DK144856B - Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af triglycerider - Google Patents
Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af triglycerider Download PDFInfo
- Publication number
- DK144856B DK144856B DK331776AA DK331776A DK144856B DK 144856 B DK144856 B DK 144856B DK 331776A A DK331776A A DK 331776AA DK 331776 A DK331776 A DK 331776A DK 144856 B DK144856 B DK 144856B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- cuvette
- serum
- general formula
- triglyceride
- compound
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 28
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 10
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 title claims description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 15
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 14
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 14
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 14
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 11
- 108010051152 Carboxylesterase Proteins 0.000 claims description 9
- 102000013392 Carboxylesterase Human genes 0.000 claims description 9
- 240000005384 Rhizopus oryzae Species 0.000 claims description 8
- 235000013752 Rhizopus oryzae Nutrition 0.000 claims description 8
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 claims description 7
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- -1 alkaline earth metal sulfate sulfate Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 6
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 5
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 claims description 5
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims description 5
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 claims description 4
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 4
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims 1
- DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-M phosphoenolpyruvate Chemical compound OP(O)(=O)OC(=C)C([O-])=O DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000057621 Glycerol kinases Human genes 0.000 description 5
- 108700016170 Glycerol kinases Proteins 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 4
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 4
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 3
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Polymers CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229930029653 phosphoenolpyruvate Natural products 0.000 description 2
- DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-K phosphonatoenolpyruvate Chemical compound [O-]C(=O)C(=C)OP([O-])([O-])=O DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 2
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 2
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 2
- UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-methylpropane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(C)CO UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Natural products CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- HOPRXXXSABQWAV-UHFFFAOYSA-N anhydrous collidine Natural products CC1=CC=NC(C)=C1C HOPRXXXSABQWAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001429 cobalt ion Inorganic materials 0.000 description 1
- UTBIMNXEDGNJFE-UHFFFAOYSA-N collidine Natural products CC1=CC=C(C)C(C)=N1 UTBIMNXEDGNJFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000001000 lipidemic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N n-heptadecyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCO GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N sym-collidine Natural products CC1=CN=C(C)C(C)=C1 GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/61—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving triglycerides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/939—Rhizopus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
Description
i
14485G
Fra beskrivelsen til dansk patentansøgning nr. 2452/73 kendes en fremgangsmåde til bestemmelse af triglycerider i en vandholdig væske ved hjælp af enzymatisk forsæbning ved hjælp af lipase fra Rhizopus arrhizus samt måling af ^ den frigjorte glycerol, hvilken fremgangsmåde er karakteristisk ved, at forsæbningen foretages i nærværelse af såvel lipase som carboxylesterase og et alkalimetal- eller jordalkalimetalalkylsulfat med 10 til 15 carbonatomer i alkylgruppen.
10 En ulempe ved denne kendte fremgangsmåde består i, at der i mange tilfælde, især i tilfælde af stærkt lipæmiske sera, optræder uklarheder, som skyldes frigjorte fedtsyrer og kraftigt forstyrrer den optiske bestemmelse. Principielt er det ganske vist muligt ved hjælp af tilsætning af deter-15 genter at holde fedtsyrer i opløsning, men ved de hertil nødvendige detergentmængder hæmmer disse til gengæld enzymerne. Undersøgelse af et meget stort antal materialer med overfladeaktiv virkning gav til resultat, at ingen af disse materialer på tilfredsstillende måde var i stand til at op-2o fylde begge fordringer, d.v.s. hindring af uklarheder og ingen forstyrrelse af enzymaktiviteterne.
Den foreliggende opfindelse tager derfor sigte på at angive en fremgangsmåde til bestemmelse af triglycerider, som muliggør den fuldenzymatiske forsæbning og bestemmelse, 25 hindrer uklarheder, som fremkaldes ved hjælp af frigjorte fedtsyrer, og ikke på uheldig måde påvirker enzymaktiviteten.
Dette opnås ifølge opfindelsen ved hjælp af en fremgangsmåde af den i krav l's indledning angivne art, som er ejen-30 dommelig ved, at forsæbningen foretages i nærværelse af yderligere en forbindelse med den almene formel RO(Cl^-CH90) H, hvori R betyder en alkyl- eller alkenylgruppe med 14 til 20 carbonatomer, og n betyder et tal fra 7 til 20.
