DK161800B

DK161800B - Fremgangsmaade til fremstilling af nasale praeparater indeholdende calcitonin

Info

Publication number: DK161800B
Application number: DK458183A
Authority: DK
Inventors: Moise Azria; Thomas Cavanak
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1982-10-05
Filing date: 1983-10-04
Publication date: 1991-08-19
Also published as: NL192563C; HUT34121A; MY8700271A; HK27389A; PT77443B; US5759565A; NL8303386A; IT1172324B; DK161800C; FR2533826A1; IL69892A; US5733569A; CH657779A5; SE8305485D0; SE8305485L; AT394947B; AU2103588A; AU572800B2; SG76388G; JPH07103043B2

Description

DK 161800 B

i

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte galeniske præparater, der som aktiv bestanddel omfatter et calcitonin.

Calcitoninerne udgør en kendt klasse af farmaceutisk virksomme, 5 langkædede polypeptider med varierende, veldokumenteret farmaceutisk anvendelighed. Forskellige calcitoniner, deriblandt fx lakse- og ålecalcitonin, er kommercielt tilgængelige og anvendes almindeligvis ved behandling af fx Paget's sygdom, hypercalcaemi og osteoporose.

Som det imidlertid sædvanligvis er tilfældet med polypeptider, har 10 tilvejebringelse af bekvemme og effektive midler til administrering af calcitoniner givet mange problemer. Eftersom de er polypeptider, er calcitoninerne følsomme over for degradation ved administration og passerer kun vanskeligt ind i kropsvæskerne. Af denne grund har parenteral administration hidtil været den eneste almindeligt til-15 gængelige vej, der tillader effektiv behandling. Administration sker almindeligvis ved injektion. Sådanne administrationsmåder er altid ubehagelige, og når administrationen skal foretages med regelmæssige intervaller, kan den forårsage betydelig smerte for patienten. Det var i mange år et vigtigt mål at udvikle brugbare, alternative ad-20 ministrationsmåder, der gav mindre ubehag for patienten og, fore-trukkent muliggjorde enkel selvadministration, og på samme tid opnåede biotilgængelighedsniveauer, der var tilstrækkelige til effektiv behandling på klinikker.

Ansøgerne har nu opdaget, at det er muligt at tilvejebringe effektiv 25 klinisk behandling med calcitoniner ved nasal administration, dvs ved applikation på næseslimhinden. I overensstemmelse med den foreliggende opfindelses specielle egenskaber har ansøgerne især fundet, at biotilgængelighedsniveauer for calcitonin, der er ækvivalente med de niveauer, der opnås ved administration af standard intramuskulære 30 doser, kan opnås ved nasal administration ved dosisniveauer, der fuldt ud er inden for grænserne for det tolerable og praktisk mulige.

Det har endvidere vist sig, at fiskecalcitonineme og disses derivater, fx laksecalcitonin og ålecalcitoninderivatet 1,7-Asu-ålecal-citonin, i det følgende kaldet Elcatonin, og især laksecalcitonin, er ] 2

DK 161800 B

særlig egnede til anvendelse via den nasale vej i overensstemmelse med den foreliggende opfindelse.

Den nasale vej tilvejebringer en enkel og smertefri administrationsmåde, der let kan udføres af patienten selv, fx ved at administrere 5 en næsespray eller -dråbeopløsning fra en nasalapplikator. Det er klart, at denne vej har en stor fordel frem for parenteral administration, der almindeligvis må gives under lægeligt opsyn.

Medens administration ad den nasale vej klart ville være at foretrække frem for parenteral administration, fx injektion, som hidtil 10 har været praktiseret, skaber tilvejebringelsen af et præparat, der er egnet til anvendelse i nasal doseringsform, i sig selv mange problemer.

Et problem, der er særlig akut i relation til nasal administration af komplekse, farmaceutiske midler såsom calcitonineme, er at tilvej e-15 bringe en fuldt kompatibel og effektiv måde til at undgå kontaminering, fx af patogene eller andre uønskede mikroorganismer. Tilvejebringelse af et passende konserveringsmiddel, der er effektivt og kompatibelt med den aktive bestanddel, til at beskytte mod kontaminering, er særlig kritisk for et nasalt farmaceutisk præparat, hvor 20 risikoen for kontaminering er særlig høj . Konserveringsmidlet må være tilstrækkeligt til ikke kun at undgå initial kontaminering, fx under formulering og påfyldning af præparatet i sin beholder, men at undgå fortsat kontaminering under anvendelse, især hvor der kræves multipel dosering fra en enkelt beholder/applikator. Der opstår især 25 problemer, når fx en nasalapplikator, som det ofte er tilfældet, senere lagres i måneder før anvendelse. Under denne fase kan det valgte konserveringsmiddel blive gjort uvirksomt, fx ved absorption til de indvendige overflader af applikatoren, ved varmedegradation eller, hvis konserveringsmidlet er blot en anelse for flygtigt, som 30 følge af lækage i applikatoren. Endvidere er der under den egentlige brugsfase (der, hvis der forudses multipel dosering fra en enkelt applikator, kan strække sig over en periode på adskillige dage eller uger) fare for, at applikatoren kan lække eller på anden måde slippe uønskede mikroorganismer eller andre forurenende partikler ind fra 35 den omgivende atmosfære i almindelighed eller fra næseborene. Endvi- 3

DK 161800 B

dere kan præparatet i korte perioder blive udsat for forhøjet temperatur, fx under transport eller lagring.

