DK142513B - Reagens, især et flydende reagens, som agglutinerer, når det bringes i kontakt med væsker indeholdende human-choriongonadotropin, og fremgangsmåde til fremstilling af reagenset. - Google Patents
Reagens, især et flydende reagens, som agglutinerer, når det bringes i kontakt med væsker indeholdende human-choriongonadotropin, og fremgangsmåde til fremstilling af reagenset. Download PDFInfo
- Publication number
- DK142513B DK142513B DK574776AA DK574776A DK142513B DK 142513 B DK142513 B DK 142513B DK 574776A A DK574776A A DK 574776AA DK 574776 A DK574776 A DK 574776A DK 142513 B DK142513 B DK 142513B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- approx
- reagent
- chorionic gonadotropin
- human chorionic
- buffered
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 61
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 title claims description 26
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 title claims description 24
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 title claims description 24
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 22
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 22
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 22
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 11
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 9
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 9
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 claims description 9
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 8
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 8
- 235000013905 glycine and its sodium salt Nutrition 0.000 claims description 8
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 6
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 3
- CVVIJWRCGSYCMB-UHFFFAOYSA-N hydron;piperazine;dichloride Chemical compound Cl.Cl.C1CNCCN1 CVVIJWRCGSYCMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 claims description 2
- 229940015047 chorionic gonadotropin Drugs 0.000 claims description 2
- XVDIJUOSZVRXCQ-UHFFFAOYSA-M sodium;piperazine;hydroxide;dihydrochloride Chemical compound [OH-].[Na+].Cl.Cl.C1CNCCN1 XVDIJUOSZVRXCQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 16
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 7
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 6
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 4
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000011111 cardboard Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
- Y10S436/817—Steroids or hormones
- Y10S436/818—Human chorionic gonadotropin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
i 142513 o
Den foreliggende opfindelse angår et reagens, især et flydende reagens, som, når det bringes i kontakt med væsker indeholdende human-choriongonadotropin, agglutinerer, som indeholder et bærerstof af polymer latex med en partikelstørrelse 5 mellem ca. 0,15 og ca. 0,9 mikrometer og overtrukket med kanin--antihuman-choriongonadotropinserum, og som er pufret til et pH mellem svagt surt og svagt basisk. Reagenset benyttes til påvisning af svangerskab, hvorved en sådan suspension af polystyrenlatexpartikler, der er sensibiliseret med en 10 globulinfraktion af antiserum over for humanchoriongona- dotropin (HCG), blandes med en urin- eller blodserumprøve, og såfremt den indeholder HCG, vil reagenset agglutinere og derved angive et positivt resultat af svangerskabsprøven.
Human-choriongonadotrop in (HCG) er til stede i gravide 15 kvinders blod og urin. Dette hormon frembringes under dannelsen af fosteret og når sit højeste niveau omkring den 50.-90. dag efter den første dag i sidst indtrufne menstruationscyklus. Påvisningen af HCG som et positivt tegn på svangerskab er dog mulig allerede fra ca. den 40. dag med reagenset ifølge 20 opfindelsen.
Sådanne direkte agglutinationsprøver såvel som den teori, der ligger til grund for deres virkemåde, er velkendte.
Fra US patentskrift nr. 3.873.683 kendes ét flydende 25 reagens, der agglutinerer ved kontakt med væsker indeholdende human-gonadotropin, og som indeholder en polymer latex som bærer med en partikelstørrelse på ca. 0,15 til ca. 0,9 pm og overtrukket med kanin-antihuman-choriongonadotropin-serum, og som eventuelt indeholder merthiolat og er pufret til 3Q svagt surt til svagt basisk pH på 6,0-8,4.
Ved direkte agglutinationsprøver med dette kendte reagens opnås dog kun en følsomhed på 1,25 til 2,5 internat, enh./ml, hvilket er utilstrækkeligt at anse for en pålidelig svangerskabspåvisning. Der består derfor fremdeles behov 25 for at forbedre de kendte reagenser af denne art, således at en påvisning med større følsomhed muliggøres.
