DK175308B1

DK175308B1 - En vaccinekomposition omfattende et inaktiveret virus eller bakterium, fremgangsmåde til fremstilling deraf samt anvendelsen af en substans eller en komposition i fremstillingen deraf

Info

Publication number: DK175308B1
Application number: DK198805342A
Authority: DK
Inventors: Dale Bordt; Hans Draayer
Original assignee: Pfizer
Priority date: 1987-09-28
Filing date: 1988-09-26
Publication date: 2004-08-16
Also published as: NZ226333A; ATE117899T1; EP0310316A3; IE882908L; DE3886332D1; JPH01230523A; DK534288D0; IE60950B1; AU2284388A; EP0310316B1; ES2067474T3; JPH01230532A; DK534188D0; KR890004728A; EP0310317B1; DE3852918D1; PT88590A; CA1332919C; KR890004725A; DK534288A

Description

i DK 175308 B1

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af en vaccinekomposition, der i det væsentlige er fri for levende virus eller bakterier.

Opfindelsen angår også vaccinekompositioner, der fremstilles ved fremgangsmåden. Opfindelsen har særlig værdi inden for området inaktiverede 5 vacciner til anvendelse i profylakse.

Indenfor det medicinske fagområde er det ofte nødvendigt eller ønskeligt at gøre vaccinekompositioner til indgift til dyr, herunder mennesker, fri for potentielt skadelige levende virus eller bakterier. Et sådant inaktiveringstrin kan være særlig 10 vigtigt, når der behøves en inaktiveret (eller "dræbt") vaccine.

Der kendes en række metoder til inaktivering af virus eller bakterier, såsom behandling med β-propiolacton, formaldehyd eller ethylenimin, fx. beskriver US 3.925.544 inaktivering åf vira med formaldehyd. Sådanne reagenser er imidlertid 15 potentielt farlige at håndtere, og mere sikre teknikker er ønskelige.

Ligeledes kendes en række metoder til inaktivering af virus og bakterier, hvor ascorbinsyre er tilstede (Chemical Abstracts, vol 107, 1987, abstract nr. 36455u;

Chemical Abstracts, vol 100, 1984, abstract nr. 186837; Chemical Abstracts, vol 20 61, 1964, abstract nr. 13647c; Chemical Abstracts, vol 105, 1986, abstract nr.

206030), ligesominaktivering af visse virale diagnostiske antigener ved hjælp af ascorbinsyre, der undergår autooxidation, som katalyseres af kobber(II)sulfat, er blevet rapporteret (L.A. White et al., J. Clinical Microbiology, 1986, 24, 527-531).

Det er nu overraskende blevet fundet, at virus og bakterier kan inaktiveres i 25 vaccinekompositioner ved en lignende behandling.

Den foreliggende opfindelse tilvejebringer en vaccinekomposition, der i det væsentlige er fri for levende virus eller bakterier, og som indeholder et inaktiveret virus eller bakterium sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer, hvilken 30 komposition er ejendommelig ved, at det inaktiverede virus eller bakterium er blevet fremstillet ved inaktivering af et levende virus eller bakterium med ascorbinsyre og/eller et salt deraf i nærværelse af oxygen og en tungmetalion-kilde.

I DK 175308 B1 I

I I

I Som anvendt i nærværende beskrivelse og krav omfatter udtrykket "terapi" I

I profylakse. I

I I et yderligere aspekt tilvejebringer opfindelsen en fremgangsmåde til fremstilling I

I 5 af en vaccinekomposition, idet fremgangsmåden omfatter blanding af et I

I inaktiveret virus eller bakterium med en farmaceutisk acceptabel bærer, hvilken „ I

I fremgangsmåde er ejendommelig ved, at det inaktiverede virus eller bakterium er I

I blevet fremstillet ved inaktivering af et levende virus eller bakterium med - I

I ascorbinsyre.og/eller et salt deraf i nærværelse af oxygen og en I

I 10 tungmetalionkilde. I

I I endnu et aspekt tilvejebringer opfindelsen en fremgangsmåde til fremstilling af I

I en vaccinekomposition, der i det væsentlige er fri for levende virus eller bakterier, I

I hvilken fremgangsmåde omfatter inaktivering af et levende virus eller bakterium I