2 144858
Fra tysk offentliggørelsesskrift nr. 2.327.894 kendes allerede en fremgangsmåde til forhindring af uklarhed i blodprøver eller serum, hvilken uklarhed fremkaldes af trigly= cerider og altså ikke af forsæbningsprodukter deraf. Ifølge 5 denne fremgangsmåde tilsættes prøven en polyoxyethyleret laurinsyreforbindelse med 9 til 20 mol ethylenoxid. Forsøg viste, at med dette middel kunne de ved den enzymatiske spaltning af triglyceriderne optrædende uklarheder ikke forhindres, og endvidere, at der skete en hæmning af lipo= ]_q lysen. Den nævnte forbindelse er derfor uegnet til løsning af det til grund for opfindelsen liggende problem.
Til fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes fortrinsvis en lipase fra Rhizopus arrhizus. Der kan imidlertid også anvendes andre lipaser, uden at reaktionsvarigheden og reak-tionstemperaturen behøver at blive forøget. Brugbarheden af en lipase ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen bestemmes delvis også ved hjælp af carboxylesterasen. Som carboxyl= esterase anvendes fortrinsvis en kendt esterase fra mikroorganismer* Den ved fremgangsmåden omhandlet i nævnte be-2ø skrivelse til ansøgning nr. 2452/73 opnåede aktivering af lipasen ved hjælp af alkylsulfat bliver derved ikke blot opnået, men det lykkes endog yderligere at formindske varigheden og reaktionstemperaturen i forhold til varigheden og reaktionstemperaturen ved den kendte fremgangsmåde.
25 Ifølge opfindelsen foretrækkes anvendelsen af forbindelser med den i krav 1 angivne almene formel, hvori n betyder et tal fra 9 til 15. Især foretrækkes forbindelser, hvori n er lig med 12.
Forbindelserne med den i krav 1 angivne almene formel an-3Q vendes hensigtsmæssigt i mængder fra 0,015 til 0,3 mg pr. ml måleopløsning.
U4856 3
Kobolt- og/eller magnesiumioner kan tilsættes til yderligere reaktionsfremskyndelse, da disse ioner har en vis aktiverende virkning på lipasen eller esterasen.
Ved tilsætning af serumalbumin undgås en uklarhed som følge 5 af udfældede sæber pålideligt, så at sådanne sæber ikke behøver at blive fraskilt, f.eks. ved hjælp af centrifugering. Serumalbumin tilsættes hensigtsmæssigt i en mængde på mellem 0,1 og 2,0 mg pr. ml måleopløsning.
En tilsætning af serumalbumin, især kvægserumalbumin, fore-10 trækkes, når prøven ikke indeholder fra protein associerede triglycerider.
Som puffere kan anvendes alle puffere, der er virksomme indenfor pH-området 6-9, fortrinsvis mellem 7 og 8,5. Eksempler på egnede puffere er triethanolaminpuffer, trispuf-15 fer, imidazolpuffer, veronalpuffer, glycinpuffer samt, mindre foretrukket, amediolpuffer, boratpuffer og collidin-puffer.
Til forskel fra fremgangsmåden ifølge ansøgning nr. 2452/73 egner imidlertid også phosphatpuffere sig ved den forelig-20 gende fremgangsmåde og er endog foretrukne. Som særligt egnet viste sig en 0,02-0,1 M phosphatpuffer med pH fra 6,5 til 8,0.
Opfindelsen angår endvidere et reagens til anvendelse ved den omhandlede fremgansmåde.
25 Reagenset til gennemførelse af fremgangsmåden ifølge op- 4 144356 findelsen, som indeholder lipase, især fra Rhizopus arrhizus, carboxylesterase, alkalimetal- eller jordalkalimetalalkyl= sulfat med 10 til 15 carbonatomer i alkylgruppen, puffer og et system til påvisning af glycerol, er ejendommeligt 5 ved et indhold af yderligere en forbindelse med den almene formel RO(CH2CH20)nH, hvori R betyder en alkyl- eller alkenyl= gruppe med 14 til 20 carbonatomer, og n betyder et tal fra 7 til 20.
Ligesom ved fremgangsmåden ifølge ansøgning nr. 2452/73 kan 10 der ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse principielt anvendes ethvert system til påvisning af glv= cerol, idet der dog foretrækkes et påvisningssystem, som består af NADH, ATP, PEP, LDH, PK, GK samt magnesiumioner og puffer.
