DE3610531A1

DE3610531A1 - Arzneimittel mit einem gehalt an n-(4-hydroxyphenyl)-retinamid mit erhoehter bioverfuegbarkeit

Info

Publication number: DE3610531A1
Application number: DE19863610531
Authority: DE
Inventors: Irwin Saul Huntington Valley Pa. Gibbs; Pramod Madhav Blue Bell Pa. Kotwal
Original assignee: McNeilab Inc
Current assignee: Janssen Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1985-03-28
Filing date: 1986-03-27
Publication date: 1986-10-16
Anticipated expiration: 2006-03-28
Also published as: DE3610531C2; US4665098A; JPH0776173B2; JPS61275215A

Description

Beschreibung

N-(4-Hydroxyphenyl)-all-trans-retinamid, das auch als HPR oder Fenretinid bekannt ist und die CAS-Registriernummer 65646-68-6 aufweist, ist in den US-PSen 4 190 594 und 4 323 581 beschrieben und weist folgende Strukturformel auf:

OH

HPR bewirkt einen Schutz gegen durch N-Nitroso-N-methylharnstoff induzierten Brustdrüsenkrebs bei Ratten. Es ist bei oraler Verabreichung an Ratten weniger toxisch als Retinylacetat und Retinoesäure; vergl. R.C. Moon et al., Cancer Research, Bd. 39 (1979), S. 1339 bis 1346. Bei oraler Verabreichung von 5 mg/kg HPR in einer Dosis an Ratten ergibt sich eine unvollständige Resorption und eine langsame Ausscheidung mit einer Halbwertszeit von 12 Stunden; vergl. B.N. Swanson et al., Drug Metabolism Disposition, Bd. 8, Nr. 3 (1980), S. I68 bis 172.

Bei der in der US-PS 4 323 581 beschriebenen experimenteilen Krebsbehandlung wird HPR in einem Lösungsmittelsystem aus Trioctanoin : Äthanol (3:1), Tenox 20 und Dl_cX_Tocopherol gelöst, das sodann mit Laborfutter vermischt wird. Somit wird das HPR durch Beimischen zum Futter verabreicht. HPR ist in Wasser praktisch,unlöslich und recht teuer. Die Verabreichung von HPR-Tabletten oder wässrigen HPR-Suspensionen würde die Aufnahme von grossen HPR-Mengen erfordern, um einen sinnvollen Blutspiegel des

Arzneistoffs zu erreichen. Es besteht ein Bedürfnis danach, t

bei Patienten eine wirksame Verabreichung von pharmazeu- I;"

κ tisch wirksamen Konzentrationen an HPR zu erreichen. Γ;

Die biopharmazeutische Wirkung von Griseofulvin wurde von \

Philip J. Carrigan, Journal of Pharmaceutical Sciences, \ Bd. 62, Nr. 9 (1973), S. 1476 bis 1479 untersucht, wobei eine wässrige Suspension, eine Maisölsuspension mit PoIy-

sorbat 60 und eine dreiphasige Öl-in-Wasser-Emulsion mit \_r

einem Gehalt an Polysorbat 60, Maisöl und Wasser bewertet ['.'

wurde. Die Verwendung von Suspensionen mit einem Gehalt ■-·■

an pflanzlichen Ölen und oberflächenaktiven Mitteln für r

Weichgelatinekapseln ist in "The Theory and Practice of £·.

Industrial Pharmacy", Hrsg. Leon Lachmann, Lea & Fergiger, :^?

Philadelphia, PA (1970), S. 371 beschrieben. ^l

f\ Gegenstand der Erfindung ist eine neue Dosierungsform für ;■■

N-(4-Hydroxyphenyl)-retinamid, die eine ausgezeichnete Bioverfügbarkeit des Wirkstoffs, insbesondere eine orale

Bioverfügbarkeit gewährleistet. Dadurch ist es möglich, ■

wesentlich geringere HPR-Mengen den Patienten zu verab- ·

reichen, als dies bei Verabreichung des Arzneistoffs in Form von trockenen Pulvern, Tabletten oder wässrigen Suspensionen der Fall ist, wobei aber doch die gewünschten '

Blutspiegel des Arzneistoffs erreicht werden.

Erfindungsgemäss wird ein Arzneimittel bereitgestellt, das HPR, Maisöl und ein nicht-ionogenes oberflächenaktives Mittel enthält.
30

Somit umfasst das erfindungsgemässe Arzneimittel eine Suspension folgender Bestandteile:

I) N-(4-Hydroxyphenyl)-retinamid der folgenden Formel

ORIGINAL INSPECTED {

II) Maisöl und

III) ein nicht-ionogenes oberflächenaktives Mittel.

HPR lässt sich nach bekannten Verfahren herstellen, z.B. gemäss US-PS 4 323 581.