I 15 med ascorbinsyre og/eller et salt deraf i nærværelse af oxygen og en I

I tungmetalionkilde. I

I Fordelen med opfindelsen er, at carcinogene eller på anden måde farlige kendte I

I reagenser til anvendelse i virusinaktivering, såsom β-propiolacton, formaldehyd og 9

I 20 ethylenimin, ikke længere er nødvendige, hvorved inaktiveringsproceduren gøres I

I mere sikker. I

I Vaccinekompositionen ifølge opfindelsen kan være et hvilket som helst I

I medikament, der er formuleret til indgift ad en hvilken som helst egnet vej, fx ved I

I 25 parenteral eller topisk applikation. I

I I et foretrukket aspekt er vaccinekompositionen en inaktiveret vaccine mod virale I

I eller bakterielle infektioner, fx en inaktiveret vaccine mod transmitterbart I

I svinegastroenteritis-virus (TGEV), parvovirus, medlemmer af Herpesvirus- I

I 30 gruppen, fx pseudorabies-virus (PRV) og infektiøst bovint rhinotracheitis (IBR)- I

I virus, paramyxo, parainfluenza-3, bovint coronavirus og bovint respiratorisk I

syncytialvirus. I

I I overensstemmelse hermed angår et yderligere aspekt af opfindelsen I

I 35 anvendelsen af en substans eller en komposition i fremstillingen af en inaktiveret I

3 DK 175308 B1 vaccinekomposition til profylakse af virale eller bakterielle infektioner, hvilken substans eller komposition i det væsentlige er fri for levende virus eller bakterier, og som er blevet fremstillet ved en fremgangsmåde, der omfatter inaktivering af et levende virus eller bakterium med ascorbinsyre og/eller et salt deraf i 5 nærværelse af oxygen og en tungmetalionkilde.

- I et foretrukket aspekt er den inaktiverede vaccine en vaccine mod transmitterbare svinegastroenteritis-virus.

ίο I yderligere et foretrukket aspekt er den inaktiverede vaccine en kombinationsvaccine mod mere end ét virus, fx op til 5, fortrinsvis op til 3 virus. En foretrukken vaccine af denne type er en vaccine mod infektiøst bovint rhinotracheitis-virusdiarré-parainfluenza-3.

15 Det vil være klart, at andre virksomme midler kan være til stede i vaccinekompositionen ifølge opfindelsen.

Den inaktiverede vaccine kan eventuelt indeholde adjuvanser omfattende fx aluminiumhydroxid (fx 2-25 vægtprocent, fortrinsvis 5-25 vægtprocent), saponin 20 (fx 0,5-1,5 mg/dosis) og Freund’s ukomplette adjuvans (typisk vand-i-olie-emulsion).

Vaccinen kan indgives i en dosis på mindst 1,9 logaritmiske enheder inaktiverede viruspartikler pr. dosis, fortrinsvis mindst 1000 viruspartikler (3 logaritmiske 25 enheder viruspartikler) pr. dosis. Normalt vil den inaktiverede vaccine indgives i mindst 4 logaritmiske enheder inaktiverede viruspartikler pr. dosis.

Egnede former af ascorbinsyre omfatter alkalimetal- eller jordalkalimetalsaltene, fx natrium-, kalium- eller calciumsaltene, eller ascorbinsyre selv.

30

Et foretrukket salt er natriumsaltet.

En hensigtsmæssig ascorbatkoncentration til anvendelse i inaktiveringstrinnet er i området 1-10 mM, fortrinsvis 2,0 mM-6,0 mM, fx 2,5 mM.

