DK171124B1 - Fremgangsmåde til forbedring af tilvæksthastigheden og til forbedring af forholdet mellem kød og fedt hos kødproducerende dyr - Google Patents

Description

DK 171124 B1

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til forbedring af tilvæksthastigheden og til forbedring af forholdet mellem kød og fedt hos kødproducerende dyr.

Substitutionsprodukter af l-(amino-dihalogenphenyl)-5 -2-aminoethaner samt syreadditionssalte deraf er omtalt i US patentskrift nr. 3.536.712. Især er her omtalt fremgangsmåder til syntese af de nævnte forbindelser, der er nyttige til forøgelse af blodcirkulationen og som bronchodilatorer, analgetika, sedativer, antipyretika, antiflogistika og hoste-10 stillende midler til varmblodede dyr. Imidlertid er der kun anført eksempler på det analgetiske anvendelsesområde. Fremstillingen af andre beslægtede l-(amino-dihalogenphenyl)-2-aminoethanoler og disses derivater er omtalt i JP-A-77 83.619 (Chemical Abstracts £7, 201061r), DE offentliggørelsesskrif-15 ter nr. 2.804.625, 2.157.040 og 2.261.914, EP patentansøgning nr. 8.715 (1980) og NL patentansøgning nr. 73/03612. I disse ansøgninger omtales anvendelser såsom analgetika, broncholy-tisk, antiinflammatorisk, uterinspasmolytisk, j8-blokerende virkning, antispasmolytisk virkning på tværstribet muskula-20 tur, til tokologi, nedsættelse af blodtryk ved hjælp af perifer vasodilatering og mobilisering af kropsfedtstof og til behandling af allergier. Det er ikke anført eller antydet i nogle af disse publikationer, at forbindelserne er effektive vækstfremmende midler til kødproducerende dyr 25 såsom fjerkræ, kvæg og får, og der findes heller ingen angivelse af, at forbindelserne forbedrer foderudnyttelsen hos de nævnte kødproducerende dyr eller forholdet mellem kød (magert kød) og fedt.

I US patentskrift nr. 3.818.101 er der beskrevet en 30 fremgangsmåde til forøgelse af foderindtagelsen hos kødproducerende dyr udover mæthed ved indgivelse af hydroxyphen-ethanolaminer med én eller to hydroxylgrupper knyttet til phenylgruppen. Indgivelsen af disse forbindelser fører til en forøget væksthastighed, men de bevirker ingen formindskel-35 se af forholdet mellem fedt og magert kød, og i nogle tilfælde fremkalder de endog et forøget forhold mellem fedt og 2 DK 171124 B1 kød.

Formålet med opfindelsen er således at tilvejebringe en fremgangsmåde til forbedring af forholdet mellem kød og fedt hos kødproducerende dyr, idet dyrenes tilvæksthastighed 5 samtidig forøges.

Ifølge opfindelsen har det vist sig, at man ved at gå frem på den måde, at man til dyrene i udvalgte indgivelsesmængder indgiver en forbindelse med den almene formel • *-O-'Ψ-Cf-®2"3 (I) Γ "i «4 i hvilken X er hydrogen eller halogen, 15 Y er hydrogen, NRgRg eller NHCOR5, Z er halogen, CN, CF3, COORlf CONH2, methyl, methoxy eller NO2, er hydrogen eller Ci_4-alkyl, R2 er hydrogen, C^-g-alkyl eller C3_4-alkenyl, 20 R3 er hydrogen, C^.g-alkyl, C3„6-cycloalkyl, C3_4-alkenyl, phenyl, 2-hydroxyethyl, α,α-dimethylphenethyl eller benzyl, R4 er OH, ORg eller SR]^, R5 er hydrogen, ¢3^.4-alkyl, C1_4-alkoxy eller 25 >> <g$>-CH2°. «10 «10 r6 er C^g-alkyl, C2_5-alkanoyl, 3° fio eller vl_y"CH2 eller C3_4-alkenyl, r8 er hydrogen, C1_4-alkyl eller C3_4-alkenyl, r9 er hydrogen, C^g-alkyl, C4_6-cycloalkyl eller 35 C3_4-alkenyl, r10 er chlor, dichlor, methyl, dimethyl, methoxy.

3 DK 171124 B1 dimethoxy eller nitro, og Ru er Ci_6-alkyl, phenyl eller benzyl, forudsat, at når R3 er phenyl, 2-hydroxyethyl, α,α-dimethyl-phenethyl, C3_6-cycloalkyl eller benzyl, er R2 hydrogen, 5 og når R3 er 2-hydroxyethyl, er R4 hydroxyl, h° og når Rg er alkanoyl eller ^ΤΛ,-co, er R2 og R3 ikke hydrogen, undtagen når R3 er en alkyΙ-ΙΟ eller en substitueret alkylgruppe, der indeholder et tertiært carbonatom knyttet til nitrogen, og når Y er hydrogen, er X og Z halogen, og R2 er hydrogen, og R3 er isopropyl, 2-butyl eller tert.butyl, og når R8 er Ci_4-alkyl eller C3_4-alkenyl, er R9 hydrogen, Ci_4-alkyl eller C3_4-alkenyl, og mindst ét 15 af symbolerne X og Y er ikke hydrogen, og når Z ikke er halogen, er Y NRgRg eller NHCOR5, og når Y er hydrogen, NH2 eller NHCOR5, og Z er halogen, kan R4 ikke være OH eller 0R6, hvor Rg er C^.g-alkyl, eller racemiske blandinger, optiske aktive isomere eller ikke-toksiske farmakologisk 20 acceptable syreadditionssalte deraf, kan forbedre tilvæksthastigheden af kødproducerende dyr, f.eks. kyllinger, kalkuner, kaniner, får, svin, geder og kvæg, herunder kalve, idet foderudnyttelseseffektiviteten herved forbedres måleligt, og samtidig forbedre forholdet mellem magert kød og fedt.

25 Indgivelsen kan ske oralt eller parenteralt.

En foretrukken gruppe forbindelser til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen har den ovenfor viste formel I, hvor X er hydrogen eller halogen, Y er hydrogen eller NRgRg, Z er chlor, brom, CN eller CF3, R^ er hydrogen 30 eller methyl, R4 er OH, ORg eller SR33, er Rg er Ci-C4-alkyl eller C2-C5-alkanoyl, eller ikke-toksiske, farmakologisk acceptable syreadditionssalte deraf.

De mest foretrukne forbindelser til anvendelse ved ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er: 35 N-tert. -butyl-3,5-dichlor-/?-methoxy-4-methylaminophenethyl-amin, a- [ (tert.-butylamino)methyl]-3,5-dichlor-4-isopropyl- 4 DK 171124 B1 aminobenzylalkohol, 5-[2-(tert.-butylamino)-1-hydroxyethyl]--3-chloranthranilonitril, 5-[2-(tert.-butylamino)-1-hydroxy-ethyl]anthranilonitril, methyl-5-[2-(tert.-butylamino)-1-hy-droxyethyl]-3-chloranthranilat, 4-amino-N-tert.-butyl-3,5-di-5 chlor-0-(methylthio)phenethylamin, a-[(tert.-butylamino)- methyl]-3,5-dichlor-4-methylaminobenzylalkohol, a-[(tert.-butylamino) -methyl) -3,5-dichlor-4-dimethylaminobenzylalkohol, methyl-4-[2-(tert.-butylamino)-l-hydroxyethyl]-2,6-dichlor-carbanilat samt de ikke-toksiske, farmaceutisk acceptable 10 syreadditionssalte deraf.

Det har vist sig, at forbindelserne med formlen I nedenfor (hvor Y er hydrogen) kan fremstilles ved kondensation af et passende substitueret styrenoxid med en passende substitueret amin i nærværelse af et inaktivt opløsningsmid-15 del, såsom en lavere alkohol, ved eller i nærheden af dettes kogepunkt som vist nedenfor:

X

_ _ * 2 ethanol ^ ^R3 -a-^ z

X

™ <0^ΓΟΗ2<«3 1 2 3 4 5 6 hvor X og Z er halogen, og R3 har de ovenfor anførte be 2 tydninger, og Y er hydrogen. Således kan 3,5-dichlorstyrenoxid 3 omsættes med en ækvimolær mængde eller med molært overskud af 4 tert.-butylamin i ethanol ved tilbagesvaling i fra ca. 1 til 8 5 timer, eller indtil reaktionen er i det væsentlige afsluttet, 6 og den ønskede a-[(tert,-butylamino)methyl]-3,5-dichlorbenzyl-alkohol fås som vist nedenfor: DK 171124 Bl 5 0 Cl C1 + H2HC4H9-t EtOH </j^-CH-CarKH-C4S9-t 5 Cl C1

Det således opnåede produkt kan renses ved kendte metoder såsom chromatografi eller omkrystallisation af dets salte.