Ferner wurde festgestellt, dass eine geringe Teilchengrösse des HPR dazu beiträgt, die Bioverfügbarkeit zu unterstützen. Somit sind durchschnittliche HPR-Durchmesser unter etwa 70 um bevorzugt, wobei ein optimaler Bereich etwa 0,5 bis 50 um beträgt. Die kleineren durchschnittlichen HPR-Durchmesser lassen sich durch Zerkleinerung (Mikronisierung) oder Kristallisation erreichen. Mahlen von HPR zur Erzielung der gewünschten durchschnittlichen Teilchengrösse kann in dem Gerät Dynomil Typ KD 200c, Fa. Willy A. Bachofen AG, Basel, Schweiz, oder einer Zerkleinerungsvorrichtung Comitrol Modell 1500 oder 3000, Fa. Urschell Labs, Inc., Valparaiso, Indiana, durchgeführt werden.

Beim erfindungsgemäss als dritten Bestandteil verwendeten nicht-ionogenen oberflächenaktiven Mittel kann es sich um beliebige oberflächenaktive Mittel handeln, die für pharmazeutische Anwendungszweeke geeignet sind. Beispiele für derartige oberflächenaktive Mittel sind Polyäthylensorbitanfettsäureester, Sorbitanfettsäureester, Polyoxyäthylenalkohole, Polyoxyäthylensäuren, Polyoxyäthylen-Polyoxypropylen-Glykole (z.B. oberflächenaktive Mittel der Handelsbezeichnung Pluronic), polyoxyäthylierte pflanzliche Öle, Monoglyceride, Diglyceride, Polyoxyäthylensorbitester oder Polysorbate, bei denen es sich um Fettsäureester eines Anhydrosorbits, das mit Ä'thylenoxid veräthert ist, handelt. Polysorbat 80 ist ein bevorzugtes oberflächenaktives Mittel und ist in The Merck Index, 10. Aufl., unter dem Eintrag Nr. 7455 als Ölsäureester von Sorbit und dessen Anhydriden, die mit etwa 20.MoI Ä'thylenoxid pro 1 Mol Sorbit und Sorbitanhydriden copolymerisiert sind, definiert. Eine Abhandlung über oberflächen-

BAD ORIGINAL

aktive Mittel vom Polysorbattyp, die unter der Handelsbezeichnung Tween vertrieben werden, sowie über andere oberflächenaktive Mittel findet sich in "Surface Active Agents" Anthony M. Schwartz et al., Interscience Publishers, Inc., New York, (19^9), insbesondere S. 209-

Die Bestandteile II) und III) werden erfindungsgemäss in einem Gewichtsverhältnis von mindestens 1:1 verwendet. Geringe Mengen an oberflächenaktivem Mittel werden im Hinblick auf die Tatsache, dass von oberflächenaktiven Mitteln im Vergleich zu Maisöl eine grössere Gefahr von nachteiligen Nebenwirkungen ausgeht, bevorzugt. Somit beträgt ein bevorzugtes Gewichtsverhältnis von Bestandteil II) zu Bestandteil III) etwa 5:1 bis 50:1 und insbesondere

!5 etwa 10:1 bis 15:1. Die individuelle Dosierung von HPR variiert je nach dem speziellen zu behandelnden Zustand und der Schwere. Normale Einheitsdosen betragen 25, 50, 100 und 175 mg HPR.

Das erfindungsgemässe Arzneimittel wird hergestellt, indem man die Bestandteile I), II) und III) in beliebiger Reihenfolge vermischt, wobei es bevorzugt ist, zunächst das Maisöl und das oberflächenaktive Mittel zu vermischen und dann die gewünschte Menge an HPR zuzusetzen. Die Mischung kann in einem Mischbehälter aus rostfreiem Stahl durchgeführt werden. Eine gewisse Vermischung findet auch statt, wenn man die HPR-Teilchengrösse, z.B. in einer Zerkleinerungsvorrichtung, wie dem Gerät; Comitrol der Fa. Urschell Labs, Inc., verringert. Eine andere Möglichkeit besteht in

3Q der Verwendung eines in situ Misch-Zerkleinerungsgeräts, z.B. einem Arde-Barinco-Gerät.

