JPH01230523A - 不活化ワクチンおよびその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、生きているウィルスまたは細菌を実質的に含
まない薬剤組成物の調製方法に関する。

本発明はまた該方法によって潤製された薬剤組成物、お
よび治療におけるそれらの使用に関する。

本発明はとりわけ予防処理用の不活化ワクチンの分野に
おいて価値がある。

〔従来の技術〕

医薬の分野では、ヒトヲ含めた動物へ投与するための薬
剤組成物に、有害でありうる生きたウィルスまたは細菌
が入りこまないようにすることが往々にして必要であり
、また望ましいことである。

このような不活化段階は不活化（または１死滅ｌ）ワク
チンを必要とするときに１特に重要になってくる。

ウィルスや細菌を不活化するために、多くの方法（例え
ばβ−プロピオラクトン、ホルムア゛ルデヒドまたはエ
チレンイミンによる処理）が知られている。しかしなが
ら、この種の試薬類は取扱いが危険であり、より安全な
手法が望まれている。

硫酸第二銅によシ触媒される自動酸化を受けるアスコル
ビン酸によるある種のウィルスの診断用抗原の不活化は
すでに報告されている〔ホワイト（Ｌ、Ａ、Ｗｈｉｔｅ
　）ら、Ｊ、Ｃｌ１ｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇ７−１９８６、−４４．．５２７−５３１　ｔ−参照
〕。篤いたことに、本発明者らはウィルスや細菌が同様
の処理により薬剤組成物において不活化されうろことを
見出したＯ 〔発明の構成〕 本発明は生きているウィルスまたは細ｉを実質的に含ま
ず、不活化ウィルスまたは細菌を製剤上許容されるキャ
リアーと共に含有してなる薬剤組成物を提供し、その不
活化ウィルスまたは細菌は。

酸素および重金属イオン源の存在下にアスコルビン酸お
よび／またはその塩で生存ウィルスまたは細菌を不活化
することにより得られたことに特徴がある。

本発明はまた生きてｈるウィルス１九は細菌を実質的に
含まず、酸素および金属イオン源の存在下にアスコルビ
ン酸および／またはその塩で生存ウィルスまたは細菌を
不活化する方法によりｖ！４裂された治療用物質もしく
は組成物を提供する。

本明細書中で用いる０治療１なる用語は予防を含むもの
である。

別の面において、本発明は、生存ウィルスまたは細菌を
酸素および重金属イオン源の存在下疋、アスコルビン酸
および／ｌたはその塩で不活化することによシ得られた
不活化ウィルスま九は細菌を製剤上許容されるキャリア
ーと混合することから成る、薬剤組成物の調製方法を提
供する。

さらに別の面において、本発明は、生存ウィルスまたは
細菌を酸素および重金属イオン源の存在下にアスコルビ
ン酸および、／またはその塩で不活化することから成る
、生きているウィルスまたは細菌を実質的に含まない薬
剤組成物の調製方法を提供する。

本発明のさらに別の面によれば、ヒトを含めた動物に、
有効量の本発明による薬剤組成物を投与することから成
る、動物における病気の予防方法が提供される。

本発明の利点は、ウィルス不活化のために当分野で知ら
れた発がん性試薬または有害試薬（例えばβ−プロピオ
ラクトン、ホルムアルデヒドおよびエチレンイミン）を
もはや必要とせず、それにより不活化方法がより安全な
ものとなる点にある。

本発明の薬剤組成物は、適当な経路（例えば非経口また
は局所適用）による投与のために製剤化された医薬品で
ありうる。

好適な面において、本発明の薬剤組成物はウィルスまた
は細菌感染症に対する不活化ワクチン、例えばブタ伝染
性胃腸炎ウィルス（ＴＧＥＶ　）　、パルボウイルス、
ヘルペスウィルス群（例えば仮性狂犬病ウィルス（ＰＲ
Ｙ　）、ウシ伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウィルス）、バ
ラミクソウィルス、パラインフルエンザ−３ウイルス、
ウシコロナウィルスおよびウシＲＳ　（ｒｅｓＰｉｒａ
ｔｏｒ）’　５７ｎｃ）ｒｔｉａｌ　）ウィルスに対す
る不活化ワクチンである。