O
2 142513
Denne opgave har nu vist sig at kunne løses med tilvejebringelsen af reagenset ifølge opfindelsen, som er ejendommeligt ved, at reagenset er pufret ved hjælp af en puffer, der omfatter ca. 0,005 til ca. 1,0 molær piperazindihydro-5 chlorid, vand og tilstrækkeligt natriumhydroxid til opnåelse af den (ønskede) pufrede pH-værdi fra 5,0 til ca. 8,6.
Med reagenset ifølge opfindelsen kan man opnå en følsomhed på 0,6 til 1,25 i.e./ml.
Som konserveringsmiddel og til at stabilisere rea-10 genset benyttes merthiolat. Tilsætning af glycin og natrium-chlorid forøger den positive prøvereaktion. Derfor foretrækkes ifølge opfindelsen, at reagenset yderligere indeholder amino-eddikesyre, natriumchlorid og merthiolat.
Endvidere foretrækkes ifølge opfindelsen, at bærerstof-15 fet er en polystyrenlatex med en partikelstørrelse på 0,36 mikrometer, at reagenset er puf ret til et pH på 6,4, at det yderligere er fra ca. 0,0025 til ca. 0,1 molær mht. aminoeddikesyre, og at det indeholder fra ca. 1 til ca. 10% natriumchlorid og ca. 1 del merthiolat pr. 5000 dele reagens. Denne partikel-20 størrelse har nemlig vist sig at være optimal, og navnlig ved mindre partikelstørrelser viser bæreren tendens til at klumpe sammen, hvilket gør agglutinationen vanskelig at se.
I øvrigt er det hensigtsmæssigt, at reagenset indeholder 0,5 molær piperazindihydrochlorid-natriumhydroxidpuffer, 25 0,02 molær aminoeddikesyre og 6% natriumchlorid. Disse koncen trationer er optimale for de respektive bestanddele i reagenset, idet brugen af disse mængder giver gode positive resultater, tydelige sondringer eller klare negative resultater samt et minimalt antal ikke-specifikke agglutinationer ved reagensets 30 anvendelse.
Desuden er det fordelagtigt ifølge opfindelsen, at reagenset yderligere indeholder fra ca. 0,5 til ca. 20% saccharose og fra ca. 0,1 til ca. 20% okseserumalbumin. Tilstedeværelsen af saccharose og oksealbumin tillader, at reagenset kan tørres 35 på præparatglas.
3
O
142513
De optimale koncentrationer af saccharose og okseserumal-bumin tillader, at det tørrede reagens let rekonstitueres, når den afprøvede væske tilsættes. Derfor er det fordelagtigt ifølge opfindelsen, at reagenset indeholder ca. 2% sacchrose og 5 ca. 0,5% okseserumalbumin.
Opfindelsen angår desuden en fremgangsmåde til fremstilling af et reagens i en eller flere af ovenstående udførelsesformer, nemlig af den art ved hvilken en bestemt mængde human-choriongonadotropin injiceres i en kanin, som tillades 10 at frembringe antistoffer mod choriongonadotropinet, hvorpå der tappes en del af kaninens blod, som tillades normal sammenløbning, hvorpå serumet adskilles fra blodkagen, og serumets globulindel fældes ved tilsætning af en 35-60% ammoniumsulfatopløsning, og bundfaldet renses til fjernelse 15 af alle spor af ovenpå flydende forureninger og opløses i en fysiologisk kogsaltopløsning, og den herved opnåede glo-bulinopløsning blandes med polystyrenlatexpartikler, der har en størrelse mellem ca. 0,15 og 0,9 mikrometer, og den herved fremkomne blanding inkuberes ved en temperatur på 20 ca. 56°C, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at der tilsættes ca. 0,005 til ca. 1 molar piperazindihydrochlorictouffer med et pH på 5,0 til ca. 8,6 og indeholdende 0,0025-0,1 molær aminoeddikesyre og 1-10 vægtprocent natriumchlorid, at denne blanding inkuberes yderligere et bestemt stykke tid, og at 25 der så sættes ca. 0,5- ca. 20% saccharose og ca. 0,1-ca. 20% okseserumalbumin til blandingen.
Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen foretrækkes det, til fremstilling af et fast reagens, at en bestemt mængde af det således fremstillede reagens anbringes 30 på et engangsobjektglas og derpå tørrer på objektglasset. Denne behandling tillader, at reagenset opbevares på tørre præparatglas ved stuetemperatur. Det flydende reagens skal derimod opbevares ved lavere temperatur end stuetemperatur, f.eks. i køleskab. Tørringsbehandlingen gør også prøven mere 35 bekvem at udføre og dermed reagenset lettere at anvende.
Til yderligere at illustrere reagenset ifølge opfindelsen, dets fremstilling og anvendelse tjener følgende udfø-
O
4 142513 relseseksempler.
Eksempel 1.
Kanin-antihuman-choriongonadotropinglobulin 5 Blod tappes fra kaniner, der i forvejen er sensibili seret over for HCG. Blodet får lov at løbe sammen ved stuetemperatur, hvorpå serumet fjernes fra blodkagen og afkøles til 4°C. Alle reagenser, der anvendes ved fremstillingen, er ligeledes afkølet til 4°C.
10 Serumet fraktioneres ved tilsætning af en mættet ammo niumsulfatopløsning i en sådan mængde, at der fås en 40%'s mættet ammoniumsulfatopløsning efter tilsætningen. Det bundfald, der dannes, når ammoniumsulfatet tilsættes, indeholder anti--HCG og opsamles ved filtrering, centrifugering eller på 15 anden måde, og laget, der flyder ovenpå, kasseres. Bundfaldet gensuspenderes ved vask med 40%'s ammoniumsulfatopløsning for at fjerne alle spor af de ovenpå flydende forureninger. Bundfaldet opsamles igen og opløses i en 0,85 vægtprocents na-triumchloridopløsning i en mængde, der giver en anti-HCG-koncen-20 tration på ca. 40% af den oprindelige koncentration i hele serumet. Denne opløsning renses yderligere ved dialysering i en 0,85%'s natriumchloridopløsning. Det således fremkomne dialysat kan anvendes straks eller fryses ned ved -20°C til senere anvendelse.
25
Eksempel 2.
2%'s polystyrenlatexsuspension
Polystyrenlatexpartikler med en størrelse på mellem ca. 0,15 og 0,9 mikrometer suspenderes i tilstrækkelig 30 destilleret vand til den ønskede koncentration. Selv om det ikke er nødvendigt, er det at foretrække, at koncentrationen bekræftes ved kolorimetrisk standardisering.
5 142513
O
Eksempel 3.
Anti-HCG-latexreagens 25 cm piperazindihydrochloridpuffer med pH 6,4 indeholdende 0,02 molær aminoeddikesyre, 6% natriumchlorid og 5 1:5000 til 1:15000 merthiolat (thimerosal) sættes til 25 cm^ destilleret vand og forvarmes til 50°C. 50 cnr* af den i eksempel 2 fremstillede latexsuspension sættes hurtigt til ca. 8 cm anti-HCG-globulin fremstillet som beskrevet i eksempel 1, og blandingen inkuberes ved 56°C i ca. to timer.
10 Den forvarmede puffer tilsættes dernæst, og hele blandingen inkuberes i yderligere en halv time. Efter inkubering tilsættes der saccharose i en mængde på ca. 0,5 til ca. 20%, fortrinsvis 1-3%, samt okseserumalbumin i en mængde på ca.
0,1 til ca. 20%, fortrinsvis ca. 0,1 til ca. 1,0%, 15 til reagenset. Efter omhyggelig blanding afkøles reagenset og opbevares ved 4°C. Det således fremstillede reagens er stabilt i op til tre år ved 4°C.
Det mættede ammoniumsulfat, der udfælder antiseruuet 20 over for HCG (eksempel 1), kan tilsættes i sådanne mængder, at den ved kombination med serumet fremkomne koncentration ligger mellem 33 og 60% mættet, fortrinsvis mellem 40 og 50% mættet.
