DK149113B

DK149113B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af et acth-derivat indeholdende fra 10 til 21 aminosyreester eller farmakologisk acceptable salte eller metalkomplekser deraf

Info

Publication number: DK149113B
Application number: DK314277AA
Authority: DK
Inventors: Hendrik Marie Greven; David De Wied
Original assignee: Akzo Nv
Priority date: 1976-07-12
Filing date: 1977-07-11
Publication date: 1986-01-27
Also published as: IE45738L; FI67365B; DK314277A; BE856695A; SE7708037L; US4110322A; JPS5325562A; FI772155A7; FR2358383B1; HU179665B; CA1109060A; GB1566836A; LU77739A1; AU2675277A; SE442121B; CH633523A5; NL7607683A; DE2731282A1; FR2358383A1; ES460618A1

Description

149113

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte ACTH-derivater med den almene formel: A-L-B-D-Lys-L-Phe-Gly-(L eller D)Lys-L-Pro-L-Val-Gly-L-Lys-L-Lys-X (I) 'eller farmakologisk acceptable salte, herunder syreadditionssalte, eller metalkomplekser deraf, hvori A er en N-endestillet kædeforlængelse valgt blandt hydrogen og en N-acylgruppe valgt blandt U-Q^, U-Q2“Q^ og Qg-C^-Q-^, hvori U er valgt blandt hydrogen og N-alkylcarbonyl med 1-6 carbonatomer, er valgt blandt aminosyreresterne L-His, D-His og NH-Z-CO, hvori Z er en usubstitueret, monohydroxysubstitueret eller monoaminosubsti-tueret alkylen- eller alkylidengruppe med 1-6 carbonatomer; Q2 er valgt blandt aminosyreresterne L-Glu,D-Glu, L-Gln, D-Gln og -NH-Z-CO; og 2 149113 er valgt blandt syreresterne U-L-Metf U-L-Met(♦ O), U-L-Met(* O2), ϋ-D-Met, U-D-Met {-* O), U-D-Met (♦ C>2), desamino-Met, desamino-Met (— 0), desamino-Met(-* 02) og UNH-Z-CO-, B er en aminosyrerest valgt blandt Phe, Trpf Tyr og -NH-CHR^-CO-, hvori R·'" er hydrogen eller alkyl med 1-6 carbonatomer; og X er valgt blandt hydroxy, en esterificeret hydroxygruppe afledt af en alifatisk alkohol med 1-8 carbonatomer, en usubstitueret amino-gruppe og en substitueret aminogruppe valgt blandt en mono-C^_g-alkyl= aminogruppe, en di-C^_g-alkylaminogruppe og L-Arg, L-Lys og en peptidrest med sekvensen 17-18, 17-19 indtil og med 17-24 ACTH eller den C-endestillede C^_g-alkylester eller det C-endestillede amid deraf, idet Lys kan indgå i stedet for Arg i nævnte peptidrest med sekvensen fra 17-18 og op til 17-24 ACTH.

De ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser er psykofarmakologisk aktive forbindelser og udviser en inhibering af ophævelsen af betinget flugtopførsel, og som resultat heraf er de fortrinligt egnede til behandling af mentale forstyrrelser, ved hvilke en stimulering af den cerebrale funktion er ønsket, såsom i tilfælde af senilitet.

Fra European Journal of Pharmacology 2, 14 (1967) er det kendt, at det naturlige adrenocorticotrope hormon (ACTH) og nærmere betegnet • visse peptiddele deraf forsinker ophævelsen af den såkaldte "betingede flugtopførsel". Navnlig peptidet indeholdende aminosyresekven-sen 4-10 fra ACTH viste sig at være den mindste peptiddel, som var lige så aktiv som ACTH selv i denne henseende.

Af U.S.A. patentskrift nr. 3.853.836 fremgår det imidlertid, at dén fuldstændige aminosyresekvens 4-10 ACTH ikke er væsentlig for psykofarmakologisk virkning, men at et meget kortere peptid, nemlig 4-6 ACTH, er ansvarlig for denne aktivitet. Det viser sig endvidere, at den N-endestillede aminosyre L-Met uden tab af aktivitet kan erstattes af D-Met, L- eller D-Met (—^0), L- eller D-Met (—> Og)» desamino- 3 149113

Met, desamino-Met (—*0), desamino-Met (—> Og) eller af gruppen tyi-Q-C, hvor Q betegner en alkylidendel med 1 til ca. 6 carbonatomer i eller en alkylendel med 1 til ca. 6 carbonatomer.

Det fremgår endvidere af U.S.A. patentskrift nr. 3.856.770, at udskiftning af den C-endestillede peptidrest -L-Trp-Gly-OH i det oprindelige 4-10-ACTH-peptid med en af grupperne -L-Phe-OH, L-Fhe-Gly-OH, en phenylalkylaminodel eller en (3-indolyl)alkylaminodel, resulterer en forøgelse af psykofarmakologisk virkning.

Det er yderligere anført i U.S.A. patentskrift nr. 3.842.064, at en betydelig forøgelse af psykofarmakologisk virkning opnås ved udskiftning af aminosyren L-arginin (L-Arg) i det oprindelige 4-10-ACTH-peptid (eller i et af de modificerede peptider, der er beskrevet i ovennævnte patentskrift) med D-lysin (D-Lys).

Et af de mest aktive peptider, der er omtalt i ovennævnte U.S.A. patentslirifter, er peptidet angivet ved følgende forkortelse: 4-9 ACTH, 4-L-Met(—> 0), 8-D-Lys, 9-L-Phe, hvilket peptid i stillingerne 4, & og 9 er blevet ændret i forhold til det oprindelige 4-9 ACTH i overensstemmelse med den potentiering, der er angivet i nævnte 0,.:S.A.. .patentskrifter.

Dette peptid, nemlig H-L-Met(—£ 0)-L-Glu-L-His-L-Phe-D-Lys-L-Phe-OH, viser sig at være ca. 1000 gange så aktivt som det uændrede 4-9 ACTH.

Det har nu vist sig, at en peptiddel i dette 4-9 ACTH, 4-L-Met(—» 0), 8-D-Lys, 9-L-Phe, nemlig delen: L-Phe-D-Lys-L-Phe i sig selv også bevirker nogen psykofarmakologisk virkning, selv om den har latent form. På basis af U.S.A. patentskrifterne nr. 3.856.770 og nr.

3.842.064 vil det fremgå for fagmanden på området, at et særlig aktivt peptid opnås (blev opnået) ved forlængelse af kæden hos peptidet L-Fhe-D-Lys-L-Phe ved den N-endestillede ende, f.eks. med peptiddelen L-Met (—> 0) -L-Glu-L-Hi s: L-Met (—> 0) -L-Glu-L-Hi s-L-Phe-D-

Lys-L-Phe.

4 149113

Det har nu overraskende vist sig, at meget aktive peptider kan opnås ved forlængelse af kæden ved den C-endestillede ende af peptidet L-Phe-D-Lys-L-Phe. Denne udtalte potentiering (med en faktor på mindst 100) ved forlængelse af kæden ved den C-endestillede ende kunne ikke forventes af fagmanden på området på basis af den hidtil kendte information. (Det har dybest set været vist, at C-endestillet kædeforlængelse af det oprindelige 4-10 eller 4-9 ACTH overhovedet ikke resulterede i nogen virkningspotentiering - se f.eks. European Journal of Pharmacology 2, 14 (1967) - medens det viste sig, at C-endestillet kædeforlængelse af 7-9 ACTH-peptidet forøgede aktiviteten med højst en faktor 10).

Denne overraskende virkning kan illustreres ved hjælp af eksemplet, som gives i den efterfølgende tabel.

Tabel 1.

Peptid Virkningsstyrke i forhold _ til 4-10 ACTH_ 1. Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp (4-9 ACTH) 1 2. Phe-Arg-Trp (7-9 ACTH) 0,1 3 Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-

Val-Gly-Lys-Lys (7-16 ACTH) 1 4. Phe-D-Lys-Phe 0,1 5· Phe-D-Lys-Phe-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys 100

Det viste sig yderligere, at forlængelsen af kæden ved den C-ende-stillede ende af ovennævnte peptid L-Phe-D-Lys-L-Phe viste sig at være af stor betydning i den forstand, at en vis korteste oterminal leadelængde er betydningsfuld. Denne mindste forlængelse af kæden viste sig overraskende at være peptidet 10-16 ACTH, idet en kortere kædelængde formindskede aktiviteten til et niveau svarende til det, som iagttages med uændret 7-16 ACTH.

Det viste sig yderligere overraskende, at en endnu mere betydelig potentiering kunne opnås ved udskiftning af aminosyren L-Lys (stilling 11) i den mindste essentielle C-endestillede kædeforlængelse (10-16 ACTH) med aminosyren D-Lys. Denne modifikation forøger peptidets 5 149113 aktivitet med en yderligere faktor på 100. Disse fakta illustreres tydeligt af det efterfølgende eksempel i tabel II.