従って、さらに別の面において、本発明は、ウィルスま
たは細菌感染症予防用の不活化ワクチン組成物ｅｌｆｉ
造するための、生存ウィルスまたは細菌を酸素および重
金属イオン源の存在下にアスコルビン酸および／または
その塩で不活化する方法により得られた、生きているウ
ィルスまたは細菌を実質的に含まない物質もしくは組成
物の使用を提供する。

１つの好適な面において、不活化ワクチンはブタ伝染性
胃腸炎ウィルスに対するワクチンである◇他の好適な面
において、不活化ワクチンは２種以上のウィルス、例え
ば５拙以下、好ましくは３種以下のウィルスに対する複
合ワクチンである。このタイプの好適なワクチンはウシ
伝染性鼻気管炎−ウイルス性下痢−パラインフルエンザ
−３に対するものである。

その他の活性薬剤が本発明の薬剤組成物中に存在しうろ
ことが理解されるであろう。

不活化ワクチンは水酸化アルミニウム（例えば２〜２５
重ＩＬ％、好ましくは５〜２５重量％）、サホニン（例
えば０．５〜１．５■／１回量）および不完全フロイン
ドアジュバント（一般的な油中水型エマルジョン）のよ
うなアジュバントを含むことができる。

ワクチンは１回量あたり少なくとも１．９　ｌｏｇの不
活化ウィルス粒子、好ましくは少なくとも１０００個の
ウィルス粒子（３ｌｏｇのウィルス粒子）の用量で投与
される。一般には、不活化ワクチンＦｉ１回量あたり少
なくとも４　ｌｏｇの不活化ウィルス粒子を投与される
であろう。

アスコルビン酸の適当な形体はアルカリ金属またはアル
カリ土類金属塩１例えばナトリウム、カリタムｔ＋はカ
ルシウム塩、もしくはアスコルビン酸それ自体であり得
る。好適な塩はナトリウム塩である。

不活化段階で使用するのに適したアスコルビン酸および
／ま九はその塩の濃度は１〜１０　ｍＭ　ｓ好ましくけ
２．０〜６．０ｍＭ１例えば２．５　ｍＭである。

適当な重金属イオン源には鋼基、鉄塩、亜鉛塩および水
銀含有化合物が含まれる。１つの好適な重金属イオンは
第二銅（Ｃｕ”）イオンであり、その供給源は硫酸第二
銅である。他の好適な重金属イオンは水銀であり、その
都合のよい供給源は有機水銀化合物、と９わけエチル水
銀チオサリチル酸ナトリウム塩（チメロサール）である
。

重金属イオンは触媒量で存在し、不活化段階で使用する
のに適した濃度ｔｉＯ，０１〜０．１　ｍＭ　、好まし
くは０，０１５〜０．０５　ｍＭ　、例えば０．０２２
ｍＭである。

酸素の存在は不可欠であり、有利には十分なエアレーシ
ョン（通気）により供給される。

−°般に、不活化段階は不活化試験が好結果を示すまで
１〜５４℃、好ましくは約３７’Ｃで進行させる。

必要とされる不活化期間は通常１０〜１００時間、好ま
しくは約４８〜７２時間である。

あるｉのウィルス（例えばパルボウイルスおよびロタウ
ィルス）を不活化する場合には、その不活化を完結させ
るためにアスコルビン酸の２回目の添加が必要である。

さらに、ウィルスを不活化することが知られている他の
薬剤も、その不活化を完結させるために加えることがで
きる。このような試薬の１つに、例えばモトゲスキー（
Ａ。

Ｍｏｔｏｖｓｋｉ　）ら、Ｙｅｔ、Ｍｅｄ、当世ｋｉ、
１９８０．１７　（３）　、４５−５５に記載されるよ
うなサボニンがある。サボニンはアスコルビン酸添加の
約７２時間後に０．５１１！９／ｍｌの濃度で加えられ
る。この種の方法はエンベロープを有するウィルス、例
えばＰＲＶ　−？　ＩＢＲｔ−含めたヘルペスウィルス
群、を不活化するのに特に有効であることが分かった。

不活化の進行過程は便利な方法を用いて、例えば残留ウ
ィルス力価１４べるためのウサギ間接螢光抗体を用いて
、ウィルスの生存能力を時々測定することにより都合よ
く監視することができる。