Temperaturen på 56°C, hvorved latexen inkuberes i eksempel 3, foretrækkes, men er ikke afgørende og kan varie-25 res til begge sider med justeringer foretaget i løbet af in-kuberingen, dvs. at denne forlænges ved lavere temperaturer og forkortes ved højere temperaturer.
Mængden af anti-HCG, der sættes til latexen i eksempel 3, reguleres således, at partiklerne netop er helt dækket.
3ø Dette eliminerer behovet for gentagen vask for at fjerne ethvert overskud af uadsorberet globulin fra reagenset.
Puffersystemet (eksempel 3), der anvendes i reagenssystemet, tillader, at reagenset kan anvendes til svangerskabspåvisning såvel på serum som på urin. Endvidere nedsæt-35 ter det forkerte positive reaktioner på grund af rheumatoid-faktoren i sera til et minimum. Endelig tillader det også, at der foretages svangerskabsprøver på urinprøver der inde-
O
6 142513 holder varierende mængder blod og protein.
Tilsætningen af saccharosen i okseserumalbumin (eksempel 3) har vist sig ikke blot at give et bedre præparat til adskillelse af positive og negative reaktioner, men 5 den tillader også, at reagenset anbringes på kort og tørres, hvorved der sikres endnu længere reagensstabilitet ved stuetemperatur .
Eksempel 4.
10 Tørrede prøvekort 50 lambda reagenssuspension fremstillet som beskrevet i eksempel 3, anbringes på præparat"glas", der kan være af glas, plastik, pap eller andet materiale. Dette reagens får lov at tørre ved stuetemperatur, hvorefter det er parat til 15 anvendelse ved den svangerskabsprøve, der er beskrevet i eksempel 5.
Eksempel 5.
Svangerskabsprøveteknik 20 Urin opsamles fra patienten og filtreres på gængs måde for at fjerne forurenende materiale.
En dråbe filtreret urin anbringes på et klart præparatglas og blandes med en dråbe af latexreagenset fremstillet som beskrevet i eksempel 3. Glasset bevæges let frem og til-25 bage i ca. to minutter. Hvis urinprøven indeholder HCG, dannes der adskilte partikler eller klumper af latex, der er skelnelige med det blotte øje; hvis urinen ikke indeholder HCG, fremtræder latexen vedblivende som en ensartet suspension.
Der kan naturligvis anvendes serum ved ovennævnte frem-30 gangsmåde i stedet for filtreret urin. Urin- eller serumdråben kan ligeledes anbringes på prøvekort fremstillet som beskrevet i eksempel 4 i stedet for på klare præparatglas, hvorved man ikke behøver at tilsætte en dråbe latexreagens.
7 142513
O
Prøver fra 215 gravide og 414 ikke-gravide kvinders urin undersøges under anvendelse af reagenset ifølge opfindelsen. Kvinderne går normalt svangerskabstid, hvorved ses at de opnåede resultater for 99,3%'s vedkommende var korrekte.
5 Reagenset ifølge opfindelsen har ligeledes vist sig (eksempel 6) at vare følsomt over for så lidt som 1,0 i.e. (internationale enheder) HCG pr. ml urin.
Eksempel 6.
10 Sammenligning med i handelen varende reagenser til svangerskabspåvisninq 13 i handelen værende reagenser til svangerskabspåvisning bedømmes med hensyn til følsomhed, idet der anvendes kendte mængder af human-choriongonadotropin (HCG) opløst i urin 15 fra en ikke-gravid kvinde. 7 er baseret på princippet om inhibering af latexagglutination (indirekte præparatglas--prøver), 1 er en reagensglasprøve, der anvender samme princip, 3 er baseret på princippet om passiv haemagglutinations-inhibering (HAI) og 3, herunder reagenset ifølge opfindelsen, er 20 baseret på direkte agglutinering af latex.
Human-choriongonadotropin (HCG):Præparat A uden urin, Division Biological Standards, National Institute of Health, Bethesda, Maryland. Indholdet af en ampul indeholdende 5000 i.e. HCG opløses i 5 ml destilleret vand, hvilket gi-25 ver en koncentration på 1000 i.e./ml. Der fremstilles yderligere fortyndinger in duplo i filtreret urin fra ikke-gravide kvinder til koncentrationer varierende fra 10 i.e./ml til 0,6 i.e./ml. På denne måde indeholdes der kendte koncentrationer af HCG på forskellige niveauer.