Die Verabreichung des erfindungsgemässen Arzneimittels kann durch Vermischen mit der Nahrung, als Aufstrich für Brot oder Cracker oder durch Einfüllen in Hart- oder Weichgelatinekapseln erfolgen. Weichgelatinekapseln werden wegen ihrer einfachen Lagerung und aufgrund der Tatsache, dass

BAD ORIGINAL

sie rn verschiedensten Formen zur Verfügung stehen, bevorzugt. Die Suspension kann auch in Form von Suppositorien rektal oder vaginal verabreicht werden. Die Herstellung von Weichgelatinekapseln ist in dem Kapitel "Soft Gelatin Capsules", J.P. Stanley, "The Theory and Practice of Industrial · Pharmacy", Hrsg. Leon Lachmann, Lea & Ferbiger, Philadelphia (1970), S. 359 bis 384 näher beschrieben. Weichgelatinekapseln können auf einer rotierenden Formvorrichtung, z.B. einer Vorrichtung der Fa. R.P. Scherer, Detroit, Michigan, hergestellt werden, wobei die Kapseln unmittelbar bei der Bildung gefüllt werden. Vorgeformte Weichgelatinekapseln mit einer kleinen Öffnung können ebenfalls verwendet werden, wobei man das Arzneimittel durch die Öffnung einfüllt und das Loch mit einem kleinen Stück geschmolzener Weichgelatine verschliesst. Vorzugsweise wird das erfindungsgemässe HPR-Arzneimittel zusammen mit einer Mahlzeit verabreicht, um die Bioverfügbarkeit zu erhöhen. Eine derartige Mahlzeit kann einen erhöhten Lipidgehalt z.B. Fette, wie Butterfette, und Öle, wie tierische und pflanzliche Öle, aufweisen. Das Arzneimittel kann innerhalb von 1 Stunde nach einer derartigen Mahlzeit 1- oder 2 mal täglich verabreicht werden. Es hat sich gezeigt, dass die Bioverfügbarkeit von Isotretinoin, z.B. Accutane-Qualität, durch die Nahrungsaufnahme beeinflusst wird; vergl.

W.A. Colburn et al., The Journal of Clinical Pharmacology, Bd. 23 (1983), S. 534 bis 539-

Überraschenderweise wurde festgestellt, dass die Verabreichung von HPR in einer Suspension aus Maisöl/oberflächenaktivem Mittel im Vergleich zu anderen Verabreichungsarten, z.B. in wässriger oder erwärmter Form.oder auch in anderen Ölträgern, eine stark gesteigerte Bioverfügbarkeit des Arzneistoffs in vivo bewirkt. Dies ermöglicht die Verabreichung einer geringeren HPR-Menge an den Patienten unter Erzielung der gleichen Wirkung, wodurch die Kosten für den Patienten gesenkt und eine geringere Belastung, zumindest des gastrischen Systems, erreicht wird, wodurch

BAD ORIGINAL

eine Belastung durch möglicherweise schädliche HPR-Mengen vermieden wird. Mit dem erfindungsgemassen Arzneimittel lassen sich Krebs, Psoriasis oder Akne, z.B. zystische Akne bei Säugetieren, z.B. beim Menschen, behandeln. Beispiele für Krebsarten, die behandelt werden können, sind Brust- oder Blasenkrebs. Für einen durchschnittlichen Erwachsenen von etwa 70 kg Körpergewicht beträgt die tägliche HPR-Dosis etwa 100 bis 2000 mg, z.B. etwa 300 bis 600 mg.

In den folgenden Beispielen und in der gesamten Beschreibung werden folgende Abkürzungen verwendet: mg (Milligramm); mg/kg (Milligramm pro Kilogramm Körpergewicht); g (Gramm); ng (Nanogramm), kg (Kilogramm); ml (Milliliter); AUC (Fläche unter der Kurve Plasmakonzentration gegen Zeit); ss (steady state=stationärer'Zustand); S. E.M. (Standardfehler des Mittelwerts); S.D. (Standardabweichung); v/v (Verhältnis Volumen/ Volumen); w/w (Verhältnis Gewicht/Gewicht); w/v (Verhältnis Gewicht/Volumen); h (Stunden).

Beispiel 1

A· HPR-wässrige Traganth-Suspension (Vergleich)

Eine wässrige Traganth-Suspension von HPR wird durch Suspendieren von HPR in einer 0,5% w/v wässrigen Traganth-Suspension unter Bildung einer Konzentration von 80,0 mg/ml HPR hergestellt. Die erforSerliche Menge an HPR wird in einem Mörser mit einer geringen Menge einer 0,5% w/v wässrigen Traganth-Susjpension versetzt und mit dem Pistill zu einem glatten Brei vermischt. Der Brei wird quantitativ in· ein vorher gewogenes Becherglas gebracht. Die quantitative übertragung wird durch mehrfaches Spülen des Mörsers mit 0,5% w/v wässriger Traganth-Suspension gewährleistet. Die Suspension wird schliesslich durch Zugabe von 0,5%

w/v wässriger Traganth-Suspension auf eine endgültige 35

HPR-Konzentration von 80 mg/ml gebracht.