15 Et særlig egnet reagens indeholder pr. ml måleopløsning 0,1 til 10,0 mg lipase fra Rhizopus arrhizus, 0,01 til 20,0 mg carboxylesterase fra mikroorganismer, 0,01 til 0,2 mg natriumdodecylsulfat, 0,015 til 0,3 mg af en blanding af cetyl- og stearyl= 20 polyglycolether med 12 mol ethylenoxid, 1 til 20 mmol nicotinamid-adenin-dinucleotid i reduceret form (NADH), 10 til 100 mmol adenosintriphosphat (ATP), 2 til 20 mmol phosphoenolpyruvat (PEP), 25 0,05 til 5 mg lactatdehydrogenase (LDH), 0,2 til 5 mg phosphoenolkinase (PK), 0,05 til 10 mg glycerolkinase (GK), 0,1 til 2,0 mg serumalbumin, 3 til 30 mmol magnesiumioner, og 30 0,012 til 0,3 molær pufferopløsning, pH 6 til 9.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen forøger præcisionen ved bestemmelsen yderligere. Endvidere er det muligt at for- U4856 5 mindske den samlede tid til gennemførelse af en bestemmelse til 10 minutter og derved at arbejde ved stuetemperatur.
Opfindelsen belyses nærmere i de følgende eksempler.
EKSEMPEL· 1 5 Et reagens til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstilles ud fra 1. Pufferopløsning: 0,05 mol natriirniphosphatpuffer pH 7,0 inde holdende 4 rrrtol magnesiumsulfat, 0,01% natriumdodecylsulfat, 10 0 ,015% blanding af ætyl- og stearylalkohol= polyglycolether med 12 mol ethylenoxid.
2. Coenzymbianding: 10 mmol NADH
22 mmol ATP-natriumsalt 18 mmol PEP-cyklohexylammoniumsalt.
15 3. Enzymblanding: 400 E/ml lipase (Rhizopus arrhizus) 50 E/ml carboxylesterase (mikroorganismer) 50 E/ml PK (kaninmuskel) 300 E/ml LDH (svinehjerte) som sus-2Q pension i ammoniumsulfatopløsning.
4. 150 E/ml glycerolkinase,suspenderet i ammoniumsulfat opløsning.
Blandingerne 1 til 4 er ved +4°C holdbare i mindst 1 år.
Blanding 2 er efter opløsning ved denne temperatur holdbar 25 i ca. 2 uger.
Af reagenserne 1 til 3 fremstilles en reaktionsblanding, som i kølet tilstand er holdbar i ca. 2 dage. Blanding 2 144856 6 opløses dertil forinden i destilleret vand. Til opnåelse af den færdige reaktionsblanding blandes derpå opløsningerne 1 og 2 samt suspensionen 3 i volumenforholdet 50:1,0:1,0.
Bestemmelsen kan gennemføres med eller uden blindværdi.
5 Gennemførelse af bestemmelsen med prøveblindværdi: 5,0 ml reaktionsblanding af 1, 2 og 3 blandes med 0,1 ml serum. Deraf udtages 2,0 til 2,5 ml og blandes med 0,01 ml suspension 4 (prøve). Resten tjener som prøveblindværdi.
Begge opløsninger lades henstå i ca. 10 minutter ved ca.
10 20 til 25°C, og prøvens ekstinktion i forhold til prøve- blindværdien måles. Den fundne værdi anvendes til beregningen.
Bestemmelse uden prøveblindværdi: 2,5 ml af reaktionsblandingen af 1, 2 og 3 blandes med 0,05 15 ml serum, lades henstå i ca. 10 minutter ved ca. 20 til 25°C, og ekstinktionen af denne opløsning aflæses. Derpå iblandes 0,01 ml suspension 4, og efter 10 minutter aflæses ekstinktionen atter. Forskellen mellem de to målinger anvendes til beregningen. Målingen foregår i et fotometer ved 365 nm, 20 340 nm eller'334 nm.
Beregningen foregår alt efter målebølgelængden ved multiplikation af ekstinktionsforskellen med 15,5 (365 nm) eller 8,23 (340 nm) eller 8,53 (334 nm), idet resultatet opnås i mmol triglycerid pr. liter prøve, 25 Gentagelse af bestemmelsen med forskellige mængder triglycerid i serum resulterer i en ret linie. Proportionaliteten r (korrelationskoefficienten) er lig med 0,997.