3q Urin fra ikke-gravide kvinder opsamles og filtreres gennem "Whatman 42" & "DE81"-papir. En alikvot mængde af hver sættes til side som "negativ" kontrol for svangerskabsprøverne, og resten anvendes til fremstilling af fortyndinger af HCG.
35 Som vist i tabel I varierer den fundne følsomhed, idet der anvendes National Institute of Health-standard for HCG, fra 0,6 til 5 i.e./ml.
O
8 142513
Tabel I
Svangerskabsprøvers følsomhed
Anført følsomhed Fundet følsomhed Navn_Type_(i.e./ml)_(i.e./ml) A LDS1 2 3 ikke anført 3-4 B LIS2 1,5-2,5 2,5-5 10 C LIS 2 2,5-5 D LIS 3 2,5-5 E LIS 3,5 2,5-5 F LIS 1-2 1,25-2,5 G LIS 1-2 1,25-2,5 15 H LIT3 1 <0,6 I LDS4 2 1,25-2,5
If3?‘ , LDS 1 0,6-1,25 opfindelse .
J HAI5 0,75 0,6-1,25 K HAI 0,75 ^0,6 20 L HAI 1 <0,6 direkte objektglas-latexprøve 2 indirekte objektglas-latexprøve 3 indirekte reagensglas-latexprøve 4
Ifølge US patent nr. 3.873.683 5 25 4) hæmagglutinationsinhibering (reagensglasprøve)
Claims (7)
142513 O Patentkrav.
1. Reagens, især et flydende reagens, som, når det bringes i kontakt med væsker indeholdende human-choriongonadotropin, 5 agglutinerer, som indeholder et bærerstof af polymer latex med en partikelstørrelse mellem ca. 0,15 og ca. 0,9 mikrometer og overtrukket med kanin-antihuman-choriongonadotropinserum, og som er pufret til et pH mellem svagt surt og svagt basisk, kendetegnet ved, at reagenset er pufret ved hjælp ]_g af en puffer, der omfatter ca. 0,005 til ca. 1,0 molær pipera-zindihydrochlorid, vand og tilstrækkeligt natriumhydroxid til opnåelse af den (ønskede) pufrede pH-værdi fra 5,0 til ca. 8,6.
2. Reagens ifølge krav 1, kendetegnet 15 ved, at det yderligere indeholder aminoeddikesyre, natrium-chlorid og merthiolat.
3. Reagens ifølge krav 2, kendetegnet ved, at bærerstoffet er en polystyrenlatex med en partikelstørrelse på 0,36 mikrometer, at det er pufret til et pH på 6,4, at 20 det yderligere er fra ca. 0,0025 til ca. 0,1 molær mht. aminoeddikesyre, og at det indeholder fra ca. 1 til ca. 10% natriumchlorid og ca. 1 del merthiolat pr. 5000 dele reagens.
4. Reagens ifølge krav 3, kendetegnet ved, at det indeholder 0,5 molær piperazindihydrochlorid-natriumhy- 25 droxidpuffer, 0,02 molær aminoeddikesyre og 6% natriumchlorid.
5. Reagens ifølge ethvert af kravene 2-4, kendetegnet ved, at det yderligere indeholder fra ca. 0,5 i til ca. 20% saccharose og fra ca. 0,1 til ca. 20% okseserum-albumin. 3Q 6. Reagens ifølge krav 5, kendetegnet ved, at det indeholder ca. 2% saccharose og ca. 0,5% okseserum-albumin.
7. Fremgangsmåde til fremstilling af et reagens ifølge ethvert af kravene 1-6, ved hvilken en bestemt mængde human- 35 -choriongonadotropin injiceres i en kanin, som tillades at frembringe antistoffer mod choriongonadotropinet, hvorpå der tappes en del af kaninens blod, som tillades normal sammenløbning, hvorpå serumet adskilles fra blodkagen, og seru-mets globulindel fældes ved tilsætning af en 35-60% ammo-
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/691,915 US4003988A (en) | 1976-06-01 | 1976-06-01 | Direct agglutination test for pregnancy |
| US69191576 | 1976-06-01 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK574776A DK574776A (da) | 1977-12-02 |
| DK142513B true DK142513B (da) | 1980-11-10 |
| DK142513C DK142513C (da) | 1981-07-13 |
Family
ID=24778485
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK574776AA DK142513B (da) | 1976-06-01 | 1976-12-21 | Reagens, især et flydende reagens, som agglutinerer, når det bringes i kontakt med væsker indeholdende human-choriongonadotropin, og fremgangsmåde til fremstilling af reagenset. |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4003988A (da) |
| JP (1) | JPS52148618A (da) |
| AR (1) | AR210183A1 (da) |
| AT (1) | AT349650B (da) |
| AU (1) | AU505765B2 (da) |
| BE (1) | BE849085A (da) |
| CA (1) | CA1083957A (da) |
| CH (1) | CH631266A5 (da) |
| DE (1) | DE2651139C3 (da) |
| DK (1) | DK142513B (da) |
| ES (1) | ES453609A1 (da) |
| FR (1) | FR2353858A1 (da) |
| GB (1) | GB1561920A (da) |
| IE (1) | IE44204B1 (da) |
| IT (1) | IT1066737B (da) |
| LU (1) | LU76374A1 (da) |
| NL (1) | NL7613350A (da) |
| NO (1) | NO148200C (da) |
| SE (1) | SE422501B (da) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4092114A (en) * | 1976-10-20 | 1978-05-30 | Fisher Scientific Company | Indirect latex test for determination of immunoglobulins |
| US4197088A (en) * | 1977-09-23 | 1980-04-08 | Akro-Medic Engineering, Inc. | Method for qualitative and quantitative determination of immunological reactions |
| US4411518A (en) * | 1977-09-23 | 1983-10-25 | Gamma Biologicals, Inc. | Apparatus for use in qualitative determination of immunological reactions |
| JPS5816471B2 (ja) * | 1977-11-29 | 1983-03-31 | 持田製薬株式会社 | 免疫化学的測定試薬の安定化剤 |
| US4138214A (en) * | 1977-12-19 | 1979-02-06 | American Home Products Corporation | Diagnostic test utilizing human chorionic gonadotropin |
| JPS55166028A (en) * | 1979-06-13 | 1980-12-24 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Optical measurement of liquid sample |
| US4259207A (en) * | 1979-09-19 | 1981-03-31 | American Hospital Supply Corporation | Suspending medium for immunologic reactions |
| US4340564A (en) * | 1980-07-21 | 1982-07-20 | Daryl Laboratories, Inc. | Immunoadsorptive surface coating for solid-phase immunosubstrate and solid-phase immunosubstrate |
| US4348207A (en) * | 1981-01-29 | 1982-09-07 | Cooper Laboratories, Inc. | Method and means for determination of pregnancy |
| IL63855A (en) * | 1981-09-16 | 1984-10-31 | Teva Pharma | Method and kit for detecting pregnancy |
| US4543339A (en) * | 1982-03-16 | 1985-09-24 | Oneill Christopher | Early pregnancy detection by detecting enhanced blood platelet activation |
| US4542103A (en) * | 1982-09-13 | 1985-09-17 | Miles Laboratories Inc. | Latex agglutination determination of IgG in neonatals and in colostrum |
| DE3303083A1 (de) * | 1983-01-31 | 1984-08-02 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Immunologisches latex-agglutinationsverfahren und mittel |
| US4720465A (en) * | 1985-05-14 | 1988-01-19 | Fisher Scientific Company | Centrifugal kinetic agglutination assay |
| JPH0827283B2 (ja) * | 1986-03-10 | 1996-03-21 | 財団法人化学及血清療法研究所 | 免疫凝集反応用組成物 |
| IT1223295B (it) | 1987-08-14 | 1990-09-19 | Boehringer Biochemia Srl | Dispositivo e metodo immunodiagnostico |
| US5900379A (en) * | 1996-04-11 | 1999-05-04 | Mizuho Usa, Inc. | Analytical device |
| US7410807B2 (en) * | 2000-07-24 | 2008-08-12 | D Aurora Vito J | Pregnancy and sex identification test based on saliva or other bodily fluids |
| US7705335B2 (en) * | 2007-03-16 | 2010-04-27 | Parttec, Ltd. | Security protection device and method |
| CN104155458A (zh) * | 2013-11-27 | 2014-11-19 | 新昌县美迪生物科技有限公司 | 人绒毛膜促性腺激素定量检测试剂盒及其用途 |
| US20150044707A1 (en) | 2014-02-18 | 2015-02-12 | Melinda Sanders | At-Home Blood Pregnancy Test Kit |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3088875A (en) * | 1959-10-27 | 1963-05-07 | Hyland Lab | Immunological diagnostics utilizing polystyrene latex particles of 0.15 to 0.25 micron |
| NL266403A (da) * | 1960-06-28 | |||
| US3236732A (en) * | 1962-01-22 | 1966-02-22 | Edward R Arquilla | Pregnancy test method and immunological indicator therefor |
| BE613680A (da) * | 1961-03-07 | |||
| US3171783A (en) * | 1962-08-15 | 1965-03-02 | Hyland Lab | Diagnostic procedure |
| NL302503A (da) * | 1962-12-28 | |||
| FR1411279A (fr) * | 1963-08-23 | 1965-09-17 | Ortho Pharma Corp | Procédé de fabrication d'un réactif pour la détection de la gonadotrophine chorionique humaine dans l'urine dans le test d'inhibition sérologique et procédé de détection de la gch dans l'urine par utilisation de ce réactif |
| NL132816C (da) * | 1963-08-23 | |||
| GB1078939A (en) * | 1964-08-12 | 1967-08-09 | Pfizer & Co C | Diagnostic reagent |
| NL125235C (da) * | 1965-04-15 | |||
| NL130516C (da) * | 1966-11-08 | |||
| US3873683A (en) * | 1968-12-10 | 1975-03-25 | Princeton Lab Inc | Pregnancy test composition and method |
| US3655838A (en) * | 1969-03-20 | 1972-04-11 | Organon | Method of pelletizing analytical or immunological reagents |
-
1976
- 1976-06-01 US US05/691,915 patent/US4003988A/en not_active Expired - Lifetime
- 1976-11-02 IE IE2437/76A patent/IE44204B1/en unknown
- 1976-11-09 DE DE2651139A patent/DE2651139C3/de not_active Expired
- 1976-11-11 IT IT52135/76A patent/IT1066737B/it active
- 1976-11-11 AU AU19546/76A patent/AU505765B2/en not_active Expired
- 1976-11-19 NO NO763966A patent/NO148200C/no unknown
- 1976-11-23 GB GB48765/76A patent/GB1561920A/en not_active Expired
- 1976-11-23 AR AR265572A patent/AR210183A1/es active
- 1976-11-24 ES ES453609A patent/ES453609A1/es not_active Expired
- 1976-11-26 CH CH1494076A patent/CH631266A5/de not_active IP Right Cessation
- 1976-11-30 NL NL7613350A patent/NL7613350A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-11-30 FR FR7636035A patent/FR2353858A1/fr active Granted
- 1976-12-03 BE BE6045785A patent/BE849085A/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-12-07 CA CA267,319A patent/CA1083957A/en not_active Expired
- 1976-12-13 LU LU76374A patent/LU76374A1/xx unknown
- 1976-12-16 JP JP15144576A patent/JPS52148618A/ja active Pending
- 1976-12-21 DK DK574776AA patent/DK142513B/da not_active IP Right Cessation
- 1976-12-22 AT AT955076A patent/AT349650B/de not_active IP Right Cessation
- 1976-12-30 SE SE7614724A patent/SE422501B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES453609A1 (es) | 1978-03-16 |
| SE7614724L (sv) | 1977-07-07 |
| AT349650B (de) | 1979-04-10 |
| LU76374A1 (da) | 1977-06-10 |
| DE2651139B2 (de) | 1978-11-23 |
