DK162053B

DK162053B - Temperaturstabile krystallinske salte af 7-oealfa-(2-amino-thiazol-4-yl)-alfa-(z)-methoxyiminoacetamidoaa-3-oe(1-ethyl-1-pyrrolidinium)-methylaa-3-cephem-4-carboxylat, fysiske blandinger af saltene og fremgangsmaade til fremstilling af svovlsyreadditionssaltet

Info

Publication number: DK162053B
Application number: DK371886A
Authority: DK
Inventors: Murray A Kaplan; Thomas W Hudyma; Robert A Lipper
Original assignee: Squibb Bristol Myers Co
Priority date: 1985-08-05
Filing date: 1986-08-04
Publication date: 1991-09-09
Also published as: SE469633B; LU86540A1; FI863155A0; GB8618989D0; HK99691A; FR2585705A1; PT83134B; NL8601991A; FI84484C; DD268395A5; AU6069486A; CS276717B6; IT1197067B; PT83134A; IL79608A; IE59222B1; EG18003A; ES2002112A6; GB2179936A; GR862055B

Description

i

DK 162053B

Den foreliggende opfindelse angår temperaturstabile semi-syntetiske cephalosporinsalte, hvis fremstilling ikke er beskrevet i litteraturen, fremstillingen af sådanne salte og blandinger indeholdende disse salte.

Aburaki et al. beskriver i US patentskrift nr. 4.406.899 7-[a-(2-5 ami nothi azol-4-yl)-α-(Z)-methoxyimi noacetami do]-3-[(1-methyl-1 - pyrrolidinium)methyl]-3-cephem-4-carboxylat på zwitterionform og omtaler tilsvarende syreadditionssalte (som er til stede på zwitterionform i injicerbare præparater) og påviser, at zwitterionformen har mere bredspektret aktivitet end ceftazidim og cefotaxim.

10 Imidlertid er de nævnte Aburaki et al.-cephalosporiner kun stabile i nogle få timer som injicerbare præparater, og zwitterion formen er endog som tørt pulver ustabil ved stuetemperatur og taber på blot én uge 30% eller mere af sin virkning ved opbevaring ved forhøjede temperaturer (f.eks. 45eC eller mere) og kræver derfor specielt isoleret emballage 15 og/eller køling, hvilket er en ulempe ved emballering og opbevaring sammenlignet med ceftazidim og cefotaxim.

Selv om Aburaki et al. omtaler syreadditionssalte, angiver patentskriftet ikke, hvorledes disse skal fremstilles eller anfører, hvilke af disse salte der om muligt måtte have god stabilitet i tør pulverform.

20 Kessler et al. omtaler i "Comparison of a New Cephalosporin, BMY 28142, with Other Broad-Spectrum /3-Lactam Antibiotics", Antimicrobial Agents and Chemotherapy, bind 27, nr. 2, s. 207-216, febr. 1985 sulfatsaltet, men ikke noget om, hvorledes det skal fremstilles, eller at dette salt har stuetemperaturstabilitet og god stabilitet i pulverform ved for-25 højede temperaturer.

Det har nu overraskende vist sig, at visse krystallinske syreadditionssal te af 7-[a-(2-aminothi azol-4-yl)-a-(Z)-methoxyimino-acetamido)- 3-[(l-methyl-l-pyrrolidinium)methyl]-3-cephem-4-carboxylat i tør form besidder fortrinlig stabilitet ved stuetemperatur og overlegen stabil i -30 tet ved højere temperatur sammenlignet med zwitterionformen. Med udtrykket "tør pulverform" som anvendtes i det foreliggende menes et fugtighedsindhold på mindre end 5 vægt%.

Disse syreadditionssalte er de krystallinske salte af 7-[or-(2-aminothi azol-4-yl)-α-(Z)-methoxyimi noacetamido-3-[(1-methyl-1-pyr-35 rolidinium)methyl]-3-cephem-4-carboxylat udvalgt blandt svovlsyre, di salpetersyre, mono-saltsyre og di-saltsyreadditionssalte samt ortho-phosphorsyreadditionssalte (1,5-2 mol orthophosphorsyre pr. mol salt, dvs. en skala fra sesqui- til di-orthophosphorsyresalte) eller soluater

DK 162053B

2 deraf. Med udtrykket "krystallinsk", som anvendes i det foreliggende menes mindst en form for karakteristisk molekylorden. Mens omhandlede svovlsyre, di-salpetersyre, di-saltsyre og orthophosphorsyreadditions-salte fremstilles på tydeligt krystallinsk form (hvilket er bekræftet 5 ved dobbeltbrydning under et polarisationsmikroskop) med nøjagtig molekylorden, er mono-saltsyreadditi onssaltet kun fremstillet med en i nogen grad regelmæssig molekylorden (hvilket er bekræftet ved ringe dobbeltbrydning under polarisationsmikroskop) og ikke med nøjagtigt forudsigelig molekylorden og er således "svagt" krystallinsk. Udtrykket 10 "krystallinsk" omfatter i det foreliggende ikke blot tydeligt krystallinske salte, men også det "svagt" krystallinsk forekommende mono-salt-syreaddi ti onssalt. ------

Syreadditionssaltene ifølge opfindelsen tilvejebringer, når de omdannes til injicerbare præparater, zwitterionen i opløsning. Zwitter-15 ionen har strukturformlen N0-CH3 COO® c'hj 20 Den bredspektrede anvendelighed over for forskellige organismer af zwitterionformen og således af vandige præparater fremstillet ud fra omhandlede salte er vist ved data hos Aburaki et al. i US patentskrift nr. 4.406.899.