7 U6856 EKSEMPEL 2
Til sammenligning af fremgangsmåden ifølge opfindelsen og det dertil benyttede reagens med henholdsvis fremgangsmåden og reagenset ifølge ansøgning nr. 2452/73 blev der gennemført 5 følgende forsøg:
Forsøg 1 og 2.
4,9 ml af komponent 1 i eksempel 1 ifølge ansøgning nr.
2452/73, 0,2 ml af komponent 2 i eksempel 1 ifølge ansøgning nr.
10 2452/73, 0,1 ml af komponent 3 + 4 i eksempel 1 ifølge ansøgning nr. 2452/73, og 0,1 ml serum (ca. 500 mg% triglycerid) blev blandet. Af denne opløsning blev 2,5 ml anbragt i cu-15 vette 1, medens resten blev bragt i cuvette 2.
Forsøg 3 og 4.
5 ml af pufferopløsning 1 ifølge eksempel 1, 0,1 ml coenzymblanding 2 ifølge eksempel 1, 0. 1 ml enzymblanding 3 ifølge eksempel 1, og 20 0,1 ml serum (som ved forsøg 1 og 2) blev blandet. Af den opnåede opløsning anbringes 2,5 ml i cuvette 3, medens resten anbringes i cuvette 4.
Efter ca. 20 minutter afpipetteres 0,01 ml GK-suspension i hver af cuvetterne 1 og 3. Cuvetterne 2 og 4 anvendes som 25 prøveblindværdi.
Resultater: 1. Genfindelse efter vurdering med prøveblindværdi:
Claims (6)
1. Fremgangsmåde til bestemmelse af triglycerider i en 20 vandholdig væske, såsom serum,ved hjælp af enzymatisk forsæbning med lipaser, især fra Rhizopus arrhizus, i nærværelse af såvel lipase som en carboxylesterase og et alkalimetal- eller jordalkalimetalalkylsulfat med 10 til 15 car= bonatomer i alkylgruppen og måling af den frigjorte glyce= 25 rol, kendetegnet ved, at forsæbningen foretages i nærværelse af yderligere en forbindelse med den almene formel R0(CH2CH20)nH (i), hvori R betyder en alkyl- eller al= kenylgruppe med 14 til 20 carbonatomer, og n betyder et tal fra 7 til 20. 1U856
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der anvendes en forbindelse med den almene formel (1), hvori n er et helt tal fra 9 til 15.
2. Uklarhed. Umiddelbart efter prøvetilsætningerne var alle forsøgsmængder næsten klare. I cuvette 1 og 2 indtræder efter 5 minutter en tydelig uklarhed. I cuvette 3 og 4 indtræder -|_5 efter 1/2 minut en klaring. Efter 55 minutter var opløsningen i cuvette 4 endnu klar, medens opløsningen i cuvette 2 var meget uklar. Patentkrav.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2,kendetegnet 5 ved, at der anvendes en forbindelse med den almene formel (l), hvori n betyder tallet 12.
4. Fremgangsmåde ifølge ethvert af kravene 1 til 3, kendetegnet ved, at der anvendes 0,015 til 0,3 mg af forbindelsen med den almene formel (l) pr. ml måleopløs-10 ning.
5. Reagens til gennemførelse af fremgangsmåden ifølge ethvert af kravene 1 tilk og indeholdende lipase, især fra Rhizopus arrhizus, carboxylesterase, alkalimetal- eller jordalkalimetalalkylsulfat med 10 til 15 carbonatomer i 15 alkylgruppen, puffer og et system til påvisning af glyce= rol, kendetegnet ved et indhold af yderligere en forbindelse med den almene formel R0(CH2CH20)nH (l), hvori R betyder en alkyl- eller alkenvlgruppe med 14 til 20 car= bonatomer, og n betyder et tal fra 7 til 20.