不活化ワクチンの製造においては、抗原の安定性を高め
るために、不活化方法の前、間または後に安定化剤を加
えるのが有利である。適当な安定化剤にはウシ血清アル
ブミンまたは他の血清型が含まれる。好適な安定化剤は
ウシ（胎児）子ウシ血清である。好ましくは、不活化方
法の前または間に安定化剤を加える。安定化剤は適当に
は０．５〜５ｖ／ｖ％、好ましくは１〜３ｖ／ｖ％、よ
り好ましくは約２　ｖ／ｖ％の濃度で存在する。

以下の実施例は本発明を例示するためのものである。

〔実施例〕

以下の実施例では、Ｌ−アスコルビン酸および硫酸第二
銅の原液を次のように調製した。

調製Ｉ Ｌ−アスコルビン酸（ＡＡ）原液は蒸留水１１あたりＡ
　Ａ　１００９を溶解することにより調製した（　１０
０１１１９／ｌｎｔ　）　。この試薬Ｉｒ１Ｏ０加μミ
クロンフィルター装置を用いて滅菌し、凍結貯蔵した。

調製２ 硫酸第二銅原液（０，５η／耐）は蒸留水１１に硫酸第
二銅ｏ、ｓ　ｇ　＠溶解することにより調製し、１２１
　’Ｃで１０〜１５分間オートクレーブ滅菌を行った。

この溶液は４℃で貯蔵した。

実施例１ ウシ伝染性鼻気管炎（ＩＢＲ）ウィルスの不活仕給えず
かきまぜながら、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム塩（１
００１Ｒ９／ｉｔ　）をウィルス液に徐濤に加えて最終
濃度を１■／−とし、その直後に硫酸第二銅（０，５〜
／ｒ！Ｌｔ原液）を謔えて最終濃度を０．５５μｆ！１
Ｉｌｌとした。この液を絶えずかきまぜて通気しなから
３７’Ｃで７２〜８０時間維持した。

１回目の不活化期間後、この液を冷却器（１，５〜７℃
）に入れて１．５〜７℃の温度に至らしめた。

−を１．２〜７．４に調整し、このウィルス液にサボニ
ン（２０１ｎ９／−）を絶えず攪拌しながら徐々に加え
て最終濃度を０．５■／Ｒｔとし、続りてチメロサール
（２，５％）を加えて最終濃度を０．０１チとした。

この液を攪拌しながら１．５〜７℃で３日間維持した。

この不活化液は１．５〜７℃で貯蔵した。

実施例２ バラインフルエンザ−３（ＰＩ−３３ウイルスの不活化 チメロサール（２，５％　）　ｔウィルス液に加えて最
終濃度ｔ　０１０１％とし、この液のｐｉ（を１０　Ｎ
　ＮａＯＨで７．２〜７．４に調整した。絶えずかきま
ぜなからＬ−アスコルビン酸（１００ＴＩ９／ｄ　）を
ウィルス液に徐々に加えて最終濃度ｔ−１１１９／Ｉｌ
ｌとした。この液を絶えずかきまぜて通気しながら３７
℃で４０〜４８時間維持し念。

１回目の不活化期間後、このウィルス液を冷却器（１，
５〜７℃）の中に入れて１．５〜７℃の温度へ至らしめ
た。ｐＨを７．２〜７．４に調整し、サボニン（２０■
／ａｔ）をウィルス液に絶えず攪拌しながら徐々に加え
て最終濃度を０．５ダ／１ＩＬｔとした。このｉｔ攪拌
下１．５〜７℃で３日間維持した。この不活化液は１．
５〜７℃で貯蔵した。

実施例３ Ａ　動物 ワクチンに含まれるどの成分に対してもワクチン接種歴
のない、−緒に飼われているウシ（体重３００〜５００
ポンド）２４ｍｌｋ使用した。ウシはＩＢＲ。

ＢＶＤおよびＰＩ−３にかかりやすく、血清中和力価ま
たはプラーク減少力価が特に言及しない限り〈１：２で
あった。

ＩＢＲ／　ＢＶＤ　／　ＰＩ−３ワクチンの２つの実験
が表１に従って組み立てられた。

ＩＢＲおよびＰＩ−３画分は実施例１および２に記載し
た通りに不活化した。

表　　　　　１ １ＢＲ／　ＢＶＤ　／ＰＩ−３系列ＡおよびＢ配合物（
ｌｏｇ＋ｏＴＣＩＤｓｏ／ｍ／　） 本実験では２４頭の子ウシを用いた。１０頭の子ウシは
５ＩＩＬｔ用量の系列Ａｔ−筋肉内にワクチン接種され
、９頭のウシは同じ方法で系列Ｂｔ−接櫨され。

