DE895546T1 - Verfahren zur isolierung bestimmter biologischer stoffe mittels magnetischer silika-partikel - Google Patents

Verfahren zur isolierung bestimmter biologischer stoffe mittels magnetischer silika-partikel

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DE895546T1 DE0895546T DE98908435T DE895546T1 DE 895546 T1 DE895546 T1 DE 895546T1 DE 0895546 T DE0895546 T DE 0895546T DE 98908435 T DE98908435 T DE 98908435T DE 895546 T1 DE895546 T1 DE 895546T1
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Claims (30)

Patentansprüche
1. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials aus anderem Material in einem Medium, dadurch gekennzeichnet, dass
a) ein das biologische Zielmaterial einschließendes Medium bereit gestellt wird;
b) magnetische Silica-Partikel bereit gestellt werden, die in der Lage sind, das biologische Zielmaterial reversibel zu binden;
c) ein Komplex aus den magnetischen Silica-Partikeln und dem biologischen Zielmaterial durch Kombinieren von magnetischen Silica-Partikeln und Medium gebildet wird;
d) der Komplex durch Anwendung eines externen magnetischen Feldes aus dem Medium entfernt wird; und
e) das biologische Zielmaterial von dem Komplex durch Eluieren des biologischen Zielmaterials abgetrennt wird, wodurch das isolierte biologische Zielmaterial erhalten wird.
20
2. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das entsprechend der Methode isolierte biologische Material aus einer Nukleinsäure besteht.
3. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die in Schritt (b) bereit gestellten magnetischen Silica-Partikel in der Lage sind, mindestens 2 Mikrogramm des biologischen Zielmaterials pro Milligramm Partikel reversibel zu binden.
4. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die in Schritt (b) bereit gestellten magnetischen Silica-Partikel mit Siliciumoxid beschichtete magnetische Partikel sind.
5. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass in Schritt (e) mindestens 60% des biologischen Zielmaterials im Komplex von den Partikeln eluiert werden.
6. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das in Schritt (e) aus dem Komplex eluierte biologische Zielmaterial nicht mehr als 50 ppm (parts per million) Verunreinigungen aus Übergangsmetall enthält.
7. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials von anderen Materialien in einem Medium, bestehend aus den folgenden Schritten:
a) Bereitstellung eines das biologische Zielmaterial enthaltenden Mediums;
b) Bereitstellung eines magnetischen Silica-Partikels, mit der Kapazität, mindestens 2 Mikrogramm des biologischen Zielmaterials pro
Milligramm Partikel reversibel zu binden;
c) Bildung eines Gemische bestehend aus dem Medium und dem magnetischen Silica-Partikel;
d) Anhaftung des biologischen Zielmaterials an den magnetischen Silica-Partikel in dem Gemisch;
e) Entfernung des magnetischen Silica-Partikels mit dem daran anhaftenden biologischen Zielmaterial aus dem Gemisch mittels der Anwendung eines äußeren magnetischen Feldes; und
f) Eluierung von mindestens 60% des biologischen Zielmaterials von dem magnetischen Silica-Partikel, indem man den Partikel einer
Elutionslösung aussetzt.
8. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass das entsprechend der Methode isolierte biologische Material aus einem Nukleinsäuren-Material besteht.
9. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass das entsprechend der Methode isolierte biologische Nukleinsäuren-Zielmaterial aus einem Plasmid-DNA-Material besteht.
10. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass das entsprechend der Methode isolierte biologische Nukleinsäuren-Zielmaterial aus einem DNA-Fragment-Material besteht.
11. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass die in Schritt (b) der Methode bereit gestellten magnetischen Silica-Partikel mit Siliciumoxid beschichtete magnetische Partikel sind.
12. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass das in Schritt (c) gebildete Gemisch aus dem Medium, dem magnetischen Silica-Partikel und einem chaotropen Salz besteht, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentration des chaotropen Salzes ausreichend hoch ist, um ein Anhaften des biologischen Zielmaterials an das magnetische Silica-Partikel in Schritt (d) zu bewirken.
13. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass das chaotrope Salz in dem in Schritt (c) gebildeten Gemisch aus einem chaotropen Guanidiniumsalz bestehend aus Guanidinhydrochlorid oder Guanidinthiocyanat besteht.
14. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentration des chaotropen Salzes in dem in Schritt (c) gebildeten Gemisch mindestens 2 molar ist.
15. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass in Schritt (d) das biologische Zielmaterial durch Inkubieren des Gemisches an den magnetischen Silica-Partikel angehaftet wird.
16. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, dass in Schritt (d) das biologische Zielmaterial an den magnetischen Silica-Partikel angehaftet wird durch Inkubieren des Gemischs bei Raumtemperatur fur mindestens 30 Sekunden.
17. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 7, umfassend zusätzlich dazu einen Schritt zum Waschen des magnetischen SiIica-Partikels nach der Entfernung aus dem Medium vor dem Eluieren des biologischen Zielmaterials von dem Partikel.
18. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, dass der Waschschritt mit einer Waschlösung umfassend einen Alkohol und ein Salz durchgeführt wird.
19. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, dass der Waschschritt durchgeführt wird unter Verwendung einer Waschlösung, umfassend mindestens 30 Vol.-% Alkohol und einen Puffer.
20. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass das biologische Zielmaterial in Schritt (f) mit-
" DE/"EP O 895 546-Tl
-5-
tels Wasser oder einer Elutionslösung mit einer geringen Ionenstärke von dem magnetischen Silica-Partikel eluiert wird.
21. Methode zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass das in Schritt (f) von dem magnetischen Silica-Partikel eluierte biologische Zielmaterial im Wesentlichen frei von Verunreinigungen durch Makromoleküle oder Metalle ist.
22. Methode zur Isolierung eines Plasmid-DNA-Materials von anderen Materialien in einem Medium, bestehend aus den Schritten:
a) Bereitstellung eines die Plasmid-DNA enthaltenden Materials;
b) Bereitstellung eines mit Siliciumoxid beschichteten magnetischen Partikels mit der Kapazität der reversiblen Bindung von mindestens 2 Mikrogramm des biologischen Zielmaterials pro Milligramm
Partikel;
c) Bildung eines Gemischs aus dem Medium, dem mit Siliciumoxid beschichtenen magnetischen Partikel und einem chaotropen Salz, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentration des chaotropen Salzes in dem Gemisch ausreichend hoch ist, um eine Anhaftung
der Plasmid-DNA an den Partikel zu bewirken;
d) Inkubation des Gemisches etwa bei Raumtemperatur, bis mindestens etwas des biologischen Zielmaterials an dem mit Siliciumoxid beschichteten magnetischen Partikel anhaftet;
e) Entfernen des mit Siliciumoxid beschichteten magnetischen Parti
kels aus dem Gemisch unter Verwendung einer äußeren magnetischen Kraft; und
f) Eluieren von mindestens 60% der dem mit Siliciumoxid beschichteten magnetischen Partikel anhaftenden Plasmid-DNA indem man den Partikel einer Elutionslösung aussetzt.
-6-
23. Methode zur Isolierung eines Plasmid-DNA-Materials gemäß Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, dass das chaotrope Salz in dem in Schritt (c) gebildeten Gemisch ein chaotropes Guanidiniumsalz bestehend aus Guanidinhydrochlorid oder Guanidinthiocyanat ist.
24. Methode zur Isolierung eines Plasmid-DNA-Materials gemäß Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentration des chaotropen Salzes in dem in Schritt (c) gebildeten Gemisch zwischen ungefähr 0,1 M und 7 M liegt.
25. Methode zur Isolierung eines Plasmid-DNA-Materials gemäß Anspruch 22, zusätzlich umfassend einen Schritt zum Waschen des mit Siliciumoxid beschichteten magnetischen Partikels nach der Entfernung aus dem Medium vor dem Eluieren der Plasmid-DNA von dem Partikel.
26. Methode zur Isolierung eines Plasmid-DNA-Materials gemäß Anspruch 25, dadurch gekennzeichnet, dass der Waschschritt durchgeführt wird unter Verwendung einer Waschlösung umfassend einen Alkohol und ein Salz.
27. Methode zur Isolierung eines Plasmid-DNA-Materials gemäß Anspruch 25, dadurch gekennzeichnet, dass der Waschschritt durchgeführt wird unter Verwendung einer Waschlösung umfassend mindestens 30 Vol.-% Alkohol und einen Puffer.
28. Methode zur Isolierung eines Plasmid-DNA-Materials gemäß Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, dass die in Schritt (f) von dem magnetischen Silica-Partikel eluierte Plasmid-DNA im Wesentlichen frei von Verunreinigungen in Form von Makromolekülen oder Metallen ist, die wahrscheinlich mit der weiteren Verarbeitung und Analyse interferieren würden.
29. Ein Kit zur Isolierung eines biologischen Zielmaterials aus einem Medium, umfassend:
DE/EP O 895546T1
ein Aliquot von Siliciumoxid beschichteten magnetischen Partikeln in wässriger Lösung in einem Behälter suspendiert, dadurch gekennzeichnet, dass die Partikel die Kapazität haben, mindestens 2
Mikrogramm des biologischen Zielmatenals pro Milligramm Partikel reversibel zu binden.
30. Ein Kit zur Isolierung eines biologischen Zielmatenals gemäß Anspruch 29, des weiteren umfassend:
ein chaotropes Salz in einem zweiten Behälter; und
eine Waschlösung in einem dritten Behälter.
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