6. Reagens ifølge krav 5, som pr. ml måleopløsning inde holder 0,1 til 10 mg lipase fra Rhizopus arrhizus, 0,01 til 20,0 mg carboxylesterase fra mikrooganismer, 0,01 til 0,2 mg natriumdodecylsulfat, 25. til 20 mmol nicotinamid-adenin-dinucleotid i reduceret form, 10 til 100 mmol adenosintriphosphat, 2 til 20 mmol phosphoenylpyruvat, 0,5 til 5 mg lactatdehydrogenase,
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2535953 | 1975-08-12 | ||
| DE19752535953 DE2535953C2 (de) | 1975-08-12 | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Triglyceriden |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK331776A DK331776A (da) | 1977-02-13 |
| DK144856B true DK144856B (da) | 1982-06-21 |
| DK144856C DK144856C (da) | 1982-11-08 |
Family
ID=5953826
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK331776A DK144856C (da) | 1975-08-12 | 1976-07-22 | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af triglycerider |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4066508A (da) |
| JP (1) | JPS5223110A (da) |
| AT (1) | AT354406B (da) |
| BE (1) | BE845042R (da) |
| CA (1) | CA1057179A (da) |
| CH (1) | CH607028A5 (da) |
| CS (2) | CS219875B2 (da) |
| DD (1) | DD126398A6 (da) |
| DK (1) | DK144856C (da) |
| FR (1) | FR2321126A2 (da) |
| GB (1) | GB1502204A (da) |
| HU (1) | HU175208B (da) |
| IT (1) | IT1065064B (da) |
| NL (1) | NL7608735A (da) |
| SE (1) | SE420216B (da) |
| SU (1) | SU641884A3 (da) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4195126A (en) * | 1977-10-04 | 1980-03-25 | The Board Of Trustees Of The University Of Alabama | Albumin-dye complex for fatty acid determination |
| US4223090A (en) * | 1978-07-13 | 1980-09-16 | American Hospital Supply Corporation | Reagents for the enzymatic determination of triglycerides |
| US4254222A (en) * | 1978-07-19 | 1981-03-03 | Owen Oliver E | Semi-quantitative assay of lactic acid and β-hydroxy butyrate |
| DE2839433A1 (de) * | 1978-09-11 | 1980-03-20 | Merck Patent Gmbh | Waessrige lipid-standardloesung und verfahren zu ihrer herstellung |
| US4394445A (en) * | 1979-02-22 | 1983-07-19 | Nix Paul T | Enzymatic glyceride hydrolysis |
| US4259440A (en) * | 1979-05-21 | 1981-03-31 | Miles Laboratories, Inc. | Hydrolysis and assay of triglycerides |
| DE3007764A1 (de) * | 1980-02-29 | 1981-10-15 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagens zur bestimmung der beta -lipoproteine |
| US4309502A (en) * | 1980-06-30 | 1982-01-05 | Beckman Instruments, Inc. | Enzymatic assay for glycerol and triglycerides and a reagent for use therein |
| US4338395A (en) * | 1980-07-21 | 1982-07-06 | Technicon Instruments Corporation | Method for the analysis of triglycerides |
| EP0045031A1 (en) * | 1980-07-22 | 1982-02-03 | Baker Instruments Corporation | Glycerol detection reagent and its use |
| US4503146A (en) * | 1980-10-01 | 1985-03-05 | Technicon Instruments Corporation | Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor |
| JPS59173080A (ja) * | 1983-03-19 | 1984-09-29 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | リパ−ゼの安定化方法 |
| US5310679A (en) * | 1985-05-13 | 1994-05-10 | Artiss Joseph D | Composition for reducing turbidity in samples of biological fluids |
| US4626511A (en) * | 1985-05-13 | 1986-12-02 | Wayne State University | Composition for reducing turbidity in samples of biological fluids |
| GB8514708D0 (en) * | 1985-06-11 | 1985-07-10 | Unilever Plc | Enzymatic detergent composition |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3853465A (en) * | 1972-06-09 | 1974-12-10 | Technicon Instr | Turbidity reduction in serum and plasma samples using polyoxyethylated lauric acid compounds |
| AT324282B (de) * | 1972-06-19 | 1975-08-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagens zur bestimmung von triglyceriden |
| US4011045A (en) * | 1975-02-14 | 1977-03-08 | Bonderman Dean P | Turbidity reduction in triglyceride standards |
| US4012287A (en) * | 1975-11-18 | 1977-03-15 | Dr. Bruno Lange Gmbh | Method and reagent for the quantitative analysis of triglycerides |
-
1976