Tabel II

Peptid Virkningsstyrke i forhold

til 4-10 ACTH

1. Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-

Lys (7-16 ACTH) 1 2. Phe-D-Lvs-Phe-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys 100 3. Fhe-D-Lvs-Phe-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys 1 4. Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Gly-Lys-Lys 10.000 I den efterfølgende tabel er core-peptidet Phe-D-Lys-Phe-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys, der er 100 gange så virksomt som sammenligningspeptidet 4-9 ACTH eller 4-10 ACTH, angivet ved hjælp af symbolet [X], det tilsvarende core-peptid

Phe-D-Lys-Phe-Gly-D-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys er angivet ved hjælp af symbolet [DX], og core-peptidet Ala-D-Lys-Phe-Gly-D-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys er angivet ved hjælp af symbolet [DY].

Tabel II A.

Peptid Virkningsstyrke i forhold

til 4-10 ACTH

h-[x]-nh2 100 Η-[X]-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-OH 100-300 H-[DX]-NH2 10.000 6 U9113

Tabel II A (fortsat).

Peptid Virkningsstyrke i forhold ________til 4-10 ACTH_ H-Met-Glu-His-[X]-NH2 300-1.000 H-Met(0)-Glu-His-[X]-NH2 100.000 H-Met(O)-Glu—His-[DX]NH2 300.000 H-Met(02)-Glu-His-[DX]-NH2 100.000 Η-Met(02)-Ala-Ala-[DX]-NH2 1.000.000 H-Met(02)-Ala-Ala-[DY]-NH2 3.000.000

Peptidet L-Phe-D-Lys-L-Phe, hvis virkning kan forøges væsentligt som ovenfor anført ved forlængelse af den C-endestillede kæde, kan yderligere potentieres ved hjælp af yderligere N-endestillet kædeforlængelse ved hjælp af fremgangsmåder, som er beskrevet i U.S.A. patentskrifterne nr. 3.853.836, nr. 3.856.770 og nr. 3.842.064.

Det har yderligere vist sig, at den første aminosyre Phe i den oprin delige L-Phe-D-Lys-L-Phe ikke nødvendigvis behøver at være til stede, men at den også kan udskiftes med andre aminosyrer, så at den primære fordel ved denne aminosyre tydeligvis hidrører fra tilvejebringelsen af den yderligere korrekte kædelængde.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at peptidet fremstilles på inden for peptidkemien i og for sig kendt måde ved sammenkobling af de indgående aminosyrer i den ønskede rækkefølge ved: 7 149113 (a) kondensation i nærværelse af et kondensationsmiddel af en forbindelse (syre, peptid) med en fri carboxylgruppe, og i hvilken andre reaktive grupper er beskyttet, med en forbindelse (aminosyre, peptid eller amin) med en fri aminogruppe, og i hvilken andre reaktive grupper ligeledes er beskyttet, eller (b) kondensation af en forbindelse (syre, peptid) med en aktiveret carboxylgruppe, og hvori andre reaktive grupper eventuelt er beskyttet, med en forbindelse (aminosyre, peptid, amin) med en fri aminogruppe, og hvori andre reaktive grupper på lignende måde eventuelt er beskyttet, hvorefter de beskyttende grupper om nødvendigt fjernes, og et således opnået Met- eller des-amino-Met-holdigt peptid eventuelt oxideres til den tilsvarende sulfon eller det tilsvarende sulfoxid, og hvorefter den fremkomne forbindelse om ønsket omdannes til et metalkompleks deraf, idet den bringes i kontakt med et svagt opløseligt oxid, hydroxid eller salt af et metal, eller om ønsket omdannes til et farmakologisk acceptabelt salt deraf.

Forbindelserne med formlen I fremstilles med henblik på udnyttelse af deres psykofarmakologiske egenskaber til behandling af mennesker for mentale forstyrrelser, ved hvilke stimulering af den cerebrale funktion er ønskelig, såsom i tilfælde af senilitet.

En eller flere af de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser med formlen I sammensættes fordelagtigt med en farmaceutisk acceptabel bærer til fremstilling af farmaceutiske præparater til behandling af mentale forstyrrelser, ved hvilke en stimulering af den cerebrale funktion er ønskelig, såsom ved senilitet.

Eksempler på i formlen I ovenfor kan indbefatte hydrogen, methyl, isopropyl, isobutyl og sec.-butyl.

I definitionen af B er de foretrukne aminosyrerester Phe og Ala, idet sidstnævnte afledes af -NH-CHR^-CO-, hvori er methyl.

I definitionen af X i samme formel I kan som eksempler på alifatiske alkoholer, hvoraf en esterificeret hydroxygruppe afledes, nævnes methanol, ethanol, propanol, butanol og hexanol. Generelt vil den esteri-ficerede hydroxygruppe indeholde fra 1 til 8 carbonatomer.

8 149113

Den substituerede aminogruppe, som omtales ved definitionen af X, indbefatter en mono- eller dialkylaminogruppe, hvori alkylgruppen indeholder fra 1 til 6 carbonatomer, såsom methylamino-, dimethyl= amino-, diethylamino-, isopropylamino-, butylamino-, isobutylamino-, sec.-butylamino-, n-pentylamino- og n-hexylaminogruppen, men indbefatter også en aminosyre eller en peptidrest med sekvensen 17» 17-18, 17-19 etc. til og med 17-24 ACTH eller den tilsvarende C-endestillede ester eller det C-endestillede amid deraf.

I den ovennævnte formel I kan udtrykket D-Lys-L-Phe-Gly-(L eller D)-Lys-L-Pro-L-Val-Gly-L-Lys-L-Lys i det følgende og i kravene omtales som den "grundlæggende enhed, der udelader forlængelse". I denne grundlæggende enhed, der udelader forlængelse, vil man bemærke, at der findes fire lysinenheder, og at den første lysingruppe, idet der regnes først fra den N-endestillede ende mod den C-endestillede ende, må foreligge i sin D-form, den tredje og fjerde gruppe må foreligge i deres L-form, medens den anden gruppe ifølge opfindelsen må foreligge i en L- eller D-form. Nomenklaturen A og B kan i det følgende omtales som "N-endestillet kædeforlængelse", medens X kan betegnes som den "C-endestillede endeforlængelse".

I definitionen af A kan N-acylderivaterne afledes af en aminosyre eller et peptid og består af 1 til 3 aminosyrerester, valgt blandt U-Q-^, U-C^-Q^ og Q^-^^-Q^-, hvori U er valgt blandt hydrogen og N-alkylcar-bonyl med 1 til 6 carbonatomer, ζ>χ er valgt blandt aminosyreresterne L-His,. D-His eller -NH-Z-CO, Q2 er valgt blandt aminosyreresterne L-Glu, D-Glu, L-Gln, D-Gln eller -NH-Z-CO-, og Q3 er syreresten U-L-Met, U-L-Met (-» O), U-L-Met(-> 02), U-D-Met, D-D-Met(-> 0), U-D-Met (-» 02), desamino-Met, desamino-Met(* 0), desamino-Met(02) eller UNH-Z-CO-, hvor Z betegner en usubstitueret, monohydroxy substitueret eller mono-aminosubstitueret alkylen- eller alkylidendel med 1 til 6 carbonatomer.

Aminosyrerester, såsom Gly, Ala, β-Ala, (cc-Me)Ala, Val, Leu, Ile,

Ser, Thr og Lys, betragtes som hørende til aminosyreresten defineret ved formlen -HN-Z-C0-.

9 149113

De mest foretrukne N-acylgrupper i betydningen A har aminosyresekvensen Q^-C^-Q^-/ hvori er afledt af methionin eller desaminomethionin (f.eks. L-Met, L-Met(-^O), L-Metdesamino-Met, desamino-Met (-*0), og desamino-Met(♦· 02)), og hvor sekvensen betegner petptidresten -Glu-His-, eller alternativt en peptidrest opbygget af to alifatiske og fortrinsvis identiske naturlige aminosyrer, såsom -Gly-Gly-, -Val-Val-, -Glu-Ala-, og især -Ala-Ala-.

En gruppe peptider med den almene formel I, som derfor foretrækkes, kan angives ved hjælp af følgende formel: Q^-Q2“Qi-L-B-D-Lys-L-Phe-Gly-(L eller D)-Lys-L-Pro-L-Val-Gly-L-Lys-L-Lys-X (II)

Med funktionelle derivater forstås: (a) farmakologisk acceptable salte eller syreadditionssalte af peptiderne med den almene formel I eller II/ fortrinsvis alkalimetalsaltene, og (b) metalkomplekser, som dannes ved, at peptiderne med formlen I bringes i kontakt med et svagt opløseligt salt, hydroxid eller oxid af et metal (fortrinsyis zink). Med "alkalimetalsalte" menes selvsagt saltene af metallerne i det periodiske systems gruppe I. Farmakologisk acceptable syreadditionssalte indbefatter f.eks. HCl-saltet, HBr-saltet, phosphorsyre-saltet, eddikesyresaltet:, vinsyresaltet, citronsyresaltet etc.

Som tidligere anført for forbindelser med formlen I betegner den esterificérede hydroxygruppe i definitionen af X for forbindelser med formlen II generelt en ester afledt af alifatiske alkoholer med 1 til 8 carbonatomer, såsom methanol, ethanol, propanol, butanol etc.

Den substituerede aminogruppe, som omtales i definitionen af X, er generelt en mono- eller di-alkyl-substitueret aminogruppe, hvori alky lgrupperne indeholder 1 til 6 carbonatomer, men gruppen kan også være L-Arg, L-Lys eller en peptidrest med sekvensen 17-18, 17-19 etc. til og med 17-24 ACTH eller den C-endestillede C^_g-alkylester eller det C-endestillede amid deraf. I definitionen af B i formel II er de foretrukne aminosyrerester Phe eller Ala.

10 149113

Peptiderne og peptidderivaterne med den almene formel I (og også med formlen II) fremstilles på den sædvanlige måde for sådanne forbindelser. De mest sædvanlige måder til fremstilling af forbindelserne med formlerne I og II kan opsummeres i to typer som følger: (a) Kondensation, i nærværelse af et kondensationsmiddel, af en forbindelse (syre, peptid, f.eks.) indeholdende en fri carboxyl= gruppe, og hvori andre reaktive grupper er blevet beskyttet, med en forbindelse (aminosyre, peptid eller amin, f.eks.) indeholdende en fri aminogruppe, og hvori andre reaktive grupper ligeledes er blevet beskyttet, eller (b) kondensation af en forbindelse (syre, peptid, f.eks.)indeholdende en aktiveret carboxylgruppe, og hvori andre reaktive grupper eventuelt er blevet beskyttet, med en forbindelse (aminosyre, peptid, amin, f.eks.) indeholdende en fri aminogruppe, og hvori andre reaktive grupper på lignende måde eventuelt er blevet beskyttet, hvorefter de beskyttende grupper om ønsket kan fjernes.

De mest almindelige metoder til udførelse af de ovenfor anførte to typer kondensationsreaktioner er: carbodiimidmetoden, azidmetoden, blandet anhydrid-metoden og de aktiverede esteres metode, således som beskrevet i "The Peptides", bind 1, 1965 (Academic Press), E. Schrdder og K-Lubke. Den såkaldte "fastfasemetode" ifølge Merrifield, der er beskrevet i J. Am. Chem. Soc. 85, 2149 (1963), kan yderligere anvendes til fremstilling af peptiderne eller peptidderivateme med formlerne I og II. San disse litteratursteder viser det, indbefatter måderne til aktivering af carboxylgrup-pen omdannelse af carboxylgruppen til et syrehalogenid, et azid, et anhydrid, en imidazol eller en aktiveret ester (såsom n-hydroxy-succinimidesteren eller p-nitrophenylesteren). På lignende måde viser disse litteratursteder, at aminogruppen kan aktiveres ved omdannelse 11 149113 af gruppen til et phosphinamid eller ved anvendelse af "phosphorazo”-metoden. Som vist i de anførte litteratursteder og som bekræftet af fagmanden på området, beskyttes de reaktive grupper, som skal hindres i at deltage i kondensationsreaktionen, effektivt ved hjælp af de såkaldte beskyttende grupper, som på deres side let kan fjernes ved hjælp af hydrolyse eller reduktion. En carboxylgruppe kan f.eks. effektivt beskyttes ved hjælp af esterifikation med f.eks. methanol, etha= nol, tertiært butanol, benzylalkohol eller p-nitrobenzylalkohol eller ved hjælp af omdannelse til et amid. Denne sidstnævnte er imidlertid vanskelig at fjerne, således at det anbefales kun at anvende denne gruppe til beskyttelse af carboxylgruppen i den C-endestillede amino= syre i det endelige peptid eller γ-carboxylgruppen i glutaminsyre.

I dette tilfælde fører peptidsyntesen direkte til amidet af peptidet svarende til formlerne I eller II.

Grupper., som effektivt kan beskytte en aminogruppe, er generelt syregrupper, f.eks. en syregruppe afledt af (a) en alifatiske aromatisk, aralifatisk eller heterocyklisk carboxylsyre, såsom en acetyl-, benzoyl- eller pyridincarboxylgruppe, (b) en syregruppe afledt af carboxylsyrer, såsom en ethoxycarbonyl-, benzyloxycarbonyl-, t-butyloxy= carbonyl- eller p-methoxybenzyloxycarbonylgruppe, eller (c) en syregruppe afledt af en sulfonsyre, såsom benzensulfonyl eller p-toluen-sulfonyl, idet andre grupper også kan anvendes, såsom substituerede eller usubstituerede aryl- eller aralkylgrupper, f.eks. benzyl eller triphenylmethyl, eller grupper som o-nitrophenylsulphenyl og 2-ben= zoyl-l-methylvinyl.

Det anbefales kraftigt at beskytte også ε-aminogruppen i lysin, γ-carboxylgruppen i Glu og om ønsket imidazolgruppen i histidin. Almindeligt anvendte beskyttelsesgrupper i denne forbindelse er en tert.-butyloxycarbonylgruppe eller en tosylgruppe til e-aminogruppen i lysin, en tert.-butyloxycarbonylgruppe til Glu og en benzyl-eller tritylgruppe til His.

12 149113

Beskyttelsesgrupperne kan fraspaltes ved hjælp af forskellige konventionelle metoder, som kendes af fagmanden på området, afhængigt af naturen af den omhandlede gruppe, f.eks. ved hjælp af trifluoreddike-syre eller ved hjælp af mild reduktion, f.eks. med hydrogen og en katalysator, såsom palladium, eller med HBr i iseddikesyre.

Metoder til opnåelse af peptider f£fmstillet ifølge den foreliggende opfindelse, hvori den N-endestillede rest er (L eller D)Met(—^ 0) eller desamino-Met (—£ 0), kan indbefatte mild oxidation på kendt måde af det tilsvarende Met- eller desamino-Met-peptid, f.eks. med fortyndet hydrogenperoxid eller en persyre. En sådan oxidation resulterer i en blanding af S- og R-sulfoxidet, som kan spaltes i de separate diaste= reoisomere ved hjælp af en kendt metode, f.eks. ved hjælp af selektiv krystallisation. Ved at koble (L eller D)-methionin-S-(eller -R-)-sulfoxid eller det tilsvarende desamino derivat deraf med resten af peptiddelen, kan de separate diastereoisomere også opnås direkte.

Peptiderne, fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse indeholdende (L eller D)~, Met(—£ Og) eller desamino-Met (—> Og) som den N-ende stillede rest, kan opnås ved oxidation af (desamino)Met-peptidet I eller ved kobling af Met- eller desamino-Met-sulfonen med resten af peptiddelen.

Syreadditionssaltene opnås ved omsætning af de ifølge opfindelsen fremstillede peptider med en farmaceutisk acceptabel syre, såsom et hydrogen-halogenid, phosphorsyre, eddikesyre, vinsyre eller citronsyre.

Peptiiferne fremstillet ifølgg. opfindelsen og de ovenfor definerede derivater kan administreres både oralt og parenteralt. Med henblik på parenteral administration opløses peptiderne eller suspenderes eller emulgeres i et passende fluidum. Ved blanding med passende excipienser eller fyldstoffer kan de bringes til at indgå i en form, der er egnet til oral administration, såsom piller, tabletter eller drageer. Heri omtalte peptider kan også administreres i form af en stikpille eller en spray. Den orale administrationsform foretrækkes. Eksempler på passende fluida til parenteral administration indbefatter steriliseret vand, der er gjort isotonisk og eventuelt puffet til ca. pH = 4, eller olier, såsom jordnøddeolie. Eksempler på passende excipienser og fyldstoffer er lactose, mannitol, stivelse, magnesiumstearat etc.

13 149113

Peptiderne eller peptidderivateme fremstillet ifølge opfindelsen anvendes fortrinsvis parenteralt i en dosis på ca. 0,1 jig til 1 μ§ pr. kg legemsvægt pr. dag og oralt i en dosis fra ca. 1 jig til 1 mg pr. kg legemsvægt pr. dag, afhængigt af peptidets aktivitetsniveau.

Særlig værdifulde præparater opnås, når de ifølge opfindelsen fremstillede peptider inkorporeres i en form, hvori de resulterer i forlænget aktivitet, dvs. i de såkaldte "tidskapsler".Metalkomplekserne af peptiderne er særlig egnede til opnåelse af denne forlængede aktivitet. Disse metalkomplekser kan opnås ved at peptiderne bringes i kontakt med i ringe grad opløselige metalsalte, metalhydroxider eller metaloxider. Metallerne, som kan anvendes ved denne proces, er de metaller, der hører til periode 4 i det periodiske system, i "b-grupperne” (overgangsgrundstofferne), f.eks. kobolt, nikkel, kobber, jern og (fortrinsvis) zink, ligesom metaller, der hører til "a-grupperne" i periode 3 i det periodiske system, og som er i stand til at danne komplekser, såsom magnesium og aluminium. Fremstillingen af disse metalkomplekser foregår på måder, der kendes af fagmanden på området.