35

I DK 175308 B1 I

H

I I

I Egnede tungmetalionkilder omfatter salte af kobber, jern og zink samt I

I kviksølvholdige forbindelser. I

I En foretrukken tungmetalion er kobber(II)(Cu2+)-ionen, for hvilken en I

I 5 hensigtsmæssig kilde er kobber(II)sulfat. I

En yderligere foretrukken tungmetalion er kviksølv, for hvilken hensigtsmæssige t I

I kilder er organokviksølvforbindelser, specielt ethylmercurithiosalicylsyre- I

I natriumsalt (thimerosal). I

I 10 I

I Tungmetalionen er til stede i en katalytisk mængde, idet en hensigtsmæssig I

I koncentration til anvendelse i inaktiveringstrinnet er i området fra 0,0 ImM til 0,1 I

I mM, fortrinsvis 0,015 mM til 0,05 mM, fx 0,022 mM. I

I 15 Tilstedeværelsen af oxygen er essentiel og tilvejebringes hensigtsmæssigt ved I

I tilstrækkelig beluftning. I

I Normalt får inaktiveringstrinnet lov til at forløbe ved mellem 1°C og 54°C, I

I fortrinsvis ved ca. 37°C, indtil en inaktiveringstest viser sig at være I

I 20 tilfredsstillende. Den nødvendige inaktiveringsperiode er typisk i området 10-100 I

I timer, generelt ca. 48-72 timer. I

I Til inaktivering af visse virus, fx parvovirus og rotavirus, kan en yderligere I

I tilsætning af ascorbinsyre være nødvendig for at fuldende inaktiveringsprocessen. I

I 25 I

I Desuden kan andre midler, der vides at inaktivere virus, eventuelt tilsættes for at I

I fuldende inaktiveringsprocessen. Ét sådant reagens er saponin. Som beskrevet fx I

I i Vet. Med. Nauki, 1980, 17(3), 45-55 (A. Motovski et al.), er ét sådant reagens I

I saponin, der fx kan tilsættes i en koncentration pi 0,5 mg/ml ca. 72 timer efter I

I 30 ascorbinsyretilsætning. En sådan procedure har vist sig at være specielt I

anvendelig til inaktivering af kappevirus såsom virus i Herpesgruppen, herunder I

I PRV og IBR. I

I Inaktiveringsprocessens fremskridt kan hensigtsmæssigt følges ved måling ved I

I 35 intervaller af viruslevedygtigheden under anvendelse af en hvilken som helst I

5 DK 175308 B1 hensigtsmæssig metode, fx ved en indirekte-fluorescerende kaninantistof-test, til bestemmelse af resterende virustitre.

Ved fremstilling af inaktiverede vacciner kan stabiliseringsmidler fordelagtigt 5 tilsættes før, under eller efter inaktiveringsprocessen for at øge antigenstabilitet.

Egnede stabiliseringsmidler omfatter bovint serumalbumin eller andre serumtyper.

Et foretrukket stabiliseringsmiddel er bovint (foetalt) kalveserum.

10 Stabiliseringsmidlet tilsættes fortrinsvis før eller under inaktiveringsprocessen.

Stabiliseringsmidlet er hensigtsmæssigt til stede i en koncentration på fra 0,5 til 5 volumenprocent, fortrinsvis fra 1 til 3 volumenprocent, især ca. 2 volumenprocent.

15

De følgende eksempler illustrerer opfindelsen.

__

I DK 175308 B1 I

I 6 I

I EKSEMPLER I

I I de følgende eksempler blev L-ascorbinsyre- og kobber(II)sulfat-stamopløsninger I

I fremstillet som følger. I

Is I

I Præparationsforskrift 1 I

I L-ascorbinsyre (AA)-stamopløsning fremstilles ved at opløse 100 g AA pr. liter I

I destilleret vand (100 mg/ml). Reagenset steriliseres under anvendelse af en 0,20 I

I 10 μ Micron filteranordning og opbevares i frossen tilstand. I

I Præparationsforskrift 2 I

I Kobber(II)sulfat-stamopløsning (0,5 mg/ml) fremstilles ved at opløse 0,5 g I

I 15 kobber(II)sulfat i 1 I destilleret vand og derefter autoklavere ved 121°C i 10-15 I

minutter. Opløsningen opbevares ved 4°C. I

I EKSEMPEL 1 I

I 20 I

I Inaktivering af infektiøst bovint rhinotracheitis (IBR)-virus I

I Natriumsaltet af L-ascorbinsyre (100 mg/ml) blev under konstant omrystning I

I langsomt sat til virusvæskerne til en slutkoncentration på 1 mg/ml, hvilken I

I 25 tilsætning straks blev efterfulgt af tilsætning af kobber(II)sulfat (0,5 mg/ml- I

I stamopløsning) til en slutkoncentration på 0,55 pg/ml. Væskerne blev holdt ved I

I 37°C under konstant omrystning og beluftning i fra 72 til 80 timer. I

I Efter den første inaktiveringsfase blev væskerne anbragt i en køler (1,5-7°C) og 'I

I 30 fik lov at nå en temperatur på 1,5-7°C. pH-Værdien blev justeret til 7,2-7,4, og I

I saponin (20 mg/ml) blev under konstant omrystning langsomt sat til I

I virusvæskerne til en slutkoncentration på 0,5 mg/ml, hvilken tilsætning blev I

I efterfulgt af thimerosal (2,5%) til en slutkoncentration på 0,01%. Væskerne blev I

I holdt ved 1,5-7°C under konstant omrystning i 3 dage. De inaktiverede væsker I

I 35 blev opbevaret ved 1,5-7°C. I

7 DK 175308 B1 EKSEMPEL 2 5 Inaktivering af parainfluenza-3 (Pl-3) virus

Thimerosal (2,5%) blev tilsat til en slutkoncentration på 0,01%, og væskernes pH-værdi blev justeret ti) 7,2-7,4 med ION NaOH. L-Ascorbinsyre (100 mg/ml) blev under konstant omrystning langsomt sat til virusvæskerne til en 10 slutkoncentration på 1 mg/ml. Væskerne blev holdt ved 37°C under konstant omrystning og beluftning i 40-48 timer.

Efter den første inaktiveringsfase blev væskerne anbragt i en køler (1,5-7°C) og fik lov at nå en temperatur på 1,5-7°C. pH-Værdien blev justeret til 7,2-7,4, og 15 saponin (20 mg/ml) blev under konstant omrystning langsomt sat til virusvæskerne til en slutkoncentration på 0,5 mg/ml. Væskerne blev holdt ved 1,5-7°C under konstant omrystning i 3 dage. De inaktiverede væsker blev opbevaret ved 1,5-7°C, 20 EKSEMPEL 3

Effektivitet af inaktiveret IBR/BVD/PI~3~vaccine 1. Materialer og metoder 25 A. Dyr 24 stykker kvæg på 136-227 kg (300-500 Ib), der havde været opstaldet sammen, og som ikke havde været vaccineret med nogen af de i vaccinen inde-30 holdte komponenter, blev anvendt. Med mindre andet er bemærket, var kvæget modtagelig for IBR, BVD og PI-3 med serumneutralisation eller pladereduktionstiter på <1:2.

To eksperimentelle IBR/BVD/PI-3-vacciner blev sammensat i overensstemmelse 35 med tabel 1.

I DK 175308 B1 I

I I

I IBR- og PI-3-fraktionerne blev inaktiveret som beskrevet i eksemplerne 1 og 2. I

I Tabel 1 I

I 5 IBR/BVD/PI-3 Serie A- og B-formulering (logi0 TCIDSo/ml) I

I Præ-inakt. Beregnet titer/dosis I

I Komponent batch-titer Serie A Serie B I

I 10 IBR 7,7 7,9 7,6 I

I BVD 6,9 7,1 7,1 I

I PI-3 7,3 7,5 7,3 I

I 15 24 kalve blev anvendt til denne undersøgelse. 10 kalve blev vaccineret I

I intramuskulært med en 5 ml dosis af Serie A; 9 kalve blev vaccineret på lignende I

I måde med Serie B; 5 kalve blev holdt som ikke-vaccinerede modtagelige I

I kontroller. Alle vaccinerede kalve blev revaccineret på lignende måde 21 dage I

I efter den første vaccination. Kalve blev overvåget dagligt med hensyn til I

I 20 eventuelle tegn på uheldige følger af vaccination. I

I B. Serologi I

Kalvenes antistoftitre blev bestemt ved vaccinationstidspunktet, ved provokation I

I 25 og 14 dage efter provokation. I

I C. Provokation I

I Kalvene blev udsat for intranasal provokation med IBR, efterfulgt 3 uger senere I

I 30 med PI-3. I

I Kalvene blev overvåget dagligt i 3 dage før provokation (én dag for PI-3) og i 14 I

I dage efter hver provokation med hensyn til grove kliniske tegn og rektale I

I temperaturer. Virusudskillelse blev overvåget i 10 dage efter provokation. Nasale I

I 35 afstrygningspræparater blev udsat for to på hinanden følgende passager på EBK- I

DK 175308 B1 9 celler til virusisolation. To kalve blev udelukket fra undersøgelsen inden PI-3-provokation; én kalv udviklede stress i de øvre luftveje efter behandling med en sulfabolus, og én kalv var kompromitteret med et fremskredet tilfælde af klovsyge. Det følgende pointsystem blev anvéndt til evaluering af kliniske 5 symptomer efter provokation.

Pointantal Tegn 1 point Klar nasal udsondring, nysen, nasal slim- 10 hindeinflammation, hosten, tåredannelse, kraftig spytafsondring, nasale læsioner.

2 point Mucopurulent nasal udsondring 15 2. Resultater

Alle kalvene forblev raske i overvågningsperioden efter vaccination.

20 A. Serologiske responser

Serologiske resultater er opsummeret i tabel 2

Det blev fundet> at 4 kalve, der var blevet vaccineret med Serie B, i forvejen 25 havde IBR-antistoftitre. Disse kalve blev taget med i undersøgelsen på grund af deres modtagelighed for PI-3. Kontaktkontroller forblev seronegative med hensyn til IBR under hele undersøgelsen, hvilket viser manglen på IBR-infektion. 9 ud af 10 kalve, der var blevet vaccineret med Serie A var seronegative med hensyn til IBR ved det tidspunkt, hvor de fik den anden vaccination; den resterende kalv 30 havde en titer på 1:3. Indenfor 3 uger efter den anden vaccination havde kalvene udviklet en geometrisk middelværdi af antistoftiter (GMAT) på >1:16 (område fra 1:7 til >1:32). Vaccinerede kalve udviste et anamnestisk respons efter provokation.

I DK 175308 B1 I

I 10 I

I Generelt viste kalve, der var blevet vaccineret med både Serie A og Serie B lidt I

I eller ingen PI-3-antistofrespons ved tidspunktet for anden vaccination. Ved I

I tidspunktet for PI-3-provokation, nemlig 6 uger efter anden vaccination, havde I

I kalve, der var blevet vaccineret med Serie A, en GMAT på >1:273,5, og kalve, der I

I 5 var blevet vaccineret med Serie B, havde en GMAT på >356 (område fra 1:21 til I

I >1:512). ‘ I

I Kalve udviste BVD-GMAT'er på henholdsvis £1:5106 og £18023 for Serie A og I

I Serie B (område fra 1:915 til >1:62500). I

I 10 I

I Tabel 2 I

I Reciprokke geometriske middelværdier af antistoftitre IBR/BVD/PI-3 (KV), I

I immunresponsundersøgelse I

I 15 I

I Uger efter vacc. I

I Fraktion Vaccine 0 3 6 Efter provokation I

I IBR A <2 <2 £16 >196 I

I 20 IBR B I.A. I.A. £62 >153 I

I IBR Kontrol <2 <2 <4 14 I

I BVD A <2 I.A. >5106 I.A. I

I BVD B <2 I.A. >18023 I.A. I

I 25 BVD Kontrol <2 I.A. <4 I.A. I

I PI-3 A <2 <3,5 £273,5 £2048 , I

I PI-3 B <2,3 <2,5 >356 £2048 I

I PI-3 Kontrol <2 <2 <2 >16 I

I 30 ___;_ I

I I.A. = ikke analyseret I

I B. IBR-evalueringer efter provokation I

I 35 I

11 DK 175308 B1

Dobbelte titreringer af IBR-provokation-virus, der straks blev udført efter provokation, viste, at kalvene var blevet udsat for provokation med 108,0 TCID50.

Kalve, der var blevet vaccineret med Serie A, udviste en betydelig (p<0,05) 5 reduktion i rektale temperaturer på dage 3 og 4 efter provokation relativt til kontrolgruppen.

IBR-virusisolationer blev overvåget i 10 dage efter provokation. Alle kalvene var fri for IBR-virus inden provokation. IBR-virus blev genfundet hos alle ikke-10 vaccinerede kontroller (100% genfinding) under hele perioden på 10 dage. En signifikant reduktion i virusgenfinding blev set blandt vaccinerede dyr på dag 9 (p<0,05) og dag 10 (p<0,01) relativt til ikke-vaccinerede kontroller.

Kliniske tegn blandt vaccine-grupper A og B og kontroller efter IBR-provokation 15 var mildere end forventet; der blev ikke fundet signifikante forskelle mellem vaccine- og kontrolgrupperne. Der var imidlertid reduktioner i kliniske point for de vaccinerede dyr.

C. PI-3-evaluering efter provokation 20

Resultaterne af dobbelte titreringer, der blev udført straks efter provokation, viste, at kalvene var blevet udsat for provokation med 107,8 TCID50 PI-3.

Kliniske tegn på PI-3-infektion var fra milde tegn til ikke-synlige tegn.

25

Alle kalvene var frie for PI-3-virus inden provokation. PI-3-virus blev isoleret i gennemsnit efter 7,4 dage/ko fra de ikke-vaccinerede kontroller, medens virus blev isoleret i gennemsnit efter 2,9 og 4,3 dage/ko fra kalve vaccineret med henholdsvis Serie A og Serie B. Når resultaterne opnået med Serie A sammen-30 lignes med resultaterne opnået med Serie B, er et dosisrespons tydeligt.

Reduktionen i udskilt virus blandt kalve, der var blevet vaccineret med både Serie A og Serie B, var signifikant relativt til de ikke-vaccinerede kontroller (p<0,01). 1 EKSEMPEL 4

I DK 175308 B1 I

I 12 I

I Inaktivering af bovint respiratorisk syncytialvirus (BRSV) I

I Inaktivering blev udført ved den i eksempel 1 beskrevne metode. I

I 5 I

I EKSEMPEL 5 I

I Vacciner mod inaktiveret transmitterbart svinegastroenteritis virus I

I 10 I

I Purdue-stamme-TGE-virus (ATCC VR-763) blev udsat for 4 passager på I

I svinenyreceller (betegnet PK0809), hvorved der vandtes et hovedvirus til podning, I

I hvilket virus derefter blev udsat for 3 passager i svinenyreceller og 2 passager i I

I Crandell-kattenyreceller (ATCC CCL 94). Viruset blev opformeret ved 35-38°C på I

I 15 Crandell-kattenyrecellelinien (ATCC CCL 94) i Eagle's MEM indeholdende højst I

I 10% bovint serum. I

I To små rulleflasker indeholdende sammenflydende Crandell-kattenyreceller (ATCC I

E CCL 94)-monolag blev inokuleret med 1 ml ufortyndet TGE-hovedpodningsvirus. 9

B 20 Efter en 1-2 timers adsorptionsperiode blev vi rus vækstmediet (Eagle's MEM I

B indeholdende højst 2% bovint serum) tilsat, og viruset blev dyrket ved 35-38°C. I

B Én rulleflaske indeholdende TGE-virus fremstillet som beskrevet foroven blev I

B nedfrosset og optøet (titerprøve udtaget) og inaktiveret som følger (bulk-viruset I

B 25 bør have et præ-inaktiveringstiter på mindst 105,5 pr. dosis): I

B Bulk-viruset blev anbragt i en 1-liters glasflaske og justeret til 37°C. Derefter blev I

B natriumascorbat-stamopløsning (1% vægt/volumen) og kobber(II)sulfat- I

B stamopløsning (1,1% vægt/volumen) tilsat for at bringe slutkoncentrationen af I

B 30 ascorbat til 5,05 mM og slutkoncentrationen af kobber(II)ioner til 0,022 mM. I

B Flaskens indhold blev blandet under tilstrækkelig beluftning i 72 timer ved 37°C, I

B hvorefter det blev afkølet til 4°C. I

B Efter inaktivering var blevet vist, blev bulk-viruset delt op og tilsat adjuvans for at I

B 35 give to inaktiverede vacciner som følger: I

13 DK 175308 B1

Vaccine A

Den ene halvdel af det inaktiverede bulk-virus blev behandlet med 10% 5 aluminiumhydroxid ved omrøring i 15-20 timer ved 4°C.

Vaccine B

Den anden halvdel af det inaktiverede bulk-virus blev tilsat adjuvans som følger: 10

Opløsning 1 består af 5 ml emulgeringsmiddel sat til 95 ml Drakoil 6 VR.

Opløsning 2 består af 2,5 ml Tween 80 sat til 47,5 ml dræbt TGE-virus.

15 Opløsning 1 (21 ml) sættes til opløsning 2 (7 ml) og blandes inden vaccination under anvendelse af en Perfektum-emulgeringsnål.

Claims

1. Vaccinekomposition, der i det væsentlige er fri for levende virus eller bakterier, I I og som indeholder et inaktiveret virus eller bakterium sammen med en I I 5 farmaceutisk acceptabel bærer, I I kendetegnet ved, at det inaktiverede virus eller bakterium er blevet 9 I fremstillet ved inaktivering af et levende virus eller bakterium med ascorbinsyre 9 I og/eller et salt deraf i nærværelse af oxygen og en tungmetalionkilde. 9 I 10

2. Komposition ifølge krav 1, I I kendetegnet ved, at den omfatter en profylaktisk virksom mængde af et 9 I inaktiveret virus, og at den er en inaktiveret viral vaccine. I

3. Komposition ifølge krav 2, 9 I 15 kendetegnet ved, at den inaktiverede vaccine er en vaccine mod virus, der 9 I er valgt blandt gruppen bestående af transmitterbart svinegastroenteritis-virus, 9 I parvovirus, medlemmer af Herpes-virus-gruppen, paramyxo, parainfluenza-3, 9 I bovint coronavirus og bovint respiratorisk syncytialvirus. 9 I 20

4. Komposition ifølge krav 3, 9 I kendetegnet ved, at den inaktiverede vaccine er en kombinationsvaccine 9 I mod infektiøst bovint rhinotracheitis - virus diarré - parainfluenza-3. 9

5. Komposition ifølge krav 1, 9 I 25 kendetegnet ved, at den omfatter en profylaktisk virksom mængde af et 9 I inaktiveret bakterium, og at den er en vaccine mod bakterier. 9

6. Komposition ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 5, 9 I kendetegnet ved, at den er blevet fremstillet ved en fremgangsmåde i 9 I 30 hvilken tungmetalionkilden er valgt blandt gruppen bestående af salte af kobber, 9 I jern og zink samt kviksølvholdige forbindelser. 9 DK 175308 B1

7. Komposition ifølge krav 6, kendetegnet ved, at tungmetalionkilden omfatter den kviksølvholdige forbindelse thimerosal.

8. Komposition ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 7, kendetegnet ved, at det levende virus eller bakterium er blevet inaktiveret , i et medium, der yderligere omfatter saponin.

9. Komposition ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 8, io kendetegnet ved, at det levende virus eller bakterium er blevet inaktiveret i nærværelse af et stabiliseringsmiddel, der i stand til at øge antigenstabilitet.

10. Komposition ifølge krav 9, kendetegnet ved, at stabiliseringsmidlet er bovint (foetalt) kalveserum.

11. Fremgangsmåde til fremstilling afen vaccinekomposition, hvilken fremgangsmåde omfatter blanding af et inaktiveret virus eller bakterium med en farmaceutisk acceptabel bærer, kendetegnet ved, at det inaktiverede virus eller bakterium er blevet 20 fremstillet ved inaktivering af et levende virus eller bakterium med ascorbinsyre og/eller et salt deraf i nærværelse af oxygen og en tungmetalionkilde.

12. Fremgangsmåde til fremstilling af en vaccinekomposition, der i det væsentlige er fri for levende virus eller bakterier, 25 kendetegnet ved, at den omfatter inaktivering af et levende virus eller bakterium med ascorbinsyre og/eller et salt deraf i nærværelse af oxygen og en . tungmetalionkilde. 1 35 Anvendelsen af en substans eller en komposition i fremstillingen af en 30 inaktiveret vaccinekomposition til profylakse af virale eller bakterielle infektioner, hvilken substans eller komposition i det væsentlige er fri for levende virus eller bakterier, og som er blevet fremstillet ved en fremgangsmåde, der omfatter inaktivering af et levende virus eller bakterium med ascorbinsyre og/eller et salt deraf i nærværelse af oxygen og en tungmetalionkilde.