Det ovennævnte styrenoxid fremstilles ved at reducere det tilsvarende phenacylbromid med NaBH^ ved eller under 5°C 10 i nærværelse af en vandfri lavere alkohol såsom ethanol.

Phenacylbromid-mellemproduktet fremstilles ved bromering af en passede substitueret acetophenon med CuBr2 i nærværelse af chloroform og ethylacetat. Den ovennævnte reaktionsrække kan illustreres som vist nedenfor: 15

Cl Cl U V-C-CH,. CuBr 2_^ V-C-CH-Br \_J I J ~CHC1 ,/EtOAc ~ \-/ Il 20 V 0 Γ 0

NaBH. Π—\ 26 EtOH >

Cl

Alternativt kan en forbindelse med formlen I, hvor Y er hydrogen, fremstilles ud fra den tilsvarende forbindelse 30 med formlen I, hvor Y er amino, via en deamineringsreaktion ved at opløse aminen i 50-52% vandig hypophosphorsyre (H3P02). Opløsningen afkøles til under 10°C, og der sættes i løbet af et vist tidsrum en ækvimolær mængde eller et overskud af natriumnitrit til den vandige opløsning. Efter at tilsætningen 3g er afsluttet, opvarmes reaktionsblandingen til stuetemperatur og omrøres i yderligere et stykke tid. Derefter udvindes produktet fra reaktionsblandingen ved standardlaboratoriemetoder og renses om ønsket.

O

DK 171124 B1 6

Fremstillingen af 4-substituerede aminoacetophenoner, der er nødvendige til fremstillingen af 4-substituerede phenyl-ethanderivater, der nu har vist sig nyttige til opdræt af kød- producerende dyr, kan f.eks. foregå på nedenstående måde; 5 F—CO—CH3 + RgRgNH —=► R8R9N~C0"" CH3 (overskud) 10 Fluorudskiftningen udføres med overskud af amin i nærvær eller fravær af et opløsningsmiddel, og dersom et opløsningsmiddel er påkrævet, synes vand at være det bedst egnede. Med flygtige aminer udføres reaktionen i en lukket beholder, og i reglen er temperaturer på 50-100°C tilstrækkelige til fuldførelse af reak-1 tionen.

Chlorering og bromering af disse aminoacetophenoner kan ske med N-chlorsuccinimid og N-bramsucciniroid i toluen, chlorbenzen eller dichlorbenzen ved 90-100°C. Io-20 dering kan foretages med NaI/N,N-dichlorbenzensulfonamid eller iodmonochlorid i eddikesyre.

Ved omsætning af disse acetophenoner med brom i chloroform eller methylenchlorid kan der fremstilles de tilsvarende phenacylbromider. Disse phenacylbromider kan derefter 25 omsættes med I^R^N-aminer, og aminoketonerne reduceres med

NaBH^ eller NaCNBH^ ved gængs teknik som beskrevet i de ovenfor omtalte publikationer. Naturligvis kræver forbindelser, der indeholder grupper, der er reaktionsdygtige med halogen, såsom når Rg er alkenyl, andre metoder, der omtales 30 nedenfor.

35 7 DK 171124 B1

O

x x

RgRgN-^^-COCH3 -RgRgN—COCH2Br Z~ 2'

L

R2R3NI^ RgRgN—COCH2NR2R3

Z

10 X,

NaBH4^ I4R9N-^^-|H—CH2'"NR2R3

Z OH

15 hvor X og Z er hydrogen, chlor eller brom, og R2 og R3 er hydrogen, C^_^-alkyl eller C2_3-alkenyl.

Forbindelserne med formlen I, hvor Rg og Rg begge er forskellige fra hydrogen, kan også fremstilles som vist i neden-20 stående reaktionsskema: 25 1 35

O

DK 171124 B1 8

L

NHj—^ \-COCH3 + (R'CO)2o pyridins ^ 5 1 x R’-C-NH—— coch3

(RI,C0)2° . 1 BH3/THF

10 pyridip- s' jC

χ f

R’CO^. jU-v 2 OH

—V ')-COCH_ | R"CO-^ W 3 I [O] Γ t B8„h_<Q_c-ce3

BH3/THF p O

20 X * R8R9N-Q—9>-«3 I 1) se02 I iu 42) R2R3NH/NaBH4 25 i103 RgNH—W—CH-CH2-NR2R3

X Γ *H

R8R9N —-Q-1*^3 Z

Z 0 30 I 1) Se02 4 2) R2R3NH/NaBH4

X

R8R9N-0- ch-ch2-nk2r3

35 V OH

9 DK 171124 B1

De metoder, der benyttes i det ovenfor viste skema, er enten, omtalt i de ovennævnte publikationer eller er gængse metoder. Oxidation af alkoholen kan foretages med chromsyre (Jones' reagens), Mn02, pyridiniumchlorchromat 5 eller andre oxidationsmidler. Når X og Z er de BH3-reducer-bare grupper CN, COOR eller CONH2, fremstilles de egnede acetophenoner ved omdannelse af X og Z repræsenteret ved brom med CuCN/DMF ved 100-160“C ved en gængs metode efter reduktion af de acylerede aminoacetophenoner i det første 10 trin, efterfulgt af genoxidation i det andet trin af ovennævnte metode. De cyano-substituerede amino-acetophenoner omdannes derefter til deres tilsvarende ethanolaminer, som derefter omdannes til de ønskede estere, syrer og amider ved gængse metoder såsom R^OH/syre -+ estere, hydrolyse -♦ 15 syrer og delvis hydrolyse -* amider.

Desuden fremstilles forbindelser med nedenstående formel ved at lade de tilsvarende ethanolaminer reagere med en ækvivalent mængde eller et lille overskud af syreanhydri-derne med eller uden organiske baser såsom tertiære aminer 20 eller pyridin. Disse reaktioner udføres i inaktive opløsningsmidler 0 X <Rl2C->2° i \ t-^W-ch-ns2r3 ^ ΓI ^ 25 Γ fe °-C-R12

z O

(hvor R12 er C1-c4-alkyl eller u /)- ) y 30 10 såsom chlorerede carbonhydrider eller aromatiske opløsningsmidler ved 0-25°C. Omsætning af anhydridet ved hydroxylgrup-pen forløber godt, forudsat at R2 og R^ ikke er hydrogen, og 35 når R2 er hydrogen, er R^ en substituent indeholdende et tertiært carbonatom knyttet til nitrogen.

DK 171124 ΒΊ 10 o

Yderligere fremstilles forbindelser med formlen I, hvor Rg og R^ er hydrogen eller Cg_4-alkenyl, ved alkenyle-ring af 4-amino-3,5-disubstituerede phenacylbromider i dime-thylformamid (DMF) i nærværelse af en syreacceptor, såsom tri- 5 ethylamin eller natriumcarbonat, ved 70-100°C, hvilket giver mono- og dialkenylerede produkter, der fraskilles og omdannes til forbindelser med formlen I ved gængse metoder. Det følgende skema viser den ovennævnte almene metode: 10

Cl H2N~V-^““COCH2Br + CH2*CH“CH2Br C2H5^ 3^ > (overskud) ^MF ' C1 15

Cl Cl CH2*CH—CI^-NH-^^-COCH2Br + (CH2»CH=CH2) 2 N—\Γ\~-C0CH2Br ^ . Cl.

20 t—BuNH2/NaBH4 \l· Cl 25 CH2=CH—CH2-NH— \__)—CH·—CH2^-NH—C (CH3) 3 ώ 0H 1 2 3 4 5 6

Forbindelser med formlen I, hvor R4 er 0Rg og SR^, 2 hvor Rg og R^ har de ovenfor anførte betydninger, kan frem 3 stilles ved at omdanne alkoholen (R4-OH) med thionylchlorid 4 under et tæppe af inaktiv gas såsom nitrogen ved en temperatur 5 fra ca. 0 til 10°C og fortrinsvis fra 0 til 5°C i en reak- 6 tionstid, der er tilstrækkelig til i det væsentlige af fuldføre reaktionen. Den således fremstillede halogenforbindel- 11 DK 171124 B1 o se isoleres ved gængse metoder og omsættes derefter med en passende alkohol eller mercaptan under et tæppe af inaktiv gas, såsom nitrogen, ved en temperatur fra ca. 0 til 50°C.

Det således fremstillede produkt med formlen I isoleres der-5 efter ved standard-laboratoriemetoder og renses om ønsket.

Den ovennævnte reaktionsrækkefølge kan gengives som følger: V* 10 Y"W*]:H"CH2""SR2R3 S0C12 ^

Z 0H

•(HC1)o,1,2

X X

15 i-0-CH-CH2-HRjR3 R6°\ V

, 6 ·(Η01,1,2

20 X

X-O-ra-CHj-NRjRj Γ k, 25 '(HCl)^ hvor X, Y, Z, R2, / Rg og R^ har de ovenfor anførte betyd ninger.

3Q Disse ombytningsreaktioner kan også udføres ved hjælp af et overskud af alkoxid (RO ) eller mercaptid _ 6 (R11S ^ ^ et ^nalctivt opløsningsmiddel, såsom tetrahydrofu-ran, hvilket giver de ovennævnte estere og thioestere på lignende måde.

35 Alternativt kan en forbindelse med formlen I, hvor R4 er ORg, fremstilles ved at opløse den tilsvarende forbin- 12

O

DK 171124 B1 delse med formlen I, hvor R er OH, i den tilsvarende R-OH- 4 o -alkohol og mætte den således opnåede opløsning med tør HC1-gas. Derefter omrøres reaktionsblandingen ved stuetemperatur i tilstrækkelig tid til, at reaktionen er i det væsent-5 lige afsluttet, og derefter isoleres produktet ved hjælp af standard-laboratoriemetoder og renses, om ønsket. Denne reaktionsrækkefølge kan gengives som følger:

X X

° HJrW· -hc°W-> y-^_y~cs-cs2m2n3.hci \ 0H I °*x z * (i) 15 hvor X, Y, Z, R£, R^ og Rg har de ovenfor anførte betydninger.

I nærværende beskrivelse med krav betyder udtrykket α,α-dimethylphenethyl en struktur med følgende konfiguration: _- 9?3 20 CH-C- Når det ovennævnte phenylethanderivat eller dets syreadditionssalt indgives oralt i foderet, i reglen ca. 0,01-25 300 g pr. ton foder, er det i stand til at forøge vækstraten og forbedre den effektive foderudnyttelse hos de ovennævnte kødproducerende dyr.

Eftersom de effektive og foretrukne mængder i foderet af det aktive stof varierer noget fra dyreart til dyre-30 art, er mængderne for hver enkelt dyreart anført i tabel I nedenfor som mængde i gram pr. ton foder: 35

O

DK 171124 B1 13

Tabel I

Effektiv Foretrukken mængde i mængde i

Forbindelse foder q/t_foder, q/t_Dyr_ 5 Formlen I 0,1-200 1-100 Får, geder 0,01-50 0,1-10 Kyllinger, kaniner 0,01-50 0,1-10 Kalkuner _0,1-300_1-100_Kvæg, svin_ 10 Dyrefodersammensætninger, der giver den ønskede vækst forøgelse og foderudnyttelse hos de ovennævnte dyr, kan fremstilles ved at blande phenylethanderivatet eller et syreadditionssalt deraf eller et dyrefodertilskud, der indeholder den nævnte forbindelse, med en tilstrækkelig mængde af et pas-15 sende dyrefoder, så at der fås den Ønskede mængde aktiv forbindelse i foderet.

Dyrefodertilskud kan fremstilles ved at blande ca. 10-75 vægtprocent af phenylethanderivatet eller et syreadditionssalt deraf med ca. 90-25 vægtprocent af et passende bære-20 stof eller fortyndingsmiddel. Bærestoffer, der er egnede til af komplettere fodertilskudssammensætningerne, omfatter følgende: lucernemel, sojabønnemel, bomuldsfrøoliemel, hørfrøo liemel/natriumchlorid, majsmel, sukkerrørmelasse, urinstof, benmel, majskolbemel og lignende. Bærestoffet fremmer 25 en homogen fordeling af det aktive stof i det endelige foder, hvori tilskudet blandes. Det har således en vigtig funktion ved at sørge for en rigtig fordeling af aktivt stof i hele foderet.

Hvis tilskudet anvendes som overfladetilsætning til 30 foderet, hjælper det med til at sikre en homogen fordeling af det aktive materiale i hele det øverste lag af det tilberedte foder.

Til parenteral indgivelse kan phenylethanderivatet fremstilles i form af en pasta eller pellet og indgives som 35 implantat, i reglen under hovedhuden eller øret på dyret, hvis vækstrate eller effektive foderudnyttelse man søger at forbedre.

14 DK 171124 B1 I praksis indebærer parenteral indgivelse i reglen injektion af en tilstrækkelig mængde af ovennævnte phe-nylethanderivat til at dyret får 0,001-50 mg/kg legemsvægt aktivt stof. Det foretrukne dosisinterval for kvæg ligger mel-5 lem 0,001 og 25 mg/kg legemsvægt af det aktive phenylethande-rivat. Det foretrukne dosisinterval for phenylethanderivat til fjerkræ er ca. 0,001-35 mg/kg legemsvægt af dyret, og det foretrukne dosisinterval for phenylethanderivat til får og geder er 0,001 til 40 mg/kg legemsvægt af dyret. Det foretrukne dosis-10 interval for kaniner er 0,001 til 35 mg/kg legemsvægt af dyret.

Pastapræparater kan fremstilles ved at dispergere det aktive phenylethanderivat i en farmaceutisk acceptabel olie såsom jordnøddeolie, sesamolie, majsolie eller lignende.

Pellets med et effektivt indhold af phenylethanderi-15 vat kan fremstilles ved at blande ovennævnte aktive stof med et fortyndingsmiddel såsom carbowax, bionedbrydelige polymere, carnaubavoks eller lignende. Et smøremiddel såsom magnesium-stearat eller calciumstearat kan om ønsket tilsættes for at lette pelletteringsprocessen.

20 Det er indlysende, at der kan indgives mere end én pellet til et dyr for at opnå den ønskede dosis, der kan give en forøget vækstrate og/eller forbedret effektiv foderudnyttelse hos dyret. Det har desuden vist sig, at implantater derudover også kan indføres med mellemrum i behandlings-25 perioden for at opretholde en korrekt præparatfrigivelseshastighed i dyrets krop.

Ud over forbedret vækstforøgelse og effektiv foderudnyttelse hos kødproducerende dyr har forbindelserne anvendt ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse den 30 yderligere fordel, at de ved udvalgte indgivelsesniveauer forøger afsætningen af magert kød (dvs. muskler eller protein) i de nævnte dyr og forbedrer kødkroppens kvalitet ved at forøge forholdet mellem magert kød og fedt hos dyr, der får disse forbindelser. Denne biologiske reaktion er en 35 væsentlig fordel for opdrættere af fjerkræ, kvæg og svin, får og geder, eftersom indgivelse af forbindelserne i ud- 15 DK 171124 B1 valgte mængder giver magrere dyr, der berettiger til bonuspriser hos kødindustrien.

Disse og andre fordele ved den foreliggende opfindelse vil fremgå af de nedenfor anførte eksempler.

5

Eksempel 1

Bedømmelse af prøveforbindelser som vækstfremmende midler til dyr CFI hunmus fra Carworth Farms modtages, når de er 10 6 uger gamle. De opbevares 10 i et bur i luftconditionerede rum (22-24°C) med automatisk reguleret lys, 14 timer tændt og 10 timer slukket. Grundkosten, der anvendes til disse undersøgelser, er "Purina Laboratory Chow" (se beskrivelsen nedenfor), hvilket gives ad libitum. Vand gives ad libitum.

15 13 dage efter ankomsten vejes musene i grupper på 10 og udpeges vilkårligt til forskellige behandlinger. Koncentrationen af de forskellige forbindelser i kosten er anført i de følgende tabeller. 12 dage senere vejes musene i-gen, og eksperimentet afsluttes. Prøvedata findes i tabel II 20 nedenfor, hvor dataene er anført som procentvis mervækst i forhold til kontroldyrene. Der anvendes nye kontroldyr til hver prøve. Nedenstående findes sammensætningen af den kost, hvortil de vækstfremmende forbindelser sættes. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

Kost 2

Garanteret analyse 3 Råprotein ikke under 23,0% 4 Råfedtstof ikke under 4,5% 5 Råfiber ikke over 6,0% 6

Aske ikke mere end 9,0% 7

Bestanddele 8 Kød- og benmel, tørret skummetmælk, hvedekimmel, 9 fiskemel, dyrelevermel, tørret roeaffald, malet ekstruderet 10 majs, malet havregrut, sojabønnemel, dehydratiseret lucerne- 11 mel, sukkerrørmelasse, dyrefedt konserveret med BHA, tilskud af vitamin calciumpantothenat, cholinchlorid, folinsyre, riboflavintilskud, tørret bryggerigær, thiamin, niacin, til-

O

DK 171124 B1 16 skud af Z-vitamin, D-aktiveret plantesterol, tilskud af E-vi-tamin, calciumcarbonat, cicalciumphosphat, ioderet salt, fer-riammoniumcitrat, jernoxid, manganoxid, koboltcarbonat, kobberoxid og zinkoxid.

5

Tabel II

Bedømmelse af prøveforbindelser som vækstfremmende midler til dyr % mervækst

Dosering Tilvækst i.f.t. kon- 10 Forbindelse_(ppm)_(gram) troldyr_ a- ((Tertr-butylamino) methyl] -3,5-dichlor-4- 200 16,0 0 -diiiethylaminobenzylalkohol 50 21,9 + 36,9 et- [ (Tert-butylamino) methyl] -3,5-dichlor-4- 200 19,4 +21,3 -methylaminobenzylalkohol 50 24,4 + 52,5 15 Methyl-4- [2- (tert-butylamino)-1-hydroxye- 50 27,9 + 40,8 thyl]-2,6-dichlarcarbanilat 5- [ 2- (Tertr-butylamino) - 1-hydroxyethy 1] -3- 200 27,3 +90,9 -chlor anthrani lonitr i1 50 26,2 +83,2 20 a- [ (Tert-butylamino) methyl] -3,5-dichlor-4- 200 24,6 +72,0 -iscprqpylamincbenzylalkohol 50 24,3 +69,9 12 28,0 + 95,8 3 27,3 + 90,8 5- [2- (Tert-butylamino) -1-hydroxyethyl] an- 200 29,6 +79,4 25 thranilonitril 50 29,9 + 81,2

Methyl-5- [2- (tert-butylamino) -1-hydroxye- 200 24,4 +47,9 thyl] -3-chloranthranilat-hydrochlorid 50 20,1 +21,8 4-AninD-N-tert-butylamino-3,5-dichlar-8- 200 25,4 +55,8 - (methylthio) phenetbylamin-hydrochlorid 50 25,3 + 55,2 30 3-Brom- 5- [ 2- (tert-butylamino) -1-hydroxy- 200 16,1 + 50,5 ethyl] -anthrani loni tri1 50 24,2 +126,2 4-Amino-a- [ (tert-butylamino)methyl]-3-me- 100 20,8 +94,5 thylbenzylalkohol 4-(Butylamino)-a-[(tert-butylamino)methyl]- 200 19,3 +80,4 35 -3,5-dichlorbenzylalkohol 50 19,4 +81,3

O

DK 171124 B1 17

Tabel II (forts.) % mervækst

Dosering Tilvækst i.f.t. kon-

For bindel se_(ppm)_(gram) troldyr_ 5 2-Amino-3-brcin-5- [2- (ter tbuty lamino)-1- 200 17,4 +62,6 -hydroxyethyl] benzamid 50 19,8 + 85,0 4-Amino-a- [ (ter t-butylanino)ne thyl] -3,5- 200 14,6 +36,4 -di chlorbenzylalkchol-acetat(ester) 50 19,1 +78,5 3-Brcm-Er- [2- (tert-butylamLnoJ-l-hydroxye- 200 18,2 +70,1 10 thyl] anthranilinsyre 50 13,6 + 27,1 N-tert-butyl-3,5-dichloi>-8-inethoxy-4-ine- 200 18,0 + 68,2 thylatmjxi^enethylamin-hydrochlorid 50 23,1 +115,9 a- [ (Tert-butylamino) methyl] -3,5-dichlor-4- 200 19,6 +83,2 - (hexylaitiino)benzylalkchol 50 20,7 + 93,5 15 4-åmino-a-[(tert-buty lamino)methyl]-3,5-di- 200 14,4 + 34,6 chlorbenzylalkoholacetat(ester), acetat 50 18,7 + 74,8 (Allyloxy) -4-amino-N-tert-buty 1-3,5-di- 200 21,5 +100,9 chlorphenethylamin 50 19,6 + 83,2 20 4- (Ally lamino) -a- [ (tert-bu ty lamino) methyl] - 200 20,2 + 88,8 -3,5-dichlorbenzy lalkohol 50 21,9 +104,7 4[3— (Tert-buty lamino) -1-hydroxyethyl] - 200 25,8 +141,1 -2' ,6 '-dichloraætanilidacetat(ester)-hy- 50 16,2 + 51,4 drochlorid 25 a- [ (Tert-buty lamino) methyl] -3,5-dichlor-4- 100 23,0 +115,0 -cyclohexylaminobenzylalkohol a- [ (Tert-butylamino)methyl] -4-amino-3- 2 00 16,5 + 54,2 -chlor- 5^methy Ibenzy lalkchol-hydrochlorld 5 0_19,7_+ 84,1 1 2 3 4 5 6

Eksempel 2 2

Antilipogen bedømmelse af prøveforbindelser - undersøgelse af 3 mus 4 CFI hunmus, 55 dage gamle, vejes i grupper på 10 og 5 indsættes i bure, så at vægtfofskellen mellem burene bliver så 6 lille som muligt. Burene udpeges vilkårligt til behandlingerne.

O

18 DK 171124 B1

Hver behandling afprøves i 3 gentagne forsøg, dvs. i 3 bure med 10 mus i hvert. Der er lo bure med 10 kontrolmus i hvert. Præparaterne blandes i kosten i den anførte dosis.

Føde og vand tilbydes ad libitum i en prøveperiode på 12 5 dage. Fødespildet opsamles under prøveperioden. Ved slutningen af prøveperioden vejes den opsamlede føde, og det gennemsnitlige fødeforbrug pr. bur med 10 mus bestemmes for hver behandling. Musene vejes som en gruppe på 10, og vægtforøgelsen bestemmes. Musene aflives ved at få drejet halsen 10 om. Den højre uterine fedtpude på hver mus fjernes. Fedtpuderne for hvert bur på 10 mus vejes som en enhed.

De opnåede data er anført i tabel III. Dataene er angivet som procent reduktion af fedtpudevægten. Reduktion af fedtpudevægten hos dyrene er i reglen tegn på reduk-15 tion af de behandlede dyrs totale kropsfedt.

Tabel III

Antilipogen bedømmelse af prøveforbindelser - undersøgelse af mus 20 % redukt. af

Dosering fedtpudevægt

Forbindelse_(ppm) vs. kontroldyr a-[(Tert-butylamino)methyl]-3,5-dichlor-4- 200 -46,1 -dimethylaminobenzylalkohol 50 -14,8 25 Methyl-4-[2-(tert-butylamino)-l-hydroxye- 50 -23,5 thyl]-2,6-dichlorcarbanilat a[(Tert-butylamino)-methyl]-3,5-dichlor- 200 -51,0 4- methylaminobenzylalkohol ^0 -41,9 30 5- [2-Tert-butylamino-l-hydroxyethyl]-3-chlor- 200 -45,9 anthranilonitril 50 -10,4 a-[(Tert-butylamino)methyl]-3,5-dichlor-4-i- 200 -52,5 sopropylaminobenzylalkohol 50 -22,6 35 12-6,3 3 -25,5 DK 171124 B1 19

O

Tabel III (forts.) % redukt. af Dosering fedtpudevægt

Forbindelse_(ppm) vs kontroldyr 5 Methyl-5-[2-(tert-butylamino)-1-hydroxyethyl]- 200 - 5,9 -3-chloranthranilat-hydrochlorid 50 - 5,8 5- [2- (Tert-butylamino)-1-hydroxyethyl] anthra- 200 -41,5 nilonitril 50 -10,3 4- [Amino-N-tert-buty 1-3,5-dichlor-f3- (methyl- 200 -28,9 10 thio)-phenethylamin-hydrochlorid 50 -16,2

Eksempel 3 N-Tert-buty 1-3,5-dichlor-3-methoxy-3-methylaminophenethylamin-15 -hydrochlorid

En prøve på 7 g a-[(tert-butylamino)methyl]-3,5--dichlor-4-methylaminobenzylalkohol sættes til 70 ml thionyl-chlorid under N2~atmosfære, og blandingen omrøres i to timer. Overskydende thionylchlorid fjernes i vakuum, og den glasag-20 tige remanens opløses i 50 ml methanol. Opløsningen omrøres i 1,5 time og inddampes til tørhed. Remanensen opløses i 100 ml H20 og ekstraheres med 2 x 50 ml CH2C12· Det vandige lag neutraliseres med fast NaHCO^ og ekstraheres med CH2C12.

Ekstrakten tørres (MgSO.) og inddampes til tørhed i vakuum, 25 ^ hvilket giver 4,1 g halvfast stof, som efter triturering med ethylether giver 1,07 g af den i overskriften nævnte forbindelse, smeltepunkt 220-221°C. På lignende måde fremstilles de følgende ethere. 1 35 0 DK 171124 B1 20 CH-NH—(f V—CH—CH- —NH—*Bu—t 3 W I 2 5 Cl

Alkohol______ R__

Ethanol ^2** 5 1- Propanol l-C^H^ 2- Propanol 10 1-Butanol 1-C^Hg 2-Butanol 2-C^Hg 1- Hexanol n-CgH^

Allylalkohol Allyl 4-Methoxybenzylalkohol 4-Methoxybenzyl 15 4-Chlorbenzylalkohol 4-Chlorbenzyl 4-Nitrobenzylalkohol 4-Nitrobenzyl 4-Methylbenzylalkohol 4-Methylbenzyl 3.4- Dimethylbenzylalkohol 3,4-Dimethylbenzy1 3.4- Dimethoxybenzylalkohol 3,4-Dimethoxybenzyl 20 3,4-Dichlorbenzylalkohol 3,4-D.ichlorbenzen 2- Chlorbenzylalkohol 2-Chlorbenzyl 2-Me thylbenzylalkoho1 2-Methylbenzy1

Eksempel 4 25 På den i eksempel 3 beskrevne måde fremstilles de følgende ethere ved at anvende de tilsvarende alkoholer i stedet for methanol.

Cl 1 35 H2”-Q—Y8—”2—C <Cg3> 3

Cl 011 DK 171124 B1 21 o

R_Smeltepunkt °C

Allyl 57- 59 4-Methoxybenzyl 5 4-Chlorbenzyl 4-Nitrobenzyl 4-Methylbenzyl 3.4- Dimethylbenzyl 3.4- Dimethoxybenzyl 10 3,4-DAchlorbenzy] 4-Chlorphenyl 4-Methoxyphenyl 4-Methylphenyl 2-Chlorphenyl 15 4-Nitrophenyl

Eksempel 5 N-tert-Butyl-3-chlor-5-cyano-b-methoxy-4-aminophenethylamin- -hydrochlorid 20 På den i eksempel 3 beskrevne måde omdannes oc-[(tert- butylamino)methyl]-4-amino-3-chlor-5-cyanobenzylalkohol til den i overskriften nævnte forbindelse, og på lignende måde fremstilles tillige: 25 Ar-CH-CH~-NH-R-HCl

Ar_R_ 4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl- t-butyl 30 phenyl 4-Ami no-3-chlor-5-tr i fluormethyl- i-propy1 phenyl 35 DK 171124 B1 22

Ar_R__ 4-Amino-3-chlor-5-H2N-CO-phenyl t-butyl 4-Amino-3-chlor-5-HO-CO-phenyl t-butyl 4-Amino-3-chlor-5-methylphenyl t-butyl 5 4-Amino-3-chlor-5-methoxyphenyl t-butyl 4-Amino-3-chlor-5-nitrophenyl t-butyl 4-Amino-3-chlor-5-CH2C)-CO-phenyl t-butyl 4-Amino-3-cyanophenyl t-butyl 10

Eksempel 6 4-Amino-a-[(tert-butylamino)methyl]-3,5-dichlorbenzylalkohol- -acetat

En blanding indeholdende 1 g 4-amino-a-[(tert-bu-15 tylamino)methyl]-3,5-dichlorbenzylalkohol i 35 ml CH2C12 omrøres ved 10-15°C, og der tilsættes dråbevis 0,37 g Ac20 og 0,5 ml Et.jN. Derefter får reaktionsblandingen lov at varme op til stuetemperatur, og reaktionen følges ved tyndtlags-chromatografi til afslutningen. Blandingen inddampes til 20 tørhed i vakuum, og den gule viskose væske (1,5 g) omrøres med 50 ml ethylether, hvilket giver 0,84 g gult fast stof, smeltepunkt 128-131°C. Dette materiale viser sig ved kernemagnetisk resonansspektroskopi og ved neutralisering med alkali at være eddikesyresaltet. Ved at behandle 100 mg af 25 dette salt i 30 ml CH2C12 med 30 ml 10%'s vandig NaOH neutraliseres saltet. CH2Cl2-Opløsningen tørres (MgSC>4) og inddampes til tørhed i vakuum, hvilket giver den i overskriften nævnte viskose forbindelse.

Analyse: 30 Beregnet for C^4H2q02N2C12: C 52,67, H 6,32, N 8,78 Fundet: C 52,38, H 6,51, N 8,88.

På samme måde får propionsyreanhydrid og smørsyrean-hydrid lov at reagere med henholdsvis 4-amino-a-[(tert.-bu-tylamino)methyl]-3,5-dichlorbenzylalkohol (A) og a-[(tert.-3 5 -butylamino)methyl]-3,5-dichlor-4-methylaminobenzylalkohol (B), hvilket giver propionatet og butyratet af A og B.

DK 171124 B1 23

O

Eksempel 7

De følgende estere fremstilles ved hjælp af den i eksempel 6 beskrevne metode ved anvendelse af det passende syreanhydrid. Cl 5 R8RgN-^~A-CH-CH2-NH-C(CH3)3 , O-C-R,

Cl " x ^χ o 10 Rg Rg Ri2 Ή CH3 ch3 H C2H5 CH3 H n-C3H7 CH3 15 H 2-C3H7 CH3 H allyl CH3 ch3 ch3 ch3 H CH3 C2H5 H CH30-C0- CH3 20 H CH3 n-C4Hg C2H5 C2H5 CH3 n-C4Hg n-C4Hg CH3 25 1 35

O

DK 171124 B1 24

Ar-CB—CH2—NH—C (CH3) 3

o—CO I

R12 5

Ar_R12 3,5-Dichlorphenyl 2-C-jH.j 4-Amino-3-chlor-5-cyanophenyl CH3 10 4-Amimo-3-chlor-5-trifluormethylphenyl CH3 4-Amino-3-chlor-5-H2NCO-phenyl CH3 4-Amino-3-chlor-5-HOOC-phenyl CH^ 4-Amino-3-chlor-5-methylpheny1 CH^ 4-Amino-3-brom-5-cyanopheny1 CH^ 15 4-Amino-3-chlor-5-CH3OCO-phenyl CH3 4-Amino-3-cyanophenyl t-C^Hg

Eksempel 8 20 4-Acetamido-a-[(tert-butylamino)methyl]-3-5-dlchlorbenzylalko- holacetat I 15 ml CH2CI2 suspenderes 1,57 g 4-acetamido-3" -[(tert-butylamino)methyl]-3,5-dichlorbenzylalkohol og omrøres, medens der tilsættes 1,2 g triethylamin i 30 ml CHjC^ 25 efterfulgt af 0,7 g eddikesyreanhydrid i 15 ml CI^C^. Blandingen omrøres i 20 timer og vaskes derefter med 100 ml 10%'s NaOH-opløsning. Den organiske fase fraskilles, tørres, (Na2SO^) og inddampes til tørhed i vakuum. Remanensen opløses i 30 ml ethanol, og der tilsættes spor af I^O, efterfulgt af 10%'s HCl 30 til syrning. Blandingen inddampes til tørhed i vakuum, og remanensen krystalliseres ud fra acetone/hexan (30 ml/5 ml).

Dette giver 1,35 g af den i overskriften nævnte forbindelse, smeltepunkt 254-257°C, under sønderdeling.

På lignende måde fremstilles ved at erstatte eddi-35 kesyreanhydrid med propionsyreanhydrid, smørsyreanhydrid og pivalinsyreanhydrid,det tilsvarende propionat, butyrat og pivalat.

DK 171124 B1 25

O

Eksempel 9 g-[(tert-Butylamino)methyl]-3,5-dichlor-4-dimethylaminobenzyl- alkohol

En blanding indeholdende 50 g p-fluoracetophenon og 5 150 ml 40%'s vandig dimethylamin opvarmes i en trykflaske ved 90-100°C. Efter to timers forløb dannes der en bleggul olie. Blandingen afkøles, og olien størkner. Det faste stof opsamles og vaskes godt med H20, hvilket giver 54,93 g p-dimethyl-aminoacetophenon, smeltepunkt 101-103°C efter heptanomkrystal-10 lisation. En prøve på 72 g af denne acetophenon opvarmes med 129 g N-chlorsuccinimid i 700 ml toluen ved tilbagesvalingstemperatur og holdes ved denne temperatur i 35 minutter. Blandingen afkøles og filtreres. Filterkagen vaskes med 200 ml toluen, og filtratet og vaskeopløsningen inddampes til tør-15 hed i vakuum, hvilket giver 66 g olie. Denne olie chromato-graferes på Si02 med 4 0%'s hexan/CH2Cl2, hvilket giver 38,9 g 3,5-dichlor-4-dimethylaminoacetophenon som en gul olie. 5,22g af denne olie tilsættes portionsvis til 2,75 g Se02 i 20 ml dioxan og 0,7 ml H20 ved 55-60°C. Denne blanding opvarmes 20 ved tilbagesvaling i 4,5 timer, afkøles og filtreres gennem kiseljord. Filterkagen vaskes med 20 ml dioxan. Dioxanop-løsningen afkøles til 15°C, og der tilsættes dråbevis 2,77 g t-butylamin, hvilket giver et gyldenbrunt bundfald. Efter omrøring i 15 minutter ved stuetemperatur fortyndes blandin-25 gen med 200 ml ethanol, afkøles til 5°C, hvorefter der tilsættes 7 g NaBH^ portionsvis. Efter 15 timers forløb behandles blandingen med 300-400 g is og 200 ml H20 på under 10°C. Blandingen omrøres for at opløse alle faste stoffer og ekstra-heres med 300 ml CH2C12. CH2Cl2-laget vaskes med 100 ml H20, 30 tørres (MgSO^) og inddampes til tørhed i vakuum, hvilket giver 5,6 g orangefarvet olie. Denne olie opløses i ethylether, affarves med aktiveret kul og inddampes til 15 ml. Ved afkøling fås der krystaller. Den i overskriften nævnte forbindelse opsamles som hvide krystaller, smeltepunkt 96-99°C.

35

O

DK 171124 B1 26

De følgende forbindelser fremstilles ved den samme fremgangsmåde:

Cl 5 RgRgN-V CH-CBj-NH-C (CHj) j

Cl 08

Rg Rg smp. °C

10 H 1_C4H9 olie H l-CgH13 62-64 H C2H5 209 (HCl-salt) H cyclopentyl olie 15 H cyclohexyl 194-198 (HCl-salt)

Eksempel 10 q-[(tert-butylamino)methyl]-3 ,5-dichlor-4-methylaminobenzyl— 20 alkohol p-Methylaminoacetophenon fremstilles og chloreres som beskrevet i eksempel 19/ hvilket giver 3,5-dichlor-4-me-thylaminoacetophenon. Denne keton (18 g) i 200 ml CHCl^ omrøres , og der tilsættes dråbevis 4,65 ml Br2 i 50 ml CHCl^-25 Efter at tilsætningen er afsluttet, omrøres blandingen i y-derligere 20 minutter og opvarmes ved tiIbagesvali'ngstemperatur i 25 minutter. Blandingen afkøles, der tilsættes 100 ml H20, og mættet Na2C03-opløsning forsigtigt, indtil blandingen er neutral. CHCl^-laget skilles fra, og det vandige 30 lag ekstraheres yderligere med 100 ml CH2C19. De kombinerede ekstrakter tørres (MgSO^) og inddampes til tørhed, hvilket giver 16,3 g af phenacylbromidet. Dette materiale (16 g) i 80 ml EtOH omrøres ved 12-15°C, og der tilsættes dråbevis 40 ml t-butylamin. Efter at tilsætningen er afsluttet, omrøres bian- . 35 dingen i 10 minutter ved 12-15°C og afkøles derefter til 5°C, og der tilsættes forsigtigt 4 g NaBH^. Efter omrøring i 0,5

O

DK 171124 B1 27 time får.blandingen lov til at varme op til stuetemperatur, og omrøringen fortsættes i 0,75 time. Blandingen hældes på 300 ml is under omrøring, og den fremkomne blanding ekstrahe-res med 300 ml CI^C^· Cl^C^-ekstrakten tørres (MgSO^) og 5 inddampes til tørhed i vakuum, hvilket giver en gul olie.

Triturering af denne remanens med ethylether giver 7,45 g af den i overskriften nævnte forbindelse, der smelter ved 98-100°C efter omkrystallisation ud fra ethylether.

10 Eksempel 11 5-[2-(Tert-butylamino)-1-hydroxyethyl]anthanilonitril

En blanding indeholdende 48,86 g p-aminoacetophenon i 490 ml toluen omrøres, medens der portionsvis i løbet af 0,5 time tilsættes 64,5 g N-bromsuccinimid ved en temperatur 15 under 40°C. Efter 15 minutters forløb vaskes blandingen med 4 x 100 ml H2O. Opløsningen tørres (MgSO^) og inddampes til tørhed, hvilket giver 70,53 g 4-amino-3-bromacetophenon, smeltepunkt 59-62°C. 35 g af dette materiale i 180 ml tør dime- thulformamid omrøres og opvarmes ved tilbagesvaling med 17,57 — 20

Cu2(CN>2 i 6 timer under ^-atmosfære. Derefter tilsættes 180 ml FeCl3/HCl-opløsning (40 g FeCl^.6H2O/10 ml koncentreret HC1/60 ml H2o)og blandingen opvarmes i 20 minutter ved 60-70°C og hældes i 350 ml H20. Den vandige blanding ekstra-heres med CH-C1-, og ekstrakterne vaskes med H^O, mættet 25 Δ Δ i

NaHCO^-opløsning og H20. CH2Cl2-opløsningen inddampes til tørhed i vakuum, og remanensen omkrystalliseres ud fra 95%'s EtOH, hvilket giver 14,25 g 4-amino-3-cyanoacetophenon, smeltepunkt 155-159°C. 4,8 g af dette produkt i 100 ml EtOAc og 30 100 ml CHCl^ indeholdende 13,32 g CuBr2 opvarmes ved tilbage svalingstemperatur i 20 minutter. Blandingen opvarmes yderligere, efter at der er tilsat 20 ml EtOH, og filtreres, medens den endnu er varm. Filterkagen vaskes med 50 ml varm 20%'s MeOH/CH2Cl2, og de forenede organiske opløsninger inddampes 35 til tørhed i vakuum. Remanensen omrøres i 25 ml CH2C12, og det faste stof opsamles og vaskes med CH^^/ hvilket giver

O

DK 171124 B1 28 8,08 g phenacylbromid. Dette materiale tilsættes til 50 ml t-BuNH2 i 100 ml EtOH ved 5°C under N2~atmosfære. Efter 10 minutters omrøring får blandingen lov at varme op til 30°C hvilket giver en opløsning. Denne opløsning afkøles til 10°C, 5 og der tilsættes 4 g NaBH^ portionsvis. Efter 45 minutter får blandingen lov at varme op (42°C) og holdes ved 20°C, indtil varmen fra den eksoterme reaktion aftager. Derefter inddampes blandingen til tørhed, og remanensen vaskes med H20. Remanensen tørres og behandles med 200 ml kogende MeOH, og 10 den varme MeOH-opløsning filtreres. Filterkagen vaskes yderligere med varm MeOH, og de forenede filtrater inddampes, hvilket giver krystaller. Dette faste stof omkrystalliseres ud fra MeOH/2-PrOH, hvilket giver 2,08 mg af den i overskriften nævnte forbindelse, smeltepunkt 184-186°C.

15 På lignende måde fremstilles følgende beslægtede forbindelser, idet man går ud fra den rigtige acetophenon.

X

20 RgRgU-/ y-CH-CH2-NHR3

L 0H

25 Rg _Rg_R3_X SmP·_

Η H 2~C3H7 H 155-159°C

H CH^ t-butyl H IR-spektrum

CH3 CH3 t-butyl H

30 H t-butyl H

H n-C^^ t-butyl H

H 2-C3H7 t-butyl H

H n-C^Hg t-butyl H

H CH3 2_C3H7 H

35 ^2H5 ^2H5 t-butyl Cl

n"C3H7 n_C3H7 t-butyl Cl 168-168,5°C

t-butyl Cl IR-spektrum DK 171124 Bl 29

O

Eksempel 12 3-Chlor-5-[2-(tert-butylamino)-1-hydroxyethyl]anthranlIon1tril I 100 ml toluen opvarmes 5 g 4-amino-3-cyanoacetophe-non ved tilbagesvalings temperatur i 20 minutter med 4,2 g N-5 -chlorsuccinimid. Blandingen afkøles og filtreres. Filtratet opvarmes yderligere ved tilbagesvalingstemperatur i 2 timer. Bundfaldet opsamles og vaskes med H^O. Det tilbageblevne faste stof behandles med 0,75 ml 6^/14 ml CHClj, der er sat til 75 ml CHCl^ og 4,9 ml EtOH. Blandingen inddampes til 10 tørhed, og remanensen opslaonmes med Cl^C^r opsamles og vaskes med CHjC^, hvilket giver 2,84 g phenacylbromid. Dette materiale får lov at reagere med t-BuNI^ og reduceres med NaBH^ ved hjælp af den i eksempel 18 beskrevne metode, hvilket giver den i overskriften nævnte forbindelse, smeltepunkt 128-138°C.

15 På lignende måde fremstilles følgende forbindelser:

Cl

L

R.R.N—V —CH-CH,-NH-R, 20 8 9 \-/ | 2 3

dT bH

26 J4_^9_^3_ Η H 2-propyl H CH^ t-butyl CH^ CH^ t-butyl H t-butyl 30 ^ ^ H 2-propyl t-butyl H n-butyl t-butyl 35 0 DK 171124 B1 30

Eksempel 13 5-[2-(tert-butylamino)-l-hydroxyethyl]-3-chloranthranilinsyre-methylester-hydrochlorid

En blanding indeholdende 1,36 g 5-[2-(tert-butylami-5 no)-1-hydroxyethyl]-3-chloranthranilonitril i 21 ml 50%'s van dig NaOH og 21 ml EtOH omrøres under N2 i 0,5 time. Blandingen inddampes for at fjerne EtOH og syrnes til pH 3 og inddampes yderligere til tørhed. Remanensen behandles flere gange med MeOH og inddampes til tørhed. Det faste stof behandles 10 derefter med en opløsning fremstillet af 40 ml MeOH og 2 ml acetylchlorid. Efter henstand natten over filtreres blandingen, og filtratet inddampes til tørhed. Filterkagen vaskes også med MeOH og tilsættes til det forudgående filtrat. Remanensen opløses i acetone, filtreres og inddampes til tørhed. 15 Det faste stof tritureres med Et20 og filtreres, hvilket giver 1,49 g af den i overskriften nævnte forbindelse, smeltepunkt 95-115°C.

På lignende måde fremstilles følgende beslægtede estere: 20 Cl R8R9N-(/y—eH-CH2-NH-R3 COOCH3 25 R8_^9_^3_ Η H 2-propyl H CH3 t-butyl 30 CH3 CH3 t-butyl H C2H5 t-butyl H n-propyl t-butyl H n-butyl t-butyl H allyl t-butyl 35 C2H5 C2H5 t-butyl n-C4H9 n-C4H9 t-butyl n-C3H7 n_C3H7 t-butyl DK 171124 B1 31

O

Eksempel 14 2-Åmino-3-brom-5- [2- (tert-butylamlno) -1-hydroxyethyl] -benzamid En blanding indeholdende 1,02 g 3-brom-5-[2-(tert--butylamino)-1-hydroxyethyl] anthranilonitril i 25 ml H20, 5 5 ml 50%'s NaOH og 30 ml EtOH omrøres og opvarmes ved 55-65°C under N2~atmosfære i 1,25 time. Blandingen inddampes for at fjerne EtOH og ekstraheres med CHC1.J. CHCl^-ekstrakten vaskes med 25 ml 2%'s NaOH, tørres (MgSO^) og inddampes til tørhed, hvilket giver 0,74 g. Dette faste stof omrøres med pen- 10 tan og filtreres, hvilket giver 0,6 g af den i overskriften nævnte forbindelse, smeltepunkt 135-145°C.

På lignende måde fremstilles følgende forbindelser conh2 ----- ί CH-CH2-NH-C (ch3) 3

I r OH X

20 *8_^9_ H CH3 Cl H C2H5 Cl CH, CH-, Cl 25 3 3 H 2-C3H7 Cl H n-C4Hg Cl H CH3 Br c2h5 c2h5 Cl 30 n-C3H? n-C3H7 C1 n-C4H9 n-C4H9 Cl 35

O

DK 171124 B1 32

Eksempel 15 4-Amino-N-tert-butyl-3,5-dichlor~3-(methylthio)phenethyl amin- -hydrochlorid På den i eksempel 3 beskrevne måde fremstilles N-5 -tert-butyl-3,5-dichlor-3-chlor-4-aminophenethylamin-hydro-chlorid. 11 g af dette produkt tilsættes portionsvis til 5 ml methylmercaptan i 100 ml tør ethylendichlorid ved -10 til 0°C. Blandingen omrøres og får lov gradvis at stige til stuetemperatur i løbet af et tidsrum på 4 dage. Blandingen 10 filtreres, filterkagen vaskes med 2 x 500 ml ethylendichlorid. Det faste stof dispergeres i 200 ml H20, afkøles til 5°C og gøres basisk med 6N NaOH-opløsning, hvilket giver en hvid olie, der ekstraheres med 3 x 100 ml CH2C12· CH2C12~ -ekstrakten tørres (MgS04) og inddampes til tørhed, hvilket 15 giver 6,41 g mørkegrøn olie. Denne olie omrøres i HCl/iso- propanol, og blandingen inddampes til tørhed. Remanensen omrøres i 35 ml ethylether i 16 timer og filtreres, hvilket giver 3,63 g, smeltepunkt 178-181°C, sønderdeling. Dette faste stof opvarmes i ethylacetat under tilbagesvaling og filtreres, 20 hvilket giver 2,07 g, smeltepunkt 188-193°C. Omkrystallisation ud fra 75 ml ethylendichlorid giver 1,45 g af den i overskriften nævnte forbindelse, smeltepunkt 191-196°C.

Den i overskriften nævnte forbindelse kan også fås ved at tilsætte et 5-10 foldigt overskud af natriummercaptid i te-25 trahydrofuran ved 0-10°C og følge ovenstående oparbejdning.

Eksempel 16 På samme måde som beskrevet i eksempel 15 fremstilles de følgende thioestere ved i stedet for methylmercaptan 30 at anvende de tilsvarende mercaptaner:

Cl

L

H2N ft 'y*CH-CH2-NH-R3 I SR *HC1

Cl DK 171124 Bl 33

O

R_R3 methyl 2-propyl ethyl t-butyl 2-propyl t-butyl 5 n-butyl t-butyl t-butyl t-butyl n-hexyl t-butyl phenyl t-butyl 10 Eksempel 17 På den i eksempel 15 beskrevne måde fås ved i stedet for N-tert-butyl-3,5-dichlor-3~chlor-4-aminophenethylamin--hydrochlorid at anvende den tilsvarende chlorforbindelse og tilsætte de passende mercaptaner de følgende thioethere:

Cl SR

20 Ar R R3 4-Amino-3-cyanophenyl methyl 2-propyl 4-Methylamino-3,5-dichlorphenyl methyl t-butyl 4-Amino-3-chlor-5-trifluormethyl methyl t-butyl 25 4-Amino-3-chlor-5-cyanophenyl methyl t-butyl 4-Amino-3-chlor-5-cyanophenyl ethyl t-butyl 4-Acetamido-3,5-dichlorphenyl methyl t-butyl 4-Amino-3-chlor-5-H2NCO-phenyl methyl t-butyl 4-Amino-3-chlor-5-HOCO-phenyl methyl t-butyl 30 4-Amino-3-chlor-5-methylphenyl ethyl t-butyl 4-Amino-3-chlor-5-methoxyphenyl n-butyl t-butyl 4-Amino-3-chlor-5-nitrophenyl methyl t-butyl 4-Amino-3-chlor-5-CH30-C0-phenyl methyl t-butyl 35

O

DK 171124 B1 34

Eksempel 18 g- [ (Tert-butylamino)methyl]-3,5-dichlor-4-diethylaminobenzy1- -alkohol På den i eksempel 9 beskrevne måde oxideres 3,5-di-5 chlor-4-diethylaminoacetophenon med Se02 og alkyleres reduktivt med t-BuNI^/NaBH^, hvilket giver den i overskriften nævnte forbindelse, smeltepunkt 93-96°C.

På lignende måde fremstilles g-[(tert-butylamino)-methyl]-3,5-dichlor-4-(n-dipropyl)aminobenzylalkohol og o-10 -t(tert-butylamino)methyl]-3,5-dichlor-4-(n-dibutyl)aminoben zylalkohol.

Eksempel 19 15 4- (Allylamino) -a- [ (tert-butylamino) methyl]-3,5-dichlorbenzy 1- -alkohol 20 CHo*CHCH,NH-CHCH-NHC (CH,) 3 r*« (a) 17,0 g (0,168 mol) triethylamin tilsættes på én 25 gang til 105,9 g (0,875 mol) allylbromid under nitrogenatmosfære. Den fremkomne hvide emulsion giver en varmeudvikling til 70°C og bliver en tyk hvid fast masse inden for 5 minutter. Den opløsning, der dannes ved tilsætning af r^lOO ml DMF, omrøres i 1 time ved 70-95°C. En opløsning 30 af 25,0 g (0,088 mol) 4'-amino-2-brom-3',5'-dichloracetophe-non i 50 ml DMF tilsættes på én gang, og den fremkomne brune reaktionsblanding holdes på 80-90°C i 2 timer. Reaktionsforløbet kontrolleres hyppigt ved tyndtlagschromatografi (Si02/CH2Cl2/hexaner (1/1)), eftersom for langvarig opvarm-35 ning resulterer i sønderdeling af såvel udgangsmaterialer som produkter. Reaktionsblandingen hældes i 1,5 liter H20

O

DK 171124 B1 35 og omrøres i 0,5 time. Efter en yderligere vandig triture-ring omrøres de tiloversblevne brune halvfaste stoffer med rvl50 ml CC14 i 0,5 time, hvorved der fås en suspension. De gulbrune faste stoffer opsamles ved filtrering og lufttørres, 5 hvilket giver 14,9 g (59,6%) udvundet phenacylbromidudgangs-materiale. CCl^-filtratet omrøres med MgSO^, filtreres og inddampes, hvilket som udbytte giver 9,42 g af en brun sirup. Lynchromatografi på en 23 x 5 cm kolonne af "Silica Gel 60" med gradient eluering (hexaner/C^C^ (10/0 —> 8/2) giver 10 to store fraktioner: (A) : 1,82 g (5,7%) af en ravfarvet sirup, der bevæger sig hurtigst, identificeret som 2-brom-3',5'-dichlor--4'-diallylaminoacetophenon ved hjælp af IR (rent) 1680 cm NMR (CDC13) S 7,93 (s, 2, AR-H), 6,25-5,55 (kompleks m, 2, 15 CH=) , 5,40-4,95 (kompleks ,.m, 4, CI^*) , 4,40 (s, 2, Cl^Br) og 3,87 (m, der ligner d, 4, J = 6 Hz, CH9N); kemisk ioni-seringsmassespektrum (M + H) = 3,62, og (B) : 3,49 g (12,2%) af en brun sirup, der bevæger sig langsomst, identificeret som 4'-(allylamino)-2-brom-3',5'- 20 -dichloracetophenon ved hjælp af IR (rent) 3330, 1670 cm NMR (CDC13) 6 7,83 (s, 2, AR-H), 6,35-5,65 (kompleks m, 1, CH=) , 5,50-5,00 (kompleks m, 2, (2^=) , 4,84 (br t, 1, NH) , 4,37 (s, 2, CH9Br) og 4,20 (br m, 2, CH9N); kemisk ioniserings-1 Δ massespektruk (M + H) = 322.

25 (b) En opløsning af 2,88 g (8,92 mmol) 4'-(allylamino)- -2-brom-31,51-dichloracetophenon i 10 ml tilsættes dråbevis i løbet af en time til en omrørt opløasning af 1,34 g (18,3 mmol) t-butylamin i 20 ml THF. Reaktionstemperaturen holdes på -24 til 13°C ved afkøling i et bad af tøris og CCl^. Den 30 fremkomne ravfarvede suspension opvarmes til stuetemperatur i løbet af 30 minutter og omrøres ved 21-22°C i 1,5 time.

2,80 g (44,6 mmol) natriumcyanoborhydrid tilsættes i to portioner i løbet af 5 minutter, hvilket giver en tyk gyldenbrun suspension med varmeudvikling fra 22 til 25°C. Der til-35 sættes dråbevis /vlO ml iseddike, så at der gradvis dannes en gul opløsning, der omrøres ved stuetemperatur i 3 dage.

36 DK 171124 B1

Reaktionsblandingen hældes i en opløsning af 100 ml H^O og 100 ml mættet vandig NaCl, som derefter indstilles til pH 7 med 10%'s Na^O^ og ekstraheres tre gange med Et20. De forenede ekstrakter rystes med to portioner fortyndet vandig 5 HC1, som forenes, neutraliseres med 10%'s Na2C03 til pH 8 og ekstraheres tre gange med Et20. Efter omrøring af de kombinerede ekstrakter med vandfrit K2C03 filtreres den bleggulgrønne opløsning og inddampes, hvilket som udbytte giver 2,04 g (72,1%) af en bleggul sirup, der identificeres som 10 4-(allylamino)-a-[(tert-butylamino)methyl]-3,5-dichlorbenzyl-alkohol ved hjælp af IR (rent) 3400 cm NMR (CDCl^) S 7,32 (s, 2, Ar-H), 6,35-5,60 (kompleks m, 1, CH=), 5,45-4,95 (kompleks m, 2, CH2=), 4,52 (d af d, 1, Ar-CH), 3,97 (overlappende m, 3, Ar-NHCH2), 3,03 (br s, 2, NH og OH), 2,68 (m, 2, 15 CH2N) og 1,13 (s, 9, C(CH3)3); kemisk ioniseringsmassespektrum (M + M)+ = 317. CH2Cl2/CH3OH/konc. NH4OH (80/19/1) viser en større plet (Rf = 0,6) med spor af 9 urenheder. Siruppen krystalliserer gradvis til et gyldenbrunt fast stof ved henstand.

20

Eksempel 20 g-[(Tert-butylamino)methyl]-3,5-dichlor-4-diallylaminobenzyl- -alkohol 25 -

Cl <CH2=CHCH2) 2-N—^^-CHCH2-NH-C (CH3) 3

Cl OH

30

Den i overskriften nævnte forbindelse fremstilles under anvendelse af en udgangsmaterialefraktion (A) fra eksempel 19(a) og ved den i eksempel 19(b) beskrevne fremgangsmåde. Den bleggule sirup, der gradvis krystalliserer 35 ved henstand, identificeres ved hjælp af IR (rent) 3300 og 1630 cm-1; NMR (CDC13) δ 7,26 (s, 2, Ar-H), 6,23-5,54 (kom- DK 171124 B1 37 pleks m, 2, CH=), 5,32-4,87 (kompleks m, 4, CH2=), 4,48 (m, 1, Ar-CH), 3,78 (m, der ligner d, 4, J = 6 Hz, Ar-NCH2), 3,4-2,0 (br S, 2, NH og OH), 2,62 (m, 2, CH2N) og 1,13 (3, 9, C(CH3)3); kemisk ioniseringsmassespektrum (M + H)+ = 357 5 svarende til det, der forventes for den i overskriften nævnte forbindelse.

10 15 20 25 30 35

Claims (4)

38 DK 171124 B1 Patentkrav.

1. Fremgangsmåde til forbedring af tilvæksthastigheden og til forbedring af forholdet mellem kød og fedt hos kødproducerende dyr, kendetegnet ved, at man til dyrene 5 i udvalgte indgivelsesmængder indgiver en forbindelse med den almene formel Ϊ—O—°P—"Ά j—^ r!. rI

10 Z 4 1. i hvilken X er hydrogen eller halogen, Y er hydrogen, NRgRg eller NHCOR5, Z er halogen, CN, CF3, COORlf CONH2, methyl, 15 methoxy eller N02, R^ er hydrogen eller Ci_4-alkyl, R2 er hydrogen, C^g-alkyl eller C3_4-alkenyl, R3 er hydrogen, C^g-alkyl, C3_g-cycloalkyl, C3_4-alkenyl, phenyl, 2-hydroxyethyl, a,a-20 dimethylphenethyl eller benzyl, R4 er OH, ORg eller SRllf R5 er hydrogen, C1_4-alkyl, C1_4-alkoxy eller ?10

25 W'™20' Å° Rg er C^.g-alkyl, C2_5-alkanoyl, li-0 eller ^_y"CH2 eller C3_4-alkenyl, 30 r8 er hydrogen, C1_4-alkyl eller C3_4-alkenyl, r9 er hydrogen, C]__6-alkyl, C4_g-cycloalkyl eller C3_4-alkenyl, RlO er chlor, dichlor, methyl, dimethyl, methoxy, 35 dimethoxy eller nitro, og r^2 er C^.g-alkyl, phenyl eller benzyl, DK 171124 Bl 39 forudsat, at når R3 er phenyl, 2-hydroxyethyl, a,a-dimethyl-phenethyl, C3_g-cycloalkyl eller benzyl, er R2 hydrogen, og når R3 er 2-hydroxyethyl, er R4 hydroxyl, *10 5 og når R6 er alkanoyl eller y^T\_co, er R2 og R3 ikke hydrogen, undtagen når R3 er en alkyl-eller en substitueret alkylgruppe, der indeholder et tertiært carbonatom knyttet til nitrogen, og når Y er hydrogen, er X 10 og Z halogen, og R2 er hydrogen, og R3 er isopropyl, 2-butyl eller tert.butyl, og når Rg er Ci_4~alkyl eller C3_4-alkenyl, er Rg hydrogen, C1_4-alkyl eller C3_4-alkenyl, og mindst ét af symbolerne X og Y er ikke hydrogen, og når Z ikke er halogen, er Y NRgRg eller NHCOR5, og når Y er hydrogen, NH2 15 eller NHCOR5, og Z er halogen, kan R4 ikke være OH eller ORg, hvor Rg er C^-g-alkyl, eller racemiske blandinger, optiske aktive isomere eller ikke-toksiske farmakologisk acceptable syreadditionssalte deraf.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg- 20 net ved, at der indgives 5-[l-hydroxy-2-(isopropylamino) -ethyl)-anthranilonitril.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der indgives 5-[2-(tert.butylamino)-1-hy-droxyethyl]-N-ethyl-anthranilonitril.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at der indgives 5-[2-(tert.butylamino)-1-hydroxy-ethyl]-anthranilonitril. 1 35