Ud over de ovennævnte problemer må et farmaceutisk præparat, der er udviklet til nasal applikation, på samme tid tolereres på passende 5 måde, især på applikationsstedet. Det bør fx hverken forårsage irritation af næseslimhinden (bør fx ikke forårsage nogen signifikant prikkende fornemmelse) eller forårsage signifikant reduktion af den ciliære slagfrekvens.

Mange velkendte konserveringsmidler viser sig at være mulige til an-10 vendelse i farmaceutiske calcitoninpræparater. Eksperimenter har imidlertid vist, at ikke alle er egnede til praktisk anvendelse i relation til en calcitoninnasalspray. Således udviste chlorbutanol i en koncentration på 0,6% i nasale farmaceutiske calcitoninpræparater utilstrækkelig virkning mod testsvampen Pen. steckii, idet der kræve-15 des mere end 3 dage til at reducere celletallet til mindre end 0,1%. Endvidere viste det sig, at chlorbutanol angriber gummipropper og andre forbindelsesled, der anvendes i nasalsprayapplikatorer, mellem forstøvningspumpen og en flaske.

Derudover forårsagede chlorbutanol i en koncentration på 0,6% mere 20 end 50% inhibering af den ciliære slagfrekvens på rottetrachea inden for 20 minutter ifølge den mikrofotooscillografiske metode beskrevet af L. Chevance et al., Acta Otolaryng. 70, 16:28 (1970). Disse er blot nogle af de ugunstige virkninger, der kan mødes.

I overensstemmelse med den foreliggende opfindelse har det nu over-25 raskende vist sig, at der kan fremstilles farmaceutiske præparater, der omfatter et calcitonin som aktiv bestanddel, der imødekommer de høje standarder med hensyn til stabilitet og tolerabllitet, der kræves for nasal applikation, og som, er særdeles velegnede til fx anvendelse i multipeldosis-nasalsprayapplikatorer, dvs. applikatorer, 30 der er i stand til give en serie individuelle doser i løbet af en periode på fx adskillige dage eller uger ved anvendelse af benzalko-niumchlorid som en co-ingrediens og konserveringsmiddel. Det har også overraskende vist sig, at anvendelse af benzalkoniumchlorid selv ved den meget lave koncentration, der kræves ved anvendelse som konser-

DK 161800 B

4 f veringsmiddel, kan bibringe gunstige fordele i relation til de nasale resorptionskarakteristika af calcitoniriholdige præparater, og på den måde forstærke calcitonins biotilgængelighedsniveauer som følge af nasal applikation. Den foreliggende opfindelse angår således en 5 fremgangsmåde til fremstilling af et farmaceutisk præparat til nasal administration, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at 1) et calcitonin, og 2) benzalkoniumchlorid i 3) en flydende diluent eller bærer, der er egnet til 10 applikation på næseslimhinden, forenes.

Udtrykket "calcitonin" anvendes i den foreliggende beskrivelse og krav i bred forstand og omfatter ikke kun de naturligt forekommende calcitoniner, men også deres farmaceutisk virksomme derivater og 15 analoge, i hvilke fx ét eller flere af de i det naturligt forekommende produkt tilstedeværende peptidrester er erstattet, eller i hvilke N- eller C-terminalen er modificeret.

Foretrukne calcitoniner til anvendelse ved den foreliggende opfindelse er lakse-, human- og porcincalcitoniner samt Elcatonin. Alle disse 20 forbindelser er kommercielt tilgængelige og er i litteraturen blevet omfattende beskrevet sammen med deres farmaceutiske egenskaber.

Som tidligere anført har det vist sig, at der opnås exceptionelt gode resultater, fx med hensyn til biotilgængelighedsniveauer og varighed af tilstedeværelse i blodplasma, ved nasal administration af lakse-25 calcitonin. Laksecalcitonin er følgelig det mest foretrukne calcitonin til anvendelse ifølge den foreliggende opfindelse.

Det vil være klart, at de ved opfindelsen anvendte calcitoniner kan være i fri form eller i form af et farmaceutisk acceptabelt salt eller complex, fx et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt.