そして５頭のウシはワクチン非接種感染性対照として用
いた。すべてのワクチン接種ウシは一次ワクチン接種後
２１日月に同様に再接種を行った。ウシはワクチン接種
に伴う望ましくない徴候について毎日監視した。

Ｂ　血清学 ウシの抗体価はワクチン接種時、チャレンジ時、および
チャレンジの１４日後に測定した。

Ｃチャレンジ ウシはＩＢＲで鼻腔内にチャレンジし、続いて３週間後
にＰＩ−３でチャレンジし念。

ウシはチャレンジ前の３日間（ＰＩ−３の場合は１日間
）、さらに各チャレンジ後の１４日間毎日。

肉眼で見える臨床上の徴候および直腸温度について監視
した。ウィルスの消散はチャレンジ後ＩＯ日間監視した
。ウィルス分離のために、鼻腔スワブ（綿棒）　ｆｔＥ
ＢＫ　ｍ抱土に２回続けて通過させた。

２頭のウシはＰＩ−３チヤレンジ前に本実験から除いた
。すなわち、１頭はサルファ剤での処置後に上部呼吸性
ストレス（ｕｐｐｅｒ　ｒｓｓｐｔｒａｔｏｒｙｓｔｒ
ｅｓｓ　）ｔ−発現し、そしてもう１頭は畦間腐らん（
ｆｏｏｔ　ｒｏｔ　）が進行して弱ってしまった。チャ
レンジ後の臨床上の徴候を評価するために、次の評点シ
ステムを用いた。

評点　　徴候 １点　鼻からの透明な分泌物、くしやみ、鼻粘膜炎症、
せき、涙液分泌、唾液分泌過多、鼻損傷。

２点　鼻からの粘液膜性分泌物。

２、結果 すべてのウシはワクチン接稽後の観察期間中ずつと健康
であった。

Ａ　血清学的反応 血清学的結果を表２に要約する。

系列Ｂｔ−接種した４頭のウシはＩＢＲ抗体価を以前に
もっていたことが判明した。これらのウシはＰＩ−３に
対するそれらの感染ａｔ評価するために本実、験に加え
られた。接触対照は実験の間中ＩＢＲに対して血清反応
陰性のままであり、　　ＩＢＲ感染の不在を示した。系
列Ａを接種した１０頭のウシのうち９頭は二次ワクチン
接種時にＩＢＲに対して血清反応陰性であり、残りのウ
シはｌ：３の抗体価を有していた。ウシは二次ワクチン
接種後３週間までに幾何平均抗体価（ｇｅｏｍｅｔｒｉ
ｃ　ｍｅａｎ　ａｎｔｉｂｏｄｙｔ　ｉ　ｔ　ｅ　ｒ　
：　ＧＭＡＴと略す）≧１：１６ｆｔ発現した（１ニア
から＞１：３２までの範囲）。ワクチン接種ウシはチャ
レンジ後氏名反応を示した。

一般に、系列Ａと系列Ｂの両方のワクチンを接種したウ
シは二次ワクチン接種時にＰＩ−３抗体反応をほとんど
又は全く示さなかった。二次ワクチン接種の６週間後の
ＰＩ−３チャレンジ時点に、系列Ａを接種したウシはン
１　：　２７３．５のＧＭＡＴを有してあり、そして系
列Ｂを接触したウシは〉３５６のＧＭＡＴを有していた
（１：２１から〉１：５１２ｔでの範囲）。

ウシは系列Ａおよび系列Ｂに関してそれぞれ≧１　：　
５１０６オ！び〉１　：　１８０２３　（１’）　ＢＶ
Ｄ　ＧＭＡＴ　を示した（　１　：　９１５から〉１　
：　６２５００までの範囲）。

表　　　２ 逆数幾何平均抗体価 ＩＢＲ／　ＢＶＤ　／　ＰＩ−３（ＫＶ）免疫反応実験
Ｎ、Ａ、＝分析せず Ｂ　　ＩＢＲチャレンジ後の評価 チャレンジ直後に実施したＩＢＲチャレンジウィルスの
２通りの滴定は、ウシが１０”’　ＴＣＩＤ詩でもって
チャレンジされたことを示し友。

系列Ａｔ−接種したウシは、対照群と比較したとき、チ
ャレンジ後３臼目と４日目に直腸温度の有意な（ｐ　（
０，０５）低下を示した。

ＩＢＲウィルスの分離はチャレンジ後１ｏ日間監視した
。すべてのウシはチャレンジ前にはＩＢＲウィルスを保
有していなかった。ＩＢＲウィルスは１ｏ日間の全期間
中ワクチン非接種対照のすべてから回収された（回収率
１００　％　）。ワクチン接種ウシでは、非接種対照と
比較したとき、９日目（ｒ〈０，０５　）と１００日目
　ｐ＜　０．０１　）にウィルス回収の有意な減少が見
られた。

ＩＢＲチャレンジ後に、ワクチン接種群ＡおよびＢ並び
忙対照の間に見られ九臨床上の徴候は予想したよりも穏
やかなものであった。すなわち、ワクチン接種群と対照
群の間には有意な差がなかった。しかしながら、ワクチ
ン接種動物では臨床上の評点が低かった。

ＣＰＩ−３チヤレンジ後の評価 チャレンジ直後に実権した２通りの滴定の結果は、ウシ
が１０”　ＴＣＩＤｓｏのＰＩ−３ウイルスでもってチ
ャレンジされたことを示した０ ＰＩ−３感染症の臨床的徴候は軽度ないし不顕性であっ
た。

すべてのウシはチャレンジ前にＰＩ−３ウイルスを保有
していなかった。ＰＩ−３ウイルスはワクチン非接種対
照から平均してウシ１頭あたり７．４日間分離されたが
、系列ＡおよびＢｔ−接種されたつ・シからはそれぞれ
平均してウシ１頭あたり２．９日問および４．３日間分
離された。用量反応は系列Ａで得られた結果と系列Ｂで
得られた結果とを比較するとき明白である。系列Ａおよ
びＢの両ワクチンを接種されたウシでは、ワクチン非接
種対照と比較し九とき、ウィルスの減少が有意であった
（ｐ（０，Ｏｌ）。

実施例４ 不活化は実施例１に記載した方法を用いて行った。

実施例５ ブタ伝染性胃腸炎ウィルス（ＴＧＥＶ　）の不活化ワク
チン Ｐｕｒｄｕｅ株ＴＧＥウィルス（ＡＴＣＣＶＲ−７６３
＞をブタ腎細胞（ＰＫＯ８０９と呼ばれる）上に４回通
過させてマスタ一種子ウィルスをつくり、その後これを
ブタ腎細胞に３回そしてＣｒａｎｄｅｌｌネコ腎細胞（
ＡＴＣＣＣＣＬ　９４　）に２回通過させた。このウィ
ルスは１０チ以下のウシ血清を含むイーグル■Ｘ中のＣ
ｒａｎｄ＠ｌｌネコ腎細胞（ＡＴＣＣＣＣＬ　９４　）
上で３５〜３８℃忙て増殖させた。

集密的Ｃｒａｎｄｅｌｌネコ腎細胸（ＡＴＣＣＣＣＬ　
９４　）単層を含む２つの小型ローラーボトルに未希釈
ＴＧＥマスタ一種子ウィルス１ＩＩＬｔ１ｆｔ入れた。

１〜２時間の吸着期間後、ウィルスの増殖培地（２−以
下のウシ血清を含むイーグル■ｙ）を加えて、３５〜３
８℃でウィルスを増殖させた。

上記の如く調製したＴＧＥウィルスを含む１つのローラ
ーボトルを凍結し、解凍しく力価サンプルの採取）、そ
して次のように不活化した（バルクフィルスは少なくと
も１０’−’　／　１回量の不活化前力価を有するであ
ろう）。

そのバルクウィルス（ｂｕｌｋ　ｖｉｒｕｓ　）ｔ’　
１１のガラスボトルに入れて３７℃に加温した。その後
、アスコルビン酸ナトリウム原液（１ｗ／ｖチ）および
硫酸第二銅原液（１，１ｗ／ｖチ）を加えてアスコルビ
ン酸塩の最終濃度ｆｔ５．０５ｍＭ　とし、第二銅イオ
ンの最終濃度１０，０２２ｍＭとした。ボトルの内容物
を通気しながら３７℃で７２時間混合し、その後４℃に
て冷却した。