Metalphosphaterne, metalpyrophosphaterne og metalpolyphosphaterne anvendes fortrinsvis som i ringe grad opløselige metalsalte. Et metalkompleks kan f.eks. opnås ved at sætte peptidet og et molært overskud af et i ringe grad opløseligt metalsalt, metalhydroxid eller metaloxid til et vandigt medium. Metalkomplekset kan også opnås ved at sætte et alkalisk medium til en vandig opløsning af peptidet samt et molært overskud af det opløselige metalsalt, hvilket resulterer i dannelse af det uopløselige peptid-metalhydroxidkompleks. Metalkomplekset kan yderligere opnås ved at sætte peptidet, et overskud af et opløseligt metalsalt og et opløseligt salt (ikke et "metal"-salt som ovenfor defineret) til et vandigt, fortrinsvis alkalisk medium, idet der som resultat heraf dannes et uopløseligt peptid-metalsaltkom-pleks in situ. Metalkomplekserne kan anvendes direkte som suspensioner, eller de kan f.eks. frysetørres og senere atter resuspenderes.

De følgende bemærkninger anføres i forbindelse med hele beskrivelsen og navnlig i forbindelse med eksemplerne, kravene og de ovenstående tabeller I og II: 1. Hvis ingen optisk konfiguration er anført, er der tale om L-formen.

2. Følgende forkortelser er blevet anvendt til betegnelse af de 14 149113 benyttede beskyttende eller aktiverende grupper:

Boc = tert.-butyloxycarbonyl tBu = tert.-butyl

Me = methyl ONP = p-nitrophenyloxy

Bzl = benzyl ONB = nitrobenzyloxy OSu = succinimido-N-oxy Z = benzyloxycarbonyl.

3. De følgende forkortelser er blevet benyttet til at betegne de anvendte opløsningsmidler eller reagenser:

Bz = benzen

To = toluen

EtOH = ethanol

Bu = butanol

Py = pyridin

Ac = eddikesyre

EtOAc = ethylacetat

Wa = vand

Am = amylalkohol iPro = isopropanol DMF = dimethylformamid THF = tetrahydrofuran DCCI = dicyklohexylcarbodiimid DCHU = dicyklohexylurinstof TAA = triethylamin TFA = trifluoreddikesyre HOOBt = 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-l,2,3-benztriazin NIM = N-ethylmorpholin HOBt = N-hydroxybenztriazol 4. De. følgende forkortelser er blevet benyttet for aminosyregrupperne:

Met = methionyl

Met(— 0) = sulf oxid af methionyl

Met(— 02) = sulfon af methionyl

Glu eller Gin = henholdsvis glutamyl (glutaminsyre) eller glutaminyl 15 149113

Ser = seryl

His = histidyl

Phe = phenylalanyl

Arg = arginyl

Lys = lysyl

Trp = tryptophyl

Gly = glycyl

Val = valyl

Leu = leucyl

Ala = alanyl

Ile eller

Ileu = isoleucyl β-Ala = β-alanyl (oc-Me)Ala = a-methylalanyl

Pro = prolyl

Tyr = tyrosyl

Thr = threonyl 5. De følgende forkortelser er blevet benyttet for grupper, som er beslægtet med aminosyrerester: desamino-Met = desamino-methionyl desamino-Met (-> 0) = sulfoxid af desamino-methionyl (eller 4-methylsulphi= nylbutyryl) desamino-Met (—> 02) = sulfon af desamino-methionyl (eller 4-methylsulfonyl= butyryl).

Fremstilling af udgangsmaterialer.

I. N-endestillet del A. Peptider med de nedenfor anførte strukturformler kendes fra U.S.A. patentskrifterne nr. 3.853.836, nr. 3-856.770 og nr. 3.842.064.

1. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-NoH^i

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,39 (S1O2).

2. Boc-Met(—> 02)-Glu(OtBu)-His-NoH^;

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,36 16 149113 3. Boc-Val-D-Glu(OtBuj-His-M^:

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,33 4. Boc-Glv-Glu(OtBu)-His-NoH·^:

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,32 5. Boc-D-Met-Glu(OtBu)-His-NoH·^:

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,37 6. Boc-g-Ala-Glu(OtBu)-His-NoH·^;

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,42 7. Boc-fct-MeHla-Gluf0tBu)-His-NnIk:

Rf i Am:iEro:¥a (10:4:5) = 0,31 8. Boc-Ala-Glu(OtBu)-His-N.Æ:

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,33 ' 9. Boc-Met-Glu(OtBu)-D-Hi s-N2H,:

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,35 10. Boc-Val-Glu(OtBu)-D-His-NoH?:

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,32 11. Boc-Met-Gln-His-N^H·?:

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,28 12. Desamino-Met-Glu(OtBu)-His-EUE,:

Rf i Bu:Ac:¥a (4:1:1) = 0,52 13. De samino-Met-Glu( OtBu) -D-Hi s-N^H·^;

Rf i Bu:Ac:¥a (4:1:1) = 0,50 14. Boc-Met-Ala-Ala-N^H·, (a) Boc-Ala-Ala-OMe: 20,79 g Boc-Ala-OH opløses i 150 ml DMF. Efter køling til -10°C tilsættes 15,84 ml TAA efterfulgt af 10,45 ml ethyl= chlorformiat. Blandingen omrøres ved -10°C i 10 minutter, hvorefter en opløsning af 13,9 g H-Ala-OMe-HCl i 150 ml DMP og 14,4 ml TAA tilsættes dråbeyis. Reaktionsblandingen omrøres derpå ved hjælp af passende mekaniske midler i 15 minutter ved -10°C, i 2 timer ved 0°C og til slut i 8 timer ved stuetemperatur. Efter køling til -10°C frafiltreres TAA-HCl-mængdén, og filtratet inddampes til tørhed. Resten opløses i 250 ml diethylacetat og vaskes i rækkefølge med vand, HC1 (0,05 N), KgCO^-opløsning (5%) og NaCl-opløsning (30%). Efter tørring over NagSO^ inddampes filtratet til tørhed, og resten krystalliseres fra ether/p.ether. Udbytte 19,3 g med smeltepunkt 108/110°C. Rf i To:EtOH (8:2) = 0,50 på Si02.

.(b) H-Ala-Ala-OMe.HC1: 18,85 g Boc-Ala-Ala-OMe (fra (a)) opløses i 150 ml methylenchlorid, og HC1 indføres i opløsningen i 45 minutter, 17 149113 i løbet af hvilken tid opløsningen holdes kold i isvand. Udbytte af afbeskyttet produkt: 14,3 g.

Rf i TosEtOH (8:2) =0,01 på Si02· (c) Boc-Met-Ala-Ala-OMe: 15,8 g Boc-Met-^H^, som er opløst i 150 ml DMF, aktiveres ved -20°C med 28,0 ml 4,2 N HC1 i THF og 8,10 ml iso= amylnitrit. Efter 20 minutters aktivering ved -15°C neutraliseres opløsningen med 14,5 ml NEM, hvorefter en opløsning af 14,3 g H-Ala-Ala-OMe.HCl (fra (b)) i 75 ml DMF og 1 ækvivalent NEM tilsættes. Efter at pH-værdien er blevet indstillet til 7,2 med NEM, holdes reaktionsblandingen på ca. 4°C i 48 timer. NEM.HCl-mængden frafiltreres derpå, og filtratet inddampes til tørhed. Resten opløses i 300 ml ethylacetat og vaskes med vand, 0,05 N HC1, 5% NaHCO^ og til slut atter med vand. Efter tørring over Na2S0^ inddampes filtratet til tørhed, og resten krystalliseres fra ethylacetat:petroleumsether (1:1). Udbytte 16,2 g med smeltepunkt 128-129°C. Rf i To:EtOH (8:2) = 0,46 på Si02- (d) Boc-Met-Ala-Ala-N^H,: 15,9 g Boc-Met-Ala-Ala-OMe (fra (c)) opløses i 160 ml methanol, og der tilsættes 16,0 ml hydrazinhydrat. Efter omrøring i 3i time tilsættes 200 ml tør ether. Efter køling til 0°C frafiltreres det faste materiale. Udbytte 12,6 g med smeltepunkt 207-208°C. Rf i Am:iPro:Wa (10:4:5) = 0,41 på Si02·

De følgende peptider fremstilles på en måde svarende til den under punkt 14 anførte: 15. Boc-j-Ala-Ala-Ala-NpH^;

Rf i Am:iPro:Wa (10:4:5) = 0,44 16. Boc-Val-Ala-Ala-NoH^:

Rf i Am:iPro:Wa (10:4:5) = 0,40 17. Boc-Met (-» 02) -Glv-Ala-M,:

Rf i Am:iPro:Wa (10:4:5) = 0,37 18. Boc-Met-GlufOtBu)-Ala-N^H^.

(a) Z-Glu(OtBuHla-OMe: En opløsning af 3,57 g Z-Glu(0tBu)0H i 30 ml acetonitril sættes ved 0°C til en suspension af 1,40 g H-Ala-OMe.HCl i 15 ml acetonitril, hvorefter 1 ækvivalent TAA efterfulgt af en opløsning af 2 g DCCI i 20 ml acetonitril tilsættes ved -10°C. Efter omrøring i 30 minutter ved -10°C omrøres reaktionsblandingen derpå 18 149113 i yderligere 12 timer ved stuetemperatur. 30 ml vand tilsættes derefter, det dannede DCHU filtreres fra, og filtratet inddampes til tørhed. Resten opløses i 100 ml ethylacetat og vaskes derefter med H20, 5% NaHCO,,-opløsning, 30% NaCl-opløsning og vand. Efter tørring over Ua2S0^ inddampes filtratet til tørhed. Rf i Am:Py:Wa (5:3:2) = 0,89 på Si02.

(b) H-Glu(0tBu)-Ala-OMe.HCl: 2,53 g Z-Glu(OtBu)-Ala-OMe (fra (a)) opløses i 30 ml methanol. Efter tilsætning af 3,4 ml 2N HCl og 700 mg Pd/C føres hydrogen gennem reaktionsblandingen i 2i time (indtil udvikling af C02 ophører). Katalysatoren filtreres fra over "Hyflo1* , der fås fra Mansville Company, og filtratet inddampes til tørhed. Udbytte 1,95 g. Rf i AmiiyjWa (5:3:2) = 0,71 på Si02- (c) Boc-Met-Glu(OtBu)-Ala-OMe: Dette beskyttede peptid fremstilles på en måde svarende til den under punkt 14 (c) beskrevne. Udbytte 90% med smeltepunkt 103-106°C. Rf i Am:Py:Wa (5:3:2) = 0,95 på Si02· (d) Boc-Met-Glu(OtBu)-Ala-NoH-.: Metode svarende til metoden i punkt 14 (d). Udbytte 74,9$. Rf i Am:iPro:Wa (10:4:5) = 0,70 på Si02.

19. Boc-Met-Lvs (Boo) -His-HoH·^ (a) Z-Lvs(Boc)-His-OMe: 22,8 g Z-Lys(Boc)-0H opløses i 200 ml DMF, hvorefter 8,11 g HOBt tilsættes. Blandingen køles til -22°C, hvorefter følgende tilsættes i rækkefølge ved -22°C: En opløsning af 14,52 g H-His-0Me.2HCl i 200 ml DMF, 2 ækvivalenter TAA og 12,36 g DCCI. Efter omrøring i 20 minutter ved -22°C, i 2 timer ved 0°C og i 16 timer ved stuetemperatur frafiltreres DCHU og TAA.HCl, og filtratet inddampes til tørhed. Resten opløses i ethylacetat og vaskes med vand, NaHCO^-opløsning (5%) og endelig atter med vand. Efter tørring over NagSO^ inddampes opløsningen til en ringe mængde. Ether tilsættes, og materialet udkrystalliserer. Udbytte 19,2 g med smeltepunkt 138-140°C. Rf i To:EtOH (8:2) = 0,35 på Si02.

(b) H-Lvs(Boc)-His-OMe-HCl: 19 g Z-Lys(Boc)-His-OMe opløses i 210 ml DMF og 2 ækvivalenter HCl/DMF. Efter tilsætning af Pd/C tilledes hydrogen i 3 timer. Katalysatoren frafiltreres, og filtratet inddampes til et volumen på ca. 100 ml· Rf i Am:Py:¥a (5:3:2) = 0,38 på Si02.

19 149113 (c) Boc-Met-Lvs(Boc)-His-OMe: Metoden er analog med den i eksempel 14 (c) anførte. Rf i Am:Py:¥å (5:3:2) = 0,24 på Si02.

(d) Boc-Met-Lvs (Boc)-His-N^H·^: Metoden er analog med den 1 eksempel 14 (d) anførte. Rf i Am:iPro:¥a (100:40:50) = 0,42 på Si02.

Følgende forbindelser fremstilles endvidere på en analog måde: 20. Desamino-Met-Ala-Ala-NoH·^:

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,54 på Si02.

21. Boo-Leu-Glu (OtBu) -His-^Hj:

Rf i Am:iEro:¥a (10:4:5) = 0,51 på Si02· 22. Boc-Met-Ser-His-NoH·^:

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,28 på Si02.

25. Boc-Ala-Ala-NoH·^:

Rf i Am:iPro:¥a (10:4:5) = 0,47 på Si02· B. Syntese af H-Phe-D-Lvs(Boo)-Phe-Glv-0H og dermed analoge.

101. H-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH

(a) Z-Phe-D-Lvs(Boc)-OMe: 29,9 g Z-Phe-OH og 14,8 g HOBt opløses i 200 ml DMF. Efter køling til -22°C tilsættes følgende i rækkefølge: (l) en opløsning af 52,6 g H-D-Lys(Boc)0Me.HCl i 210 ml DMF og 1 ækvivalent TAA, og (2) en opløsning af 22,7 g DCCI i 100 ml DMF. Hele materialet omrøres derpå ved hjælp af passende mekaniske midler i 15 minutter ved -22°C, i 2 timer ved 0°C og i ca. 16 timer ved stuetemperatur. Blandingen køles til -20°C, hvorefter det dannede DCHU frafiltreres, og filtratet inddampes til tørhed. Resten opløses i ethylacetat og vaskes med vand, en 5% opløsning af citronsyre, 5% NaHCOj-opløsning og atter vand, hvorefter opløsningen inddampes til tørhed. Resten krystalliseres fra diisopropylether/ether (1:5). Udbytte 51,6 g med smeltepunkt 122/125°C. Rf i To:EtOH (8:2) = 0,60 på Si02.

(b) Z-Phe-D-Lvs(Boc)-OH: 15,7 g Z-Phe-D-Lys(Boc)-OMe fra (a) opløses i 180 ml dioxan/H20 (9:1)· Efter tilsætning af 15 ml 2N NaOH omrøres reaktionsblandingen i 2 timer ved stuetemperatur, og pH-værdien indstilles til 7 med IN HC1. Reaktionsblandingens volumen reduceres 20 149113 derpå til ca. 50 ml (dioxanfri) ved hjælp af inddampning, og 250 ml ethylacetat tilsættes. Blandingen vaskes med vand og tørres over NagSO^. NagS0^-mængden filtreres fra, og filtratet inddampes til tørhed, hvorpå resten krystalliseres fra ether/petroleumsether (1:2). Udbytte 11,3 g med smeltepunkt 72/75°C. Rf i To:Et0H (8:2) = 0,12 på SiOgi Rf i Am:Py:¥a (5:3:2) = 0,69 på SiOg.

(c) Boc-Phe-Glv-OBzl: 1 ækvivalent NEM sættes til en opløsning af 12,6 g H-Gly-OBzl.HC1 i 100 ml DMF efterfulgt af en opløsning af 25,5 g Boc-Phe-ONP i 100 ml DMF. Efter omrøring natten over ved stuetemperatur inddampes reaktionsblandingen til tørhed. Resten opløses i 300 ml ethylacetat/vand (5:1)» og den resulterende opløsning vaskes med vand.

Efter tørring over NagSO^ reduceres filtratets volumen til ca. 100 ml ved hjælp af inddampning, og 50 ml petroleumsether og 250 ml tør ether tilsættes derefter. Udbytte 16,7 g med smeltepunkt 126-127°C.

Rf i TorEtOH (8:2) = 0,56 på SiOg.

(d) H-Phe-Glv-OBzl.HC1: 8,25 g Boc-Phe-Gly-OBzl opløses i 120 ml methylenchlorid, og HCl-gas indføres under omrøring og køling (is/vand) i 1 time. Indføringen af HC1 standses efter 1 time, og reaktionsblandingen inddampes til tørhed. Udbytte 6,98 g af et skumlignende produkt. Rf i To:EtOH (8:2) = 0,33 på SiOg.

(e) Z-Phe-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OBzl: Metoden er analog med metoden beskrevet under (a). Reagenser, der behøves: 9,25 g Z-Phe-D-Lys(Boc)-OH (fra (b)), 2,92 g HOBt, 6,98 g H-Phe-Gly-OBzl.HCl og 4,12 g DCCI. Krystallisation fra ethylacetat/petroleumsether. Udbytte 12,0 g med smeltepunkt 157-159°C.

(f) H-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH: 4,11 g Z-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly-OBzl opløses i 75 ml DMF. Efter tilsætning af Pd/C indføres hydrogen i blandingen i 3 timer. Katalysatoren frafiltreres over "Hyflovasbest, og filtratet inddampes til tørhed. Udbytte 2,9 g. Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:0,75:0,25:1) = 0,46 på SiOg.

De efterfølgende peptider blev fremstillet under betingelser og på en måde, som er identisk med hvad der er anført i det foregående eksem- 21 149113 pel 101: 102. Η-Τγρ-D-Lvs(Boc)-Phe-Gly-OH?"

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:0,75:0,25:1) = 0,52 på Si02 103. H-Leu-D-Lys(Boc)-Phe-Gly-OH;

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:0,75:0,25:1) = 0,40 på Si02· 104. H-Val-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH;

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:0,75:0,25:1) = 0,42 på Si02.

105. H-Ala-D-Lvs(Boc)-Phe-Gly-OH;

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:0,75:0,25:1) = 0,37 på Si02·, 106. H-Tvr-D-Lvs(Boc)-Phe-Gly-OH;

Rf 1 Bu:Py:Ac:Wa (4:0,75:0,25:1) = 0,48 på Si02.

C. Syntese af H-Lvs(Boc)-Pro-Val-Glv-Lvs(Boc)-Lys(Boc)-OH og analoge.

201. H-Lvs (Boc)-Pro-Val-Glv-Lvs (Boc)-Lvs (Boc)-0Me_ (11-16 ACTH)? C.A. 72, 13055 (1970)? 202. H-Lvs(Boc)-Pro-Val-Glv-Lvs(Boc)-Lvs(Boc)-NHo (11-16 ACTH-amid)? C.A. 72, 13055 (1970)? 203. H-Lvs(Boc)-Pro-Val-Glv-Lvs(Boc)-Lvs(Boc)-Arg-Arg-Pro-NHn (11-19 ACTH-amid)? C.A. 63, 16405a (1965)? 204. H-Lvs (Boc)-Pro-Val-Glv-Lvs (Boc)-Lvs (Boc)-Arg-Arg-Pro-Val-Lvs (Boc )_-Val-Tyr-Pro-OtBu: Helv. 44, 1136 (1961)? 205. H-D-Lvs(Boc)-Pro-Val-Glv-Lvs(Boc)-Lvs(Boc)-NHo (a) Η-Pro-Val-Glv-Lvs(Boc)-Lvs(Boc)-NH2: 8,61 g Z-Pro-Val-Gly-Lys (Boc)-NH2 opløses i 110 ml methanol. Efter tilsætning af Pd/C indføres hydrogen i blandingen i 3 timer. Katalysatoren frafiltreres over "Hyflo"®,og filtratet inddampes til tørhed. Udbytte 7,27 g.

Rf i AmtPy:Wa (5:3:2) = 0,36 på Si02.

(b) Z-D-Lvs(Boc)-Pro-Val-Glv-Lys(Boc)-Lvs(Boc)-HH^: 4,18 g Z-D-Lys(Boc)-OH og 1,62 g HOBt opløses i 30 ml DMF. Efter køling af denne opløsning til -22°C tilsættes en opløsning af 7,26 g H-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-0Me (fra (a)) i 30 ml DMF efterfulgt af 2,47 g DCCI. Efter omrøring i 15 minutter ved -22°C, i 2 timer ved 0°C og i 16 timer ved stuetemperatur frafiltreres det dannede DCHU, og filtratet inddampes til tørhed. Resten opløses i ethylacetat og vaskes i rækkefølge med en 5% citronsyreopløsning i vand, en opløsning af NaHCO^ (5%) og en opløsning af NaCl (30%), hvorefter den tørres over Na^O^ . Opløsningen inddam-

«I

22 149113 pes til tørhed, og resten krystalliseres fra ethylacetat. Udbytte 9.1 g med smeltepunkt 114-119°C. Rf i To:EtOH (8:2) = 0,20 på SiOg.

(c) H-D-Lvs(Boc)-Pro-Val-Glv-Lvs(Boc)-Lvs(Boc)-NHo: 3,68 g af det beskyttede peptid opnået under (b) opløses i 50 ml methanol. Efter tilsætning af Pd/c indføres hydrogen i 4 timer. Katalysatoren frafiltreres derpå over "Hyflo'^og filtratet inddampes til tørhed. Udbytte 3.2 g; Rf i Bu:Ac:Wa (10:1:3) = 0,56 på SiOg, Opløsning af dette produkt i en methanolisk opløsning af HC1 resulterer i det tilsvarende HCl-salt af peptidet.

206. H-Lvs(Boc)-Pro-Val-Glv-Lys(Boc)-Lvs(Boc)-OH: Opnås ved hjælp af alkalisk hydrolyse af den tilsvarende methylester, som er beskrevet under 201.

D. Syntese af peptider opnået ved kobling af peptider anført under (A) med peptider anført under (B.) ved hjælp af azidmetoden.

301. Boc-Met-Ala-Ala-Ala-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (14 og 105): 1,62 g Boc-Met-Ala-Ala-NgH^ opløses i 20 ml DMF. Efter køling af opløsningen til -20°C tilsættes 1,68 ml 4,74N HCl/THF efterfulgt af 0,60 ml iso= amylnitrit. Efter omrøring i 20 minutter ved -15°C tilsættes 0,6 ml NEM, en opløsning af 2,3 g H-Ala-D-Lys(Boc)-Phe-Gly-OH i 20 ml DMF

og 1,68 ml 4,74N HCl/THF. Reaktionsblandingens pH-værdi indstilles til 7,2 med NEM, hvorefter blandingen holdes ved ca. 4°C i 2 dage. NEM.HCl-mængden frafiltreres derpå, og filtratet inddampes til tørhed. Resten opløses i 125 ml see.butanol/CHCl^ (2:3) og 25 ml HgO, hvorefter den i rækkefølge vaskes med vand, 3% citronsyreopløsning og atter med vand. Efter tørring over Na2S0^ inddampes filtratet til tørhed. Resten opløses i 40 ml methanol, hvortil 160 ml vand derpå tilsættes, hvorpå det faste materiale frafiltreres og tørres. Udbytte 2,6 g; Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:0,75:0,25:1) = 0,62 på Si02; smeltepunkt 202-203°C under dekomponering. De efterfølgende peptider fremstilles under samme betingelser som under 301 anført: 302. Boc-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (14 og 101).

Rf i Bu:Py:Ac:Wa (4:0,75:0,25:1) = 0,63 på Si02; smeltepunkt 215-216°C (dekomponering).

303. Boc-Ala-Ala-Ala-Fhe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (15 og 101); Rf = 0,59.

23 149113 304. Boc-Val-Ala-Ala-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-QH (16 og 101); Rf = 0,61.

305. Boc-Met(-» 0^)-Glv-Ala-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-QH (17 og 101);

Rf = 0,49.

306. Boc-Met-GlufOtBu)-Ala-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (18 og 101);

Rf = 0,64.

307. Ttegamino-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Gly-OH (20 og 101);

Rf = 0,67.

308. Boc-Ala-Ala-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (25 og 101); Rf = 0,50.

309. Boc-Ala-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-QH; Rf = 0,51.

310. Boc-Met-GluCOtBu)-Ala-Ala-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (18 og 105);

Rf = 0,64.

311. Boc-Met C—» 0^)-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-QH (2 og 101); 2,98 g Boc-Met(—£ O^-GluiOtBuJ-His-^H^ (4,82 mmol) opløses i 20 ml DMF og opløsningen køles til 0°C, hvorefter 2,65 ml 5,46N HCl/THF sættes til den kølede opløsning. Reaktionsblandingen omrøres derpå i et stykke tid, hvorefter den yderligere køles til -20°C, og 0,66 ml isoamylnitrit tilsættes. Blandingen omrøres i 20 minutter ved ca. -15°C, hvorefter man følger samme metode, som er beskrevet i 301. De følgende peptider fremstilles på en måde svarende til den i 311 beskrevne: 312. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-QH (1 og 101);

Rf = 0,69.

313. Boc-Met-Glu(OtBu)-D-His-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (9 og lol);

Rf = 0,71.

314. Boc-Val-D-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (3 og 101);

Rf = 0,65.

315. Boc-Glv-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (4 og 101);

Rf = 0,60.

24 149113 316. Boc-D-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (5 og 101);

Rf = 0,68.

317. Boc-β-Ala-Glu(QtBu)-His-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (6 og 101);

Rf = 0,62.

318. Boc-(cc-Met)Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-GlVrQH (7 og 101); Rf = 0,60.

319. Boc-Val-Glu(OtBu)-D-His-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (10 Og 101);

Rf = 0,64.

320. Boc-Met-Gln-His-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (11 og 101); Rf = 0,75.

321. nffflamino-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-GlV"QH (12 og 101); Rf = 0,58.

322. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Trn-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (1 og 102);

Rf = 0,70.

323. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Leu-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (1 og 103);

Rf = 0,65.

324. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Val-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (1 og 104);

Rf = 0,70.

325. Boc-Leu-Glu(OtBu)-His-Leu-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (21 og 103);

Rf = 0,66.

326. Boc-Met-Ser-His-Phe-D-Lvs(Boc)-Phe-Glv-OH (22 og 101);

Rf = 0,76.

327. Boc-Met-Lvs(Boc)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Glv-OH (19 og 101);

Rf = 0,69.

328. N-acetvl-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Glv-OH (N-acetyl-Met-Ala-Ala-NgH^ fremstilles under de samme betingelser og på samme måde som beskrevet i 14, med det forbehold, at i dette tilfælde anvendes N-acetyl-Met-NgH^ i stedet for Boc-Met-^H^). Rf = 0,55.

25 149113 329. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Tvr-D-Lvs(Boc)-Phe-GlY-QH (l og 106);

Rf = 0,75.

Rf-værdierne for ovennævnte peptider gælder for Si02 med Bu:Py:Ac:Wa (4:0,75:0,25:1) som elueringsmiddel.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen illustreres nærmere i de efterfølgende eksempler.

Eksempel I,

Fremstilling af H-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-NHo (a) Boc-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly-D-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys (Boc) -Lys (Boc) -1¾ 2,53 g Boc-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly-OH (2,6 mmol) (se 302 ovenfor) og 422 mg HOBt (1,2 ækvivalent) opløses i 25 ml DMF. Opløsningen køles til 0°C,hvorefter en opløsning af 2,48 g H-D-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH2.HC1 (2,5 mmol) i 20 ml DMF (205) og 1,1 ækvivalent TEA tilsættes. Temperaturen af reaktionsblandingen indstilles til ca. 35°C, hvorefter 857 mg DCCI (1,6 ækvivalent) tilsættes ved denne temperatur, og det hele omrøres natten over. Blandingen køles derpå til -20°C, det blandede DCHU frafiltreres, og filtra-. tet inddampes til tørhed. Resten opløses i 200 ml sec.butanol/CHCl^ (2:3) og 50 ml H20, hvorefter opløsningen vaskes med vand, 5% NaHCO^-opløsning, atter med vand og til slut tørres over Na2S0^. Na2S0^ fra-filtreres, og filtratet inddampes til tørhed. Udbytte 4,2 g. Rf i Bu:Ac:Wa (10:1:3) = 0,75 på Si02· (b) H-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys-Phe-Gly-D-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-KH2. acetat.

3,97 g af de 4,2 g udbytte ovenfor af Boc-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly-D-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH2 opløses i 80 ml 90% TFA, og opløsningen omrøres under nitrogen og i mørket i li time 26 149113 ved stuetemperatur.

Reaktionsblandingen sættes dråbevis til 500 ml tør ether. Det faste materiale filtreres fra, vaskes med ether og tørres, hvorefter resten opløses i t.butanol/HgO (1:1) og omrøres med en ionbytterharpiks i acetat. Efter omrøring i 1 time frafiltreres ionbytterharpiksen, og filtratet inddampes til tørhed. Det rå produkt underkastes modstrømsrensning (system sec.butanol/0,1% TFA), De opsamlede fraktioner inddampes til tørhed, og resten opløses i t.butanol/HgO (l:l), hvorefter den atter behandles med ionbytterharpiksen i acetatform og filtreres. Filtratet inddampes til tørhed. Udbytte 2,27 g (65,8%); Rf i Bu:Py:Ac: Wa (58:24:8:30) = 0,40 på si02·

Eksempel II.

Fremstilling af H-Met(—» Og)-Ala-Ala-Phe-D-rLvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-NHo.acetat.

2,0 g H-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys-Phe-Gly-D-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-NHg. acetat (fra eksempel I) opløses i 10 ml HgO, hvorefter 0,25 ml 0,5M ammoniummolybdat, 1,25 ml 4M HCIO^ og 0,75 ml 30% HgOg tilsættes.

Det hele omrøres derpå i 4 timer ved stuetemperatur, hvorefter 50 ml tert.butanol/HgO (1:1) og 1 g af en passende ionbytterharpiks (Dowex® 2 x 8)i acetatform sættes til reaktionsblandingen. Efter omrøring i 30 minutter frafiltreres ionbytterharpiksen, og filtratet inddampes til tørhed. Udbytte 1,9 g; Rf i Bu:Py:Ac:Wa (38:24:8:30) = 0,32 på si°2.

Eksempel III.

Fremstilling af H-Met(—> 0)-Ala-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-NHg.acetat.

0,06 mol af peptidet opnået i eksempel I opløses i 5 ml eddikesyre, hvorefter 15 pi 30% hydrogenperoxid tilsættes. Opløsningen omrøres i 1 time ved stuetemperatur, hvorefter en suspension af 20 mg platinsort i 2,5 ml iseddikesyre tilsættes. Blandingen omrøres derpå i 30 minutter, hvorefter den filtreres. Filtratet inddampes til tørhed under vakuum, og resten sættes til 10 ml tert.butanol/vand. Derefter frysetørres blandingen. Rf i Bu:Py:Ac:Wa (38:24:8:30) = 0,29 på sio2.

Eksempel IV.

27 149113

Fremstilling af H-Met(— Oo)-Glu-His-Phe-D-Lys-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-ΝΗ».acetat.

4,0 g af peptidet fremstillet i 311 ovenfor kobles til peptidet 205 under anvendelse af DCCl/HOBt-metoden som beskrevet i eksempel 1(a).

Det beskyttede slutprodukt har en Rf-værdi i Bu:Ac:Wa (10:1:3) på 0. 73.på Si02.

Afbeskyttelsen og yderligere oparbejdning foretages på den måde, som er beskrevet i eksempel 1(b). Udbytte 1,55 g; Rf i Bu:Py:Ac:Wa (38:24: 8:30) = 0,19 på Si02<

Eksempel V.

Acetaterne af følgende peptider opnås under samme betingelser og på den måde, som svarer til den i eksempel I beskrevne: 1. H-Met-Ala-Ala-Ala-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-NH^ (301 og 205); Rf = 0,20.

2. H-Ala-Ala-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-NHn (fra 303 og 205 ovenfor); Rf = 0,35.

3. H-Val-Ala-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-NHo (fra 304 og 205 ovenfor); Rf = 0,42.

4. H-Met(— 0»)-Glv-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lvs-yNHo (fra 305 og 205 ovenfor); Rf = 0,19.

5. H-Met-Glu-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lys-Pro-Val-Glv-Lys-Lys-NHo (fra 306 og 205 ovenfor); Rf = 0,34.

6. Desaminft-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Gly-D-LvsrPro^Val-Glv-Lys-Lvs-NHo (fra 307 og 205 ovenfor); Rf = 0,47.

7. Ητ-Ala-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Gly-Lvs-Lys-NHo (fra 308 og 205 ovenfor); Rf = 0,40.

28 U9113 8. H-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D--Lvs-Pro-V~al-Glv-Lvs-Lvs-NH2 (fra 309 og 205 ovenfor); Rf = 0,42.

9. H-Met-Glv-Ala-Ala-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Gly-Lvs-Lvs-NH^ (fra 310 og 205 ovenfor); Rf = 0,18.

10. H-Met-Glu-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Glv-Lys-Lys--NH2 (fra 312 og 205 ovenfor); Rf = 0,29.

11. H-Met-Glu-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-Lvs-Pro-Val-Glv-Lys-Lys-NHo (fra 312 og 202 ovenfor); Rf = 0,36.

12. H-Met-Glu-His-Fhe-D-Lvs-Fhe-Glv-Lvs-Pro-Val-Gly-Lvs-Lys-OMe (fra 312 og 201 ovenfor); Rf = 0,52.

13. H-Met~Ala-Ala-Ala-D-Lvs-Phe-Glv-Lvs~Pro-Val-Lvs-Lys-QMe (fra 301 og 201 ovenfor); Rf = 0,30.

14. H-Met-Glu~D-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv~D-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-NHo (fra 313 og 205 ovenfor); Rf = 0,31.

15. H~Val-D-Glu-His-Phe-D-Lvs~Pbe-Glv-D-Lvs-Pro-Va.T-Glv-Lvs-Lvs-NH? (fra 314 og 205 ovenfor); Rf = 0,25.

16. H-Glv-Glu-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lys-Pro-Val-Glv-Lvs-Lys-NHo (fra 315 og 205 ovenfor); Rf = 0,20.

17. H-D-Met-Glu-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-P-Lys-Pro-Val-Glv-Lvs-Lys-NHo (fra 316 og 205 ovenfor); Rf = 0,33· 18. H-(oc-MeHla-Glu-His--Piie-D-Lvfi-Phe-Glv-D-Lvs-Prn-Val--G}v-Lys-Lys-NH? (fra 318 og 205 ovenfor); Rf = 0,28.

19. H-B-Ala-Glu-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-NHg (fra 317 og 205 ovenfor); Rf = 0,19.

20. H-Met-Gln-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-IjHp (fra 320 og 205 ovenfor); Rf = 0,32.

29 149113 21. Desamino-Met-Glu-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Gly-Lys-Lys- MHo (fra 321 og 205 ovenfor); Rf = 0,37.

22. H-Met-Glu-His-Tro-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Glv-Lys-Lys-NHo (fra 322 og 205 ovenfor); Rf = 0,31.

23. Η-Met- Glu-His-Leu-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-GlV-Lys-Lys-NH2 (fra 323 og 205 ovenfor); Rf = 0,27.

24. H-Met-Glu-Hls-Val-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lys-Pro-Val-Glv-Lys-Lys-NH,, (fra 324 og 205 ovenfor); Rf = 0,28.

25. H-Leu-Glu-His-Leu-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-NHo (fra 325 og 205 ovenfor); Rf = 0,25.

26. H-Met-Ser-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-NHo (fra 326 og 205 ovenfor); Rf = 0,31.

27. H-Met-Lvs-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Glv-Lys-Lys-NH2 (Fra 327 og 205 ovenfor); Rf = 0,15.

28. N-acetvl-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-NHU (fra 328 og 205 ovenfor); Rf = 0,50; og 29. H-Met-Glu-His-Tyr-D-Lys-Phe-Glv-D-Lys-Pro-Val-Glv-Lys-Lys-fllHo (Fra 329 og 205 ovenfor); Rf = 0,26.

Alle Rf-værdier i Bu:Py:Ac:Wa (38:24:8:30) på si02.

Eksempel VI.

Acetaterne af de efterfølgende peptider (hvortil ingen N-endestillet kædeforlængelse har været benyttet) fremstilles på samme måde og under de samme betingelser som beskrevet i eksempel I: H-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-NEU (fra 101 og 202 ovenfor); Rf = 0,11.

H-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lys-Pro-Val-Glv-Lys-Lvs-NHo (fra 101 og 205 ovenfor); Rf = 0,13.

30 l*9113 H-Phe-D-Lvs-Fhe-Gly-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-OMe (fra 101 og 201 ovenfor); Rf = 0,25· H-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-Arg-Arg-Pro-m.

(fra 101 og 203 ovenfor); Rf = 0,01.

H-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-Arg-Arg-Pro-Val-Lvs-Val-

Tvr-Pro-OH

(fra 101 og 204 ovenfor); Rf = 0,05.

H-Ala-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-NHo (fra 105 og 205 ovenfor); Rf = 0,12.

Rf-værdierne blev målt på med Bu:Py:Ac:Wa (2:0,75:0,25:1) som elueringsmiddel.

Eksempel VII.

De efterfølgende peptider, hvis fremstilling er beskrevet i eksempel V, oxideres til de tilsvarende sulfoner under de samme betingelser og på samme måde som beskrevet i eksempel II. Disse peptider opnås som acetater.

H-Met (—» Op)-Ala-Ala-Ala-D-Lys-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-NHo» Rf = 0,16.

Desamino-Met(—£ 0^)-Ala-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Glv-Lys-_

Lvs-NHL: Rf = 0,12.

H-Met (-» 02)-Glu-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lys-NHoί Rf = 0,14.

H-Met (—» 02)-Glu-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-OMe;

Rf = 0,22.

Desamino-Met(—» Oo)-Glu-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvsr Lvs-NH^: Rf = 0,17.

Rf-værdierne blev målt på Si02 med Bu:Py:Ac:Wa (38:24:8:30) som elueringsmiddel.

Eksempel VIII.

31 149113

De følgende peptider, hvis fremstilling er beskrevet i eksempel V, oxideres til de tilsvarende sulfoxider under de samme betingelser og på samme måde som beskrevet i eksempel III. Peptiderne opnås som acetater: H-Met(—* 0)-Glu-His-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-NEU:

Rf = 0,19.

H-Met(—» 0) —Glu—His—Phe-D—Lvs-Phe—Giv—D-Lvs— Pro-Val-Gly-Lys-Lys-NH2; Rf = 0,21.

Desamino-Met(—» 0)-Ala-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-D-Lvs-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-NHo: Rf = 0,10.

Rf-værdierne blev målt på sio2 med Bu:Py:Ac:Wa (38:24:8:30) som eluer ingsmidde1.

Eksempel IX.

Fremstilling af H-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lvs-Phe-Glv-Lvs-Pro-Val-Glv-Lvs-Lvs-OH

3,3 g Boc-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly-OH (302) og 571,0 mg HOOBt opløses i 20 ml DMF, hvorefter opløsningen køles til 0°C.

DCCI (760 mg) sættes til denne opløsning. Blandingen omrøres i 1 time ved 0°C og i ca. 16 timer ved stuetemperatur. Præcipitatet (DCHU) filtreres fra, og filtratet inddampes. Den opnåede rest (3,8 g), som er den tilsvarende benztriazinester af ovennævnte udgangspeptid, og 4,06 g af peptidet H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OH (206) opløses i 50 ml DMF. Blandingen omrøres i ca. 16 timer og inddampes derpå til tørhed. Resten opløses i 200 ml sec.butanol/chloroform (2:3) og vaskes med vand, Ο',ΟΓΝ HC1 og atter med vand. Opløsningen tørres på Na2SQ^ og filtreres derefter samt inddampes til tørhed. Udbytte 6,7 g.

På den i eksempel Ib beskrevne måde afbeskyttes det opnåede peptid. Udbytte 4,0 g. Rf i Bu:Py:Ac:Wa (38:24:8:30) = 0,35 på Si02.

Claims

149113 Eksempel X. Zinkkompleks Af en opløsning af zinkchlorid indeholdende 50 mg zink pr. ml sættes 1,5 ml til en opløsning af 31,5 mg Na2HP0^.

2^0 i 30 ml destilleret vand. Præcipitatet af dannet zinkphosphat opløses atter ved tilsætning af 4N HC1. Derpå sættes 175 mg NaCl og 0,5 ml benzylalkohol til denne blanding. 1,5 mg af peptidet H-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys-Phe-Gly-D-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-NH2 opløses derpå i denne blanding, og derefter tilsættes tilstrækkeligt IN natriumhydroxid til indstilling af blandingens pH-værdi på 8,5. Derefter bringes volumenet op på 50 ml med destilleret vand. 1 ml af suspensionen indeholder: 30 pg af peptidet 1.5 mg zink 0,63 mg Na2HP04.2H20 3.5 mg NaCl 10 mg benzylalkohol. Analogifremgangsmåde til fremstilling af et ACTH-derivat indeholdende fra 10 til 21 aminosyrerester og med den almene formel: A-L-B-D-Lys-L-Phe-Gly-(L eller D)Lys-L-Pro-L-Val-Gly-L-Lys-L-Lys-X (I) eller farmakologisk acceptable salte, herunder syreadditionssalte, eller metalkomplekser deraf, hvori A er en N-endestillet kædeforlængelse valgt blandt hydrogen og en N-acylgruppe valgt blandt O-Q^, U-C^-Q^ og hvori U9113 U er valgt blandt hydrogen og N-alkylcarbonyl med 1-6 carbonatomer, 0^ er valgt blandt aminosyreresterne L-His, D-His og NH-Z-CO, hvori Z er en usubstitueret, monohydroxysubstitueret eller monoaminosubsti-tueret alkylen- eller alkylidengruppe med 1-6 carbonatomer; C>2 er valgt blandt aminosyreresterne L-Glu, D-Glu, L-Gln, D-Gln og -NH-Z-CO-; og er valgt blandt syreresterne U-L-Met, U-L-Met(-* 0), U-L-Met (O2) , U-D-Met, U-D-Met (0), U-D-Met (-* 02), desamino-Met, desamino-Met (-·» 0), desamino-Met(-^02) og UNH-Z-CO-, B er en aminosyrerest valgt blandt Phe, Trp, Tyr og -NH-CHR^-CO-, hvori R1 er hydrogen eller alkyl med 1-6 carbonatomer; og X er valgt blandt hydroxy, en esterificeret hydroxygruppe afledt af en alifatisk alkohol med 1-8 carbonatomer, en usubstitueret amino-gruppe og en substitueret aminogruppe valgt blandt en mono-C1_6-alkyl= aminogruppe, en di-C^_g-alkylaminogruppe og L-Arg, L-Lys og en peptidrest med sekvensen 17-18, 17-19 indtil og med 17-24 ACTH eller den C-endestillede C^_g-alkylester eller det C-endestillede amid deraf, idet Lys kan indgå i stedet for Arg i nævnte peptidrest med sekvensen fra 17-18 og op til 17-24 ACTH, kendetegnet ved, at pep-tidet fremstilles på inden for peptidkemien i og for sig kendt måde ved sammenkobling af de indgående aminosyrer i den ønskede rækkefølge ved: (a) kondensation i nærværelse af et kondensationsmiddel af en forbindelse (syre, peptid) med en fri carboxylgruppe, og i hvilken andre reaktive grupper er beskyttet, med en forbindelse (aminosyre, peptid eller amin) med en fri aminogruppe, og i hvilken andre reaktive grupper ligeledes er beskyttet, eller (b) kondensation af en forbindelse (syre, peptid) med en aktiveret carboxylgruppe, og hvori andre reaktive grupper eventuelt er beskyttet, med en forbindelse (aminosyre, peptid, amin) med en fri amino-