Vandige præparater, der er fremstillet med omhandlede syreaddi-25 tions-salte ved blot at tilsætte sterilt vand giver sure opløsninger, som fremkalder uacceptabel irritation ved intravenøs administrering til kaniner og uacceptabel smertefølelse ved intramuskulær administrering til kaniner. Svovlsyre- og di-salpetersyreadditionssaltene har en reduceret opløselighed, som er utilstrækkelig for typiske injicerbare 30 præparater. Ifølge den foreliggende opfindelse er disse uheldige karakteristika overvundet ved anvendelse af omhandlede salte i fysisk blanding (dvs. som en blanding af faste stoffer) med en farmaceutisk acceptabel ikke-toksisk organisk eller uorganisk base i sådanne forhold, at der tilvejebringes en pH-værdi på ca. 3,5 til ca. 7 ved fortynding 35 med vand til en zwitterionaktivitet på fra 1 mg/ml til 400 mg/ml, •^normalt 250 mg/ml (bestemt ved højydelsesvæskechromatografi, herefter betegnet HPLC).

Et foretrukket salt ifølge opfindelsen er det krystallinske svovl-

DK 162053 B

3 syreadditionssalt. Det er foretrukket* fordi dets lave opløselighed i vand (25 mg/ml) muliggør stort udbytte fra vandigt medium ved krystallisation.

Det krystallinske svovlsyreadditionssalt fremstilles let ved en 5 fremgangsmåde, der omfatter, at man (a) fremstiller en vandig blanding af (i) mindst 1 molækvivalent svovlsyre og (II) zwitterion i en sådan mængde, at den forefindes i blandingen i en koncentration på over 25 mg/ml, (b) fremkalder krystallisation af svovlsyreadditionssaltet, og (c) isolerer det krystallinske svovlsyreadditionssalt.

10 De krystallinske salte ifølge opfindelsen (herefter blot benævnt som salte) besidder fortrinlig stabilitet ved stuetemperatur og udviser et styrketab (bestemt ved HPLC) på mindre end 1% ved opbevaring i en måned ved stuetemperatur. Disse salte har også udmærket stabilitet ved forhøjede temperaturer og udviser et styrketab (bestemt ved HPLC) på 15 mindre end 15% ved opbevaring i 1 måned ved 45-56'C.

Svovlsyreadditionsaltet er et foretrukket salt ifølge opfindelsen.

Det udviser et styrketab på mindre end 10% ved opbevaring i 1 måned ved 45-56eC. Af stor betydning er, at det har lav opløselighed i vand, dvs. ca. 25 mg/ml, og derfor udkrystalliseres fra vand med minimalt resttab.

20 Di-salpetersyreadditionssaltet ifølge opfindelsen har også en lav opløselighed i vand, dvs. ca. 60 mg/ml, og giver derfor også lavt resttab ved krystallisation fra vand.

Mono-saltsyre-, di-saltsyre- og sesqui- eller di-orthophosphor-syreadditi onssal tene har en vandopløselighed, der ligger over 200 mg/ml 25 og udkrystalliseres derfor fortrinsvis fra organiske opløsningsmidler snarere end fra vand for at opnå gode udbytter.

I det følgende omtales fremstillingen af saltene ifølge opfindelsen.

Som tidligere anført fremstilles svovlsyreadditionssaltet ifølge 30 opfindelsen ved en fremgangsmåde, der omfatter trinene (a), fremstilling af en vandig blanding af (i) mindst én molækvivalent svovlsyre og (ii) zwitterion svarende til nævnte salt i en sådan mængde, at den forefindes i blandingen i en koncentration, der er større end 25 mg/ml, (b) fremkaldelse af krystallisation og (c) isolering af det krystallinske svovl-35 syreadditionssalt.

I trin (a) anvendes zwitterionen fortrinsvis i en sådan mængde, at den forefindes i blandingen i en koncentration fra ca. 100 mg/ml til ca.

200 mg/ml, og trin (b) udføres i et vandigt medium uden indhold af

DK 162053B

4 organisk opløsningsmiddel. Normalt anvendes ikke mere end 1. molækvivalenter svovlsyre i trin (a). Normalt anvendes zwitterionen i trin (a) i en sådan mængde, at den forefindes i blandingen i en koncentration, der er mindre end 500 mg/ml.

5 Trin (a) udføres let enten, ved tilsætning zwitterionen i fast form til en svovlsyreopløsning (f.eks. IN HgSO^) under hurtig omrøring til dannelse af en opløsning. Alternativt kan trin (a) udføres ved at opløse fast zwitterion i vand og langsomt tilsætte svovlsyre under omrøring til dannelse af en opløsning.

10 Trin (b) udføres ved at fremkalde krystallisation, fortrinsvis ved podning, og derefter opslæmning, fortrinsvis i 15 minutter til 2 timer.

