DK144527B - Cephalosporansyrederivat til anvendelse som mellemprodukt ved fremstilling af andre cephalosporansyrederivater - Google Patents

Description

(19) DANMARK

^ (12) FREMLÆGGELSESSKRIFT ud 144527 B

DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET

(21) Ansøgning nr, 291 5/80 (51) |nt.Cl.3 C 07 D 501/18 (22) Indleveringsdag 4. jul. 198Ο (24) Løbedag 28. aug. 1973 (41) Aim. tilgængelig 4. Jul. 198Ο (44) Fremlagt 22. mar. 1982 (86) International ansøgning nr. -(86) International indleveringsdag -(85) Videreførelsesdag -(62) Stamansøgning nr. 4725/73

(30) Prioritet 31. aug. 1972, 285764, US 6. sep. 1972, 286630, US

6. sep. 1972, 286792, US

(71) Ansøger BRISTOL-MYERS COMPANY, New York, US.

(72) Opfinder Takayuki Naito, JP: Jun Okumura, JP.

(74) Fuldmægtig Th. Ostenfeld Patentbureau A/S.

(54) Cephalosporansyrederivat til an= vendeise som mellemprodukt ved fremstilling af andre cephalo= sporansyrederivater.

Den foreliggende opfindelse angår et hidtil ukendt cephalosporansyrederivat til anvendelse som mellemprodukt ved fremstilling af cephalosporansyrederivater med den almene formel I

CHgNHg o / ° . /s\ /\_ (S) -c%-c-ra-0H — OH CH2 »-»

N X -\\ // 'm ^ 1 1 i q_// VoH

o -\_f \=/ d- i - COOH τ ^ hvori X betegner H eller OH, og m betegner 0 eller 1, under den forudsætning at, når X betegner OH, betegner m 0, eller ikke-toxiske farmaceutisk anvepdelige salte og let hydrolyserbare esterere deraf.

Slutprodukterne med formel I er amfotere forbindelser, der primært eksisterer på zwitterion-form.

2 144527

Slutprodukterne med formel I samt ikke-toksiske, farmaceutisk anvendelige salte og let hydrolyserbare estere deraf udviser værdifuld antibakteriel aktivitet og udmærker sig i forhold til de kommercielle antibiotika, cephaloridin og cephalothin ved at udvise et bredere antibakterielt spektrum, idet de kan anvendes til bekæmpelse af en række bakterier, som vides at være resistente over for cephalothin og cephaloridin. De omhandlede slutprodukter udviser især en uventet større effektivitet over for visse gram-negative bakterier, såsom E. coli, K. pneumoniae og M. morganii.

De ikke-toksiske farmaceutisk anvendelige salte af slutprodukterne med formel I omfatter ikke-toksiske carboxylsyresalte, herunder ikke-toksiske metalliske salte, såsom natrium-, kalium-, calcium- og aluminiumsaltene, ammoniumsaltet og de substituerede ammoniumsalte, f.eks. salte af sådanne ikke-toxiske aminer som trialkylaminer, herunder triethylamin, proca-in, dibenzylamin, N-benzyl-beta-phenethylamin, 1-ephenamin, Ν,Ν'-diben-zylethylendiamin, dehydroabietylamin, N,N'-bis-dehydroahietylethylendi-amin, N-(lavere)-alkylpiperidin, f.eks. N-ethylpiperidin, samt andre ami-ner, der har været anvendt til dannelse af salte med benzylpenicillin, samt de ikke-toxiske syreadditionssalte (dvs. aminsaltene) omfattende de mineralsure additionssalte, såsom hydrochloridet, hydrobromidet, hydroiodidet, sulfatet, sulfamatet samt phosphatet og de organiske syreadditionssalte, såsom maleatet, acetatet, citratet, oxalatet, succinatet, benzoatet, tartratet, fumaratet, malatet, mandelatet, as-corbatet og lignende. Særligt foretrukne salte er natriumsaltene af dimethansulfonatet af forbindelserne med formlen I. Disse salte er vandopløselige samt nyttige til fremstilling af injicerbare præparater.

Cephalosporansyrederivatet ifølge opfindelsen er 7-amino-3-(6-hydroxypyridazin-3-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre med formlen II

/\

H0N-CH—CH CB0 N—N

"

COOH

144527 3 samt ikke-toksiske, farmaceutisk anvendelige salte og let hydrolyserbare estere heraf. Slutprodukterne fremstilles ved, at dette cepha-losporansyrederivat eller et salt eller en let hydrolyserbar ester heraf omsættes med et acylerende derivat af en syre med formlen

CHgNHB

X —^ ^— (8). “ CH2 - COOH

III

hvori B betegner en amino-beskyttende gruppe, og m samt X har ovennævnte betydning, til fremstilling af en forbindelse med formlen

Cl^NHB

y-i 0 /S v /—\ II X \

X—(v /V(S) -CHo-C-NH-CH- CH CH2 N N

vx m % i—; i01

tv COOH

hvori B, X og m har samme betydning som ovenfor, eller et salt eller en let hydrolyserbar ester heraf, samt at man derefter fjerner den amino-beskyttende gruppe B, og om ønsket omdanner en opnået forbindelse med formel I til et ikke-toksisk, farmaceutisk anvendeligt salt eller en let hydrolyserbar ester heraf eller et opnået salt eller en opnået ester til den frie syre.

De omhandlede amfotere forbindelser fremstilles således ved kobling mellem 7-amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, eller et salt eller en let hydrolyserbar ester heraf (omfattende estere analoge med de produkter, der er omhandlet i USA patentskrift nr, 3.284.451 og engelsk patentskrift nr. 1.229.453 samt enhver af de silylestere, der er beskrevet i USA patentskrift nr. 3.249.622, til anvendelse med 7-aminopenicillansyrc, hvilke forbindelsers anvendelse er beskrevet i engelsk patentskrift nr. 1.073.530, samt i særdeleshed pivaloyloxymethyl, acetoxymethyl, methoxymethyl, . acetonyl, phenacyl, p-nitrobenzyl og β ,β, β-trichlorethylestere) og U 4527 4 en syre med formlen III eller dens funktionelle ækvivalent som et acylerende middel for en primær amingruppe. lifter kobling fjernes den amino-blokcrende gruppe B til dannelse af det ønskede produkt. Den amino-beskyttende gruppe B betegner en blokerende gruppe af den type, der anvendes enten ved peptidsynteser eller i enhver af do talrige synteser af ampicillin eller cephaloglycin eller cephalexin ud fra 2-phenylglycin. Særlig nyttige blokerende grupper er en proton, såsom i forbindelsen med formlen CHgNHg* HC1

/=( S

X-/ V-(S)m-C%-C-Cl eller en y?-diketon eller en β -ketoester, såsom det er nævnt i engelsk patentskrift nr. 1.123.333 samt i USA patentskrift nr. 3.325.479 samt USA patentskrift nr. 3.316.247, f.cks. methylacetoacetat, eller et /S-ketoamid, såsom i japansk patentskrift nr. 71/24714 (Farmdoc 47,321S), i hvilket tilfælde syren, som indeholder den blokerede ami-nogruppe, fortrinsvis omdannes til et blandet anhydrid, såsom med ethyl-chloroformiat, før omsætning med en forbindelse med formlen II eller et salt heraf til dannelse af det ønskede produkt I efter fraspaltning af den blokerende gruppe.

Efter koblingen fjernes den blokerende gruppe til dannelse af de omhandlede produkter, idet f.cks. t-butoxycarbonylgruppen kan fjerne ved behandling med myresyre eller trifluoreddikesyre, medens carbo-benzyloxygruppen kan fjernes ved katalytisk hydrogenering, 2-hydroxy--1-naphthcarbonylgruppen kan fjernes ved sur hydrolyse, trichlor-ethoxycarbonylgruppen kan fjernes ved behandling med zinkstøv i iseddike, og l-carboethoxy-l-propenyl-2-gruppen fortrinsvis kan fjernes med myresyre. Naturligvis kan andre funktionelt ækvivalente blokerende grupper for aminogrupper anvendes .

Med hensyn til det acylerende middel med formlen· III omfatter funktionelle ækvivalenter de tilsvarende syrehalogenider, syreanhydri-der, herunder blandede anhydrider, og i særdeleshed de blandede anhy-drider, som fremstilles ud fra stærkere syrer, såsom lavere alifatiske monoestere af carbonsyre, eller alkyl- samt arylsulfonsyrer og af mere hindrende syrer, såsom diphenyleddikesyre. Endvidere kan et surt azid eller en aktiv ester eller thioester (f.eks. med p-nitrophenyl, 2,4- 5 U6527 -dinitrophenol, thiophenol, thioeddikesyre) anvendes, eller selve den frie syre kan kobles med forbindelsen II efter først at være omsat med N,N'-dimethylchloroformiminiumchlorid (konferer engelsk patentskrift nr. I.008.170 samt Novak and Weichet, Experientia XXI, 6, 360 (1965)) eller ved anvendelse af enzymer eller et N,N'-carbonyldiimidazol eller en N,N'-carbonylditriazol (konferer sydafrikansk patentbeskrivelse nr. 63/2684) eller et carbodiimidreagens (især N,N'-dicyclohexylcarbodi-imid, N,N1-diisopropylcarbodiimid eller N-cyclohcxyl-N'-(2-morpholino-ethyl)-carbodiimid; konferer Sheehan og Hess, J. Arner. Chem. Soc., 77, 1067 (1955)), eller et alkylylaminreagcns (konferer R. Buijle og H.G. Viehe, Angew. Chem. International Edition 3, 582 (1964)) eller et isoxasoliumsalt (konferer R.B. Woodward, R.A, Olofson og H. Mayer, J. Amer. Chem. Soc., 83, 1010 (1961)) eller et keteniminreagens (konferer C.L. Stevens og M.E. Mond i J. Amer. Chem. Soc., 80, (4065)).

fin anden med syren ækvivalent forbindelse er det tilsvarende azo-lid, dvs. et amid af den tilsvarende syre, hvis amidnitrogen er en del af en kvasiaromatisk fem-leddet ring indeholdende mindst to nitrogenatomer, dvs. imidazol, pyrazol, triazolcrne, bcnzimidazol, benzoe-triazol og deres substituerede derivater. Som et eksempel på den almene fremgangsmåde til fremstilling af azolid kan N,Ν'-carbonyldiimidazol omsættes med en carboxylsyre i ækvimolære mængder ved stuetemperatur i tetrahydrofuran, chloroform, dimethylformamid eller et lignende inert opløsningsmiddel til dannelse af carboxylsyrcimidazolidet i praktisk taget kvantitativt udbytte under frigørelse af carbondioxid og 1 mol imidazol. Dicarboxylsyrer giver diimidazolider. Biproduktet, imidazol, udfælder og kan separeres, hvorpå imidazolidet kan isoleres, men dette er ikke nødvendigt. Fremgangsmåderne til udførelse af disse omsætninger til fremstilling af en cephalosporin samt fremgangsmåderne, der anvendes til isolering af den således fremstillede cephalosporin, er velkendte for fagfolk.

Ovenfor nævntes anvendelse af enzymer til at koble den frie syre med dennes blokerede nminogruppe med forbindelsen II. Indenfor rammerne af sådanne fremgangsmåder falder anvendelse af en ester, f.eks. methyl-esteren af den frie syre i forbindelse med enzymer, der tilvejebringes af forskellige mikroorganismer, f.eks. de, der er beskrevet af T. Takahashi et al., i J. Amer. Chem. Soc., 94(11), 4035-4037 (1972) og af T. Nara et al., i J. Antibiotics (Japan) 24(5), 321-323 (1971).

Efter afslutning af koblingen og fraspaltningen af den blokerende gruppe kan forbindelsen med formlen I om ønsket omdannes ved fremgangsmåder, der som sådanne er kendte, til ikke-toxiske, farmaceutisk anvendelige salte eller let hydrolyserbare estere heraf. Zwitterionpro-dukter med formlen 144527 6 + CHpNII- _ / i 0 X (S)m-CHe-C-NH—|-^ S-> \=/ -N^^J-CiI2_s \__y coo- hvori X og m har den ovenfor anførte betydning, kan således omdannes til dimethansulfonatnatriumsalte med formlen C HpN (C i Ig S O^Na) g X -J { > N —tt

\=J J.-K^^J-CHg-S-^ ^-OH

COONa

Omdannelse af cephalosporansyrcrne på zwittcrionforin til dimethansul-fonatderivaterne kan udføres ved fremgangsmåder, der som sådanne er kendte. En foretrukken fremgangsmåde omfatter, at zwitterionen omsættes med natriumformaldehydhydrogensulfit (eller en kilde hertil, såsom f.eks. natriumhydrogensulfit samt formalin) og vand under tilstedeværelse af en stærk natriumbase, f.eks. natrium-2-ethylhexanoat. Ovennævnte blanding opvarmes til over stuetemperatur, f.eks. over 40°C, og fortrinsvis til intervallet mellem 40 og 45°C, i et kort tidsrum, indtil der frembringes en opløsning af det ønskede produkt. Produktet udvindes som et faststof ved udfældning, f.eks. ved tilsætning af et vandopløseligt i det væsentlige vandfrit opløsningsmiddel, fortrinsvis en alkohol, såsom ethanol eller isopropanol.

Cephalosporansyrederivatet ifølge opfindelsen . /\

H0N-CH^— CH CH2 n—N

0^-%^<ν8Ο“<Η

COOH

U4527 7 eller salte eller let hydrolyserbare estere heraf kan fremstilles ved, at man omsætter 7-aminocephalosporansyre eller et salt heraf med en thiol med formlen:

N-N

HS-^ ^-—OH

eller et salt heraf, fortrinsvis et natrium- eller kaliumsalt, og om ønsket på i og for sig kendt måde omdanner den således fremstillede 7-amino-3-(6-hydroxypyridazin-3-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre . til et salt eller en let hydrolyserbar ester heraf.

Erstatningen af en estergruppe, f.eks. 3-acetoxygruppcn·' i 7-aminocephalosporansyre, med en thiolgruppe er en velkendt reaktion, som kan gennemføres i vandig opløsning under tilstedeværelse af en mild base, såsom natriumhydrogencarbonat. Ombytningen udføres fortrinsvis ved en temperatur i intervallet fra ca. 50 til ca. 100°C.

Fremstilling af udgangsmaterialer J°2 Γ JT2 Ί //~~X\ Pd/C /ΓΛ NaN0o,KCu(CN)o CHgCOOH _^ CH^O-r y-CHgCCOH 2_ 1 2 CN ' CH2NH2*HC1

^ CHgCOOH 2* 2 \ CH^of^-CHgCOOH

i i 8 144527 2-cyano-4-methaxyphenyleddikesyre lin opløsning af 12,7 g (.0,06 mol) 4-mcthoxy-2-nitrophenyleddike-syre (D.G. Marvey et al., J. Chcm. Soc., 1938, 97) samt 2,4 g (0,06 mol) natriumhydroxid i 100 ml vand hydrogeneredes ved stuetemperatur under et hydrogentryk på 50 psi med 1 g 10» palladium-på-trækul som katalysator. Den teoretiske hydrogenmængde absorberedes på 1 time. Katalysatoren fjernedes ved filtrering under anvendelse af et filter, som først var belagt med diatomejord ("Cel i te"), filtratet tilsattcs dråbevis en opløsning af 4,2 g (0,06 mol) natriumnitrit i 30 ml vand ved 0°C, og derpå tilsattcs dråbevis ved samme temperatur under omrøring 20 ml koncentreret saltsyre (ca. 0,25 mol). Omrøringen fortsattes i 10 minutter. Der tilsattes en opløsning af 4,1 g (0,03 mol) kaliumcarbDnat i 10 ml vand. Reaktionsblandingen sattes til en opløsning af 10 g kaliumcyanid og 7 g cuprocyanid i 33 ml vand under kraftig omrøring ved 0°C, hvorpå blandingen omrørtes i 10 minutter ved pQC, il time ved 10-15°C, og sluttelig i 2 timer ved 50°C, hvorpå den fortyndedes med 300 ml vand og filtreredes, filtratet syrnedes med koncentreret saltsyre, ekstraheredes med ethylacetat (5 x 100 ml) og genekstraheredes med 5°» natriumhydrogencarbonatopløsning (5 x 100 ml). De forenede vandige ekstrakter affarvedes med en ringe mængde aktivt carbon, afkøledes, syrnedes med koncentreret saltsyre og ekstraheredes med ethylacetat (3 x 100 ml), ekstrakterne udvaskedes med vand (3 x 30 ml), mættet natriumchloridopløsning (3 x 30 ml) og tørredes med vandfri natriumsulfat. Fjernelse af opløsningsmidlet tilvejebragte 8,7 g (76") 2-cyano-4-methoxyphcnyleddikcsyre, som omkry-sta.ll iseredes fra benzen-1 igroin. Smeltepunkt 130-132°C.

IR: i 2 240 cm-1 NMR: S pp^°~d6 3,69 (2 II, s, CII2-CO) , 3,77 (3 H, s, 0CH3), 6,9--7,4 (3 H, m, phenyl-II).

Analyse beregnet for C^gllgNO^: C: 62,82 , II: 4,75, N: 7,33 Fundet: C: 62,92 , 11: 4,74 , N: 7,20.

2-amlnomethyl -4-met box yphcnylcdd ikcsyre,h y d r o c h l_or i d

Hn opløsning af 8,2 g (0,043 inol) 2-cyano-4-methoxyphenyleddike-syre i 100 ml ethanol og 50 ml 6N saltsyre hydrogeneredes med platinoxid i 2 dage ved stuetemperatur under 50 psi hydrogentryk. Katalysatoren fjernedes ved filtrering. Filtratet inddampedes til tørhed. Remanensen udvaskedes med acetone (3 x 20 ml) til dannelse af 5,5 g 2--aminomethy1-4-metboxyphenyl eddikesyre,hydrochlorid.

9 144527 NMR: å »“Λ 3,61 (2 II, s, CH2-CO), 3,70 (3 II, s, 0(¾), 3,9 (2 II, q, 6,0 Hz, CH2-N), 6,5-7,3 (3 II, m, phenyl-H), 8,5 (3H, br, nh3+J· 2-aminomethyl-4-hydrpxyphenyleddikesyre

En blanding af 3 g (0,013 mol) 2-aminomethyl-4-methoxyphenyled-dikesyrc jhydrochlorid samt 40 ml 48¾ brombrintc tilbagesvaledes i 5 timer. Reaktionsblandingen behandledes med aktivt carbon og neutraliseredes (pil-værdi 6-7) med 6N natriumhydroxid til dannelse af et bundfald af 2-aminomethyl-4-hydroxyphenyleddikesyre, som'opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand samt acetone og tørredes i vakuum. Udbytte 1,9 g (81,5¾). Smeltepunkt > 300°C.

2-t-butoxycarbonylaminomethyl-4-hydroxyphenyleddikesyre

Bn opløsning af 2,1 g (.0,012 mol) 2’-aminomethyl-4-hydroxyphenyl-eddikesyre samt 1,4 g (0,035 mol) natriumhydroxid i 50 ml vand tilsattes en opløsning af 2,0 g (0,014 mol) t-butoxycarbonylazid i 25 ml Till·’, og blandingen omrørtes i 22 timer ved stuetemperatur, hvorpå den udvaskedes med ether syrnet med fortyndet saltsyre og ekstraheredes med ether (2 x 150 ml). De forenede ekstrakter udvaskedes med vand (2 x 50 ml) samt en mættet natriumchloridopløsning (3 x 50 ml), hvorpå ekstrakterne tørredes. Opløsningsmidlet fjernedes, og den olieag-tige remanens tritureredes med chloroform-carbontetrachlorid (1:1, 50 ml) til dannelse af 1,7 g (52¾) 2-t-butoxycprbonylaminomethyl-4--hydroxyphenyleddikesyre som et hvidt faststof smeltende ved 145-147°C.

IR: J KB3 3340, 1700, 1680, 1260 cm"'1.

NMR: S Dpn,°~d6 1,37 (9 II, s, t-Bu-II) , 3,42 (2 II, s, CH2C0), 3,97 (2 H, d, 6 Hz, CH2-N), 6,3-7,1 (3 H, m, phenyl-H), 9,00 (1 H, br, NH) , 12,0 (1 H, br, NH).

Analyse beregnet for Cj^ll^gNO^: C: 59,77 , II: 6,81, N: 4,98 Bundet: C: 58,84 , II: 6,89, N: 4,79.

Kalium-o-A-carbomethoxypropen-2-’ylaminomcthylJ'-pThydroxyphenylacetat I en 2000 ml rundbundet kolbp udstyret med en køler samt en topmonteret omrører anbringes 0,28 mol o-aminomethyl-p-hydroxyphenyled-dikesyre, 15,28 g (0,28 mol) kaliumhydroxid, 64,96 g (0,56 mol) methyl-acetoacetat samt 1500 ml absolut methanol. Derpå tilbagesvales blandingen i 3 timer. Opløsningen inddampes herpå til ringe 10 U4527 volumen (100-150 ml), filtreres og fortyndes med 400-700 ml vandfri ether. Ved skrabning udkrystalliscfer produktet, faststoffet frafil-treres og tørres i en vakuumekssikkator over P^O^. Udbyttet af produktet, som smelter ved 140-148°, er ca. 80 g.

Natrium-o-(1-cthoxycarbonyl-1-propen-2-ylaminomethyl)-p-hydroxyphenyl-acetat_____ lin ethanol isk opløsning n f natr iumcthoxjd fremstillet ud fra 0,6 g (0,026 atom) meta11 i sk natrium og 50 ml absolut ethanol tilsættes 0,026 mol o-aminomethyl-p-hydroxyphenylcddikcsyre samt 3,38 g (0,026 mol) ethylacetoacetat, hvorpå blandingen ti lbagesvale's i 6 timer. Blandingen inddampes til tørhed, og remanensen omkrystalliseres fra ethanol til dannelse af ca. 6 g natrium-o-(1-ethoxycarbonyl-l-propen--2-ylaminomethyl)-p-hydroxyphenylacetat som farveløse nåle.

t-butoxycarbonylazid . . .

lin afkølet opløsning af 100 g (0,76 mol) t-butylcarbazat i 87 g iseddikesyre og 120 ml vand tilsættes dråbevis en opløsning af 60 g (0,85 mol) natriumnitrit i 50 ml vand i løbet af et tidsrum på 40 minutter, idet temperaturen holdes ved 10-15°C. lifter tilsætningen var afsluttet, fortsattes omrøringen i yderligere 50 minutter ved samme temperatur. Blandingen t.ilsattes 100 ml vand, og en olie, som udfældede, ekstraheredes med fem 100 ml portioner incthylenchlorid. De forenede organiske ekstrakter udvaskedes med 100 ml 10¾ natriumhydrogen-carbonatopløsning og herefter 100 ml vånd, hvorpå ekstrakterne tørredes over vandfri natriums.ulfat. Methylenchloridet fjernedes under sænket tryk på et vandbad, som opretholdtes ved 40-45°C. Azidresten destilleredes ved 45°C/20 mm Mg og opsamlcdes. Resten vejede 92,7 g (84¾).

3-chlor-6-hydroxypyridazin

En blanding af 22,47 g (0,15 mol) 3,6-dichlorpyridazin og 50 ml eddikesyre t i.1 bagesvaledes i 2 timer. Reaktionsblandingen afkøledes og fortyndedes med 50 ml vand, hvorpå den inddampedes til tørhed under reduceret tryk. Remanensen omkrysta11iscredcs fra vand til dannelse af 15j8 g (80¾) 3-chlor-6-h’ydroxypyridazin som farveløse prismer, der smeltede ved 133-137°C. (litteratur 138-140°). Se N. Takabayashi, Yakugaku Zasshi, 75, 778 (1955).

11 144527 3-hydroxy-6-mercaptopyridazin

Lin blanding af 2,6 g (0,02 mol) 3-chlor-6-hydroxypyridazin og 5,0 g (0,07 mol) nyfremstillet kaliumhydrogensulfid i 30 ml ethanol opvarmedes til 130-140°C i et lukket rør i 6 timer. Reaktionsblandingen afkøledes og fortyndedes med 200 ml vand. Næsten alt organisk opløsningmiddel fjernedes ved destillation under reduceret tryk. Den tilbageblevne vandige opløsning syrnedes med fortyndet saltsyre til pil-værdien 3 og ekstraheredes med cthylaeetat (6 x 50 ml). De forenede ekstrakter inddampedes til tørhed, og remanensen genudfældedes ud fra 30 ml ethanol-ligroin (1:1) til dannelse af 2,2 g (87¾) amorft 3-hydroxy-6-mercaptopyridazin. Smeltepunkt 158-159°C (litteratur 157~158°C). Se J. Druey et al., Ilelv. Chem. Acta, 37, 121 (1954).

3-hydroxy-6-mercaptopyridazin

En opløsning af 5,6 g (0,05 mol) 3,6-dihydroxypyridazin i 150 ml pyridin tilsattes portionsvis 2,70 g (0,012 mol) phosphorpentasulfid under kraftig omrøring og tilbagesvaling. Tilbagesvalingen fortsattes i 1 time, hvorpå reaktionsblandingen fortyndedes med 200 ml vand og ekstraheredes til fjernelse af pyridin. Den fremkomne olieagtige remanens suspenderedes i vand og ekstraheredes med ethylacetat. De organiske ekstrakter forenedes og inddampedes igen til dannelse af et olieagtigt materiale, som tritureredes med en ringe mængde vand til dannelse af 3-hydroxy-6-mcrcaptopyridazin som et gult faststof. Omkrystallisation fra vand tilvejebragte 0,62 g (12¾) af produktet, der identificeredes som det ovenfor fremstillede.

5.6- dihydroxypyridazin

En kogende opløsning af 315 g (3 mol) hydrazin,dihydrochlorid i 2 liter vand tilsattes portionsvis 295 g (3 mol) fint malet malein-anhydrid under omrøring. Efter at tilsætningen var afsluttet, fortsattes opvarmningen i 4 timer, hvorpå man lod rcaktionsblandingen henstå natten over i et køleskab til dannelse af 285 g (85¾) 3,6--dihydroxypyridazin som tykke søjler. Smeltepunkt >290°C.

3.6- dichloropyridazin

En blanding af 150 g (1,33 mol) 3,6-dihydroxypyridazin og 250 g phosphoroxychlorid tilbagesvaledes i 3 timer under udelukkelse af fugt. Overskudet af phosphoroxychlorid fjernedes under reduceret tryk, og den mørke remanens udhældtes på 1 kg knust is. Det fremkomne bundfald opsamledes ved filtrering. Anden fraktion af produktet fremkom 12 144527 fra moderluden ved ekstraktion med fem 300 ml portioner chloroform efterfulgt af behandling med 1 g trækul og bortdampning af opløsningsmidlet. I-’ørste og anden fraktion forenedes, opløstes i 500 ml chloroform og behandledes igen med 1 g trækul, hvorpå der inddampedes til dannelse af 165 g (83») 3,6-dichlorpyridazin som fine nåle smeltende ved 60-6l°C. (i et forseglet rør).

6-chlor-5-hydroxypyridaz in lin suspension af 60 g (0,4 mol) 3,6-dichlorpyridazin i 200 ml 10¾ saltsyre tilbagesvaledes i 2 timer, indtil der fremkom en klar opløsning. Den klare opløsning behandledes med ca. 1,5 g aktivt carbon, hvorpå den filtreredes. I-’iltratet inddampedes under reduceret tryk til dannelse af 6-chlor-3-hydroxypyridazin som farveløse nåle. Udbytte 49,5 g (98¾). Smeltepunkt 137-139°C.

3-hydroxy-6-mercaptopyridazin

En blanding af 50 g (0,38 mol) 6-chlor-3-hydroxypyridazin, 60 g (0,83 mol) kaliumhydrogensulfid i 250 ml ethanol opvarmedes i en 500 ml autoklav ved 140°C i 14 timer under magnetomrøring. Trykket steg til 15-20 kg/cm . Blandingen inddampedes til tørhed, og remanensen opløstes i 300 ml vand. Den vandige opløsning syrnedes med fortyndet saltsyre til pil-værdien 3 og ekstraheredes med ti 200 ml portioner ethylacetat. De forenede ekstrakter inddampedes til dannelse af 34,3 g (70¾) amorft 3-hydroxy-6-mercaptopyridazin. Smeltepunkt 151-152°C.

Kalium-o-/l-carbomethoxypropen-2-ylaminomethyl7-phenylthioacetat I en 2000 ml rundbundet kolbe udstyret med en køler og en topmonteret omrører anbringes 0,28 mol o-aminomethylphenylthioeddikesyre, 15,28 g (0,28 mol) kaliumhydroxid, 64,96 g (0,56 mol) methylacetoace-tat og 1500 ml absolut methanol. Derpå tilbagesvales blandingen i 3 timer. Opløsningen inddampes derpå til ringe volumen (100-150 ml), filtreres og fortyndes med 400-700 ml vandfri ether. Ved skrabning udkrystalliserer produktet, faststoffet opsamles ved filtrering og tørres i en vakuumekssikkator over P2O5.

Natrium-o-(l-ethoxycarbonyl-l-propen-2-ylaminomethyl)-phenylthioacetat En ethanolisk opløsning af natriumethoxid, som fremstilles ud fra 0,6 g (0,026 gramatom) metallisk natrium og 50 ml absolut ethanol tilsættes 0,026 mol o-aminomethylphenylthioeddikesyre samt 3,38 g (0,026 mol) ethylacetoacetat, hvorpå blandingen tilbagcsvalcs i 6 timer.

13 U4S27

Blandingen inddampes til tørhed, og remanensen omkrystalliseres fra ethanol til dannelse af natrium-o-(l-cthoxycarbonyl-l-propen-2-yl-aminomethyl)-phcnylthioacetat som farveløse nåle.

/=\ NBS ^ /“V, 1. HaN„ /A_CH2C02CH3 ^ >^-011300^3 2_ hyd;ol > 7°* ? Q-c w Q c w ch2n3 cii2mi2 n N0

QM-dnp — II

CH NH-EOC CHoNH-B0C

2 *

Methyl-o-brommethylphenylacetat

En blanding af methyl-o-methylphenylacetat (82,0 g, 0,50 mol), N--bromosuccinimid (89,0 g, 0,50 mol), benzoyl peroxid (1,0 g) samt car-bontetrachlorid (800 ml) opvarmedes under tilbagesvaling i 2 timer, medens der bestråledes med en 750 watt lyskilde. Succinimidet fjernedes ved filtrering, opløsningsmidlet fjernedes fra filtratet, og remanensen destilleredes i vakuum til dannelse af 90,1 g (74¾) produkt, kogepunkt 95-105° (0,4 mm); n.m.r. (CC14): singlets ved ΤΓ2,85 (411), 5,50 (2II), 6,31 (211) og 6,38 (311).

o-azidomethylphenyleddikesyre

En blanding af methyl-o-brommethylphenylacetat (90,1 g, 0,371 mol), natriumazid (26,0 g, 0,40 mol) og 10¾ vandig acetone (750 ml) omrørtes ved stuetemperatur i 3 timer. Opløsningsmidlet fjernedes under reduceret tryk, og remanensen behandledes med ether (300 ml) samt vand (100 ml). Det rå methyl-o-azidomethylphenylacctat (74,8 g), der frem 14 144527 kom efter tørring og inddampning af etheropløsningcn, opløstes i ISO ml methanol, denne opløsning afkøledes i is og behandledes med 150 ml 3N methanolisk natriumhydroxid. Blandingen henstod ved stuetemperatur i 1 time, hvorpå den inddampedes til tørhed, og remanensen opløstes i vand. Den vandige opløsning syrnedes, produktet opsamledes ved filtrering, tørredes og omkrystalliseredes fra etliylacctat-n-hexan til dannelse af 49,5 g (70s) af syren med smeltepunkt 116-118°; n.m.r. (CDClj) : skarpe singlets ved 2,75 (411), 5,()3 (211) og 6,28 (211).

Nu;)o1 2100 og 1700 cm'1, max b

Analyse beregnet for CgllghUC^: C: 56,53, H: 4,75, N: 21,98 Fundet: C: 56,37, 11: 4,65, N: 21,74.

o-aminomethylphcnyledd i kesyre

En blanding af o-azidomethylphenyleddikesyre (9,6 g, 0,050 mol), 10¾ palladium-på-trækul (2,5 g), methanol (150 ml) og IN saltsyre (50 ml) hydrogeneredes ved 30 p.s.i. i 3,5 time. Blandingen filtreredes, inddampedes under reduceret tryk til et volumen, der nærmede sig 30 ml, og ekstraheredes med ether. Fra etherekstrakten udvandtes 1-2 g urent udgangsmateriale. Den vandige opløsning indstilledes til pH--værdien 5,0 med fortyndet ammoniumhydroxid og afkøledes i is. Det hvide faststof, som udfældede, opsamledes ved filtrering, udvaskedes successivt med isvand, methanol samt ether og tørredes i vakuum over P205: Udbytte 5,4 g (65¾), smeltepunkt 179-181° (dekomponering).

n.m.r. (CF3C02II) : Τ' 2,54 (s, 4H) 5,48 (q, 2H) og 6,00 (s, ZH).

o-t-butoxycarbonylaminomethylphenyleddikesyre

Triethylamin (14,4 g, 0,143 mol) sattes til en isafkølet opløsning af o-aniinomethylphenyleddikesyre (10,3 g, 0,0624 mol) i 100 ml vand efterfulgt af tilsætning af en opløsning af t-butoxycarbonylazid (11,4 g, 0,080 mol) i 75 ml TUF. Reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i 16 timer, hvorpå det meste af TUF fjernedes under reduceret tryk. Den vandige opløsning udvaskedes med ether, dækkedes med 125 ml ethylacetat og indstilledes på pli-værdien 3,5 med fortyndet saltsyre under isafkøling. Hthylacetatopløsningen tørredes, inddampedes, og den faste remanens omkrystalliseredes fra ethylacetat-n-hexan (1:1) til dannelse af 14,4 g (87¾) hvide nåle med smeltepunktet 114--116°.

Analyse beregnet for Cj^H-^gNO^: C: 63,39, H: 7,22, N: 5,28 Fundet: C: 63,44, H: 7,21, N: 5,42.

15 144527 2,4-dinitrophenyl-o-t-butoxycarbonylaminophenylacetat Ν,Ν'-dicyclohoxylcarbodiimicl (1,0 g, 0,0050 mol) sattes til en isafkølet opløsning af o-t-butoxycarbonylaminomethylphenyleddikesyre (1,33 g, 0,0050 mol) samt 2,4-dinitrophcnol (0,92 g, 0,0050 mol) i 12 ml vandfri tetrahydrofuran. Rcaktionsblandingen holdtes ved stuetemperatur i J time, hvorpå det udfældede N,N'-di eye 1ohcxylurinstof fjernedes ved filtrering. Opløsningsmidlet fjernedes fra filtratet til dannelse af den aktiverede ester som en viskos gul olie.

o-Aminomethylphenyleddikesyre.

Materialer Vægt, g Volumen, ml Mol Rå o-aminornethylphenyl eddikesyre- lactam ud fra 1000 g 2-indanonoxim ~1000 ^6,78

Koncentreret saltsyre 8000 "Darko KB" aktiveret trækul 100

Methylenchlorid 6000

Methyl i sobutyl keton (MIBK) lifter behov 0N ammoniumhydroxid lifter behov fremgangsmåde 1. Sæt 8000 ml koncentreret saltsyre til ca. 1000 g- rå lactam fremkommet ved oximomlej ring.

2. Omrør blandingen og opvarm forsigtigt til tilbagesvaling i 3 ti mer. (Ved opvarmning dannes ved denne omsætning en stor mængde skum, efterhånden som 11C1 fragår. Dette skum kan fylde hele apparatet. Skummet kan mindskes ved tilsætning af siliconeholdigt antiskummiddel.

Efter at det indledende skummende trin er overstået, kan reaktionsblandingen tilbagesvales uden vanskeligheder).

3. Afkøl den mørke opslæmning til ca. 40-50°C og tilsæt 100 g aktiveret trækul ("Darko KB") og fortsæt omrøringen.

4. Behandl med carbon i 15-20 minutter, filtrer opslæmningen gennem en "Dicalite" filterkage og udvask filterkagen med ca. 4000 ml varmt vand.

5. Ekstraher det klare, gule filtrat med 6000 ml methylenchlorid () volumen) og fraskil methylenchloridet. Gem Cl^C^-laget til kontrol for mulig udvinding af uomsat lactam.

6. Inddamp vandfasen ved reduceret tryk til dannelse af fast o-amino-methylphenyleddikesyre »hydrochlorid.

7. Tilsæt MIBK til de våde faststoffer og fortsæt destillationen under reduceret tryk med MIBK-tilsætning, indtil alt vandet er blevet fjernet fra faststofferne.

16 144527 8. Fortsæt destillationen under reduceret tryk, indtil al MIBK er blevet fjernet fra faststofferne. (MIBK-dcstillationen fjerner ikke alene vandet ved dannelse af en azeotrop, men fjerner også overskudet af UC1).

9. Genopløs faststofferne i 3900 ml vand og tilsæt 650 ml MIBK.

10. Medens der omrøres ved 20-25°C, indstil da pH-værdien af opløsningen på 5,0 med 6N ammoniumhydroxid, o-aminomethylphenyleddikesyrens zwitterion begynder at udkrystallisere ca. ved pH-værdien 3,5.

11. Omrør zwitterionopslæmningen og afkøl den til 0-5°C i 1 time.

Kalium-o-(1-carbomethoxypropen-2-ylaminomethyl)-phenylacetat I en 2000 ml rundbundet kolbe udstyret med en køler samt en topmonteret omrører fyldes 45,92 g (0,28 mol) o-aminoinethylphenyleddike-syre, 15,28 g (0,28 mol) kaliumhydroxid, 64,96 g (0,56 mol) methyl-acetoacetat samt 1500 ml absolut methanol. Derpå tilbagesvales blandingen i 3 timer. Opløsningen inddampes derpå til ringe volumen (100— -150 ml), filtreres og fortyndes med 400-700 ml vandfri ether. Ved skrabning udkrysta11 iscrer produktet. Faststoffet frafiltreres og tørres i en vakuumekss i kkator over P^Og. (*)ct faste materiale var yderst hygroskopisk. Det bør filtreres så hurtigt som muligt og bør ikke lufttørres). Udbyttet af produktet, som smelter ved 140-148°, andrager 84,1 g (99").

Analyse beregnet for Cj^H^NO^K: C: 54,20, H: 5,49, N: 4,52, KF: 2,90 Fundet: C: 53,72, H: 5,44, N: 4,56, KF: 2,92.

Natrium-o-(l-ethoxycarbonyl-l-propen-2-ylaminomethyl)-phenylacetat

Bn ethanolisk opløsning af natriumethoxid, som fremstilledes ud fra 0,6 g (0,026 gramatom) metallisk natrium og 50 ml absolut ethanol tilsattes 4,27 g (0,026 mol) o-aminomethylphenyleddikesyre samt 3,38 g (0,026 mol) ethylacetoacetat, hvorpå blandingen tilbagesvaledes i 6 timer. Blandingen inddampedes til tørhed, og remanensen omkrystalliseredes fra ethanol til dannelse af 6,36 g (82¾) natrium-o-(1-ethoxy-carbonyl-l-propen-2-ylaminomethyl)-phenylacetat som farveløse nåle smeltende ved 230-232°C.

IR: 'J KBr 3320, 1645, 1605, 1470, 1395, 1275, 1180 cm”1.

Analyse beregnet for C^H^gNO^Na: C: 60,20, II: 6,06, N: 4,68 Fundet: C: 59,95, II: 5,86, N: 4,67.

17 144527 o- (t-butoxycarbonylaminomethyl)-phenyleddikesyre lin opløsning αΓ 70 g (0,35 mol) o-aminoinothylphenyleddikesyre, hydrochlorid samt 110 g (1,15 mol) triethylamin (TEA) i 400 ml vand tilsattcs dråbevis cn opløsning af 64 g (0,45 mol) t-butoxycarbonyl-azid i 300 ml tetrahydrofuran (TUP) under omrøring ved 0°C. Efter at tilsætningen var afsluttet, lod man temperaturen stige til stuetemperatur, og omrøringen fortsattes i 20 timer. Tetrahyclrofuranen frade-stilleredes under 40°C, og den vandige opløsning udvaskedes med 200 ml ether, dækkedes med 200 ml ethylacetat og syrnedes med fortyndet saltsyre til pil-værdien 3 under afkøling til 0°C. Det organiske lag fraskiltes, og den vandige fase ekstraheredes med fire 200 ml portioner ethylacetat. Den samlede ethylacetatopløsning udvaskedes med 200 ml vand, tørredes over vandfri natriumsulfat og inddampedes i vakuum. Koncentratet behandledes med 500 ml n-hexan til dannelse af 87,9 g (95¾) o-(t-butoxycarbonylaminomethyl)-phenyleddikesyre som farveløse nåle smeltende ved 114-116°C.

2,4-dinitrophenyl-o-t-butoxycarbonylaminomethylphenylacetat

Dicyclohexylcarbodiimid (17,72 g, 0,086 mol) (DCC) sattes på én gang til en blanding af o-(t-butoxycarbonylaminomethyl)-phenyleddike-syre (22,73 g, 0,086 mol) samt 2,4-dinitrophenol (15,82 g, 0,086 mol) (2,4-DNP) i 250 ml THI·’. Reaktionsblandingen omrørtes i 2 timer ved stuetemperatur. Det udfældede dicyclohexylurinstof frafiltreredes og udvaskedes med 100 ml TI1F. Filtratet og vaskevæskerne forenedes og inddampedes under reduceret tryk under 50° til dannelse af en viskos gul olie, som tritureredes med n-hexan (150 ml) til dannelse af 2,4--dinitrophenyl-o-t-butoxycarbonylaminomethylphenyleddikesyre som gule nåle. Udbytte 34,9 g (94¾). Smeltepunkt 76-77°C.

IR: 0 KBr 3340, 1785, 1685, 1610, 1540, 1530, 1500, 1340 cm-1.

r max ’’’’’’’

Analyse beregnet for ^20^21^3^2' II: 4,91, N: 9,74

Fundet: C: 55,70, H: 5,05, N: 9,93.

Den foreliggende opfindelse belyses i det følgende nærmere ved eksempler, hvoraf eksempel 1 belyser fremstillingen af cephalo-sporansyrederivatet ifølge opfindelsen, mens de øvrige eksempler belyser omdannelsen deraf til de værdifulde slutprodukter, herunder salte og estere deraf. Alle temperaturer er anført i °C. 7-aminocepha-losporansyre er forkortet som 7-ACA, idet -ACA- betegner gruppen med strukturen 18 U4527 /\ -HH-CH—CH CH_ I I I 2 0SC-\y - ^

COOH

II

og 7-ACA således kan betegnes soin H-ACA-O-C-CHj.

Eksempel 1 7-amino-3-(6-hydroxypyridazin-3-ylthiomethyl)-5-cephem-4-carboxylsyre En blanding af 0,60 g (0,0047 mol) 3-hydroxy-b-mercaptopyridazin, 1,27 g (0,0047 mol) 7-aminocephalosporansyre, 0,78 g (0,0094 mol) na-triumhydrogencarbonat i 25 ml 0,1M phosphatpuffer (pH-værdi 6,4) opvarmedes ved 60°C i 5 timer. Reaktionsblapdingen filtreredes til fjernelse af spor af uopløseligt materiale, og filtratet indstilledes på pH-værdien 5 med eddikesyre til dannelse af brune bundfald, som opsam-ledcs ved filtrering, udvaskedes med vand og herefter med acetone, hvorpå der tørredes i vakuum til dannelse af 7-amino-3-(6-hydroxypyri-dazin-3-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre. 1,03 g (71¾). Smeltepunkt 290-300°C (dekomponering).

IR: ^ max 1805, 168t)> 1650, 1580> 1415 cm_1· UV: λ i!vNa0H 249 nm (£ 19400). max NMR: i jj2°"K2C03 3,22 (III, d, 19 Hz), 3,37 (IH, d, 14 Hz), 3,65 (111, d, 411z) , 5,30 (111, d, 4 Hz), 6,75 (111, d, 10 llz), 7,30 (IH, d, 10 Hz).

Analyse beregnet for ^2 2^12^4O4S2 * 5II2O: C: 41,25, II: 3,75, N: 16,04, S: 18,36 Fundet: C: 41,45, H: 3,70, N: 15,83, S: 18,03.

Eksempel 2 - A.

7-(2-t-butoxycarbonylaminomethyl-4-hydroxyphenylacetamido)-3-(6-hydroxy- pyridazin-3-ylthiomethyl) - 3-cephem-4-carboxyl syre_____

En opløsning af 1,7 g (6 mmol) 2-t-butoxycarbonylaminomethyl-4--hydroxyphenyleddikesyre samt 1,2 g (6,6 mmol) 2,4-dinitrophenol i 40 ml THF tilsattes på én gang 1,35 g (6,6 mmol) dicyclohexylcarbodi-irnid, og blandingen omrørtes i 11 time ved stuetemperatur. Det udfældede urinstof fjernedes ved filtrering. Filtratet tilsattes på én gang en opløsning af 2,0 g (5,9 mmol) 7-amino-5-(6-hydroxypyridazin- 19 164527 -3-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre samt 1,7 ml (ca. 12 mmol) triethylamin i 30 ml vand. Blandingen omrørtes i 20 timer ved stuetemperatur, udvaskedes med ethylacetat (3 x 150 ml) og syrnedes med 6N saltsyre til dannelse af et bundfald, som opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand (50 ml) og tørredes. Bundfaldet opløstes i 1 liter methanol ved 50°C og filtreredes til fjernelse af en ringe mængde uopløseligt materiale, filtratet behandledes med aktivt carbon og inddampedes til tørhed. Remanensen triturcrcdes med ether (50 ml) til dannelse af 920 mg (25") 7-(2-t-butoxycarbony]am inomethy1-4-hydroxyphc-nylacetamido)-3-(6-hydroxypyridazin-3-ylthiomethy1)-3-cephem-4-carboxylsyre smeltende ved 190-200°C (dekomponering).

IR: ^ max 1770 , 1 700 , 1670 > 1 580 > 1250 cm-1.

Analyse beregnet for ^26^29^5^8^2 * lI2°: C: 50,23 , II: 5,03, N: 11,27 Fundet: C: 50,63, H: 4,69, N: 10,94.

B.

7-(2-aminomethyl-4-hydroxyphenylacetamido)-3-(6-hydroxypyridazin-3--ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre_

Trifluoreddikcsyre (2 ml) samt 7-(2-t-butoxycarbonylaminomethyl--4-hydroxyphenylacetamido)-3-(6-hydroxypyridazin-3-ylthiomethyl)-3--cephem-4-carboxyIsyre (850 mg, 1,4 mmol) sammenblandedes under afkøling til 0-5°C og omrørtes i 1 time. Blandingen fortyndedes med 150 ml ether til dannelse af trifluoracetatet af den ønskede cephalosporin, 7-(2-aminomcthyl-4-hydroxyphenylacetamido)-3-(6-hydroxypyridazin--3-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, hvilket acetat opsamledes ved filtrering og suspenderedes i 30 ml vand. Suspensionen indstilledes på pH-værdien 6 med fortyndet ammoniumhydroxid og fortyndedes med 1 liter acetonitril under omrøring. Faststoffet opsamledes, udvaskedes med acetonitril (3 x 100 ml) og tørredes i vakuum til dannelse af 546 mg (77¾) af den ønskede 7-(2-aminomethyl-4-hydroxyphenylacetamido)--3-(6-hydroxypyridazin-3-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre smeltende ved 210°C (dekomponering).

IR: 9 KBr 1770, 1660, 1580, 1390 cm'1, max ’ * ’

Analyse beregnet for ^’21**21^5^0^2 ‘ ^**2^: ^>>82, II: 4,73, N: 12,56

Fundet: C: 43,85, H: 4,28, N: 13,12.

20 144527

Eksempel 3 7-(o-aminomethyl-p-hydroxyphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6- -ylthiomethyl)-3-cephcm-4-carboxylsyre__

En omrørt suspension af 2,1 mmol natrium-o-(I-ethoxycarbonyl-1--propen-2-ylaminomethyl)-p-hydroxyphenylacetat i 5 ml tørret aceto-nitril indeholdende 1 dråbe N,N'-dimethylbenzylamin tilsættes 0,25 g (2,3 mmol) ethylchloroformiat under omrøring ved -15°C, og omrøringen fortsættes i 20 minutter ved -10 til -15°C. Blandingen tilsættes på δη gang en opløsning af 0,71 g (2,1 mmol) 7-amino-3-(3-hydroxypyrida-zin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyrc samt 0,21 g (2,1 mmol) triethylamin i 3 ml acetonitril og 3 ml vand, og blandingen omrøres i 1 time ved 0°C. Reaktionsblandingcn behandles med en ringe mængde trækul og filtreres, filtratet tilsættes 0,5 ml myresyre under omrystning, og blandingen filtreres til fjernelse af en ringe mængde uomsat 7-amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre. Filtratet tilsættes 100 ml acetonitril, og man lader blandingen henstå i 1 time ved stuetemperatur. Bundfaldet opsamles ved filtrering, udvaskes med 10 ml vand og tørres i vakuum til dannelse af ca. 0,5 g 7- (o-aminomethyl-p-hydroxyphenylacetainido)-3-(3-hydroxypyridazin-6--ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre.

Eksempel 4 7->o-amiriQmethyl-p-hydroxyphenylacetamido-3- (3-hydroxypyridazin-6- -ylthipmethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre_ I en 1 liter trcluilsct, rundbundet kolbe udstyret med et tørrerør, en topmonteret omrører og et termometer anbringes 0,08 mol fint pulveriseret kaliuin-o-(l-carbomethoxypropcn-2-ylaminomethyl)-p-hydroxy-phenylacetat i 350 ml tør tetrahydrofuran (TUF) samt 4 dråber N,N-di-methylbenzylainin. Suspensionen omrøres kraftigt og afkøles til -40° med et bad af acetone og tøris. Suspensionen tilsættes 13,6 g (0,06 mol) isobutylchlorformiat på én gang, medens temperaturen holdes under -35°. Efter 2] minut fjernes kuldebadet af acetone og tøris, og en opløsning af 0,056 mol 7-amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiome-thyl)-3-cephcm-4-carboxylsyre samt 5,04 g (0,050 mol) N-methylmorpho-lin i 250 ml vand tilsættes. Reaktionsblandingen omrøres, indtil den pår stuetemperatur (1-2 timer). THF fjernes under reduceret tryk. Den vandige opløsning dækkes med 100 ml ethylacetat og syrnes til pH-vær-dien 1,7-2,0 med koncentreret HC1. Blandingen behandles med 3,5 g trækul ("Darco KB") og filtreres. Lagene adskilles, og den vandige fase ekstraheres med 2 x 100 ml portioner ethylacetat. Den vandige fase 21 144527 filtreres derpå gennem filterpapir, og pH-værdien indstilles på 4,0. Efter skrabning lader man opløsningen henstå natten over ved 5-7° til udkrystallisation. Produktet opsamles ved filtrering, udvaskes med en ringe mængde vand og tørres i en vakuumekssikkator over P2O5- Udbyt-tet af 7-(o-aminomothyl-p-hydroxyphcnylacctamido)-3-(3-hydroxypyrida-zin-6-ylthiomcthyl)-3~eophcm-4“carboxylsyro andrager ca. 30°s.

liksempel 5 lin suspension af 7-(o-aminomethyl-p-hydroxyphcnyIacetamido)-3--(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3~cephem-4-carboxylsyres zwitter-ionform (0,361 g) j 3 ml methanol afkøles i is og behandles med få dråber koncentreret saltsyre, indtil der fås en klar opløsning. 7-(o--aminomethyl-p-hydroxyphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthio-methyl)-3“cephem-4-carboxylsyre,hydrochlorid udfælder som et lysebrunt farvet faststof ved tilsætning af ether og opsamles ved filtrering, hvorpå det tørres i vakuum over P2°5*

Eksempel 6

En omrørt suspension af zwitterionformen af 7-(o-aminomethyl-p--hydroxyphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-ce-phem-4-carboxylsyre (0,361 g) tilsættes IN vandig natriumhydroxid ved stuetemperatur, indtil der fås en klar opløsning (pli-værdi 10,8). Denne opløsning frysetørres øjeblikkeligt til dannelse af uren, fast natrium-7-(o-aminomethyl-p-hydroxyphenylacctamido)-3-(3-hydroxypyri-dazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat, 22 144527

Eksempel 7 ch2nh2 0 c M ii /s\

HO—(. λ CH -C-NH-CH —CH CH N-N

\\ // I i 1 / \

X.-y C -N- .C-CH^S-f V-OH

o7/ N/ 2 WA

COOH

f2«5 -j- HOCHgSO^Na -j- CH^(CK2)^CH-C00Na (30$ SFH 1 acetone) 1. Opvarm i vand 2. Behandl med carbon og filtrer 3. Sæt filtratet til vandfri alkohol

V

CH2N(CH2S03Na)2 O s

HC---/ \-CHg- C-NH-CH CH CHg N—N

Jo — N ^C-CHg-S·/_% 0H

O Nc/ \- COONa h2o _|_ EHA .

23 U4527

Fremgangsmåde:

Anbring 2 mol (ca. 1010 g på vandfri basis) 7-(o-aminomethyl-p--hydroxyphcnylaceti'imido-3 - (5-hydroxypyr idaz i n-6-ylthiomethyl) -3-cephem--4-carboxylsyre, 540 g natriumformaldehydhydrogcnsulfit (4,03 mol), 3000 ml vand og 2700 ml (4,87 mol) 30¾ Sllil (natrium-2-ethylhexanoat) i acetone i en egnet beholder og omrør, medens 1)landingen opvarmes til 40-45°C. Blandingen danner i løbet af ca. 10 minutter en gul opløsning.

Opløsningen tilsaittcs efter 15 minutters opvarmning 50 g affar-vende trækul ("Uareo KB”), og der omrøres i yderligere 15 minutter ved 40-45°C.

Filtrer gennem diatomejord ("Dicalite") efter opvarmning af reaktionsblandingen til 40-45°C i ialt 50 minutter.

Udvask carbonfilterkagen med 2000 ml 50¾ ethanol-vand.

Foren filtraterne, indstil temperaturen på 25°C og sæt ved ved 25° C opløsningen til 112 liter 100» ethylalkohol under hurtig omrøring.

Der dannes et fint, hvidt, amorft bundfald af di-(natriummethansulfo-natet) af natrium-7-(o-aminomethyl-p-hydroxyphenylacetamido-3-(3-- hydroxypyr idaz in-O'-y 1 thiomethyl) -3-cephem-4-carboxylat.

Omrør suspensionen i ca. 10 minutter og filtrer herpå, hvorefter filterkagen udvaskes med 15 liter 100¾ ethylalkohol.

Tør filterkagen ved 50-55°C i en ovn med luftcirkulation i ca. 2 timer og derpå i vakuum ved 4-6 mm i 24 timer.

Udbyttet andrager ca. 1200-1400 g amorft, hvidt, fast di-(natrium-methansulfonat) af natrium-7-(o-aminomethyl-p-hydroxyphenylacetamido--3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat. Produktet indeholder normalt adskillige procent vand samt muligvis ethanol-spor.

Dette produkt betegnes også natrium-7-/p-N,N-bis-(natriumsulfo-methyl)-aminomethyl-p-hydroxyphenylacetamidq7-3-(3-hydroxypyridazin--6-ylthiomethyl) -3-cephein-4-carboxylat.

Eksempel 8

Der fremstilledes følgende opslæmning: 2,19 g natrium-formaldehydhydrogensulfit (2 ækvivalenter).

3,5 g 7-(o-aminomethyl-p-hydroxyphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyr idaz in- 6-yl thiomethyl ) -3-cephem-4 -carboxyl syrezwitter ion (100-200 mesh).

25 ml vand (voluminet kan varieres).

14 ml 30"» SE1I-isopropanol.

24 144527 I løbet af ca. \ times hurtig omrøring ved 24°C fås en næsten klar opløsning. Blandingens temperatur stiger hurtigt til 40-43°C. Temperaturen holdes lier i ca. 2 minutter, hvorpå der hurtigt afkøles t.il 20-23°C.

Opløsningen filtreres til fjernelse af uopløsc materiale (den samlede tid på opløst form hør ikke overskride 2 timer).

Opløsningen med pil-værdien 7,3 sættes i løbet af et tidsrum på 5 minutter til 001) ml absolut ethanol under meget kraftig omrøring (andre alkoholer, såsom vandfri isopropanol kan anvendes. Der dannes et amorft bundfald af di-(natriummethansulfonatet) afnatrium-7-(o--aminomethyl-p-hydroxyphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-yl-thiomethyl)-3-cepheni-4-carboxylat. Blandingen omrøres i 5 minutter. Bundfaldet opsamles ved filtrering, udvaskes med 60 ml ethanol (eller isopropanol) og vakuumtørres ved 50°C i 24 timer. Udbyttet andrager ca. 4,3 g.

Produktet kan ved en pH-værdi på ca. 7 opløses i vand i en mængde på mindst 200 mg/ml. lin sådan opløsning er stabil i mindst 2 timer ved stuetemperatur. Mere fortyndede opløsninger er stabile i endnu længere tidsrum. Produktet har samme antibakterielle spektrum som udgangszwitterionen og er fuldt biologisk aktivt, hvadenten det er hydrolyseret tilbage til zwitterionformen eller ej.

Eksempel 9

Natrium-7-Zb-N,N-bis-(natriumsulfomethyl )-aminomethyl-p-hydroxyphenyl-acetamido_7-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethy])-3-cephem-4-carboxylat. Fremstilling under anvendelse af hydroxymethansulfonat._ lin blanding af 2,05 inrnol 7-(o-aminomethyl-p-hydroxyphenylacet-amido)-3-(3-hydroxypyr idazin-6-ylthiomethyl)-3-ccphem-4-carboxylsyres zwitterion, 1,56 g (10 mmol) natriumhydroxymethansulfonatmonohydrat, 6 ml (mmol) 1M SEH-opløsning i ethylacetat, 10 ml isopropanol og 10 ml vand omrøres ved stuetemperatur i 3j time. Den fremkomne opløsning behandles med 1 g aktivt carbon og hældes under omrøring ud i 300 ml absolut ethanol, hvorpå blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter til dannelse af det krystallinske produkt, som opsamles ved filtrering, udvaskes med tre 50 ml portioner absolut ethanol og tørres over P2O5 ved 45-52°/l mm i 20 timer til dannelse af ca. 1,5 g natrium- 7-/o-N,N-bis-( natriumsulfomethyl )-aminomethyl-p-hydroxyphenylacetamido7- 3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat, der er let opløseligt i vand (> 1 g/ml).

25 144527

Eksempel 10

Natrium-7-^b-N,N-bis-(natriumsulfomethyl )-aminomethyl-p-hydroxyphenyl-acetamido7-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl) -3-cephem-4-carboxylat. fremstilling under anvendelse af formalin og natriumhydrogensulfit.

(a) En opløsning af 1 ml (10 mmol) 30» formalin og 1 g natrium-hydrogensulfit i 10 ml vand tilsættes successivt 2 mmol af 7-(o-amino-methyl-p-hydroxyphcnylacetamido)-3-(3-hydroxypyridaz in-6-ylthiomethyl)--3-cephem-4-carboxylsyres zwittcrion, 6 ml 1M SElI-opløsning samt 10 ml isopropanol. Blandingen omrøres i 2] time ved stuetemperatur og udhældes i 300 ml ethanol. Det fremkomne natrium-7-/t>-N,N-bis-(natrium-sul forne thyl )-aininome thyl-p-hydroxyphenylace tam idoj-3- (3-hydroxypyrida-zin-6-ylthiomethyl-3-cephem-4-carboxylat opsamles ved filtrering, udvaskes med tre 50 ml portioner ethanol og tørres i vakuum. Udbytte ca.

1,5 g.

(b) En blanding af 2 mmol 7-(o-aminomethyl-p-hydroxyphenylacet-amido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyres zwitterion, 6 ml 1M Slill i ethylacetat, 10 ml isopropanol samt 10 ml vand tilsættes 1 ml (10 mmol) 30¾ formalin. Blandingen omrøres i 2 timer ved stuetemperatur til dannelse af en klar opløsning med en ringe mængde olieagtigt bundfald. Herefter tilsættes 1 g natriumhydrogen-sulfit, hvorpå opløsningen omrøres i yderligere 2 timer, i løbet af hvilket tidsrum det olieagtige bundfald går i opløsning. Reaktionsblandingen udhældes i 300 ml ethanol under kraftig omrøring til dannelse af ca. 1,8 g natrium-7-/0-N,N-bis-(natriumsulfomefhyl )-aminomethyl--p-hydroxyphenylacetamidq7-3-(3-hydroxypyridaz in-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat, der opsamles ved filtrering, udvaskes med tre 50 ml portioner ethanol og tørres i vakuum.

Eksempel 11 - A.

7-(o-t-butoxycarbonylaminomethylphenylthioacetamido)-3-(3-hydroxy- pyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxyl syre_

En opløsning af 2,19 g (4,7 mmol) 2,4-dinitrophenylesteren af den BOC-beskyttede aminosyre o-aminomethylphenylthioeddikesyre i 50 ml THF tilsattes ved 0°C en opløsning af 1,02 g (3 mmol) 7-amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre samt 0,85 ml triethylamin i 50 ml THF samt 20 ml vand. Reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i 17 timer, hvorpå den behandledes med aktivt carbon og filtreredes, Filtratet inddampedes i vakuum til fjernelse af THF, og koncentratet udvaskedes med fem 100 ml portioner ether. Den vandige opløsning dæk-kedes med 100 ml ethylacetat og syrnedes til pH-værdien 2 med fortyn- 26 144527 det saltsyre under kraftig omrøring ved 0°C. Det vandige lag ekstra-heredes med tre 100 ml portioner cthylacetat. Det organiske lag forenedes med ethyl acetatekstrakterne, tørredes over vandfri natriumsulfat og behandledes med aktivt carbon, filtratet inddampedes under reduceret tryk ved 50°C til dannelse af et olieagtigt produkt, som tritureredes med 100 ml ether til dannelse af 7-(o-t-butoxycarbonyl-aminomethylphenylthioacetamido)-3-(3-hydroxy-pyridazin-6-ylthiomethyl)--3-ccphem-4-cnrboxylsyrc som el lysegult faststof. Opsamling af bundfaldet ved filtrering efterfulgtes af udvaskning in cd 100 ml ether, og der tilvejebragtes 0,71 g (38¾) af den ønskede 7-(o-t-butoxycarbonyl-aminomethylphenylthioacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)--3-cephem-4-carboxylsyre.

B.

7-(o-aminomethylphenylthioacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre__ 7-(o-t-butoxycarbonylaminomethylphenylthioacetamido)-3-(3-hydroxy-pyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (0,50 g, 0,8 mmol) sattes på én gang til 3 ml trifluoreddikesyre under omrøring ved 0°C. Omrøringen fortsattes i 1 time ved 0-5°C. Ved tilsætning af 100 ml ether fremkom et hvidt bundfald. Dette opsamledes ved filtrering og suspenderedes i 4 ml vand ved stuetemperatur. Suspensionen indstilledes på pil-værdien 5 med fortyndet ammoniumhydroxid samt omrøring. Opsamling af bundfaldet ved filtrering tilvejebragte 7-(o-aminomethyl-phenylthioacctamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem--4-carboxylsyre som et brunt pulver, der udvaskedes med vand samt herefter acetonitril og tørredes i vakuum over phosphorpentoxid. Produktet vejede 220 mg (52¾) og havde et smeltepunkt på 200-210°C (de-komponering).

IR: $ KBr 1770, 1670, 1580, 1210 cm"1, max UV: λ maxNallC°3 250 nm 20800), 270 nm (£ 14900).

Analyse beregnet for ^21^21^5^583.2|Π2θ: C: 44,67 , II: 4,64, N: 12,40, S: 17,04 Fundet: C: 44,43, li: 3,85, N: 10,84, S: 17,89.

27 144527

Eksempel 12 - A.

7-(o-t-butoxycarbonylaminomethylphenylthioacetamido)-3-(3-hydroxy- pyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxyl syre_

En opløsning af 1,85 g (4 mmol) 2,4-dinitrophenyl-(o-t-butoxy-carbonylaminomethylphenylthio)-acetat (fremstillet som beskrevet i USA patentskrift nr. 3.657,232) i 50 ml Till·' tilsattcs en opløsning af 1,02 g (3 mmol) 7-amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3--cephem-4-carboxyl syre, 0,85 ml (ca. 6 mmol) tri ethyl amin i en blanding af 30 ml tetrahydrofuran (T1IF), 30 ml acetonitril, samt 50 ml vand under afkøling ved 0QC. Man lod blandingen langsomt indstille sig på stuetemperatur, og der omrørtes i 12 timer. Reaktionsblandingen behandledes med en ringe mængde aktivt carbon og filtreredes. Filtratet inddampedes til fjernelse af det organiske opløsningsmiddel under vakuum ved en temperatur under 35°C. Den fremkomne vandige opløsning udvaskedes godt med ether (30 ml x 4), dækkedes med 50 ml ethylacetat, syrnedes med fortyndet saltsyre til pH-værdien 3 under omrøring ved 0-5°C. Bundfaldet, som fremkom mellem de to lag, opsamledes ved filtrering. Produktet vejede 0,6 g. Dette produkt udgjorde den ønskede 7-(o-t-butoxycarbonylaminomethylphcnylthioacetamido)-3--(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre. En yderligere mængde af produktet opnåedes fra filtratet, der udgjordes af de to lag. Det vandige lag ekstraheredes tre gange med 100 ml ethylacetat pr. gang. Den organiske fase forenedes med de organiske ekstrakter, tørredes over vandfri natriumsulfat og inddampedes til tørhed. Remanensen udvaskedes godt med 100 ml ether og tørredes i vakuum over phosphorpentoxid. Produktet vejede 0,42 g. Det samlede udbytte af 7-(o-t-butoxycarbonylaminomcthylphonylthioacetamido)-3--(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre androg 1,02 g (55¾)· Smeltepunkt 150-160°C (dekomponering).

IR: V KBr 1770, 1690, 1590, 1535, 1175 cm"1, max UV: λ 14 NaHC03 250 nm (£ 21700), 270 nm (sh) (£ 15500).

IHclX

Analyse beregnet for C26H29N5°7S3·2U20: C: 49,67, H: 4,97, N: 11,13, S: 15,30 Fundet: C: 49,95, li: 4,60, N: 10,70, S: 15,52.

28 144527 B.

7-(o-aminomcthylphcnylthioacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthio- methyl-3-cephcm-4-carboxylsyre_ lin blanding af 0,98 g (1,58 mmol) af den BOC-beskyttede cephalosporin 7-(o-t-hutoxycarbonylam i nomethylphenylthioacetamido)-3-(3--liydroxypyridazin-0-ylthiomcthyl)-3-cephem-4-carboxylsyre samt 4 ml trifluoreddikesyre omrørtes ved 0°C i 1 time. Tilsætning af 100 ml ether gav et hvidt bundfald, som opsamlcdes ved filtrering og udvaskedes med 100 ml ether. Lin suspension af bundfaldet i 10 ml vand indstilledes på pil-værdien 5 med fortyndet ammoniak til dannelse af den ønskede cephalosporin 7-(o-aminomethylphenylthioacetamido)-3-(3-hy-droxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-car.boxylsyre, der opsamledes ved filtrering, udvaskedes med 50 ml acetonitril og tørredes i vakuum. Udbytte 0,46 g (56¾). Produktet var identisk (IR) med produktet fra eksempel 11 ovenfor.

Eksempel 13 7-(-o-aminomethylphenylthioacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthio- methyl-3-cephem-4-carboxylsyre_

En omrørt suspension af 2,1 mmol natrium-o-(1-ethoxycarbonyl-l--propen-2-ylaminomethy])-phenylthioacetat i 5 ml tørret acetonitril indeholdende 1 dråbe Ν,Ν-dimethylbenzylamin tilsættes 0,25 g (2,3 mmol) ethylchloroformiat under omrøring ved -15°C, og omrøringen fortsættes i 20 minutter ved -15°C. Blandingen tilsættes på én gang en opløsning af 0,71 g (2,1 mmol) 7-amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre samt 0,21 g (2,1 mmol) triethyl-amin i 3 ml acetonitril og 3 ml vand, hvorpå blandingen omrøres i 1 time ved 0°C. Rcaktionsblandingen behandledes med en ringe mængde trækul og filtreres. Filtratet tilsættes 0,5 ml myresyre under omrystning, og blandingen filtreres til fjernelse af en ringe mængde uomsat 7-amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carb-oxylsyre. Filtratet tilsættes 100 ml acetonitril, og blandingen lader man henstå i 1 time ved stuetemperatur. Bundfaldet opsamles ved filtrering, udvaskes med 10 ml vand og tørres i vakuum til dannelse af 0,4 g 7-(o-aminomethylphenylthioacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre.

29 144527

Eksempel 14 7-o-aminomethylphenylthioacetamido-3- (3-hydroxypyridazin-6-ylthio- methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre_ 1 cn 1 liter trchalset rundbundet kolbe udstyret med et tørre-rør, en topmonteret omrører og et termometer anbringes 0,08 mol godt pulveriseret kalium-o-(l-carbomethoxypropcn-2-ylaminomethyl)-phenyl-thioacetat i 350 ml tør tetrahydrofuran (THE) samt 4 dråber N,N-di-methylbenzylamin. Suspensionen omrøres kraftigt og afkøles til -40° med et bad af acetone og tøris. Suspensionen tilsættes på en gang 13,6 g (0,06 mol) isobutylchlorforiniat, medens temperaturen holdes under -35°. Efter 2\ minut fjernes kuldebadet af acetone og tøris, og der tilsættes en opløsning af 0,036 mol 7-amino-3-(3-hydroxypyri-dazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre samt 5,04 g (0,050 mol) N-methylmorpholin i 250 ml vand. Reaktionsblandingen omrøres, indtil den når stuetemperatur (1-2 timer). THE fjernes under reduceret tryk. Den vandige opløsning dækkes med 100 ml ethylacetat og syrnes til pH-værdien 1,7-2,0 med koncentreret HC1. Blandingen behandles med 3,5 g trækul ("Darco KB") og filtreres. Lagene adskilles, og den vandige fase ekstraheres med to gange 100 ml portioner ethylacetat. Den vandige fase filtreredes derpå gennem filterpapir, og pH-værdien indstilledes på 4,0. Efter skrabning henstår opløsningen natten over ved 5-7° til udkrystallisation. Produktet opsamles ved filtrering, udvaskes med en ringe mængde vand og tørres i en vakuumekssikkator over P205· Udbyttet af 7-o-aminomethylphenylthioacetamido-3-(3-hydroxy-pyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre er ca. 30¾.

Eksempel 15

En suspension af zwitterionformen af 7-(o-aminomethylphenylthio-acetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (0,361 g) i 3 ml methanol afkøles i is og behandles med nogle få dråber koncentreret saltsyre, indtil der fås en klar opløsning.

7-(o-aminomethylpheny1thioacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthio-methyl)-3-cephein-4-carboxylsyre,hydrochlorid udfælder som et lysebrunt farvet faststof ved tilsætning af ether og opsamles ved filtrering, hvorpå det tørres i vakuum over ·

Eksempel 16

En omrørt suspension af zwitterionformen af 7-(o-aminomethyl-phenylthioacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem- 4-carboxylsyre (0,361 g) tilsættes IN vandig natriumhydroxid ved 30 U*527 stuetemperatur, indtil der fås en klar opløsning med pH-værdien 10,8. Denne opløsning frysetørres øjeblikkeligt til dannelse af uren, fast natrium-7-(o-aminomcthylphenylthioacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin--6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat.

Fremstilling af dimethansulfonat Eksempel 17 /=y » /8\ / \-S-CH2-0-NH-CH—CH CH2 «—k

V_/ C — ^0-CH2-s/ _ VoH

° I

COOH

?2H5 4- HOCHgSO^Na -j- CH5(CH2)3pH-COONa (30$ SEH i acetone) 1. Opvarm i vand 2. Behandl med carbon og filtrer 3. Sæt filtratet tiL vandfri alkohol

V

CH2N(CH2S03Na)2 r\ li /\

Faststof (' \VS-CH-c-nh-CH CH CH0 N—N

'V=// C —N C-CH -s/ ^-OH

\/ 2 \=/ COONa ‘ I h2o i EHA.

3i 144527

Fremgangsmåde:

Anbring 2,0 mol (ca. 1020 g på vandfri basis) 7-(o-aminomethyl-phenyl thioaceta'mido-3- (3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem--4-carboxylsyrc, 540 g »atriumformaldehydhydrogensulfit (4,03 mol), 3000 ml vand samt 2700 ml (4,87 mol) 30¾ SU1I (natrium-2-ethylhexanoat) 1 acetone i en egnet beholder og opvarm under omrøring blandingen til 40-45°C, Blandingen danner i løbet af ca. 10 minutter en gul opløsning.

lifter 15 minutters opvarmning tilsæt da 50 g affarvende trækul ("Darco KB") til opløsningen og omrør i yderligere 15 minutter ved 40-45°C.

Filtrer gennem diatomejord ("Dicalite") efter opvarmning af reaktionsblandingen ved 40-45°C i ialt 30 minutter.

Udvask carbonfi 1 terkagen med 2000 ml 5()¾ ethanol-vand.

Foren filtraterne, indstil på 25°C og sæt ved 25°C opløsningen til 112 liter 100¾ ethylalkohol under hurtig omrøring. Der dannes et fint, hvidt, amorft bundfald af di-(natriuinmethansulfonatet) af natrium-7- (o-aminomethylphenylthioacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6--ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat.

Omrør suspensionen i ca. 10 minutter og filtrer herpå og udvask filterkagen med 15 liter 100¾ ethylalkohol.

Tør filterkagen ved 50-55°C i en ovn med luftcirkulation i ca.

2 timer og derpå under vakuum ved 4-6 mm i 24 timer.

Udbyttet andrager ca. 1200-1400 g amorft, hvidt, fast di-(natri-ummethansulfonat) af natrium-7-(o-aminomethylphenylthioacetamido)-3--(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomcthyl)-3-cephem-4-carboxylat. Produktet indeholder normalt adskillige procent vand samt muligvis ethanol-spor.

Dette produkt betegnes også 7-/o-N,N-bis-(natriumsulfomethyl )--aminomethylphenylthioacetamido7-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)--3-cephem-4-carboxylat.

Eksempel 18

Der fremstilles følgende opslæmning: 2,19 g natriumformaldehydhydrogensulfit (2 ækvivalenter).

3,5 g 7-(o-aminomethylphenylthioacctam ido)-3-(3-hydroxypyridazin--6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyrezwitterion (100-200 mesh).

25 ml vand (voluminet kan varieres).

14 ml 30¾ SElI-isopropanol.

Der fås i løbet af ca. \ times hurtig omrøring ved 24°C næsten en klar opløsning. Blandingens temperatur hæves hurtigt til 40-43°C.

32 144527

Temperaturen holdes her i ca. 2 minutter, hvorpå der hurtigt nedkøles til 20-23°C.

Opløsningen filtreres til fjernelse af uopløseligt materiale (den samlede tid på opløst form bør ikke overskride 2 timer).

Opløsningen med pli-værdien 7,3 sættes i løbet af et tidsrum på 5 minutter til 000 ml absolut ethanol under meget hurtig omrøring (andre alkoholer, såsom vandfri isopropanol kan anvendes). Der dannes et amorft bund fa Id af di-(nat riummethansu1fonatct) af natrium-7--(o-aminornethyl phenylthioacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthio-methyl)-3-cephcm-4-carboxylat. Blandingen omrøres i 5 minutter. Bundfaldet opsamles ved filtrering, udvaskes med 00 ml ethanol (eller isopropanol) og vakuumtørres ved 50°C i 24 timer. Udbyttet andrager ca. 4 g.

Produktet kan ved pil-værdien ca. 7 opløses i vand i en mængde på mindst 200 mg/ml. En sådan opløsning er stabil i mindst 2 timer ved stuetemperatur. Mere fortyndede opløsninger er stabile i endnu længere tidsrum. Produktet har samme antibakterielle spektrum som udgangs-zwitterionen og er fuldt biologisk aktivt, hvadenten det er hydrolyseret tilbage til zwitterionformen eller ej.

Eksempel 19

Natrium-7-/d-N,N-bis-( natriumsulfomethyl )-aminomethylphenylthioacet-amido_7-3-(3-hydroxypyridazin-6-yl thiomethyl)-3-ccphem-4-carboxylat. Fremstilling under anvendelse af hydroxymethansulfonat._

En blanding af 2,05 minol 7-(o-aminomethylphenylthioacetamido)--3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyres zwit-terion, 1,56 g (10 minol) natriumhydroxyinethansulfonatmonohydrat, 6 ml (6 mmol) 1M SEFI-opløsning i ethylacetat, 10 ml isopropanol samt 10 ml vand omrøres ved stuetemperatur i 3| time. Den fremkomne opløsning behandles med 1 g aktivt carbon og udhældes under omrøring i 300 ml absolut ethanol, hvorpå blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter til dannelse af det krystallinske produkt, som opsamles ved filtrering, udvaskes med tre 50 ml portioner absolut ethanol og tørres over P2O5 ved 45-52°/l mm i 20 timer til dannelse af natrium-7-- /o-N, N-bis -(natriumsulfomethyl )-aminomcthylphenyl thioacetamido_7-3-(3--hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat, der er let opløseligt i vand (>1 g/ml).

33 144527

Eksempel 20

Natrium-7-^δ-Ν,N-bis- (.natriumsulfomethyl ) -aminomethylphenylthioacet-amido_7-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl-3-ccphem-4-carboxylat. Fremstilling under anvendelse af formalin og natriumhydrogensulfit.

(a) En opløsning af 1 ml (10 mmol) 30» formalin og 1 g natrium-hydrogcnsulfit i 10 ml vand tilsættes successivt 2 mmol 7-(o-amino-methylphenylthioacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3--cephcm-4-carboxylsyres zwitterion, 6 ml 1M Slill-opløsning samt 10 ml isopropanol. Blandingen omrøres i 2\ time ved stuetemperatur og udhældes i 300 ml ethanol. Det fremkomne natrium-7-/o-N,N-bis-( natriumsulfomethyl) -aminomethylphenylthioacetamidoj-3- (3-hydroxypyridazin--6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat opsamles ved filtrering, udvaskes med tre 50 ml portioner ethanol og tørres i vakuum.

(b) En blanding af 2 mmol 7-(o-aminomethylphenylthioacetamido)--3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyres zwitterion, 6 ml 1M SEll i ethylacetat, 10 ml isopropanol samt 10 ml vand tilsættes 1 ml (10 mmol) 301 formalin. Blandingen omrøres i 2 timer ved stuetemperatur til dannelse af en klar opløsning med en ringe mængde olieagtigt bundfald. Herefter tilsættes 1 g natriumhydrogen-sulfit, hvorpå opløsningen omrøres i yderligere 2 timer, i løbet af hvilket tidsrum det olieagtige bundfald opløses. Reaktionsblandingen udhældes i 300 ml ethanol under kraftig omrøring til dannelse af fast natrium-7-^ό-Ν,Ν-b is - (natriumsulfomethyl )-ami nornethyl phenylthioacet-amidq7-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat, der opsamles ved filtrering, udvaskes med tre 50 ml portioner ethanol og tørres i vakuum.

Eksempel 21 - A.

7-(o-t-butoxycarbonylaminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyrida- zin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre_

En omrørt opløsning af 1,9 g (3,75 mmol) 2,4-dinitrophenyl-o-t--butoxycarbonylaminomethylphenylacetat i 15 ml TIIF tilsættes på én gang cn afkølet opløsning af 1,14 g (3,3 mmol) 7-amino-3-(3-hydroxy-pyridazin-6-ylthiomethyl)-3-ccphem-4-carboxylsyre samt 0,62 g (6,6 mmol) triethylamin i 15 ml acetonitril og 5 ml vand under afkøling ved 0°C. Man lader langsomt reaktionsblandingen nå stuetemperatur, og der røres natten over. Blandingen inddampes til fjernelse af organisk opløsningsmiddel under reduceret tryk ved en temperatur under 30°C, og den tilbageblevne vandige opløsning udvaskes med ether (10 ml x 3).

Den vandige fase dækkes med 20 ml ethylacetat og syrnes til pH-værdien 34 144527 2,5 med fortyndet saltsyre under omrøring, hvorpå det organiske lag fraskilles. Den vandige fase ekstraheres med ethylacetat (100 ml x 3). Uopløseligt materiale, som fremkom under ekstraktionen, opsamledes ved filtrering og udvaskedes med en ringe mængde vand til dannelse af 7--(o-t-butoxycarbonylaminomethylphenylacetainido)-5-(3-hydroxypyridazin--6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre som et lysegult pulver (0,30 g) (A). De forenede organiske ekstrakter behandledes med en ringe mængde aktivt carbon og filtreredes, filtratet tørredes over vandig natriumsulfat, og opløsningsmidlet bortdampedes til dannelse af et oiieagtigt materiale, der udvaskedes godt med 50 ml ether til dannelse af 0,59 g 7-(o-t-butoxycarbonylaminomethylphenylacetamido)-3-(3--hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre som et lysegult pulver (B). Begge fraktioner (Λ) og (B) havde samme IR-spektre. Samlet udbytte 0,89 g (86¾). Smeltepunkt 160-170°C (dekomponering).

IR: ^ 1780, 1710, 1690, 1680, 1530 cm"1.

UV: λ 1 JxNaIIC°3 250 nm (£ 18400).

NMR: 6 ppm° lj35 C9 s)’ 3’55 (2H, 5). 4,02 C2 s), 3,3-4,7 (5 H, ikke godt adskilt), 4,95 (111, d, 4 Hz), 5,50x (1 H, d-d, 9, 4 Hz), 6,64 (111, d, 10 Hz), 7,04 (4 11, s), 7,18 (1 11, d, 10 Hz), 8,90XX (1 H, d, 9 Hz), 12,60xx (1 H, br-s).

( dublet (J=4 Hz) ved tilsætning af D2O. Forsvandt ved tilsætning af ϋ20).

Analyse beregnet for C2øll2gNjOyS2 · II^O: C: 52,34, H: 5,07, N: 11,74, S: 10,75 Fundet: C: 52,03, H: 4,98, N: 11,37, S: 10,09.

B.

7-(o-aminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6~ylthiomethyl)- -3-cephem-4-carboxylsyre_ 7 -(o-t-butoxycarbonylaminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxy-pyridazin-6-ylthiomethyl)-3-ccphem-4-carboxylsyre (500 mg, 0,87 mmol) sattes til'3 ml trifluoreddikesyre under omrøring ved 0°C, hvorpå blandingen omrørtes i yderligere 1 time under 0°C. Der tilsattes 100 ml ether til reaktionsblandingen, og det fremkomne bundfald opsamledes ved filtrering. Bundfaldet suspenderedes i 10 ml vand, og pH-vær-dien af denne suspension indstilledes på 5 ved tilsætning af fortyndet ammoniumhydroxid under omrøring. Det ønskede produkt 7-(o-aminomethyl-phenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4- 35 144527 -carboxylsyre opsamledes ved filtrering, udvaskedes med først 5 ml vand og derpå 5 ml acetonitril og tørredes i vakuum over phosphor-pentoxid. Produktet vejede 286 mg (67¾)· Smeltepunkt 222-230°C (de-komponering).

IR: 9 1770, 1665, 1640, 1580, 1395, 1005 cm"1.

IH il X

UV: ^ maxNaHC°3 250 nm 1840°)' 270 nm (sh) (£14600).

NMR: S p2^"K2C03 3,70 (2 II, s), 4,15 (211, s), 3,0-4,3 (411, ikke godt adskilt), 4,90 (IH, d, 4 Hz), 5,45 (1 11, d, 4 Hz), 6,63 (1 H, d, 9 Hz), 7,15 (4 H, s), 7,20 (1 II, d, Hz).

Analyse beregnet for .11^0: C: 49,02, H: 4,71, N: 13,61, S: 12,46.

Fundet: C: 48,66, H: 4,52, N: 13,04, S: 12,43.

Bksempel 22 - A.

7-(o-t-butoxycarbonylaminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyrida- zin-6-ylthiomethyl)-5-cephem-4-carboxylsyre_ lin opløsning af 1,0 g (3,7 mmol) o-t-butoxycarbonylaminomethyl-

'1/ <· - iUC-i-U

phenyleddikesyre samt 0,69 g (3,7 mmol)Vi 8 ml tør ethylacetat til-sattes på én gang 0,78 g Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimid, og blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 1 time. Dicyclohexylurinstof, som udskiltes, frafil treredes, og filtratet inddampedes under reduceret tryk til dannelse af den aktiverede ester som en gul olie. Den aktive ester opløstes i 30 ml TUF og afkøledes til 0°C. Opløsningen tilsattes på én gang en blanding af 7-amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (1,02 g, 3 mmol), 0,85 ml triethyl-amin, 30 ml TUF og 10 ml vand. Reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i 16 timer og behandledes med aktivt carbon. Filtratet fortyndedes med 50 ml vand og udvaskedes to gange med 100 ml ether.

Den vandige opløsning dækkedes med 100 ml ethylacetat og syrnedes til pH-værdien 2 med fortyndet saltsyre under kraftig omrøring ved 5-10°C. l)et vandige lag ekstraheredes to gange med 100 ml ethylacetat. Det organiske lag forenedes med ethylacetatekstrakterne, tørredes over vandfri natriumsulfat, behandledes med aktivt carbon og filtreredes. Bortdampning af opløsningsmidlet tilvejebragte 7-(o-t-butoxy-carbonylaminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre som et lysegult olieagtigt faststof, der tritureredes med 100 ml ether. Det BOC-beskyttede produkt opsamledes ved filtrering, udvaskedes med 30 ml ether og tørredes i vakuum.

36 144527

Produktet vejede 0,95 g (54¾).

B.

7-(o-aminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)--3-cephem-4-carboxyl syre _

Lin kold blanding af 0,95 g (1,6 mmol) af den BOC-beskyttede cephalosporin, 7-(o-t-butoxycarbonylaminomethylphenylacetamido)-3-(3--hydroxypyridazin-b-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyrc, samt 6 ml trifluoreddikcsyre omrørtes i 1 time ved 0-5°C. Der tilsattes til reaktionsblandingen 100 ml ether, og det fremkomne hvide bundfald opsamledes ved filtrering og udvaskedes med 100 ml ether. Suspensionen af bundfaldet i 10 ml vand indstilledes på pli-værdien 5 med fortyndet ammoniumhydroxid. Det ønskede produkt, 7-(o-aminomethylphenylacet-amido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, frafiltreredes, udvaskedes med 50 ml acetonitril og tørredes i vakuum over phosphorpentoxid. Udbytte 0,50 g (61¾).

Eksempel 23 - A.

7-(o-t-butoxycarbonylaminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin--6-yithiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre_

En afkølet (-3 til 0°C) og omrørt opløsning af 93 g 2,4-dinitro-phenyl-o-t-butoxycarbonylaminomethylphenylacetat i 600 ml tetrahydro-furan tilsattes på en gang en afkølet opløsning af 62 g (0,18 mol) 7-amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre samt 46 g (0,46 mol) triethylamin i 250 ml vand. Reaktionsblandingen omrørtes natten over, og man lod temperature stige til stuetemperatur. Blandingen behandledes med 10 g trækul og filtreredes. Filtratet inddampedes til ca. 300 ml under reduceret tryk ved en temperatur under 40°C. Koncentratet udvaskedes med fem 200 ml portioner ether og behandledes igen med ca. 20 g trækul. Filtratet dækkedes med 1 liter ether og syrnedes med fortyndet saltsyre til pH-værdien 3,5 under kraftig omrøring til dannelse af rå 7-(o-t-butoxycarbonylaminomethylphenyl-acetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomcthyl)-3-ccphem-4-carboxylsyre, der opsamledes ved filtrering, udvaskedes med 2 liter ether, 2 liter vand og 0,5 liter ether efter tur. Produktet vejede 90 g.

Råproduktet opdeltes i to dele. Første del (50 g) anvendtes til næste trin uden yderligere rensning.

Anden del (40 g) opløstes i 1 liter methanol til fjernelse af mørkfarvet uopløseligt materiale (3,9 g), og filtratet inddampedes til ca. 50 ml. Koncentratet tilsattes 300 ml acetonitril til dannelse 37 144527 af 17,4 g lysegult bundfald, der opsamledes ved filtrering og udvaskedes med 100 in 1 acetonitril. Inddampning af moderluden tilvejebragte yderligere 12,5 g produkt.

B.

7- (o-aminomethy1 phonylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)--3-cephem-4-carboxylsyre_______ (a) 50 g af den rå 7-(o-t-butoxycarbonylaminomcthylphenylacet-amido) -3- (3-hydroxypyr ida zin-6-yl thiometliyl) -3-ccplicm-4-carboxylsyre opløstes i 100 ml trifluoreddikesyre under afkøling. Opløsningen om-rørtes i 11 time ved 0-5°C. Tilsætning af 1 liter ether til opløsningen tilvejebragte trifluoracetatet af den ønskede cephalosporin, hvilket produkt opsamledes ved filtrering og udvaskedes med 300 ml ether. Trifluoracetatet opløstes i 100 ml vand, og opløsningen indstilledes på pH-værdien 4 med 10¾ ammoniumhydroxid til dannelse af det farvede produkt (26,6 g), hvilket udvaskedes med 300 ml vand og herefter 300 ml acetonitril, hvorpå produktet tørredes i vakuum. Råproduktet opløstes i 50 ml formamid ved stuetemperatur, og opløsningen tilsattes dråbevis 150 ml vand til dannelse af en ringe mængde farvet bundfald, som frafiltreredes. Filtratet tilsattes 1,5 liter acetonitril til dannelse af 7-(o-aminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6--ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre som et lysegult pulver. Produktet vejede 9,8 g.

(b) Samme fremgangsmåde som ovenfor beskrevet anvendtes med to fraktioner (17,4 g og 12,5 g) af genudfældet 7-(o-t-butoxycarbonyl-aminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3--cephem-4-carboxylsyre og tilvejebragte 12,3 g af det ønskede produkt, 7-(o-aminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)--3-cephem-4-carboxylsyre.

De to produkter fra (a) og (b), der ovenfor er beskrevet, havde næsten samme IR-spektre og MIC-værdier. Produkterne forenedes og analyseredes. Smeltepunkt 208°C (dekomponering).

Analyse beregnet for C21^5^^582 · 2: C: 47,36, H: 4,92, N: 13,15, S: 12,04 Fundet: C: 47,30, H: 4,37, N: 13,67, S: 12,38 47,56 4,50 13,71.

38 144527

Eksempel 24 7-(o-aminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyrimidin-6-ylthiomethyl)- -3-cephem-4-carboxylsyre_

En omrørt suspension af 0,63 g (2,1 mmol) natrium-o-(l-ethoxy-carbonyl-l-propen-2-ylaminomethvl)-phenylacetat i 5 ml tørret aceto-nitril indeholdende 1 dråbe Ν,Ν'-dimethylbenzylamin tilsattes 0,25 g (2,3 mmol) ethylchlorformiat under omrøring ved -15°C, og omrøringen fortsattes i 20 minutter ved -10 til -15°C. Blandingen tilsattes på en gang en opløsning af 0,71 g (2,1 mmol) 7-amino-3-(3-hydroxypyri-dazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre samt 0,21 g (2,1 mmol) triethylamin i 3 ml acetonitril samt 3 ml vand, hvorpå blandingen om-rørtes i 1 time ved 0°C, Reaktionsblandingen behandledes med en ringe mængde trækul og filtreredes. Filtratet tilsattes 0,5 ml myresyre under omrystning, og blandingen filtreredes til fjernelse af en ringe mængde uomsat 7-amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem--4-carboxylsyre. Filtratet tilsattes 100 ml acetonitril, og man lod blandingen henstå i 1 time ved stuetemperatur. Bundfaldet opsamledes ved filtrering, udvaskedes med 10 ml vand og tørredes i vakuum til dannelse af 0,49 g (48¾) 7-(o-aminomethylphenylacotamido)-3-(3-hydroxy-pyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre. Smeltepunkt 200--210°C (dekomponering).

Eksempel 25 7-o-aminomethylphenylacetamido-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)- -3-cephem-4-carboxylsyrc_ I en 1 liter trehalset rundbundet kolbe udstyret med et tørrerør, en topmonteret omrører og et termometer anbringes 24,0 g (0,08 mol) godt pulveriseret kalium-o-(l-carbomethoxypropen-2-ylaminomethyl)--phenylacetat i 550 ml tør tetrahydrofuran (TUF) samt 4 dråber N,N-dimethylbenzylamin. Suspensionen omrøres kraftigt, og der afkøles til -35 til -40° med et kuldebad af acetone og tøris. Suspensionen tilsættes 13,6 g (0,06 mol) isobutylchloroformiat på én gang, medens temperaturen holdes under -35°. lifter 2] minut fjernes kuldebadet af acetone og tøris, og der tilsættes en opløsning af 0,036 mol 7-amino--3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephcm-4-carboxylsyre samt 5,04 g (0,050 mol) N-methylmorpholin i 250 ml vand. Reaktionsblandingen omrøres, indtil den når stuetemperatur (1-2 timer). THF fjernes under reduceret tryk. Den vandige opløsning dækkes med 100 ml ethyl-acetat og syrnes til pH-værdien 1,7-2,0 med koncentreret HC1. Blandingen behandles med 3,5 g trækul ("Darco KB") og filtreres. Lagene ad- 39 144527 skilles, og den vandige fase ekstraheres med 2 x 100 ml portioner af ethylacetat. Den vandige fase filtreres derpå gennem filterpapir, og pil-værdien indstilles på 4,0. Efter skrabning henstår opløsningen natten over ved 5-7° til udkrystallisation. Produktet opsamles ved filtrering, udvaskes med en ringe mængde vand og tørres i en vakuumekssik-kator over P20[.. Udbyttet af 7-o-am.inomethylphenylacetamido-3-(3-hy-droxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre er ca. 301.

Eksempel 26

En suspension af zwitterionformen af 7-(o-aminomethylphenylacet-amido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethy1)-3-cephem-4-carboxylsyre (0,361 g) i 3 ml methanol afkøles i is og behandles med få dråber koncentreret saltsyre, indtil der fås en klar opløsning. 7-(o-amino-methylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem- 4-carboxylsyre,hydrochlorid udfælder som lysebrunt farvet faststof ved tilsætning af ether og samles ved filtrering, hvorpå det tørres i vakuum over P2O5·

Eksempel 27

En omrørt suspension af zwitterionformen af 7-(o-aminomethylphe-nylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carb-oxylsyre (0,361 g) tilsættes IN vandig natriumhydroxid ved stuetemperatur, indtil der fås en klar opløsning med pU-værdien 10,8. Denne opløsning frysetørres Øjeblikkeligt til dannelse af uren fast natrium-7-(o-aminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)--3-cephem-4-carboxylat.

40 144527

Fremstilling af dimethansulfonat Eksempel 28 ch2nh2 0 ς M ii /\ (\ ^ CHa-C-NH-CH—CH 0¾ »

\-^ /9-N ^C"CH2~S\ OH

o7 \—/

COOH

c2h5 + HOCHg-SO^Ha ~\~ CH^ (CHgJ^CH-COONa (3056 SEH i acetone) . 1. Opvarm i vand 2. Behandl med carbon og filtrer 3. Sæt filtratet til vandfri alkohol V ' CHgN (CHgSO-^Na) g r f \ ” /S\

faststof // y—CHp-C-NH-CH CH CHp N—N

7=7 Jc~cyi2s4^ J—oH

C

. i COONa • __J_ HgO __j_ EHA .

144527 41

Fremgangsmåde:

Anbring 2,0 mol (ca. 980 g på vandfri basis) 7-(o-aminomethyl-phenylacetamido-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carb-oxylsyre, 540 g natriumformaldehydhydrogensulfit (4,03 mol), 3000 ml vand og 2700 ml (4,87 mol) 30¾ SEII (natrium-2-ethylhexanoat) i acetone i en egnet beholder og opvarm under omrøring blandingen til 40-45°C. Blandingen danner i løbet af ca. 10 minutter en gul opløsning.

Sæt efter 15 minutters opvarmning 50 g affarvende trækul ("Darco KB") til opløsningen og omrør i yderligere 15 minutter ved 40-45°C.

Filtrer gennem diatoméjord ("Dicalite") efter opvarmning af reaktionsblandingen til 40-45°C i ialt 30 minutter.

Udvask filterkagen med 2000 ml 50¾ ethanol-vand.

Foren filtraterne, indstil temperaturen på 25°C og sæt ved 25°C opløsningen til 112 liter 100¾ ethylalkohol under hurtig omrøring.

Der dannes et fint, hvidt, amorft bundfald af di(natriummethansulfona-tet) af natrium-7-(o-aminomethylphenylacetainido-3-(3-hydroxypyridazin--6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat.

Omrør suspensionen i ca. 10 minutter og filtrer herpå og udvask filterkagen med 15 liter 1001 ethylalkohol.

Tør filterkagen ved 50-55°C i en ovn med luftcirkulation i ca. 2 timer og derpå under et vakuum ved 4-6 mm i 24 timer.

Udbyttet andrager ca. 1200-1400 g amorft, hvidt fast di-(natrium-methansulfonatet) af natrium-7-(o-aminomethylphenylacetamido-3-(3-hy-droxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat. Produktet indeholder normalt adskillige procent vand og muligvis spor af ethanol.

Dette produkt betegnes også natrium-7-/o-N,N-bis-(natriumsulfome-thyl)-aminomethylphenylacetamidq7-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl) -3-cephem-4-carboxylat.

Eksempel 29

Der fremstilles følgende opslæmning: 2,19 g natriumformaldehydhydrogensulfit (2 ækvivalenter).

3,5 g 7-(o-aminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6--ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyrezwitterion (100-200 mesh).

25 ml vand (voluminet kan varieres).

14 ml 30¾ SEH-isopropanol.

Der fås i løbet af ca. \ times hurtig omrøring ved 24°C næsten en klar opløsning. Temperaturen af blandingen hæves hurtigt til 40-43°C. Temperaturen holdes her i ca. 2 minutter, hvorpå der hurtigt afkøles til 20-23°C.

42 144527

Opløsningen filtreres til fjernelse af uopløseligt materiale (den samlede tid på opløst form bør ikke overskride to timer).

Opløsningen med pli-værdi 7,3 sættes i løbet af et tidsrum på 5 minutter til 600 ml absolut ethanol under meget hurtig omrøring (andre alkoholer, såsom vandfri isopropanol, kan anvendes). Der dannes et amorft bundfald af di(natriummethansulfonat) af 7-(o-aminomethylphenyl-acetamido)-3-(3-hydroxypyridaz in-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat. Blandingen omrøres i 5 minutter. Bundfaldet opsamles ved filtrering, udvaskes med 60 ml ethanol (eller isopropanol) og vakuumtørres ved 50°C i 24 timer. Udbyttet andrager ca. 4,3 g.

Produktet kan ved pil-værdien ca. 7 opløses i vand i en mængde på ca. 200 mg/ml. En sådan opløsning er stabil i mindst 2 timer ved stuetemperatur. Mere fortyndede opløsninger er stabile i endnu længere tidsrum. Produktet har samme antibakterielle spektrum som udgangszwit-terionen og er fuldt biologisk aktivt, hvadenten det er hydrolyseret tilbage zwitterionen eller ej.

Eksempel 30

Natrium-7-^o-N,N-bis-( natriumsulfomethyl)-aminomethylphenylacetamidq7--3-(3-hydroxypyridaz in-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat. Fremstilling under anvendelse af hydroxymethansulfonat.__

En blanding 1 g (2,05 mmol) 7-(o-aminomethylphenylacetamido)-3--(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyres zwitter-ion, 1,56 g (10 mmol) natriumhydroxymethansulfonatmonohydrat, 6 ml (6 mmol) 1M SEH-opløsning i ethylacetat, 10 ml isopropanol og 10 ml vand omrørtes ved stuetemperatur i 31 time. Den fremkomne opløsning behandledes med 1 g aktivt carbon og udhældtes under omrøring i 500 ml absolut ethanol, hvorpå blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 30 minutter til dannelse af det krystallinske produkt, som opsamledes ved filtrering, udvaskedes med tre 50 ml portioner absolut ethanol og tørredes over P2O5 ved 45-52°/l mm i 20 timer til dannelse af 1,64 g natrium-7-/o-N,N-bis-(natriumsulfomethyl.)-aminomethylphenylacetamidq7--3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiometi.yl)-3-cephem-4-carboxylat, der var let opløseligt i vand (>1 g/ml). Smeltepunkt > 270°.

IR: ^ max 1760> 1680“1620> 1580, 1400> 1200> 1040 cm-1.

UV: λ H2° 249 nm (£ 14.900), 272 nm (£ 10.900, sh), 320 nm (£

IllclX

2.100, sh).

43 144527 NMR: S D2° 3,30-4,0 (6H, m, S-CH,, 0-CH7-CO og Ø-CH.-N eller ppm —— 4.

3-CH2-S), 4,04 (2II, s, N-CH2-0 eller 3-CH2-S), 4,30 (4H, s, N-CH2--S03Na), 4,89 (III, d, 4 Hz, 6-H), 5,40 (111, d, 4 Hz, 7-H), 6,78 (IH, d, 9,5 Hz, pyridazin-II), 7,1-7,4 (4H, phenyl-H), 7,32 (IH, d, 9,5 Hz, pyridazin-II).

Eksempel 31

Natrium-7-/o-N,N-bis-( natriumsul forne thyl )-aminomethylphenylacetamidoj--3-(3-hydroxypyridaz in-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat. Fremstilling under anvendelse af formalin og natriumhydrogensulfit.

(a) En opløsning af 1 ml (10 mmol) 30¾ formalin og 1 g natriumhydrogensulf it i 10 ml vand tilsattes successivt 0,975 g (2 mmol) 7- -(o-aminomethylphenylacetamido)-3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)--3-cephem-4-carboxylsyres zwitterion, 6 ml 1M SEH-opløsning og 10 ml isopropanol. Blandingen omrørtes i 2\ time ved stuetemperatur og udholdtes i 300 ml ethanol. Det fremkomne natrium-7-/o-N,N-bis-(natrium-sulfomethyl)-aminomethylphenylacetamido7-3-(3-hydroxypyridazin-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat opsamledes ved filtrering, udvaskedes med tre 50 ml portioner ethanol og tørredes i vakuum. Udbytte 1,60 g.

(b) En blanding af 0,975 g (2 mmol) 7-(o-aminomethylphenylacetamido) -3-(3-hydroxypyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyres zwitterion, 6 ml 1M SHII i ethylacetat, 10 ml isopropanol og 10 ml vand tilsættes 1 ml (IQ mmol) 30¾ formalin. Blandingen omrøres i 2 timer ved stuetemperatur til dannelse af en klar opløsning med en ringe mængde olieagtigt bundfald. Efter tilsætning af 1 g natriumhydro-gensulfit omrøres opløsningen i yderligere 2 timer, hvorunder det olieagtige bundfald opløses. Reaktionsblandingen udhældes i 300 ml ethanol under kraftig omrøring til dannelse af 1,84 g natrium-7-^b--N,N-bis-(natriumsulfomethyl.)-aminomethylphenylacetamidq7-3-(3-hydroxy-pyridazin-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat, der opsamledes ved filtrering, udvaskedes med tre 50 ml portioner ethanol og tørredes i vakuum.