- 1976-06-08 AT AT416376A patent/AT354406B/de not_active IP Right Cessation
- 1976-06-10 GB GB24061/76A patent/GB1502204A/en not_active Expired
- 1976-07-06 CS CS766611A patent/CS219875B2/cs unknown
- 1976-07-06 CS CS764473A patent/CS219874B2/cs unknown
- 1976-07-07 CA CA256,485A patent/CA1057179A/en not_active Expired
- 1976-07-21 US US05/707,455 patent/US4066508A/en not_active Expired - Lifetime
- 1976-07-22 DK DK331776A patent/DK144856C/da not_active IP Right Cessation
- 1976-07-26 IT IT25712/76A patent/IT1065064B/it active
- 1976-07-30 SU SU762386217A patent/SU641884A3/ru active
- 1976-08-06 FR FR7624214A patent/FR2321126A2/fr active Granted
- 1976-08-06 NL NL7608735A patent/NL7608735A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-08-09 CH CH1014376A patent/CH607028A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-08-10 BE BE169690A patent/BE845042R/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-08-10 DD DD194266A patent/DD126398A6/xx unknown
- 1976-08-10 SE SE7608919A patent/SE420216B/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-08-11 HU HU76BO1627A patent/HU175208B/hu unknown
- 1976-08-12 JP JP51096608A patent/JPS5223110A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BE845042R (fr) | 1977-02-10 |
| FR2321126A2 (fr) | 1977-03-11 |
| CS219875B2 (en) | 1983-03-25 |
| SE420216B (sv) | 1981-09-21 |
| IT1065064B (it) | 1985-02-25 |
| DD126398A6 (da) | 1977-07-13 |
| FR2321126B2 (da) | 1980-10-10 |
| ATA416376A (de) | 1979-06-15 |
| CA1057179A (en) | 1979-06-26 |
| DK144856C (da) | 1982-11-08 |
| JPS5223110A (en) | 1977-02-21 |
| GB1502204A (en) | 1978-02-22 |
| CS219874B2 (en) | 1983-03-25 |
| DK331776A (da) | 1977-02-13 |
| AT354406B (de) | 1979-01-10 |
| US4066508A (en) | 1978-01-03 |
| SU641884A3 (ru) | 1979-01-05 |
| CH607028A5 (da) | 1978-11-30 |
| NL7608735A (nl) | 1977-02-15 |
| SE7608919L (sv) | 1977-02-13 |
| HU175208B (hu) | 1980-06-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK144856B (da) | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af triglycerider | |
| CA1131097A (en) | Process and a reagent for the removal of turbidities | |
| US4543326A (en) | Stabilization of oxidase | |
| Webb | The action of alkyl fluorophosphonates on esterases and other enzymes | |
| EP0019253B1 (en) | Test device, composition and method for the determination of triglycerides | |
| US3862009A (en) | Determination of triglycerides | |
| US4978624A (en) | Reagent for the determination of a differential white blood cell count | |
| CS212729B2 (en) | Method of determining glycerol ester and fatty acid contents in aqueous media,and an enzymatic agent for carrying out the method | |
| Warren | [67] Thiobarbituric acid assay of sialic acids | |
| CS244665B2 (en) | Method of enzymatic determination of enzyme substrates | |
| EP0214613A2 (en) | Method for determination of a differential white blood cell count | |
| CA1212022A (en) | Process and a reagent for the determination of blood glucose in haemolysed whole blood | |
| US4503146A (en) | Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor | |
| US4801549A (en) | Method for the determination of a differential white blood cell count | |
| JPH01108997A (ja) | 血液又は血液から導出した試料中の血清のフルクトスアミン含量を特異的に測定する方法及び試薬、及び非特異的還元作用を有するか、又は／及び溷濁を惹起する試料成分を除去する方法 | |
| JP4013108B2 (ja) | リパーゼの安定化方法 | |
| EP0037742A2 (en) | Method for the estimation of hydroxysteroids and reagent system therefor | |
| GB2084726A (en) | Reagent for reducing turbidity in a biological fluid | |
| EP0104780B1 (en) | Measurement of alpha-amylase activity | |
| JP4018237B2 (ja) | 酵素活性測定用リパーゼ基質溶液およびリパーゼ活性測定用試薬キット | |
| Morton | The phosphotransferase activity of phosphatases. 1. Spectrophotometric methods for the estimation of some phosphate esters and other compounds | |
| JPH0367600A (ja) | リパーゼ定量用単一試薬系およびその製造方法 | |
| US4207203A (en) | Uric acid standard solutions | |
| EP0418940B1 (en) | Stabilization of glucose oxidase enzyme in liquid reagent | |
| CN119372283B (zh) | 一种胆碱酯酶测定试剂及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |