JPH0827283B2 - 免疫凝集反応用組成物 - Google Patents
免疫凝集反応用組成物Info
- Publication number
- JPH0827283B2 JPH0827283B2 JP61052890A JP5289086A JPH0827283B2 JP H0827283 B2 JPH0827283 B2 JP H0827283B2 JP 61052890 A JP61052890 A JP 61052890A JP 5289086 A JP5289086 A JP 5289086A JP H0827283 B2 JPH0827283 B2 JP H0827283B2
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- Japan
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- carrier
- freeze
- stabilizer
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は間接担体凝集反応、凝集抑制反応等の抗原−
抗体凝集反応に用いる、抗原（または抗体）感作担体を
含む水性組成物、特に長期間にわたり安定的に使用でき
るように改良されたそのような組成物に関する。
抗体凝集反応に用いる、抗原（または抗体）感作担体を
含む水性組成物、特に長期間にわたり安定的に使用でき
るように改良されたそのような組成物に関する。
検体中の抗原または抗体の測定を、対応する抗体また
は抗原を感作した感作担体と検体との凝集反応によって
行う、いわゆる間接担体凝集反応はすでに確立されてい
る方法である。
は抗原を感作した感作担体と検体との凝集反応によって
行う、いわゆる間接担体凝集反応はすでに確立されてい
る方法である。
この方法は、操作が簡便で、判定が容易、短時間で判
定可能、比較的高感度、再現性が高い、経費が少なくて
済む、特別な機器がが不要でどこでも手軽に実施でき
る、などの種々の利点により広く一般に利用されてい
る。
定可能、比較的高感度、再現性が高い、経費が少なくて
済む、特別な機器がが不要でどこでも手軽に実施でき
る、などの種々の利点により広く一般に利用されてい
る。
一般に、抗原または抗体を感作させる担体としては、
哺乳類または鳥類由来の固定または固定しない赤血球、
あるいはラテックス、スチレン重合体、ゼラチン、エポ
キシ樹脂、セルロース樹脂、活性炭末などの人工担体が
用いられる。赤血球の固定は、一般に、ホルムアルデヒ
ド、グルタルアルデヒド、ピルビンアルデヒド等のアル
デヒド類で行われ、その保存性を高めるためである。こ
れらの担体に抗原あるいは抗体を感作した感作担体の水
性浮遊液は、一応の保存安定性を有し、およそ２〜３ヶ
月は使用可能である。しかしながら、感作担体を工業的
に製造するためには、１年以上の保存安定性が要求され
ている。
哺乳類または鳥類由来の固定または固定しない赤血球、
あるいはラテックス、スチレン重合体、ゼラチン、エポ
キシ樹脂、セルロース樹脂、活性炭末などの人工担体が
用いられる。赤血球の固定は、一般に、ホルムアルデヒ
ド、グルタルアルデヒド、ピルビンアルデヒド等のアル
デヒド類で行われ、その保存性を高めるためである。こ
れらの担体に抗原あるいは抗体を感作した感作担体の水
性浮遊液は、一応の保存安定性を有し、およそ２〜３ヶ
月は使用可能である。しかしながら、感作担体を工業的
に製造するためには、１年以上の保存安定性が要求され
ている。
そこで、感作担体の水性浮遊液を凍結乾燥し、更に保
存安定性を延ばそうという試みがなされている。しかし
ながら、水性浮遊液の状態で凍結乾燥を行うと、凍結乾
燥しないものと比べて凍結乾燥後は、外見の形状の悪化
（縮まった状態、カルメラ状etc）、反応パターンの悪
化、保存安定性が良くない、再現性が悪い等の問題が生
ずる。これは明らかに凍結乾燥工程が感作担体に悪影響
を与えるためと思われる。
存安定性を延ばそうという試みがなされている。しかし
ながら、水性浮遊液の状態で凍結乾燥を行うと、凍結乾
燥しないものと比べて凍結乾燥後は、外見の形状の悪化
（縮まった状態、カルメラ状etc）、反応パターンの悪
化、保存安定性が良くない、再現性が悪い等の問題が生
ずる。これは明らかに凍結乾燥工程が感作担体に悪影響
を与えるためと思われる。
従って、凍結乾燥を行わなくて済むか、あるいは凍結
乾燥しても凍結乾燥前後で反応パターンに変化がなく、
外見の形状も良く、更に１年以上安定的に使用できるよ
うな感作担体の浮遊液が要求されている。
乾燥しても凍結乾燥前後で反応パターンに変化がなく、
外見の形状も良く、更に１年以上安定的に使用できるよ
うな感作担体の浮遊液が要求されている。
本発明者らは、鋭意研究した結果、感作担体の水性浮
遊液即ち懸濁液に特定量の糖、さらに選択的にアルブミ
ンを存在させることによって、上記問題点を一挙に解決
しうることを見出し、本発明を完成するに至った。
遊液即ち懸濁液に特定量の糖、さらに選択的にアルブミ
ンを存在させることによって、上記問題点を一挙に解決
しうることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、間接担体凝集反応、凝集抑制反
応等の抗原−抗体凝集反応に用いる感作担体の水性浮遊
液を製造する際に、感作担体の保存安定性を高める目的
で感作担体水性浮遊液中に特定の安定剤物質を特定量で
添加して改良された保存安定性の高い感作担体含有水性
組成物を提供することにある。
応等の抗原−抗体凝集反応に用いる感作担体の水性浮遊
液を製造する際に、感作担体の保存安定性を高める目的
で感作担体水性浮遊液中に特定の安定剤物質を特定量で
添加して改良された保存安定性の高い感作担体含有水性
組成物を提供することにある。
そのような特定量の特定の安定剤とは、２〜20W/V％
のラクトースである。このラクトースは、約2W/V％より
少ないと保存安定性を高める効果は弱く、20W/V％より
多いと外見が非常に悪くなる傾向があり、また、粘度の
増大あるいは溶解が困難となり、本発明の目的に適さな
い。特に好ましいラクトース濃度は、５〜10W/V％であ
る。
のラクトースである。このラクトースは、約2W/V％より
少ないと保存安定性を高める効果は弱く、20W/V％より
多いと外見が非常に悪くなる傾向があり、また、粘度の
増大あるいは溶解が困難となり、本発明の目的に適さな
い。特に好ましいラクトース濃度は、５〜10W/V％であ
る。
また、選択的に前記ラクトースにアルブミンを添加す
ることにより、ラクトース単味添加の場合と比べて、そ
の効果は更に増幅される。この増幅効果はラクトースと
アルブミンの好ましい濃度の組合せにおいて特に顕著で
ある。最も好ましいアルブミンの濃度は、５〜10W/V％
のラクトースに対して0.05〜1W/V％である。使用される
アルブミンは、ヒド、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ウサ
ギ、ニワトリ由来などのいずれを用いてもよいが、とり
わけ、ウシ又はヒトの血清アルブミンを使用することが
好都合である。
ることにより、ラクトース単味添加の場合と比べて、そ
の効果は更に増幅される。この増幅効果はラクトースと
アルブミンの好ましい濃度の組合せにおいて特に顕著で
ある。最も好ましいアルブミンの濃度は、５〜10W/V％
のラクトースに対して0.05〜1W/V％である。使用される
アルブミンは、ヒド、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ウサ
ギ、ニワトリ由来などのいずれを用いてもよいが、とり
わけ、ウシ又はヒトの血清アルブミンを使用することが
好都合である。
感作担体を0.5〜10W/V％の割合に含有する水性浮遊液
に、上記の安定剤を添加しよく混和後、バイアルに分注
し、そのまま保存してもよいが、さらに好ましいのは、
このバイアルを、前もって−40〜−45℃程度に冷却して
おいた凍結乾燥機のチャンバー内の棚にいれ、24時間か
ら48時間にわたって真空凍結乾燥する。その後、真空状
態または窒素ガスを充填したのち封栓をして、凍結乾燥
担体ができあがる。
に、上記の安定剤を添加しよく混和後、バイアルに分注
し、そのまま保存してもよいが、さらに好ましいのは、
このバイアルを、前もって−40〜−45℃程度に冷却して
おいた凍結乾燥機のチャンバー内の棚にいれ、24時間か
ら48時間にわたって真空凍結乾燥する。その後、真空状
態または窒素ガスを充填したのち封栓をして、凍結乾燥
担体ができあがる。
凍結乾燥感作担体は、水または適当な希釈液を加えて
復元し、そのままの濃度で、あるいは必要に応じて希釈
により濃度を調整して、間接担体凝集反応等に用いるこ
とが出来る。
復元し、そのままの濃度で、あるいは必要に応じて希釈
により濃度を調整して、間接担体凝集反応等に用いるこ
とが出来る。
本発明による安定剤を用いて凍結乾燥した感作担体
は、４℃保存２年間以上にわたって使用可能である。
は、４℃保存２年間以上にわたって使用可能である。
本発明による安定剤の添加は、感作担体だけではな
く、固定血球を担体として使用した場合には担体そのも
のの保存安定性を高め得る。従って、本発明は担体とし
て血球を使用する場合に極めて有利に適用できる。ま
た、感作担体浮遊体に本発明による安定剤を添加したま
まの状態、即ち凍結乾燥を行わず液体状態のままで保存
した場合においても、感作担体は少なくとも４℃、６ヶ
月は充分安定的に使用可能であり、凍結乾燥による不都
合を避けなければならない用途には極めて有効である。
く、固定血球を担体として使用した場合には担体そのも
のの保存安定性を高め得る。従って、本発明は担体とし
て血球を使用する場合に極めて有利に適用できる。ま
た、感作担体浮遊体に本発明による安定剤を添加したま
まの状態、即ち凍結乾燥を行わず液体状態のままで保存
した場合においても、感作担体は少なくとも４℃、６ヶ
月は充分安定的に使用可能であり、凍結乾燥による不都
合を避けなければならない用途には極めて有効である。
かくして、本発明によれば、優れた品質を長期間安定
的に保持することの出来る感作担体を工業的に生産する
ことが可能となり、病院や臨床検査センター等の日常の
臨床検査業務用として安価に供給できる。
的に保持することの出来る感作担体を工業的に生産する
ことが可能となり、病院や臨床検査センター等の日常の
臨床検査業務用として安価に供給できる。
担体に感作する物質としては、何らかの方法で担体に
感作できるものであれば全ての抗原性物質、抗体を対象
とできる。
感作できるものであれば全ての抗原性物質、抗体を対象
とできる。
また感作担体を浮遊させる溶液は、感作担体に悪影響
を及ぼさないものであればいかなるものでもよく、一般
的には生理食塩液、PBS（リン酸緩衝食塩液）などが使
用できる。
を及ぼさないものであればいかなるものでもよく、一般
的には生理食塩液、PBS（リン酸緩衝食塩液）などが使
用できる。
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明す
る。
る。
実施例 １ 〔羊赤血球の固定〕 羊の血液を100ml採血し、オルセバ液100mlと混合し、
ガーゼ濾過し、ヘマトクリットによリ血球の濃度を測定
した。生理食塩液で５回洗浄し、その後“Methods in l
mmunology and lmmuno chemistry,vol.VI pp.33〜34 19
77年（WILLIAMS,CHASE編 Academic Press New York）”
のAbram B,Stavitskyの記載に従い、ホルマリン固定羊
血球を調製した。
ガーゼ濾過し、ヘマトクリットによリ血球の濃度を測定
した。生理食塩液で５回洗浄し、その後“Methods in l
mmunology and lmmuno chemistry,vol.VI pp.33〜34 19
77年（WILLIAMS,CHASE編 Academic Press New York）”
のAbram B,Stavitskyの記載に従い、ホルマリン固定羊
血球を調製した。
すなわち、洗浄遠心した赤血球の沈澱の８倍量の冷3V
/V％ホルムアルデヒド生理食塩液を加え４℃24時間ゆっ
くり撹はんする。さらにその２倍量の冷40V/V％ホルム
アルデヒド生理食塩液を加え24時間撹はんした。次い
で、赤血球をガーゼで濾過し、生理食塩液で８回洗浄
し、PBS（M/15リン酸緩衝食塩液pH7.2）で2.5V/V％にな
るように懸濁し、窒化ソーダ0.1W/％を加え４℃にて保
存した。
/V％ホルムアルデヒド生理食塩液を加え４℃24時間ゆっ
くり撹はんする。さらにその２倍量の冷40V/V％ホルム
アルデヒド生理食塩液を加え24時間撹はんした。次い
で、赤血球をガーゼで濾過し、生理食塩液で８回洗浄
し、PBS（M/15リン酸緩衝食塩液pH7.2）で2.5V/V％にな
るように懸濁し、窒化ソーダ0.1W/％を加え４℃にて保
存した。
上記で調製した固定羊赤血球をさらにPBSで２回洗浄
し、PBS中赤血球濃度が2.5V/V％になるように懸濁し
た。“Methods in lmmunology and immunochemistry,vo
l.IV pp.36"（前出）を参考に、抗原を固定羊赤血球に
感作した。抗原としては生化学工業（株）より購入した
サイログロブリンを用いた。すなわち、タンニン酸をPB
Sで0.001W/V％に希釈し、600mlの2.5V/V％羊固定赤血球
と等量混合し、37℃45分反応させた。その後、PBSで３
回洗浄し、600mlのPBSに再懸濁した。このタンニン酸処
理赤血球600mlにサイログロブリンの50μg/mlPBS溶液60
0mlを加え、37℃30分感作した。PBSで３回洗浄したの
ち、0.1W/V％窒化ソーダを含むPBS1500mlで懸濁し間接
担体凝集反応用のサイログロブリン感作血球を1V/V％濃
度で1500ml得た。
し、PBS中赤血球濃度が2.5V/V％になるように懸濁し
た。“Methods in lmmunology and immunochemistry,vo
l.IV pp.36"（前出）を参考に、抗原を固定羊赤血球に
感作した。抗原としては生化学工業（株）より購入した
サイログロブリンを用いた。すなわち、タンニン酸をPB
Sで0.001W/V％に希釈し、600mlの2.5V/V％羊固定赤血球
と等量混合し、37℃45分反応させた。その後、PBSで３
回洗浄し、600mlのPBSに再懸濁した。このタンニン酸処
理赤血球600mlにサイログロブリンの50μg/mlPBS溶液60
0mlを加え、37℃30分感作した。PBSで３回洗浄したの
ち、0.1W/V％窒化ソーダを含むPBS1500mlで懸濁し間接
担体凝集反応用のサイログロブリン感作血球を1V/V％濃
度で1500ml得た。
上で得たサイログロブリン感作血球1V/V％浮遊液に、
第１表の各安定剤を加えて、凍結乾燥用10mlバイアルに
2.5mlずつ分注し、前もって−45℃に冷却しておいた真
空凍結乾燥機のチャンバー内に入れ、−50℃で２時間、
−50℃〜＋15℃で10時間、＋20℃で12時間の温度推移で
凍結乾燥した。乾燥終了後バイアル内に窒素ガスを充填
したのち封栓した。かくして得られた凍結乾燥感作血球
の性状を比較した結果を第１表に示す。なお、乾燥後の
外見は縮んだ形態の程度で判定した。反応パターンは、
各々の凍結乾燥感作血球に水2.5mlを加えて1V/V％感作
血球浮遊液に復元したものを用いて、抗サイログロブリ
ン抗体陽性血清および陰性血清を検体として、常法に従
って間接担体（血球）凝集反応を行ったときの陽性パタ
ーン、陰性パターンより判定した。×と判定したもの
は、陰性パターンの陽性化がみられたものである。反応
パターンについては、その安定性を経時的に試験した。
その結果、第１表で有効性○としたサンプルは、保存安
定性が著しく向上したものである。
第１表の各安定剤を加えて、凍結乾燥用10mlバイアルに
2.5mlずつ分注し、前もって−45℃に冷却しておいた真
空凍結乾燥機のチャンバー内に入れ、−50℃で２時間、
−50℃〜＋15℃で10時間、＋20℃で12時間の温度推移で
凍結乾燥した。乾燥終了後バイアル内に窒素ガスを充填
したのち封栓した。かくして得られた凍結乾燥感作血球
の性状を比較した結果を第１表に示す。なお、乾燥後の
外見は縮んだ形態の程度で判定した。反応パターンは、
各々の凍結乾燥感作血球に水2.5mlを加えて1V/V％感作
血球浮遊液に復元したものを用いて、抗サイログロブリ
ン抗体陽性血清および陰性血清を検体として、常法に従
って間接担体（血球）凝集反応を行ったときの陽性パタ
ーン、陰性パターンより判定した。×と判定したもの
は、陰性パターンの陽性化がみられたものである。反応
パターンについては、その安定性を経時的に試験した。
その結果、第１表で有効性○としたサンプルは、保存安
定性が著しく向上したものである。
実施例 ２ 実施例１で作製したサイログロブリン感作血球1V/V％
浮遊液に、第２表で示すような各々の安定剤を加えて、
以下実施例１と同様にして凍結乾燥し、作製した凍結乾
燥感作血球の性状を実施例１と同様にして比較した結果
を第２表に示す。第１表は安定剤を単味で用いたときの
効果を調べたものであり、第２表はアルブミンと糖を組
み合わせて添加したときの効果を調べたものである。
浮遊液に、第２表で示すような各々の安定剤を加えて、
以下実施例１と同様にして凍結乾燥し、作製した凍結乾
燥感作血球の性状を実施例１と同様にして比較した結果
を第２表に示す。第１表は安定剤を単味で用いたときの
効果を調べたものであり、第２表はアルブミンと糖を組
み合わせて添加したときの効果を調べたものである。
実施例 ３ 実施例１、実施例２の表１、表２の中で、著しく有効
であった安定剤サンプルNo.3、４、10、16、22、31、3
3、35、37、39、41の11サンプルについて、４℃で長期
間保存した後の凍結乾燥感作血球の力価を試験した結果
が第３表である。いずれのサンプルも４℃２年間安定で
あった。
であった安定剤サンプルNo.3、４、10、16、22、31、3
3、35、37、39、41の11サンプルについて、４℃で長期
間保存した後の凍結乾燥感作血球の力価を試験した結果
が第３表である。いずれのサンプルも４℃２年間安定で
あった。
実施例 ４ 実施例１、２で著しく有効であった保護剤11サンプル
について、凍結乾燥を行わないで液状のままの製品につ
いて実施例３と同様な保存安定性を調べた。結果は第４
表のとおりであり、６ヶ月〜１年の安定性を有してい
た。
について、凍結乾燥を行わないで液状のままの製品につ
いて実施例３と同様な保存安定性を調べた。結果は第４
表のとおりであり、６ヶ月〜１年の安定性を有してい
た。
実施例 ５ サイログロブリン感作ラテックスについて実験した。
ラテックスの感作方法は公知の方法（例えば、小田隆
弘 他：ラテックス凝集反応を用いたブドウ球菌エンテ
ロトキシンの食品等からの検出，福岡市衛試報,4,33−3
7,1979）に従った。すなわち、ラテッス（ポリスチレン
ラテックスSDL−59,武田薬品工業）をPBSで0.025W/V％
に希釈し、サイログロブリンPBS溶液25μg/mlを等量加
えて室温で１時間感作した。PBSで３回遠心洗浄したの
ち、PBSで浮遊させ、さらに窒化ソーダを0.1W/V％加え
0.025W/V％感作ラテックス浮遊液を作った。これに第５
表に示す安定剤を各々添加した浮遊液とし、そのまま液
状で保存した場合、あるいは実施例１と同様にして凍結
乾燥し、乾燥状態で保存した場合について、その保存安
定性を経時的に調べた。反応パターンに関する判定法は
実施例１に準じ、力価は感作ラテックス凝集反応マイク
ロタイター法の常法に従った。結果は第５表の通りであ
り、液状で６ヶ月〜１年の安定性を有し、乾燥状態で２
年以上の安定性を有していた。
弘 他：ラテックス凝集反応を用いたブドウ球菌エンテ
ロトキシンの食品等からの検出，福岡市衛試報,4,33−3
7,1979）に従った。すなわち、ラテッス（ポリスチレン
ラテックスSDL−59,武田薬品工業）をPBSで0.025W/V％
に希釈し、サイログロブリンPBS溶液25μg/mlを等量加
えて室温で１時間感作した。PBSで３回遠心洗浄したの
ち、PBSで浮遊させ、さらに窒化ソーダを0.1W/V％加え
0.025W/V％感作ラテックス浮遊液を作った。これに第５
表に示す安定剤を各々添加した浮遊液とし、そのまま液
状で保存した場合、あるいは実施例１と同様にして凍結
乾燥し、乾燥状態で保存した場合について、その保存安
定性を経時的に調べた。反応パターンに関する判定法は
実施例１に準じ、力価は感作ラテックス凝集反応マイク
ロタイター法の常法に従った。結果は第５表の通りであ
り、液状で６ヶ月〜１年の安定性を有し、乾燥状態で２
年以上の安定性を有していた。
Claims (2)
- 【請求項１】抗原または抗体感作担体の水性懸濁液から
なり、安定剤として５〜10W/V％のラクトースを含有
し、凍結乾燥してからなる免疫凝集反応用組成物。 - 【請求項２】安定剤として選択的に0.05〜1W/V％のアル
ブミンを含むことを特徴とする特許請求の範囲第（１）
項記載の組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61052890A JPH0827283B2 (ja) | 1986-03-10 | 1986-03-10 | 免疫凝集反応用組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61052890A JPH0827283B2 (ja) | 1986-03-10 | 1986-03-10 | 免疫凝集反応用組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62209362A JPS62209362A (ja) | 1987-09-14 |
| JPH0827283B2 true JPH0827283B2 (ja) | 1996-03-21 |
Family
ID=12927458
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61052890A Expired - Lifetime JPH0827283B2 (ja) | 1986-03-10 | 1986-03-10 | 免疫凝集反応用組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0827283B2 (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3734015A1 (de) * | 1987-10-08 | 1989-04-20 | Behringwerke Ag | Diagnostisches mittel und verfahren zur bestimmung von apolipoprotein b |
| JPH021554A (ja) * | 1987-11-18 | 1990-01-05 | Internatl Reagents Corp | 杭ｄ血液型判定用試薬 |
| US5045446A (en) * | 1988-08-26 | 1991-09-03 | Cryopharm Corporation | Lyophilization of cells |
| IL90188A0 (en) * | 1988-05-18 | 1989-12-15 | Cryopharm Corp | Process and medium for the lyophilization of erythrocytes |
| JP2684425B2 (ja) * | 1989-09-06 | 1997-12-03 | 日本化薬株式会社 | ラテックス試薬 |
| US6267958B1 (en) | 1995-07-27 | 2001-07-31 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
| CA2226575C (en) * | 1995-07-27 | 2011-10-18 | Genentech, Inc. | Stabile isotonic lyophilized protein formulation |
| JP7269906B2 (ja) * | 2019-10-29 | 2023-05-09 | 三洋化成工業株式会社 | 免疫測定用試薬、免疫測定用キット及び免疫測定方法 |
| CN116840004A (zh) * | 2023-06-16 | 2023-10-03 | 武汉明德生物科技股份有限公司 | 一种半乳糖凝集素3质控品及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4003988A (en) * | 1976-06-01 | 1977-01-18 | Warner-Lambert Company | Direct agglutination test for pregnancy |
-
1986
- 1986-03-10 JP JP61052890A patent/JPH0827283B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62209362A (ja) | 1987-09-14 |
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