Det foretrækkes, at dette krystal!isationstrin udføres i vandigt medium, der er uden indhold af organisk opløsningsmiddel, og i dette tilfælde opnås normalt en renhed, der er ligger over 98%. Selv om tilstedeværel-15 sen af organisk opløsningsmiddel, såsom acetone, fremmer krystallisation og forhøjer udbyttet ved at formindske opløseligheden af det dannede svovlsyreadditonssalt i krystal!isationsmediet, kan det også fremme udfældningen af urenheder med en formindsket renhed til følge. Når zwitterionen anvendes i trin (a) i en sådan mængde, at den kan fore-20 findes i blandingen i en mængde, der er mindre end 25 mg/ml, skal organisk opløsningsmiddel, fortrinsvis acetone indgå i krystal!isations-mediet for at give et rimeligt udbytte. I tilfælde af, at acetone ~ —anvendes, benyttes hensigtsmæssigt en mængde fra 0,5 til 10 volumen acetone pr. volumen vandigt krystallisationsmedium.

25 I trin (c) separeres krystallerne fra krystallisationsmediet, for trinsvisvis ved vakuumfiltrering, vaskes derefter f.eks. med acetone/-vand efterfulgt af acetone alene eller 0,1N svovlsyre (f.eks. 1/10 volumen) efterfulgt af acetone (f.eks. 1/4 volumen) og tørres så f.eks. ved vakuumtørring ved 30-50C i 4-20 timer.

30 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til dannelse af svovlsyreadditionssaltet medfører rensning af zwitterionformen på grund af svovlsyreadditionssaltets begrænsede opløselighed i sammenligning med zwitter-ionformen og kan benyttes til at rense zwitterionen uden at isolere den som et faststof. Hvis det er ønskeligt at opnå i det væsentlige ren 35 zwitterion (fri base) ud fra det dannede svovlsyreadditionssalt, kan dette ske ved at opløse saltet i vand under tilsætning af Ba(QH)2»8H20 i en mængde på 90-100% af det teoretiske ved en pH-værdi på mindre end 6,5 til udfældning af BaSO^, filtrere til fjernelse af BaSO^ og genvin-

DK 162053 B

5 ding af filtratet indeholdende den deri opløste zwitterion og anvende det som en opløsning eller isolere den faste zwitterion (fri base) ved lyofilisering eller ved at tilsætte acetone til udfældning af amorf zwitterion efterfulgt af isolering af den faste zwitterion ved vakuum-5 filtrering, vask f.eks. med acetone og vakuumtørring. Alternativt omdannes svovlsyreadditionssaltet til den fri base under anvendelse af ionbytterharpiks, f.eks. "Dowex WGR" (en svagt basisk anionbytter-harpiks) og "Dowex XU-40090.01" (en stærkt sur kationbytterharpiks) og lyofiliseres derpå.

10 Hed hensyn til fremstillingen af krystallinsk di-salpetersyreadditionssalt ifølge opfindelsen opnås dette ved at blande (i) mindst to molækvival enter salpetersyre og (i i) zwitterion svarende til saltet i en sådan mængde, at den forefindes i blandingen i en koncentration, der er større end 100 mg/ml og derefter fremkalde krystallisation ved at 15 pode eller gnide med end en glasstang, fortynde med 2-propanol og afkøle. Det krystallinske di-salpetersyreadditionssalt udvindes f.eks. ved filtrering, sekventiel vask med f.eks. 2-propanol-I^O (50% vol/vol), 2-propanol og ether og så vakuumtørring ved 50eC i 2 timer.

Mono-saltsyreadditionssaltet ifølge opfindelsen fremstilles ved at 20 opløse zwitterionen i ca. 1 molækvivalent saltsyre og fremkalde krystallisation ved at tilsætte acetone under omrøring og fortsætte omrøringen efterfulgt af isolering af krystallerne, f.eks. ved vakuumfiltrering efterfulgt af vask med acetone og vakuumtørring. Alternativt dannes mono-saltsyreadditionssaltet ud fra di-saltsyreadditionssaltet ved at 25 opslæmme di-hydrochloridsyreadditionssaltet i methylenchlorid og tilsætte 1 molækvivalent triethylamin efterfulgt af opslæmning til dannelse af mono-saltsyreadditionssaltet, som isoleres, f.eks. ved vakuumfiltrering efterfulgt af vask med methylenchlorid og vakuumtørring.

Det krystallinske di-saltsyreadditionssalt ifølge opfindelsen frem-30 stilles ved at opløse zwitterionen i mindst to molækvivalenter saltsyre, fremkalde krystallisation ved tilsætning af acetone, isolere krystallerne, f.eks. ved vakuumfiltrering, vaske med acetone og vakuumtørre.

Det krystallinske di-orthophosphorsyreadditionssalt ifølge opfindelsen fremstilles ved at opløse zwitterion i mindst 2 molævival enter 35 phosphorsyre, fremkalde krystallisation ved tilsætning af acetone og isolere krystallerne ved f.eks. vakuumfiltrering efterfulgt af vask først med acetone og så med ether og derefter vakuumtørring. Det krystallinske sesqui-orthophosphorsyreadditionssalt dannes ved samme frem-

DK 162053B

6 gangsmåde bortset fra, at der anvendes ca. 1\ molækvivalent phosphor-syre.

Saltene ifølge opfindelsen omdannes til injicerbare præparater ved at fortynde med sterilt vand og pufferindstilles til pH 3,5-7 til op-5 nåel se af en injicerbar zwitterionkoncentration på 1 mg/ml til 400 mg/ml zwitterion. Egnede puffermidler omfatter f.eks. tri natriumorthophosphat, natriumbicarbonat, natriumcitrat, N-methylglucamin, L(+) lysin og L(+)arginin. Til intramuskulær og intravenøs administrering til en voksen person er en total dosis på fra ca. 750 til ca. 3000 mg daglig 10 fordelt i portioner normalt tilstrækkelig.

Saltene ifølge opfindelsen omdannes fortrinsvis ikke til injicerbare præparater ved blot at tilsætte sterilt vand, fordi svovlsyre- og di-salpetersyreadditionssaltene ikke er tilstrækkeligt opløselige til at danne præparater af normal koncentration til administrering, og fordi 15 de pågældende salte i opløst tilstand tilvejebringer præparater med meget lav pH-værdi (1,8-2,5), hvilket virker smertefuldt ved injektion.

Som anført ovenfor har det nu vist sit, at disse mangler kan overvindes ved at omdanne saltene til en fysisk, dvs. fast blanding med farmaceutisk acceptable, normalt faste, ikke-toksiske organiske eller uorganiske 20 baser i sådanne forhold, at der tilvejebringes en pH-værdi i området fra 3,5 til ca. 7, fortrinsvis fra ca. 4 til ca. 6, ved fortynding af blandingen med vand til en injicerbar zwitterionkoncentration på 1 mg/ml tiT~400 mg/ml, f.eks. en zwitterionaktivitet på 250 mg/ml bestemt ved HPLC-analysen.

25 De nøjagtige forhold mellem bestanddelene i den fysiske blanding varierer fra parti salt til parti salt, eftersom saltets renhed varierer fra parti til parti. Forholdene mellem bestanddelene fastsættes for et bestemt partt ved en forudgående titrering af en prøve til opnåelse af en udvalgt p-H-værdi i førnævnte område.

30 Den fysiske blanding opbevares let og forsendes i fast form, idet der drages fordel af saltenes stabilitet, og den omdannes let til et injicerbart præparat blot ved, at f.eks. en sygeplejerske eller læge lige før brug tilsætter vand.

Den fysiske blanding fremstilles ved at blande saltet og basen til 35 en ensartet blanding, f.eks. ved at anvende en standardblender i tør atmosfære, og den påfyldes derefter fortrinsvis i glas eller anden beholder, alt under aseptiske forhold.

Baserne til anvendelse i blandingen omfatter f.eks. trinatrium-

DK 162053B

7 orthophosphat, natriumbicarbonat, natriumcitrat, N-methylglucamin, L(+) lysin og L(+) arginin. L(+) lysin og L (+) arginin foretrækkes, eftersom blandinger med indhold heraf, ved genfortynding giver injicer-bare præparater, der ved injektion er mindre smertefulde for dyr end 5 præparater, der stammer fra blandinger indeholdende andre baser. L(+) lysin anvendes fortrinsvis i et sådant forhold, at der tilvejebringes en pH-værdi på 3,5-6 ved fortynding af blandingen med vand til opnåelse af et præparat med zwitterionaktivitet på 250 mg/ml (bestemt ved HPLC-analysen).

10 Saltene ifølge opfindelsen og i det væsentlige tørre fysiske blandinger indeholdende disse kan opbevares uden afkøling eller isoleret emballage og stadig bevare høj styrke.

I flere af præparaterne ifølge opfindelsen anvendes den ustabile zwitterion som udgangsmateriale. Fremstillingen heraf er beskrevet i 15 eksempel 1-3 i US patentskrift nr. 4.406.899. Heri benævnes zwitterion 7-[(Z)-2-methoxyimino-2-(2-aminothiazol-4-yl)acetamido-3-[(l-methyl-l-pyrroli d i n i um)methy1]-3-cephem-4-carboxyl at].

Opfindelsen belyses i det følgende nærmere ved hjælp af udførel ses-eksempler og under henvisning til tegningen, hvor 20 fig. 1 er en grafisk afbildning af det infrarøde absorptionsspektrum af det krystallinske svovlsyreadditionssalt af 7-[a-(2-amino-thi azol-4-yl)-a-(Z)-methoxyiminoacetamidoj-3-[(1-methyl-1-pyrrolidi-nium)-methyl]-3-cephem-4-carboxylatsulfatsalt i KBr-fortynding, fig. 2 er en grafisk afbildning af det infratøde absorptionsspek-25 trum af det krystallinske sesquiphosphorsyreadditionssalt af 7-[a-(2-aminothi azol-4-yl)-x-(Z)-methoxy-iminoacetamido]-3-[(1-methyl-1-pyrro-lidiniumj-methylJ-3-cephem-4-carboxylat i KBr-fortynding, fig. 3 er en grafisk afbildning af det infrarøde absorptionsspektrum af det krystallinske diphosphorsyreadditionssalt af 7-[a-(2-amino-30 thi azol-4-yl)-x-(Z)-methoxy-imi noacetamido]-3-[(1-methyl-1-pyrrolidi-nium)-methyl]-3-cephem-4-carboxylat i KBr-fortynding.