BAD ORIGINAL

B. HPR-Maisöl/Tween 80-Suspension (Erfindung)

Erfindungsgemäss wird eine HPR-Suspension in einem 11,7:1 (w/w)-Gemisch aus Maisöl und Tween 80 hergestellt, indem

man HPR in einem Gemisch aus Maisöl und Tween 80 im Ver-5

hältnis 11,7:1 (w/w) suspendiert. Die erforderliche Menge an Tween 80 wird zur erforderlichen Menge an Maisöl gegeben, wobei man mit einem Arde Barinco-Homogenisator Modell CJ-4B vermischt. Die erforderliche HPR-Menge wird zum Maisöl-Tween 80-Gemisch zugegeben, wobei der Mischvorgang fortgesetzt wird. Man erhält eine homogene Suspension mit einem Gewichtsverhältnis an Maisöl-Tween 80-Gemisch zu suspendiertem HPR von 7,6:1 (w/w).

Bioverfügbarkeitstest (Ratte)
15

Die HPR-Suspensionen A und B werden an 48 CRL:COBS.

(WI)BR-Ratten (24 männliche und 24 weibliche Tiere mit einem Gewicht von 150 bis 250 g) 1 mal täglich 7 Tage lang auf folgende Weise verabreicht. Eine Gruppe (12 männliche

r,,- und 12 weibliche Tiere) erhalten die Suspension A in einer Menge von 800 mg HPR/kg Körpergewicht pro Tag. Die andere Gruppe erhält die Suspension B in einer Menge von 125 mg HPR/kg Körpergewicht pro Tag. Die Verabreichung erfolgt über eine Sonde unter Verwendung einer gekrümmten Nadel

₂;_Γ., zur Tierfütterung (z.B. Produkt der Fa. Popper and Sons, New Hyde Park, NY. Nach 2, 4, 6 und 24 Stunden nach der 7. Dose werden aus jeder Gruppe 6 Tiere (3 männliche und 3 weibliche Tiere) entblutet. Das Plasma wird gesammelt und bis zur Bestimmung auf -20⁰C eingefroren. HPR und

_g0 dessen N-(4-Methoxyphenyl)-retinamid-Metabolit (4-MPR) werden getrennt bestimmt.

Bestimmungsverfahren

Die Bestimmung erfolgt durch Hochdruckflüssigchromatographie unter Verwendung eines Waters HPLC-Systems, das aus einem Lösungsmittelabgabesystem Modell 6000A und einem Absorptionsdetektor Modell 440 UV (Filter 365 nm) sowie entweder

einem Modell U6K-Injektionsgerät (2 ml Probenschleife)

(R)

oder einem Waters Intelligent Sample Processor (WISP^) besteht. Hierfür kann auch eine vergleichbare HPLC-Einrichtung verwendet werden. Bei der Säule handelt es sich um eine 10 cm χ 4,6 mm (Innendurchmesser) Brownlee Labs RP-18 Spheri-5 (5 ^x) Säule aus rostfreiem Stahl, die mit einer 3 cm χ 4,6 mm (Innendurchmesser) Brownlee Labs RP-18 (10 u) Schutzsäule aus rostfreiem Stahl ausgerüstet ist. Bei der beweglichen Phase handelt es sich um Acetonitril:

Wasser:Eisessig (75:23:2, v/v/v), die in 2 Liter-Mengen hergestellt wird. Die Bestandteile der beweglichen Phase werden vermischt, durch eine 5 um Millipore ^-Filtriervorrichtung filtriert und unter vermindertem Druck 1/2 Stunde unter Rühren entgast. Als interner Standard für die Be-Stimmung wird N-(4-Äthoxyphenyl)-retinamid (4-EPR) verwendet. Eine Lösung von 4-EPR wird durch Einwiegen von 10,0 mg 4-EPR in einen 100 ml fassenden dunklen Messkolben und Auffüllen mit Acetonitril hergestellt. Eine 1/200-Verdünnung dieser Stammlösung wird hergestellt, indem man 1 ml der 100 ^g/ml 4-EPR-Lösung in einen 200 ml fassenden Messkolben bringt und mit Acetonitril auffüllt. Die erhaltene Lösung enthält 500 ng/ml 4-EPR. Diese Lösung wird im Kühlschrank aufbewahrt und 6 Monate lang verwendet, ohne dass es Anzeichen für eine Zersetzung gibt.

Für die Bestimmung wird eine 0,05 ml Aliquot-Plasmaprobe in ein 12 χ 75 mm-Polypropylenröhrchen (z.B. Falcon 2063, Oxnard, CA) pipettiert. Nach Zugabe von 1 ml der internen Standardlösung wird etwa 30 Sekunden stark geschüttelt.

Nach 15-minütigem Stehenlassen wird die Probe mit 600xg 15.min bei 15°C zentrifugiert. Eine 100 ^1-Aliquotprobe des Überstands wird in die Säule eingespritzt. Die Bereiche der Retentionszeit für die einzelnen Verbindungen, einschliesslich endogenem Retinol, sind naqhstehend angegeben:

HPR: 3,57 - 3,85 min

4-MPR: 6,70-7,42 min . 4-EPR: 8,29 - 9,40 min Retinol: 4,79 - 5,03 min 5

Vergleichseichkurven (Peakhöhe HPR gegenüber Peakhöhe 4-EPR gegen die HPR-Konzentration 30 bis 10 000 ng/ml) werden täglich ermittelt. Die HPR-Konzentration in den Proben wird durch mathematische Interpolation nach einer gewichteten (1/Varianz) linearen Regressionsanalyse der Standards bestimmt.

Ergebnisse

Die Untersuchungsergebnisse zeigen, dass die durchschnittlichen Plasmakonzentrationen von HPR und 4-MPR zu sämtlichen Zeitpunkten bei den Tieren, denen die erfindungsgemässe Suspension B verabreicht worden ist, höher sind als bei Verabreichung der Suspension A, selbst wenn die letztgenannte Suspension in einer wesentlich höheren Dosis ge-

geben worden ist; vergl. Tabelle I. Die durchschnittliche Fläche unter der Kurve HPR-Plasmakonzentration gegen die Zeit über den Dosierungsintervall nach der 7. Dose ist für das Ölpräparat B nahezu 2 mal so gross wie bei der wässrigen Suspension. Dieser Unterschied ist statistisch signifikant (p<0,01).

Das Verhältnis AUC (Fläche unter der Kurve im stationären

S S

Zustand) zur Dosis beträgt 106,7 für die Suspension B gegenüber 8,7 für die Suspension A.
30

- 12 Tabelle I

HPR-Plasmakonzentrationen bei Ratten (ng/ml)

Zeit (h) nach der Dosierung	4	6	24	823 576 1008 858 1379 641	679 813 805 987 1048 450	186 133 63 163 253 178
Suspension A 2 '	390 533 462 597 375 210	281 298 505 585 237 367	37 341 272 77 37 133	881 (288)	797 (216)	163 ( 63)
{800 mg HPR/kg Körpergewicht männlich 402 384 615 weiblich ²^ 376	428 (136)	379 (138)	150 (128)	AÜC_SS* = 13340± 957(Mit\|el- ± SEM)
402 (S.D.) ' (112)	(Mittel— AUC_SS* = 6943± 750;_ert ± 'SEM)
Suspension B (Erfindung)
(125 rag HP R/kg Körpergewicht männlich 986 940 937 weiblich 1370 759 953
Mittelwert 991 (S.D.) (202)

Dosierungsintervall = 24 h; 24 h-Wert =.0 h-Wert

Beispiel 2

C. HPR-trockenes Pulver in Hartgelatinekapseln

100 ml HPR werden von Hand in orangefarbene opake Kapseln g der Grosse Nr. 1 gefüllt.

D. HPR-Lebertran/Tween 80-Suspension in Weichgelatinekapseln

Gewogene Mengen an HPR und Tween 80 werden zu Lebertran in einem Gewichtsverhältnis von 25:15:176 gegeben, wobei mit einem Überkopfmischer gemischt wird. Die Suspension wird unter Verwendung eines Arde Barinco-Homogenisators gleichmassig vermischt. Sodann wird die Suspension unter vermindertem Druck entlüftet und unter Verwendung einer rotierenden Formvorrichtung der Fa. R.P. Scherer of North America in Weichgelatinekapseln gefüllt. Die Kapseln werden in flachen Schalen unter kontrollierten Temperatur- und Feuchtigkeitsbedingungen getrocknet. Jede Kapsel enthält 25 mg HPR, 15 mg Tween 80 und 176 mg Lebertran.

E. HPR-Maisöl/Tween 80-Suspension in Weichgelatinekapseln (Erfindung)

Diese Kapseln werden gemäss den Angaben für die Lebertran-Suspension D-Kapseln hergestellt, mit der Abänderung, dass

Maisöl anstelle von Lebertran verwendet wird. 25

F. HPR-Stärke/Lactose in Hartgelatinekapseln

Gewogene Mengen an HPR, Lactose (wasserhaltig), Stärke und vorgelatinierte Stärke werden in den nachstehend angegebenen Mengenverhältnissen mit Mörser und Pistill vermischt:

HPR 10 g

Lactose (wasserhaltig) 3,5 g

Stärke 15 g

_oc vorgelatinierte Stärke 2 g

Das erhaltene Gemisch wird unter Verreiben mit einer 2-prozentigen Lösung von Natriumlaurylsulfat in gereinigtem Wasser (15 ml) versetzt. Zusätzliches Wasser wird zugegeben, um eine geeignete Granulierung zu erzielen. Das Granulat wird 6 Stunden in einem Trockenschrank bei 48 C auf mit Papier ausgelegten Schalen getrocknet. Sodann wird das Granulat mit Mörser und Pistill zerkleinert und gewogen. Der Gewichtsverlust während der Formulierung wird berechnet. Sodann werden 2,34 g modifizierte Stärke und 0,278 g Magnesiumstearat mit 25,2 g Granulat vermischt. Das Gemisch wird von Hand in Hartgelatinekapseln der Grosse Nr. gefüllt. Man erhält Kapseln mit einem Gehalt an jeweils 100 mg HPR, 35 mg wasserhaltiger Lactose, 150 mg Stärke, 20 mg vorgelatinierterStärke, 3 mg Natriumlaurylsulfat, 28,6 mg modifizierter Stärke und 3,4 mg Magnesiumstearat.

Bioverfügbarkeitstests (Hund)

An 4 Hunden wird mit den Präparaten C, D, E und F eine Bioverfügbarkeitsuntersuchung bei Verabreichung einer einzelnen oralen Dosis durchgeführt. Es handelt sich um eine offene Studie mit einer sequentiellen 5-Weg-Überkreuzanordnung, wobei es sich beim 5. Präparat um ein 200 mg HPR-Präparat in einem von Maisöl oder Lebertran abweichenden Öl handelt, das eine geringere Plasmakonzentration als diese beiden anderen Präparate hervorruft.

Zwischen den einzelnen HPR-Behandlungen wird eine 2-wöchige Auswaschperiode eingehalten. Während der gesamten Studie erhalten die Tiere Futter und Wasser naoh Belieben. 7 ml-Blutproben werden unter Verwendung von heparinisierten Vacutainern von jedem Hund zu folgenden Zeitpunkten gewonnen: 0 (vor der Verabreichung), 0,5, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48 und 72 Stunden nach der Verabreichung bei jeder Behandlung. Die Blutproben werden aus der Jugularvene durch separate Venenpunktion zum jeweiligen Zeitpunkt gewonnen. Die Blutproben werden in einer Tischzentrifuge zentrifugiert. Das Plasma wird gewonnen und bis zum

- 15 Analysenzeitpunkt bei -20 C eingefroren.

Bestimmungsverfahren

Man verfährt wie in Beispiel 1 unter Verwendung eines g

4-EPR-internen Standards mit einem Gehalt an 100 ^ig/ml, der durch Einwiegen von 10,0 mg 4-EPR in einen 100 ml-Messkolben und Auffüllen mit Methanol hergestellt wird. Eine 1/2000 Verdünnung dieser Stammlösung wird hergestellt, indem man 0,1 ml der 100 ^ig/ml 4-EPR-Lösung in einen 200 ml-Messkolben gibt und mit Methanol auffüllt. Die erhaltene Lösung enthält 50 ng/ml 4-EPR. Diese Lösung wird im Kühlschrank aufbewahrt und 6 Monate ohne Anzeichen von Zersetzung verwendet. Für die Bestimmung wird eine 1,0 Liter Aliquotmenge Plasma in ein 15 ml fassendes, konisch zulaufendes Zentrifugenrohr mit Schraubverschluss gegeben. Nach Zugabe von 1 ml der internen Standardlösung wird 15 Sekunden gründlich geschüttelt. Nach Zugabe von 4 ml Extraktionslösung (3:1 Äther/Chloroform) wird weitere 15 Sekunden gründlich geschüttelt. Sodann wird auf einem

Horizontalschüttler 15 Minuten vermischt. Anschliessend werden die Proben mit 600xg 15 Minuten bei 15 C zentrifugiert. Die Verwendung einer Kühlzentrifuge wird empfohlen, um einen Temperaturanstieg der Probe beim Zentrifugieren, der zur Zersetzung der Retinoide führen kann, zu vermeiden.

3,5 ml der oben befindlichen 3:1-Äther/Chloroform-Phase werden in ein weiteres Zentrifugenröhrchen mit konischem Boden und Schraubverschluss mit einem Fassungsvermögen von 15 ml gegeben. Nach Eindampfen zur Trockne unter Stickstoff werden 200 ul 3:1 Äthanol/Wasser zugegeben. Das Ge-

misch wird 30 Sekunden gründlich geschüttelt. Eine 150 ul-Aliquotmenge der rekonstituierten Probe wird in die Säule eingespritzt. Die Chromatographie und die quantitative HPR-Bestimmung werden gemäss Beispiel 1 durchgeführt.

Die Behandlungen C, D, E und F mit den entsprechenden Präparaten lassen sich folgendermassen zusammenfassen:

C: 400 mg HPR werden in Form von 4 Hartgelatinekapseln mit einem Gehalt an jeweils 100 mg HPR in Form eines trockenen Pulvers verabreicht.

D: 200 mg HPR werden in Form von 8 Weichgelatinekapseln mit einem Gehalt an jeweils 25 mg HPR, 15 mg Tween 80 und 176 mg Lebertran verabreicht.

E: 200 mg HPR werden in Form von 8 Weichgelatinekapseln mit einem Gehalt an jeweils 25 mg HPR, 15 mg Tween 80 und 176 mg Maisöl verabreicht.

F: 200 mg HPR werden in Form von 2 Hartgelatinekapseln mit einem Gehalt an jeweils 100 mg HPR, 35 mg wasserhaltiger Lactose, 150 mg Stärke, 20 mg vorgelatinierter Stärke, 3 mg Natriumlaurylsulfat, 28,6 mg modifizierter Stärke und 3,4 mg Magnesiumstearat pro Kapseln verabreicht.

Blutproben werden 1/2, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 24, und 72 Stunden nach der Verabreichung entnommen.

Ergebnisse

In der nachstehenden Tabelle II sind die maximalen Plasmakonzentrationen an HPR in ng/ml und als prozentuale Werte, bezogen auf die Vergleichsbehandlung C, angegeben. Die Daten der Behandlung C sind auf eine 200 mg-Dosis umgerechnet. Ferner ist die Fläche unter der Kurve der Daten für die 72 h-Periode nach der Verabreichung angegeben.

- 17 Tabelle II

Behandlung	maximale Plasma konzentration (ng/ml)	C	D	E (Erfindung)	F
Mittelwert in % des Ver- fileic'-hs- ' "	431	1513	1718	576
AUC (0-72 h ) (ng h ./ml)	Vergleich	351%	399%	134%
Mittelwert in % des Ver gleichs	7861	16481	22054	8586
Vergleich	210%	281%	109%

Beispiel 3

Es wird ein Vergleich der Bioverfügbarkeit von HPR bei Verabreichung in Form eines trockenen Pulvers in Dosen von 800 bzw. 1600 mg/kg Körpergewicht pro Tag und bei Verabreichung in Form einer Maisöl/oberflächenaktives Mittel-Suspension in einer Dosis von 125 mg/kg pro Tag durchgeführt. Die 800 mg- und 1600 mg-Dosen (pro kg pro Tag), d.h. die Präparate G und H, werden wie das Präparat C von Beispiel 2 hergestellt. Die 125 mg/kg-Maisölsuspension der Erfindung, d.h. das Präparat I, wird wie das Präparat B in Beispiel 1 hergestellt. Das Bestimmungsverfahren erfolgt ebenfalls wie in Beispiel 1 . HPR wird an vier Beagle-Hunde (2 männlich, 2 weiblich)"täglich über einen Zeitraum von 21 Tagen hinweg verabreicht. Während der 1. Woche wird trockenes HPR-Pulver in Hartgelatinekapseln in einer Dosis von 800 mg/kg verabreicht. Plasmamaproben werden vor und 24 Stunden nach der 7- Dose gewonnen. Am 8. Tag wird die HPR-Dosis in Form des trockenen Pulvers auf 1600 mg/kg erhöht. Die Probenentnahme erfolgt zu den gleichen Zeitpunkten, mit der Ausnahme, dass zu-

sätzlich vor der Verabreichung am 5. Tag eine Probe ent- -j

nommen wird. Diese Probeentnahmeschema wird auch während ^;J

der 3. Woche eingehalten, in der eine Maisöl/Tween 80 ^;-

(11,7:1) (w:w)-HPR-Suspension in Hartgelatinekapseln ver- ,

abreicht wird. Sämtliche Plasmaproben werden unmittelbar ^; nach der Gewinnung eingefroren und bis zur Bestimmung bei

-20⁰C gelagert. ' =

Ergebnisse :

Die HPR-Konzentrationen sind in nachstehender Tabelle IIIA _:;

angegeben. Es ergibt sich folgende Reihenfolge der Mittel- j

werte der maximalen Plasmakonzentrationen: 125 mg/kg/Tag ,j

Maisöl/Tween 80-Präparat > 1600 mg/kg/Tag trockenes Pulver |

> 800 mg/kg/Tag trockenes Pulver. Ein Vergleich der AUG - "

^

Werte der beiden HPR-Troekenpulver-Dosierungen (Tabelle 1

IIIB) ergibt einen 36-prozentigen Anstieg der relativen Be- <j lastung (Fläche unter der Kurve Plasmakonzentration gegen ~\

Zeit bei stationärem Zustand, AUC ) und einen 21-prozenti- \ gen Anstieg der minimalen HPR-Plasmakonzentration bei

··

Steigerung der Dosis auf das 2-fache. Das Ölpräparat ergibt einen 2,5-faehen Anstieg des AUC -Werts gegenüber

S 5

dem Vergleichspräparat (800 mg/kg Pulver) bei 1/6 HPR-

Dosis. Das Verhältnis von AUC -Wert zur Dosis unter diesen

ss

Bedingungen beträgt beim ölpräparat mindestens das 15-fache

des Trockenpulverpräparats.

ORIGINAL INSPECTED

- 19 Tabelle IIIA

Mittelwert für h Hunde (ng/ml. PLasma]	Standardab weichung	Präparat G:	1276 1370 2484 2532 2172 1032	. Präparat H:	1304 1320 1419 2434 3391 3356 1414	.Präparat I:	18 64 2164 2217 7150 7265 5603 18 62	58 5 495 855 912 1030 629
	8 00 mq/kq/ Tag-TrockenDUlver	43061	1600 mg/kg/ Tae-Trookenmil vpr -	58437	(Erfindung) 125 mg/kg/Tae- Mai=sp1-Twfipn Rn	105727	18 291
vor Dosis Nr. 6 vor Dosis Nr."7 4 h 6 h 8 h 24 h	vor Dosis Nr .3 5 vor Dosis Nr. 6 vor Dosis Nr. 7 4 h 6 h 8 h 24 h	vor Dosis Nr. 5 vor Dosis Nr. 6 vor Dosis Nr. 7 4 h 6 h S h 24 h
AUC_SS (ng.h/ml)	AUC_SS (ng.h/ml)	AUC_SS (ng.h/ml)		521 500 566 745 939 706 434
11494

78 230 578 2298 2353 - 178 4 261
27626

- 20 Tabelle III-B

Präparat G Präparat H Präparat I

800 mg/kg 1600 mg/kg (Pulver, (Pulver)

AUC (ng.h/ml)

S S

% des Vergleichs

430.61+18291
100

136

105727+27626 246

AUC /Dosis ss

53,8

36,5

845,8

maximale Peak-Konzentration (ng/ml)

2716+1026

3607+838

7882+2734

Peakzeit Ch)

5,5+1,9

7,0+1,2

5,0+1,2

minimale Konzentration 1226+561

(ng/ml) % des Vergleichs

1489+480 121

2027+167 165

Beispiele 4 bis

HPR-S.uspensionen in Maisöl und Polysor'bat 80 werden gemäss

Präparat B folgendermassen hergestellt:

Beispiel 4:· Eine "längliche "A"-Weichgelatinekapsel Nr. 16 mit einem Gehalt an:

60 mg Tween

100 mg HPR

704 mg Maisöl zum Auffüllen

Beispiel 5: Eine längliche "A"-Weichgelatinekapsel Nr. 16 mit einem Gehalt an:

49 mg Tween

175 mg HPR

651 mg Maisöl

1 Beispiel 6: Eine ovale "B"-Weichgelatinekapsel Nr. 4 mit einem Gehalt an:

15 mg Tween 25 mg HPR 5 176 mg Maisöl

Beispiel 7: Eine längliche Weichgelatinekapsel Nr. 9 1/2 mit einem Gehalt an:

28 mg Tween 10 100 mg HPR

372 mg Maisöl .

Claims

scniiucL-iiöi-F j 10-339 -:- : --36Ί053 McNeilab, Inc. Welshand McKean Roads Spring House, PA., USA Arzneimittel mit einem Gehalt an N-(M-Hydroxyphenyl)-retinamid mit erhöhter Bioverfügbarkeit Patentansprüche

1. Arzneimittel, enthaltend eine Suspension mit folgenden Bestandteilen: (I) N-(M-Hydroxyphenyl)-retinamid der Formel

„._ (II) Maisöl und (III) ein nicht-ionogenes oberflächenaktives Mittel.

2. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Gewichtsverhältnis von Bestandteil II) zu Bestandteil. III) mindestens 1:1 beträgt.

3. Arzneimittel nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Gewichtsverhältnis von Bestandteil II) zu Bestandteil III) etwa 5:1 bis 50:1 beträgt.

H. Arzneimittel nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Gewichtsverhältnis von Bestandteil II) zu Bestandteil III) etwa 10:1 bis 15:1 beträgt.

5. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die durchschnittliche Teilchengrösse von Bestandteil I) unter etwa 70 um liegt.

6. Arzneimittel nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass die durchschnittliche Teilchengrösse von Bestandteil I) etwa 5 bis 50 um beträgt.

7. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, !O dass der Bestandteil III) aus folgender Gruppe ausgewählt ist: Polyäthylensorbitanfettsäureester, Sorbitanfettsäureester, Polyoxyäthylenalkohole, Polyoxyäthylensäuren, Polyoxyäthylen-polyoxypropylen-glykole, polyoxyäthylierte pflanzliche Öle, Monoglyceride, Diglyceride, Polyoxyäthylensorbitester und Polysorbate.

8. Arzneimittel nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass es sich beim Bestandteil III) um ein Polysorbat handelt.

9· Arzneimittel nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass es sich beim Bestandteil III) um Polysorbat 80 handelt.

10. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es in der Verabreichungsform einer Gelatinekapsel für die orale Verabreichung vorliegt.

11. Arzneimittel nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Gelatinekapsel um eine Weichgelatinekapsel handelt.