不活化試験後、バルクウィルスを分割し、アジュバント
を加えて次のような２種類の不活化ワクチンを得た。

ワクチンＡ 不活化したバルクウィルスの半分は４℃で１５〜加時間
攪拌することにより１０チ水酸化アルミニウムで処理し
た。

ワクチンＢ 不活化したバルクウィルスの残りの半分は次の通りにア
ジュバントを加えた： 溶液１はＤｒａｋｏｉｌ　６■９５−に乳化剤５＃Ｌｌ
−加えたものである。

溶液２は死滅ＴＧＥウィルス４７．５　Ｉｌｌ　Ｋ　Ｔ
ｗｅｅｎ　８０２．５ＩｒＬｔを加えたものである。

溶液１（２１１１ｊ）を溶液２（７Ｉｎｔ）に加え、Ｐ
ｅｒｆｅｋｔｕｍ乳化針を用いて混合し、その後ワクチ
ン接種に使用した。

代理人　弁理士　　秋　沢　政　光 信１名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、生きているウィルスまたは細菌を実質的に含まず、
   生きているウィルスまたは細菌を酸素および重金属イオ
   ン源の存在下にアスコルビン酸および／またはその塩で
   不活化することにより得られた不活化ウィルスまたは細
   菌を、製剤上許容されるキャリアーと共に含有してなる
   薬剤組成物。 ２、予防薬として有効な量の不活化ウィルスを含み、不
   活化ウイルスワクチンである請求項１記載の組成物。 ３、不活化ワクチンはブタ伝染性胃腸炎ウィルス、パル
   ボウイルス、ヘルペスウィルス群のウィルス、パラミク
   ソウィルス、パラインフルエンザ−３ウィルス、ウシコ
   ロナウイルス、およびウシＲＳ（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒ
   ｙｓｙｎｃｙｉａｌ）ウィルスから成る群より選ばれる
   ウィルスに対するワクチンである請求項２記載の組成物
   。 ４、不活化ワクチンはウシ伝染性鼻気管炎−ウィルス性
   下痢−パラインフルエンザ−３に対する複合ワクチンで
   ある。請求項３記載の組成物。 ５、予防薬として有効な量の不活化細菌を含み、細菌に
   対するワクチンである、請求項１記載の組成物。 ６、金属イオン源が銅塩、鉄塩、亜鉛塩、および水銀含
   有化合物から成る群より選ばれる方法により調製された
   、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。 ７、金属イオン源は水銀含有化合物のチメロサールであ
   る、請求項６記載の組成物。 ８、生きているウィルスまたは細菌がサボニンをさらに
   含む媒質中で不活化されたものである、請求項１〜７の
   いずれか１項に記載の組成物。 ９、生きているウィルスまたは細菌が抗原安定性を高め
   ることのできる安定化剤の存在下で不活化されたもので
   ある、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。 １０　安定化剤はウシ（胎児）子ウシ血清である、請求
   項９記載の組成物。 １１　生きているウィルスまたは細菌を酸素および重金
   属イオン源の存在下にアスコルビン酸および／またはそ
   の塩で不活化することにより得られた不活化ウィルスま
   たは細菌を、製剤上許容されるキャリアーと混合するこ
   とから成る、薬剤組成物の製造方法。 １２　生きているウィルスまたは細菌を、酸素および重
   金属イオン源の存在下に、アスコルビン酸および／また
   はその塩で不活化することから成る、生きているウィル
   スまたは細菌を実質的に含まない薬剤組成物の製造方法
   。 １３　生きているウィルスまたは細菌を、酸素および重
   金属イオン源の存在下に、アスコルビン酸および／また
   はその塩で不活化する方法により得られた、生きている
   ウィルスまたは細菌を実質的に含まない治療用物質また
   は組成物。 １４　ウィルスまたは細菌感染症の予防用の不活化ワク
   チン組成物を製造するための、生きているウィルスまた
   は細菌を酸素および重金属イオン源の存在下にアスコル
   ビン酸および／またはその塩で不活化する方法により得
   られた、生きているウィルスまたは細菌を実質的に含ま
   ない物質または組成物の使用。