Eksempel 1

Fremstilling af svovlsyreadditionssaltet 35 1,5 g zwitterion sættes langsomt til 10 ml hurtigt omrørt IN H2$04 (1,59 molækvivalenter) ved 20-26° C. En opløsning opnås. Krystallisation fremkaldes derefter ved at pode med krystallinsk svovlsyreadditionssalt og den krystallinske masse opslæmmes i ¼ time. Krystallerne frasepareres

DK 162053B

8 derefter ved vakuumfiltrering, vaskes med 3 ml 50% acetone/vand (vol/vol) og med to 5 ml portioner acetone og vakuumtørres så ved 40-50°C natten over.

Et typisk udbytte er 1,3 g svovlsyreadditionssalt.

5 Analyse for CjgH^NgØ-^^SO^:

Beregnet: %C, 39,44; %H, 4,53; %N, 14,524; %S, 16,62; %H20, ingen Fundet: %C, 38,91; %H, 4,57; %N, 14,64; %S, 16,71; %H20, 1,42

Eksempel 2 10 Fremstilling af svovlsyreadditionssaltet 1,5 g zwitterion opløses i 5 ml vand. 5 ml 1M H2S0^ sættes langsomt til denne opløsning under omrøring. Krystallisation fremkaldes så ved at pode med krystallinsk syreadditionssalt, og den krystallinske masse opslæmmes i % time. Krystallerne frasepareres så ved vakuumfiltrering, 15 vaskes med 3 ml 50% acetone/vand (vol/vol) og med to 5 ml portioner acetone og vakuumtørres ved 40-50°C natten over.

Et typisk udbytte er 1,3 g svovlsyreadditionssalt.

Eksempel 3 20 Fremstilling af (HNO^lnSyreadditionssaltet 300 mg zwitterion opløses i 2N salpetersyre (0,5 ml). Der gnides med en glasstang, og opløsningen fortyndes med 2-propanol (0,4 ml) og ~ afkøles. Den krystallinske titel forbindelse opsamles og vaskes sekventielt med 0,4 ml 2-propanol/H20 (1:1), 2-propanol og så med ether til 25 opnåelse af 127 mg dinitratsalt.

Analyse for CjgH^NgOgS^HNOj:

Beregnet: %C, 37,62; %H, 4,32; %N, 18,47; %S, 10,57;

Fundet: %C, 36,92; %H, 4,10; %N, 18,08; %S, 10,67; (H20-indhold 0,90%) 30

Eksempel 4

Fremstilling af monosaltsyreadditi onssaltet 1 g zwitterion opløses i 2,08 ml IN HC1 (1 molækvivalent) ved 20-25eC. 30 ml acetone tilsættes under hurtig omrøring i løbet af 15 35 minutter, hvorved der dannes krystaller Omrøringen fortsættes 1 time. Krystallerne isoleres ved vakuumfiltrering, vaskes med 10 ml acetone og vakuumtørres ved 50°C i 2 timer.

Et typisk udbytte er 0,9 g krystallinsk monosaltsyresalt.

DK 162053B

9

Analyse for CjgHg^NgOgSg'HCl:

Beregnet: %C, 41,37; %H, 4,75; %N, 15,2; %S, 11,63; %C1, 12,86.

Fundet: %C, 39,32; %H, 4,88; %N, 13,95; %S, 11,28;*C1, 12,44; %H20, 4,5.

5 (korrigeret for H^O: %C, 41,17; %N, 14,61; %S, 11,82; %C1, 13,03).

Eksempel 5

Fremstilling af disaltsyreadditionssaltet og fremstilling af monosalt-10 syreadditionssalt derudfra 350 mg zwitterion opløses i 2 ml IN HC1. 10 ml acetone sættes til den resulterende opløsning under hurtig omrøring og over et interval på 5 minutter, hvorved der dannes krystaller. Omrøringen fortsættes i yderligere 5 minutter. Så tilsættes yderligere 10 ml acetone, og omrøringen 15 udføres i ½ time. Krystallerne fjernes ved vakuumfiltrering, vaskes med to 5 ml portioner acetone og vakuumtørres ved 40-45°C i 24 timer.

Et typisk udbytte er 300 mg krystallinsk di saltsyreadditionssalt.

Analyse for ci9H24N6°5S2*2HC^:

Beregnet: %C, 41,38; %H, 4,75; %N, 15,2; %$, 11,62; %C1, 12,8.

20 Fundet: %C, 40,78; %H, 4,98; %N, 14,7; %S, 11,25; %H20, 1,25.

(korrigeret for H20: %C, 41,1; %N, 14,88; %S, 11,39; %C1, 11,94).

1 g di saltsyreadditi onssalt fremstillet som ovenfor opslæmmes i 20 ml methylenchlroid ved 20-25°C i en forseglet kolbe, og 0,28 ml tri -25 ethylamin tilsættes over et interval på 15 minutter. Den krystallinske masse opslæmmes så i 5 timer. De resulterende monosaltsyreadditi onsalt krystaller isoleres så ved vakuumfiltrering, vaskes med to 5 ml portioner methylenchlorid og vakuumtørres ved 50eC i 2 timer. Et typisk udbytte er 800 mg.

30

Eksempel 6

Fremstilling af di-orthophosphorsyreadditi onssalt 1 g zwitterion opløses i 3,4 ml 144 mg/ml H^PO^ (2,2 molækvivalenter) ved 15eC. Den resulterende opløsning klares ved filtrering på 35 passende måde. I løbet af et tidsrum på 10 minutter tilsættes 12 ml acetone til den klarede opløsning under hurtig omrøring, hvorved der dannes krystaller. Omrøringen fortsættes i 10 minutter. Så tilsættes 30 ml acetone i løbet af 10 minutter, og omrøringen fortsættes i yderligere

. DK 162053B

ίο 15 minutter. Krystallerne opsamles ved vakuumfiltrering, vaskes med to 5 ml portioner acetone og to 5 ml portioner ether og tørres under høj-vakuum i 16 timer.

Et typisk udbytte ved denne fremstillingstype var 1,1 g krystal -5 linsk di-orthophosphorsyreadditionssalt.

Analyse for ci9H24N605S2’2H3P04:

Beregnet: %C, 33,72; %H, 4,47; %N, 12,42;

Fundet: %C, 33,43; %H, 4,65; %N, 12,02; %H20, 1,82.

(korrigeret for H20: %C, 34,0; %N, 12,2) 10 Sesqui-orthophosphorsyreadditionssaltet dannes som ovenfor med undtagelse af, at 1,5 molækvival enter af H3P04 anvendes i stedet for 2,2 molækvival enter.

Eksempel 7 15 Stabilitet ved forhøjede temperaturer

Stabilitet ved forhøjede temperaturer bestemtes ved opbevaring af præparaterne i tørre beholdere ved temperaturer og i tidsrum som anført nedenfor, og tab eller forøgelse af styrke bestemtes ved HPLC. Forøgelse af styrke i % angives ved et plustegn foran et tal. Tab af styrke på 20 mindre end 10% over et tidsrum på 2 til 4 uger ved 45-56°C er sædvanligvis tegn på mindre end 10% tab af styrke over en periode på 2-3 år ved stuetemperatur.

Procent tab 25

45eC 56eC 100eC

(Uger) (Uger) (dage)

Form 1 2461 2 4 | 1 30 ----------— -.............-..............— I...................I......

DK 162053B

11

Eksempel 8

Testning af fysiske blandinger

Fysiske blandinger fremstilledes ud fra krystallinske svovlsyresalt med (a) tri natriumorthophosphat, (b) natriumbicarbonat, (c) L(+) lysine 5 og (d) L(+) arginin. Baserne tilsattes i sådanne mængder, at der ved fortynding af blandingen med vand til en zwitterionaktivitet på 250 mg/ml (bestemt ved HPLC-analyse) tilvejebragtes pH-værdier, som følger: trinatriumorthophosphat (til tilvejebringelse af pH 6,0); natriumbicarbonat (til tilvejebringelse af pH 6,0); L(+) lysin (til tilvejebrin-10 gel se af pH 6,0); L(+) arginin (til tilvejebringelse af pH 6,0). Inji-cerbare præparater fremstilledes ved at rekonstituere med sterilt vand til en zwitterionaktivitet på 250 mg/ml ifølge HPLC-analysen. Der var ikke nogen problemer med hensyn til opløseligheden. Smerten ved i injektioner (100 mg/kg) udført intramuskulært på kaniner lå under acceptable 15 grænser. Det mindst smertefulde præparat var det, som indeholdt arginin.

Lignende resultater med god opløselighed og acceptabel smerte ved intramuskulær injektion opnås ved brug af de omhandlede andre salte i fysisk blanding med ovennævnte baser.

Fig. 1 er det infrarøde absorptionsspektrum for det krystallinske 20 sulfatsalt, der er fremstillet som beskrevet ovenfor i eksempel 1 eller 2, hvilket spektrum er opnået under anvendelse af en prøveskive frem stillet med kaliumbromid.

Røntgendiffraktionsmønstret af det krystallinske sulfatsalt af 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(z)-methoxyiminoacetamido]-3-[(l-methyl“l-25 pyrrolidinium)methyl]-3-cephem-4-carboxylat fremstillet som beskrevet i eksempel 1 eller 2 bestemtes med et "Rigaku Powder Diffractometer" under anvendelse af et kobberantikato-røntgenrør og et nikkel filter, idet prøven var anbragt i en glasskål. Skanningshastigheden var 2 grader/min. i området fra 5 grader til 40 grader, og der blev mekanisk optegnet et 30 diagram til angivelse af de maksimale diffraktionsvinkler. Ud fra dette beregnedes (d) afstandene og relative intensiteter (I/Γ). De er angivet nedenfor.

DK 162053B

12 d afstand (A)° Ι/Γ (%) 9,20 100 6,80 50 5 5,50 28 5,09 22 4,50 38 4,41 44 4,19 63 10 3,78 38 3,64 44 3,39 25 3,31 31 3,15 47 15

Eksempel 9

Fremstilling af sesquiphosphatsaltet

Zwitterionen 0,70 g, opløses under hurtig omrøring i fra 2,2 til 2,4 ml 85% phosphorsyre (2,1 til 2,2 molækvival enter), som er fortyndet 20 1:10 (vol/vol) med vand. Opløsningen klares ved filtrering gennem et membranfilter med en porestørrelse på 0,22-0,45 mikron. 5 til 7 volumendele methanol (15-20 ml) sættes under hurtig omrøring til filtratet i løbet af 30 til 60 minutter. Krystaller dannes under dette forløb, og den hurtige omrøring fortsættes i \\ til 2 timer. Det krystallinske 25 produkt udvindes ved vakuumfiltrering. Produktet vaskes på filteret først med 6 til 8 ml methanol:acetone i forholdet 1:1 (vol/vol), idet det påses, at en tæt pakket filterkage bevares, og derefter med acetone. Produktet tørrres i vakuum ved 50°C i 2 timer, typisk udbytte 0,7 til 0,75 g.

30 .

Tydning af IR-spektrum (se fig. 2) (IR, KBr skive).

DK 162053 B

13

Topposition (cm-1) Funktionel gruppe

2800-3400 NH, NH3+, carboxyl OH

1780 /J-l aktam C=0 5 1680 Carboxyl C=0 1660 Amid C=0

1630 C=N, C=C

1550 Amid OH

980, 1040 P04= 10

Opførsel ved opvarmning

Under differentiel skanningskalorimetri påvistes en eksoterm omdannelse ved 171,8°C.

15 Røntgendi f frakti onsmønster Røntgendiffraktionsmønstret af det ovenfor omhandlede sesqui-phosphatsalt tilvejebragtes ved hjælp af et "Rigaku Powder Diffrakto-meter" på den i forbindelse med sulfatsaltet ovenfor beskrevne måde med følgende resultater.

20 d Ι/Γ 11,04 32 9,2 16 25 7,89 24 7.02 42 6,7 32 5.5 26 4,64 100 30 4,456 53 4.3 58 3,88 26 3,75 89 3,56 21 35 3,31 26 3.05 16

DK 162053 B

14

Tydning af NMR-spektrum (*H 90 MHz NMR, D20-opløsning) 5 N-°CH* S^ir u / O «Τ η n< 10 ” CO* ’

Kemiske skift (ppm δ i for- hold til TSP) Beskrivelse Integral Henføres til 15 2,0-2,4 Multiplet 4 14CH2, 14'CH2 3,04 Singlet 3 12CH3 3,3-3,6 Multiplet 5 2CH, 13CH2, 13'CH^

3,94 Doublet 1 2CH

4,12 Singlet 3 20CH3

20 4,12 Doublet 1 11CH

4,8 Doublet 1 11CH

5,42 Doublet 1 6CH

5,88 Doublet 1 7CH

7,21 Singlet 1 18CH

25

DK 162053 B

15

Stabilitet

Tid_Temperatur % Tab 5 1 dag 100°C - 10,9 3 dage 70eC - 0 7 dage 70eC - 1,9 1 uge 56eC - 1,0 2 uger 56eC - 0 10 4 uger 56°C - 0 1 uge 45°C - 0 2 uger 45eC - 1,4 4 uger 45eC - 0,7 8 uger 45eC - 1,6 15 1 måned 37°C - 2,5

Grundstofanalyse (vægtprocent) 20 Fundet Tør basis Teoretisk (sesquiphosphat) C 35,44 36,3 36,4 H 4,66 4,41 4,7 N 12,88 13,2 13,4 25 H20 2,29* - monohydrat = 2,8% H20 H3P04 23,06 23,06 23,06 * Karl Fischer metode 30

Eksempel 10

Methanol udkrystallisation af sesquiphosphatsalt 25 g omkrystalliseret sulfatsalt fremstillet som beskrevet ovenfor i eksempel 1 eller 2 opløstes i 400 ml l,l,2-trichlor-2,2,l-trifluor-35 ethan ("Freon TF") og opløsningen behandledes med 50 ml Amber!ite LA2® (Amberiite LA-2® er en vanduopløselig aliphatisk sekundær amin, som er opløselig i organisk opløsningsmiddel, hvis mineral syresal te også er opløselige i organisk opløsningsmiddel) og 50 ml vand. Efter kraftig

DK 162053B

16 omrøring af blandingen i 70 minutter separeredes faserne og den vandige fase indeholdende zwitterionen opsamledes efterfulgt af behandling deraf med yderligere 40 ml Amberi ite LA-2®, ekstraktion med yderligere 310 ml "Freon TF", behandling med affarvende carbon og filtrering.

5 1/2 af ovennævnte vandige opløsning af zwitterionen, 33,5 ml, anbragtes i en omrøringsbeholder og behandledes med 1,65 ml 85% phosphorsyre. Yderligere 1,65 ml 80% phosphorsyre blandedes med 90 ml methanol, og sattes langsomt til den vandige zwitterionopløsning i løbet af 30 minutter ved 25°C. En opslæmning af det ønskede sesquiphosphatsalt 10 dannedes og omrøring fortsatte ved 25°C i 1 time. Produktet opsamledes så ved sugningsfiltrering, vaskedes med 30 ml absolut ethanol og derefter med 15 ml methylenchlorid, og tørredes i vakuum ved 45°C i 15 timer til opnåelse af 9,80 9, 72% på analysebasis af 7-[a-(2-amino-thiazol-4-yl)-o:-(Z)-methoxyiminoacetamido]-3-[(l-methyl-l-pyrroli di ni o)-15 methyl-3-cephem-4-carboxylatphosphatsalt indeholdende 1,5 molækvivalenter H3PO4 og karakteriseret ved differenterial scanningskolorimeter kurveaftegningen, infrarødt absorptionsspektrum og røntgen-diffraktionsmønster beskrevet heri.

20

Claims

1. Temperaturstabilt krystallinsk salt af 7-[a-(2-amino-thiazol-4-yl)-α-(Z)-methoxyiminoacetamido]-3-[(1-methyl-1-pyrrolidi ni urn)-methyl]- 3-cephem-4-carboxylat udvalgt fra gruppen bestående af svovl-syre-, di- 5 saltepetersyre-, mono-saltsyre- og di-saltsyreadditionssalte samt ortho-phosphorsyreadditionssalte indeholdende 1,5-2 molækvivalenter HgPO^ eller sol vater deraf.

2. Krystallinsk salt ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at det er udvalgt fra gruppen bestående af svovlsyre-, mono-saltsyre-, di-salt- 10 syre- og orthophosphorsyreadditionssal te eller sol vater deraf.

3. Fysisk blanding af saltet ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at den indeholder en farmaceutisk acceptabel ikke-toksisk organisk eller uorganisk base i et forhold, der tilvejebringer en pH-værdi på ca. 3,5 til ca. 7 ved fortynding af blandingen med vand til en injicerbar koncentra- 15 tion.

4. En fysisk blanding ifølge krav 3, KENDETEGNET ved, at saltet og basen forefindes i forhold, der tilvejebringer en pH-værdi på ca. 4 til ca. 6 ved fortynding af blandingen med vand til en injicerbar koncentration.

5. En fysisk blanding ifølge krav 4, KENDETEGNET ved, at basen er L(+)lysin.

6. En fysisk blanding ifølge krav 4, KENDETEGNET ved, at basen er [_(+) arginin.

7. Fremgangsmåde til fremstilling af svovlsyreadditionssalt ifølge 25 krav 1, KENDETEGNET ved, at man (a) fremstiller en vandig opløsning af (i) mindst 1 malækvivalent svovlsyre og (i i) zwitterion svarende til dette salt, (b) fremkalder krystallisation af svovlsyreadditionssaltet, under den forudsætning at når zwitterionen er til stede i blandingen i en 30 koncentration på mindre end 25 mg/ml udføres krystallisationen i nærvær af et organisk opløsningsmiddel, og (c) isolerer det krystallinske svovlsyreadditionssalt.

8. Fremgangsmåde ifølge krav 7, KENDETEGNET ved, at trin (b) udføres i et vandigt medium, der ikke indeholder organisk opløsningsmiddel.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 8, KENDETEGNET ved, at zwitterionen under trin (a) anvendes i en sådan mængde, at den forefindes i blandingen i en koncentration, der er mindre end 500 mg/ml.

10. Fremgangsmåde ifølge krav 7, KENDETEGNET ved, at mængden af den DK 162053 B under trin (a) anvendte zwitterion er af en sådan størrelse, at koncentrationen af zwitterion i blandingen overstiger 25 mg/ml.

11. Fremgangsmåde ifølge krav 8, KENDETEGNET ved, at zwitterionen anvendes i trin (a) i en sådan mængde, at den forefindes i blandingen i 5 en koncentration fra ca. 100 mg/ml til ca. 200 mg/ml.

12. Krystallinsk svovlsyreadditionssalt ifølge krav 1.

13. Krystallinsk 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)-methoxyiminoacet-amido]-3-[(l-methyl-l“pyrrolidinium)]methyl]-3-cephem-4-carboxylat-sulfatsalt ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at det udviser røntgendif- 10 fraktionsmønster: d afstand (A)° Ι/Γ (%) 9,20 100 6,80 50 15 5,50 28 5,09 22 4,58 38 4,41 44 4,19 63 20 3,78 38 3,64 44 3,39 25 3,31 31 3,15 47 25

14. Krystallinsk orthophosphorsyreadditionssalt ifølge krav 1 og hydrater deraf.

15. Krystal 1 i nsk 7- [or- (2-ami nothi azol -4-yl) -or- (Z) -methoxyimi no-acetamido]-3-[(l-methyl-l-pyrrolidinium)methyl]“3-cephem-4-carboxylat- 30 phosphat ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at det udviser følgende røntgendiffraktionsmønster. 35 DK 162053B d ur 11,04 32 9,2 16 7,89 24 5 7,02 42 6,7 32 5,5 26 4,64 100 4,456 53 10 4,3 58 3,88 26 3,75 89 3,56 21 3,31 26 15 3,05 16 20 25