30 Sådanne salte og complexer er kendte og har virkning og tolerabili-tet, der er ækvivalent med de fri former. Passende syreadditionssalt- 5

DK 161800 B

former til anvendelse ved den foreliggende opfindelse omfatter fx hydrochloriderne og acetaterne.

Benzalkoniumchlorid er det almindeligt anvendte navn for kendte blandinger af kvaternære ammoniumsalte, der typisk har den almene 5 formel CgH5-CH2-NR(CH3)2Cl, hvor R er CgH^-C^gl^y. En foretrukken koncentration af benzalkoniumchloridkomponenten i præparaterne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er fra ca. 0,002 til ca. 0,02% (vægt/volumen), typisk ca. 0,01% (vægt/volumen) af det totale præparat.

10 De ovenfor definerede præparater kan påføres næseslimhinden, fx enten i dråbe- eller sprayform. Som det imidlertid er beskrevet i det følgende, påføres de især i sprayform, dvs. i form af fint fordelte smådråber.

Præparatet fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan na-15 turligvis også omfatte yderligere ingredienser, især komponenter tilhørende klassen af konventionelle farmaceutisk anvendelige overfladeaktive midler. I denne forbindelse har det vist sig, at anvendelse af overfladeaktive midler generelt i relation til nasal applikation af calcitoniner, især laksecalcitonin, kan forøge resorptionen via 20 næseslimhinden yderligere og således yderligere forbedre de opnåede biotilgængeligheder.

Den flydende diluent eller bærer 3) til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen [dvs. hvad enten der kun anvendes 2) benzalkoniumchlorid eller eventuelt også 4) et konventionelt overfladeaktivt 25 middel som nødvendig komponent] vil omfatte vand (farmaceutisk renhed) . Den flydende diluent eller bærer omfatter især vandig saltopløsning. Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen formuleres præparaterne på en sådan måde, at de tillader administration ad den nasale vej.

Til dette formål kan præparaterne også indeholde fx mindre mængder af 30 en hvilken som helst ønsket yderligere ingrediens eller excipiens, fx yderligere konserveringsmidler eller fx ciliære stimulanser såsom koffein. Til nasal administration vil et svagt surt pH normalt foretrækkes. Præparatet fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen har fortrinsvis et pH på fra ca. 3 til 5, især fra ca. 3,5 til ca.

DK 161800 B

6 4,5. Justering af pH udføres ved tilsætning af en passende syre såsom saltsyre.

Præparaterne ifølge opfindelsen bør også have en passende isotonici-tet og viskositet. Det foretrækkes, at de har et osmotisk tryk på fra 5 ca. 260 til ca. 380 mOsm/liter. En ønsket viskositet for præparaterne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen vil afhænge af den specifikke administrationsform, dvs. hvorvidt administration skal foregå ved næsedråber eller nasalspray. Til næsedråber er en hensigtsmæssig viskositet på fra ca. 2 til ca. 40 x 10"^ Pa x s. Til 10 nasalsprays vil viskositeten hensigtsmæssigt være mindre end 2 x 10 Pa X s, fx fra 1 til 2 x 10." ^ pa x s.

Hvis præparater fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen omfatter et konventionelt overfladeaktivt middel foretrækkes ikke-ioniske overfladeaktive midler. Særligt foretrukne overfladeaktive 15 midler er polyoxyalkylen-højere alkohol-ethere, fx med den almene formel I

R0-E (CH2V°-j~xH I

hvor RO er en rest af en højere alkohol, især en højere alkanol eller alkylphenyl såsom lauryl- eller cetylalkohol, eller en sterolrest, især en lanosterol-, dihydrocholesterol- eller cholesterolrest, såvel 20 som blandinger af to eller flere af sådanne ethere. Foretrukne po- lyoxyalkylenethere til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er polyoxyethylen- og polyoxypropylenethere (dvs. hvor n i den ovenfor viste formel er 2 eller 3), især polyoxyethylen- og polyoxy-propylenlauryl-, -cetyl- og -cholesterylethere, såvel som blandinger 25 af to eller flere af sådanne ethere.

Hydroxygruppen for enden af alkylenenheden af sådanne førnævnte ethere kan være helt eller delvis acyleret, fx med acyIrester af ali-phatiske carboxylsyrer såsom eddikesyre.

Foretrukne ethere til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindel-30 sen har en hydrofil-lipofil balance (HLB-tal) på fra ca. 10 til ca.

20, især fra ca. 12 til ca. 16.

7

DK 161800 B

Særligt egnede ethere til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er sådanne, i hvilke det gennemsnitlige antal gentagne enheder i polyoxyalkylendelen (x i den ovenfor viste formel) er fra 4 til 75, især 8-30, specielt 16-26. Etheme kan opnas ifølge kendte teknikker.

5 Et bredt spektrum af sådanne produkter er kommercielt tilgængelige fx fra firmaet Amerchol tinder handelsnavnet Solulan, firmaerne KAO Soap, ICI og Atlas under handelsnavnene Emalex, Brij og Laureth og fra firmaet Croda under handelsnavnet Cetomacrogol®.

Eksempler på polyoxyalkylenethere, der er egnede til anvendelse ved 10 fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er følgende: (POE - polyoxyethylenether; POP - polyoxypropylenether; x - gennemsnitligt antal gentagne enheder i POP/POE-delen).

1. Cholesterylethere: 1.1 Solulan C-24 - POE, x - 24 15 2. Ethere af lanolinalkoholer: 2.1 Solulan 16 - POE, x - 16.

2.2 Solulan 25 - POE, x - 25.

2.3 Solulan 75 - POE, x - 75.

2.4 Solulan PB-10 - PPE, x - 10.

20 2.5 Solulan 98 - POE, x - 10 - delvis acetyleret.

2.6 Solulan 97 - POE, x =* 9 - helt acety leret.

3. Laurylethere: 3.1 Exalex 709/Laureth 9 - POE, x - 9.

3.2 Laureth 4/Brij 30 - POE, x - 4.

25 3.3 Laureth 23/Brij 35 - POE, x - 23.

4. Cetylethere: 4.1 Cetomacrogol® - POE, x - 20-24.

Lanolinalkoholer kaldes også uldfedtsalkoholer og er en blanding af cholesterol, dihydrocholesterol og lanosterol.

DK 161800 B

8 . i

Foretrukne estere til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er polyoxyethylencholesterylethere, dvs. med den ovenstående al- i mene formel I, hvor n = 2 og RO er en cholesterolrest, især sådanne ethere, i hvilke antallet af gentagne enheder i polyoxyethylendelen 5 er fra 16 til 26, specielt ca. 24.

Det foretrækkes især, at sådanne ethere er i det væsentlige fri for forureninger, især fra andre polyoxyalkylenethere. De omfatter fortrinsvis mindst 75 vægtprocent, især mindst 85 vægtprocent, specielt mindst 90 vægtprocent ren polyoxyethylencholesterylether.

10 Hvis der anvendes et overfladeaktivt middel, fx en polyoxyalkylen-ether, vil den mængde, der er til stede i præparaterne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, variere afhængig af det valgte overfladeaktive middel, den specifikke administrationsmåde (fx dråber eller spray) og den ønskede virkning.

15 Den tilstedeværende mængde vil imidlertid almindeligvis være af størrelsesordenen fra ca. 2,0 mg/ml til ca. 200 mg/ml (fortrinsvis til ca. 100 mg/ml, især til ca. 20 mg/ml), hensigtsmæssigt fra ca. 5 mg/ml til ca. 30 mg/ml (fortrinsvis til ca. 15 mg/ml), og specielt ca. 10 mg/ml.

20 Den mængde calcitonin, der skal administreres, og følgelig mængden af aktiv bestanddel i præparatet fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen vil naturligvis afhænge af det specifikt valgte calcitonin, den tilstand, der skal behandles, den ønskede administrations-frekvens og den·ønskede virkning. 1 2 3 4 5 6

Som anført i nedenstående eksempel 2 har det vist sig, at biotilgæn- 2 gelighed af calcitoniner, især laksecalcitonin, bestemt som blodplas 3 makoncentration efter nasal administration vist sig at være overras 4 kende høj, i almindelighed af størrelsesordenen ca. 50% af de niveau 5 er, der opnås ved intramuskulær injektion. Administration af præpa- 6 rater fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen vil følgelig hensigtsmæssigt blive udført på en sådan måde, at der gives en dosis af størrelsesordenen to gange eller mere, fx fra ca. 2 til ca. 4

DK 161800B

9 gange den dosis, der kræves til behandling via intraparietal, fx intramuskulær, administration.

Hvor behandling med calcitonin, fx laksecalcitonin, hidtil har være foretaget ved intramuskulær injektion, er individuelle doser på ca.

5 50-100 internationale enheder (IU) blevet tilført fra ca. 1 gang daglig til ca. tre gange ugentlig. Til nasal administration vil behandlingen derfor hensigtsmæssigt omfatte administration af doser på fra ca. 50 til ca. 400 IU, især fra ca. 100 til ca. 200 IU, med en frekvens på fra ca. én gang daglig til ca. tre gange ugentlig. Doser 10 vil som nævnt ovenfor bekvemt administreres i en enkelt applikation, dvs. behandlingen vil omfatte administration af enkelte nasale doser omfattende fra ca. 50 til ca. 400 IU, fortrinsvis fra ca. 100 til ca.

200 IU calcitonin. Alternativt kan sådanne doseringer deles over en serie af fx 2-4 applikationer taget med mellemrum dagen igennem, idet 15 dosen ved hver applikation så omfatter fra ca. 10 til ca. 200 IU fortrinsvis fra ca. 25 til ca. 100 IU.

Den totale præparatmængde, der administreres ved hver nasal applikation, omfatter hensigtsmæssigt fra ca. 0,05 til 0,15 ml, typisk ca.

0,1 ml, fx 0,09 ml. Præparaterne fremstillet ved fremgangsmåden 20 ifølge opfindelsen omfatter følgelig hensigtsmæssigt fra ca. 150 til ca. 8000, fortrinsvis fra ca. 500 til ca. 4000, især fra ca. 500 til ca. 2500, og specielt fra ca. 1000 til ca. 2000 IU calcitonin, fx laksecalcitonin, pr. ml.

Med henblik på nasal administration vil præparaterne fremstillet ved 25 fremgangsmåden ifølge opfindelsen fortrinsvis være anbragt i en beholder, der er forsynet med dele, der muliggør applikation af det indeholdte præparat til næseslimhinden, fx anbragt i en nasalappli-katorindretning. Egnede applikatorer er kendte inden for teknikken og omfatter sådanne, der er tilpasset til administration af flydende 30 præparater til næseslimhinden i dråbe- eller sprayform. Eftersom dosering af calcitoniner bør reguleres så præcist som muligt, foretrækkes i almindelighed anvendelse af sprayapplikatorer, hvor den administrerede mængde kan underkastes præcis regulering. Passende administratorer omfatter fx forstøvningsindretninger, fx mekaniske 35 forstøvere og aerosolbeholdere. I sidstnævnte tilfælde vil applika-

DK 161800 B

10 toren indeholde et præparat fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen sammen med et drivmedium, der er egnet til anvendelse i en nasalapplikator. Forstøvningsindretningen vil være forsynet med en passende sprayadaptor, der tillader videregivelse af det indeholdte 5 præparat til næseslimhinden. Sådanne indretninger er velkendte inden for teknikken.

Beholderen, fx en nasalapplikator, kan indeholde tilstrækkeligt præparat til en enkelt nasal dosering eller til afgivelse af adskillige på hinanden følgende doser, fx i løbet af nogle dage eller uger.

10 Mængderne af de enkelte videregivne doser vil fortrinsvis være som defineret ovenfor.

I overensstemmelse med det foregående angår den foreliggende opfindelse endvidere: A. En beholder indeholdende et farmaceutisk præparat til nasal ad-15 ministration, hvilket præparat omfatter 1) et calcitonin og 2) benzalkoniumchlorid i 3) en flydende diluent eller bærer, der er egnet til applikation til næseslimhinden, 20 idet beholderen er forsynet med dele, der muliggør applikation af det indeholdte præparat til næseslimhinden, fortrinsvis i sprayform.

Opfindelsen åbner mulighed for en metode til administrering af et calcitonin til en patient, der kræver calcitoninbehandling, hvilken metode omfatter administrering af et præparat til nasal administra-25 tion, som omfatter komponenterne 1), 2) og 3) og eventuelt 4) som defineret ovenfor, til patienten ad den nasale vej.

Beholdere som defineret under A ovenfor er hensigtsmæssigt nasalaero-solapplikatorer. De muliggør fortrinsvis applikation af det indeholdte præparat i individuelt fastlagte mængder på fra ca. 0,05 ml 30 til ca. 0,15 ml, fx ca. 0,1 ml.

DK 161800 B

11

Egnede præparater såvel som individuelle komponenter 1), 2), 3) og eventuelt 4) til anvendelse i forbindelse med beholdeme/metoderne defineret ovenfor er som beskrevet i det ovenstående. Hensigtsmæssige dosisområder til anvendelse i relation til metoden er også som be-5 skrevet i det ovenstående.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen udføres fortrinsvis ved, at komponent 1), komponent 2) og eventuelt komponent 4) blandes omhyggeligt, fx i opløsning i komponent 3), og, hvis det ønskes, det vundne præparat fyldes i en beholder, der er forsynet med dele, der muliggør 10 applikation af det opnåede præparat til næseslimhinden, og hensigtsmæssigt udgør applikation af det ønskede præparat til næseslimhinden i sprayform.

Stabiliten af præparatet fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan bestemmes på konventionel måde. Calcitoninindholdet af 15 præparaterne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen under en inert nitrogenatmosfære vil degradere mindre end 10% på 2 år ved 20°C, som det antydes af standardanalysetests.

Fx blev nasalspraypræparatet, der er beskrevet i eksempel 1 i det følgende, lagret i 2 måneder ved 5°C, 20°C og 30°C under nitrogen i 20 en glasbeholder. Der blev ikke observeret nogen målelig (mindre end 1%) degradation af calcitonin ved 5°C og 20°C. Ved 30°C blev der observeret en 4% degradation, hvilket ikke var mere end hvad der kunne forventes for en ren, vandig opløsning. Disse resultater indikerer tilstrækkelig stabilitet, dvs. mindre end 10% degradation over 25 2 år under nitrogen i en forseglet beholder.

Præparaterne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, hvilke præparater indeholder benzalkoniumchlorid, er ligeledes stabile over for forurening af mikrober, fx ifølge standardtests, fx ifølge procedurerne beskrevet af S. Urban et al., Zbl. Bakt. Hyg. I 30 Abt. Orig. B., 1972, s. 478-484 (1981) og S. Urban, Acta Pharm. Tech-nol, 22, s. 247-253 (1976). Fx reduceres celletællingen af standardbakterier, nemlig E. coli ATCC 8739, Pseud, aeruginosa ATCC 9027,

Staph, aureus ATCC 6538, Strept. pyogenes ATCC 8668, og standardsvampe Cand. albicans ATCC 10231, Sacch. cerevisae ATCC 9763, Aspergillus

DK 161800 B

12 niger ATCG 16404 og Pen. steckli ATGC 10499 efter inokulering af præparatet til 0,1% eller derunder inden for 24 timer som antydet ved standardtests.

I én stabilitetstest blev nasalspraypræparatet ifølge eksempel 1 i 5 det følgende lagret ved 30°C i 3 måneder under nitrogenatmosfære i en glasbeholder. Pseud, aeruginosa ATCC 9027, Staph, aureus ATCC 6538,

Strept. pyogenes ATCC 8668 og svampene Cand. albicans ATCC 10231,

Sacch. cerevisae ATCC 9763, Aspergillus niger ATCC 16404 og Pen. stechii ATCC 10499 blev sat til for at give en celletælling på ca.

10 2 x 105 organismer i den inokulerede væske. Inden for 2 timer var celletællingen faldet til mindre end 0,1%. Eter 4 uger kunne der ikke påvises nogen celler.

Endvidere tåles præparaterne godt, hvilket antydes af standardtests, fx ved at der observeres mindre end 50% irihibering af fimrehårsslag-15 frekvensen op til 20 minutter efter administration ifølge den mikro-foto-oscillografiske metode beskrevet af L. Chevance et al., Acta.

Otolaryng. 70, s. 26-28 (1970).

Ubetydelig eller ingen prikkende fornemmelse og god stabilitet mod forurening tinder anvendelse kan også påvises ved standard klinisk 20 afprøvning.

Opfindelsen illustreres ved følgende eksempler:

DK 161800 B

13 EKSEMPEL 1

Præparat indeholdende laksecalcitonin, og som er egnet til nasal administration:

Bestanddel Mængde (pr. ml) 5 1) Laksecalcitonin (aktiv bestanddel) 0,1375 mg 10% overskud 0,01375 mg 0,15125 mg 2) NaCl 7,5 mg 10 3) Benzalkoniumchlorid 0,1 mg 4) HC1 (IN) tilsat til pH 3,7 5) Destilleret vand til et slutvolumen på 1,0 ml.

Komponenterne l)-3) forenes under beskyttelse af nitrogengas (i en 15 mængde der giver et slutvolumen på 2500 ml) på konventionel måde, idet der sættes 10% laksecalcitonin til for at opveje tab ved filtrering. Komponent 4) sættes derefter til for at bringe pH til 3,7, og destilleret vand sættes til til et slutvolumen på 2500 ml. Den vundne opløsning filtreres (fx ved anvendelse af 0,2 μια filter), 20 hvilket giver et præparat, der er egnet til nasal applikation og til at fylde i en nasalspraybeholder med et opløsningsvolumen på 2 ml.

Præparatet omfatter ca. 550 IU aktiv bestanddel/ml, og applikatoren afgiver en mængde svarende til 55 enheder pr. aktivering.

EKSEMPEL 2 25 Relativ biotilgængelighedsundersøgelse: nasal administration/intra- muskulær injektion af laksecalcitonin

Undersøgelsen udføres på 12 sunde frivillige forsøgspersoner, 6 mandlige og 6 kvindelige, med en kropsvægt på fra 50 kg til 85 kg.

Hver forsøgsperson modtager fire administrationer laksecalcitonin, én

DK 161800 B

i ! 14 j intramuskulært og tre nasalt. Administration udføres med følgende j doseringer: j A: Nasalt: Al. 55 IU.

A2. 110 IU.

5 A3. 220 IU.

B. Intramuskulært: 50 IU.

Nasal administration udføres under anvendelse af præparatet ifølge eksempel 1 og en sprayapplikator, der afgiver 55 IU pr. tryk. Med henblik på administrationen lægges forsøgspersonen på ryggen med 10 hovedet højet bagover i 5 minutter. Næseborene renses ved pudsning af næsen umiddelbart før administration.

Intramuskulær administration udføres ved injektion af en enkelt 1 ml dosis af et præparat ifølge eksempel 1, men uden benzalkoniumchlorid og indeholdende 50 IU, ind i gluteus medius musklen.

15 Hver forsøgsperson modtager de fire administrationer i tilfældig rækkefølge, og der får lov at gå mindst 3 dage mellem på hinanden følgende administrationer. Hver administration foretages om morgenen efter en let morgenmad, fra hvilken mælk, smør og ost er udelukket, 100 ml vand eller appelsinjuice indtages hver time efter behandling 20 for at opretholde urinafgivelse. Yderligere fødeindtagelse tillades ikke tidligere end 4 timer efter behandling.

Der tages blodprøver umiddelbart før administrationen (kontrol) og ved intervaller på 5, 15, 30, 60, 90, 120, 180, 240, 360 og 480 minutter efter administration. Til kontrolprøven tages en prøve på 20 25 ml. Alle efterfølgende prøver er på 2 ml.

Koncentrationen af laksecalcitonin i hver serumprøve måles ved hjælp af radioimmunoassay. Blodtrykket kontrolleres tinder afprøvningens forløb, og urinprøver afprøves for mulig ugunstig reaktion. Forekomst af bivirkninger, fx kvalmesymptomer, noteres. 1 AUC ("areal under kurve") for plasmakoncentrationen af laksecalcitonin beregnes statistisk; én gang under anvendelse af alle værdier 15

DK 161 800 B

inklusive værdierne under detektionsgrænsen på 26 pg/ml og én gang med værdier under detektionsgrænsen læst som nul. Den maksimale plasmakoncentration og det tidspunkt, på hvilken denne opnås, bestemmes også. Den relative biotilgængelighed ved nasal administration 5 bestemmes ud fra den relative dosisstandardiserede AUC (fx baseret på 50 IU) efter nasal og intramuskulær administration.

De opnåede resultater indikerer, at AUC-værdier efter administration af både 110 og 220 IU intranasalt er sammenlignelige med AUC-værdier-ne opnået efter administration af 50 IU intramuskulært, idet serumni-10 veauerne for laksecalcitonin forblev over detektionsgrænsen i 8 timer efter nasal applikation af 110 IU sammenlignet med 6 timer efter intramuskulær indgivelse af 50 IU. Der blev ikke bemærket nogen ugunstige bivirkninger efter nasale administrationer, selv ved den højeste dosis på 200 IU.

15 EKSEMPEL 3

Præparater indeholdende laksecalcitonin, som er egnede til nasal administration

Præparat nr. Anvendt mængde laksecalcitonin 3a 0,06874 mg/ml 20 3b 0,275 mg/ml 3c 0,55 mg/ml 3d 1,1 mg/ml.

Præparaterne fremstilles analogt med eksempel 1 under anvendelse af de samme mængder af komponenterne 2) og 3) (henholdsvis 7,5 mg/ml og 25 0,1 mg/ml), identisk justering til pH-værdi 3,7 under anvendelse af komponent 4) og opfyldning til det nødvendige slutvolumen under anvendelse af komponent 5). De vandne præparater omfatter ca. 250 (præparat 3a), 1000 (3b), 2000 (3c) og 4000 (3d) IU aktiv bestand-del/ml og fyldes på en nasalspraydispenser, der giver 0,2 ml aktiv 30 bestanddel pr. tryk (= 25, 100, 200 og 400 IU/pr. tryk for præparaterne henholdsvis 3a, 3b, 3c og 3d). Det vil være klart, at hvis der anvendes laksecalcitoninpræparater med forskellig aktivitet kan der 16

DK 161800 B

kræves forskellige mængder for at opnå den ønskede koncentration defineret som IU.

EKSEMPEL 4

Præparater indeholdende laksecalcitonin sammen med et ikke-ionisk 5 overfladeaktivt middel, der er egnet til nasal administration

Præparaterne fremstilles på en måde analogt med eksempel 1 men med tilføjelse af følgende bestanddele:

Præparat Yderligere bestanddel Mængde i 4a polyoxyethylencholesterylether: x - 24 30 mg/ml 10 4b polyoxyethylencholesterylether: x ** 24 10 mg/ml 4c polyoxyethylencetylether: x - 20-24 100 mg/ml.

Præparaterne anbringes i en nasalapplikator som beskrevet i eksempel 1.

EKSEMPEL 5 15 Sammenlignende biotilgængelighedsundersøgelse for præparaterne ifølge eksemplerne 1 og 4a 0,2 ml-portioner af præparat 1 eller 4a blev administreret nasalt ved hjælp af en nasalsprayapplikator til Rhesusaber (0,1 ml/næsebor), hvilket gav en dosering på ca. 100 IU laksecalcitonin/abe, og plasma-20 niveauer af laksecalcitonin blev målt i de efterfølgende 6 timer. Der blev udført tre forsøgsforløb pr. præparat, og de kombinerede resultater blev afbildet grafisk. Den grafiske afbildning er vist på tegningen. Afbildningen indikerer, at biotilgængeligheden for begge præparater (arealet under kurven) i det væsentlige er ækvivalent, 25 idet maksimet opnås noget tidligere med præparatet fra eksempel 4a.

17

DK 1 6 1 800 B

EKSEMPEL 6

Sammenlignende biotilgængelighedsundersøgelse for præparater med og uden benzalkoniumchlorid

Ved at gå frem analogt med Eksempel 1 fremstilledes nedenstående 5 præparater A og B, hvor præparat A er et sammenligningspræparat, der ikke indeholder benzalkoniumchlorid, medens præparat B er fremstillet ifølge opfindelsen og indeholder benzalkoniumchlorid.

Præparat A (Sammenligningspræparat)

Bestanddel Mængde

10 1. Laksecalcitonin 100 IU

10% overskud 10 IU

2. NaCl 7,5 mg 3. Destilleret vand til et slutvolumen på 1,0 ml 15 4. HC1 (IN) til en endelig pH-værdi på 3,7

Præparat B (Præparat fremstillet ifølge opfindelsen)

Bestanddel Mængde

1. Laksecalcitonin 100 IU

20 10% overskud 10 IU

2. NaCl 7,5 mg 3. Benzalkoniumchlorid 0,1 mg 4. Destilleret vand til et slutvolumen på 1,0 ml 25 5. HCl (IN) til en endelig pH-værdi på 3,7 18

DK 161800 B

Testmetode

Testen blev udført under anvendelse af hun-rhesusaber som forsøgsdyr. Testpræparaterne A og B blev administreret nasalt ved applikation via de ydre næsebor under anvendelse af en pipette. Abernes hoveder blev 5 holdt fastspændt tinder og efter administrationen for at undgå udstødning af administreret komposition. Der blev anvendt 1 ml komposition ved hver testforløb, hvilket gav en laksecalcitonindosering pr. testforløb på ca. 100 IU under anvendelse af enten testpræparat A eller B. j 10 Laksecalcitoninniveauer i blodserum i forsøgsdyrene blev bestemt ! tinder anvendelse af blodprøver taget umiddelbart før administration j i af testforbindelse og 0,25, 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4 og 6 timer efter administration. Calcitoninniveaueme i prøverne blev målt under anvendelse af standard laksecalcitonin-radioimmunoassay-teknikker.

15 Der blev foretaget 12 individuelle testforløb under anvendelse af sammenligningspræparat A og 7 testforløb under anvendelse af præparat B fremstillet ifølge opfindelsen.

De for både præparaterne A og B opnåede gennemsnitsresultater er vist i tabellen nedenfor.

20 TABEL

Plasmaniveauer af laksecalcitonin i rhesusaber efter nasal administration af 100 IU

Tid efter administration Plasmaniveauer (mIU/ml) 25 (time) Præparat A (n-12) Præparat B (n-7) 0,25 0,22 0,23 0,5 0,03 0,13 1.0 0,09 0,12 30 1,5 0,04 0,22 2.0 0,08 0,32 3.0 0,05 0,29 4.0 0,03 0,12 6.0 0,08 0,08 35 ________

Claims

10 PATENTKRAV

1. Fremgangsmåde til fremstilling af et flydende farmaceutisk præparat til nasal administration, kendetegnet ved, at 1. et calcitonin, 15 2) benzalkoniumchlorid og 3. en flydende diluent eller bærer, der er egnet til applikation til næseslimhinden, forenes.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 20 kendetegnet ved, at der fremstilles et præparat, i hvilket 2) er til stede i en koncentration på fra ca. 0,002 til ca. 0,02% (vægt/volumen).

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at der endvidere tilsættes 25 4) et overfladeaktivt middel, der er egnet til applikation til næ seslimhinden.

4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, kendetegnet ved, at der fremstilles et præparat, der er tilpasset til administration i form af en nasalspray. DK 161800 B

5. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-4, kendetegnet ved, at 1) er valgt fra klassen bestående af laksecalcitonin, humant calcitonin, porcint calcitonin og elcatonin.

6. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1-5, 5 kendetegnet ved, at der fremstilles et præparat, i hvilket 1) er til stede i en mængde på fra ca. 100 til ca. 8000 IU/ml.

7. Fremgangsmåde ifølge krav 6, i kendetegnet ved, at 1) er laksecalcitonin.

8. Fremgangsmåde ifølge krav 3, 10 kendetegnet ved, at 4) er et ikke-ionisk, overfladeaktivt middel.

9. Fremgangsmåde ifølge et krav 3 eller 8, kendetegnet ved, at der fremstillet et præparat, i hvilket 4. er til stede i en mængde på fra ca. 2 til ca. 200 mg/ml. 1

10. Beholder indeholdende et præparat fremstillet ifølge et hvilket som helst af kravene 1-9 og forsynet med dele, der muliggør applikation af det indeholdte præparat til næseslimhinden.