37%), Schmelzpunkt 183°C.

Beispiel 2 α-Ethynyl-α,δ-diaminovaleriansäure

11,8 g (0,048 M) N-(3-Trimethylsilylprop-2-ynyl)-benzolcarboximidat in 20 ml Tetrahydrofuran wurde Lithiumdiisopropylamid zugesetzt, das aus 4,9 g (6,78 ml, 0,048 M) Diisopropylamid in 60 ml Tetrahydrofuran und 23,6 ml einer 2,05-M-Lösung n-Butyllithium bei -70°C hergestellt worden war, wonach 9,5 g (0,042 M) N-(3-Brompropyl)-benzylimin zugesetzt wurden und das Gemisch bei -70°C 5½ Stunden gerührt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde mit 23,6 ml einer 2,05 M Lösung von n-Butyllithium und anschließend mit 4,5 g (3,67 ml, 0,048 M) Methyl chlorformiat versetzt. Nach 30 Minuten bei -78°C wurde das Gemisch mit einer Salzlösung behandelt und das Reaktions produkt durch Etherextraktion isoliert. Der Etherextrakt wurde eingedampft, und es wurden 300 ml 3N HCl zu dem dabei entstehenden Rückstand gegeben und das Gemisch 7 Stunden lang unter Rückfluß gehalten. Beim Abkühlen wurde das Gemisch gut mit Methylenchlorid gewaschen, alkalisch gemacht und nochmal gewaschen. Die wäßrige Lösung wurde angesäuert und zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde mit Ethanol trituriert, abfiltriert und das Ethanol abgedampft. Der Rückstand wurde in Wasser gelöst, der pH-Wert auf 6 eingestellt und die Lösung auf eine mit Amberlit 120 H⁺ gefüllte Säule gegeben und mit 1 M NH₄OH eluiert, wobei man nach Umkristallisation aus Ethanol/Wasser α-Ethynyl- α,δ-diaminovaleriansäure erhielt, Schmelzpunkt 168 bis 169°C (Zers.).

In vorstehendem Verfahren wird N-(3-Brompropyl)-benzylimin aus 3-Brompropylamin und Benzaldehyd nach allgemein bekannten Verfahren hergestellt.

Beispiel 3 1-Fluormethyl-1,4-butandiamin-dihydrochlorid

Eine Lösung von 40 mMol Diazomethan in 110 ml Ether, die auf 0°C gekühlt und magnetisch gerührt wurde, wurde unter Stickstoff tropfenweise binnen 1 Stunde mit einer Lösung von 20 ml 4-Phthalimidobutyrylchlorid in 75 ml Ether versetzt. Das Rühren wurde 1 Stunde lang bei 25°C fortgesetzt, wonach das Reaktionsgemisch einer Lösung von 40 ml HF/Pyridin, vorgekühlt auf 0°C, zugesetzt wurde. Das dabei entstehende heterogene Gemisch wurde bei 25°C 1½ Stunden gerührt und dann auf Eiswasser gegossen. Die Etherphase wurde abge trennt, mit einer Bicarbonatlösung und dann mit einer Salz lösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Die Einengung des Lösungsmittels unter vermindertem Druck ergab einen Feststoff, der aus Diethylether/Pentan umkristallisiert wurde und Fluormethyl-3-phthalimidopropylketon war, Schmelzpunkt 92°C.

Eine Lösung von 550 g (2,2 mMol) Fluormethyl-3-phthalimido propylketon in einem Gemisch von 5 ml Tetrahydrofuran und 5 ml Methanol, gekühlt auf -20°C, wurde mit einer Lösung von 0,8 mMol Natriumborhydrid in einem Gemisch aus 5 ml Tetrahydrofuran und 5 ml Methanol, vorgekühlt auf -20°C, versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Minuten lang bei -20°C gerührt und dann mit 2 M HCl auf einen pH-Wert von 1 neutralisiert. Die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck abgedampft und der Rückstand zwischen Wasser und Chloroform geteilt. Die organische Phase wurde mit Salzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt unter Bildung eines Rückstands, der aus Tetrahydrofuran/ Diethylether umkristallisiert wurde und 1-Fluor-5-phthalimido- 2-pentanol ergag, Schmelzpunkt 85°C. Ein Gemisch aus 264 mg (1,05 mMol) 1-Fluor-5-phthalimido-2-pentanol, 170 mg (1,05 mMol) Phthalimid, 302 mg (1,05 mMol) Triphenyl phosphin und 201 mg (1,15 mMol) Diethylazodicarboxylat in 8 ml Tetrahydrofuran wurde unter Stickstoff 2 Stunden lang bei 25°C gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter ver mindertem Druck abgedampft und der Rückstand in Benzol aufgenommen. Das unlösliche Material wurde verworfen und der erhaltene Rückstand nach Einengung des Filtrats wurde das Tetrahydrofuran/Diehtylether umkristallisiert und ergab 1-Fluormethyl-1,4-butandiyl-bis-phthalimid, Schmelzpunkt 112°C. Eine Suspension aus 3,1 g 1-Fluormethyl- 1,4-butandiyl-bis-phthalimid in 140 ml konzentrierter HCl wurde 3 Tage lang auf Rückflußtemperatur erhitzt. Die beim Kühlen auf 4°C ausfallende Phthalsäure wurde abfiltriert. Das Filtrat wurde auf 20 ml eingeengt und auf 4°C gekühlt. Die sich abscheidende noch verbliebene Phthalsäure wurde abfiltriert und das Filrat unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mit 40 ml siedendem Isopropylalkohol 3× behandelt und dann aus absolutem Ethanol umkristallisiert, unter Bildung von 1-Fluormethyl-1,4-butandiamindihydrochlorid, Schmelzpunkt 154°C.

Beispiel 4 1-Fluormethyl-4-methyl-1,4-butandiamin-dihydrochlorid

Eine Lösung von 40 mMol Diazomethan in 110 ml Ether auf 0°C gekühlt und magnetisch gerührt wurde unter Stickstoff tropfenweise binnen 1 Stunde mit einer Lösung von 20 ml 4-Phthalimido-4-methylbutyrylchlorid in 75 ml Ether zersetzt. Das Rühren wurde 1 Stunde lang bei 25°C fortgesetzt, wonach das Reaktionsgemisch einer Lösung von 40 ml HF/Pyridin, vorgekühlt auf 0°C, zugesetzt wurde. Das dabei entstehende heterogene Gemisch wurde bei 25°C 1½ Stunden lang gerührt und dann auf Eiswasser gegossen. Die Etherphase wurde abge trennt, mit einer Bicarbonatlösung und dann mit Salzlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Einengen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck ergab einen Feststoff, der aus Diethylether/Pentan umkristallisiert wurde und Fluormethyl-3-phthalimido-3-methylpropylketon ergab.

Eine Lösung aus 550 mg (2,2 mMol) Fluormethyl-3-phthalimido- 3-methylpropylketon in einem Gemisch aus 5 ml Tetrahydro furan und 5 ml Methanol, gekühlt auf -20°C, wurde mit einer Lösung von 0,8 mMol Natriumborhydrid in einem Gemisch aus 5 ml Tetrahydrofuran und 5 ml Methanol, vorgekühlt auf -20°C, versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 15 Minuten lang bei -20°C gerührt und dann mit 2 M HCl auf einen pH- Wert von 1 neutralisiert. Die Lösungsmittel wurden unter vermindertem Druck abgedampft und der Rückstand zwischen Wasser und Chloroform aufgeteilt. Die organische Phase wurde mit Salzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt unter Bildung eines Rückstands, der aus Tetrahydrofuran/Diethylether umkristallisiert wurde und 1-Fluor-5-phthalimido-5-methyl-2-pentanol ergab. Ein Gemisch aus 264 mg (1,05 mMol) 1-Fluor-5-phthalimido-5-methylpentanol, 170 mg (1,05 mMol) Phthalimid, 302 mg (1,05 mMol) Triphenyl phosphin und 201 mg (1,15 mMol) Diethylazodicarboxylat in 8 ml Tetrahydrofuran wurde unter Stickstoff 2 Stunden lang bei 25°C gerührt, das Lösungsmittel unter vermindertem Druck verdampft und der Rückstand in Benzol aufgenommen. Das unlösliche Material wurde verworfen und der erhaltene Rückstand nach Einengen des Filtrats aus Tetrahydrofuran/Diethyl ether umkristallisiert, wobei man 1-Fluormethyl-4-methyl- 1,4-butandiyl-bis-phthalimid erhielt. Eine Suspension von 3,1 g 1-Fluormethyl-4-methyl-1,4-butandiyl-bis-phthalimid in 140 ml konzentrierter HCl wurde 3 Stunden lang auf Rück flußtemperatur erhitzt. Die beim Kühlen auf 4°C ausfallende Phthalsäure wurde abfiltriert. Das Filtrat wurde auf etwa 20 ml eingeengt und auf 4°C gekühlt. Die sich abscheidende rückständige Phthalsäure wurde abfiltriert und das Filtrat unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mit 40 ml siedendem Isopropylalkohol 3× behandelt und dann aus absolutem Ethanol umkristallisiert, und ergab 1-Fluormethyl-4-methyl-1,4-butandiamin-dihydrochlorid.

Beispiel 5 1-Ethynyl-4-methyl-1,4-butandiamin

10,8 g (0,05 M) 3-Trimethylsilylprop-2-ynyl-1-iminobenzyl in 500 ml Tetrahydrofuran wurden unter einer Stickstoffat mosphäre bei -78°C mit n-Butyllithium (0,05 M) versetzt. Nach 10 Minuten wurde das dunkelrote Carbanion mit 11,3 g (0,05 M) 4-Brom-2-iminobenzylbutan in 20 ml Tetrahydrofuran behandelt. Nach 3 Stunden bei -78°C wurden 50 ml Wasser zugesetzt und das Tetrahydrofuran abgedampft unter Hinter lassung eines Rückstands, der unter Stickstoffatmosphäre 48 Stunden lang mit 100 ml 6 N Salzsäure auf Rückflußtemperatur erhitzt wurde. Nach dem Kühlen wurde die wäßrige Lösung mit Methylenchlorid gewaschen, mit wäßrigem Natriumhydroxid alkalisch gemacht und mit Methylenchlorid nochmals extrahiert. Der Methylenchloridextrakt wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert, eingeengt und destilliert unter Bildung von 1-Ethynyl-4-methyl-1,4-butandiamin.

Galenische Beispiele Beispiel 6

Granulate, die zur Zugabe zum Trinkwasser von Geflügel geeignet sind, wurden wie folgt hergestellt:


Gramm
2-Difluormethyl-2,5-diaminopentansäure
33,0
Maisstärke	18,5
Lactose	48,2
Zinkstearat	0,3
	100,0

Die 2-Difluormethyl-2,5-diaminopentansäure wurde mit etwa 6 bis 9 g Lactose vermischt und durch eine Strahlmühle oder Micronizer-Mühle geführt, um eine Teilchengröße von 1 bis 25 µm zu erzielen. 35 ml Wasser wurden zu etwa 2,5 g Maisstärke zugesetzt und vermischt, um eine 5%ige Stärkepaste zu erzielen. Das mikronisierte 2-Difluormethyl- 2,5-diaminopentansäure-Lactosepulver, die restliche Lactose und die restliche Maisstärke wurden gut vermischt. Die Stärkepaste wurde zugesetzt und vermischt und das dabei entstehende Gemisch durch ein Sieb mit einer lichten Maschenweite von 1,41 mm gegeben. Die dabei entstehenden Granulate wurden bei 38°C auf einen Feuchtigkeitsgehalt von etwa 3% getrocknet, durch ein Sieb mit einer lichten Maschenweite von 1,41 mm gegeben und durch Vermischen mit 0,3 g Zinkstearat gleitend gemacht.

Beispiel 7

Eine 10%ige Vorratslösung zur Verwendung bei der Behandlung von Coccidiose wurde hergestellt durch Lösen von 37,5 g 2-Difluormethyl-2,5-diaminopentansäure in 3,79 l Wasser bei Raumtemperatur. Ein Teil dieser Vorratslösung, die mit 9 Teilen Wasser verdünnt war, ergab eine 1%ige medizinische Trinkwasserlösung für Geflügel, die zur Vorbeugung gegenüber Coccidiose bei Geflügel geeignet ist.

Beispiel 8

Ein medizinisches Tierfutter für Geflügel wurde hergestellt unter Verwendung der folgenden Bestandteile. Die Tiere wurden mit dem medizinischen Futter ad libitum gefüttert.


Gew.-%
Gemahlener gelber Mais\|60,3
Sojabohnenölmehl	33,0
Alfalfablättermehl	1,0
Dicalciumphosphat	3,0
Calciumcarbonat	1,0
iodhaltiges Salz	0,2
2-Difluormethyl-2,5-diaminopentansäure	0,33
antibiotisches Vitamin-Mineral-Aminosäure-Gemisch aus folgenden Bestandteilen auf je 0,454 kg Futter: @	Oxytetracyclin	0,5 g
Penicillin (als Procainsalz)	0,25 g
Mangansulfat	8 g
DL-Methionin	22,7 g
Riboflavin	130 mg
DL-Calciumpantothenat	930 mg
Niacin	1400 mg
Pyridoxin	130 mg
Vitamin B₁₂	1 mg
Cholinchlorid	22,7 g
Vitamin A	300 000 Einheiten
Vitamin D₃	25 000 Einheiten

Wirkungsnachweise Beispiel 9

Im nachstehenden wird die Wirkung von 2-Difluormethyl- 2,5-diaminopentansäure auf Trypanosoma brucei brucei Infektionen bei Mäusen erläutert.

Gruppen von 5 Mäusen mit einem Gewicht von 20 bis 25 g wurden mit T.b.brucei (EARTO 110 Isolat; 5×10⁵ Organismen/ Maus inokuliert. Die Verbindung wurde über das Trinkwasser ad libitum 24 Stunden nach der Infektion verabreicht. Die Ergebnisse werden als mittlere Überlebenszeit (in Tagen) über den Tod der Kontrolltiere ausgedrückt auf der Basis einer mittleren Überlebenszeit der Kontrolltiere von 5 Tagen. Berenil (Diminazenaceturat) wurde als Kontroll trypanosid zugesetzt. Die Ergebnisse werden in nachstehender Tabelle I wiedergegeben.

Tabelle I

Beispiel 10

Nachstehendes Beispiel erläutert die Wirkung einer 2%igen Lösung von 2-Difluormethyl-2,5-diaminopentansäure im Trinkwasser von Hühnern, die mit Oocysten von Eimeria tenella infiziert worden waren.

20 Hühner wurden per os am ersten Tag mit 100 000 Oocysten von E. tenella infiziert. 10 dieser Tiere wurde Trinkwasser verabreicht, das eine 2%ige Lösung 2-Difluormethyl-2,5- diaminopentansäure enthielt. Die restlichen Tiere dienten als Kontrolltiere. Am 3. Tag zeigten alle Kontrolltiere Anzeichen von Krankheit. Am 7. Tag wurden alle Tiere getötet, die Zökumschädigungen wurden makroskopisch geprüft und wie folgt bewertet:

0= keine feststellbaren makroskopischen Schädigungen
+1= einige vereinzelte Petechien in der Zökumwand, keine Verdickung der Wand und normale Zökumgehalte vorhanden,
+2= Schädigungen sind zahlreich mit merklichem Verlust der Zökumgehalte, Zökumwand leicht verdickt,
+3= große Mengen an Blut und Gewebetrümmer vorhanden, d.h. Zökumeiterpfropfen; Zökumwand stark verdickt, geringer, wenn überhaupt, normaler Zökumgehalt vor handen,
+4= Zökumwand stark aufgetrieben mit viel vorhandenem Blut oder Zökumeiterpfropfen. Zökumtrümmer fehlen oder sind in Eiterpfropfen eingebettet (tote Tiere werden ebenfalls mit der Note +4 bewertet).

Tabelle II

Beispiel 11

Nach im wesentlichen der gleichen Methode wie im vorstehenden Beispiel wurde an 6 Hühner eine 2%ige Lösung 2-Difluormethyl- 2,5-diaminopentansäure (DFMO) in deren Trinkwasser 3 Tage lang verabreicht. Am Tag 1 wurde diese Gruppe von 6 Hühnern zusätzlich zu 2 Gruppen von je 10 Hühnern per os mit 100 000 Oocysten von E. tenella je Huhn infiziert. Eine Gruppe von 10 Hühnern diente als Kontrollgruppe, die andere Gruppe von 10 Hühnern erhielt eine Standarddosis Amprolium im Trinkwasser für die nächsten 5 Tage. Zur Zeit ist Amprolium das coccidiostatische Mittel der Wahl. Am 5. Tag wurden alle Tiere getötet und auf Anzeichen von Krankheit untersucht, unter Anwendung des Schädigungsbe wertungsindex, wie er in vorstehendem Beispiel beschrieben ist. Es wurden folgende Ergebnisse erzielt.

Tabelle III

Beispiel 12

Das nachstehende Beispiel erläutert die Wirkung von unter schiedlichen Dosen an 2-Difluormethyl-2,5-diaminopentan säure auf Eimeria tenella-Infektionen bei Hühnern.

Nach im wesentlichen der gleichen Methode wie in Beispiel 10 wurde die Dosis an 2-Difluormethyl-2,5-diaminopentan säure (DFMO) wie in nachstehender Tabelle IV gezeigt verändert. Die Behandlung mit DFMO wurde am Tag -1 begonnen. Die Hühner wurden per os am Tag 0 infiziert und die Behandlung wurde 5 weitere Tage oder insgesamt 6 Tage fortgesetzt. Die Tiere wurden am Tag 5 getötet und auf Anzeichen von Krankheit untersucht unter Anwendung des Schädigungsbewertungsindexes, wie er im Beispiel 10 beschrieben wird.

Tabelle IV

Beispiel 13

Das nachstehende Beispiel erläutert die Wirksamkeit einer geringen prophylaktischen Dosis auf Eimeria tenella Schädi gungen bei Hühnern.

Nach im wesentlichen der gleichen Methode wie in Beispiel 10, jedoch mit unterschiedlichen verabreichten Dosen von 2-Difluormethyl-2,5-diaminopentansäure (DFMO) und unter schiedlichen Verabreichungszeitspannen wurden folgende Ergebnisse erzielt.

Beispiel 14

Nachstehendes Beispiel erläutert die Erwerbung einer perma nenten Immunität gegenüber Eimeria tenella-Infektionen bei Hühnern.

Tiere, die vorher mit 2-Difluormethyl-2,5-diaminopentansäure bei Konzentrationen von nur 0,5% am Tag -8 bis zum Tag +5, bezogen auf die Infektion, behandelt worden waren, wurden 1 Woche nach Beendigung der Therapie wie in nachstehender Tabelle VI angegeben bewertet. Diese Ergebnisse zeigen an, daß die prophylaktische Therapie bei niedrigen Dosen eine adequate Entwicklung von Parasiten gestattet in Ab wesenheit eines Krankheitsstatus und dadurch die Entwicklung einer Immunität gegenüber anschließenden E. tenella-Infektionen ermöglicht.

Tabelle III

Claims

1. Verwendung einer α-substituierten Aminosäure oder eines α-substituierten Amins der allgemeinen Formel worin R₁ Wasserstoff oder Carboxyl, Y CH₂F, CHF₂, CF₃ oder C≡CH und Z H₂N-(CH₂)₃, H₂NCH(CH₃)-(CH₂)₂ oder H₂N-CH₂CH=CH bedeuten, Salze und einzelne optische Isomeren, zur Bekämpfung von Protozoen-Infektionen bei Tieren, mit Ausnahme von Verbindungen, worin R₁ Wasser stoff und Z H₂N-(CH₂)₃ bedeuten sowie der Verbindungen, worin R₁ Wasserstoff und Z H₂N-CH₂-CH=CH bedeuten und der Verbindung, worin R₁ Wasserstoff, Z H₂N-CH(CH₃)-CH₂-CH₂ und Y CF₃ bedeuten.

2. Verwendung nach Anspruch 1 von Verbindungen der Formel (I), worin Z=H₂N-CH(CH₃)-(CH₂)₂ und Y=CHF₂ bedeuten.

3. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2 von 2,5-Diamino-2-di fluormethylpentansäure.