| CA1083957A (en) | 1980-08-19 |
| NO763966L (no) | 1977-12-02 |
| IE44204L (en) | 1977-12-01 |
| DE2651139C3 (de) | 1979-07-26 |
| CH631266A5 (de) | 1982-07-30 |
| FR2353858B1 (da) | 1980-08-29 |
| NL7613350A (nl) | 1977-12-05 |
| SE422501B (sv) | 1982-03-08 |
| AU505765B2 (en) | 1979-11-29 |
| JPS52148618A (en) | 1977-12-10 |
| IE44204B1 (en) | 1981-09-09 |
| BE849085A (fr) | 1977-06-03 |
| AU1954676A (en) | 1978-05-18 |
| ATA955076A (de) | 1978-09-15 |
| IT1066737B (it) | 1985-03-12 |
| DK142513C (da) | 1981-07-13 |
| FR2353858A1 (fr) | 1977-12-30 |
| AR210183A1 (es) | 1977-06-30 |
| US4003988A (en) | 1977-01-18 |
| NO148200C (no) | 1983-08-24 |
| GB1561920A (en) | 1980-03-05 |
| DK574776A (da) | 1977-12-02 |
| DE2651139A1 (de) | 1977-12-15 |
| NO148200B (no) | 1983-05-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4003988A (en) | Direct agglutination test for pregnancy | |
| US4248965A (en) | Immunochemical process of measuring physiologically active substances | |
| Fagraeus et al. | Mixed haemadsorption: A mixed antiglobulin reaction applied to antigens on a glass surface: Preparation and evaluation of indicator red cells; survey of present applications | |
| US4259207A (en) | Suspending medium for immunologic reactions | |
| Kaplan | Cryoglobulinemia in infectious mononucleosis: quantitation and characterization of the cryoproteins | |
| Ingraham | The preparation and use of formalinized erythrocytes with attached antigens or haptens to titrate antibodies | |
| Brinkman et al. | Alkaline resistance and spreading velocity of foetal and adult types of mammalian haemoglobin | |
| Vaughan et al. | Quantitative considerations of the rheumatoid factor | |
| CA1168580A (en) | Immunological reagent for the detection of tubes of the rheumatoid factor in a biological specimen and process for preparing this novel reagent | |
| Pondman et al. | The specificity of the complement antiglobulin test | |
| US4307071A (en) | Analytical reagent and method | |
| Richard-Lenoble et al. | Human hydatidosis: evaluation of three serodiagnostic methods, the principal subclass of specific immunoglobulin and the detection of circulating immune complexes | |
| CA1114743A (en) | Erythrocytes selectively sensitized with c3 complement component | |
| Peterson et al. | Sudden infant death syndrome and hypertriiodothyroninemia: Comparison of neonatal and postmortem measurements | |
| Epstein et al. | Naturally-occurring macroglobulin antibody of foetal origin in the normal human newborn | |
| US3840655A (en) | Diagnostic methods and reagents for infectous mononucleosis | |
| US4331649A (en) | Immune complex assay | |
| CA2495728C (en) | Method for the detection of antibodies and/or antigens in a test liquid, particularly for determining the blood group | |
| Gonyea et al. | Comparison of three procedures for isolating human ferritin, for use as a standard in an immunoradiometric assay. | |
| Lippes et al. | Human oviductal fluid proteins. II. Preparation of an antiserum to a human oviductal fluid protein: existence of autoantibodies against it in some sera | |
| CN113219183B (zh) | 一种液态胶血型检测卡、制备方法及血型检测系统 | |
| US3697639A (en) | Serological test for the detection of hepatitis | |
| US4540565A (en) | Reduced IgG in low ionic strength medium for immunohematologic agglutination | |
| Steinberg et al. | Agglutination of circulating leukocytes by antileukocytic sera | |
| RU2021815C1 (ru) | Способ диагностики алеутской болезни норок |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |