EA016258B1 - Рекомбинантные грибы, продуцирующие каротиноиды, и способы их применения - Google Patents

Рекомбинантные грибы, продуцирующие каротиноиды, и способы их применения Download PDF

Info

Publication number
EA016258B1
EA016258B1 EA200701974A EA200701974A EA016258B1 EA 016258 B1 EA016258 B1 EA 016258B1 EA 200701974 A EA200701974 A EA 200701974A EA 200701974 A EA200701974 A EA 200701974A EA 016258 B1 EA016258 B1 EA 016258B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
fungus
carotenoid
polypeptide
polypeptides
oleagenic
Prior art date
Application number
EA200701974A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200701974A1 (ru
Inventor
Ричард Бэйли
Кевин Т. Мадден
Джошуа Трухарт
Original Assignee
Микробиа, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Микробиа, Инк. filed Critical Микробиа, Инк.
Publication of EA200701974A1 publication Critical patent/EA200701974A1/ru
Publication of EA016258B1 publication Critical patent/EA016258B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L31/00—Edible extracts or preparations of fungi; Preparation or treatment thereof
    • A23L31/10—Yeasts or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P23/00—Preparation of compounds containing a cyclohexene ring having an unsaturated side chain containing at least ten carbon atoms bound by conjugated double bonds, e.g. carotenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L31/00—Edible extracts or preparations of fungi; Preparation or treatment thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение обеспечивает системы для продуцирования рекомбинантных олеагенных дрожжей или грибов, которые экспрессируют каротиноиды.

Description

Родственные заявки
Настоящая заявка на патент испрашивает приоритет предварительной заявки на патент и8 № 60/663621 от 18 марта 2005 г., содержание которой полностью включается в настоящее описание в качестве ссылки.
Предпосылки изобретения
Каротиноиды представляют собой органические пигменты, которые имеют цвет от желтого до красного и вырабатываются в естественных условиях определенными организмами, в том числе фотосинтетическими организмами (например, растениями, водорослями, цианобактериями), а также некоторыми грибами. Каротиноиды являются ответственными за оранжевый цвет моркови, а также за розовую окраску фламинго и лосося и за красную окраску омаров и креветок. Однако животные не могут вырабатывать каротиноиды и должны получать их в пищевом рационе.
Каротиноидные пигменты (например, β-каротин и астаксантин) используют в промышленности в качестве ингредиентов пищевого и кормового сырья, которые одновременно выполняют питательную функцию и повышают потребительские свойства. Так, например, астаксантин широко используют при разведении лососевых рыб, чтобы обеспечить оранжевую окраску, характерную для их диких сородичей. Некоторые каротиноиды являются предшественниками витамина А. Кроме того, каротиноиды обладают антиоксидантными свойствами и могут быть полезными для здоровья (см., например, 1уопоисЫ е! а1., ΝιιΙγ. Сапсег 16:93, 1991; бюуапписа е! а1., 1. Ν;·ι11. Сапсег 1пх!. 87:1767, 1995; М1к1, Риге Арр1. Сйеш. 63:141, 1991; Сйете е! а1., Апйсапсег Кех. 19:1849, 1999; ^апд е! а1., АпбшкгоЬ. Адеп1х СйешоШег. 44:2452, 2000). Некоторые каротиноиды, в частности β-каротин, ликопин и лютеин, в настоящее время поступают в продажу в качестве пищевых добавок.
В общем случае биологические системы, которые вырабатывают каротиноиды, не поддаются промышленной обработке и/или вырабатывают эти соединения в таком малом количестве, что их производство в промышленных масштабах является нецелесообразным. Поэтому большинство каротиноидов, применяемых в промышленности, получают путем химического синтеза. Таким образом, существует потребность в усовершенствованных биологических системах, продуцирующих каротиноиды. Ранее предпринимались попытки модифицировать определенные бактерии или грибы при помощи генной инженерии, чтобы получать более высокое содержание каротиноидов (см., например, М1хатеа е! а1., 1. Βίο1ес1шо1. 59:169, 1998; У1ххег е! а1., РЕМ8 Уеах! Кехеагсй 4:221, 2003). Однако при этом сохраняется потребность в усовершенствованных системах, которые обеспечивают более высокую производительность и простоту выделения.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение обеспечивает усовершенствованные системы, предназначенные для биологической выработки каротиноидов. Согласно одному аспекту изобретение охватывает открытие, которое желательно для получения каротиноидов в олеагенных организмах. Не желая ограничиваться какой-либо конкретной теорией, авторы настоящего изобретения предполагают, что биологические системы могут аккумулировать каротиноиды в большом количестве, если указанные соединения заключены в липидные тела. Однако, несмотря на высокое абсолютное содержание, каротиноиды, аккумулированные в липидных телах в олеагенных организмах, можно легко выделять посредством выделения липидных тел.
Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает олеагенные грибы (включая, например, дрожжи или другие одноклеточные грибы), которые вырабатывают один или несколько каротиноидов. Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает способы получения указанных дрожжей и грибов, способы применения таких дрожжей и грибов для получения каротиноидов, а также способы получения составов, содержащих каротиноиды, в частности, в форме пищевых или кормовых добавок либо питательных добавок с использованием каротиноидов, которые вырабатываются в указанных дрожжах или грибах. В частности, настоящее изобретение обеспечивает системы и способы получения дрожжей и грибов, содержащих одну или несколько олеагенных и/или каротиногенных модификаций и/или изменений их способности вырабатывать каротиноиды по сравнению с идентичными организмами, в которых такие модификации отсутствуют.
Настоящее изобретение включает также общее представление о том, что аккумулирующие липиды системы являются полезными для получения и/или выделения липофильных агентов (в частности, но без ограничения, изопреноидов или производных соединений изопреноидов). Таким образом, согласно изобретению желательно сконструировать организмы для получения таких липофильных агентов и/или для аккумулирования липидов.
Различные другие аспекты настоящего изобретения станут очевидны для специалистов в данной области техники из данного описания, включающего прилагаемую формулу изобретения.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1А-Ш представлены некоторые известные каротиноиды.
Фиг. 2 показывает путь возможного аккумулирования достаточного количества ацетил-КоА (кофермент А-редуктазы) и ΝΛΩΡΗ (шсо!шаш1бе абешпе бшис1ео!1бе фосфат, никотинамидадениндинуклеотидфосфат) в цитозоле олеагенных организмов, чтобы обеспечить получение цитозольных липидов в
- 1 016258 значительном количестве. Ферменты: 1 - пируватдекарбоксилаза, 2 - малатдегидрогеназа, 3 - малатдегидрогеназа, 4 - пируватдегидрогеназа, 5 - цитратсинтаза, 6 - АТФ-(аденозинтрифосфат)цитратлиаза, 7 цитрат/малаттранслоказа.
На фиг. ЗА и 3В представлен путь мевалонатного биосинтеза изопреноидов, который обычно происходит в эукариотах, включая грибы.
На фиг. 4 показан путь мевалонат - независимого биосинтеза изопреноидов, известный также как путь ΌΧΡ, который обычно реализуется в бактериях и в пластидах растений.
На фиг. 5 показаны промежуточные соединения, образующиеся на пути биосинтеза изопреноидов и их встраивание в пути биосинтеза других биомолекул, включая каротиноиды, а также некаротиноидные соединения, в частности стеролы, стероиды и витамины, например витамин Е или витамин К.
На фиг. 6А-6О показаны различные пути биосинтеза каротиноидов. На фиг. 6А выделены ветви, ведущие к различным циклическим и ациклическим ксантофиллам, на фиг. 6В показаны некоторые пути синтеза дрожжевого гриба X. беибгоФоиБ, который вырабатывает дициклические и моноциклические каротиноиды, включая астаксантин, на фиг. 6С - соединительные пути для превращения β-каротина в один из множества других каротиноидов, включая астаксантин, а на фиг. 6Ό - возможные пути синтеза циклических каротиноидов и обычных растительных и водорослевых ксантофиллов из нейроспорина.
На фиг. 7А-7С показана структура некоторых репрезентативных грибных полипептидов редуктазы НМС-СоА (З-гидрокси-З-метилглутарил-КоА). Можно видеть, что эти полипептиды обладают очень высокой идентичностью в каталитической зоне, а также содержат комплексные трансмембранные домены. В некоторых вариантах реализации изобретения эти трансмембранные домены разрушают или удаляют, чтобы получить, например, гиперактивную версию полипептида.
На фиг. 8Λ-8Ό показаны схематические представления плазмид, которые образуются и подробно описываются в приведенных далее примерах.
Определения
Каротиногенная модификация: термин каротиногенная модификация, используемый в данном описании, относится к модификации организма-хозяина, который регулирует продуцирование одного или нескольких каротиноидов в соответствии с настоящим описанием. Так, например, каротиногенная модификация может повышать уровень продуцирования одного или нескольких каротиноидов и/или изменять относительные уровни продуцирования различных каротиноидов. В принципе, каротиногенная модификация согласно изобретению может представлять собой любую химическую, физиологическую, генетическую или иную модификацию, которая соответствующим образом изменяет в организмехозяине продуцирование одного или нескольких каротиноидов, вырабатываемых этим организмом, по сравнению с уровнем продуцирования в идентичном организме, не подвергнутом такой же модификации. Однако в большинстве вариантов реализации изобретения каротиногенная модификация является генетической модификацией, которая обычно приводит к повышению продуцирования одного или нескольких выбранных каротиноидов. В некоторых вариантах реализации изобретения выбранный каротиноид представляет собой один или несколько из следующих каротиноидов: астаксантин, β-каротин, кантаксантин, лютеин, ликопин, фитоин, зеаксантин и/или модификации зеаксантина или астаксантина (например, глюкозид, этерифицированный зеаксантин или астаксантин). В некоторых вариантах реализации изобретения выбранный каротиноид представляет собой один или несколько ксантофиллов и/или их модификацию (например, глюкозид, этерифицированные ксантофиллы). В некоторых вариантах реализации изобретения указанный ксантофилл выбирают из группы, включающей астаксантин, лютеин, зеаксантин, ликопин и их модификации. В некоторых вариантах реализации изобретения выбранный каротиноид представляет собой один или несколько из следующих каротиноидов: астаксантин, β-каротин, кантаксантин, лютеин, ликопин и зеаксантин и/или модификации зеаксантина или астаксантина. В некоторых вариантах реализации изобретения указанный каротиноид представляет собой β-каротин. В некоторых вариантах реализации изобретения выбранный каротиноид представляет собой астаксантин. В некоторых вариантах реализации изобретения выбранный каротиноид не является β-каротином.
Каротиногенный полипептид: термин каротиногенный полипептид, используемый в данном описании, относится к любому полипептиду, который участвует в процессе выработки каротиноидов в клетке и может включать полипептиды, которые участвуют в процессах, отличных от продуцирования каротиноидов, однако, активность которых оказывает влияние на объем или уровень продуцирования одного или нескольких каротиноидов, например, за счет потребления субстрата или реагента, используемого каротиноидным полипептидом, непосредственно участвующим в продуцировании каротиноидов. Каротиногенные полипептиды включают полипептиды биосинтеза изопреноидов, полипептиды биосинтеза каротиноидов и конкурентные полипептиды биосинтеза каротиноидов в соответствии с приведенными здесь определениями терминов. Данный термин включает также полипептиды, которые могут оказывать влияние на степень аккумулирования каротиноидов в липидных телах.
Каротиноид: термин каротиноид, используемый в данном описании, относится к разнообразному по структуре классу пигментов, которые получают из промежуточных соединений изопреноидного пути. Важным этапом в биосинтезе каротиноидов является образование фитоена из геранилгеранилпирофос- 2 016258 фата. Каротиноиды могут быть ациклическими или циклическими и могут содержать или не содержать кислород, поэтому термин каротиноиды включает как каротины, так и ксантофиллы. В общем случае каротиноиды представляют собой углеводородные соединения, имеющие полиенуглеродный каркас, формально полученные из пятиуглеродного соединения ΙΡΡ (изопентилпирофосфат), включая тритерпены (С30 диапокаротиноиды) и тетратерпены (С40 каротиноиды), а также их кислородосодержащие производные и другие соединения, которые имеют длину, например, С35, С50, С60, С70, С80 или иную длину. Многие каротиноиды обладают сильными абсорбирующими свойствами и могут иметь длину более С200. С30 диапокаротиноиды обычно состоят из шести изопреноидных единиц, соединенных таким образом, что расположение изопреноидных единиц является противоположным в центре молекулы, при этом две центральные метильные группы находятся в позициях 1, 6, а остальные неконцевые метильные группы находятся в позициях 1, 5. Такие С30 каротиноиды можно формально получить из ациклической структуры С30Н42, имеющей длинную центральную цепь из конъюгированных двойных связей, способом: (1) гидрогенизации, (2) дегидрогенизации, (3) циклизации, (4) окисления, (5) этерификации/гликозилирования или комбинации этих способов. С40 каротиноиды обычно состоят из восьми изопреноидных единиц, соединенных таким образом, что расположение изопреноидных единиц является противоположным в центре молекулы, при этом две центральные метильные группы находятся в позициях 1, 6, а остальные неконцевые метильные группы находятся в позициях 1, 5. Такие С40 каротиноиды можно формально получить из ациклической структуры С40Н56, имеющей длинную центральную цепь из конъюгированных двойных связей, способом: (1) гидрогенизации, (2) дегидрогенизации, (3) циклизации, (4) окисления, (5) этерификации/гликозилирования или комбинации этих способов. Класс С40 каротиноидов включает также некоторые соединения, которые получаются в результате перестройки углеродного каркаса или (формального) удаления части этой структуры. В природе идентифицировано более 600 различных каротиноидов. Некоторые распространенные каротиноиды представлены на фиг. 1. Каротиноиды включают, в частности, но без ограничения: антераксантин, адонирубин, адониксантин, астаксантин, кантаксантин, капсорубин, β-криптоксантин, α-каротин, β-каротин, β,ψ-каротин, δ-каротин, ε-каротин, эхиненон, 3-гидроксиэхиненон, З'-гидроксиэхиненон, γ-каротин, ψ-каротин, 4-кето-у-каротин, ζ-каротин, α-криптоксантин, деоксифлексиксантин, диатоксантин, 7,8-дидегидроастаксантин, дидегидроликопин, фукоксантин, фукоксантинол, изорениератин, β-изорениератин, лактукаксантин, лютеин, ликопин, миксобактон, неоксантин, нейроспорин, гидроксинейроспорин, перидинин, фитоин, родопин, родопин глюкозид, 4-кеторубиксантин, сифонаксантин, сфероиден, сфероиденон, спириллоксантин, торулин, 4кетоторулин, З-гидрокси-4-кетоторулин, уриолид, уриолид ацетат, виолаксантин, зеаксантин-βдиглюкозид, зеаксантин и С30 каротиноиды. Кроме того, каротиноидные соединения включают производные этих молекул, которые могут содержать гидрокси-, метокси-, оксо-, эпокси-, карбокси- или альдегидные функциональные группы. Указанные каротиноидные соединения включают также сложный эфир (например, сложный гликозидный эфир, сложный эфир жирных кислот) и сульфатные производные (например, этерифицированные ксантофиллы).
Полипептид биосинтеза каротиноидов: термин полипептид биосинтеза каротиноидов относится к любому полипептиду, который участвует в синтезе одного или нескольких каротиноидов. Такие полипептиды биосинтеза каротиноидов включают, например, полипептиды фитоинсинтазы, фитоиндегидрогеназы (или десатуразы), ликопинциклазы, каротиноидкетолазы, каротиноидгидроксилазы, астаксантинсинтазы, каротиноидэпсилонгидроксилазы, ликопинциклазы (субъединицы бета и эпсилон), каротиноидглюкозилтрансферазы и ацил-КоА: диацилглицеринацилтрансферазы. Репрезентативные примеры последовательностей полипептидов биосинтеза каротиноидов представлены в табл. 17-25.
Ген: термин ген, используемый в данном описании, в общем случае относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей полипептид и, возможно, включающей некоторые регуляторные элементы, которые могут оказывать влияние на экспрессию одного или нескольких генных продуктов (т.е. РНК или белка).
Гетерологичный: термин гетерологичный, используемый в данном описании применительно к генам или полипептидам, относится к гену или полипептиду, который не встречается естественным образом в организме, в котором он экспрессируется. Следует понимать, что, в общем случае, когда гетерологичный ген или полипептид выбирают для введения в клетку-хозяина и/или для экспрессии клеткойхозяином, конкретный организм-источник, из которого могут быть выбраны гетерологичный ген или полипептид, не является существенным для реализации настоящего изобретения. Учитываемые обстоятельства могут включать, например, насколько близко связаны в эволюции организмы источника и хозяина или как организм-источник связан с другими организмами-источниками, из которых выбраны последовательности других соответствующих полипептидов.
Клетка-хозяин: используемый в данном описании термин клетка-хозяин представляет собой дрожжевую или грибную клетку, которую подвергают определенным манипуляциям согласно настоящему изобретению, чтобы аккумулировать липид и/или экспрессировать один или несколько каротиноидов в соответствии с данным описанием. Термин модифицированная клетка-хозяин, используемый в данном описании, представляет собой клетку-хозяина, которая содержит по меньшей мере одну олеагенную модификацию и/или по меньшей мере одну каротиногенную модификацию согласно настоящему
- 3 016258 изобретению.
Выделенный: термин выделенный, используемый в данном описании, означает, что выделенный элемент отделен по меньшей мере от одного компонента, с которым он был предварительно объединен. Если большинство других компонентов удалено, то выделенный элемент является очищенным. Выделение и/или очистку можно выполнить любым способом, известным специалистам в данной области техники, включая, например, фракционирование, экстракцию, осаждение или иной способ разделения.
Конкурентный полипептид биосинтеза изопреноидов: термин конкурентный полипептид биосинтеза изопреноидов, используемый в данном описании, относится к полипептиду, экспрессия которого в клетке уменьшает содержание геранилгеранилпирофосфата (ССРР), необходимого для реализации пути биосинтеза каротиноидов. Например, конкурентные полипептиды биосинтеза изопреноидов включают ферменты, которые действуют на промежуточные соединения изопреноидов прежде ССРР, что приводит к уменьшению продуцирования ССРР (см., например, фиг. 5). Скваленсинтаза является одним из конкурентных полипептидов биосинтеза изопреноидов согласно настоящему изобретению; репрезентативные последовательности скваленсинтазы представлены в табл. 16. Другими конкурентными полипептидами биосинтеза изопреноидов согласно настоящему изобретению являются ферменты пренилдифосфатсинтазы и парагидроксибензоат (ПГБ) полипренилтрансферазы; репрезентативные ферменты пренилдифосфатсинтазы и полипептиды ПГБ полипренилтрансферазы представлены в табл. 29 и 30 соответственно.
Полипептид биосинтеза изопреноидов: термин полипептид биосинтеза изопреноидов относится к любому полипептиду, который участвует в синтезе изопреноидов. Например, как рассматривается в данном описании, ацетоацетил-КоА-тиолаза, НМС-СоА-синтаза, НМС-СоА-редуктаза, мевалонаткиназа, фосфомевалонаткиназа, мевалонатпирофосфатдекарбоксилаза, 1РР изомераза, РРР (фарнезилпирофосфат)синтаза и ССРР-синтаза участвуют в мевалонатном пути биосинтеза изопреноидов. Каждый из этих белков является также полипептидом биосинтеза изопреноидов в рамках настоящего изобретения. Последовательности репрезентативных примеров этих ферментов представлены в табл. 7-15.
Изопреноидный путь: термин изопреноидный путь, используемый в данном описании, относится к метаболическому пути, который вырабатывает или использует пятиуглеродный метаболит - изопентилпирофосфат (1РР). Как указано в данном описании, распространенный предшественник изопреноиодов 1РР можно получить двумя различными путями - мевалонатным путем и немевалонатным путем. Термин изопреноидный путь является достаточно общим и включает оба этих типа пути. Биосинтез изопреноидов из 1РР происходит в результате полимеризации нескольких пятиуглеродных изопреновых субъединиц. Изопреноидные метаболиты, полученные из 1РР, имеют различные размеры и химические структуры и включают циклические и ациклические молекулы. Изопреноидные метаболиты включают, в частности, но без ограничения, монотерпены, сесквитерпены, дитерпены, стерины и полипренолы, в частности каротиноиды.
Олеагенная модификация: термин олеагенная модификация, используемый в данном описании, относится к модификации организма-хозяина, которая обеспечивает желаемую олеагенность указанного организма-хозяина в соответствии с данным описанием. В некоторых случаях организм-хозяин уже в исходном состоянии является олеагенным, т.е. способным аккумулировать липид с содержанием по меньшей мере около 20% от сухой клеточной массы. Тем не менее, может оказаться желательным применить к такому организму олеагенную модификацию в соответствии с настоящим изобретением, чтобы, например, увеличить (или в некоторых случаях, возможно, уменьшить) его суммарное аккумулирование липидов или отрегулировать типы или содержание одного или нескольких конкретных липидов, которые он аккумулирует (например, увеличить относительное аккумулирование триацилглицерина). В других случаях организм-хозяин может быть неолеагенным (хотя при этом он может содержать некоторые ферментные и регуляторные компоненты, используемые в других организмах для аккумулирования липидов) и может потребовать олеагенной модификации, чтобы стать олеагенным согласно настоящему изобретению. Настоящее изобретение включает также применение олеагенной модификации к неолеагенным штаммам-хозяевам, чтобы повысить их олеагенность, однако даже после такой модификации они могут не стать олеагенными согласно приведенному здесь определению. В принципе, олеагенная модификация может представлять собой любую химическую, физиологическую, генетическую или иную модификацию, которая соответствующим образом изменяет олеагенность организма-хозяина по сравнению с идентичным организмом, не подвергнутым олеагенной модификации. Однако в большинстве вариантов реализации изобретения олеагенная модификация включает генетическую модификацию, которая обычно вызывает повышение продуцирования и/или активности одного или нескольких олеагенных полипептидов. В некоторых вариантах реализации изобретения олеагенная модификация включает по меньшей мере одну химическую, физиологическую, генетическую или иную модификацию. В других вариантах реализации изобретения олеагенная модификация включает более чем одну химическую, физиологическую, генетическую или иную модификацию. В некоторых аспектах изобретения при использовании более чем одной модификации такие модификации могут содержать любую комбинацию химических, физиологических, генетических или иных модификаций (например, одну или несколько генетических модификаций и химических или физиологических модификаций).
Олеагенный полипептид: термин олеагенный полипептид, используемый в данном описании, от
- 4 016258 носится к любому полипептиду, который участвует в процессе аккумулирования липидов в клетке, и может включать полипептиды, которые участвуют в процессах, отличных от биосинтеза липидов, однако их активность оказывает влияние на степень или уровень аккумулирования одного или нескольких липидов, например, путем потребления субстрата или реагента, используемого олеагенным полипептидом, который непосредственно участвует в аккумулировании липидов. Например, как рассматривается в настоящем описании, ацетил-КоА-карбоксилаза, пируватдекарбоксилаза, изоцитратдегидрогеназа, АТФ (аденозинтрифосфат)цитратлиаза, маликфермент и АМФ (аденозинмонофосфат)деаминаза среди других белков участвуют в аккумулировании липидов в клетках. В общем случае ожидается, что снижение активности пируватдекарбоксилазы или изоцитратдегидрогеназы и/или повышение активности ацетилКоА-карбоксилазы, АТФ-цитратлиазы, маликфермента и/или АМФ-деаминазы способствует олеагенности. Каждый из этих белков представляет собой олеагенный полипептид, используемый в настоящем изобретении. Последовательности репрезентативных примеров этих ферментов представлены в табл. 1-6.
Олеагенный: термин олеагенный относится к способности организма аккумулировать липид в количестве по меньшей мере около 20% от его сухой клеточной массы. В некоторых вариантах реализации изобретения олеагенные дрожжи или грибы аккумулируют липид по меньшей мере до примерно 25% их сухой клеточной массы. В других вариантах реализации изобретения олеагенные дрожжи или грибы аккумулируют липид в пределах примерно 20-45% их сухой клеточной массы. В некоторых вариантах реализации изобретения олеагенные организмы могут аккумулировать липид примерно до 70% их сухой клеточной массы. В некоторых вариантах реализации изобретения олеагенные организмы могут аккумулировать большую долю всех аккумулированных липидов в форме триацилглицерина. В некоторых вариантах реализации изобретения основная часть аккумулированного липида находится в форме триацилглицерина. Альтернативно или дополнительно, липид можно аккумулировать в форме внутриклеточных липидных тел или масляных тел. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение использует дрожжи или грибы, которые являются природно олеагенными. В некоторых аспектах природно олеагенные организмы модифициуют (например, генетическим, химическим или иным способом), чтобы дополнительно увеличить содержание аккумулированного липида в организме. В других вариантах реализации изобретения дрожжи или грибы, которые не являются природно олеагенными, модифицируют (например, генетическим, химическим или иным способом), чтобы аккумулировать липид согласно данному описанию. Для задач настоящего изобретения Хаи!орйу11ошусек беибгогйоик (РйаШа гйобохуша) и СаиФба ибйк не являются природно олеагенными грибами.
Полипептид: термин полипептид, используемый в данном описании, в общем случае имеет свое традиционное значение полимера по меньшей мере трех аминокислот. Однако этот термин используется также применительно к специфическим функциональным классам полипептидов, например олеагенные полипептиды, каротиногенные полипептиды, полипептиды биосинтеза изопреноидов, полипептиды биосинтеза каротиноидов и конкурентные полипептиды биосинтеза изопреноидов. Для каждого такого класса в настоящем описании приведено несколько примеров известных последовательностей этих полипептидов. Однако для рядовых специалистов в данной области техники очевидно, что термин полипептид является достаточно общим и включает не только полипептиды, имеющие полную последовательность, приведенную в данном описании (или в ссылке или конкретно указанной базе данных), но также и полипептиды, которые представляют собой функциональные фрагменты (т.е. сохраняющие по меньшей мере одну функцию) таких полных полипептидов. Кроме того, специалисты в данной области техники понимают, что последовательности белка обычно допускают некоторое замещение без нарушения функциональности. Таким образом, любой полипептид, который сохраняет функциональность и имеет идентичность общей последовательности по меньшей мере примерно 30-40%, часто более чем примерно 50, 60, 70 или 80%, и, кроме того, обычно содержит по меньшей мере одну область с более высокой идентичностью, часто более чем 90% или даже 95, 96, 97, 98 или 99% в одной или нескольких высоко консервативных областях (например, полипептиды изоцитратдегидрогеназы часто содержат консервативный АМФсвязывающий фрагмент; полипептиды НМО-СоА редуктазы обычно содержат высоко консервативный каталитический домен (см., например, фиг. 7); ацетил-СоА-карбоксилаза обычно содержит домен карбоксилтрансферазы; см., например, Оо\ушпд е! а1., Сйеш. АЬк. 93:484, 1980; Ой е! а1., Се11 41:249, 1985; Л!гаракбее е! а1. Сигг Рго!еш Рер! 8с1. 4:217, 2003; патент И8 № 5349126, все из которых полностью включены в данное описание в качестве ссылки), обычно включающие по меньшей мере 3-4 и часто до 20 или более аминокислот, с другим полипептидом того же самого класса, включается в соответствующий термин полипептид, используемый в данном описании.
Организм-источник: термин организм-источник, используемый в данном описании, относится к организму, в котором конкретную полипептидную последовательность можно найти в естественных условиях. Так, например, если один или несколько гетерологичных полипептидов экспрессируются в организме-хозяине, то организм, в котором указанные полипептиды экспрессируются в природе (и/или из которого их гены были первоначально клонированы), называют организмом-источником. Если несколько гетерологичных полипептидов экспрессируются в организме-хозяине, то один или несколько организмов-источников можно использовать для независимой селекции каждого из таких гетерологичных полипептидов. Следует понимать, что все организмы, которые в естественных условиях содержат
- 5 016258 соответствующие полипептидные последовательности, в соответствии с настоящим изобретением можно использовать в качестве организмов-источников. Репрезентативные организмы-источники включают, например, животных, млекопитающих, насекомых, а также растительные, грибные, дрожжевые, водорослевые, бактериальные, цианобактериальные, архебактериальные и протозойные организмыисточники.
Подробное описание некоторых предпочтительных вариантов реализации изобретения
Как указано выше, согласно настоящему изобретению каротиноиды желательно получать в олеагенных дрожжах и грибах. В соответствии с настоящим изобретением штаммы, которые (1) аккумулируют липид, часто в форме цитоплазматических масляных тел и обычно по меньшей мере около 20% их сухой клеточной массы, и (2) продуцируют каротиноиды на уровне по меньшей мере около 1%, а в некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере около 3-20% их сухой клеточной массы, получают посредством обработки клеток-хозяев (т.е. штаммы, включающие, например, природные штаммы, штаммы, которые были предварительно модифицированы и т.п.). Затем эти обработанные клеткихозяева используют для получения каротиноидов таким образом, чтобы иметь возможность легкого выделения каротиноидов, отделенных в липидных телах.
В общем случае желательно сбалансировать олеагенность и продуцирование каротиноидов в клетках согласно изобретению таким образом, чтобы после достижения минимального желательного уровня олеагенности практически весь остальной углерод, который можно использовать и превращать в продукты биосинтеза, направлялся по пути продуцирования каротиноидов. В некоторых вариантах реализации изобретения эта стратегия включает конструирование олеагенных клеток; в других вариантах реализации изобретения она включает конструирование клеток, которые аккумулируют более высокое содержание липида, в особенности цитоплазматического липида, чем при отсутствии такого конструирования, хотя эти сконструированные клетки могут не стать олеагенными согласно определению, приведенному в данном описании. В других вариантах реализации изобретения степень аккумулирования липида олеагенной клеткой-хозяином фактически снижают, чтобы использовать остальной углерод для продуцирования каротиноидов.
Клетки-хозява.
Рядовым специалистам в данной области техники известно, что существует множество дрожжевых и грибных штаммов, которые являются природно олеагенными и которые продуцируют каротиноиды в естественных условиях. Такие штаммы можно использовать согласно настоящему изобретению в качестве штаммов-хозяев, а также можно конструировать или иным образом обрабатывать, чтобы получать олеагенные штаммы, продуцирующие каротиноиды, в соответствии с изобретением. Альтернативно можно использовать штаммы, которые в естественных условиях не являются ни олеганенными, ни продуцирующими каротиноиды. Кроме того, даже если какой-либо конкретный штамм имеет природную способность к олеагенности или к продуцированию каротиноидов, его природные способности можно откорректировать согласно данному описанию, чтобы изменить уровень продуцирования липида и/или каротиноида. В некоторых вариантах реализации изобретения конструирование или обработка штамма приводит к модификации типа продуциремого липида и/или каротиноида. Так, например, штамм может быть природно олеагенным и/или каротиногенным, однако при помощи инженерии или модификации штамма можно изменить тип липида, который аккумулируется, или тип каротинида, который продуцируется этим штаммом.
При выборе конкретного дрожжевого или грибного штамма для применения согласно настоящему изобретению, как правило, желательно выбирать такой штамм, характеристики культивирования которого позволяют обеспечить производство в промышленном масштабе. Так, например, обычно (хотя не обязательно всегда) является желательным избежать использования филаментных организмов или организмов, которые требуют необычных или строгих условий роста. Однако если можно обеспечить условия промышленного производства, которые позволяют применять филаментные организмы, их можно выбрать в качестве клеток-хозяев. В некоторых вариантах реализации изобретения в качестве клеток-хозяев желательно использовать съедобные организмы, поскольку их при желании можно непосредственно применять в пищевых или кормовых добавках или в качестве питательных добавок. Для простоты производства в некоторых вариантах реализации используют клетки-хозева, которые поддаются генетической модификации средствами молекулярной генетики (например, могут быть эффективно трансформироваными, в особенности с помощью адаптированных или имеющихся векторов; возможно, могут включать и/или объединять различные гены, например, последовательно; и/или имеют известную генетическую последовательность и т.п.), не требуют сложных условий для роста (например, необходимости освещения), являются мезофильными (например, предпочитают для роста температуру в пределах примерно 2532°С), способны ассимилировать разнообразные источники углерода и азота и/или способны к росту до высокой плотности клеток. Альтернативно или дополнительно, в различных вариантах реализации изобретения используют клетки-хозяева, которые растут в форме отдельных клеток, а не многоклеточные организмы (например, как мицелии).
В общем случае, если в соответствии с настоящим изобретением желательно использовать природный олеагенный организм, то возможно применение любого модифицируемого или культивируемого
- 6 016258 олеагенного организма. В некоторых вариантах реализации изобретения применяют дрожжи или грибы, включая, в частности, но без ограничения, виды В1акек1еа, Сапб1ба, Сгур1ососсик, Сипшпдйаше11а, Ырошусек, Могйеге11а, Мисог, РНусошусек, Ру1Ыит, Вйобокропбшш, ВНобо1оги1а, ТпсНокрогоп и Υ;πτο\νί;·ι. В некоторых конкретных вариантах реализации применяют организмы видов, которые включают, в частности, но без ограничения, В1акек1еа йткрога, Сапб1ба ри1сйетша, С. геукаий, С. 1горюа11к, Сгур1ососсик сигуайк, СиппНщНатеНа есЫпи1а1а, С. е1едапк, С. _)арошса, Ырошусек к1агкеуг Ь. НроГегик, МогбегеИа а1рша, М. каЬеШпа, М. гашапшапа, М. ушасеа, Мисог агсше11о1бек, РНусотусек Ь1акек1еапик, Ру1Ыиш пгеди1аге, Вйобокропбшш 1оги1о1бек, ВНобо1оги1а дЫбшк, В. дгасШк, В. дгаш1шк, В. шисбадшока, В. р1шсо1а, ТпсНокрогоп ри11апк, Т. сЫапеиш и Υа^^оν^а йро1убса.
Одни из этих природных олеагенных штаммов также естественно продуцируют каротиноиды, а другие - нет. Встречающиеся в природе каротиногенные олеагенные дрожжи или грибы в большинстве случаев продуцируют каротиноиды лишь в небольшом количестве (менее чем примерно 0,05% сухой клеточной массы). Иногда β-каротин продуцируется в большем количестве, однако высокое содержание других каротиноидов, как правило, не наблюдается.
В общем случае любой организм, который является природно олеагенным и не продуцирующим каротиноиды (например, продуцирует менее чем примерно 0,05% сухой клеточной массы, не продуцирует каротиноид, представляющий интерес), можно использовать в соответствии с настоящим изобретением в качестве клетки-хозяина. В некоторых вариантах реализации изобретения организм представляет собой дрожжи или гриб, в частности, но без ограничения, рода Сапб1ба, Сгур1ососсик, Сипшпдйаше11а, Ырошусек, Могйеге11а, Ру1Ыиш, ТпсНокрогоп и Υа^^оν^а; в некоторых вариантах реализации изобретения организм относится, в частности, но без ограничения, к виду МойегеПа а1рша и ΥηπΌ\νίη 11ро1уПса.
Для сравнения, настоящее изобретение позволяет использовать в качестве клетки-хозяина также любой природно олеагенный организм, продуцирующий каротиноиды. В общем случае настоящее изобретение можно использовать для увеличения потока углерода, направляемого по изопреноидному пути в природных организмах, продуцирующих каротиноиды (в особенности для организмов, отличных от В1акек1еа и РНусошусек), и/или для сдвига продуцирования от одного каротиноида (например, от βкаротина) к другому (например, к астаксантину). Введение одной или нескольких каротиногенных модификаций (например, увеличение экспрессии одного или нескольких эндогенных или гетерологичных каротиногенных полипептидов) в соответствии с настоящим изобретением может обеспечить достижение этих целей.
В некоторых вариантах реализации изобретения используемый олеагенный организм, продуцирующий каротиноиды, представляет собой дрожжи или гриб, в частности, но без ограничения, рода В1акек1еа, Мисог, РНусошусек, Кйобокропбшш и Вйобо1оги1а; в некоторых вариантах реализации изобретения организм относится к видам Мисог агсше11о1бек и Вйобо1оги1а дЫПшк.
В тех случаях, когда в качестве клеток-хозяев в соответствии с настоящим изобретением желательно использовать штаммы, которые являются природно неолеагенными, роды неолеагенных дрожжей или грибов включают, в частности, но без ограничения, АкрегдШик, Войубк, Сегсокрога, Рикагшш (61ЬЬеге11а), КЫууегошусек, Иеигокрога, РешсШшш, РюЫа (Напкепи1а), РисаЫа, ЗассНагошусек, 8с1его1шш, ТпсНобегта и Хап1НорНу11отусек (РНаГПа); в некоторых вариантах реализации изобретения организм относится к роду, включая, в частности, но без ограничения, АкрегдШик шби1апк, А. Ыдег, А. 1епеик, ВоПуПк сшегеа, Сегсокрога ЫсоПапае, Рикалиш Гн)1киго1 (61ЬЬеге11а хеас), К1пууеготусек 1асбк, К. 1асбк, Иеигокрога сгакка, РюЫа рак1опк, Рисаша б1к!шс1а, 8ассНаготусек сегеуШае, 8с1его1шш го1Гкп, ТпсНобегта гееке1 и Хап(НорНу11отусек бепбгогНоик (РНаГПа гНобохута).
Следует понимать, что термин неолеагенный, используемый в данном описании, включает штаммы, которые обладают некоторой естественной способностью аккумулировать липид, в частности, цитоплазматически, однако, не до такого уровня, который можно квалифицировать как олеагенный согласно приведенному здесь определению, а также штаммы, которые не обладают естественной способностью аккумулировать внешний липид, например внемембранный липид. Следует также понимать, что в некоторых вариантах реализации изобретения достаточно увеличить естественный уровень олеагенности конкретной клетки-хозяина, даже если модифицированная клетка не квалифицируется как олеагенная согласно приведенному здесь определению.
Как и природно олеагенные организмы, одни из природно неолеагенных грибов в естественных условиях продуцируют каротиноиды, а другие - нет. Роды природно неолеагенных грибов, которые в естественных условиях не продуцируют каротиноиды (например, продуцируют менее чем примерно 0,05% сухой клеточной массы, не продуцируют каротиноид, представляющий интерес) и могут быть использованы в качестве клеток-хозяев в соответствии с настоящим изобретением, включают, в частности, но без ограничения, АкрегдШик, КЫууегошусек, РешсШйш, 8ассНагошусек и РюЫа; виды включают, в частности, но без ограничения, АкрегдШик пфег и Зассйагошусек сегеуШае. Роды природно неолеагенных грибов, которые в естественных условиях продуцируют каротиноиды и могут быть использованы в качестве клеток-хозяев в соответствии с настоящим изобретением, включают, в частности, но без ограничения, Войубк, Сегсокрога, Рикагшш (61ЬЬеге11а), Иеигокрога, Рисаша, 8с1его1шш, ТпсНобегта и Хап(НорНу11о
- 7 016258 тусек (РНаГДа); виды включают, в частности, но без ограничения, Хап1НорНу11отусек бепбгогНоик (РНаГПа гНобохута).
Как указано выше, любые из множества организмов можно использовать в качестве клеток-хозяев в соответствии с настоящим изобретением. В некоторых вариантах реализации изобретения клеткихозяева представляют собой клетки Уагго\\за 11ро1убса. Достоинства Υ. 11ро1у11са включают, например, возможность регулирования генетики и молекулярной биологии, наличие геномной последовательности (см., например, Зйегтаи е1 а1. Иискю Лабк Век. 32 (Иа1аЬаке 1ккие):И315-8, 2004), пригодность разнообразных экономичных условий для роста и способность роста до высокой плотности клеток. Кроме того, Υ. 11ро1уйса является природно олеагенным, поэтому может требоваться меньшая обработка для получения олеагенного штамма Υ. 11ро1убса, продуцирующего каротиноид, чем для других организмов. Кроме того, в настоящее время существует обширный опыт промышленного применения Υ. 11ро1убса.
Зассйаготусек сегеуЩае также является полезной клеткой-хозяином согласно настоящему изобретению, в особенности благодаря удобству ее применения в экспериментах и богатому опыту, который приобрели исследователи при использовании этого организма. Хотя культивирование Зассйаготусек при высоком содержании углерода может приводить к увеличению образования этанола, это обычно можно преодолеть при помощи технологических или генетических изменений.
Другие полезные клетки-хозяева включают Хап1НорНу11отусек бепбгогНоик (РНаГПа гНобохута), который является удобным для экспериментов и обладает природной каротиногенностью. Штаммы Хап1НорНу11отусек бепбгогНоик (РНаГПа гНобохута) могут продуцировать несколько каротиноидов, включая астаксантин.
ЛкрегдШик шдег и МогйегеНа а1рта в больших количествах аккумулируют лимонную кислоту и жирную кислоту соответственно; МогПеге11а а1рта также является олеагенной.
№игокрога или С1ЬЬеге11а также являются полезными. Они не являются природно олеагенными и имеют тенденцию продуцировать очень низкое количество каротиноидов, поэтому в соответствии с настоящим изобретением может потребоваться значительная модификация. Ыеигокрога и 01ЬЬеге11а считаются относительно удобными для экспериментов. Оба являются мицелиальными грибами, поэтому производство в промышленных масштабах может представлять собой сложную задачу, которую необходимо решить для использования таких штаммов.
Другим полезным видом является Мисог с1гсше11о1бек. Хотя его молекулярная генетика менее доступна для изменений, чем у других организмов, он продуцирует β-каротин в естественных условиях и поэтому может требовать меньшей модификации, чем другие имеющиеся виды.
Молекулярно-генетические преобразования можно выполнить в В1акек1еа, хотя это может потребовать значительных усилий. Кроме того, возможна необходимость создания рентабельных условий для ферментации, например может потребоваться смешивание двух типов спаривания. Грибы рода РНусотусек также являются возможными источниками, которые могут требовать определенных условий процесса ферментации, и эти грибы также могут быть менее пригодными для обработки, чем некоторые другие потенциальные организмы-хозяева.
Для специалистов в данной области техники очевидно, что на выбор конкретной клетки-хозяина для применения в соответствии с настоящим изобретением оказывает влияние, например, выбор последовательностей экспрессии, используемых с гетерологичным полипептидом, который вводят в клетку, а также оказывают влияние различные аспекты условий культивирования и т.п. Известно много о различных требованиях генной регуляции, требованиях к направленным последовательностям белков и требованиям к культивированию различных клеток-хозяев, используемых в соответствии с настоящим изобретением (см., например, относительно Υа^^о\ν^а. ВайН е1 а1. РЕМ8 М1сгоЬю1. Вет. 19:219, 1997; Мабхак е1 а1. 1. Вю1есНпо1. 109:63, 2004; см., например, относительно ХаШНорНуНотусек, Уегбоек е1 а1. Арр1. Επνίгоп МюгоЬю1. 69: 3728-38, 2003 ; У1ккег е1 а1. ЕЕМ8 Υеакΐ Век 4: 221-31, 2003; МаПтех е1 а1. Ап1оше Уап ЕееитеиНоек. 73(2):147-53, 1998; К1т е1 а1. Арр1. Етзгоп М1сгоЬю1. 64(5): 1947-9, 1998; ^егу е1 а1. Ген. 184(1):89-97, 1997; см., например, относительно ЗассНаготусек, СшНпе апб Ешк Мебюбк ш Епхуто1о§у 194:1-933, 1991). Так, например, в некоторых аспектах направленные последовательности клеткихозяина (или тесно связанных аналогов) могут быть полезными для включения направляющих гетерологичных белков в субклеточную локализацию. Например, такие полезные направленные последовательности можно добавлять к гетерологичной последовательности для соответствующей внутриклеточной локализации активности. В других аспектах (например, добавление митохондриальных направленных последовательностей), гетерологичные направленные последовательности можно удалять или изменять в выбранной гетерологичной последовательности (например, изменение или удаление направленных последовательностей растительного хлоропласта организма-источника).
Конструирование олеагенности.
Все живые организмы синтезируют липиды для использования их в своих мембранах и других различных структурах. Однако большинство организмов не аккумулируют суммарный липид в количестве более чем примерно 10% от их сухой клеточной массы, при этом основная часть этого липида обычно располагается в клеточных мембранах.
Была проведена большая биохимическая работа для определения метаболических ферментов, необ
- 8 016258 ходимых для обеспечения олеагенности микроорганизмов (главным образом в целях конструирования одноклеточных масел в качестве промышленных источников арахидоновой кислоты и докозагексаеновой кислоты; см., например, работу Кабебде В1осЫш1е 86:807, 2004, все содержание которой включается в данное описание в качестве ссылки). Хотя эта биохимическая работа была опубликована до настоящего изобретения, нет сообщений об олеагенности бе ηονο, полученной посредством генной инженерии с использованием генов, кодирующих ключевые метаболические ферменты.
Следует отметить, что олеагенные организмы обычно аккумулируют липид только будучи выращенными при избытке углерода и ограничении азота или других питательных веществ. В этих условиях организм легко исчерпывает запасы ограниченного питания, но продолжает ассимилировать источник углерода. Избыток углерода потребляется биосинтезом липидов, таким образом липиды (обычно триацилглицерины) аккумулируются в цитозоле обычно в форме липидных тел.
Как правило, считается, что олеагенный организм должен продуцировать в цитозоле ацетил-КоА и ΝΑΌΡΗ, которые затем могут использоваться механизмом синтазы жирных кислот для выработки липидов. По меньшей мере, в некоторых олеагенных организмах ацетил-КоА вырабатывается в цитозоле под действием АТФ-цитратлиазы, которая катализирует реакцию (1) цитрат + СоА + АТФ -> ацетил-СоА + оксалацетат + АДФ + Ф|.
Разумеется, для того чтобы АТФ-цитратлиаза вырабатывала соответствующее количество ацетилКоА в цитозоле, сначала необходимо иметь определенный запас лимонной кислоты в его субстрате. Лимонная кислота вырабатывается в митохондриях всех эукариотных клеток в результате цикла трикарбоновых кислот (ЦТК) и может перемещаться в цитозоль (на смену малату) цитрат/малаттранслоказой.
В большинстве олеагенных организмах и в некоторых неолеагенных организмах фермент изоцитратдегидрогеназа, который функционирует в митохондриях как часть цикла ЦТК, сильно зависит от АМФ. Поэтому, если АМФ выводится из митохондрий, этот фермент инактивируется. Если изоцитратдегидрогеназа является неактивной, изоцитрат аккумулируется в митохондриях. Затем этот аккумулированный изоцитрат уравновешивается лимонной кислотой предположительно под действием аконитазы. Таким образом, в условиях низкого содержания АМФ цитрат аккумулируется в митохондриях. Как указано выше, митохондриальный цитрат легко транспортируется в цитозоль.
Уменьшение содержания АМФ, который, как предполагается, инициирует в олеагенных организмах каскад реакций, приводящий к аккумулированию цитрата (и, следовательно, ацетил-КоА) в цитоплазме, происходит в результате вышеупомянутого истощения запаса питательного вещества. Когда олеагенные клетки выращивают в присутствии источника избыточного углерода, но в условиях ограничения азота или других питательных веществ, активность АМФ-деаминазы, которая катализирует реакцию (2) АМФ -+ инозин 5'-монофосфат + ЫНз резко повышается. Повышенная активность этого фермента истощает запасы клеточного АМФ как в цитозоле, так и в митохондриях. Удаление АМФ из митохондрий, как полагают, инактивирует АМФзависимую изоцитратдегидрогеназу, что приводит к аккумулированию цитрата в митохондриях и, следовательно, в цитозоле. Эта последовательность событий схематично представлена на фиг. 2.
Как указано выше, олеагенность требует продуцирования как цитозольного ацетил-КоА, так и цитозольного ΝΑΌΡΗ. Предполагается, что во многих олеагенных организмах соответствующие уровни цитозольного ΝΆΌΡΗ обеспечиваются под действием малатдегидрогеназы (фермент 3 на фиг. 2). Некоторые олеагенные организмы (например, Ыротусек и некоторые Сапб1ба), видимо, не содержат малатдегидрогеназ, поэтому, вероятно, другие ферменты могут обладать сравнимой с ними активностью, хотя предполагается, что для синтеза жирных кислот требуется специальный источник ΝΆΌΡΗ (см., например, работы \Уупп е! а1., МютоЬю1. 145:1911, 1999; Кабебде Α6ν. Арр1. М1стоЫо1. 51:1, 2002, обе из которых полностью включены в данное описание в качестве ссылки).
Таким образом, согласно настоящему изобретению олеагенность организма-хозяина можно увеличить, модифицируя экспрессию или активность одного или нескольких полипептидов, участвующих в продуцировании цитозольного ацетил-КоА и/или ΝΑΌΡΗ. Например, модифицируя экспрессию или активность одного или нескольких полипептидов из группы, включающей ацетил-КоА карбоксилазу, пируватдекарбоксилазу, изоцитратдегидрогеназу, АТФ-цитратлиазу, малатдегидрогеназу и АМФдеаминазу, можно повысить олеагенность в соответствии с настоящим изобретением. Типичные полипептиды, которые можно использовать или модифицировать, чтобы повысить олеагенность, в соответствии с настоящим изобретением, включают, в частности, но без ограничения, полипептиды ацетил-КоАкарбоксилазы, пируватдекарбоксилазы, изоцитратдегидрогеназы, АТФ-цитратлиазы, малатдегидрогеназы и АМФ-деаминазы, представленные в табл. 1-6 соответственно.
В некоторых вариантах реализации изобретения, в которых используется олеагенная клетка-хозяин, ферменты и регуляторные компоненты, ответственные за олеагенность, уже имеются, однако могут быть при желании модифицированы, например, путем изменения экспрессии или активности одного или нескольких олеагенных полипептидов и/или введения одного или нескольких гетерологичных олеагенных полипептидов. При использовании в таких вариантах реализации изобретения неолеагенной клеткихозяина, как правило, ожидается, что будет введено по меньшей мере один или несколько гетерологич
- 9 016258 ных олеагенных полипептидов.
Настоящее изобретение предполагает не только введение гетерологичных олеагенных полипептидов, но также и корректировку уровней экспрессии или активности гетерологичных или эндогенных олеагенных полипептидов, включая, например, изменение конститутивных или индуцируемых паттернов экспрессии. В некоторых вариантах реализации изобретения паттерны экспрессии корректируют таким образом, что для индуцирования олеагенности не требуется выращивание в условиях ограничения питания. Например, генетические модификации, содержащие изменение и/или добавление регуляторных последовательностей (например, промоторных элементов, терминаторных элементов), можно использовать для обеспечения определенной регуляции паттернов экспрессии. Такие генетические модификации можно использовать в сочетании с эндогенными генами (например, для регуляции эндогенных олеагенных полипептидов). Альтернативно, такие генетические модификации могут быть включены для того, чтобы обеспечить регуляцию экспрессии по меньшей мере одного гетерологичного полипептида (например, олеагенных полипептидов). Так, для модификации паттернов экспрессии эндогенных олеагенных полипептидов и/или гетерологичных олеагенных полипептидов можно использовать, в частности, но без ограничения, промоторы ТеГ1, СрФ1 в сочетании с эндогенными генами и/или гетерологичными генами. Аналогично этому типичные концевые последовательности включают, в частности, но без ограничения, применение концевых последовательностей ХРК.2 Υ. Про1уОса.
В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один олеагенный полипептид вводят в клетку-хозяин. В некоторых вариантах реализации изобретения в одну и ту же клетку-хозяин вводят несколько (например, два или более) различных олеагенных полипептидов. В некоторых вариантах реализации изобретения несколько олеагенных полипептидов содержат полипептиды из одного и того же организма-источника, в других вариантах реализации изобретения эти несколько полипептидов выбирают независимо из различных организмов-источников.
Репрезентативные примеры олеагенных полипептидов, которые могут быть введены в клеткихозяева или модифицированы в них согласно настоящему изобретению, включают, в частности, но без ограничения, полипептиды, представленные в табл. 1-6. Как указано выше, ожидается, что, по меньшей мере, некоторые из этих полипептидов (например, малатдегидрогеназа и АТФ-цитратлиаза) должны действовать согласованно и, возможно, совместно с одним или несколькими компонентами синтеза жирных кислот, при этом в некоторых вариантах реализации изобретения желательно использовать два или более олеагенных полипептидов от одного и того же организма-источника.
В общем случае организмы-источники для олеагенных полипептидов, используемые в соответствии с настоящим изобретением, включают, в частности, но без ограничения, В1акек1еа, СапФФа. СгурФсоссик, Сипщпдйате11а, Ыротусек, МогФеге11а, Мисог, Рйусотусек, Ру1Ыит, ККоФокропФшт, В1ФФоФги1а, Тпсйокрогоп, Υа^^ο\ν^а. АкрегдШик, Во)губк, Сегсокрога, Еикапит (С1ЬЬеге11а), К1иууеготусек, Ыеигокрога, РешсШшт, РФЫа (Напкепи1а), Рисаша, 8ассйаготусек, 8с1его1шт, ТпсНоФегта и ХаШ1юр11у11отусек (РйаГйа). В некоторых вариантах реализации изобретения виды источников для полипептидов ацетилКоА-карбоксилазы, АТФ-цитратлиазы, малатдегидрогеназы и/или АМФ-деаминазы включают, в частности, но без ограничения, АкрегдШик шФи1апк, СгурФсоссик пеоГогтапк, Еикапит Ги)1киго1, К1иууеготусек 1асФк, Ыеигокрога сгакка, 8ассйаготусек сегеу1К1ае, 8с1нхокасс11аготусек ротЬе, ИкШадо тауФ1к и Υ;·ιπΌ\νί;·ι 11ро1уйса. В некоторых вариантах реализации изобретения виды источников для полипептидов пируватдекарбоксилазы или изоцитратдегидрогеназы включают, в частности, но без ограничения, Ыеигокрога сгакка, ХапШорйу11отусек ФепФгогйоик (РйаГВа гкоФо/ута), АкрегдШик шдег, 8ассйаготусек сегеу1К1ае, Мисог спсте11о1Фек, К1юФоЮги1а д1цфшк, СапФ1Фа и)Шк, МогйегеИа а1рта и Υ;·ιπΌ\νί;·ι Фро1убса.
Конструирование продуцирования каротиноидов.
Каротиноиды синтезируют из изопреноидных предшественников, некоторые из которых участвуют также в продуцировании стероидов и стеролов. Наиболее распространенный путь биосинтеза изопреноидов, иногда называемый мевалонатным путем, в общем виде представлен на фиг. 3. Как показано, ацетил-КоА превращается в гидроксиметилглютарил-КоА (НМС-СоА), а затем в мевалонат. После этого мевалонат фосфорилируется и превращается в пятиуглеродное соединение изопентенилпирофосфат (1РР). После изомеризации 1РР в диметилаллилпирофосфат (БМАРР) в результате трех последовательных реакций конденсации с дополнительными молекулами 1РР образуется десятиуглеродная молекула геранилпирофосфата (СРР), затем пятнадцатиуглеродная молекула фарнезилпирофосфата (ЕРР) и, наконец, двадцатиуглеродное соединение геранилгеранилпирофосфат (ССРР).
Альтернативный путь изопреноид биосинтеза изопреноидов, который используют некоторые организмы (в частности, бактерии) и который иногда называют мевалонат-независимым путем , показан на фиг. 4. Этот путь инициирует синтез 1-деокси-Б-ксилоглюкоза-5-фосфата (БОХР) из пирувата и глицеральдегид-3-фосфата. Затем в результате последовательности реакций, показанных на фиг. 4, БОХР превращается в 1РР, который изомеризуется в БМАРР, а затем через СРР и РРР превращается в ССРР, как показано на фиг. 3 и описано выше.
Различные белки, участвующие в биосинтезе изопреноидов, идентифицированы в ряде организмов, и их характеристики описаны. Кроме того, различные аспекты изопреноидного пути биосинтеза широко сохраняются в грибном, бактериальном, растительном и животном мире. Например, полипептиды, соот
- 10 016258 ветствующие ацетоацетил-КоА тиолазе, НМС-СоА синтазе, НМС-СоА редуктазе, мевалонаткиназе, фосфомевалонаткиназе, мевалонатпирофосфатдекарбоксилазе, ΙΡΡ-изомеразе, ЕРР-синтазе и ООРРсинтазе, показанным на фиг. 3, идетифицированы и выделены из широкого спектра организмов и клеток. Репрезентативные примеры из множества таких полипептидов представлены в табл. 7-15. Один или несколько полипептидов, выбранных из табл. 7-15, можно использовать или модифицировать для применения в способах и составах в соответствии с настоящим изобретением.
Согласно настоящему изобретению продуцирование каротиноидов в организме-хозяине можно регулировать, модифицируя экспрессию или активность одного или нескольких белков, участвующих в биосинтезе изопреноидов. В некоторых вариантах реализации изобретения такая модификация включает введение одного или нескольких гетерологичных полипептидов биосинтеза изопреноидов в клеткухозяин; альтернативно или дополнительно, можно модифицировать экспрессию или активность одного или нескольких эндогенных или гетерологичных полипептидов биосинтеза изопреноидов. При сохранении в достаточной степени компонентов полипептидов биосинтеза изопреноидов ожидается, что гетерологичные полипептиды биосинтеза изопреноидов часто будут функционировать даже в значительно отличающихся организмах. Кроме того, если окажется желательным ввести несколько гетерологичных полипептидов биосинтеза изопреноидов, во многих случаях полипептиды из различных организмовисточников будут функционировать совместно. В некоторых вариантах реализации изобретения множество различных гетерологичных полипептидов биосинтеза изопреноидов вводили в одну и ту же клеткухозяин. В некоторых вариантах реализации изобретения это множество содержит только полипептиды из одного и того же организма-источника (например, две или более последовательности, полученные или модифицированные из одного организма-источника); в других вариантах реализации изобретения указанное множество включает полипептиды, независимо выбранные из различных организмов-источников (например, две или более последовательности, полученные или модифицированные по меньшей мере из двух независимых организмов-источников).
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения, которые используют гетерологичные полипептиды биосинтеза изопреноидов, организмы-источники включают, в частности, но без ограничения, грибы родов В1акех1еа, Сапб1ба, Стур1ососсих, Сипшпдйаше11а, Ыротусех, Мотйете11а, Мисог, Р1усотусех, РуШшт, В1юбохропбшт, В1юбо1оги1а. Тпскохрогоп, Уагго\\Е1. АхретдШих, Вобубх, Сетсохрога, Еихалит (01ЬЬете11а), К1иууетотусех, Ыеигохрога, РешсШшт, Р1сШа (Напхепи1а), Рисаша, 8ассйаготусех, ЗсШ/охассйатотусех, 8с1его1шт, Тйсйобегтх, ИхШадо и ХапШорйу11отусех (РНаГПа). В некоторых вариантах реализации изобретения организмы-источники относятся к видам, которые включают, в частности, но без ограничения, СтурШсоссих пеоГогтапх, Еихапит Ги)1киго1, КШууептусех 1асбх, Ыеигохрога сгахха, 8ассНаготусех сегеу1х1ае, 8сЫхохассНаготусех ротЬе, ИхШадо тауб1х и Уагго\\Е1 Еро1убса.
Как указано выше, изопреноидный путь биосинтеза участвует также в продуцировании некаротиноидных соединений, в частности стеролов, стероидов и витаминов, например витамина Е или витамина К. Следовательно, белки, которые воздействуют на промежуточные соединения изопреноидного пути биосинтеза и отводят их в биосинтез некаротиноидных соединений, являются косвенными ингибиторами биосинтеза каротиноидов (см., например, фиг. 5, на которой указаны точки вывода изопреноидных промежуточных соединений на другие пути биосинтеза). Поэтому такие белки считают конкурентными полипептидами биосинтеза изопреноидов. Ожидается, что снижение содержания или активности этих конкурентных полипептидов биосинтеза изопреноидов увеличит продуцирование каротиноидов в клеткаххозяевах согласно настоящему изобретению.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения продуцирование или активность эндогенных конкурентных полипептидов биосинтеза изопреноидов в клетках-хозяевах можно уменьшить или устранить. В некоторых вариантах реализации изобретения такое уменьшение или устранение активности конкурентных полипептидов биосинтеза изопреноидов можно обеспечить обработкой организмахозяина низкомолекулярными ингибиторами ферментов пути синтеза эргостеролов. Ферменты пути синтеза эргостеролов включают, например, скваленсинтазу, скваленэпоксидазу, 2,3оксидоскваленланостеролциклазу, цитохром Р450-ланостерол-14а-деметилазу, С-14 стеролредуктазу, С4 стеролметилоксидазу, 8АМ:С-24 стеролметилтрансферазу, С-8 стеролизомеразу, С-5 стеролдесатуразу, С-22 стеролдесатуразу и С-24 стеролредуктазу. Каждый из этих ферментов считается конкурентным полипептидом биосинтеза изопреноидов. Регуляторы этих ферментов также можно считать конкурентными полипептидами биосинтеза изопреноидов (например, дрожжевые белки 8и11 (номер в базе данных ОепЬапк 1С4374 01:2133159) и Мо13 (номер в базе данных ОепЬапк №_013786 01:6323715), которые могут иметь или не иметь гомологов в других организмах.
В других вариантах реализации изобретения уменьшение или устранение активности конкурентного полипептида биосинтеза изопреноидов можно обеспечить путем уменьшения активности пути биосинтеза убихинона. Ключевым шагом в биосинтезе убихинона является образование парагидроксибензоата (ПГБ) из тирозина или фенилаланина у млекопитающих или из хоризмата у бактерий, с последующей конденсацией ПГБ и предшественника изопрена, что приводит к добавлению пренильной группы. Эта реакция катализируется ПГБ-полипренилтрансферазой. Цепь убихинона со стороны изопреноида определяется ферментом пренилдифосфатсинтазой. 3-Декапренил-4-гидроксибензойную кислоту, кото
- 11 016258 рая получается в результате реакции конденсации ПГБ и декапренилдифосфата, подвергают дальнейшим модификациям, которые включают гидроксилирование, метилирование и декарбоксилирование, чтобы получить убихинон (СоС10). Таким образом, ингибирование пренилдифосфатсинтазы, которое приводит к образованию изопреноидов с удлиненной цепью из фарнесилдифосфата, или ингибирование ПГБполипренилтрансферазы может быть полезным для увеличения содержания изопреноида, используемого для биосинтеза каротиноидов (примеры ферментов пренилдифосфатсинтазы и ПГБполипренилтрансферазы представлены в табл. 29 и 30 соответственно).
Известные низкомолекулярные ингибиторы конкурентных ферментов биосинтеза изопреноидов включают, в частности, но без ограничения, зарагосовую кислоту (в том числе ее аналоги, например, ΤΑΝ1607Α (Βίοсйет. Вюрйук. Кек. Соттип. 1996 БеЬ. 15; 219(2):515-520)), ЯРЯ 107393 (3-гидрокси-3-[4-(хинолин-6-ил)фенил]1-азабицикло[2-2-2]октан дигидрохлорид; 1. Рйагтасо! Ехр. Тйег. 1997 Мау; 281(2):746-52), ЕЯ-28448 тринатриевую соль (5-{М-[2-бутенил-3-(2-метоксифенил)]-М-метиламино}-1,1-пентилиден-бис-(фосфоновой кислоты); 1ошПа1 οί Мрйе Яекеагсй, νοί. 41, 1136-1144, 1и1у 2000), ВМ8-188494 (Тйе 1оигпа1 οί С11тса1 Рйагтасо1о§у, 1998; 38:1116-1121), ΤΑΚ-475 (1-[2-[(3Я,58)-1-(3-ацетокси-2,2-диметилпропил)-7-хлор-1,2,3,5-тетрагидро-2-оксо-5(2,3-диметоксифенил)-4,1-бензоксазепин-3-ил]ацетил]пиперидин-4-уксусную кислоту; Еиг. 1. Рйагтасо! 2003 Арг. 11; 466(1-2):155-61), ΥΜ-53601 ((Е)-2-[2-фтор-2-(хинуклидин-3-илиден)этокси]-9Н-карбазолмоногидрохлорид; Вг. 1. Рйагтасо1. 2000 8ер.; 131 (1):63-70), или сквалестатин I, который ингибирует скваленсинтазу; тербинафин, который ингибирует скваленэпоксидазу; различные азолы, которые ингибируют цитохром Р450-ланостерол-14а-деметилазу, и фенпропиморф, который ингибирует С-14 стеролредуктазу и С-8 стеролизомеразу. В других вариантах реализации изобретения можно использовать гетерологичный конкурентный полипептид биосинтеза изопреноидов (функциональный или нефункциональный; в некоторых вариантах реализации изобретения используют доминатные негативные мутанты).
Одним из конкурентных полипептидов биосинтеза изопреноидов, пригодным для настоящего изобретения, является скваленсинтаза, которая идентифицирована и охарактеризована во многих организмах. Репрезентативные примеры последовательностей полипептида скваленсинтазы представлены в табл. 16. В некоторых вариантах реализации изобретения, в которых используют скваленсинтазу (или модификации скваленсинтазы), организмы-источники включают, в частности, но без ограничения, Ыеигокрога сгакка, ХапПюрйуПотусек бепбгогйоик (РНаГПа гйобохута). АкрегдШик шдег, Бассйаготусек сегеνίκΥκ, Мисог сйсшеИойек, ЯЬо1оги1а д1и11ш8, СапФба иШ18, МогИегеИа а1рша и Уаггсшаа 11ро1уйса.
Путь биосинтеза каротиноидов ответвляется от пути биосинтеза изопреноидов в точке образования ССРР. Решающим этапом биосинтеза каротиноидов является образование фитоена в результате конденсации двух молекул ССРР с расположением голова к голове при катализации фитоинсинтазой (часто называемой сг(В; см. фиг. 6). Последовательность реакций дегидрогенизации, каждая из которых увеличивает на два число конъюгированных двойных связей, превращает фитоин в нейроспорин, а затем в ликопин. Путь разветвляется в различных точках до и после образования ликопина, что позволяет получать широкий спектр каротиноидов. Так, например, действие фермента циклазы на ликопин приводит к образованию γ-каротина, в то время как действие десатуразы вызывает образование 3,4дидегидроликопина. γ-Каротин превращается в β-каротин под действием циклазы, β-каротин можно превратить в один из нескольких продуктов (см., например, фиг. 6С), включая астаксантин (путем последовательного превращения в эхинон, гидроксиэхинон и феникоксантин).
Согласно настоящему изобретению продуцирование каротиноидов в организме-хозяине можно регулировать, модифицируя экспрессию или активность одного или нескольких белков, участвующих в биосинтезе каротиноидов. Как указано выше, в некоторых вариантах реализации изобретения в качестве клеток-хозяев желательно использовать организмы, которые в естественных условиях продуцируют один или несколько каротиноидов. Иногда в таких случаях делают упор на увеличение продуцирования природно вырабатываемого каротиноида, например, путем увеличения уровня и/или активности одного или нескольких белков, участвующих в синтезе этого каротиноида и/или путем уменьшения уровня или активности одного или нескольких белков, участвующих в конкурентном пути биосинтеза. Альтернативно или дополнительно, в некоторых вариантах реализации изобретения желательно продуцировать один или несколько каротиноидов, которые клетка-хозяин не вырабатывает в естественных условиях.
Согласно некоторым вариантам реализации изобретения в клетку-хозяин желательно вводить один или несколько гетерологичных каротиногенных полипептидов. Для специалистов в данной области техники очевидно, что для этой цели можно использовать множество гетерологичных полипептидов, выбор которых будет зависеть, в частности, от конкретного каротиноида, продуцирование которого следует увеличить. Настоящее изобретение включает не только введение гетерологичных каротиногенных полипептидов, но также и регуляцию уровней экспрессии или активности гетерологичных или эндогенных каротиногенных полипептидов, включая, например, изменение конститутивных или индуцируемых паттернов экспрессии. В некоторых вариантах реализации изобретения паттерны экспрессии регулируют таким образом, чтобы для индуцирования олеагенности не требовалось выращивания в условиях ограниченного питания. Так, например, генетические модификации, включающие изменение и/или добавление регуляторных последовательностей (например, промоторных элементов, терминаторных элементов),
- 12 016258 можно использовать для конкретной регуляции паттернов экспрессии. Такие генетические модификации можно применять в сочетании с эндогенными генами (например, для регуляции эндогенной каротиногенности); альтернативно, такие генетические модификации можно включать, чтобы обеспечить регуляцию экспрессии по меньшей мере одного гетерологичного полипептида (например, каротиногенного полипептида). Так, для модификации паттернов экспрессии эндогенных каротиногенных полипептидов и/или гетерологичных каротиногенных полипептидов можно использовать промоторы, включающие, в частности, но без ограничения, ТеГ1 и Орб1 в сочетании с эндогенными генами и/или гетерологичными генами. Аналогично этому типичные терминаторные последовательности включают, в частности, но без ограничения, применение терминаторных последовательностей ХРК2 Υ. Нро1уНса.
Как показано на фиг. 6 и в литературе, белки, участвующие в биосинтезе каротиноидов, включают, в частности, но без ограничения, фитоинсинтазу, фитоиндегидрогеназу, ликопинциклазу, каротиноидкетолазу, каротиноидгидроксилазу, астаксантинсинтазу (одиночный многофункциональный фермент, обнаруженный в некоторых организмах-источниках и обычно обладающий функциями кетолазы и гидроксилазы), эпсилонкаротиноидгидроксилазу, ликопинциклазу (субъединицы бета и эпсилон), каротиноидгликозилтрансферазу и ацил-КоА: диацилглицерин ацилтрансферазу. Репрезентативные примеры последовательностей полипептидов биосинтеза этих каротиноидов представлены в табл. 17-25.
Ксантофиллы могут отличаться от других каротиноидов присутствием функциональных групп, содержащих кислород, в их циклических концевых группах. Так, например, лютеин и зеаксантин содержат одну гидроксильную группу в каждой из своих терминальных кольцевых структур, в то время как астаксантин содержит в каждом терминальном кольце кетогруппу и гидроксил. Это свойство делает ксантофиллы более полярными, чем каротины, в частности бета-каротин и ликопин, и поэтому кардинально снижает их растворимость в жирах и липидах. Природные ксантофиллы часто находятся в форме сложных эфиров терминальных гидроксильных групп сложных моно- и диэфиров жирных кислот. Они также встречаются в форме глюкозидов некоторых видов бактерий. Растворимость и диспергируемость ксантофиллов можно в значительной степени модифицировать добавлением сложных эфирных групп, при этом известно, что эстерификация может оказывать влияние также на абсорбционную способность и/или биологическую доступность данного каротиноида. Задачей настоящего изобретения является максимизация содержания определенного ксантофилла, который аккумулируется во внутриклеточной фракции триацилглицерида олеагенных дрожжей, при этом один из механизмов решения этой задачи заключается в увеличении гидрофобности аккумулируемого ксантофилльного продукта. Одним из путей достижения этого является конструирование продуцирования ацильных сложных моно- и/или диэфиров требуемого ксантофилльного соединения.
Многие ферменты могут этерифицировать каротиноиды. Например, в нескольких видах бактерий идентифицированы каротиноидглюкозилтрансферазы (см., например, табл. 24). Кроме того, ацилКоА: диацилглицеринацилтрансфераза (трансфераза ДГАТ) и ацил-КоА:моноацилглицеринацилтрансферазы (трансферазаМГАТ), которые функционируют на последних этапах биосинтеза триацилглицерина, вероятно, играют дополнительную роль в этерификации ксантофиллов. Репрезентативные полипептиды ДГАТ представлены в табл. 25. При этом другие ферменты могут специфически модифицировать каротиноиды и молекулы аналогичной структуры (например, стеролы) и быть доступными для модификации и продуцирования сложных эфиров.
В некоторых вариантах реализации изобретения потенциальные организмы-источники для полипептидного биосинтеза каротиноидов включают, в частности, но без ограничения, роды природно олеагенных или неолеагенных грибов, которые продуцируют каротиноиды в естественных условиях. Они включают, в частности, но без ограничения, ВоЦубх Сегсокрога, Еикапит (01ЬЬете11а), Мисог, Ыеитокрога, Рйусотусек, Риссша, Яйобо1ош1а, 8с1ето1шт, Тпсйобетта и ХаиШорйуНотусек. Типичные виды включают, в частности, но без ограничения, Ыеитокрога сгакка, Хаи1йорйу11отусе8 бепбтогйоик (РйаГПа гйобохута). Мисог агсшеИоИек и Я1юбо1оги1а β1υΙίηίδ. Каротиноиды продуцируются широким спектром разнообразных организмов, в частности растениями, водорослями, дрожжами, грибами, бактериями, цианобактериями и т.п. Согласно настоящему изобретению такие организмы могут представлять собой организмы-источники для полипептидного биосинтеза каротиноидов.
Следует понимать, что конкретная каротиногенная модификация клетки-хозяина в соответствии с настоящим изобретением зависит от каротиноидов, которые желательно получить. Например, полипептиды биосинтеза изопреноидов связаны с продуцированием большинства каротиноидов. Полипептиды биосинтеза каротиноидов также широко связаны с этим. Так, например, кетолаза, в частности, связана с продуцированием кантаксантина, в то время как гидроксилаза связана с продуцированием лютеина и зеаксантина. Гидроксилаза и кетолаза (или астаксантинсинтаза) особенно полезны для продуцирования астаксантина.
Продуцирование и выделение каротиноидов.
Как указано выше, аккумулирование липидных тел в олеагенных организмах обычно индуцируется ростом соответствующего организма в присутствии источника избытка углерода и при ограничении азота. Специфические условия, индуцирующие такое аккумулирование, были установлены ранее применительно к ряду различных олеагенных организмов (см., например, работы ^о1Г (еб.) Ыопсопуепбопа1
- 13 016258 уеа818 ίη Ь1о1есйпо1оду, νοί. 1, 8ргшдег-Уег1ад, Вегйп, Сегтапу. р. 313-338; Ыр1б8 18(9):623, 1983; 1пб1ап 1. Εχρ. Вю1. 35(3):313, 1997; 1. 1пб. МкгоЬю1. Вю1есЬпо1. 30(1):75, 2003; Вюгезоиг. ТесЬпо1. 95(3):287, 2004, все из которых полностью включены в данное описание в качестве ссылки).
В общем случае желательно культивировать клетки-хозяева, модифицированные согласно настоящему изобретению, при условиях, которые позволяют аккумулировать в форме липида по меньшей мере около 20% их сухой клеточной массы. В других вариантах реализации изобретения клетки-хозяева, модифицированные согласно настоящему изобретению, выращивают при условиях, которые позволяют аккумулировать в форме липида по меньшей мере примерно 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 или даже 80% или более их сухой клеточной массы. В некоторых вариантах реализации изобретения применяемые клетки-хозяева представляют собой клетки, которые являются природно олеагенными и в которых индуцируется выработка липида до желаемого уровня. В других вариантах реализации изобретения клетки-хозяева являются клетками, которые в естественных условиях продуцируют липид, однако их модифицируют таким образом, чтобы обеспечить продуцирование и аккумулирование липида на желательном уровне.
В некоторых вариантах реализации изобретения клетки-хозяева согласно изобретению являются не природно олеагенными, а модифицированными для продуцирования липида таким образом, чтобы обеспечить выработку липида на желаемом уровне. Для специалистов в данной области техники очевидно, что в общем случае условия выращивания, эффективные для индукции аккумулирования липидов в организме-источнике, можно также использовать, чтобы индуцировать аккумулирование липидов в клеткехозяине, в которую введены олеагенные полипептиды организма-источника. Разумеется, с учетом характеристик клетки-хозяина могут потребоваться модификации, которые способны провести рядовые специалисты в данной области техники.
Для специалистов в данной области техники очевидно также, что в общем случае желательно, чтобы продуцирование требуемого каротиноида клеткой-хозяином, модифицированной согласно изобретению, происходило в течение соответствующего времени по отношению к индуцированию олеагенности таким образом, чтобы в липидных телах аккумулировались каротиноиды. В некоторых вариантах реализации изобретения желательно индуцировать выработку каротиноидов в клетке-хозяине, которая в естественных условиях не продуцирует каротиноиды, чтобы обеспечить получение каротиноидов на обнаруживаемом уровне. В некоторых аспектах клетки-хозяева, которые не производят в естественных условиях одних каротиноидов, способны продуцировать другие каротиноиды (так, например, некоторые клетки-хозяева могут в естественных условиях продуцировать β-каротин, но не могут продуцировать в естественных условиях астаксантин), в других аспектах клетки-хозяева не продуцируют каротиноиды в естественных условиях. В некоторых других вариантах реализации изобретения желательно повысить уровни продуцирования каротиноидов в клетке-хозяине, которая в естественных условиях вырабатывает каротиноиды в малом количестве таким образом, чтобы получить каротиноиды на повышенном обнаруживаемом уровне. В некоторых аспектах клетки-хозяева, которые в естественных условиях продуцируют одни каротиноиды (например, β-каротин), продуцируют также и другие каротиноиды (например, астаксантин и др.), в других аспектах клетки, которые в естественных условиях продуцируют одни каротиноиды (например, β-каротин), не продуцируют других каротиноидов.
В некоторых вариантах реализации изобретения желательно аккумулировать каротиноиды до уровней (т.е. считая суммарное количество всех продуцируемых каротиноидов), превышающих по меньшей мере примерно 1% от сухой массы клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения уровень суммарного аккумулирования каротиноидов в липидных телах составляет по меньшей мере примерно 2%, по меньшей мере примерно 3%, по меньшей мере примерно 4%, по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 6%, по меньшей мере примерно 7%, по меньшей мере примерно 8%, по меньшей мере примерно 9%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 11%, по меньшей мере примерно 12%, по меньшей мере примерно 13%, по меньшей мере примерно 14%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 16%, по меньшей мере примерно 17%, по меньшей мере примерно 18%, по меньшей мере примерно 19%, по меньшей мере примерно 20% или более от суммарной сухой массы клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения желательно достичь уровней суммарного аккумулирования каротиноидов в липидных телах (т.е., считая суммарное продуцирование всех каротиноидов), превышающих по меньшей мере примерно 1% от сухой массы клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения уровень суммарного аккумулирования каротиноидов в липидных телах составляет по меньшей мере примерно 2%, по меньшей мере примерно 3%, по меньшей мере примерно 4%, по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 6%, по меньшей мере примерно 7%, по меньшей мере примерно 8%, по меньшей мере примерно 9%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 11%, по меньшей мере примерно 12%, по меньшей мере примерно 13%, по меньшей мере примерно 14%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 16%, по меньшей мере примерно 17%, по меньшей мере примерно 18%, по меньшей мере примерно 19%, по меньшей мере примерно 20% или более от суммарной сухой массы клеток.
Показано, что бактериальные каротиногенные гены могут передаваться другим организмам, поэто
- 14 016258 му они особенно полезны в соответствии с настоящим изобретением (см., например, Мшга е! а1., Арр1. ΕπνίΓοπ. М1сгоЫо1. 64:1226, 1998). В других вариантах реализации изобретения может быть желательным использовать гены от других организмов-источников, в частности растений, водорослей или микроводорослей. Эти организмы обеспечивают множество потенциальных источников полипептидов кетолазы и гидроксилазы. Другие полезные организмы-источники включают грибные, дрожжевые, инсектиционные, протозойные и млекопитающие источники полипептидов.
В некоторых вариантах реализации изобретения в Уагго\\'1а 11ро1уйса могут быть экспрессированы гены многофункциональной фитоинсинтазы/ликопинциклазы Мисог сйсте11о16еБ и фитоендегидрогеназы ЫеигоБрога сгаББа. Последующий сверхсинтез каталитического домена из гидроксиметилглютарилКоА-редуктазы N. сгаББа и/или обработка модифицированных штаммов Υ. 11ро1у!юа зарагосовой кислотой, которая является ингибитором скваленсинтазы, увеличивает продуцирование каротиноидов. И, наконец, гены РагасоссиБ тагсиБИ, кодирующие ферменты каротиноидгидроксилазу и каротиноидкетолазу, экспрессируются в штаммах Υ. 11ро1уйса, вырабатывающих β-каротин, и эта модификация приводит к аккумулированию астаксантина. Аналогичные подходы можно использовать для повышения продуцирования каротиноидов в других олеагенных или неолеагенных организмах-хозяевах, используя те же самые гомологичные или функционально схожие каротиногенные полипептиды.
Следует отметить, что для организмов согласно изобретению, которые продуцируют несколько каротиноидов, в некоторых случаях можно регулировать относительные количества отдельных продуцируемых каротиноидов путем изменения условий выращивания. Например, имеются сообщения о том, что управление концентрацией растворенного кислорода в культуре в процессе культивирования позволяет регулировать относительные уровни продуцирования определенных каротиноидов, в частности βкаротина, эхиненона, β-криптоксантина, 3-гидроксиэхиненона, астероиденона, кантаксантина, зеаксантина, адонирубина, адониксантина и астаксантина (см., например, патент И8 № 6825002, авторы ТбиЬокига е! а1., содержание которого полностью включено в данное описание в качестве ссылки).
В особенности для вариантов реализации настоящего изобретения, направленных на продуцирование астаксантина, часто оказывается желательным использовать один или несколько генов из природного организма, вырабатывающего астаксантин. В тех случаях, когда требуется экспрессировать несколько гетерологичных полипептидов, может быть желательным использовать для всех из них один и тот же организм-источник или близкородственные организмы-источники.
Одно из достоинств настоящего изобретения состоит в том, что кроме получения высоких уровней каротиноидов настоящее изобретение позволяет легко выделять эти полученные соединения, поскольку они аккумулируются в липидных телах олеагенных организмов. Способы и системы выделения липидных тел разработаны для широкого спектра олеагенных организмов (см., например, патенты И8 №№ 5164308, 5374657, 5422247, 5550156, 5583019, 6166231, 6541049, 6727373, 6750048 и 6812001, все из которых полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки). Вкратце, клетки обычно извлекают из культуры, часто способами распылительной сушки, фильтрации или центрифугирования. В некоторых случаях клетки гомогенизируют, а затем экстрагируют сверхкритической жидкостью или растворителями (например, такими растворителями, как хлороформ, гексан, метиленхлорид, метанол, изопропанол, этилацетат и т.п.), получая неочищенную масляную суспензию. Такую масляную суспензию можно очистить способами, известными специалистам в данной области техники. Очищенные масла можно непосредственно использовать в качестве пищевых или кормовых добавок. Альтернативно или дополнительно, каротиноиды можно выделить из масла, используя известные способы.
Учитывая, что каротиноиды, как правило, чувствительны к окислению, во многих вариантах реализации используют стабилизаторы окисления (например, токоферолы, витамин С, этоксихин, витамин Е, БОТ (бутилокситолуол), БОА (бутилоксианизол), ТБГХ (третичный бутилгидрохинон) и т.п. или их комбинации) во время или после выделения каротиноидов. Альтернативно или дополнительно, можно использовать микроинкапсуляцию, например, с белками, чтобы создать дополнительный физический барьер от окисления и/или сделать более удобным обращение с каротиноидами (см., например, заявку на патент И8 № 2004/0191365).
Применение.
Каротиноиды, полученные согласно настоящему изобретению, можно использовать в различных областях, например использовать их биологические или пищевые свойства (в частности, антиоксидантные, антипролиферативные и т.п.) и/или их пигментные свойства. Например, согласно настоящему изобретению каротиноиды можно использовать в лекарственных средствах (см., например, Вейгат, М1г. Йем 57:182, 1999; 8ίηβ1ι е! а1., Опсо1о§у 12:1643, 1998; Воск, Рйагтасо1. Тйег. 75:185, 1997; Ебде е! а1., 1. РкоЮскет Рйо!оЬю1. 41:189, 1997; заявку на патент И8 2004/0116514; заявку на патент И8 2004/0259959), в пищевых добавках (см., например, Коуата е! а1., 1. РНоЮсНет Р1ю1оЫо1. 9:265, 1991; ВаиетГетб, Саго1еио1бБ аБ со1огап!Б апб ν^ίат^η А ргесигБогБ, Асабетю РгеББ, ΝΥ, 1981; заявку на патент И8 2004/0115309; заявку на патент И8 2004/0234579), в электрооптике, в кормовых добавках для животных (см., например, Кг1ПБк1, Риге Арр1. Скет. 66:1003, 1994; Ро1ахха е! а1., Ме!к. Епхуто1. 213:403, 1992), в косметике (в качестве антиоксидантов и и/или косметических средств, включая ароматизаторы; см., например, заявку на
- 15 016258 патент И8 2004/0127554) и т.п. Каротиноиды, получаемые в соответствии с настоящим изобретением, можно использовать также в качестве промежуточных соединений при производстве других соединений (например, стероидов и т.п.).
В частности, астаксантин и/или его сложные эфиры можно использовать во многих фармацевтических средствах и продуктах лечебного питания, в том числе для лечения воспалительных заболеваний, астмы, атопического дерматита, аллергий, множественной миеломы, артериосклероза, сердечнососудистых заболеваний, заболеваний печени, цереброваскулярных болезней, тромбоза, заболеваний, связанных с неоангиогенезом, включая рак, ревматизма и диабетической ретинопатии; дистрофии желтого пятна и мозговых нарушений, гиперлипидемии, почечной ишемии, диабета, гипертензии, пролиферации и метастаза, а также нарушений обмена веществ. Кроме того, каротиноиды и астаксантин могут использоваться для предотвращения и лечения утомления, для улучшения функции почек при нефропатии от воспалительных заболеваний, а также для предотвращения и лечения других заболеваний, связанных с образом жизни. Установлено также, что астаксантин играет роль ингибитора различных биологических процессов, в том числе ингибитора интерлейкинов, ингибитора фосфодиэстеразы, ингибитора фосфолипазы А2, ингибитора циклооксигеназы-2, ингибитора матриксной протеиназы, ингибитора пролиферации клеток эндотелия капилляров и ингибитора липоксигеназы. См., например, японскую публикацию № 2006022121, опубликованную 20060126 (японская заявка № 2005-301156, поданная 20051017), японскую публикацию № 2006016408, опубликованную 20060119 (японская заявка № 2005-301155, поданная 20051017), японскую публикацию № 2006016409, опубликованную 20060119 (японская заявка № 2005301157, поданная 20051017), японскую публикацию № 2006016407, опубликованную 20060119 (японская заявка № 2005-301153, поданная 20051017), японскую публикацию № 2006008717, опубликованную 20060112 (японская заявка № 2005-301151, поданная 20051017), японскую публикацию № 2006008716, опубликованную 20060112 (японская заявка № 2005-301150, поданная 20051017), японскую публикацию № 2006008720, опубликованную 20060112 (японская заявка № 2005-301158, поданная 20051017), японскую публикацию № 2006008719, опубликованную 20060112 (японская заявка № 2005-301154, поданная 20051017), японскую публикацию № 2006008718, опубликованную 20060112 (японская заявка № 2005301152, поданная 20051017), японскую публикацию № 2006008713, опубликованную 20060112 (японская заявка № 2005-301147, поданная 20051017), японскую публикацию № 2006008715, опубликованную 20060112 (японская заявка № 2005-301149, поданная 20051017), японскую публикацию № 2006008714, опубликованную 20060112 (японская заявка № 2005-301148, поданная 20051017) и японскую публикацию № 2006008712, опубликованную 20060112 (японская заявка № 2005-301146, поданная 20051017).
Следует понимать, что в некоторых вариантах реализации изобретения каротиноиды, продуцируемые модифицированными клетками-хозяевами согласно данному описанию, вводили в конечный продукт (например, в пищевую или кормовую добавку, фармацевтический или косметический препарат, в состав, содержащий краситель и т. п.) в среде клетки-хозяина. Так, например, клетки-хозяева могут быть лиофизированы, сублимированы, заморожены или инактивированы любым способом, после чего цельные клетки можно вводить в конечный продукт или использовать в качестве конечного продукта. Клетку-хозяин можно также обработать перед введением в продукт, чтобы повысить биологическую доступность (например, способом лизиса). Альтернативно или дополнительно, в конечный продукт можно вводить только часть клетки-хозяина (например, фракционированную по размеру или растворимости), отделенную от целого. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения липидные капли выделяют из клетки-хозяина и вводят в конечный продукт или используют в качестве конечного продукта. В других вариантах реализации изобретения сами каротиноиды или отдельные каротиноидные соединения выделяют и преобразуют в конечный продукт.
Как указано выше, сложные эфиры жирных кислот и глюкозидов являются преобладающими сложными эфирами каротиноидов, найденными в природе, в то время как другие сложные эфиры (например, с органическими кислотами или с неорганическим фосфатом) можно синтезировать, чтобы получить полезные формы продуктов. Для доставки каротиноидные сложные эфиры можно получить также в форме солей сложных эфиров (см., например, публикацию патента И8 № 20050096477).
Количество каротиноида, вводимого в данный продукт, может существенно изменяться в зависимости от указанного продукта и конкретных участвующих каротиноидов. Это количество может лежать в пределах, например, от менее чем 0,01 мас.% продукта, до более чем 1, 10, 20, 30% или выше; в некоторых случаях каротиноид может составлять 100% продукта.
В некоторых вариантах реализации изобретения один или несколько полученных каротиноидов вводят в пищевой или кормовой компонент (например, в пищевую добавку). Типы пищевых продуктов, в которые можно вводить каротиноиды согласно настоящему изобретению, не имеют особых ограничений и включают напитки, в частности чаи, соки и алкогольные напитки; кондитерские изделия, в частности желе и сухое печенье; жиросодержащую пищу и напитки, в частности молочные продукты; бакалейные продукты, в частности рис и размягченный рис (или кашу); продукты детского питания и т.п. В некоторых вариантах реализации этого аспекта изобретения может оказаться полезным введение каротиноидов в тела съедобных липидов, поскольку это может способствовать их введению в жиросодержащие пищевые продукты.
- 16 016258
Примеры кормовых продуктов, в которые можно вводить каротиноиды, полученные в соответствии с настоящим изобретением, могут включать, например, корма для животных, например корма для кошек, собак и т.п., корма для аквариумных рыб, рыбы или ракообразных, разводимых в искусственных условиях и т. п., корм для сельскохозяйственных животных (включая домашний скот, а также рыбу и ракообразных, разводимых в промышленных масштабах). Пищевой или кормовой материал, в который введены каротиноиды, полученные в соответствии с настоящим изобретением, предпочтительно имеет привлекательный вкус для предполагаемого потребителя. Такой пищевой или кормовой материал может обладать свойствами, которые известны для соответствующего материала (например, твердый, жидкий, мягкий).
В некоторых вариантах реализации изобретения один или несколько полученных каротиноидов вводят в косметический продукт. Примеры таких косметических продуктов включают, в частности, косметику для кожи (например, лосьоны, эмульсии, кремы и т.п.), губную помаду, препараты для защиты от солнечных ожогов, косметику для макияжа, душистые композиции, продукты для ежедневного применения (например, зубные пасты, жидкости для полоскания рта, агенты для предотвращения неприятного запаха изо рта, твердое мыло, жидкое мыло, шампуни, кондиционеры) и т. п.
В некоторых вариантах реализации изобретения один или несколько полученных каротиноидов вводят в лекарственные средства. Примеры таких лекарственных средств включают, в частности, различные типы таблеток, капсул, питьевых препаратов, пастилок, полосканий и т. п. В некоторых вариантах реализации изобретения лекарственное средство является пригодным для местного применения. Лекарственные формы не имеют особых ограничений и включают капсулы, масла, гранулы, кишечнорастворимые гранулы, порошки, таблетки, пилюли, пастилки и т.п. Масла и капсулы с масляным наполнением могут иметь дополнительные преимущества, поскольку они не содержат компонентов, вызывающих разложение в процессе приготовления, и, кроме того, капли липидов, содержащие каротиноиды согласно изобретению, можно легко вводить в составы на масляной основе.
Лечебные препараты согласно настоящему изобретению можно приготовить известными способами, включая, например, стандартную процедуру, описанную в Фармакопее США.
Каротиноиды, полученные согласно настоящему изобретению, можно вводить в любой продукт, содержащий пигмент, включая, например, ткань, краску и т.п. Их можно также вводить в продукт, который является индикатором окружающей среды или прибором, в частности биосенсором, применяемым в качестве агента обнаружения.
Примеры
В табл. 26 представлены некоторые штаммы Уагго\\та Нро1уйса, которые используются в приведенных ниже примерах.
Таблица 26
Штаммы Уагго\\та 11ро1уйса
ΝΚΚί Υ- 1095 Диплоид дикого типа
АТСС76861 МАТВ ига2-211ус1-5Ι.Υ81-5Β
АТСС76982 МАТВ ас1е11еи2-351ус1-5 хрг2
АТСС201249 МАТВ игаЗ-302 1еи2-270 1уз8-11 ΡΕΧΤ7-ΗΑ
МЕ346 МАТА ига2-21 АТСС76861 х АТСС201249
МЕ350 МАТА ига2-211еи2-35 аОе1 АТСС76982 х МЕ346
(Генотипы в ЬУС1, ЬУ81, ХРВ2 и РЕХ17 не определяли в кроссах и не проверяли на соответствие штаммам АТСС (Американской коллекции типовых культур)).
Все основные описанные здесь молекулярно-биологические процедуры и модификации ДНК выполняли в соответствии с работами 8атЬгоок с( а1. или Аи8иЬе1 с( а1. (8атЬгоок I., Епкск Е.Е., ΜαηίαΙίδ Т. (ебк). 1989. Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬога!огу Мапиа1. Сок 8рпп§ НагЬог ЬаЬога!огу Ргекк: Ыете Уогк; Аи8иЬе1 Е.М., Вгеп! В., Кшдйоп В.Е., Мооге Ό.Ό., 8ектап ЕС., 8ιηί11ι 1.А., 8ΐπ.ι1ι1 К. (ебк). 1998. Сиггеп! РгоЮсоЕ ίη Мо1еси1аг Вю1о§у. \УПеу: Ыете Уогк).
Пример 1. Получение плазмид для конструирования каротиноидных штаммов.
Получили плазмиды для конструирования штаммов, продуцирующих каротиноиды. В следующих разделах описано получение плазмид, кодирующих каротиногенные полипептиды. Плазмиды, используемые в этих исследованиях, и детали их конструирования описаны в табл. 27. Дополнительные детали конструирования плазмид и описание их применения приведено в тексте соответствующего раздела. Если не указано иного, для всех амплификаций полимеразных цепных реакций (ПЦР) в качестве матрицы использовали геномную ДНК Υ-1095 ЫВВЬ. Ген ИВА 5, описанный ниже, является аллельным с ауксотрофом ига2-21, указанным выше. Промоторы СРЭ1 и ТЕЕ1 получены из Υ. Нро1уйса, как и терминатор ХРВ2.
СС81 представляет собой ген Υ. Нро1уЕса, кодирующий геранилгеранилпирофосфатсинтазу. Нук
- 17 016258 леиновая кислота, кодирующая последовательность, и кодированный белок Сд§1 из рМВ4591 рМВ4683 представлены ниже:
а1ддайа1аасадсдсддай1сааддада(а1ддддсааддссдссдасассдсдс{дс(дддассд1а саас1асс1сдссаасаассддддссасааса1сададаасасйда1сдсадсдйсддадсддйа1саадд!д дасаададсд аМсдадассай1сдсаса1сассаадаййдса1аас1сд1сдс1дсйдйда1дасд1ддаадасаас{сда1дс (ссдасдадд 0с(дссддсадсссаЙд1с(дШддад1сссссааасса1саас1ссдссаас1аса1д1асШд1ддс(с1дсадд адд1дс(саа дс1саад1сйа1да1дссд1с1ссаййсассдаддааа1да1саасйдса(ададд1саддд1а1дда(с1с1ас1д дададаааса с1оасНдсссс1сддаадасдад(а(с1ддада1дд1дд(дсасаадассдд1ддас1д(йсддс(ддс(с1дада сйа1дс1д1сд д1ддса1сдааасаддаддасса1даааада1саасй(да1с1сасасассйассдасасас1дддад1са1йа ссадайс(дда1 дайасс1саасс(дсад1ссасддаайдассдадаасаадддайс1дсдаада(а1садсдааддааадййс дй1ссдс1дай сасадса(асдсассаасссдда1аассасдадайс(саасайс1сааасадсдаасаадсдасдсйсас1са аааад(асдсс д1ддас1аса(дадаасадааассаадад1йсдас1ас1дсс1:саададда1асаддсса1д1сас1сааддсаа дйсд1а сайда 1да1с1адсадсадс1ддссасда1д1с4ссаадс(асдадссаййдсайаййд1:д1ссасс1с1дас1д1даддад адааад(ас1 йдадда1дсдсад1да [00113] тс1уп8айЛ<емдкаасЙа11друпу1апт-дйП1геЬ)1ааГдау1кУс1к5сЛейз|-1йк||11пзз)|усИ «ес1л8т1ггд1рааНсИдурдйп8апутуТ7а1деу1к1к£у0аУ81Йеет1п1Ьгдддт01у\угеШсркес1еу1 етуу
Ьк1дд1Тг1а1г1т1§уа5кчес1|1екюй1й111сй1ду|уд||с1с1у1п1я81е11епкдТсе<йзедкТ5(рП1131г1прс1пЬе1
1л11к чг1зс1аз1ккуау0утг1е1кзк1ус1кпдагт1з1ка8зу1с1с11ааадИс1узк|гаН11у(У818с)сеегку(ес1ад
Таблица 27
Плазмиды
Плазмида Каркас Вставка Олигонуклеотиды или источник
рМВ4529 ПЦР2.1 3.4 т.п.н. ΑΩΕ1 продукт ПЦР МО4475 и МО4476
рМВ4534 ПЦР.1 2.1 т.п.н. 1.Еи2 продукт ПЦР МО4477 и МО4478
РМВ4535 ПЦР2.1 3.4 т.п.н. С1Р.А5 продукт ПЦР МО4471 и МО4472
рМВ4589 рМВ4535 (ΚηρΙ + 5ре1) 1.2 т.п.н. СРО1 промотер (ΚηρΙ + ΝοΙΙ); 0.14 т.п.н. ХРР2 терминатор (Λ/ΟΪ1+ 5ре1) МО4568 и МО4591; МО4566 и МО4593
рМВ4590 рМВ4535 (ΚηρΙ + Зре!) 0.4 т.п.н. ТЕР1 промотер (ΚηρΙ + ΝοίΙ); 0.14 т.п.н. ХРР2 терминатор (Νοίΐ+Зре!) МО4571 и МО4592; МО4566 и МО4593
- 18 016258
рМВ4591 рМВ4590 (Мге1+М/а1) 1.0 т.п.н. 3381 ОКЕ (ХЬа1+МкЛ) МО4534 и МО4544
рМВ4597 рМВ4534 (Асс651+ 8ре1) ΘΡΩ1 промотер и ХРР2 терминатор (Асс651+8ре1) Из рМВ4589
рМВ4603 рМВ4597 (КзН1+Ш/1) Остаточный каркас и ТЕР1 промотер (Рз/11+ М1и\) Из рМВ4590
рМВ4616 рМВ4529 (Й5г11+3ре1) Остаточный каркас и ТЕР1 промотер (КзН1+ Μ/υΙ) Из рМВ4589
рМВ4629 рМВ4616 (ΚβΗΙ+Μ/οΙ) Остаточный каркас и ТЕР1 промотер (Рзг11+ М/и1) Из рМВ4590
рМВ4631 рМВ4603 (ΚρηΙ+ΜίΦ) 1.2 т.п.н. СРО1 промотер (Крп1+Л/йе1); МО4568 и МО4659
рМВ4628 рМВ4603 Сагр См. 1А
рМВ4637 рМВ4629 1.5 Ьтд1тп,! ОКЕ (ХЬа! + МкЛ) См. Ю
рМВ4638 РМВ4629 салВ(Г) См. 1С
рМВ4660 рМВ4638 {+иРАЗ) сагВ(Г) См. 1В
рМВ4662 рМВ4631 (5ре1+ХЪо1) 1.8 т.п.н. иРАЗ фрагмент (Зре1+Ваа|)
РМВ4683 рМВ4662 (Асс651+М/и1) 1.4 т.п.н. (е?1 Ρ-6Θ31 Фрагмент (Асс651+Мте1) Из рМВ4591
рМВ4692 рМВ4682 (Асс651+М/а1) 0.4 т.п.н. ТЕР1 промотер См. 1Е
(Асс651+Л/Ле1); 0.55 т.п.н. ΟΓίΖ ОКЕ (ХЬа1+М/а1)
рМВ4698 рМВ4629 (Л/Ле1+ШЛ) 0.9 т.п.н. ΟΓίΙΥ ОКЕ (Х£>а1+ Λί/υΙ) См. 1Е
рМВ4599 рВ1ие8Спр13КН(ЕсоКУ) 1.9 т.п.н. сагРРген МО4525 и МО4541
рМВ4606 рВ1иезспр18К11- (ЕсоРУ) 1.9 т.п.н. сагВ ген МО4530 и МО4542
рМВ4613 рМВ4599 (Асс651+ ΡρυΜΙ) сагРР(\') См. описание
рМВ4619 рВ1ие8спр(ЗКП(ВатН1+ Асс651) сагВ{Г) См. описание
Некоторые олигонуклеотиды, указанные в табл. 27, представлены ниже
- 19 016258
МО4471 б'-СТСССТбАССТСеДАСССТТ
МО4472 5'-ААСАТСААТСССТАСААСТТСАЗ
МО4475 З'-ААСССАТТАСААТСТТССТТТСО
МО4476 5'-ССАЗТССАТСААСТСАСТСТСА
МО4477 5'-ССАТТССТТАТТАС6ААбАСТАС
МО4478 Б'-ССАСТСТССТССАСТАСАААСАС
МО4534 5-САСАААС6СЗТТСАСТЗСЗСАТССТСАААЗТ
МО4544 5-САСААТСТА<ЗАСАСАААТС6АТТАТААСАССССССАТ
МО4566 5'-САСАААСТА6ТТТЗССАССТАСААЗССАСАТ
МО4568 5’- САСААССТАССААТСТСАААСТСССССТСАТ
МО4571 5'-САСААеСТАССАОАСАССеС(ЗТТССС66
МО4591 5’- САСААЗСЗЗССССЗСТАбСАТЗЗЗСАТСЗАТСТСТТАТАТ
МО4592 5-САСААСССЗСС<ЗСОСТА6СОААТеАТТСТТАТАСТСАСААС
МО4593 5'-САСААССССССССАСССЗТССААТТААСАСАТАСТТТССС
МО4659 5'- САСААЗСТАЗСТЗОСЗАТЗССАТСТСТТАТАТС
1А. Продуцирование рМВ4628 ВеПр-сагИБ БЕШ), кодирующего фитоенсинтазу/ликопинциклазу: интронсодержащий сагКГ амплифировали из геномной ДНК (АТСС 90680) М. с1гс1пе11о1без, используя МО4525 и МО4541
МО4525 бьСАСАААСЗСбТТТАААТОЗТАТТТАЗАТТТСТСАТТ
МО4541 б’-САСААТСТАСАСАСАААТЗСТЗСТСАССТАСАТЗЗА а полученный фрагмент размером 1,9 т.п.н. (тысяч пар нуклеотидов) фосфорилировали полинуклеотидкиназой Т4. Образовавшийся фрагмент лигировали тупым концом в рВ1ие8спр!§КП, расщепленный ЕсоКУ, получив рМВ4599. Фрагмент ХЬа1-М1и1 размером 1,9 т.п.н. из рМВ4599 инсертировали в рМВ4603, расщепленный ΝΙκΙ и М1и1, получив рМВ4628. Интронсодержащая последовательность, кодирующая нуклеиновую кислоту, и кодированый белок СагИб рМВ4628 представлены ниже а1дс1дс1сасс1аса1ддаад(ссасс1с1ао(асасдс!дсс1д(дс(дддсд1сс1д(сс1ддс1д1сдсд дссд(айасасадссассда1дсдс!сааайсааай!йдасас1ддйдссйсасдассдсс(ссдсс1дддас аайасайд!
йассасааддсд1дд1сйайдссссасйдсд1сассдйд1са(1ддйасд1дсссйддаддад1аса1дй:сй са(са1са(д ас1йдйдассд1ддсайсассаа1йдд!да1дсдйддсасс1дсасадсйсй1а!саддсйдааасдсссд(с а!дсад!сс д!сйдд1ссд!сйд!сссса1аасадсй1айаа1сайдса1асааддсйддд1аадсааасааасааа1да1д1
- 20 016258 дссдса1сдса ййаа1айаассайдса1асасадсай1ддсдд1ссс1ддааадссайдййасдда1са1дсаййд1дд1асдс с(д1ссддШ 1ддссиайд1дди(дд(дс(ддсдад(аса(да1дсд(сд1ссдс1ддсдд(дс1сд(с1ссайдсдс(дсссасдс1 дШскйдй ддд1сда(д(сд1сдс(а((ддсдссддсаса<дддаса(((сдс(ддссасаадсассддсаад11сд1сд1дсссс асйдсссд! ддаддаайса1дйсй1дсдс1аайаа1ассдййдд1ай1дд1асд1д1дсда1сда1сдсасда1ддсда(сйсс асс(дйсаа ааасаадад1ссЦа(садсдссса1ассадсасадсаад1сдДсс(ссассада1сс1сдада(дасс1дддссЦ с(дй1асссда ссаад(дс1дсайсадасасайссасдасйд(ссд1садс1дддаса(сс1дсдсааддсс(ссаад1ссййас асддсскЛдс 1д1сй1сссддсдасд4дсдссаададйсдд1д1дйа1асдссййдсададссасддасда1с1с1дсдасаас дадсадд1с сс1д(дсадасдсдаааддадсадс1да(ас1дасаса1садйсд1садсда(с(дй{ддссаааадасаадсд сдссдайдсс айдас(дддасййасаасдассаас1дсс(дсйсд1дса1с1с1дссйсаад1сдйсасссдй1дсдсса1д1дс( ддаадйдд адсса(сааддаас1дс(сдасдддйсаад(ддда1йддадсд1сдс1сса(саддда(саддадда1с(сада( айайсадсй д1д1сдссадсад1дйдд1дааа1д1дсас1сдса1са1ас1ддсссасдссдасаадсссдсйсссдссадсаа асасад1дда 1сайсадсд1дсдсд1дааа1ддд(с1дд(ас1ссаа1а1асааасайдсаададасайд1сассдасадсдадд аайдддсад а(дйасс(дсс1саддайддсйассдадааддадд(ддсдс1дайсааддсддссйдсссдадааайддсд аддадсдай дс1йсайд1сдса(сдсс(саййассаддсадасдадйса{дд1ддйдссаасаадддса1сдасаадс1дсс садссайд!с ааддсддсд!дсд1дсддсйдсаасд1йа1дй(ссайддсассаадйсаад1сйасаадсассайа1ссса дсададсаса 1д1сддсаайсдааасдад1ддааайдйсйсйадсд(а1асаасййасассдсдссаайдсдайад1ад1а ссасасайдс адасадддааааа(дадааа1йааа1ассай1аа
Гп111угпеу!11уу(1ру|ду1зу/18груу1а1с1а1кмк1уай1а5ау|/с1пу|ууг1кауу8уср1су1ау|д уур1ееутТП|1п11Йуайа1утп«Г|1й5П1гре1рутч5У|уг1урИа11йаукаУ7Ыаурдкр11уд8а17ууасру| а11 ууГдадеутт1хр1ау|уз1а1р11йсууус1ууа1дад1У/с1181а(81дМуурЫруееТтй:а11п1у|у1д(са1дйта|| Ь11к пк8рудгрудЬ8к8ЙЬд|1ет№аГс1риду||-|5с1ЙМ1зу8жШгказк81у1а5ауТрдс1угде1ду)уаТсгай1 йсбпе дуруд<гкедПИпдМс1Иддк(зар(а1с1^с11уп0д1ра8аза!к8Йг1г(1У!еада1ке11с1дук>л'с11егг81Гс1дес1 1гууз асуаззудегпсйШа11айкра8гддк|\л/идгагетд|у|дуй11агс11УЙзее1дгсу1рдс1уу11екеуа1|ддд1аг адееИ
1818кг1|уда<1е1тууапкд1с1к1р8Нсдддугааспууа81д1к1к8укЫ1ур8гаЬудп8кгуе1а118ууп1у(ар1 а(ззйп сгддктгп1п11
Альтернативно, рМВ4599 также использовали в качестве матрицы для амплификации при помощи ПЦР с применением МО4318, МО4643, МО4644 и МО4639
- 21 016258
МО4318 5’-СТААААССАС6СССАСТ
МО4643 5 '-САСАСССТСТСАТСССААбССТТСТАТОСАСТбАТТАА
МО4639 5’-ссАстететттсстеесоб
МО4644 5'- САСАСССТСТСТеССАТТТеесеСТСССТССААА получив фрагменты размером 0,5 и 0,95 т.п.н., которые затем расщепили Асс651 и В§а1 и В§а1 и РриМ1 соответственно. Эти фрагменты лигировали в рМВ4599, который подвергли гидролизу с Асс651 и РриМ1, получив рМВ4613, содержащий безинтронный сагКР. Фрагмент ХЬа1-М1и1 размером 1,85 т.п.н. из рМВ4613 можно инсертировать в рМВ4603, расщепленный ΝΙιοΙ и М1и1, чтобы получить рСагКРбеП.
1В. Продуцирование РМВ4638 (1еГ1р-сагВ ΑΌΕ1), кодирующего фитоендегидрогеназу: интронсодержащий сагВ амплифицировали из геномной ДНК (АТСС 90680) М. сйстеПоЛех используя МО4530 и МО4542
МО4530 5’-САСАААССССТГТАААТСАСАТТАСАОТТАТ6ААС
МО4542 5'-САСААТСТАСАСАСАААТСТССАА6АААСАСАТТеТС а полученный фрагмент размером 1,9 т.п.н. фосфорилировали полинуклеотидкиназой Т4 и лигировали тупым концом в рВ8-8КП, расщепленный ЕсоКУ, получив рМВ4606. Затем рМВ4606 использовали в качестве матрицы для амплификации при помощи ПЦР с применением МО4318 и МО4648, МО4646 и МО4647, МО4343 и МО4645
МО4318 5 ’-СТААААССАСОеССАеТ
МО4648 б'-САСААбСТСТСААеСАСОСАТСССеСААСТе
МО4646 5 '-САСАСССТСТСАСССАТСТСОСССТАССАТСС
МО4647 б'-САСАСООТСТСАТОСТТССАСССАСАААОААТАСО
МО4343 б'-САбСАААСАССТАТСАС
МО4645 5' -САСАСССТСТСТТССССАТАТАСАТСОТСТОАААСО получив фрагменты по 0,4, 0,85 и 0,7 т.п.н., которые затем расщепили Асс651 и В§а1 и В§а1, В§а1 и ВатН1 соответственно. Эти фрагменты лигировали в рВ8-8КП, который был вырезан с Асс651 и ВатК1, получив рМВ4619, содержащий безинтронный сагВ. Фрагмент ХЬа1-М1и1 размером 1.75 т.п.н. из рМВ4619 инсертировали в рМВ4629, расщепленный ΝΙκΙ и М1и1, получив рМВ4638. Полученная последовательность, кодирующая нуклеиновую кислоту, и кодированный белок СагВ рМВ4638 представлены ниже а1д>ссаадааасасайд(сайа1сдд(дс1ддсд1ддд1ддсасддйасадс(дс1сдЩддсссдсда аддсйсаадд4сас(д(дд1ддадааааасдасй(дд1ддсддссдс1дс1ссйда1сса(сассадддсса1сд сШда1садд дсссд1сдс1с1асс1да1дсссаад1асШдаддасдссй1дссда(с!ддасдадсдсайсаадассасс(дда дс1дс1дсда
1дсдасаасаас(асаадд1дсасШдасдасдд(дад1сда1ссадс(д1сд(с1дасйдасасдса1дааддс(
- 22 016258 даайддассд сд1ддадддсссссйддййддссда11сс(ддай!са1дааададасасаса1ссас1асдааадсддсассс( дайдсдйса адаадааШсдаа1сса1с(дддасс(да(1сдса1саад1асдс(ссадада(с(йсдсЙдсасс1дШддсаад а1с(асдассд сдсйссаад1асйсаадассаадаада1дсдса1ддсайсасдй1садасса(д(а(а(дддса1д1сдссс1ас да(дсдсс(дс
1д1с1асадсс1дйдсад{асассдадйсдс1дааддса(с1дд(а1ссссд(ддсддсйсааса{дд1ддйсада адйададд сдайдсааадсаааад(асда1дссдадй4а1с1асаа1дсдсс1дйдссаадайаасассда1да1дссасса аасаад(даса дд1д(аассйддаааа{ддссаса{са(сда(дссда(дсддйд(д(д(аасдсада(с(дд(с1а{дсйа(сасаа( с(дйдсс(сс с1дссда(ддасдсаааасасайддсйссаадааайдасд1сйсйссай1ссйс1ас1дд1сса1д1ссассаа дд)дсс(саа1
1ддасд1дсасааса(с1ййддссдаддсйа1саддададсй1дасдааа1сйсааддасшддсс1дссйс(д аадссксйс
1асд1саа1д1дссс1йсдса1сда(ссйс(дс{дс(сссдасддсааддас1с1д(сайд1сйдд1дсс(айдд1са( а1даадад саадасдддсда1дсйссассдадаас1асссддсса1дд1ддасааддсасдсаада1дд1дс1ддс1д1дай дадсд)сд(с1 дддса1д1сдаай1сдссдасйдайдадса(дадсаад1саа1да(сссдс1д1а(ддсададсаадйсаа1с1д{ ддададдс!
саайс!ддд1йд4с1са1да1д1дсйсадд(дс{д1ддйссд1сссадсасаааддайс1ассдд1сдйа1да1аас с1айсЙ1д1 ддд1дсаадсасдса1сссддаас1дд(дйсссайд1ссйдсаддаадсаадс(сасс1с1дассаадйд1саа дадсШддаа адасдсссаадссаадааада(сдада(ддадаасасдсаадсассй1ддаддадсс1да1дс(даа(сдаса йссйд(д1дд1
1с1ддйдсдсдс1дссййддд(са1д(йа1дйсййасйсйссс1саа1ссаа1ддссааасдсссдса1с(й(а1са а1ааШдйа сс1даад1айссдсдйса1аас1с1аа1д1сакаа тзккп1уидадудд(а1ааг1агед1ку1ууекпсНдддгсз1|Г1йдд11гМддрз1у1тркуГес1аГас1
Нег1дс1Ые11гсс1ппукуМ0с1де81я1ззс111гткае1с1гуедр1д1дгПсйткей1|11уезд1Па1ккп{ез1УУС1Ппк уар ейг1М1дк|ус1га8ку(1к1кктгта!йч1тутдгп8рус1арауу5|к|у1е1аед1УУургдд1птуудк<еа1акд куйае
Пупаруактйс1а1кду1дуиепдппс1ас1аууспас11ууау11п11ррсгуу1дп11а8кк11з881з1ууу8гп5(курд1 άνΡηί
Йаеаудез1с1е11ксЙд1р8еа81уупур8пс1рзаарс1дк£18У1у|ур|д11ппкзк(дс1аБ4епуратус1кагкту| βνϊβΓΓΐ дт8п1ас11|е11едуг>РраууудзкГп1уугдэ|1д|811С1у|ду1уу/гр81кс1з1дгу<1пНТуда8й1рд1дур1у1адзкИ8 с1дуу кзТд1с(ркргк|етеп(дар1еер0аез1фУуЖм(гаа(улт'|ГтйуНрдзг1дд(ра8(|Пп11реу(гуНпапу!
1С. Продуцирование рМВ4660 (1еГ1р-сагВ ИКЛ3), кодирующего фитоендегидрогеназу. Фрагмент ХМ-ЫоП 4,3 т.п.н. и фрагмент Ыо11-8ре1 1,8 т.п.н. из рМВ4638 лигировали в ген ИКЛ3 размером 1,9 т.п.н., расщепленный В§а1 и 8ре1 и полученный путем амплификации ПЦР геномной ДНК Υ. 11ро1убса с использованием МО4684 и МО4685 для образования рМВ4660
МО4684 5’-САТТСАСТАСТО6ТОТ6ТТСТеТ6СА6САТТС
МО4685 б’-САСАСОСТСТСАТСбАООТОТАСТООТАСТОСАСТб
Полученная последовательность, кодирующая нуклеиновую кислоту, и кодированный белок СагВ(1) белок рМВ4660 представлены ниже
- 23 016258 а1д1ссаадааасасайд1сайа1сдд1дс1ддсд1ддд1ддсасддс1асадс1дс1сдй1ддсссдсда аддс11саадд1сас1д1дд1ддадааааасдасШдд1ддсддссдс1дс1сс11да1сса1сассадддсса1сд сШда1садд дсссд1сдо1с(асс1да1дсссаад1асШдаддасдссй1дссда1с1ддасдадсдсайсаадассасс1дда дс1дс!дсда
1дсдасаасаас1асаадд(дсас1йдасдасдд1дад*сда1ссадс1д1сд*с(дасйдасасдса{дааддй даайддассд сд(ддадддсссссйдд(й(ддссдайсс1ддай1са1дааададасасаса1ссасйасдааадсддсассс1 дайдсдсЮа адаадаай1сдаа1сса(с!дддасс(дайсдса1саад1асдс1ссадада1сШсдсйдсасс1д(йддсаад а(с1асдассд сдсйссаад1асйсаадассаадаада1дсдса1ддсайсасдй1садасса1д1а1а1дддса1д(сдссс(ас да1дсдсс1дс
1д1с1асадсс1дйдсад1асассдадйсдс1дааддса1йдд1а1ссссд1ддсддсйсааса1дд1ддйсада адс1ададд сдайдсааадсаааад1асда1дссдадй1а1о1асаа1дсдсс1дйдссаадайаасассда1да1дссасса аасаад!даса дд(д1:аассйддаааа1ддссаса1са1сда1дссда1дсддйд1д1д1аасдсада(с1дд1с1а1дсйа(сасаа1 с1дйдсс!сс с1дссда1ддасдсаааасасас1ддсйссаадааайдасд1сйсйсса(йссйс(ас1дд1сса1д*ссассаа дд{дсс1саа(
1ддасд1дсасааса1сйй1ддссдаддсйа1саддададсй1дасдааа1сйсааддасШддсс1дссйс1д аадсйссйс
1асд1саа1д1дссс1с1сдса1сда1:ссйс(дс1дс1сссдасддсааддас1с1д1сайд1сйдд1дсс1айдд1са1 а!даадад саадасдддсда1дсйссассдадаас1асссддсса1дд*ддасааддсасдсаада(дд1дс1ддс1д1дай дадсд1сд1й дддса1д1сдааШсдссдасйдайдадса1дадсаад1саа1да1сссдс1д(а1ддсададсаадйсаа1с1д1 ддададдс!
саайс1ддд1йд1с1са1да1д1дсйсадд1дс1д1ддйссд1сссадсасаааддайс1ассдд1сдйа1да1аас с1айс(йд!
ддд1дсаадсасдса(сссддаас(дд1дйсссайд(ссйдсаддаадсаадс(сасс(с1дассаадйд1саа дадййддаа адасдсссаадссаадааада1сдада1ддадаасасдсаадсасс1Йддаддадсс1да1дс1даа1сдаса
Иссс(д1д(дд1 (с1ддйдсдсдс1дссййддд1са1д1йа1дйсййасйсйссс1саа1ссаа1ддссааасдсссдса1сййа1са а1аа1йдйа сс(даад1айссдсдйса1аас1<йаа1д1сай1аа т8ккб1У11дадудд(а1ааг1агедТкИууекпс11дддгсз1|ЬйддбгТс1ддрз1у1тркуГес1аТас1
10епдйЫе11гсйппукубМс1дез1д188й1(гткае1д1Уедр1дГд|41сйткей1111уе5дЙ1а1ккпГе51ж11|пк уар еИг1ЫГдк)у4газкуГкЬйтигпай1д1аутдгпзрус1араууз11ду1еГаедгл'ургдд1птуудк1еа1акдк уйае
Г|упаруак1ПЙ0а1кд\Лду(1епдб11с1ас1аууспас11ууауйп11ррсг\«1дпИа8ккйззз1з1у1л<31Пз1курд1
Φ/Ιιηί
Т1аеаучезйе|1кс1Тд1рзеаэГуупурзпс1рэаарс1дкдзу|у|ур|дЬппк8к1дс1а81епуратус1кагкту| θνίθίτΙ дтзпГа01|ейедуп<1рауж|зкГп1«/гд811д18Г1с|у|ду|у4|р51кй81дгус1г11йудавй1рд1дурМад5к115 ΰςνν к5Тдк(ркргк1етеп1дар1еерйаезйр™Гт1гаайлл/пп1тйуйрд8пдя1ра8йпп11реу1губп8ПУ1
1Ό. Продуцирование рМВ4637 и рТеГ-НМС, кодирующих усеченный НМС1.
Для продуцирования усеченного варианта гена редуктазы ГМГ-СоА, который кодирует также лидерную последовательность 77 аминокислот, полученную из 8. сегеу181ае, синтезировали следующие олигонуклеотиды:
- 24 016258
ПРАЙМЕР О 5'-ТТСТАСАСАСАААААТСССТССАСАССААТТССТСА
ПРАЙМЕР Р б’-САТТААТТСТТСТАААОСАСеТАТТТТСТТАТС
ПРАЙМЕР 0 б'-СТГСТСТбСАССАССТАбАеб
МО4658 5'-САСАСАССС6ТАСАССТАТ6АСССТАТССАААТ
Праймеры О и Р использовали для амплификации фрагмента размером 0,23 т.п.н., кодирующего Ме1-А1а с последующими остатками от 530 до 604 белка Нтд1 8. сетеу1х1ае, применяя геномную ДНК в качестве матрицы.
Праймеры О и МО4658 использовали для амплификации фрагмента размером 1,4 т.п.н., кодирующего 448 С-концевых остатков белка Нтд1 Υ. 11ро1убса, применяя геномную ДНК в качестве матрицы. Эти остатки лигировали в соответствующий клонирующий вектор, а полученные плазмиды, обозначенные как рОР и рЦМО4658, проверили секвенированием. Фрагмент ОР выделили при помощи ХЬа1 и Ахе1, а фрагмент ЦМО4658 - при помощи Мае1 и М1и1. Затем эти фрагменты, вырезанные с ХЬа1 и М1и1, лигировали в вектор рМВ4629 экспрессии АЭЕ1 ТеГ1р, чтобы получить рТеГНМС.
Альтернативно, нативный ген Нтд1 из Υ. Нро1у(1са можно модифицировать без последовательностей 8. сегеу1х1ае, как показано в приведенной выше таблице, используя праймеры МО4658 (описан выше) и МО4657, чтобы получить рМВ4637
МО4657 5 '-САСАСТСТАбАСАСАААААТбАСССАСТСТбТбААбСТбС
Полученная последовательность, кодирующая нуклеиновую кислоту, и кодированный белок Нтд14гапс рМВ4637 представлены ниже а*дасссад(с!д1даадд1ддйдадаадсасдйсс1а(сд1сайдадаадоссадсдадааддаддад дасасс1сйс1даадас1ссайдадс1дас1д1сддааадсадсссаадссод1дассдадасссдйс1с1ддас дасс1ададд с1а<са1дааддсадд(аадассаадсйс1ддаддассасдаддйд1саадс(с(с(с(сдадддсаадсйсс1й д1а1дс(ойда даадсадсйдд1дасаасасссдадс1дйддса1ссдасда1с(а1сай:1сссадсад1с1аа1ассаадасШа дадасйсаа адсйссйасс1дсас1асдас1асдассд(д1й1(ддадсс1дйдсдадаасдйайддйаса(дсс1с1соссдй дд!дйдс1д дсссса1даасайда1ддсаадаас(ассасайсс1а(ддссассас1дадддйд1сйдНдсс1саасса1дсд аддйдсаадд сса1саасдссдд1ддсдд(дйасоайд1дсйас1саддасдд1а1дасасдадд4ссйд1дй1ссйсссс1йс( саадсдддс 1ддадссдс1аада1с1ддсйдайссдаддаддд1с1саад1сса1дсдаааддссйсаас1ссасс1с1сда1йд с1сд1о1сса д1йсйсас1с1асссйдс1дд1аасс1дс(дй1айсдайссдаассассас1дд(да1дсса1дддса1дааса{д а1с(ссаадд дсд(сдаасас1с4с1ддссд1са1дд1сааддад(асддсйссс1да1а1ддасайд1д1с(д1с(сддд1аас(ас1 дсас!дасаа даадсссдсадсда1саас1дда1сдааддссдаддсаадад1дйдйдссдаадссасса1ссс1дс1сасай д(саад1с1дй с1саааад1даддйдасдо(сйдйдадс(сааса(садсаадаа1с{да1сдд1ад{дсса1ддс{ддс1с1д1ддд аддй!саа!д сасасдссдсааасс(дд1дассдсса1с1ассйдссас(ддссадда(сс(дс1садаа1д1сдад1сйссаас1
- 25 016258 дса1сасдс(д а(дадсаасд(сдасдд(аасс1дс(са(с1ссдмсса(дссйс(а1сдадд1сдд(ассайдд(ддадд(ас(айй ддадсссс адддддс1а1дс1ддада1дсйддсд(дсдадд1сс1саса(сдадасссссдд!дссаасдсссаасадс«дс1 сдса1сайдс Йс1ддадйсйдсадсддадсй1сдс(д1дйс1дс1сйдс1дссддсса1сйд1дсааад1са1а1дасссасаасс ддГсссадд с1сс1ас1ссддссаадсад(с(саддссда1с1дсадсд1с1асаааасддйсдаа(ай(дса1эсдд1сэ1ад
1п1дзукууекйурмекр8екеесй88ес181ейуд1«|ркру1е1г810с11еа1ткад1с1к11еййеуук 1з1едк1р1уа1екя1дс1пйауд1гг8Й8дязп1кйе18к1ру111ус1у<1гуГдассепу|дутр1рудуадрппп1С1дкп γίιίρ тайедс1уа81тгдска1падддуЙу1к|с1дгпй'дрсузТр81кгадаакп«1с18еед1к8тгкай|518ГГаг1д8111 зИадп!
1й|1гй1д<1атдтпт18кдуеГ|з1аутукеудТрс1тсйУ5УздпусМккраа1ГИУ1едгдк5УУаеайра111Ук зу1кз еус1а1уе1п18кпПдзатадзуддта11аап1у1а1у1а1ддс1радпуе88пс1Йт8пус1дп1Нзузтрз1еудйд ддйер ддат1ет1дУгдр|11е1:рдападц1аП1азду1аае181с8а1аадЫуд8йт№пг8дар1ракд8дас11дг1дпд
ЗП1С1Г8
1Е. Продуцирование рМВ4692 (ИКА3 !е£1р-сг12), кодирующего каротингидроксилазу.
Синтезировали следующую последовательность каротингидроксилазы (ί'ιΐΖ) ОКЕ на основе последовательности белка №1оБр11тдоЬшт аготайсгуогапБ, используя склонность кодона Υ. 11ро1у!1са к кодированию
5'Цс{адасасааааа{яяя1яяаясса1ясаяассс1сяс1яс1а1сс{яа1ся1сс1сяя1асад{яс1еяс1 айяадПШс ясйяя1сНс1са1аан1а1а1са1яса1яясйсяяа1яяяяа1дяса{аяаяасса1сасяаясссса1д аяяяаШсйя аяааяаа1яасНа1асдсса1сяйяясяс1яссс1с1сяа1ас{са1яШяссс1сяяс1с1ссса1яа1с а1дддсяс<дас дсс1дя1яясссдйаасс<дда1сдаас1сяд1а1сс1сйс1а1дя1д1са1с1а1ассс1сд{дсасдасд я1с1яя1дсасс аасяа{даШааа1аяа1ясс1ааасяааяНасяссааасяасЗся1ясаяяссса1ааяс1дсассас яссассаНяяс ааддааяааяяся1с1саПсяяШсд1дЦсясссяаяа1сссяссяйс1яааясааааасйсааас1 саасдадаадс адд1а1сдссд1яс1дсдададдс1д1ддаеддс1адасдса1
Эту последовательность расщепили при помощи ХЬа1 и М1и1 и лигировали с фрагментом промотора Асс651-Ше1 ТЕЕ1 из рМВ4629 в рМВ4662, вырезанный с Асс651 и М1и1, чтобы получить рМВ4692. Последовательность, кодирующая нуклеиновую кислоту, показана выше полужирным шрифтом и подчеркнута. Полученный кодированный белок ^ΙΖ белок рМВ4692 представлен ниже тддатдйаай1у|д1у1атеГуам/8зпку|т11дГд»/ди/11гс1Ы1ерйедЯекпс11уа1удаа1з|| тТа1д8рт1тдайаумрдМд1дуйуду1уЙуТ1с1д|у1х1плФуууркгдуак|1уяайк1№айдкедду5ТдТ у!аг фау1кчекадгеад1ау1геаус1д
1Е. Продуцирование оГ рМВ4698 (АОЕ1 !е£1р-сг1^), кодирующего каротинкетолазу.
Синтезировали следующую последовательность каротинкетолазы (Сг1\У) ОКР на основе последовательности природного белка, выделенного из Саргассова моря (номер в базе данных СепЬапк: ААСΥ01034193.1)
- 26 016258
5’Нс1ааасасааааа1дас1сдаЬ;иШсс'Щд<;сМссасс1ас1ддсасс1ссадссс1:сс1дИсйсйдд д^сасааасаа аЫс1с<сс1саадсссдаааадд1с1сд1сс{сдс1:аа1с1сайадН:ссасйадс1асКас<с1саяасК ддсйИсссйс ссс1сса(сааасдадс1ддсйс^сакдпНд1с1сдКс{ссНада{сШсс1дсасассддасШПа1с дНдссса<да сдс{а1дсасдсНс1сйдйсс1дассасссгддссааассдЫддайддасдЩ1с1д1:сйс1:са<:д1з1д с{ддас1с1сс^ асаааадаШсМссдааа<сассд{сяасассассааасссс{аааасадКааааасссЩасГасса асда1дсас!аа саасаа1а1сс1саас*ддисдНдасШаЦ|ддааааасс{сдда1ддсаасаайдсКаа1с1с1сйдс дШддс{сдс (:сиассКссд<дЩс{дас{ас1с1дс1саайсКссасс<дс4сс<Шс1с<д{ссНсс<с1са1сд<с4сс{ ссЩсааскЛ {сс1сд1аддаасс1дд<Ляссасассдасдаддсдс1ас1ас1сдасссяасайассас1сяа1ссс*д аасйссассс1д с1сШссМсдс1дсЦдс1ассасНсддйассассд1даасасса<даа1с1ссс1:сГас1ссНдйЦссаа сйсс«ааас1с сдадааддйс1с1са1сЬаасаса!
Эту последовательность расщепили при помощи ХЬа1 и М1и1 и лигировали в рМВ4629, вырезав с ЫЬе1 и М1и1, чтобы получить рМВ4698. Последовательность, кодирующая нуклеиновую кислоту, показана выше полужирным шрифтом и подчеркнута. Полученный кодированный белок сг1\У рМВ4698 представлен ниже т1г£1£№р&1ушЫдр5сг&№апе!&рдагкд1у1ад||д8аш1111д1д1г1р1Ьд15ш1НдсМ1г&№ 1д1ПуаНс1атГ|а8|урс111рд1гту|дп/с11туад1зукгсст11п'п11даре1уейрс1учгс1ппг>1Й17ут11Гтд пу!дуу дд11п1бстч71аМгузс1у8адПЫ1К8у|рНуз5сд1(1удЬ«1р11ггда11грд7Йг81пП1ра18Гаасу|1ТдуНге!111е зрэ( руу£я1рк1гед51|
Пример 2. Конструирование Уагго\\та 11ро1уДса для повышения продуцирования каротиноидов.
2А. Продуцирование оГ Υ. Нро1уДса, экспрессирующего геранилгеранилпирофосфатсинтазу и фитоендегидрогеназу: МЕ350 (МАТВ ига2-21 1еи2-35 абе1) трансформировали с рМВ4591 (!е£1р-6681), который был расщеплен выше ИВА5 с 8кр1; идентифицировали трансформант Ига+, содержащий плазмиду в локусе ига2, и обозначили его как МЕ364. Затем его трансформировали с рМВ4638 (!е£1р-са), который расщепили в АЭЕ1 с 8кр1, и выбрали прототропный трансформант, который закрепил плазмиду в локусе абе1. Этот штамм обозначили как МЕ502.
2В. Продуцирование Υ. 11ро1уДса, экспрессирующего геранилгеранил-пирофосфатсинтазу, фитоендегидрогеназу и фитоенсинтазу/ликопинциклазу МЕ502 траснформировали с рМВ4628 (!е£1р-сагВР), предварительно обработанным 8кр1. Выбрали девять прототрофных колоний, которые были неокрашенными, оранжевыми или интенсивно оранжевыми на питательной среде для трансформации (агар ΥΝΒ с 1% глюкозы и 0,1% глютамата |ΥΝΒ§1υΙ|) после выращивания в течение двух-трех суток. Две из них МЕ597 и МЕ600 (интенсивно оранжевые) продуцировали более 4 мг каротина на 1 г сухой клеточной массы (бгу се11 \уещН1 Όϋν) после четырех суток выращивания в среде, содержащей декстрозу и пептон, при 30°С. Анализ методом саузерн-блоттинга выявил одинарную полосу Крп1-НтбШ в геномной ДНК, отличную от МЕ597 и МЕ600, ни одна из которых не предполагала гомологичной интеграции в 1еи2-270.
2С. Продуцирование оГ Υ. 11ро1уДса, экспрессирующего фитоенсинтазу/ликопин циклазу и фитоендегидрогеназу: АТСС201249 (МАТА ига3-302 1еи2-270 1ук8-11) трансформировали с рМВ4628, расщепленным 8кр1. Сотни колоний Ьеи+ объединили, дополнительно вырастили и трансформировали с рМВ4660 (!е£1р-сагВ), который предварительно расщепили 8а11 выше ИКА3. Выбрали одну колонию, которая имела заметный желтый цвет после выращивания в течение 5 суток при 30°С в ΥΝΒ§1ι.ιΙ плюс 0,6 мМ лизина, обозначили как МЕ447 и установили, что она продуцирует 0,2 мг каротина на 1 г сухой клеточной массы после выращивания в среде, содержащей декстрозу и пептон, в течение 4 суток.
МЕ447 стимулировали 1 г/л 5-фтороротовой кислоты и выбрали сегреганты для Ига-. Неожиданно оказалось, что все они сохраняют идентичный желтый свет своей материнской клетки, что указывает на то, что потеря функционального гена ИКА3 не совпадает с потерей функционального фермента СагВ. Анализ способом саузерн-блоттинга показал, что два фрагмента из гидролизата Крп1-НшбШ ДНК МЕ447 содержали ИКА3р-гибридизирующие последовательности, только одна из которых также гибридизирует в сагВ. Другая - отсутствует в МЕ578, сегреганте Ига3-, выбранном для дальнейшей работы. Выделение
- 27 016258 плазмиды и анализ последовательности ДНК, содержащей интрон сагЯР в штаммах МР447, МР597 (пример 2С) и МР600 (пример 2С), показал, что экзоны 1 и 2 являются смежными, при этом каждый из них отделен интронной последовательностью, в которой отсутствует исходный внутренний сайт 8кр1 (присутствующий в РМВ4628).
2Ό. Продуцирование Υ. Нро1у(1са, экспрессирующего фитоинсинтазу/ликопинциклазу, фитоендегидрогеназу и геранилгеранилпирофосфатсинтазу: МР578 трансформировали с рМВ4683 (1еГ1р-СС81), который предварительно расщепили 8а11 (выше ИЯА3) или 81и1 (в СС81 ОЯЕ). В обоих случаях колонии Ига+ Ьеи+ были ярко-оранжевыми на ΥΝΒ§1ι.ιΙ+Ρύ8 и на среде, содержащей декстрозу и пептон, при этом некоторые из них, будучи выращенными, как описано выше, продуцировали более 4 мг каротина на 1 г сухой клеточной массы. Одна колония, МР633, содержала единственную копию плазмиды в локусе СС81, как показал анализ методом сузерн-блоттинга. Остальные являлись результатом негомо логичных или более сложных интеграций.
2Е. Продуцирование Υ. 11ро1уйса, экспрессирующего фитоинсинтазу/ликопинциклазу, фитоиндегидрогеназу и геранилгеранилпирофосфатсинтазу: МР364 скрестили с МР578 и поместили споры полученного диплоида в среду, содержащую декстрозу и пептон, (Уеак1 Рер1опе ЭехЯоке, дрожжевая пептонная декстроза) на двое-трое суток при 30°С. Провели контроль оранжевых колоний Ьеи+ Абе- Ига- на присутствие 1еГр-сагВ, 1еГр-сагЯР и 1еГр-СС81 при помощи ПЦР и на высокое продуцирование каротиноидов (>4 мг/г сухой клеточной массы) после выращивания в жидкой среде, содержащей декстрозу и пептон. Колонии, соответствовавшие этим критериям, а также проявлявшие стойкость к 5-фтороротовой кислоте, что является показателем содержания аллеля ига3-302, выбрали для дальнейших исследований и далее обозначили как штаммы СВЯРиа. Этот штамм выбрали для последующего анализа и модификации.
Пример 3. Экстракция каротиноидов из клеток Уагго^1а 11ро1уйса.
Провели испытание полученных штаммов во встряхиваемой колбе, используя среду, содержащую декстрозу и пептон (1% экстракта дрожжей, 2% пептона, 2% глюкозы). 20 мл культур выращивали в колбах емкостью 125 мл при 30°С. Клетки Υ. 11ро1уйса отбирали от культур, выращенных в течение 72-96 ч, и проводили экстракцию, чтобы определить форму и количество каротиноидов. 1,8 мл культуры поместили в микропробирку типа Эппендорф. Клетки суспендировали и дважды промыли 1 мл Н2О. После второй промывки ресуспендированные клетки перенесли в предварительно взвешенную пробирку с защелкивающейся крышкой с отверстием в верхней части и лиофилизировали клетки в течение ночи. После сушки до постоянной массы пробирку взвесили, чтобы рассчитать величину сухой клеточной массы. 0,25 мл культуры из той же самой встряхиваемой колбы поместили в пробирку объемом 2 мл с завинчивающейся крышкой для экстракции каротиноидов. Клетки осадили центрифугированием и надосадочный слой слили. Суспендированные клетки можно заморозить при -80°С и хранить. К осажденным центрифугированием клеткам добавили гранулы кубического циркония вместе с 1 мл охлажденного до 0°С экстракционного растворителя (смесь 50/50 по объему гексана и этилацетата, содержащего 0,01% бутилгидрокситолуола (БГТ)). Затем смесь перемешали (М1п1-ВеадВеа1ег-8, Вю8рес РгойисК 1пс.) при максимальной скорости в течение 5 мин при 4°С. После этого смесь центрифугировали при максимальной скорости в течение 1 мин, отобрали надосадочный слой и поместили в холодный стеклянный флакон емкостью 16 мл. Остальной клеточный дебрис повторно экстрагировали по меньшей мере три раза без добавления гранул циркония. Все надосадочные слои объединили в стеклянном флаконе емкостью 16 мл. После экстракции стеклянный флакон центрифугировали в течение 5 мин со скоростью 2000 об/мин при 4°С в настольной центрифуге 8ог\'а11 и перенесли надосадочный слой в новый холодный стеклянный флакон емкостью 16 мл. Для концентрирования надосадочного слоя (в темноте, при комнатной температуре) использовали установку 8реей Уас. Образцы хранили при -20 или -80°С вплоть до проведения анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Перед анализом образцы ресуспендировали в 1 мл охлажденного до 0°С растворителя, а затем перенесли в холодный флакон из оранжевого стекла. На протяжении всего протокола следили за тем, чтобы исключить контакт с кислородом, светом, теплом и кислотами.
Пример 4. Количественное определение продуцирования каротиноидов методом ВЭЖХ.
Для проведения анализа каротиноидов образцы ресуспендировали в растворителе-экстрагенте (смесь 50/50 по объему гексана и этилацетата, содержащего 0,01% бутилгидрокситолуола (БГТ)), охлажденного до 0°С. Установку ВЭЖХ АШапсе 2795 (^а1егк), оснащенную колонкой \Уа1егк ХВпйде С18 (3,5 мкм, 2,1x50 мм) и защитной колонкой Тйегто Вак1с 8 (2,1x10 мм) использовали для разделения каротиноидов при 25°С. В качестве стандартов использовали аутентичные образцы каротиноидов. Подвижные фазы и скорости потоков указаны ниже (растворитель А = этилацетат; растворитель В = вода; растворитель С = метанол; растворитель Ό = ацетонитрил). Вводимый объем составлял 10 мкл. Детектор представлял собой фотодиодный матричный детектор \Уа1егк 996. Время удерживания для липофильных молекул: астаксантин (1,159 мин), зеаксантин (1,335), в-апо-8'-каротинал (2,86 мин), эргостерол (3,11 мин), ликопин (3,69 мин), β-каротин (4,02 мин) и фитоин (4,13 мин). Астаксантин, зеаксантин, в-апо-8'каротиналь, ликопин и β-каротин определяли при 475 нм, а эргостерол и фитоин при 286 нм.
- 28 016258
Таблица 28
Время удерживания для липофильных молекул
Время (мин) Поток (мл/мин) %А %В %С Кривая
0.50 0.0 20.0 0.0 80.0
3.00 1.00 20.0 0.0 0.0 80.0 6
4.50 1.00 80.0 0.0 20.0 0.0 6
5.50 1.00 0.0 0.0 60.0 40.0 6
6.50 1.00 0.0 0.0 80.0 20.0 6
7.50 1.00 0.0 0.0 100.0 0.0 6
8.50 1.00 0.0 0.0 100.0 0.0 6
9.50 1.00 0.0 20.0 0.0 80.0 6
10.50 0.50 0.0 20.0 0.0 80.0 6
Пример 5. Экспрессия редуктазы НМС-СоА в усеченной форме приводит к повышению продуцирования каротиноидов.
Для увеличения продуцирования каротиноидов усиливали поток углерода по изопреноидному пути за счет использования усеченного варианта гена редуктазы ГМГ-СоА.
В одном из вариантов реализации усеченный вариант гена редуктазы ГМГ-СоА, который также кодирует лидерную последовательность 77 аминокислот, полученную из Нтд1 8. сегеу181ае, ввели в штамм СВРВиа (описанный выше в примере 2Е). Плазмиду рТе£НМС можно расщепить 8паВ1, ВЬуС1 или Вки361, чтобы направить интеграцию в локус абе1, или ВатН1, чтобы направить интеграцию в локус НМС1, или ЕсоВУ, чтобы способствовать рандомизированной интеграции в штаммах СВРВиа, возвращая их к прототрофии аденина. В полученных трансформантах Айе' проверяли повышенное продуцирование каротиноидов.
Альтернативно, нативный ген НМС1 из Υ. 11ро1уйса можно модифицировать без последовательности 8. сегеу181ае, как описано выше в примере 1Ό, чтобы получить рМВ4637. Эту плазмиду можно гидролизовать, как описано для рТе£НМС, трансформировать в штаммы СВРВиа и произвести контроль полученных трансформантов, как описано для увеличенного продуцирования каротиноидов.
В другом варианте реализации может быть использован усеченный вариант гена редуктазы НМССоА N. сгакка и введен в штаммы Υ. 11ро1уйса. Для получения плазмиды, пригодной для экспрессии гетерологичной редуктазы НМС-СоА, модифицировали р641Р (Уеа5(5 2001; 18 (2001): 97-113) путем замены промотора 1СЬ1 на промотор СРЭ и добавления последовательностей, придающих резистентность к флеомицину. Геномную ДНК Υ. 11ро1уйса амплифировали двумя праймерами дистальный 6Ρϋ: 5' САСАСССТасс1д(аддйдддйддд(д проксимальный СРР: 5' САСАСССАТСС1дШааЙсаадаа1даа1а!ададаададаад, а образовавшийся фрагмент (0,7 т.п.н.) расщепили ВатН1 и Крп1 и лигировали в р641Р, расщепленном ВатН1 и Крп1, получив плазмиду р641Рдрй. Затем ген Ь1е под контролем промотора СРЭ А. шйи1апк удалили из рВСрЫео (811аг, Рипда1 Сепейск №\\'81еиег 42:73) в форме фрагмента Вс11-ВатН1 размером 3,2 т.п.н. и ввели в уникальный сайт ВатН1 р641Рдрй с ориентацией, которая препятствует сайту ВатН1, проксимальному к промотору СРЭ, создавать ''р641РдрйЬ1е.
Геномную ДНК N. сгакка амплифировали двумя праймерами прямой №ийтд: 5' САСАСС6АТССАСАТСААСАа1ддса1с1дссасссйсссс обратный Ыеибтд: 5' САС АССС АТСсаад1дс1дасдсддаасйд, а полученный фрагмент расщепили ВатН1 и ввели с нормальной ориентацией в р641РдрйЬ1е, гидролизованной ВатН1. Образовавшаяся плазмида μΖμ содержала последовательности, кодирующие усеченный цитозольный каталитический домен гидроксиметилглютарил-КоА-редуктазы из N. сгакка (номер в базе данных СепЬапк: ХР_324892) под контролем конститутивного промотора СРЭ. Эту плазмиду можно ввести в штамм Υ. 11ро1уйса, полученный в приведенном выше примере 2Е, а трансформанты выбрать по их резистентности к флеомицину (100 мкг/мл). Отобранные трансформанты тестировали на продуцирование β-каротина, как описано выше.
Пример 6. Введение гетерологичных генов каротингидроксилазы и каротинкетолазы в штаммы Υ. 11ро1уйса, продуцирующие каротиноид, для продуцирования астаксантина.
Для введения каротингидроксилазы и каротинкетолазы в штаммы Υ. Про1у(1са, продуцирующие каротиноиды, рМВ4692 и рМВ4698, описанные выше в примерах 1Е и 1Р, можно последовательно ввести в штамм СВРВиа (описанный в примере 2Е). Для введения рМВ4692 плазмиду можно расщепить 8а11 или ВкгСТ, чтобы направить интеграцию в локус ига3, или ХЬа1, чтобы способствовать рандомизированной
- 29 016258 интеграции, отбирая урацильные прототрофы. Трансформанты ОРРВиа Ига+, содержащие рМВ4692, тестировали на продуцирование зеаксантина в среде, содержащей декстрозу и пептон. Клетки, продуцирующие зеаксантин, трансформировали рМВ4698 (который можно расщепить РриМ1, 8§р1 или ВЬуС1, чтобы направить интеграцию в локус абс1. или ЕсоРУ, чтобы способствовать рандомизированной интеграции), а прототрофные колонии тестировали на продуцирование астаксантина.
В альтернативном варианте можно реверсировать порядок трансформации плазмиды, при этом вначале трансформировали рМВ4698 и выбрали трансформанты для прототрофии аденина. Траснформанты СРРВиа Абе+, содержащие рМВ4698, тестировали на продуцирование кантаксантина. Клетки СРРВиа [рМВ4698], продуцирующие кантаксантин, трансформировали рМВ4692, а прототрофные колонии тестировали на продуцирование астаксантина.
В другом варианте реализации гены каротиноидкетолазы и каротиноидгидроксилазы из Р. татсикп можно вводить в штаммы, описанные выше в примере 2, с целью превращения β-каротина в астаксантин. Геномную ДНК Р. татсикп амплифицировали двумя праймерами прямой ΟγΙΖ : 5' САСАСС<ЗТСТСААа(дассаай1сс1да1сд!сд(с обратный Сг£: 5' САСАСАСАТС1сасд1дсдс(сс(дсдсс, а полученный фрагмент расщепили ВктЫ, модифицировали фрагментом Кленова полимеразы ДНК, и расщепили ВдШ. Этот фрагмент ввели в ρΙΝΑ1269, расщепленный Рт11 и ВатН1 (1. Мо1. М1сгоЬю1. Вю1ес1то1. 2 (2000): 207-216), содержащий промотор йр4б, терминатор ХРР2, селектируемый ген ЬЕШ и последовательности, необходимые для селекции и размножения в Е. сой. Образовавшаяся плазмида рА содержала последовательности, кодирующие каротингидроксилазу из Р. татсикп (ген αΐΖ) (номер в базе данных ОепЬаик: САВ56060.1) под контролем промотора Нр4б.
рУЕОПЕЕ модифицировали замещением терминатора Ь1Р2 на терминатор ХРР2 следующим образом. рША1291 гидролизовали ΑντΙΙ, модифицировали фрагментом Кленова полимеразы ДНК и расщепили ЕсоР1, а малый фрагмент, содержащий ЫР21, лигировали в рУЕОПЕЕ, гидролизованной 8асП, модифицированном полимеразой ДНК Т4 в присутствии 6ΝΤΓ (дезоксинуклеозидтрифосфат) и расщепленном ЕсоР1. Полученную плазмиду обозначили как рУЕО1ТЕЕ-Е1Р21.
Для амплификации гена каротиноидкетолазы геномную ДНК Р. татсикп амплифицировали двумя праймерами прямой СИЛА/: 5' САСАСССТАССССа1дадсдсаса1дссс1дс обратный СПУУ: 5' САСАСАА6СТТ1са1дсдд!д1сссссйд, а полученный фрагмент расщепили ΑντΙΙ и ΗίηάΙΙΙ и ввели в рУЕО1ТЕЕ-Е1Р21, расщепленный ΑντΙΙ и ΗίηάΙΙΙ. Образовавшаяся плазмида рВ! содержала последовательности, кодирующие каротинкетолазу (ген сг!\У) (номер в базе данных ОепЬапк: САВ56059.1) под контролем конститутивного промотора ТЕЕ1.
Для того чтобы объединить две кассеты экспрессии в одну, плазмиду рВ1 расщепили СЫ, модифицировали фрагментом Кленова полимеразы ДНК, расщепили ЕсоРф выделили фрагмент, содержащий сгАУ, смешали с парой фосфорилированных олигонуклеотидных адаптеров
51 ААттсесеесссст и
5' АССООССбСО, расщепили №И и лигировали в рА, гидролизованной №И. Полученная плазмида, рАВ!, содержала обе кассеты ТеГ1р/сг1^/Е4Р21 и йр4б/стЙ/ХРР21, а также селектируемый ген ЬЕШ.
рАВ! можно вводить в штамм Υ. Бро1уйса, описанный выше в примере 4 (ТеГ1р/а1-1/ХРР2!; 11р4б/сагр/ЫР21: ОРПр/НМОР!гипс), и выбирать трансформанты для лейциновой прототрофии.
Пример 7. Частичная инактивация гена ЕРО9 Υ. 11ро1уБса, кодирующего скваленсинтазу, приводит к повышению продуцирования каротиноидов.
7А. Для частичной инактивации гена ЕРО9, кодирующего скваленсинтазу, разрушили соседний ген ЕОЬЗ, что привело к потребности в фолиевой кислоте. Затем этот штамм трансформировали с мутагенным фрагментом ДНК, частично перекрывающим два гена, и тестировали трансформанты Ео1+ на пониженную активность скваленсинтазы.
Синтезировали следующие олигонуклеотиды:
ПРАЙМЕР К 5'-ССТТСТАСТС6ТАССТАОТСАСС;
ПРАЙМЕР ί 5'-ССАСТСАТСТА6ААТСТСТТТСТОС и использовали их для амплификации фрагмента размером 2,3 т.п.н. из геномной ДНК Υ. Нро1уБса, перекрывающего основную часть гена ЕОЬЗ, при помощи полимеразы РГи. Полученный фрагмент расщепили ХЬаб и фосфорилировали, затем лигировали в рВ1иекспр18К-, который расщепили Крпб, обработали полимеразой ДНК Т4 (Т4ро1) в присутствии дезоксинуклеозидтрифосфатов и после этого расщепили ХЬаЕ
- 30 016258
Затем полученную плазмиду, обозначенную как рВ8-ГоВ, расщепили Асс651 и ЕсоК1, обработали Т4ро1, как указано выше, и лигировали во фрагмент ЕсоКУ-8ре1 АБЕ1 размером 3,4 т.п.н. (обработанный Т4ро1) из рМВ4529.
Полученную плазмиду, рВ8£о13ДаФе, можно расщепить Вк|\У1 и ХЬа, чтобы выделить фрагмент размером 5,5 т.п.н., который используется для трансформации штаммов СКВРиа, описанных выше, в прототрофию аденина. Полученные трансформанты АФе+ тестировали на потребность в фолиевой кислоте и гомологичную интеграцию при помощи анализа методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР).
Штаммы, которые содержат образовавшийся аллель £о13ДАБЕ1, можно трансформировать с фрагментом ДНК размером 3.5 т.п.н., который получается в результате мутагенной амплификации ПЦР с использованием праймеров
ПРАЙМЕР М б'-бССТСАТТССОСАТССТААСАТСС;
ПРАЙМЕР N б’-СОАССАТбСТАТбАбСТТСТАбАСС, и геномной ДНК Υ. 11ро1уФса в качестве матрицы. Полученный фрагмент, содержащий три четверти Ν’концевой области ОКЕ ЕОЬ3 и девять десятых С-концевой области ОКЕ ЕКС9, использовали для трансформации штаммов. Полученные трансформанты Ео1+ АФе- тестировали на уменьшение активности скваленсинтазы по чувствительности к таким агентам, как зарагосовая кислота, итраконазол или флуконазол. Кроме того, полученные трансформанты тестировали на увеличение продуцирования каротиноидов.
7В. Альтернативно, фрагмент ПЦР, полученный в п.7А, можно клонировать и модифицировать таким образом, чтобы удалить нетранслированную область 3' гена ЕКС9. Замена этим фрагментом расщепления Го13ДАБЕ1 приводит к уменьшению экспрессии скваленсинтазы [8сйи1Фшег е( а1. (2005), Се11 123:507-519] [МиЫгаФ и Рагкег (1999), КИА 5:1299-1307], что можно подтвердить, как и в п.7А. Такой же подход можно использовать для штамма Ео1+ АФе-, используя маркер АБЕ1 для расщепления 3'-ИТК ЕКС9.
7С. В другом варианте реализации частично дефектные аллели ЕКС9 можно идентифицировать в 8. сегеуыае при помощи способа перетасовки плазмид [Воеке е( а1. (1987), МеШоФк Епхуто1. 154:164-175] и используя восприимчивость к препаратам в качестве фенотипа. Дефектные гены можно переносить в Υ. 11ро1уйса, применяя стандартные молекулярно-генетические способы.
Пример 8. Обработка штаммов Υ. 11ро1уйса, продуцирующих каротиноиды, ингибитором конкурентного полипептида биосинтеза каротиноидов, приводит к повышению продуцирования каротиноидов.
Культуры, полученные в примере 2, обработали ингибитором скваленсинтазы - зарагосовой кислотой (зарагосовая кислота с концентрацией 0,5 мкМ) и тестировали на продуцирование β-каротина, как описано выше.
Пример 9. Конструирование олеагенного штамма 8ассйаготусек сегеуШае.
Провели сверхсинтез генов, кодирующих две субъединицы - АТФ-цитратлиазы из Ν. сгакка, АМФдеаминазу из 8ассйаготусек сегеуШае и цитозольную малатдегидрогеназу из М. спсте11о1Фек, в штаммы 8. сегеу1кеае, чтобы увеличить общее содержание липидов. Аналогичные способы увеличения продуцирования можно применять в других организмах-хозяевах, в частности в Хап11юр11у11отусек ФепФгогйоик (РйаГйа гкоФо/ута), используя те же самые гомологичные или функционально аналогичные олеагенные полипептиды.
Для получения матричной РНК (мРНК) из лиофилизированной биомассы, приготовленной из культур Ν. сгакка, использовали наборы 01адеп КИАЕаку (Р1адеп, Уа1епаа, СА.). Затем провели две полимеразные цепные реакции с обратной транскрипцией (КТ-ПЦР) с участием матрицы мРНК и одной из следующих пар праймеров.
ас11:
прямой: 5' САСАС6САТССТАТАа(дссЙссдсаасдассд обратный: 5' САСАСАСТАСйааай1ддасс1саасасдассс ас12:
прямой: 5' САСАСССАТССААТАТААа(д(с(дсдаададса1сс(сд обратный: 5' САСАС6САТССйаадсйддаас1ссассдсас
Фрагмент, полученный в результате реакции ас11, расщепили 8ре1 и ВатН1, а в результате реакции ас12 расщепили ВатН1 и 8рЫ, и совместно лигировали оба фрагмента в ΥЕр24, который гидролизовали И11е1 и 8рЫ, получив плазмиду р12. Двунаправленный промотор САИ-10 амплифировали из геномной ДНК 8. сегеуШае, используя праймеры
- 31 016258 даН 0: 5' САСАСССАТССаа1тсааааайсйасШйййдда1ддас даН: 5' САСАСОеАТССйййс1ссйдасдйааад1а1ададд, а полученный фрагмент размером 0,67 т.п.н. расщепили ВатН1 и лигировали в различных ориентациях в р12, гидролизованную ВатН1, чтобы получить р1да12 и р2да11'', содержащие САЬ1-ас11/САЬ10-ас12 и САЬ10-ас11/САЬ1-ас12 соответственно (образцы базы данных СепЬапк: ас11: САВ91740.2; ас12: САВ91741.2).
Для того чтобы амплифицировать ген 8. сегеущеае, кодирующий АМФ-деаминазу и промотор, пригодный для экспрессии этого гена, геномную ДНК 8. сегеуШае амплифицировали, используя две пары праймеров в отдельных реакциях: АМО1 ОКБ прямой ΑΜϋ1: 5' САСАССАССТСААААа(ддасаа1саддс(асасадад обратный АМ01: 5' САСАСССТАСС1сасййсйсаа1ддйс1сйдааайд
ΘΑυρ:
проксимальный да17: 5' САСАССАССТСддаа{айсаас1дйййй1а1са1дйда1д дистальный да17: 5' САСАСССА(ссйсКдаааа1а(дсас(с(а(а(сШ1ад
Фрагмент, полученный в результате реакции АМО1 (2.4 т.п.н.), расщепили 8ас1 и АугП, а в результате реакции САБ7 (0.7 т.п.н.) расщепили ВатН1 и 8рЫ и совместно лигировали в УЕр13, гидролизованной ΝΙκΙ и ВатН1, получив плазмиду рАМРЭ. Эта плазмида содержит ген 8. сегеуШае, АМО1, кодирующий АМФ-деаминазу под контролем промотора САБ7, индуцируемого галактозой.
мРНК получили из лиофилизированной биомассы М. снсше11о1бе8, как описано выше, и использовали матрицу мРНК в КТ-ПЦР с двумя праймерами прямой МАЕ: 5' САСОСТА6СТАСАААа1дйд1сас1сааасдса1адсаас обратный МАЕ: 5' САСАССТССАСйаа1да1с(сдд1а(асдададдаас, а полученный фрагмент расщепили ΝΙιοΙ и 8а11 и лигировали в рК8413ТЕБ, гидолизованной ХЬа1 и ΧΙοΙ (МитЬегд, Ό. е1 а1. (1995) Сене, 156:119-122), получив плазмиду рТЕБМАЕ, которая содержит последовательности, кодирующие цитозольный НАДФ+-зависимую малатдегидрогеназу из М. снсше11о1бе8 (Е.С. 1.1.1.40; ген тсе; номер в базе данных СепЬапк: АУ209191) под контролем конститутивного промотора ТЕБ1.
Плазмиды р1да12, рАМРЭ и рТЕБМАЕ последовательно трансформировали в штамм 8. сегеущеае, чтобы восстановить прототрофию для урацила (р 1да12), лейцина (рАМРЭ) и гистидина (рТЕБМАЕ) (Си111пе апб Б1пк МеШобк ίη Епхуто1оду 194:1-933, 1991). В полученных трансформантах определили общее содержание липидов после испытания во встряхиваемой колбе в полностью синтетической полной (8С) среде без урацила, лейцина и гистидина, как описано в примере 3, или в 2-этапном процессе ферментации. В 2-этапном процессе 1,5 мл клеток, культивированных в культуре, содержащей среду 8С без урацила, лейцина и гистидина, в 2 мл вращающейся пробирке в течение ночи, центрифугировали, промывали дистиллированной водой и ресуспендировали в 20 мл среды с ограниченным содержанием азота, пригодной для аккумулирования липидов (30 г/л глюкозы, 1,5 г/л экстракта дрожжей, 0,5 г/л ΝΉ4α, 7 г/л КН2РО4, 5 г/л Ыа2НРО4-12Н2О, 1,5 г/л М§8О4-7Н2О, 0,08 г/л БеС13-6Н2О, 0,01 г/л 2п8О47Н2О, 0,1 г/л СаС12-2Н2О, 0,1 мг/л Мп8О4-5Н2О, 0,1 мг/л Си8О4-5Н2О, 0,1 мг/л Со(ЫО3)2-6Н2О; рН 5,5 (.1. Ат Об Сйет. 8ос. 70:891-894(1993)).
Внутриклеточное содержание липидов модифицированных и контрольных штаммов 8. сегеуШае определяли при помощи флуоресцентного зонда нильский красный (1. М1сгоЬю1. Ме111 (2004) 56:331338). Вкратце, клетки, разбавленные буфером, окрасили флуоресцентным красителем нильский красный, который возбуждается излучением с длиной волны 488 нм, получили спектры флуоресцентной эмиссии в области длин волн 400-700 нм и сравнили их с соответствующими спектрами клеток, не окрашенных нильским красным. Для подтверждения результатов, полученных таким быстрым способом, общее содержание липидов определили при помощи газового хроматографического анализа всех жирных кислот, непосредственно трансметилэтерифицированных из сухих клеток, как описано в литературе (Арр1. М1сгоЬю1. В|о1есйпо1. 2002 Ыоу.; 60(3):275-80). Нетрансформированные штаммы 8. сегеуШае продуцировали 6 и 10% липидов суммарно (относительно сухой клеточной массы) после выращивания в среде, содержащей декстрозу и пептон, и среде, аккумулирующей липиды соответственно. Штаммы дрожжей, экспрессирующие несколько олеагенных полипептидов, продуцировали 17 и 25% липидов суммарно после выращивания в среде, содержащей декстрозу и пептон, и среде, аккумулирующей липиды соответственно.
Пример 10. Введение гетерологичной каротингидроксилазы в штаммы Υ. 11ро1у11са, продуцирующие каротиноиды, для продуцирования зеаксантина.
МБ578 (1еГ-сагКР 1еГ-сагВ) трансформировали с рМВ4692, предварительно расщепленным 8а11. Несколько колоний Ига+, которые согласно анализу методом ПЦР содержали 1еГ-сг12, смогли продуцировать зеаксантин во встряхиваемых колбах со средой, содержащей декстрозу и пептон, а в одном случае
- 32 016258 весь каротин был израсходован.
Ниже представлены таблицы, на которые имеются ссылки в настоящем описании. Таблица 1
Примеры полипептидов ацетил-КоА-карбоксилазы
Строка Номер в базе данных вепЬапк Общий идентификатор в базе данных бепбапк
1 ХР 410263 49097606
2 ХР 329580 32418204
3 ХР 386756 46124405
4 ХР 367702 39972623
5 ХР 501721 50548503
6 ЕАК99708 46440402
7 ХР 457211 50413128
8 ΝΡ 982612 45184894
9 ХР 449236 50293649
10 ΝΡ 593271 19114183
11 ΝΡ 014413 6324343
12 ХР 455355 50310667
13 Т42531 11272737
14 ААА20073 171504
15 ЕА1 20176 50257469
16 ХР 571316 58268320
17 ХР 402244 49076566
18 360200 2133343
19 ВАА24410 2804173
20 Р32874 1708192
21 355089 7438088
22 ΝΡ 990836 45382859
23 САЕ01471 32526576
24 ААК37018 40019048
25 ΝΡ 001... 57164283
26 ΝΡ 776649 27806341
27 СА125271 56205878
28 ХР 109883 51828611
29 ΝΡ 942134 38679971
30 ΝΡ 942131 38679960
31 ΝΡ 942135 38679974
32 ΝΡ 942136 38679977
33 ААР94122 33112885
34 ΝΡ 071529 11559962
35 2006242А 740964
36 АА813685 42405896
37 ΝΡ 598665 48976025
38 013085 2493311
39 ХР 548250 57091783
40 ХР 314071 58385597
- 33 016258
41 САО08536 47226520
42 ΝΡ 724636 24586460
43 ΝΡ 610342 24586458
44 ΝΡ 001084 4501855
45 ΝΡ 446374 16758804
46 ΕΑΙ 63219 60465120
47 ΝΡ 921034 37533464
43 Τ07084 7438099
49 ΑΑΡ78896 32264940
50 ΑΑΟ62903 29123370
51 ΒΑΑ07012 1100253
52 ААЮ2О56 15558947
53 ΑΑΘ40563 11869927
54 ϋ86483 25293894
55 Τ07920 7438090
56 Α57710 2130099
57 ΑΑΟ62902 29123376
58 2208491Α 1588584
59 Τ09538 7438102
60 САС19875 12057067
61 ΑΑΡ78897 32264942
62 Τ02235 7438095
63 ΑΑ640564 11869928
64 Ε86483 25293893
65 САС84161 20975574
66 Τ07081 7438097
67 САС19876 12057069
- 34 016258
Таблица 2
Примеры полипептидов пируватдекарбоксилазы
Строка Номер в базе данных ёепЬапк Общий идентификатор в базе данных ОепЬапк
1 ЮРВВ 7245977
2 САА54522 871533
3 1ΡΥϋΒ 515237
4 САА28380 4109
5 1ΡνϋΒ 1127233
6 САА33709 4114
7 ΑΑΝ77243 25992752
а ΝΡ 013235 6323163
9 О6ПАЗ 57012668
10 336363 486942
11 012629 52788279
12 ΑΑΡ75898 37359468
13 370684 2131152
14 ΝΡ 011601 6321524
15 ΑΑΟ73618 34500072
16 ΝΡ 983270 45185554
17 ΑΑΡ78895 8745337
18 САВ65554 6689662
19 ΑΑΡ75899 37359470
20 ΝΡ 982469 45184751
21 САА97091 1945321
22 350700 1086157
23 ΧΡ 446491 50288125
24 ΧΡ 462338 50427451
25 ААС03164 17066784
26 ΕΑΚ96569 46437219
27 ΧΡ 457131 50412425
28 ААС03165 2734883
29 ΧΡ 459224 50421349
30 САН56494 52673248
31 ΧΡ 502647 50550349
32 ΝΡ 010203 6320123
33 ΒΑΑ04886 1786148
34 χρ 449074 50293325
35 ЕАЮ4098 46444826
36 СА060727 27803024
37 Τ38759 25777585
38 ΧΡ 331173 32421459
39 ΝΡ 594083 19114995
40 ΧΡ 401609 49075036
41 ΧΡ 390010 46136637
42 ΧΡ 409025 49095128
43 ΝΡ 984350 45188127
44 ΑΑϋ16178 4323053
45 Ρ87208 2501326
46 ΕΑΜ8331 50255598
47 ΧΡ 567475 58260130
48 ΑΑΜ73540 21666011
49 ΑΑΜ73539 21666009
50 ΧΡ 502508 50550071
51 САА93158 1177659
52 ΧΡ 412533 49123327
53 Ρ51844 1706333
54 χρ 455842 50311631
55 САА61155 3688422
56 χρ 444902 50284947
57 САА47319 4118
- 35 016258
Таблица 3
Примеры полипептидов изоцитратдегидрогеназы
Строка Номер в базе данных бепЬапк Общий идентификатор в базе данных СепЬапк
1 013285 3023996
2 ЕАК91676 46432179
3 013285 3023996
4 ЕАК94305 46434909
5 ХР 451683 50303483
6 ХР 459772 50422415
7 013294 27805482
8 ХР 460289 50423413
9 ХР 390523 46137663
10 ХР 367343 39971905
11 ХР 323176 32405126
12 ХР 445447 50286037
13 ААК76730 15027826
14 ΝΡ 010217 6320137
15 ΝΡ 984921 45190667
16 ААК76731 15027827
17 Р79089 3023999
18 ΝΡ 013275 6323203
19 ХР 407136 49091350
20 ΝΡ 982520 45184802
21 ХР 446953 50289047
22 ХР 445184 50285511
23 ХР 455638 50311227
24 ААА64516 736722
25 ΝΡ 970434 42525054
26 ААТ93173 51013759
27 ХР 569233 58264154
28 ХР 569234 58264156
29 ХР 403726 49080406
30 ХР 503571 50552322
31 ХР 458151 50428131
32 013302 13124301
33 ХР 409927 49096934
34 ХР 385909 46122711
35 ХР 365293 39967489
36 ΝΡ 983873 45187650
37 ХР 455266 50310493
38 ΝΡ 594397 19115309
39 ХР 324955 32408949
40 САЕ81942 38636405
41 ΝΡ 014361 6324291
42 ХР 446479 50288101
43 ХР 567378 58259936
44 ХР 398944 49069310
45 ХР 502479 50550013
46 ЕАК96238 46436683
47 ЕАК96305 46436951
48 ХР 461797 50426401
49 ХР 328403 32415850
50 САР31997 42820684
51 ХР 389756 46136129
52 ХР 363786 39952139
53 ΑΑΙ.73035 18463935
54 ХР 405140 49086142
55 ΝΡ 595203 19111995
56 ΝΡ 014779 6324709
57 ХР 447564 50290265
58 ΝΡ 985684 45198655
59 ХР 566837 58258849
60 ХР 454086 50306171
61 ХР 398943 49069308
- 36 016258
Таблица 4
Примеры полипептидов АТФ-цитратлиазы
Строка Номер в базе данных бепЬапк Общий идентификатор в базе данных бепЬапк
1 ХР 327071 32413182
2 093988 30912679
3 ХР 370222 39977669
4 ХР 406573 49090008
5 ХР 504787 50554757
6 О9Р71Л/3 30912748
7 ХР .398620 49068662
8 ΝΡ 596202 19112994
9 ХР 567460 58260100
10 ΝΡ 001008 56118260
11 ХР 418154 50760837
12 ААН84253 54038148
13 ΝΡ 942127 38569423
14 ΝΡ 001087 38569421
15 Р53396 20141248
16 АА134316 17028103
17 ΝΡ 001002 50540366
18 ААН84776 54311201
19 821173 105392
20 ААТ94429 51092031
21 ΑΑϋ34754 28372804
22 ААН21502 18204829
23 ХР 319323 58392375
24 ΝΡ 725514 24653990
25 ЕА1.26601 54637198
26 САЕ56725 39579419
27 САЕ64663 39593194
28 ХР 511495 55645405
29 САГ95829 47210997
30 ААО22565 27754223
31 АА633788 17065616
32 САВ46077 5304837
33 САР96044 47204726
34 ААК13318 13160653
35 ААО75159 34558815
36 ААО75128 34558783
37 ХР 537640 57091075
38 ХР 327069 32413178
39 САВ76164 7160184
40 ХР 370223 39977671
41 ХР 386215 46123323
42 САА10666 7159697
43 ХР 406572 49090004
44 ХР 503231 50551515
- 37 016258
45 ΝΡ 593246 19114158
46 ХР 398620 49068662
47 ХР 567460 58260100
48 ААТ94429 51092031
49 ΝΡ 725514 24653990
50 ΑΑϋ34754 28372804
51 ΕΑί26601 54637198
52 ΧΡ 319323 58392375
53 ΑΑΗ84776 54311201
54 ΒΑΒ00624 9229902
55 ΝΡ 001008 56118260
56 ΑΑΗ84253 54038148
57 ΑΑΗ56378 38614162
58 ΝΡ 001087 38569421
59 ΝΡ 942127 38569423
60 Ρ53396 20141248
61 ΧΡ 511495 55645405
62 ΝΡ 058683 8392839
63 ΝΡ 001002 50540366
64 821173 105392
65 ΝΡ 508280 17551266
66 САЕ64663 39593194
67 САЕ56725 39579419
68 ΝΡ 506267 17557344
69 ΧΡ 537640 57091075
70 САЕ96059 47204551
71 Ε96633 25404292
72 ΑΑΜ91141 22136126
73 ΝΡ 849634 30681854
74 ΑΑΟ23582 27764922
75 ΑΑΜ65078 21593129
76 САС86996 15919089
77 ΑΑΟ75158 34558814
78 ΑΑΟ75127 34558782
- 38 016258
Таблица 5
Примеры полипептидов малатдегидрогеназы
Строка Номер в базе данных СепЬапк Общий идентификатор в базе данных СепЬапк
1 ΝΡ 012896 6322823
2 ХР 448858 50292851
3 ХР 454793 50309563
4 ΝΡ 986598 45201028
5 ХР 460887 50424595
6 ЕАК97738 46438407
7 ХР 504112 50553402
8 ХР 330094 32419237
9 ХР 380981 46107844
10 ХР 411070 49102552
11 ХР 362875 39946676
12 ΝΡ 587760 19075260
13 ΝΡ 978189 42780942
14 ΥΡ 035982 49481098
15 ΥΡ 027934 49184682
16 ΥΡ 018438 47527089
17 ΖΡ 002365 47565532
18 ΥΡ 083209 52143619
19 ХР 571672 58269032
20 ΝΡ 391586 16080758
21 ΥΡ 092693 52786864
22 ΝΡ 831516 30019885
23 ΥΡ 093460 52787631
24 ΥΡ 081030 52082239
25 ΝΡ 822689 29828055
26 034389 33517449
27 ЕАИ9111 50256386
28 ΝΡ 825047 29830413
29 ΖΡ 002340 47096498
30 ΝΡ 928837 37525493
31 ΝΡ 230833 15641201
32 ΝΡ 934257 37679648
33 ΝΡ 761613 27366085
34 АС1314 25283688
35 ΥΡ 055602 50842375
36 ΥΡ 095310 52841511
37 ΖΡ 002315 47093832
38 АС 1686 25283689
39 ΥΡ 126594 54294179
40 ΥΡ 123567 54297198
41 ЕА376260 44510091
42 ΥΡ 114273 53803890
43 ΝΡ 797637 28898032
44 ΥΡ 040250 49483026
- 39 016258
45 ΖΡ 001276 53693400
46 ΥΡ 044961 50083451
47 ΥΡ 128226 54295811
48 ΝΡ 719387 24375344
49 ΧΡ 572853 58271394
50 ΝΡ 252161 15598667
51 ΖΡ 001368 46164263
52 ΥΡ 125345 54298976
53 ΝΡ 793695 28871076
54 ΥΡ 096964 52843165
55 ΕΑΗ92280 44245125
56 ΥΡ 154988 56459707
57 ΕΑΙ68195 44354928
58 ΥΡ 070054 51595863
59 ΥΡ 133025 54303032
60 ΝΡ 969623 42524243
61 ΝΡ 856009 31793516
62 ДЕКАКВОХУ ΑΤΙΝ6))
63 ΝΡ 935035 37680426
64 ΥΡ 050922 50121755
65 Ε70705 7431223
66 ΝΡ 216848 57116971
67 ДЕКАВВОХУ ΑΤΙΝΟ))
68 ΥΡ 143786 55980489
69 ΥΡ 130202 54309182
70 ΝΡ 415996 16129438
71 ΝΡ 819843 29654151
72 ΝΡ 753809 26247769
73 ΝΡ 707611 56479957
74 Ρ85728 25283682
75 ΥΡ 163690 56552851
76 ΥΡ 150562 56413487
77 ΝΡ 720610 24378655
78 ΝΡ 460525 16764910
79 ΖΡ 003193 48865537
80 ΝΡ 784797 28377905
81 Τ13496 7431227
82 ΑΑν65766 55793550
83 Α97096 25283683
84 ΥΡ 193951 58337366
85 Η97096 25283684
86 ΖΡ 003237 48870993
87 ΖΡ 001460 41689468
88 086737 25283676
- 40 016258
89 ΖΡ 002870 48825851
90 ΖΡ 001439 34762975
91 1922245Α 737262
92 ΥΡ 169914 56708018
93 ΥΡ 055027 50841800
94 ΖΡ 000625 23023297
95 ΝΡ 296302 15807565
96 ΝΡ 285599 15807938
97 ΥΡ 132069 54302076
98 САА50716 467569
99 ΖΡ 002906 48833596
100 ΖΡ 003155 48861632
101 ΝΡ 773109 27381580
102 ΑΑΟ95658 37622953
103 САС19505 56204311
104 ΑΑΗ80660 51873855
105 Ρ40927 729986
106 ΑΑΤ02533 46850200
107 ВАС37086 26346875
108 Τ02763 7431235
109 ΧΡ 387367 46125627
110 ААС50613 1465733
111 САА39421 669118
112 САА39420 669117
113 ΝΡ 032641 6678912
114 САА39419 581228
115 ΑΑΒ01380 1335389
116 ЧС4160 1085347
117 Ε96828 25283677
118 ΒΑΩ87910 57899974
119 ΕΑ177Ο83 44511304
120 Ρ13697 266504
121 ΝΡ 036732 7106353
122 ΥΡ 065939 51246055
123 САС18164 16944467
124 ΧΡ 322953 32404680
125 ΑΑΚ91502 18460985
126 ΑΑΟ88396 37147841
127 ΝΡ 001003 57525624
128 1ΘΟ2Ρ 21465488
129 ΑΑΟ26053 28195290
130 ΑΑΗ84250 54038006
131 ΧΡ 362590 39946106
132 ΑΑΗ03287 13096987
133 029558 2497785
134 ΧΡ 532217 57094622
- 41 016258
135 Р28227 126734
136 ΝΡ 496968 17537199
137 ΝΡ 914533 34906372
133 ΑΑϋ 10504 4096786
139 ΑΑΟ67523 50897495
140 Ρ43279 1170871
141 ΑΑΚ83074 15077109
142 ΑΑΡ33011 30575690
143 ΑΑΝ86690 27357017
144 Ρ78715 41017288
145 ΑΑΡ32204 30526303
146 ΑΑν31249 54287505
147 Τ06402 7431232
148 Ο99ΚΕ1 55583978
149 ΧΡ 399922 49071266
150 Ρ36444 547886
151 ΑΑ030034 28059162
152 ΑΑΚ83Ο73 15077107
153 ΝΡ 002387 4505145
154 ΑΑΑ33487 168528
155 ΒΑΑ74735 4239891
156 ΝΡ 989634 45383538
157 1ΘΖ3Ρ 31615316
158 ΑΑνν56450 57791240
159 ΑΑΤ02534 46850202
160 329742 422339
161 Ю03В 34811253
162 . Ρ27443 126732
163 Τ06401 7431231
164 ААЫ6175 16226466
165 ΑΑΕ73006 8118507
166 ΑΑΚ97530 15420975
167 ΕΑΙ90348 44385841
168 Ρ51615 1708924
169 ΑΑΑ19575 169327
170 543718 1084300
171 Ρ34105 1346485
172 ΑΑ838597 42733630
173 ВАС54101 27530932
174 ΑΑΤ02535 46850204
175 САВ66003 6706333
176 ΑΑΗ84860 54311418
177 САА39422 669119
178 ΝΡ 916713 34910732
179 САА56354 510876
180 ОЕЕВС 7427668
181 6С5967 7431234
182 ΝΡ 197960 15239517
183 ΝΡ 651959 21356279
184 185 САВ64263 ΒΑΒ20887 6634090 54606800
186 ΕΑ1.27424 54638022
187 ΝΡ 006671 5729920
188 ΑΑΒ08874 1561774
189 1РЛН 33358128
190 16Ζ4ϋ 22218682
191 1ΩΡ6Β 5822327
192 1Ρϋ3ϋ 39654475
193 Ρ22178 126736
194 ΧΡ 410305 49097690
195 ΑΑΗ22472 18490280
- 42 016258
Таблица 6
Примеры полипептидов АМФ-деаминазы
Строка Номер в базе данных бепЬапк Общий идентификатор в базе данных ЭепЬапк
1 ААА34420 171053
2 ХР 446684 50288509
3 ΝΡ 983153 45185436
4 ХР 453337 50306727
5 ЕАЮ2322 46443037
е ХР 460211 50423261
7 ХР 503822 50552824
8 ХР 413009 49131023
9 ХР 360256 39941438
10 ХР 381547 46108978
11 ХР 330167 32419447
12 САВ97316 16945394
13 Т50996 11359582
14 ΝΡ 595153 19111945
15 ΕΑΙ.22226 50259553
16 ХР 402237 49076548
17 САА62797 995562
18 ААР65407 7638159
19 ХР 537039 57088163
20 ААН49119 29145073
21 ХР 569691 58265070
22 АА056303 5922018
23 ΝΡ 004028 21264318
24 А44313 345738
25 САИ 9307 56206061
26 ААА62126 644509
27 САИ 9305 56206059
28 ХР 310497 58424203
29 САИ 9306 56206060
30 ААС50308 608499
31 СА606825 47229629
32 ΝΡ 727741 45551453
33 ΝΡ 727739 45551452
34 ΝΡ 727740 24641890
35 ΑΑΝ09337 22832227
36 Т01259 7484807
37 ХР 506591 51963676
38 ΝΡ 850294 30687456
39 САС07509 47228777
40 ΝΡ 494974 32564190
41 Т15771 7497030
42 САЕ59064 39596837
43 ΝΡ 494973 32564194
44 ВАА06505 1321635
45 ΝΡ 000471 4502079
46 868147 2134756
47 ААН56380 38614134
48 008739 2494043
49 ΝΡ 113732 13928736
50 009178 2494044
51 ХР 420973 50747746
52 ΝΡ 956142 41054127
53 САС01709 47222742
54 ΝΡ 957187 41053780
55 ХР 392957 48104570
56 ААН07183 13938134
57 СА005605 47220579
58 ΝΡ 620231 20302047
59 ХР 540247 57098851
60 САР99638 47230445
61 ХР 513671 55587796
62 САИ 8828 56203368
63 САИ8829 56203369
64 СА118830 56203370
65 ЕАА19931 23484684
66 САН99706 56500932
67 ХР 131103 38076931
68 САН77387 56523366
- 43 016258
Таблица 7
Примеры полипептидов ацетил-КоА-тиолазы
Строка Номер в базе данных ОепЬапк Общий идентификатор в базе данных ОепЬапк
1 Р10551 135758
2 004677 418002
3 012598 34925109
4 Т10247 7433657
5 Т42741 11257345
6 ААИ8924 16417944
7 ААМ67058 21618008
8 ААО51605 28829030
9 ААи95618 53854350
10 ААи95619 53854352
11 ВАА97003 8777413
12 САЕ76429 38567134
13 ЕАК90852 46431255
14 ΕΑΙ.32264 54643520
15 ΝΡ 015297 6325229
16 ΝΡ 568694 30695411
17 ΝΡ 572414 24640423
18 ΝΡ 596686 19113478
19 ΝΡ 851154 30695409
20 ΝΡ 908411 34894172
21 ΝΡ 974900 42573608
22 ΝΡ 974901 42573610
23 ΝΡ 984262 45188039
24 ХР 389497 46134945
25 ХР 401186 49074048
26 ХР 405546 49087148
27 ХР 449306 50293789
28 ХР 449306 50293789
29 ХР 450298 50899020
30 ХР 453599 50307241
31 ХР 460741 50424309
32 ХР 500646 50546253
- 44 016258
Таблица 8
Примеры полипептидов ГМГ-СоА-синтазы
Строка Номер в базе данных СепЬапк Общий идентификатор в базе данных ОепЬапк
1 В55729 1083370
2 Р54869 1708235
3 813887 86312
4 327197 284048
5 ААА37076 387072
6 ААЕ89580 9621905
7 ААН00297 33991031
8 ААН31363 21618633
9 ААН42929 27552834
10 ААН79694 50925193
11 ААН83543 54035469
12 ААО52569 28830079
13 ААР35966 30583443
14 ВАВ23657 12836439
15 ВАС04559 21754758
16 ВАС05233 21758044
17 САА52032 1772495
18 САС18553 11602786
19 САС33131 48145817
20 САН92111 55730782
21 СА122408 56205097
22 ЕАК97451 46438115
23 ЕА1-25034 54635631
24 ΝΡ 002121 54020720
25 ΝΡ 013580 6323509
26 ΝΡ 032282 31560689
27 ΝΡ 058964 8393538
28 ΝΡ 593859 19114771
29 ΝΡ 666054 31981842
30 ΝΡ 725570 24654139
31 ΝΡ 775117 27465521
32 ΝΡ 957379 41055180
33 ΝΡ 983739 45187516
34 ΝΡ 990742 45382279
35 ΝΡ 999545 47523816
36 ХР 315872 58387870
37 ХР 323241 32405256
38 ХР 368218 39973655
39 ХР 389442 46134253
40 ХР 397202 48141273
41 ХР 402977 49078452
42 ХР 409060 49095198
43 ХР 446972 50289085
44 ХР 453529 50307101
ХР_456470
ХР_506052 ХР_513693
ХР_536483
ХР_569805
ХР 571930
50405663
50557288
55587844
57085299
58265298
58269548
- 45 016258
Таблица 9
Примеры полипептидов ГМГ-СоА редуктазы
Строка Номер в базе данных СепЬапк Общий идентификатор в базе данных ОепЬапк
1 А23586 90238
2 074164 11132850
3 Р51639 1708252
4 Р54960 1708251
5 012649 18276268
6 029512 2495262
7 Ο9Υ7Ο2 11133211
8 830338 422383
9 372194 7450066
10 ААА36989 387052
11 ААА37077 305355
12 ААА49740 214237
13 ААО20975 9817458
14 ААН74197 49257596
15 ΑΑΙ.09351 15824453
16 ААО85434 29468180
17 ААР72015 32165622
18 ААЯ02862 45272118
19 ААТ92819 51013051
20 ВАС20567 23574646
21 САА63970 4376229
22 САЕ47850 41581201
23 САР92135 47213283
24 САН92577 55731745
25 ЕАК94577 46435190
26 ЕА 1.20195 50257490
27 ААР80374 8886086
28 ΝΡ 013555 6323483
29 ΝΡ 013636 6323565
30 ΝΡ 032281 56119096
31 ΝΡ 037266 40538852
32 ΝΡ 588235 19075735
33 ΝΡ 905010 45190756
34 ΝΡ 989816 45383193
35 ΝΡ 999724 47551099
36 ХР 324892 32408825
37 ХР 364130 39955070
38 ХР 389373 46134115
39 ХР 400629 49072680
40 ХР 405730 49087632
41 ХР 407954 49092986
42 ХР 449268 50293713
43 ХР 451740 50303597
44 ХР. 458872 50420671
45 ХР 503558 50552167
46 ХР 536323 57084803
47 ХР 571450 58268588
- 46 016258
Таблица 10
Примеры полипептидов мевалонаткиназы
Строка Номер в базе данных СепЬапк Общий идентификатор в базе данных СепЬапк
1 ХР 386088 46123069
2 ХР 408006 49093090
3 ХР 370449 39978123
4 ЕАЬ04797 46445529
5 ХР 322935 32404644
6 ΝΡ 001007 55925207
7 ХР 460851 50424525
8 ХР 567851 58260882
9 ХР 567850 58260880
10 ААО02416 33303805
11 САА53059 450346
12 ААН16140 16359371
13 ААН05606 13542811
14 ХР 403111 49078786
15 ХР 452532 50305147
16 САС08527 47226511
17 ХР 446138 50287417
18 ААО51522 28828936
19 ΝΡ 985191 45190937
20 ХР 500956 50546973
21 ΝΡ 013935 6323864
22 ААО45421 5578718
23 ΝΡ 920723 37532842
24 ΝΡ 851084 30690651
25 ААЫ8925 16417946
26 ΝΡ 788338 28573850
27 ΑΑυ20834 51988124
28 ΑΑΙΙ87813 52839819
29 ААигоззб 51988125
30 ΥΡ 183887 57641409
31 ΝΡ 143478 14591399
32 ΒΑΑ24409 2804172
33 ΝΡ 126232 14520757
34 ΧΡ 522574 55639331
35 ΝΡ 071114 11499870
36 ΧΡ 423949 50797461
37 ΝΡ 633786 21227864
38 ΖΡ 002971 48840229
39 ΕΑΗ50787 44170778
40 ΝΡ 615566 20089491
41 ΐνΐ8Α 40890012
42 ΕΑΚ03559 44549994
43 ΝΡ 248080 15669275
44 1ΚΚΗΑ 20150886
- 47 016258
45 <250559 2497518
46 САГ88123 47200914
47 ΝΡ 275189 15678075
48 ΕΑΙ88745 44383877
49 ΖΡ 002040 46141948
50 ХР 543435 57105916
51 ΕΑΙ38920 44313360
52 ΝΡ 148611 14602065
53 ΕΑ 008953 43286228
54 ΕΑ 045697 43361720
55 ΥΡ 134862 55377012
56 ΝΡ 720650 24378695
57 ΝΡ 614276 20094429
58 Ε84270 25409931
59 ΝΡ 691146 23097680
60 ΖΡ 003233 48870579
61 ААС02440 9937386
62 ΕΑΟ12278 43292898
63 ΝΡ 498328 17555862
64 ΕΑΒ31483 42928976
65 ΖΡ 003319 50590618
66 ΝΡ 814642 29375488
67 АС1434 25514495
68 ΖΡ 003577 53796847
69 ΕΑΟ82048 43454743
70 САЕ73618 39586491
71 ΥΡ 012624 46906235
72 ΝΡ 988455 45358898
73 ΖΡ 002348 47097293
74 ΖΡ 002862 48824993
75 ΖΡ 002307 47093020
76 ΝΡ 597102 19173299
77 САО24422 20429111
78 ΝΡ 785308 28378416
79 ΕΑΑ39098 29247539
80 ΝΡ 819638 29653946
81 ΕΑΗ49746 44168765
82 ΕΑΗ49745 44168764
83 ΝΡ 378182 15922513
84 ΖΡ 000459 23002259
85 Η90181 25393827
86 ΥΡ 054120 50405028
87 ΒΑΒ07790 9695270
88 ΑΑΘ02435 9937379
Строка Номер в базе данных СепЬапк Общий идентификатор в базе данных ОепЬапк
89 ΝΡ 560495 18313828
90 ΥΡ 187834 57866187
91 ЕАК40782 44602942
92 САС51370 15212070
93 ΑΑΘ02424 9937364
94 ΥΡ 185521 57651465
95 ΥΡ 040044 49482820
96 ΥΡ 194037 58337452
97 ϋ86675 25400965
98 ΝΡ 763916 27467279
99 САР89434 47197810
100 ΕΑΕ38333 43767792
101 ΕΑΚ46841 44611394
102 Η89827 25507776
103 ΖΡ 003149 48861061
104 ΕΑΚ17824 44570143
105 ΕΑΗ86276 44235719
106 ΥΡ 118418 54024176
107 ΖΡ 003196 48865749
108 ΑΑΘ02430 9937372
109 ΝΡ 269075 15674901
110 ΝΡ 802520 28896170
111 ΑΑΙ.97579 19748102
112 ΖΡ 003666 56808907
113 ΝΡ 965060 42519130
114 ΝΡ 819639 29653947
115 ΕΑϋ97024 43484567
116 ΒΑϋ86800 57753870
- 48 016258
Таблица 11
Примеры полипептидов фосфомевалонаткиназы
Строка Номер в базе данных БепЬапк Общий идентификатор в базе данных ОепЬапк
1 ААА34596 171479
2 ХР 452514 50305111
3 ΝΡ 985210 45190956
4 ХР 446144 50287429
5 ХР 462340 50427455
6 ЕАЮ4096 46444824
7 ЕАС03941 46444668
8 ХР 503619 50552418
9 ХР 389940 46136497
10 ХР 329795 32418634
11 ХР 369652 39976529
12 ХР 406448 49089559
13 ΝΡ 593421 19114333
14 ХР 568385 58261950
15 Е АН 7628 50254887
16 ААН8926 16417948
17 ВАО43274 51969164
18 ВАО44652 51971975
19 ХР 398375 49068172
20 ΒΑΌ44486 51971643
21 Е90479 25393214
22 ΥΡ 194039 58337454
- 49 016258
Таблица 12
Примеры полипептидов мевалонатпирофосфатдекарбоксилазы
Строка Номер в базе данных СепЬапк Общий идентификатор в базе данных СепЬапк
1 ААТ93171 51013755
2 1Г14А 13786942
3 ХР 455548 50311049
4 ХР 445335 50285813
5 ХР 456912 50409853
6 ΝΡ 986435 45200865
7 ААЕ19399 6625790
8 ХР 328845 32416734
9 ХР 505041 50555265
10 ΝΡ 594027 19114939
11 ХР 364905 39963452
12 ХР 390600 46137817
13 ХР 408551 49094180
14 ААА34506 7544604
15 ЕДЫ 8927 50256200
16 ХР 568247 58261674
17 ХР 402794 49077992
18 ААН81784 51980639
19 ЕАЮ0166 46440864
20 ΝΡ 619597 20149736
21 ΝΡ 112324 13592005
22 ВАС40852 26354448
23 ХР 546783 57087071
24 О993Р5 23814095
25 ААН63907 39645379
26 САР99534 47230341
27 ААР35576 30582699
28 ААР36301 30584105
29 ААН8927 16417950
30 ААУ32433 54292590
31 ААР68208 31711704
32 ААМ64988 21593039
33 ΝΡ 566995 18410026
34 ХР 423130 50771155
35 ААМ65192 21593243
36 ΝΡ 001007 55925435
37 ΝΡ 573068 28571205
38 8АО27942 50252009
39 Т47584 11281655
40 ХР 307373 31196851
41 САЕ73245 39591192
42 ΝΡ 496966 17537201
43 ХР 393230 48121058
44 С90479 25393662
- 50 016258
45 ΝΡ 496967 17537203
46 ΝΡ 691147 23097681
47 ΕΑί29282 54640164
48 Αϋ1434 25515042
49 ΖΡ 002308 47093021
50 ΥΡ 012625 46906236
51 ΖΡ 002348 47097294
52 ΝΡ 819637 29653945
53 ΝΡ 376888 15921219
54 ΖΡ 003319 50590617
55 ΝΡ 585805 19074299
56 ΥΡ 187835 57866188
57 САО24423 20429112
58 ААС02431 9937373
59 ΝΡ 763917 27467280
60 ААС02446 9937394
61 ΖΡ 002863 48824994
62 ААС02441 9937387
63 ΥΡ 185522 57651466
64 Α89828 25505863
65 ΝΡ 814641 29375487
66 ΥΡ 040045 49482821
67 ΝΡ 785307 28378415
68 ΖΡ 003196 48865750
69 ΖΡ 003233 48870580
70 Ε86675 25400967
71 ΕΑΕ31110 43552684
72 ΒΑΒ07791 9695271
73 САС51371 15212071
74 ΖΡ 000459 23002258
75 ΝΡ 965061 42519131
76 ΒΑϋ86801 57753871
77 ΥΡ 194038 58337453
78 ΥΡ 118419 54024177
79 ΕΑΚ18820 44571499
80 ΕΑΙ85935 44379784
81 ΝΡ 721336 24379381
82 095044 25388338
83 ΑΑΘ02456 9937408
84 С97914 25511486
85 ΕΑΚ47683 44612560
86 ΕΑΒ86425 43039778
87 ΥΡ 140971 55822530
88 ΥΡ 139081 55820639
89 ΒΑΟ07376 40882372
90 ΝΡ 968512 42523132
91 ΕΑΙ06705 44265427
92 ΥΡ 060018 50914046
93 ААС02451 9937401
94 ΝΡ 269076 15674902
95 ΖΡ 003666 56808906
96 ΝΡ 688323 22537472
97 ΝΡ 735832 25011437
98 ЕАС40267 43149093
99 ΑΑ1.97580 19748103
100 ΕΑΙ76915 44367119
101 ΕΑΟ35042 43339207
102 ΥΡ 073129 51598941
103 ΕΑΙ90092 44385501
104 ΒΑΒ07818 9711347
105 ΕΑ072850 43433025
106 ΝΡ 212820 15595031
107 ΥΡ 124337 54297968
108 ΥΡ 096056 52842257
109 ΕΑΑ39903 29248368
110 ΕΑΗ06252 44088237
111 ΥΡ 127354 54294939
112 ΕΑΟ45753 43361830
113 ΝΡ 802519 28896169
- 51 016258
Таблица 13
Примеры полипептидов ИППФ (изопентилпирофосфат)изомеразы
Строка Номер в базе данных бепЬапк Общий идентификатор в базе данных бепЬапк
1 ΝΡ 015208 6325140
2 ХР 448008 50291151
3 ΝΡ 983828 45187605
4 ХР 455121 50310203
5 ХР 462358 50427491
6 ЕА1.01685 46442395
7 ХР 504974 50555131
8 ХР 328425 32415894
9 ХР 367200 39971619
10 ХР 389898 46136413
11 ХР 404716 49085144
12 САО37150 21627818
13 ΝΡ 595164 19111956
14 ХР 566641 58258457
15 ХР 402453 49077100
16 035586 6225528
17 ААР36609 30584713
18 ААЕ37873 7188790
19 ΝΡ 445991 16758306
20 042641 6225529
21 ВАА33979 3790386
22 013907 6225527
23 ААН22418 48257241
24 ААН19227 48257312
25 ААН57827 35505325
26 ΝΡ 004499 40018633
27 ААН89786 58477715
28 САН91844 55730243
29 ХР 418561 50732281
30 ААН06999 48257093
31 САР98782 47225155
32 ΝΡ 808875 29366820
33 ХР 507622 55633353
34 ААН82648 52139082
35 ΝΡ 001011 58332496
36 ААР29976 6856556
37 ААОЮ423 9971806
38 048964 6225525
39 ААР29973 6856550
40 ААР29977 6856558
41 ААО84167 35186998
42 ААЕ29974 6856552
43 039472 6225526
44 549588 1085973
- 52 016258
45 АА 1.91980 19568939
46 ВАВ40973 13603406
47 ААР29975 6856554
46 Т52027 25493162
49 АА 1.91979 19568937
50 Т46812 11362218
51 Т51248 11362217
52 ВАВ40974 13603408
53 048965 6225532
54 ХР 225509 34877710
55 ХР 506401 51963472
56 ААЕ29978 6856560
57 ААН76541 50369278
58 ААТ94033 51038230
59 ХР 225502 34876517
60 039471 6225533
61 ААВ67743 1213450
62 ΝΡ 197148 22326844
63 ВАВ09611 9759126
64 ААО41766 5305669
65 ААВ67741 1213442
66 ХР 395125 48101420
67 ΑΑΝ28784 23505849
68 ААР36996 7110585
69 ВАВ16690 15289752
70 ААО14869 33340598
71 ВАС65421 28971819
72 371369 2129625
73 ААР29979 6856562
74 ААР29980 6856564
75 ААР21674 30267831
76 039664 6225534
77 ΝΡ 650962 24648688
78 ААМ50284 21429130
79 ХР 321388 58395620
80 О9ВХ31 20978506
81 Т07979 7484383
82 ХР 225508 34876527
83 ААТ92102 51011386
84 ХР 225507 34876555
85 ХР 344623 34876537
86 344843 630677
87 ХР 225498 27687955
88 ААТ08468 47013849
- 53 016258
89 ΕΑΙ79636 44370808
90 САЕ75055 39587401
91 ЕА1.04047 46444775
92 ХР 225528 34876543
93 ХР 544282 57040602
94 ХР 225511 27688013
95 Р26173 114353
96 ΕΑΊ04069 44405322
97 ЕАН27496 44127513
98 ААР91499 9653280
99 ААМ48661 21328655
100 ЕАК17826 44570145
101 ЕАО59515 43391069
102 ΥΡ 128702 54307682
103 ЕАК66656 44639203
104 ΥΡ 118189 54023947
105 Т50740 11282665
106 ΖΡ 002077 46193541
107 ЕАК16470 44568229
108 ΥΡ 165403 56695056
109 ЕА008775 43285885
110 ΥΡ 195623 58616494
111 ΕΑΙ38918 44313358
112 ΝΡ 930583 37527239
113 ΥΡ 160254 56478665
114 ЕАН69842 44206571
115 ЕАК26254 44582307
116 ААР24381 38569721
117 ААМ48607 21328600
118 ΕΑϋ82049 43454744
119 ΖΡ 001924 45914126
120 ΥΡ 056780 50843553
121 ΥΡ 050880 50121713
122 ΕΑΓ29235 43749645
123 ΝΡ 630823 21225044
124 С182М47 34582349
125 ΖΡ 003374 52010110
126 ΑΑ375819 45737905
127 Ο8ΚΡ37 30913023
123 ΧΡ 507621 55633351
129 ΧΡ 344621 34876521
130 ΧΡ 346322 34880719
131 ΥΡ 152060 56414985
132 ΑΑΤ42442 48429280
133 Ο9ΚΚ75 13878536
134 ΝΡ 306649 29143307
135 ΥΡ 063124 50955836
136 Ο8ΕΝΟ7 46395593
137 САЕ20647 41326485
138 Ο8ΝΝ99 23821718
139 Ο7Χ5Η2 46395586
140 ΝΡ 336246 15841209
141 О83Ш9 46395588
142 Ρ60923 46395576
143 Ο8ΡΕ75 31563050
144 1Ρ67Α 38493022
145 09Κνν01 13878537
146 Ο7νευο 46395585
147 Β84333 25410326
148 ΝΡ 417365 16130791
149 Ε85944 25355426
150 1ΗΖΤΑ 15826050
151 1РУРВ 50513321
152 ΕΑΟ63579 43403471
153 1Ι9ΑΒ 13786886
154 ΥΡ 012992 46906603
155 ΖΡ 002293 47091503
156 ΕΑΙ37194 44310821
157 ΥΡ 137864 55380014
158 САО92056 42516867
159 1θνΥ2Β 42543244
- 54 016258
Таблица 14
Примеры полипептидов ФПФ-синтазы
Строка Номер в базе данных бепЬапк Общий идентификатор в базе данных Оепбапк
1 092250 2497455
2 ХР 363065 39948036
3 ХР 386960 46124813
4 092235 3122099
5 ХР 412149 49116518
6 ХР 503599 50552378
7 ΝΡ 593299 19114211
8 САО42869 21955860
9 ХР 448787 50292709
10 ΝΡ 012368 6322294
11 Т42081 7433997
12 ЕАК93751 46434339
13 ХР 451300 50302727
14 ХР 571137 58267962
15 ХР 460720 50424267
16 ΝΡ 984739 45190485
17 ВАО15361 46367743
18 371433 7433991
19 САА65643 1523990
20 ХР 399061 49069544
21 871432 7433990
22 ААН68912 46249832
23 1РР5 1065289
24 Р08836 3915686
25 ААН83515 53733369
26 111ВХ 1942050
27 ШВУ 1942051
28 ААР37872 7188788
29 ΝΡ 803463 29135293
30 ААК63847 14488053
31 АА\/58896 55710092
32 Т06272 7433988
33 ЭС4846 2117737
34 Р05369 120478
35 024241 25452945
36 024242 25452946
37 ААН59125 37590777
38 ААН48497 28913418
39 ААР74720 32329199
40 САО11850 47225367
41 ААМ51429 21436457
42 ААР74719 32329197
43 ААМ08927 20135548
44 ХР 537252 57089113
- 55 016258
45 ААО56011 34013692
46 ААО14872 33340604
47 ААСИ4871 33340602
48 ААО17204 4324960
49 ААН87886 56789674
50 ААК68152 14573639
51 ААА52423 182399
52 866470 2129849
53 САА29064 4725
54 СА112715 55957735
55 ВАА03523 40788949
56 Р14324 1346031
57 366471 2129850
58 ААА35820 182405
59 САА59170 1491641
60 ВАВ16687 15289750
61 САА72793 1922251
62 САН91070 55728661
63 ААК58594 14279425
64 ААВ07264 1146159
65 009152 21431776
66 064905 6016044
67 ВАВ60822 14422406
68 852009 1076319
69 ΝΡ 917118 34911542
70 ΑΑϋ32648 4894899
71 ΑΑΑ40960 203582
72 ΑΑΚ27053 38684029
73 ΑΑΙΙ43998 52353430
74 ΑΑ1.82595 18958450
75 ΝΡ 917069 34911444
76 ΧΡ 228802 34879769
77 ΒΑϋ81810 56785155
78 ΑΑΝ62522 24796660
79 ΝΡ 595334 19112126
80 Τ52066 25458583
81 ΑΑ1.49067 17946048
82 САА08919 3395483
83 ΧΡ 547662 57089869
84 ΕΑΙ-26135 54636732
85 ΒΑΒ60821 14422404
86 ΑΑΡ74721 32329201
87 ΧΡ 496902 51466663
88 ΧΡ 474182 50929309
89 САА87327 1160178
90 ΒΑϋ20729 47776234
91 ВАС53873 30984142
92 ΒΑΒ69490 15991313
93 ΝΡ 974565 42572937
94 САА08918 5678609
95 ΑΑΡ86267 32527731
96 ΑΑ017735 30522953
97 ΑΑΚ71861 14647139
98 ΑΑΙ.73357 18478919
99 ΑΑΟ63552 29124957
100 СА100471 56498227
101 ΝΡ 701155 23508486
102 ΧΡ 474180 50929305
103 ААЦ73358 18478922
104 ΕΑΗ48995 44167328
105 ΝΡ 493027 17508563
106 САЕ71711 39580204
107 ΧΡ 487220 51766977
- 56 016258
Таблица 15
Примеры полипептидов ГГПФ-синтазы
Строка Номер в базе данных СепЬапк Общий идентификатор в базе данных СепЬапк
1 ААТ92871 51013155
2 ХР 447025 50289191
3 ΝΡ 984623 45190369
4 ХР 390273 46137163
5 ХР 404791 49085320
6 ХР 368486 39974191
7 092236 6831550
8 ААО85432 29468176
9 ХР 572774 58271236
10 ХР 502923 50550901
11 ААК11525 13021716
12 ХР 326920 32412880
13 САЕ32032 42820719
14 ВАО29965 50355599
15 ХР 384767 46117498
16 ВАО29970 50355631
17 САВ89115 7649674
18 САО09545 47229030
19 САИ 3753 55960163
20 ААН69913 47124116
21 ААН67768 45709211
22 ХР 455003 50309979
23 Р56966 9296978
24 ΝΡ 001007 56090562
25 ААТ65717 49409613
26 ΝΡ 956329 41053321
27 ВАА90525 6899844
28 ХР 405729 49087630
29 ААК11531 13021724
30 ХР 412280 49119197
31 ААС05273 2944400
32 ΝΡ 523958 24660002
33 ХР 402074 49076128
34 ЕАЕ30191 54641441
35 ХР 536340 57084951
36 ХР 424685 50811194
37 ААН06798 13905030
38 ААР06018 29841005
39 ХР 460338 50423511
40 ААС05595 2957271
41 ЕАК92197 46432727
42 ХР 535573 57108760
43 ААН83212 53734594
44 ХР 486466 51827552
- 57 016258
45 САН 18006 51469024
46 САА75568 3549881
47 ХР 397455 48143654
48 ХР 410947 49101294
49 ХР 381914 46109712
50 ХР 364478 39959279
51 ХР 360889 39942704
52 ХР 369218 39975655
53 ХР 406544 49089926
54 ХР 367595 39972409
55 ХР 363775 39952117
56 ХР 368486 39974191
57 ХР 390273 46137163
58 092236 6831550
59 ААК11525 13021716
60 САЕ32032 42820719
61 ХР 404791 49085320
62 ААО85432 29468176
63 ВАО29965 50355599
64 ВА029970 50355631
65 ВАА90525 6899844
66 ААТ65717 49409613
67 ХР 384767 46117498
68 САВ89115 7649674
69 ХР 572774 58271236
70 ААК11531 13021724
71 ХР 502923 50550901
72 САИ 3753 55960163
73 САС09545 47229030
74 ХР 412280 49119197
75 Р56966 9296978
76 ΝΡ 001007 56090562
77 ААН69913 47124116
78 ААН67768 45709211
79 ΝΡ 956329 41053321
80 ЕА1.30191 54641441
81 ХР 424685 50811194
82 ХР 536340 57084951
83 ΝΡ 523958 24660002
84 ААС05273 2944400
85 ХР 405729 49087630
86 ААС05595 2957271
87 ХР 402074 49076128
88 ААР06018 29841005
- 58 016258
09 ААН 06798 13905030
90 ХР 535573 57108760
91 ААН83212 53734594
92 ААР21085 30097620
93 ΝΡ 984623 45190369
94 ХР 447025 50289191
95 ААТ92871 51013155
96 ХР 486466 51827552
97 ХР 410947 49101294
98 ХР 397455 48143654
99 ХР 455003 50309979
100 ЕАК92197 46432727
101 ХР 381914 46109712
102 ХР 460338 50423511
103 САН18006 51469024
104 ХР 360889 39942704
105 ХР 406544 49089926
106 ХР 364478 39959279
107 ХР 363775 39952117
108 ХР 367595 39972409
109 ХР 369218 39975655
110 С39273 483124
111 ВАВ79600 18143445
112 ВАА14124 216682
113 ΑΑΝ85596 27228290
114 ААА32797 413730
115 008291 585326
116 552584 1073293
117 553722 1076576
118 ААС44848 1842242
119 ВАА19583 1944371
120 571230 2129674
121 ВАА23157 2578822
122 ААС77874 3885426
123 САВ38744 4490594
124 ВАА78047 4958920
125 ВАА82613 5631295
126 САВ56064 5912297
127 ВАА86284 6277254
128 Т11021 7447356
129 ААЕ78199 8650415
130 ААОЮ424 9971808
131 САС10561 10637876
132 Т50879 11279298
133 ВАВ01343 11994221
134 042698 13431546
- 59 016258
135 043133 13431547
136 Р54976 13878921
137 ВАВ50600 14023995
138 ВАВ60678 14325238
139 ВАВ60820 14422402
140 ΝΡ 189589 15228704
141 ΝΡ 188651 15231055
142 ΝΡ 188069 15231869
143 ΝΡ 188073 15231881
144 ААЮ1997 15553715
145 ААЮ1998 15553717
146 ΝΡ 252732 15599238
147 ΝΡ 245470 15602398
148 ΝΡ 390308 16079484
149 ΝΡ 440010 16329282
150 ΝΡ 440010 16329282
151 ΑΑ 1.17614 17352451
152 ΝΡ 520343 17546941
153 ΑΑΙ.76349 18645048
154 ΑΑΜ21638 20386366
155 ΑΑΜ21639 20386368
156 ΝΡ 622916 20807745
157 ΑΑΜ48650 21328644
158 ΝΡ 659794 21492720
159 ΑΑΜ64496 21592547
160 ΑΑΜ65107 21593158
161 ΝΡ 680811 22297564
162 ΖΡ 000474 23003800
163 ΖΡ 001252 23469933
164 ΝΡ 698760 23502633
165 Ε84566 25313373
166 Ρ85434 25313385
167 АС1245 25313389
168 Ε83997 25313393
169 (384566 25313395
170 ΑΗ2910 25315863
171 ϋ87505 25398795
172 Α89932 25505949
173 Ρ97685 25520741
174 ΑΙ3285 25527013
175 ВАС42571 26450928
176 ΝΡ 785195 28378303
177 ΝΡ 790546 28867927
178 ΑΑΟ63392 28950937
179 ΑΑΟ93113 29893480
180 ΝΡ 833891 30022260
- 60 016258
Строка Номер в базе данных СепЬапк Общий идентификатор в базе данных ОепЬапк
181 МР59037 31621279
182 ΖΡ 001374 32039216
183 ΝΡ 864766 32471772
184 ΝΡ 875521 33240579
185 ΝΡ 881399 33593755
186 ΝΡ 884694 33597051
187 ΝΡ 888456 33600896
188 ΝΡ 893187 33861626
189 ΝΡ 894940 33863380
190 ΝΡ 896835 33865276
191 ΝΡ 896835 33865276
192 ААО65086 34365549
193 ΝΡ 945877 39933601
194 ΝΡ 946867 39934591
195 ΝΡ 952815 39996864
196 ААЙ37805 40062934
197 ААК37858 40062988
198 ААК98495 41018904
199 ААК99082 41059107
200 ΝΡ 965349 42519419
201 ΝΡ 980544 42783297
202 ЕАА96348 42853148
203 ЕАВ36506 42939031
204 ЕАВ36642 42939300
205 ЕАС39208 43146996
206 ЕА026007 43320598
207 ЕАЕ43084 43576643
208 ЕАЕ70061 43630884
209 ЕАР70308 43832107
210 ΕΑΘ88494 44055952
211 ЕАН52060 44173220
212 ЕАН78354 44221788
213 ЕАН84117 44231960
214 ΕΑΙ11762 44272832
215 ΕΑΙ49391 44328289
216 ΕΑΙ54846 44336042
217 ΕΑΙ68356 44355138
218 ΕΑΙ68713 44355672
219 ΕΑΙ69401 44356609
220 ΕΑΙ73873 44362658
221 ЕА373634 44506168
222 ΕΑΰ77351 44511694
223 ЕАК70639 44644254
224 ΖΡ 001751 45523854
225 АА376253 45752710
226 ΖΡ 001957 45916757
- 61 016258
227 1КТКВ 46015556
228 ΖΡ 001863 46105954
229 ΖΡ 002002 46107045
230 ΖΡ 001711 46132567
231 ΖΡ 002073 46192680
232 ΖΡ 002074 46192861
233 ΑΑ382860 46241274
234 ΖΡ 002108 46308696
235 ΥΡ 010568 46579760
236 ВАЭ18313 47076770
237 ΖΡ 002315 47093750
238 ΖΡ 002335 47095946
239 ΑΑΤ35222 47531118
240 ΖΡ 002401 47569437
241 ΖΡ 002435 47573473
242 ΖΡ 002626 48728941
243 ΖΡ 002702 48765678
244 ΖΡ 002705 48766028
245 ΖΡ 002732 48768894
246 ΖΡ 002914 48834438
247 ΖΡ 003024 48848203
248 ΖΡ 003129 48858958
249 ΖΡ 003177 48863841
250 ΖΡ 003225 48869790
251 ΑΑΤ51323 49086036
252 ΖΡ 003301 49236117
253 ΥΡ 034222 49476181
254 ΥΡ 040995 49483771
255 ΥΡ 043579 49486358
256 ΑΑΤ71982 50253560
257 ΑΑΤ90315 50952782
258 ΥΡ 066435 51246551
259 ΥΡ 075673 51892982
260 ΥΡ 085511 52141318
261 ΥΡ 092166 52786337
262 ΖΡ 001298 53691368
263 ΥΡ 105136 53716444
264 ΥΡ 111769 53722784
265 ΖΡ 003630 54030933
266 ΥΡ 129021 54308001
267 ΑΑν74395 56122554
268 ΑΑν74396 56122556
269 ΥΡ 148246 56420928
270 ΥΡ 156518 56461237
271 ΥΡ 162590 56551751
272 ΥΡ 171470 56750769
273 ΥΡ 175959 56964228
274 ΥΡ 186407 57650478
275 ΥΡ 190690 58038726
276 АА\М66658 58201026
277 ΥΡ 194187 58337602
278 ΥΡ 197469 58579257
279 ΥΡ 201938 58582922
280 ΥΡ 196510 58617311
- 62 016258
Таблица 16
Примеры полипептидов скваленсинтазы
Строка Номер в базе данных бепЬапк Общий идентификатор в базе данных ОепЬапк
1 ААА34597 171481
2 САА42583 3686
3 Ο9ΗΘΖ6 51704336
4 ВАВ12207 9955387
5 ХР 453457 50306959
6 0752X9 51701405
7 074165 51701378
8 ХР 458579 50420093
9 ЕАК95451 46436082
10 Р78589 2499979
11 Ο9Υ753 51701459
12 ХР 407513 49092104
13 ХР 364394 39958237
14 Ο784Ζ6 51701416
15 СА060581 27764301
16 ХР 389557 46135731
17 ΝΡ 595363 19112155
18 В48057 477750
19 ΝΡ 034321 34328173
20 САН92517 55731622
21 ААЕ00038 6002565
22 Р53798 1706773
23 ΝΡ 004453 31542632
24 ААР36671 30584837
25 1ΕΖΕΟ 11514497
26 ААН09251 14328083
27 ААН84016 54035372
28 Ι52090 2136196
29 ХР 420043 50745256
30 ААН81810 51858605
31 САЕ48363 50841455
32 ХР 569783 58265254
33 | ХР 569782 58265252
34 | ХР 534557 57105080
35 | ХР 401989 49075920
- 63 016258
Таблица 17
Примеры полипептидов фитоендегидрогеназы
Строка Номер в базе данных бепЬапк
1 1613414В
2 1613414Р
3 1904206А
4 2121278А
5 А86203
6 А96612
7 А99470
8 ААА24820
9 ААА34001
10 ААА50313
11 ААА64981
12 ААА91161
13 ААА99519
14 ААС44798
15 ААС44850
16 ААС48983
17 ААЕ78201
18 ААС10426
19 АА614399
20 ААС28700
21 ΑΑΘ50743
22 ААН85048
23 ААК51545
24 ААК51557
25 ААК64299
26 ААЮ2000
27 ААЫ5300
28 ΑΑΙ.38046
29 ААЬ73986
30 АА1.80005
31 АА 1.91366
32 ААМ45380
33 ААМ48646
34 ААМ63349
35 ААМ94364
36 ΑΑΝ75037
37 ΑΑΝ85599
38 ААО24235
39 ААО46892
40 ААО46894
41 ААО53257
42 ААО53258
43 ААО64750
44 ААО93135
- 64 016258
45 ААР59036
46 ААР79175
47 ΑΑΩ04224
48 ΑΑΩΟ4225
49 ААО65246
50 ΑΑΩ65246
51 ΑΑΩ88931
52 ААК37797
53 ААК37802
54 ААК37850
55 ААР37855
56 ААК86105
57 ААР98491
58 ААН98494
59 ААК98733
60 АА817750
61 ААТ01639
62 ААТ35222
63 ААТ74579
64 ААТ74580
65 ААТ76050
66 ААТ76434
67 ААТ90316
68 ΑΑΙΙ34019
69 ААХЛ/23161
70 АВ2035
71 АВ2064
72 АС2446
73 АР1557
74 АР2029
75 АО2103
76 ΑΘ2509
77 АН1199
78 ΑΙ2185
79 ΑΙ2273
80 В55548
81 В84327
82 В90061
83 ВАА14127
84 ВАА20276
85 ВАА76534
86 ВАВ10768
87 ВАВ50520
88 ВАВ51896
- 65 016258
Строка Номер в базе данных бепЬапк
89 ВАВ68552
90 ВАВ79603
91 ВАВ82461
92 ВАВ82462
93 ВАВ98016
94 ВАС75676
95 ВАС77668
96 ВАС77671
97 ВА007279
98 ВА007280
99 ΒΑϋ07287
100 ΒΑϋΟ7288
101 САА52098
102 САА60479
103 САА66626
104 САВ38739
105 САВ38743
106 САВ40843
107 САВ56041
108 САВ56062
109 САВ59726
110 САВ65434
111 САВ94794
112 САС85667
113 САО19989
114 САО27442
115 САО55814
116 САЕ00192
117 САЕ83576
118 САИ 9330
119 САЕ21094
120 САЕ21337
121 САН91165
122 Е90061
123 ЕАА90383
124 ЕАА98598
125 ЕАВ09790
126 ЕАВ14136
127 ЕАВ18725
128 ЕАВ29729
129 ЕАВ30992
130 ЕАВ41377
131 ЕАВ54727
132 ЕАВ76679
133 ЕАВ87028
134 ЕАВ92587
- 66 016258
135 ЕАВ94459
136 ЕАВ96864
137 ЕАС01884
138 ЕАС38895
139 ЕАС60360
140 ΕΑϋΟ5874
141 ΕΑΟ05999
142 ΕΑϋ20520
143 ΕΑΕ06978
144 ΕΑΕ70773
145 ΕΑΕ04985
146 ΕΑΕ51354
147 ΕΑΕ62819
148 ΕΑΕ75453
149 ΕΑΘ09111
150 ΕΑΘ19412
151 ЕАС23070
152 ЕАС25053
153 ΕΑΘ25054
154 ΕΑΘ29279
155 ΕΑΘ39845
156 ЕАС56100
157 ΕΑΘ63013
158 ΕΑΘ68633
159 ЕАС71574
160 ΕΑ689835
161 ΕΑΗ04928
162 ΕΑΗ04936
163 ΕΑΗ08586
164 ΕΑΗ22597
165 ΕΑΗ22853
166 ΕΑΗ31648
167 ΕΑΗ55579
168 ΕΑΗ68071
169 ΕΑΗ73302
170 ΕΑΗ79041
171 ΕΑΗ86965
172 ΕΑΗ97108
173 ΕΑΗ99977
174 ΕΑΙ01660
175 ΕΑΙ03576
176 ΕΑΙ06784
177 ΕΑΙ11087
178 ΕΑΙ15261
179 ЕАИ5547
180 ЕАИ7521
- 67 016258
Строка Номер в базе данных бепЬапк
181 ΕΑΙ21398
182 ΕΑΙ29728
183 ΕΑΙ38468
184 ΕΑΙ43591
185 ΕΑΙ51589
186 ΕΑΙ58453
187 ΕΑΙ72974
188 ΕΑΙ77885
189 ΕΑΙ78272
190 ΕΑΙ80262
191 ΕΑΙ83937
192 ΕΑΙ86664
193 ΕΑϋ00517
194 ЕА105570
195 ΕΑϋΟ8238
196 ЕАЛ5524
197 ЕАЛ8144
198 ЕАЭ20649
199 ΕΑϋ21683
200 ΕΑϋ24413
201 ΕΑ128774
202 ΕΑΛ30522
203 ΕΑ335157
204 ЕАЭ37407
205 ΕΑΰ39929
206 ΕΑ154356
207 ΕΑϋ54959
208 ΕΑΰ56207
209 ЕАЛ58447
210 ΕΑϋ59958
211 ΕΑΰ63347
212 ΕΑϋ66054
213 ΕΑ167637
214 ΕΑ169812
215 ЕАЛ4441
216 ЕАЛ6472
217 ЕАЛ6473
218 ΕΑ180355
219 ΕΑΰ80339
220 ΕΑΰ81408
221 ΕΑ386174
222 ΕΑΰ87600
223 ЕАЛ88203
224 ΕΑ188682
225 ΕΑΰ92341
226 ΕΑ194774
- 68 016258
227 ЕА397555
228 ΕΑΰ97958
229 ΕΑΚ07654
230 ΕΑΚ08513
231 ΕΑΚ08529
232 ΕΑΚ10609
233 ΕΑΚ10614
234 ΕΑΚ12902
235 ΕΑΚ13034
236 ΕΑΚ15092
237 ΕΑΚ22483
238 ΕΑΚ23222
239 ΕΑΚ24187
240 ΕΑΚ24674
241 ΕΑΚ28785
242 ΕΑΚ34731
243 ΕΑΚ34742
244 ΕΑΚ36883
245 ΕΑΚ37522
246 ΕΑΚ42705
247 ΕΑΚ43213
248 ΕΑΚ52580
249 ΕΑΚ53452
250 ΕΑΚ58759
251 ΕΑΚ62665
252 ΕΑΚ63558
253 Ρ84187
254 Ε90272
255 Θ87635
256 <390413
257 Η83880
258 Η84320
259 Χ7723
260 ΝΡ 060220
261 ΝΡ 080435
262 ΝΡ 193157
263 ΝΡ 214383
264 ΝΡ 276913
265 ΝΡ 293819
266 ΝΡ 294534
267 ΝΡ 294585
268 ΝΡ 295972
269 ΝΡ 338490
270 ΝΡ 376437
271 ΝΡ 377056
272 ΝΡ 388895
- 69 016258
273 ΝΡ 441167
274 ΝΡ 441254
275 ΝΡ 442491
276 ΝΡ 442727
277 ΝΡ 562475
278 ΝΡ 568712
279 ΝΡ 601630
280 ΝΡ 601630
281 ΝΡ 616426
282 ΝΡ 624522
283 ΝΡ 626360
284 ΝΡ 630834
285 ΝΡ 643053
286 ΝΡ 647302
287 ΝΡ 659552
288 ΝΡ 661086
289 ΝΡ 661546
290 ΝΡ 661701
291 ΝΡ 662300
292 ΝΡ 681023
293 ΝΡ 681127
294 ΝΡ 682351
295 ΝΡ 693380
296 ΝΡ 693382
297 ΝΡ 737250
298 ΝΡ 763380
299 ΝΡ 786524
300 ΝΡ 822198
301 ΝΡ 822828
302 ΝΡ 827278
303 ΝΡ 851528
304 ΝΡ 857496
305 ΝΡ 868798
306 ΝΡ 869339
307 ΝΡ 870237
308 ΝΡ 874530
309 ΝΡ 874561
310 ΝΡ 874977
311 ΝΡ 892236
312 ΝΡ 892265
313 ΝΡ 892458
314 ΝΡ 893232
315 ΝΡ 894882
316 ΝΡ 895385
317 ΝΡ 895793
318 ΝΡ 895829
- 70 016258
319 ΝΡ 896854
320 ΝΡ 896994
321 ΝΡ 898304
322 ΝΡ 898346
323 ΝΡ 902647
324 ΝΡ 923340
325 ΝΡ 923639
326 ΝΡ 923813
327 ΝΡ . 925079
328 ΝΡ 931515
329 ΝΡ.936379
330 ΝΡ 940208
331 ΝΡ 945754
332 ΝΡ 946860
333 ΝΡ 946866
334 ΝΡ 948851
335 ΝΡ 962004
336 ΝΡ 968600
337 ΝΡ 974222
338 ΝΡ—974545
339 049901
340 Ρ17059
341 Ρ54971
342 Ρ54978
343 Ρ54979
344 345 Ρ54981 Ρ54982
346 Ρ74306
347 001671
348 002861
349 038893
350 040406
351 О9ЕУ46
352 Ο98Ε20
353 Ο93Μΰ3
354 Ο9ΖΤΝ9
355 Ο9ΖΤΡ4
356 829314
357 832171
358 849624
359 852586
360 865060
361 Τ10701
362 Τ31463
363 Τ46822
364 Τ48646
- 71 016258
Строка Номер в базе данных СепЬапк
365 Т50745
366 Т50749
367 Т50893
368 Т50910
369 Т51119
370 Т51123
371 ХР 324732
372 ХР 383241
373 ХР 401825
374 ХР 470568
375 ХР 473486
376 ХР 477063
377 ХР 525801
378 ХР 540198
379 ΥΡ 006049
380 ΥΡ 013621
381 ΥΡ 024310
382 ΥΡ 041986
383 ΥΡ 041988
384 ΥΡ 044561
385 ΥΡ 044564
386 ΥΡ 062471
387 ΥΡ 117947
388 ΥΡ 120612
389 ΥΡ 135077
390 ΥΡ 136483
391 ΥΡ 145331
392 ΥΡ 145348
393 ΥΡ 171014
394 ΥΡ 172823
395 ΥΡ 173078
396 ΥΡ 173207
397 ΥΡ 184572
398 ΥΡ 187368
399 ΥΡ 187371
400 ΥΡ 187371
401 ΥΡ 187371
402 ΖΡ 000490
403 ΖΡ 000509
404 ΖΡ 000518
405 ΖΡ 000566
406 ΖΡ 000627
407 ΖΡ 000627
408 ΖΡ 001073
409 ΖΡ 001081
410 ΖΡ 001091
- 72 016258
411 ΖΡ 001116
412 ΖΡ 001117
413 ΖΡ 001119
414 ΖΡ 001124
415 ΖΡ 001510
416 ΖΡ 001591
417 ΖΡ 001593
418 ΖΡ 001602
419 ΖΡ 001614
420 ΖΡ 001645
421 ΖΡ 001650
422 ΖΡ 001722
423 ΖΡ 001746
424 ΖΡ 001752
425 ΖΡ 001770
426 ΖΡ 001777
427 ΖΡ 001787
428 ΖΡ 001837
429 ΖΡ 001867
430 ΖΡ 002073
431 ΖΡ 002077
432 ΖΡ 002339
433 ΖΡ 002680
434 ΖΡ 002705
435 ΖΡ 002771
436 ΖΡ 002892
437 ΖΡ 002916
438 ΖΡ 002963
439 ΖΡ 003022
440 ΖΡ 003036
441 ΖΡ 003107
442 ΖΡ 003202
443 ΖΡ 003258
444 ΖΡ 003268
445 ΖΡ 003269
446 ΖΡ 003276
447 ΖΡ 003283
448 ΖΡ 003557
449 ΖΡ 003559
450 ΖΡ 003565
451 ΖΡ 003577
452 ΖΡ 003593
453 ΖΡ 003595
441 ΖΡ 003685
- 73 016258
Таблица 18
Примеры полипептидов фитоинсинтазы и ликопинциклазы
Строка Номер в базе данных СепЬапк Общий идентификатор в базе данных ОепЬапк
1 1613414С 227040
2 А49558 1076590
3 ААА19428 506623
4 ААА32836 413732
5 ААА64982 148413
6 ААВ87738 29893495
7 ААС44849 1842243
8 АА038051 13542332
9 ААР78202 8650418
10 ААР82616 9081847
11 ΑΑΘ10427 9971814
12 ΑΑΘ28701 11066678
13 ААК07734 18476085
14 ААК07735 18476089
15 ААК15621 13195243
16 АА102001 15553721
17 ААС76346 18645045
18 АА1-82578 21326700
19 ААМ45379 21360353
20 ААМ48647 21328641
21 ААМ62787 21553694
22 ААМ94363 22296799
23 ΑΑΝ85600 27228294
24 ААО24767 27903500
25 ААО39835 28403302
26 ААО46895 37729028
27 ААО47570 33465823
28 ААО73816 33465821
29 ААР22038 30349414
30 ААР55451 32350232
31 ААР55453 32350236
32 ААР55461 32350252
33 ААР55471 32350272
34 ААР55484 32350298
35 ААР55486 32350302
36 ААР56083 32349564
37 ААР56124 32349646
38 ААР56127 32349652
39 ААР56136 32349670
40 ААР56148 32349694
41 ААР56155 32349708
42 ААР56156 32349710
43 ААР56157 32349712
44 ААР56158 32349714
- 74 016258
45 ААР79176 32307542
46 ΑΑΩ91837 37499616
47 ААК08445 38037628
48 ААК31885 39842609
49 ААК37803 40062932
50 ААК37856 40062986
51 ААК86104 40456029
52 ААВ87868 40557193
53 ААЕ98492 41018901
54 АА302284 41394357
55 АА817009 42491736
56 АА818307 42521626
57 ААТ28184 47498515
58 ААТ35222 47531118
59 ААТ38473 47779181
60 ААТ46069 48686711
61 ААТ74581 50313418
62 ААТ90319 50952786
63 ААУ74394 56122551
64 ΑΑνν23162 56698928
65 . АС2035 25366683
66 АС2О35 25366683
67 ВАВ18514 11344507
68 ВАВ79604 18143449
69 ВА007278 40809739
70 ΒΑϋ07286 40809755
71 ΒΑ062106 54291340
72 ВАО62Ю7 54291341
73 С90061 25506636
74 САА47625 19347
75 САА68575 19341
76 САВ07958 1934837
77 САВ38740 4490590
78 САВ51949 5690074
79 САВ56063 5912296
80 САВ86388 7453011
81 САВ93661 8250520
82 САВ94795 8574392
83 САС19567 11990226
84 САС27383 12584564
85 САО19988 18307500
86 САО29284 57282088
87 САЕ76609 38567321
88 Ε37802 95606
- 75 016258
89 Е84320 25410251
90 ЕАА98758 42863045
91 ЕАВ01965 42869439
92 ЕАВ04170 42873822
93 ЕАВ07138 42879858
94 ЕАВ09791 42885235
95 ЕАВ19826 42905452
96 ЕАВ35029 42936011
97 ЕАВ41375 42948740
98 ЕАВ78706 43024004
99 ЕАВ92586 43052355
100 ЕАС06949 43081493
101 ЕАС18360 43104624
102 ЕАС25793 43119723
103 ЕАС29883 43128092
104 ЕАС32813 43133973
105 ЕАС33105 43134560
106 ЕАС38486 43145552
107 ЕАС52233 43173313
108 ЕАС60029 43189028
109 ЕАС68026 43204953
110 ЕАС96197 43261031
111 ΕΑϋ08701 43285745
112 ΕΑΟ20866 43310220
113 ΕΑΌ32755 43334458
114 ΕΑ038008 43345761
115 ΕΑϋ50152 43370658
116 ΕΑ050402 43371147
117 ΕΑΟ81123 43452903
118 ΕΑΩ93882 43478303
119 ΕΑΕ12860 43516265
120 ΕΑΕ16121 43522884
121 ΕΑΕ31084 43552634
122 ΕΑΕ35665 43561764
123 ΕΑΕ44717 43579862
124 ΕΑΕ46627 43583580
125 ΕΑΕ47846 43586023
126 ΕΑΕ72264 43635190
127 ΕΑΕ76009 43642573
128 ΕΑΕ86335 43662748
129 ΕΑΕ89581 43669163
130 ΕΑΕ18881 43728007
131 ΕΑΕ64277 43819669
132 ΕΑΕ67931 43827263
133 ΕΑΕ84745 43861327
134 ΕΑΕ94004 43880040
- 76 016258
135 ЕАС06083 43903395
136 ΕΑΘ21950 43933540
137 ЕАО43625 43973477
138 ЕАО50171 43985555
139 ΕΑΘ57517 43999205
140 ЕАО62787 44009110
141 ΕΑΘ65580 44014171
142 ЕАС68110 44018715
143 ЕАО72283 44026322
144 ЕАС78750 44037938
145 ЕАС80445 44041116
146 ΕΑΘ93220 44064453
147 ЕАН04927 44085694
148 ЕАН08972 44093217
149 ЕАН10377 44095788
150 ЕАН22151 44117864
151 ЕАН31461 44134654
152 ЕАН50033 44169323
153 ЕАН64480 44196848
154 ЕАН79040 44223009
155 ЕАН99976 44255671
156 ΕΑΙ02786 44259828
157 ΕΑΙ02787 44259829
158 ΕΑΙ03575 44260943
159 ΕΑΙ05900 44264266
160 ЕА161004 44344824
161 ΕΑΙ70669 44358327
162 ΕΑΙ83938 44377067
163 ЕА605110 44406802
164 ЕА605569 44407471
165 ЕА608876 44412338
166 ЕА335156 44449986
167 ЕА638900 44455130
168 ЕАЧ49645 44470504
169 ЕА654357 44477026
170 ЕАЧ60475 44485647
171 ЕАЧ64125 44492007
172 ЕАЧ67499 44497025
173 ЕАЧ76471 44510405
174 ЕА676950 44511114
175 ЕАЧ78637 44513596
176 ЕАЧ78787 44513824
177 ЕА679616 44515082
178 ЕА680356 44516200
179 ЕА681914 44518489
180 ЕА687417 44526623
- 77 016258
181 ЕАК08514 44557109
182 ЕАК08523 44557119
183 ЕАК12901 44563097
184 ЕАК22180 44576315
185 ЕАК24859 44580262
186 ЕАК28345 44585276
187 ЕАК34732 44594324
188 ЕАК34736 44594329
189 ЕАК37296 44597942
190 ЕАК37521 44598256
191 ЕАК56335 44624430
192 ¢384363 25410528
193 ΝΡ 274195 15677043
194 ΝΡ 284085 15794263
195 ΝΡ 294586 15805888
196 ΝΡ 388961 16078144
197 ΝΡ 441168 16330440
198 ΝΡ 443763 16519643
199 ΝΡ 624523 21218744
200 ΝΡ 630832 21225053
201 ΝΡ 662273 21674208
202 ΝΡ 682350 22299103
203 ΝΡ 693381 23099915
204 ΝΡ 786525 28379633
205 ΝΡ 822199 29827565
206 ΝΡ 822829 29828195
207 ΝΡ 851527 30795077
208 ΝΡ 868799 32475805
209 ΝΡ 874560 33239618
210 ΝΡ 879992 33592348
211 ΝΡ 884101 33596458
212 ΝΡ 889809 33602249
213 ΝΡ 892264 33860703
214 ΝΡ 895828 33864268
215 ΝΡ 898345 33866786
216 ΝΡ 902648 34498433
217 ΝΡ 902649 34498434
218 ΝΡ 924690 37521313
219 ΝΡ 931516 37528171
220 ΝΡ 946861 39934585
221 ΝΡ 949079 39936803
222 ΝΡ 962005 41409169
223 ΝΡ 968601 42523221
224 007333 3913360
225 Ρ08196 585746
226 Ρ21683 30923192
- 78 016258
227 Р37269 585009
228 Р37271 27735222
229 Р37272 585749
230 Р53797 1709885
231 Р54975 1706137
232 Р54977 1706139
233 Р65860 54041032
234 0983118 8928282
235 оэииое 34922667
236 522474 7489041
237 532170 321671
238 552587 1073300
239 556668 2129505
240 568307 2130144
241 Т10702 7484346
242 Т46594 11291807
243 Т50746 11356347
244 Т50895 11291816
245 ХР 324765 32408567
246 ХР 383242 46114448
247 ХР 403902 49080862
248 ΥΡ 006040 46255128
249 ΥΡ 103126 53723680
250 ΥΡ 112342 53723357
251 ΥΡ 117945 54023703
252 ΥΡ 120611 54026369
253 ΥΡ 136628 55378778
254 ΥΡ 136629 55378779
255 ΥΡ 145340 55978284
256 ΥΡ 145343 55978287
257 ΥΡ 160917 56479328
258 ΥΡ 160918 56479329
259 ΥΡ 162605 56551766
260 ΥΡ 172822 56752121
261 ΥΡ 187369 57652299
262 ΥΡ 192648 58040684
263 ΖΡ 000044 22956752
264 ΖΡ 001091 53688068
265 ΖΡ 001591 53763709
266 ΖΡ 001657 45514234
267 ΖΡ 001690 46132223
268 ΖΡ 001746 45523280
269 ΖΡ 001837 53771530
270 ΖΡ 001867 45546711
271 ΖΡ 002096 46204978
272 ΖΡ 002248 46324513
273 ΖΡ 002450 47575031
274 ΖΡ 002680 48763469
275 ΖΡ 002710 48766450
276 ΖΡ 002791 48782680
277 ΖΡ 002892 48832182
278 ΖΡ 002916 48834623
279 ΖΡ 003036 48849426
280 ΖΡ 003269 48893702
281 ΖΡ 003351 52007802
282 ΖΡ 003487 53730362
283 ΖΡ 003501 53759405
284 ΖΡ 003591 53798896
285 ΖΡ 003628 54030691
- 79 016258
Таблица 19
Примеры полипептидов каротиноидкетолазы
Строка Номер в базе данных ОепЬапк Общий идентификатор в базе данных ОепЬапк
1 ААА99932 609575
2 ААВ48668 1870215
3 ААС25611 2541936
4 ААР78203 8650419
5 ААН16427 16741158
6 ΑΑΝ03484 22597194
7 ΑΑΝ 85497 26541510
3 ΑΑΝ86030 33439708
9 ААО64399 28976134
10 ААО23139 33621091
11 ААТ35222 47531118
12 ААТ35555 47558911
13 АА1/41372 55139370
14 АВ2307 25530134
15 АЕ2204 25533132
16 ВАВ54999 14028447
17 ВАВ58879 14270087
18 ВАС98366 37360914
19 САА60478 2654318
20 САВ56059 5912292
21 087673 25398945
22 ЕАА79304 42823978
23 ЕАА80363 42826055
24 ЕАА81403 42828115
25 ЕАА84711 42834481
26 ЕАВ82380 43031476
27 ЕАВ86624 43040184
28 ЕАС05755 43079085
29 ЕАО12219 43292778
30 ЕАО71182 43427899
31 ЕАО94927 43480380
32 ЕАН 1582 43712986
33 ЕАР98072 43888329
34 ΕΑΘ19345 43928738
35 ΕΑΘ38273 43963688
36 ΕΑΘ79800 44039853
37 ΕΑΘ96474 44070318
38 ЕАН00349 44077315
39 ЕАН 36448 44143633
40 ЕАН40683 44151265
41 ЕАН 53180 44175316
42 ЕАН96648 44250729
43 ЕАЮ5260 44263397
44 ΕΑ117468 44281329
- 80 016258
45 ΕΑΙ53009 44333409
46 ΕΑΙ54054 44334878
47 ΕΑΙ67818 44354362
48 ΕΑΙ68153 44354875
49 ΕΑΙ89684 44384943
50 ΕΑΰ27674 44439188
51 ΕΑΰ45589 44464684
52 ΕΑΰ45589 44464684
53 ΕΑ367118 44496466
54 ЕАЛ4221 44507022
55 ΕΑϋ74653 44507662
56 ΕΑΰ88396 44528064
57 ЕАЭ88887 44528792
58 ΕΑΚ06069 44553531
59 ΕΑΚ11467 44561166
60 ΕΑΚ16824 44568733
61 ΕΑΚ28828 44585942
62 ΕΑΚ28828 44585942
63 ΕΑΚ31112 44589271
64 ΕΑΚ42591 44605441
65 ΝΡ 045063 11465545
66 ΝΡ 081575 27754029
67 ΝΡ 338204 15843167
68 ΝΡ 440788 16330060
69 ΝΡ 441220 16330492
70 ΝΡ 682690 22299443
71 ΝΡ 770721 27379192
72 ΝΡ 848964 30468077
73 ΝΡ 857223 31794730
74 ΝΡ 881760 33594116
75 ΝΡ 882469 33594826
76 ΝΡ 886657 33599097
77 ΝΡ 895643 33864083
78 ΝΡ 896386 33864827
79 ΝΡ 897461 33865902
80 ΝΡ 924674 37521297
81 ΝΡ 927525 37524181
82 ΝΡ 947075 39934799
83 Ρ54972 1706150
84 039982 2498257
85 044261 2498256
86 Τ31123 11361063
87. ΧΡ 330780 32420673
88 ΧΡ 368852 39974923
89 ΧΡ 380194 46102628
90 ΧΡ 383758 46115480
91 ΧΡ 405100 49086048
92 ΧΡ 409222 49095522
93 ΥΡ 102417 53725671
94 ΥΡ 108945 53719959
95 ΥΡ 132414 54302421
96 ΥΡ 154670 56459389
97 ΥΡ 166682 56696325
98 ΥΡ 168846 56698471
99 ΥΡ 172377 56751676
100 ΖΡ 001068 23124870
101 ΖΡ 001112 53688676
102 ΖΡ 001607 53764743
103 ΖΡ 001757 46118877
104 ΖΡ 001787 53736018
105 ΖΡ 002218 46321435
106 ΖΡ 002456 47575608
107 ΖΡ 003028 48848557
108 ΖΡ 003107 48856640
109 ΖΡ 003264 48893204
110 ΖΡ 003458 53688805
111 ΖΡ 003513 53763576
- 81 016258
Таблица 20
Примеры полипептидов каротиноидгидроксилазы
Строка Номер в базе данных бепЬапк Общий идентификатор в базе данных ОепЬапк
1 ААС44852 1842246
2 ААС49443 1575296
3 ААО54243 5852870
4 ΑΑΘ10430 9971820
5 ΑΑΘ10793 9988836
6 ΑΑΘ33636 11245486
7 ААЬВОООб 19071768
8 ААМ44971 21280903
9 ААМ51300 21436107
10 ААМ77007 21734857
11 ΑΑΝ85601 27228295
12 ААО53295 28911949
13 АА548097 44887642
14 АА855552 45184599
15 АА888426 46326968
16 ААТ48741 49036137
17 ААТ84408 50844570
18 ΑΑΥ85452 56267980
19 ААУ85453 56267982
20 ВАА14129 216687
21 ВАВ79605 18143450
22 ВАС77670 31790567
23 ВА007283 40809749
24 ΒΑϋΟ7291 40809765
25 САА70427 2956671
26 САА70888 2956717
27 САВ55625 5870598
28 САВ55626 5870600
29 САВ56060 5912293
30 САС06712 9968545
31 САС95130 33145986
32 ЕАВ30128 42926157
33 ЕАС49462 43167766
34 ЕАС86129 43241003
35 ΕΑϋ61089 43395962
36 ЕАО76156 43443111
37 ΕΑϋ88640 43467793
38 ΕΑΕ27903 43546376
39 ΕΑΕ28203 43546980
40 ΕΑΕ78743 43647896
41 ΕΑΡ12173 43714211
42 ΕΑΗ29370 44130906
43 ΕΑΗ44202 44158360
44 ΕΑΙ00766 44256844
45 ΕΑΙ29017 44298625
46 ΕΑΰ30844 44443849
47 ΕΑ172524 44504516
48 ΕΑΚ10611 44559981
49 ΕΑΚ53455 44620561
50 ΕΑΚ63955 44635271
51 Η90469 25394049
52 ΝΡ 745389 26989964
53 ΝΡ 922503 37536402
54 Ρ54973 1706152
55 044262 2498258
56 852982 1073291
57 ΧΡ 473611 50928167
58 ΥΡ 024309 48478603
59 ΖΡ 003055 48851297
60 ΖΡ 003107 48856620
- 82 016258
Таблица 21 Примеры полипептидов астаксантинсинтазы и предполагаемой астаксантинсинтазы
Строка Номер в базе данных бепЬапк Общий идентификатор в базе данных бепЬапк
1 ААМ56288 21501451
2 ХР 571276 58268240
3 ЕАЬ20013 50257304
4 ХР 401804 49075484
5 ХР 397817 49067054
6 ХР 399595 49070612
7 ХР 403279 49079218
8 ХР 382294 46110473
9 ХР 406021 49088382
10 ХР 381224 46108332
11 ХР 391479 46139577
12 ХР 569261 58264210
13 ЕАЬ22841 50260180
14 ХР 359866 39940658
Таблица 22
Примеры полипептидов каротиноидэпсилонгидроксилазы
Номер в базе данных Общий идентификатор ОПИСАНИЕ БЕЛКА
АВВ52076 79155148 предполагаемая эпсилон-ппд каротингидроксилаза [Оаисиз саго1а зиЬзр. за^уиз]
ВАО94136 62319017 Цитохром Р450 -подобный белок [АгаЬНор518 ФаНапа]
АВО28565 87162770 Е-кпасс Р450, группа 1 [МеФсадо 1гипса1и1а]
ААТ28222 47498772 предполагаемая 97В2-подобный цитохром Р450 [Θί пкдо ЬИоЬа1
АВС68396 85001685 цитохром Р450 монооксигеназа ΟΥΡ97Α [61уапе тах1
АВС59110 84514203 цитохром Р450 монооксигеназа ΟΥΡ97Β [МеФсадо 1гипса(и1а]
ΝΡ 190881 42565881 ШТ1 (лютеин - дефектный 1); связывание кислорода [АгаЬИорз1в ШаНапа]
АВВ47954 78708979 цитохром Р450 монооксигеназа, предполагаемая [Огуга зай'уа Оаролюа сиШуаг-группа)]
ΝΡ 922δΟ4 37536604 предполагаемая цитохром Р450 монооксигеназа [Огуга зайуа ([аропюа сиШуаг-группа)]
- 83 016258
Таблица 23
Примеры полипептидов ликопинциклазы, бета- и эпсилонсубъединицы
Номер в базе данных Общий идентификатор ОПИСАНИЕ БЕЛКА
ААК07431 12746307 ликопин эпсилон-циклаза [Αόοηίβ ра1ае811па]
АВВ52073 79154988 предполагаемая ликопин эпсилон циклаза [Ьаисиз саго!а эиЬзр. δθϋνυεί
038932 27735211 Ликопин эпсилон циклаза, предшественник хлоропласта
ААВ53336 1399181 ликопин эпсилон циклаза
АА<310428 9971816 эпсилон циклаза ГГаде1еэ егес1а]
ААК07434 12746313 ликопин эпсилон-циклаза Г1 ас1иса за№/а1
ААМ45382 21360359 эпсилон циклаза [Таде1е$ егес1а]
065837 11132841 Ликопин эпсилон циклаза, предшественник хлоропласта
АА1.69394 18419661 ликопин эпсилон-циклаза [8р|пас1а о1егасеа]
ВАЕ79549 87299433 ликопин эпсилон-циклаза [СЬгуэапНзетит х топ(о1шт1
ХР 463351 50901836 предполагаемая ликопин эпсилон-циклаза [Огуга за1ма Оаропюа сиКмаг-группа)]
АА348096 44887640 эпсилон ликопин циклаза [СКгиз Βίηβπδίδ]
ААХ92679 62638188 ликопин эпсилон циклаза [СЛгиз тах1та]
АА 1.92114 19569601 ликопин эпсилон-циклаза [Сйгиз х рагасИз|]
ААК07433 12746311 ликопин эпсилон-циклаза [8о1апит ГиЬегозит]
АА1.47019 17864021 ликопин эпсилон-циклаза [Сйгив З1пепв1в1
ААТ46065 48686703 Предшественник хлоропластовой ликопин эпсилон-циклазы |СР1атуРотопаз ге1пНагСЦй]
ВА007293 40809769 ликопин эпсилон-циклаза [Сйгив Нтоп]
ΒΑϋΟ7285 40809753 ликопин эпсилон-циклаза [Сйгив εΐηβηείβ]
ΒΑϋΟ7277 40809737 ликопин эпсилон-циклаза ГСйгиз ипзЫи]
ЕА062839 44489138 неизвестен [последовательность из окружающей среды]
ВАЕ43547 73993068 предполагаемая ликопин бета циклаза [ТахосПит Р13(1спит уаг. ΡίεϋοΡιιηι]
ВАЕ43550 73993074 предполагаемая ликопин бета циклаза ГГахосйит й13(1сЬит уаг. сйзПспит]
ВАЕ43557 73993088 предполагаемая ликопин бета циклаза [Тахосйит Р^НсРит уаг. 1тЬпсапит]
ВАЕ43558 73993090 предполагаемая ликопин бета циклаза [Тахосйит Р1з(1сРит уаг. 1тЬпсапит]
ВАЕ43553 73993080 предполагаемая ликопин бета циклаза [Тахосйит сИзйсНит уаг. !тЬпсапит]
ВАЕ43545 73993064 предполагаемая ликопин бета циклаза [Тахосйит сИзйсРит уаг. сбвИсЬит]
ВАЕ43556 73993086 предполагаемая ликопин бета циклаза [Тахосйит Р|зйсрит уаг. 1тЬпсапит]
ВАЕ43552 73993078 предполагаемая ликопин бета циклаза [Тахосйит р|$йсРит уаг. ЛзИсРит!
ВАЕ43560 73993094 предполагаемая ликопин бета циклаза [Тахосйит сИзйсРит уаг. 1тЬпсапит]
ВАЕ43554 73993082 предполагаемая ликопин бета циклаза
- 84 016258 [Тахосйит сИзйсГшт уаг, |тЬпсапит]
ВАЕ43551 73993076 предполагаемая ликопин бета циклаза [Тахосйит сИзйоЬит уаг. <йзйс1тит1
ВАЕ43519 73993012 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур(отепа )ароп<са]
ВАЕ43535 73993044 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур1отепа |аропюа]
ВАЕ43541 73993056 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур(отепа |ароп1са]
ВАЕ43542 73993058 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур1отепа ίβροηίοθ]
ВАЕ43517 73993008 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур1отепа [арокса]
ВАЕ43534 73993042 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур1отепа |ароп'|са]
ВАЕ43537 73993048 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур1огпепа ]ароп1са)
ВАЕ43533 73993040 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур1отепа 1аропюа]
ВАР02774 38603277 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур1отепа Чаропюа]
ВАР02766 38603261 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур1отепа ]аропюа]
ВАЕ43540 73993054 предполагаемая ликопин бета циклаза [СгурЮтепа )ароп!са]
ВАЕ43514 73993002 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур(отепа [аротса]
ВАЕ43544 73993062 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур1отепа |арогиса]
ВАЕ43538 73993050 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур1отепа 1арог»са]
ВАЕ43528 73993030 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур1отепа )аропюа]
ВАЕ43546 73993066 предполагаемая ликопин бета циклаза [ТахосПит сйзйсйит уаг. <Й5ЙсЬит1
ВАЕ43526 73993026 предполагаемая ликопин бета циклаза ГСгур1отепа |ароп1са]
ВАЕ43543 73993060 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур(отепа |’ароП1са]
ВАР02742 38603213 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур(отепа 1ароп1са]
ВАР02770 38603269 предполагаемая ликопин бета циклаза [СгурГотепа |ароП1са]
ВАЕ43522 73993018 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур(отепа 1'ароп1са1
ВАЕ43559 73993092 предполагаемая ликопин бета циклаза [ТахосЦцт сйзйсНит уаг. 1тЬпсапит]
ВАЕ43527 73993028 предполагаемая ликопин бета циклаза [Сгур1отепа ]ароп1са]
ВАЕ43548 73993070 предполагаемая ликопин бета циклаза [Тахосйит сИайсйит уаг. сйзйсЬит]
ААЕ44700 14550425 ликопин бета-циклаза [Сйгиз δίηβηβίβ]
ВАЕ43555 73993084 предполагаемая ликопин бета циклаза [ТахосНит сИзйсНит уаг. 1тЬпсапит]
- 85 016258
ВАЕ43549 73993072 предполагаемая ликопин бета циклаза [ТахоФит (Язйспит уаг. 01з1юЬит1
АА1Л4144 51922063 ликопин бета-циклаза [Сйгиз δίπβηείδ]
ΑΑΝ86060 27261727 ликопин циклаза [СНгиз ипзЫи]
ААР89632 40756518 ликопин-бета-циклаза ГСКгиз тамта]
ААМ21152 20530862 ликопин бета-циклаза [СНгиз ΒίηθΠΒίε]
ΑΑϋ38049 13959731 ликопин циклаза [Сйгиз х рагабиП
ΑΑΙ)05146 51511939 ликопин бета-циклаза [Сйгиз 51пеп515]
ААЫ05145 51511937 ликопин бета-циклаза [СИгиз з!пелз13]
ΑΑΚ07430 12746305 ликопин бета-циклаза [Αάοηίδ ра1аез11па1
ΑΒΒ72443 82394885 ликопин бета-циклаза [Сйгив 5;пепз1з]
ΒΑΕ79544 87299423 ликопин бета-циклаза [СЬгузапФетит х тогКоПит]
ΒΑΕ78471 85717882 ликопин бета циклаза ГГагахасит оТЯс1па1е]
043415 11133019 Ликопин бета циклаза, предшественник хлоропласта
ΑΑΡ23013 6665782 ликопин эпсилон-циклаза [Оаисиз саго1а]
ΑΒΒ52071 79154899 предполагаемая ликопин бета циклаза [Оаисиз саго(а зиЬзр. за1|уиз1
ΑΑ\Λ/88382 59665024 ликопин бета-циклаза [1 ус1ит ЬагЬагит)
ΑΑΘ10429 9971818 бета циклаза ГГаде1е8 егейа]
ΑΑΜ45381 21360357 бета циклаза ГТадйез егес1а]
ΑΑΜ14335 20259239 предполагаемая ликопин бета циклаза [АгаЬ|с)орз'|з ФаПапа]
ΑΑΟ18661 27728515 ликопин бета-циклаза Ееа тауз]
ΑΑΑ81880 735882 ликопин циклаза
043503 11133022 Ликопин бета циклаза, предшественник хлоропласта
366350 2129931 ликопин бета-циклаза (ЕС 5.5.1.-) -1ота1о
ΧΡ 464409 50905841 предполагаемая ликопин бета-циклаза [Огуга заЯуа 0ароп1са сиЩуаг-группа)]
САО70565 45237491 ликопин циклаза [В!ха огеИапа]
043578 11133025 Ликопин бета циклаза, предшественник хлоропласта
ΑΑΙ.92175 19569782 бета-ликопин циклаза [Запбегзогиа аигапЬаса]
ΑΑΧ54906 61742130 предполагаемый предшественник хлоропластовой ликопин бета циклазы [СЫатуботолаз геюпагсИи]
366349 2129954 ликопин бета-циклаза (ЕС 5.5.1.-) - табак настоящий
ΑΑ621133 10644119 Хромопласт-специфичная ликопин бетациклаза [Ьусорегз1соп е8Си1еп(ит]
САВ92977 8247354 Неоксантин синтаза [£о1апигп (иЬегозит]
САВ93342 8249885 Неоксантин синтаза [Ьусорегаюоп е8си1еп1игп1
Ο93ΕΑ0 11131528 капсантин/капсорубин синтаза, предшественник хлоропласта
042435 12643508 капсантин/капсорубин синтаза, предшественник хлоропласта
ΑΑΟ64977 37730608 ликопин бета циклаза [Наета1ососсиз р1иу|аН8]
040424 11133011 Ликопин бета циклаза, предшественник хлоропласта
ΑΒΒ52072 79154940 предполагаемая капсантин/капсорубин синтаза [Оаисиз саго(а зиЬзр. гаНуие]
- 86 016258
ААО02668 33304511 ликопин циклаза [8е1апа КаНса]
САА54961 840729 предполагаемая хромопластовая оксидоредуктаза [Сарз1сит аппиит]
ЕА162838 44489136 неизвестен [последовательность из окружающей среды]
ΥΡ 401079 81300871 Ликопин циклаза, бета и эпсилон [ЗупесНососсиз е1опда1из РСС 7942]
ΥΡ 172741 56752040 ликопин циклаза [ЗупесКососсиз е1опда(из РСС 6301]
ΖΡ 011... 88808972 ликопин бета циклаза [Зупеспососсиз ер. \Л/Н 7805]
ΕΑΚ50052 44615956 неизвестен [последовательность из окружающей среды]
ΝΡ 892751 33861190 предполагаемая ликопин эпсилон циклаза [РгосЫогососсив таппиз зиЬзр. раз1опэ з1г. ССМР1986]
ΝΡ 875182 33240240 Ликопин эпсилон циклаза [РгосЫогососсив таппиз зиЬзр. таппиз з1г. ССМР1375]
ΥΡ 382237 78213458 Ликопин циклаза, бета и эпсилон [ЗупесГюсоссив зр. СС9605]
ΥΡ 397130 78779018 Ликопин циклаза, бета и эпсилон [Ргосйогососсиз таппиз з1г. М(Т 93121
ΝΡ 896821 33865262 ликопин бета циклаза [ЗулесИососсиз зр. МН 8102]
ΥΡ 397570 78779458 Ликопин циклаза, бета и эпсилон [РгосЫогососсиз таппиз э1г. ΜΙΤ 9312]
ΖΡ 010... 87302144 ликопин циклаза [ЗупесЬососсив зр. МН 5701]
ΕΑΚ17149 44569190 неизвестен [последовательность из окружающей среды]
ΥΡ 291882 72382527 ликопин циклаза, бета и эпсилон [РгосЫогососсиз таппиз з1г. ΝΑΤ1.2Α]
ΝΡ 875528 33240586 Дегидрогеназа, относящаяся к ликопин бета циклазе [РгосЫогососсиз таппиз зиЬзр. таппиз в1г. ССМР1375]
ΝΡ 893181 33861620 предполагаемая ликопин бета циклаза [РгосЫогососсиз таппиз зиЬзр. раз1опз з1г. ССМР1986]
ΝΡ 895600 33864040 предполагаемая ликопин эпсилон циклаза [РгосЫогососсиз таппиз в1г. М1Т 9313]
ΕΑΙ47456 44325573 неизвестен [последовательность из окружающей среды]
ΥΡ 291268 72381913 ликопин циклаза, бета и эпсилон [РгосЫогососсиз таппиз з(г. ΝΑΤ1.2Α]
ΖΡ 010... 84517806 Ликопин бета циклаза ге1а1ес1 беНубгодепазе [РгосЫогососсиз таппиз з1г. ΜΙΤ 9211]
ΑΑΕ34191 6970079 ликопин эпсилон циклаза [Оаисиз саго1а]
ΖΡ 010... 84518202 Ликопин эпсилон циклаза [РгосЫогососсиз таппив з1г. ΜΙΤ 92111
ΥΡ 376736 78184301 Ликопин циклаза, бета и эпсилон [Зупеспососсиз зр. СС9902]
ΖΡ 003... 66796756 Ликопин циклаза, бета и эпсилон [Оетососсиз деойгегтаПз ОЗМ 11300]
ΝΡ 894954 33863394 предполагаемая ликопин бета циклаза [РгосЫогососсиз таппиз в1г. ΜΙΤ 9313]
ΑΑΤ76051 50365502 ликопин циклаза [СКгиз с1етепйпа]
ΕΑΚ22047 44576122 неизвестен [последовательность из окружающей среды1
ΝΡ 294525 15805827 ликопин циклаза [Ое1пососсиз гасНобигапз Е1]
- 87 016258
Таблица 24
Примеры полипептидов каротиноидглюкозилтрансферазы
Номер в базе данных Общий идентификатор ОПИСАНИЕ БЕЛКА
ААА21261 148395 СПХ [Рап1оеа адд1отегапз]
ΑΑΝ85597 27228291 Зеаксантинглюкозилтрансфераза [Рап1оеа з1еи*агВ!]
ВАВ79601 18143446 сПХ [РаМоеа адд1отегапз ρν. тН1е11ае]
ΑΑΖ73147 72536082 зеаксантинглюкозилтрансфераза [Еп(егоЬас1епасеае Ьайепит 0С413]
ΑΑΖ73128 72536060 зеаксантинглюкозилтрансфераза [Еп1его6айепасеае Ьайепит ОС260]
ΑΑΖ73140 72536074 зеаксантинглюкозилтрансфераза [Еп1его6ас1епасеае байепит 0С416]
001330 231911 Зеаксантинглюкозилтрансфераза
ΖΡ 006... 71674312 СЮР-гликозилтрансфераза, МОТ [Тпс6ос1езт1ит егуйчгаеит ΙΜ3101]
ΝΡ 439972 16329244 зеаксантинглюкозилтрансфераза [Зупесбосузйз ер. РСС 6803]
ЕАН29368 44130903 неизвестен [последовательность из окружающей среды]
ΖΡ 005... 67926135 зеаксантинглюкозилтрансфераза, гипотетический белок [Сгосозрбаега и/а1зопй УУН 8501]
ΥΡ 378763 78188425 гипотетический белок Сад_0447 [СЫогоЬ1ит сЫогосЬготаЫ СаОЗ]
ΖΡ 005... 68549418 Гликозилтрансфераза, группа 1 [Ре!оФйуоп р6аеос1а1Нга1йогте ви-1]
ΖΡ 010... 85713606 гликозилтрансфераза, группа 1 [ЫйгоЬайег зр. N6-311 А]
ΥΡ 317171 75674750 гликозилтрансфераза, группа 1 [МИгоЬас(ег ™подгас!зку| N6-255]
ΖΡ 006... 69929171 Гликозилтрансфераза, группа 1 [Мйгобайег батбигдепзк Х14]
ΖΡ 009... 84500589 гипотетический белок ОВ2597_11541 [Осеапюо1а Ьа!зепз13 НТСС2597]
ΖΡ 009... 83953176 гипотетический белок ΝΑ8141_12746 [ЗиНИобайег βρ. ΝΑ8-14.1]
ΖΡ 009... 83942121 гипотетический белок ЕЕ36_07793 [ЗиНИобаЙег зр. ЕЕ-36]
ΥΡ 508020 89052569 гликозилтрансфераза, группа 1 [1аппазсК1а зр. СС31]
ΖΡ-010... 85704103 гипотетический белок РО8217_13931 [Возеоуагаз зр. 217]
ΖΡ.009... 83370850 возможная гликозилтрансфераза [РГюОоЬайег зр6аего1с1ез АТСС 17025]
- 88 016258
ΖΡ 006... 69934465 Гликозилтрансфераза, группа 1 [Рагасоссиз <1епйгЩсапэ РО1222]
ΖΡ 009... 83949880 возможная гликозилтрансфераза [Козеоуапиз пиЫпЫЬепз Ι5Μ]
ΥΡ 376237 78183803 предполагаемая гликозилтрансфераза [ЗупесГюсоссиз зр. СС9902]
ΥΡ 376129 78183695 возможная гликозилтрансфераза [ЗупесГюсоссиз зр. СС9902]
ΥΡ. 374296 78186253 гипотетический белок Р1и1_0365 [Ре1осНс1уоп 1и1ео1ит ОЗМ 273]
ΖΡ 010... 87301651 Предполагаемая гликозилтрансфераза [ЗупесГюсоссиз зр. ΆΉ 5701]
ΖΡ 011... 88809938 Предполагаемая гликозилтрансфераза [ЗупесГюсоссиз зр. ТУН 7805]
ΒΑΕ47471 78483937 каротиноид глюкоэилтрансфераза [Рагасоссиз зр. N81106]
ΖΡ 010... 87303273 возможная гликозилтрансфераза [ЗупесГюсоссиз зр. \А/Н 5701]
ΥΡ 376127 78183693 возможная гликозилтрансфераза [Зупесйососсиз зр. СС9902]
ΥΡ 501334 88196509 гипотетический белок ЗАОиНЗС_02880 [31арГ|у1ососсиз аигеиз зиЬзр. аигеиз ΝΟΤΟ 8325]
ΥΡ 187370 57652300 гликозилтрансфераза, семество белков группы 2 [31арЬу1ососсиз аигеиз зиЬзр. аигеиз СОЦ
САА66627 1340131 и обозначенный белковый продукт [31арЬу1ососсиз аигеиз]
ΥΡ 041987 49484763 предполагаемая гликозил трансфераза [31арЬу1ососсиз аигеиз зиЬзр. аигеиз МНЗА252]
ΥΡ 417885 82752144 гипотетический белок ЗАВ2436с [31арйу1ососсиз аигеиз КГ 122]
ΥΡ 252404 70725490 гипотетический белок ЗН0489 Г31арЬу1ососсиз Ьаето1у1юиз 10301435]
ΝΡ 693379 23099913 гипотетический белок ОВ2458 [ОсеапоЬасШиз |Ьеуепз18 НТЕ831]
ΖΡ 008... 82501285 консервативный гипотетический белок [Са1с1юе11и1оз1гир(ог зассЬаго1уйсиз ОЗМ 8903]
ΖΡ 010... 87303565 гипотетический белок \Л/Н5701_09900 [ЗупесЬососсиз зр. УУН 5701]
- 89 016258
Таблица 25
Примеры полипептидов ацил-КоА:диацилглицеринацилтрансферазы (ДГАТ)
Номер в базе данных Общий идентификатор ОПИСАНИЕ БЕЛКА
ХР 957022 85082953 Гипотетический белок [Ыеигоерога сгазза N150]
ХР_386864 46124621 Гипотетический белок Г<306688.1 [3|ЬЬегеИа геае РН-11
ХР 755172 71000982 диацилглицерол О-ацилтрансфераза ДГАТ [АзрегдШиз 1иггида1из А1293]
ХР 663763 67539978 гипотетический белок ΑΝ6159.2 [АерегдШиз пНи1алз РСЗЗС А41
ВАЕ65302 83775179 Белковый продукт без обозначения [АзрегдШиз огугае1
ХР 502557 50550169 гипотетический белок [Уаггоила ΙίροΙγΙίοθ]
АА378662 56199782 диацилглицерол ацилтрансфераза [С1ус1пе шах]
АВВ84383 82582915 диацилглицерол ацилтрансфераза [ЗайорЬа сигсае]
ААУЗЮЗЗ 54145459 1,2-диацил-сн-д1усего1:ацил-СоА ацилтрансфераза [Еиопушиз а1а1из]
АА (323696 10803053 диацилглицерол ацилтрансфераза [РепПа Тгйезсепз]
ААЕ64065 7576941 предполагаемая диацилглицерол ацилтрансфераза [Вгаззюа париз1
АА501606 41387497 ацил-СоА:диацилглицерол ацилтрансфераза 1 [О1еа еигораеа]
ААТ73629 50299542 ацил СоА:диацилглицерол ацилтрансфераза [<31уале тах]
ААМ03340 67043496 предполагаемая диацилглицерол ацилтрансфераза [Тгораео1ит та|и$1
ХР 645633 66824557 гипотетический белок ООВ0202877 [О|с1уое1е1шт с1|зсо1с1еит1
ААР19345 6625653 диацилглицерол ацилСоА ацилтрансфераза [№сойапа 1аЬасит]
ΑΑΥ40785 63376239 диацилглицерол ацилтрансфераза ϋΘΑΤ2 [Вгазз1са ]илсеа]
АА\Л/47581 57231736 диацилглицерол ацилтрансфераза (Огуга зайуа Оарогпса сиккаг-группа)!
ААК11479 38146080 диацилглицерол ацилтрансфераза [Εϊίοίηυε соттил1з]
ΑΑΥ40784 63376226 диацилглицерол ацилтрансфераза ΟΘΑΤ1 [Вгааака ]ипсеа1
ААР68322 31711932 А12я19450 [АгаЬ|с1ор51511та1|апа1
ААИ51456 57545061 диацилглицерол ацилтрансфераза [1_о1из согл1си1а1из уаг. ]ароп1сиз]
ААО45536 5579408 предполагаемая диацилглицерол ацилтрансфераза [Вгаэдса париа]
ВАО53762 53791817 предполагаемая ацил-СоА:диацилглицерол ацилтрансфераза [Огуга за1ма (|ароп(са сиИгоаггруппа)!
- 90 016258
ΝΡ 956024 41054343 гипотетический белок БОС325875 [Оапю гегю]
ΑΑ1.49962 18642598 диацилглицерол ацилтрансфераза 1 [Воз 1аигиз]
ΧΡ 930884 89028385 Сходный с диацилглицерол О-ацилтрансферазой 1 (Диглицерид ацилтрансфераза) (АСАТродственный ген) [Ното зар1епз]
ΝΡ 777118 27819636 диацилглицерол О-ацилтрансфераза 1 [Воз (аигиз]
О9СМР1 18202926 Диацилглицерол О-ацилтрансфераза 1 (Диглицерин ацилтрансфераза)
ΝΡ 036211 6912332 диацилглицерол О-ацилтрансферазой 1 [Ното зар1елз]
ΑΑΗ06263 34782946 Белок ДГАТ1 [Ното заргепз[
ΧΡ 780515 72006039 сходный с Диацилглицерол О-ацилтрансферазой 1 |·$ΐΓοηονΙοοθηίΓθίιΐ8 ригригаК151
ΑΑϋ40881 5225382 предполагаемая диацилглицерол ацилтрансфераза [Вгаз$1са париз]
ΧΡ 539214 73974769 сходный с Диацилглицерол О-ацилтрансферазой 1 (АСАТ -связанный генный продукт 1) изоформа 1 [Сап!3 ГатШапз]
ΑΑΖ22403 71063860 диацилглицерол О-ацилтрансфераза 1 [ВиЬа1из ЬиЬаПз]
ΝΡ 999216 47522918 диацилглицерол ацилтрансфераза [Зиз зсго!а1
ΝΡ 001... 50539976 гипотетический белок ЬОС436731 ГОапю гепо[
ΧΡ 849176 73974767 сходный с Диацилглицерол О-ацилтрансферазой 1 (АСАТ -связанный генный продукт 1) изоформа 2 [Сап1з ТатШап'з]
ΝΡ 505828 71997360 Η19Ν07.4 [СаепоФаЬбЩз е!еяапз]
ΑΑΡ82410 9049538 диацилглицерол ацилтрансфераза [Саепог1габс1Н|з е!ечапз|
САЕ75170 39591950 Гипотетический белок СВС23107 [СаепоФаЬсНИз Ьпяязае1
ΧΡ 626337 66358318 диацилглицерол ацилтрансфераза 1 [Сгур1озропсйит рагуит 1оууа II]
ΧΡ 668402 67624239 ацил-СоА:диацилглицероп ацилтрансфераза 1 связанный фермент [Сгур1оэрогк1шт ПотИз Ти502]
ΑΑΡ94208 33113253 ацил-СоА:диацилглицерол ацилтрансфераза 1связанный фермент [Тохор1азта допсИП
ΑΑΡ94209 33113255 ацил-СоА:диацилглицерол ацилтрансфераза 1связанный фермент ГГохор1азта допсИП
ΧΡ 579557 62652535 РАССЧИТАНО: диацилглицерол Оацилтрансфераза 1 [КаНиз погуея1сиз1
ВАС66171 29170489 диацилглицерол ацилтрансфераза [Миз тизси1из[
Ο9ΕΡΜ3 18202872 Диацилглицерол О-ацилтрансфераза 1 (Диглицерин ацилтрансфераза)
ΑΑ1.78366 18698659 ацил коэнзим Адиацилглицероп ацилтрансфераза [ОгозорНИа те1алояаз1ег]
ΝΡ 995724 45552403 СО31991-Р0, изоформа ϋ [ОгозорМа те1аподаз1ег]
ΝΡ 724017 24584734 СС31991-РС, изоформа С [ОгозорЬПа те1алодаз[ег]
ΧΡ 858062 73974765 сходный с Диацилглицерол О-ацилтрансферазой 1 (АСАТ-связанный генный продукт 1) изоформа 3 [Сап1$ ТатШалз]
ΧΡ 728984 82915156 гипотетический белок ΡΥ01256 [Р1азтос1шт уоеШ уоеШ з1г. 17ΧΝΙ.1
САО11944 47225461 белковый продукт без обозначения [Те1гаос1оп
- 91 016258
ηφΓονίήάίΞ]
ΒΑϋ27526 50199438 ацил-СоА:диацилглицерол ацилтрансфераза [еикагуобс зупШейс сопзФисЦ
ΧΡ 317656 31226099 ΕΝ8ΑΝΘΡ00000002281 [АпорЛе1ез датЫае з1г. РЕ8Т]
ΑΑν59457 55733950 предполагаемая диацилглицерол ацилтрансфераза [Огуга забча ОаропФа сиШчаггруппаЦ
ΕΑ1.33593 54644853 СА16599-РА [ОгозорпЛа рзеибообзсига]
ΧΡ 678753 68073677 диацилглицерол О-ацилтрансфераза [Р1азтоФит ЬегдЬе! з1га1п ΑΝΚΑ]
ΧΡ 520014 55631434 РАССЧИТАНО, сходный с Диацилглицерол Оацилтрансферазой 1 (Диглицерин ацилтрансфераза) [Рап (год1обу1ез1
СА610815 47219451 белковый продукт без обозначения [ТекаоОоп П1дгоу|нс1|$]
ΧΡ 624754 66522700 РАССЧИТАНО: сходный с ΕΝ8ΑΝΘΡ00000002281 [Αρίβ теПНега]
САС69884 15620769 диацилглицерол ацилтрансфераза I [Райиз погуедФиз]
ΧΡ 686181 68363630 РАССЧИТАНО: сходный с Диацилглицерол 0ацилтрансферазой 1 (Диглицерин ацилтрансфераза) [Оапю тело]
ΧΡ 734008 70921323 диацилглицерол О-ацилтрансфераза [Р!азтоФит сЛаЬаисИ сЛаЬаиФ]
ΧΡ 673128 68062248 гипотетический белок РВ300300.00.0 [Р1азтоФит ЬегдЛа зкаФ ΑΝΚΑ]
ΑΑ872376 45642963 ацил-СоА:холестерол ацилтрансфераза бета [Тохор1азта οοηάίίΐ
ΑΑ872375 45642961 ацил-СоА:холестерол ацилтрансфераза альфа [Тохор)азта долби]
ΝΡ 586145 19074639 СТЕРОЛ О-АЦИЛТРАНСФЕРАЗА [ЕпсерГаНЮгооп сип1сиН ΘΒ-Μ11
ΧΡ 640280 66812202 гипотетический белок 0080205259 [0Ф(уоз(е1|ит ФзсоФеит]
ΑΑΥ40783 63376221 диацилглицерол ацилтрансфераза [Вгазз1са ]ипсеа]
ΧΡ 765774 71032265 диацилглицерол О-ацилтрансфераза [ТНеИепа рагуа з!га1п Мидида]
Ο876Ι.2 34582301 Стерол О-ацилтрансфераза 2 (Стерол-ез(ег синтаза 2)
ΧΡ 571260 58268208 стерол О-ацилтрансфераза [СгурЮсоссиз пеоТогтапз уэг. пеоТогтапз ЛЕС21]
ΕΑί.20032 50257323 гипотетический белок ΟΝΒΕ3580 [Сгур1ососсиз пеоТогтапз уаг. пео1огтапз В-3501А1
ΧΡ 954478 84999514 ацил трансфераза [ТЛеЛепа аппи1а1а з1га)п Алкага]
ΧΡ 505086 50555355 гипотетический белок [Уаггоула ||ро1у1|са]
ΝΡ 588558 19076058 гипотетический белок 8РСР1Е11.05с [ЗсНФозассЛаготусез ротЬе 972Н-]
ААС49441 1389739 ацил-СоА:стерол ацилтрансфераза
ΝΡ 014416 6324346 Ацил-СоА:стерол ацилтрансфераза, Фогуте οΐ Аге1р; Аге2р [ЗассЛаготусез сегеу|ыае]
ΧΡ 750354 70991010 стерол о-ацилтрансфераза АРЕ2 [АзрегдЛФв Гит1Яа1из А1293]
- 92 016258
ХР 382192 46110268 гипотетический белок РС020161 [СФЬегеЛа зеае РН-11
ΒΑΕ54934 83764790 белковый продукт без обозначения [Азрегд||1чз огугае]
ΧΡ 885914 76617939 сходный с Стерол О-ацилтрансферазой 2 (Холестерол ацилтрансфераза 2) (АСАТ-2) изоформа 2 [Воз [аигиз]
ΧΡ 591251 76617937 сходный с Стерол О-ациптрансфераза 2 (Холестерол ацилтрансфераза 2) (АСАТ-2) изоформа 1 [Воз 1аигиз1
ВАС00846 21392392 АцилСоА:Холестерол Ацилтрансфераза 2 [Райиз погуедюиз]
ΝΡ 649816 28571583 СС8112-РА ЮгозорбПа те1аподаз1ег[
ΝΡ 666176 22122547 стерол О-ацилтрансфераза 2 [Миз тизси1из]
088908 18202245 Стерол О-ацилтрансфераза 2 (Холестерол ацилтрансфераза 2) (АСАТ-2)
ΧΡ 761502 71022545 гипотетический белок 1)М05355.1 [изШадо тауфз 5211
ΝΡ 714950 40254723 стерол О-ацилтрансфераза 2 [Райиз погуея1сиз]
ΕΑΟ86094 88178626 гипотетический белок СН66_07347 [СДаеТотшт д!оЬозит СВЗ 148.51]
ΧΡ 461395 50425599 гипотетический белок ОЕНАОР25652д [ОеЬагуотусез ЬапзепН СВ5767]
ΧΡ 661812 67527926 гипотетический белок ΑΝ4208.2 [АзрегдШиз пМи1апз РСЗС А4]
ΑΑΗ96091 64654094 Стерол О-ацилтрансфераза 2 [Ното зар1епз]
075908 18202149 Стерол О-ацилтрансфераза 2 (Холестерол ацилтрансфераза 2) (АСАТ-2)
ΑΑΗ96090 64652990 Стерол О-ацилтрансфераза 2 [Ното зар|’епз[
ΑΑΚ48829 13898623 ацил коэнзим А: холестерол ацилтрансфераза-2 [Ното эар!епз]
ΧΡ 543637 73996435 РАССЧИТАНО: сходный с стерол 0ацилтрансферазой 2 [Сап15 (атШапз)
077759 18202176 Стерол О-ацилтрансфераза 2 (Холестерол ацилтрансфераза 2) (АСАТ-2)
ΑΑΟ32474 28564191 АРЕ2 [Зассбаготусез саз1е1Ш]
ΧΡ 323485 32405744 гипотетический белок [Иеигозрога сгазза1
ΝΡ 982606 45184888 ААК065Ср [ЕгетоФеаит доззурп]
ΝΡ 593708 19114620 гипотетический белок ЗРАС1367.06 [ЗсЫгозассбаготусез ротЬе 972Н-1
ΑΑΟ32554 28564940 АКЕ2 [Зассбаготусез к1иууеп]
ΕΑΙ.28962 54639560 ΘΑ20833-ΡΑ [ОгозорЬМа рзеиЦооЬзсига1
ΧΡ 449806 50294790 гипотетический белок СА61_0М10571д [СалФс1а д1аЬга1а СВ81381
ΝΡ 033256 84619697 стерол О-ацилтрансфераза 1 [Миз тизси1из1
061263 18202591 Стерол О-ацилтрансфераза 1 (Холестерол ацилтрансфераза 1) (АСАТ-1)
ВАС34925 26342537 белковый продукт без обозначения [Миз тизси1и$]
ΧΡ 452607 50305295 белковый продукт без обозначения [КЮууеготусез 1ас115]
ΝΡ 001... 77735363 гипотетический белок ЮС504287 [Воз 1аигиз]
060457 18202585 Стерол О-ацилтрансфераза 1 (Холестерол ацилтрансфераза 1) (АСАТ-1)
ΧΡ 320321 58393811 ΕΝ5ΑΝΟΡ00000016512 [Апорбе1ез яатЫае з1г.
- 93 016258
РЕ8Т]
ХР 320320 58393809 ΕΝ8ΑΝΘΡ00000016486 [Апор1те1ез датЫае з(г. РЕ5Т]
070536 18202126 Стерол О-ацилтрансфераза 1 (Холестерол ацилтрансфераза 1) (АСАТ-1)
ХР 714776 68482533 ацил-СоА холестерол ацилтрансфераза [Сапййа а!Ь|сапз 8С5314]
Р84285 56404462 Стерол О-ацилтрансфераза 2 (Стеролэфирсинтаза) (А8АТ)
ААН77916 50416229 Белок 8оа11-ргоу [Хепориз 1аеу|з]
ХР 692855 68364838 РАССЧИТАНО: сходный с белком ЗоаН-ρΓθν Рапю геп'о]
САИ 3574 55960156 стерол О-ацилтрансфераза (ацил-коэнзим А: холестерол ацилтрансфераза) 1 [Ното зар:епз1
ААБ56227 18028942 холестерол ацилтрансфераза 1 [ОопПа допИа!
ААБ56228 18028944 холестерол ацилтрансфераза 1 [Ропдо рудтаеиз]
ААС37532 4878022 ацил-коэнзим А: холестерол ацилтрансфераза [Ното зафепз]
2201440А 1585676 ацил-СоА/холестерол ацилтрансфераза
0876(.3 34582302 Стерол О-ацилтрансфераза 1 (Стерол-ее1ег синтаза 1)
ВАЕ01048 67969393 белковый продукт без обозначения [Масаса (азс1си1апз]
ХР 514030 55588858 РАССЧИТАНО: гипотетический белок ХР_514030 [Рап 1год1ос1у1ез1
ХР 547445 73961286 сходный с Стерол 0-ацилтрансферазой 1 (Холестерол ацилтрансфераза 1) (АСАТ-1) [Сап($ 1ат(Папз1
ЕАО84619 88177151 гипотетический белок СН6О_08633 [СИае1от1ит д1оЬозит СВ8 148.511
077761 18202178 Стерол О-ацилтрансфераза 1 (Холестерол ацилтрансфераза 1) (АСАТ-1)
ХР 422267 50751122 РАССЧИТАНО: сходный с Стерол Оацилтрансферазой 1 (Холестерол ацилтрансфераза 1) (АСАТ-1) [СаИиа да11из1
ХР 693284 68392980 РАССЧИТАНО: сходный с Стерол Оацилтрансферазой 1 (Холестерол ацилтрансфераза 1) (АСАТ-1) [Оапю гепо]
ААТ92940 51013293 УСК048УУ [бассбаготусез сегеу|яае]
ХР 956576 85080625 гипотетический белок [Ыеигозрога сгазза N150]
ХР 624691 66564061 РАССЧИТАНО: сходный с ΕΝ8ΑΝΘΡ00000018486 [Ар(з теИНега]
САР96514 47222847 белковый продукт без обозначения [Те(гаос1оп ηίοΓονίπΦεΙ
ХР 788209 72085563 РАССЧИТАНО: сходный с стерол Оацилтрансферазой 1 [8!гопду1осеп(го!из ригрига(из)
ХР 445307 50285757 белковый продукт без обозначения [СапсИба д1аЬга1а]
САЕ70002 39596364 Гипотетический белок СВ<316409 [СаепогпаМШз Ьпддзае)
СА007990 47225647 белковый продукт без обозначения [Тейаобоп ηφΓΟνϊΠΟίίδ]
ΝΡ 510623 17549960 В0395.2 [СаепогИаМНз е1едапв]
ААХ28331 76157393 81СН6С04421 ρΓΟίθϊη [Зсп1з1оеота |ароп1сит]
СА196158 66347204 Диацилглицерол О-ацилтрансфераза [ВиЬа1из ЬиЬаПз]
ХР 390039 46136695 гипотетический белок ΕΘ09863.1 [ОФЬегеИа геае РН-1]
ХР 643169 66819019 гипотетический белок ΟϋΒ0203882 [ΟίοίγοδΐβΙΐιΐΓΠ άίδϋοϊόβΐίΓη]
АА053095 28850306 гипотетический белок П0|с1уоз(е1|ит сКзсо1с1еит1
ААВ06959 1515472 ацил-СоА:холестерол ацилтрансфераза [Огус1о1адиз сип1си1из]
ΝΡ 945619 39933343 предполагаемая альгинат о-ацетилтрансфераза А1д1 [КпоСорзеидотопаз ра1из(пз С6А009]
ΖΡ 008... 77691302 Мембрано-связанная О-ацил трансфераза, МБОАТ [К(1ос1орзеис1отопаз ра1из1пз ΒίεΒ5]
ХР 465546 50908115 предполагаемая парафин-синтаза [Огуга заКиа Паропюа си1(|уаг-группа)1
- 94 016258
Таблица 29
Примеры полипептидов пренилдифосфатсинтазы
Номер в базе данных Общий идентификатор Описание
29А: Белки бактерий, которые требуют митохондриальной направленной последовательности
ΖΡ 009... 83373595 Транс-гексапренилтранстрансфераза [РНос1оЬас(ег зрбаегойез АТСС 17029]
ΖΡ 009... 83371280 Транс-гексапренилтранстрансфераза [РбобоЬайег зрбаегойез АТСС 17025]
СА024417 20429105 декапренил дифосфат синтаза [Рагасоссиз геахап1№|Гас1епз]
ΖΡ 010... 85705714 Геранилгеранил пирофосфат синтаза/Полипренил синтетаза [Козеоуапиз зр. 217]
ΖΡ 010. .. 84515724 декапренил дифосфат синтаза [ЬокСапеНа νβΒΐΐοΙόβπείΒ 3ΚΑ53]
ΥΡ 165582 56695234 декапренил дифосфат синтаза [8Шс|Ьас(ег ротегоу! ϋ83-3]
ΖΡ 010... 86139019 декапренил дифосфат синтаза [РозеоЬас1ег зр. МЕО193]
ΖΡ 009... 83941379 декапренил дифосфат синтаза [8иККоЬас1ег зр. ЕЕ36]
ΖΡ 009... 83854856 декапренил дифосфат синтаза [ЗиИНоЬасГег зр. ΝΑ814. 11
ΖΡ 006... 69299873 Фарнезилтранстрансфераза [5ШаЬас1ег зр. ТМ1040]
ΖΡ 010... 84683979 Геранилгеранил пирофосфат синтаза/Полипренил синтетаза [РКобоЬас1ега1ез Ьайепит НТСС2654]
ΖΡ 009... 84500217 декапренил дифосфат синтаза [Осеап1со1а Ьа1зепз13 НТСС2597]
ΖΡ 009... 83952381 декапренил дифосфат синтаза [Розеоуапиз пиЫпМЬепз Ι8Μ]
ΖΡ 006... 69937106 Транс-гексапренилтранстрансфераза [Рагасоссиз 6епйп1|сапз Ρϋ1222]
ΖΡ 005... 68180845 Транс-гексапренилтранстрансфераза [6аппазс111а эр. СС81]
ΖΡ 008... 78495595 Полипренил синтетаза [Рпоборзеиботопаз ра1из1пз ΒΙ3Β18]
ΑΑΥ82368 67866738 декапренил дифосфат синтаза [АдгоЬас1епит 1ите1ас1епз]
ΝΡ 353656 15887975 Гипотетический белок АСР_С_1125 [АдгоЬас1епит 1ите(ас1епз з1г. С581
ΖΡ 008... 77688465 Фарнезилтранстрансфераза [Рбоборзеиботопав ра1из1пз Βί3Β5]
ΝΡ 531334 17934544 октапренил-дифосфат синтаза [АдгоЬас1епит 1ите1ас1епз з1г. С581
ΥΡ 484709 86748213 Фарнезилтранстрансфераза [Рбоборэеиботопаз ра1из!пз НаА2]
ААР56240 37903500 декапренил дифосфат синтаза [Адгобас(епит 1ите1ас1епз]
ΥΡ 192388 58040424 Декапренил дифосфат синтаза [С1исопоЬас1ег
- 95 016258 охубапз 621 Η]
29В: Субъединица 1 - Белки, которые содержат митохондриальную направленную последовательность
Номер в базе данных Общий идентификатор Описание
Т43193 11279237 транс-пентапренилтранстрансфераза от гомологично делящихся дрожжей (ЗсЫгозасспаготусез ротЬе)
ААО28559 4732024 транс-пренилтрансфераза [Ното зар|епе1
ΑΑΙ07275 78070698 Транс-лренилтрансфераза [Миз тизси1из1
ВАЕ48216 81157931 субъединица 1 декапренил дифосфат синтазы [Ното зар|епз[
ААН49211 29165656 Белок РО331 [Ното зар|епз]
ОЗЗЭК2 85700953 Субъединица 1 декапренил-дифосфат синтазы (субъединица 1 соланесил-дифосфат синтаза) (Т ранс-пренилтрансфераза)
ХР 507706 55633583 РАССЧИТАНО: сходный с белкомТРРТ[Рап 1гоц1о<1у1ез1
ХР 586717 76632198 РАССЧИТАНО: сходный с транс-пренилтрансферазой [Воз (аигиз]
ХР 849908 73948851 РАССЧИТАНО: сходный с транс-пренилтрансферазой [Сап1® [атШагз]
29С: Субъединица 2 - Белки, которые содержат митохондриальную направленную последовательность
Номер в базе данных Общий идентификатор Описание
013851 60389474 Субъединица 2 декапренил-дифосфат синтазы (Субъединица 2 декапренил пирофосфат синтетазы)
ВАЕ48218 81157935 Субъединица 2 соланесил дифосфат синтазы [Миз тизси1из1
ВАЕ48217 81157933 Субъединица 2 декапренил дифосфат синтазы [Ното зар1епз]
- 96 016258
Таблица 30
Примеры полипептидов ПГБ-полипренилтрансферазы
Общий идентификатор Описание белка
51013645 ΥΝΒ041С [Зассйагошусез οβΓβνϊεϊθβ]
50285815 Белковый продукт без обозначения [СапФба д!аЬга1а1
50311051 Белковый продукт без обозначения [К1иууегошусез 1асйз]
45200866 ΑΘί23ΐννρ [ЕгешоИэеаиш доззурй]
50555263 гипотетический белок [Уаггомла Нро1у11са]
68473193 пара-гидроксибензоат: полипренил трансфераза [СапсПба а1Ысапз 8С5314]
50410039 гипотетический белок ОЕНАОА14212д [ОеЬагуотусез Ьапзепп СВ3767]
83769349 Белковый продукт без обозначения [Азрегд|Ииз огугае]
70994900 Предшественник пара-гидроксибензоат: полипренил трансферазы [АзрегдШиз 1иш1да1из А1293]
19114131 гипотетический белок ЗРАС56Р8. 04с [ЗсЫгозассКаготусез ротЬе 972Ь~]
39973573 πιιυισι ΐΓΐΉονι\κ·ιτι ινΐ4>ν ι υυ/ . «τ ρνια^ιιαμυι и 1С дпзеа 70-15]
85078920 Белок, связанный с предшественником парагидроксибензоат- полипренил трансферазы [Ыеигозрога сгазза N150]
76660839 Рассчитано: сходный с пара-гидроксибензоатполипренил трансферазой, митохондриальной [Воз 1аигиз]
52138578 пара-гидроксибензоат: полипренил трансфераза, митохондриальная [Ното зар!епз]
18088424 Белок ССЮ2 [Ното зар1епз]
47221448 Белковый продукт без обозначения [Тейаобоп тдгОУШСПз]
58385249 ΕΝ3ΑΝ6Ρ00000012220 [АпорЬе1ез датЫае з!г, РЕЗТ]
50746583 Рассчитано: сходный с гипотетическим белком С1640 [СаПиз да!1из]
54638587 СА21912-РА [ОгозорН|1а рзеибооЬзсига]
21355567 С69613-РА [ОгозорЬНа те1аподаз(ег]
71005862 гипотетический белок ΙΙΜ01450. 1 [изб!адо таусНз 5211
Специалисты в данной области техники представляют или смогут установить, используя только стандартные эксперименты, множество эквивалентов конкретных вариантов реализации изобретения, приведенных в данном описании. Предполагается, что область настоящего изобретения ограничивается не вышеприведенным описанием, а прилагаемой формулой изобретения.
- 97 016258
Перечень последовательностей <110> Бэйли и пр.
<12 0> ПОЛУЧЕНИЕ КАРОТИНОИДОВ В ОЛЕАГЕННЫХ ДРОЖЖАХ И ГРИБАХ <130> 2005862-0004 <140> 11/385,580 <141> 2006-03-20 <160> 81 <170> Патентная версия 3.2 <210> 1 <211> 984 <212> ОНА <213> АгТ161С1а1 <220>
<223> У. ИроТуХтса <400> 1
аХддаХХаХа асадсдсдда хххсааддад ахахддддса аддссдссда сассдсдсхд 60
схдддассдх асаасХассХ сдссаасаас сддддссаса асахсадада асасХХдаХс 120
дсадсдххсд дадсддххах сааддхддас аададсдахс хсдадассах ххсдсасахс 180
ассаадаХХХ хдсахаасхс дхсдсхдсхх дххдахдасд хддаадасаа схсдахдсхс 240
сдасдаддсс хдссддсадс ссаХХдХсгд хххддадхсс сссааассах саасхссдсс 300
аасхасаХдх асхххдхддс хсхдсаддад дхдсхсаадс ХсаадХсХХа ХдаХдссдХс 360
хссаххххса ссдаддаааХ дахсаасххд саХададдХс адддХаХдда ХсХсХасХдд 420
ададааасас хсасххдссс схсддаадас дадхарсхдд адахддхддх дсасаадасс 480
ддхддасхдх ххсддсхддс хсхдадасхх ахдсхдхсдд хддсахсдаа асаддаддас 540
саХдаааада тсаасрххда хсхсасасас сХХассдаса сасхдддадх саХХХассад 600
аХХсХддаХд аХХассХсаа ссХдсадХсс асддааххда ссдадаасаа дддаххсхдс 660
даадахахса дсдааддааа дххххсдххх ссдсхдаххс асадсаХасд сассаасссд 720
дахаассасд адаххсхсаа саххсхсааа садсдаасаа дсдасдсХХс асХсааааад 780
хасдссдхдд асхасахдад аасадааасс аададхххсд асхасхдссх саададдаха 840
саддссахдх сасхсааддс аадХХсдХас аХХдаХдаХс Хадсадсадс ХддссасдаХ 900
дхсхссаадс ХасдадссаХ хххдсаххах ХХХдХдХсса ссХсХдасХд Хдаддадада 960
аадгасхххд аддахдсдса дгда 984
<210> 2 <211> 327 <212> РКТ <213> АгХт С1 а1 <220>
<22 3> У. ИроЗуХтса <400> 2
- 98 016258
мег дер туг АЗП Зег А1а АЗр рКе ьуз 61 и 11е тгр 61 у ьуз А1а А1а
1 5 10 15
А5р тКг А1а Ьеи 20 Ьеи С1у РГО туг АЗП 25 туг Ьеи А1а АЗП АЗП 30 Агд 61 у
Ηί 5 АЗП 11 е Агд 61 и нтз Ьеи 11е А1а А1а РКе 61 у А1а Уа1 11 е ьуз
35 40 45
Уа1 АЗр ьуз Зег Азр Ьеи 61 и тКг 11 е Зег нтз Не тКг ьуз 11 е Ьеи
50 55 60
Ηί 5 АЗП Зег Зег Ьеи Ьеи Уа! А5Р Азр Уа! 61 и Азр А5П зег мет ьеи
65 70 75 80
Агд Агд 61 у ьеи Рго А1а А1 а нтз суз Ьеи РКе 61 у Уа1 Рго 61 η тКг
85 90 95
11 е А5П Зег А1а АвП Туг Мет Туг РКе Уа1 А1а Ьеи 61 п 61 и Уа! Ьеи
100 105 110
Ьуз Ьеи ьуз 5ег Туг АЗр А1а Уа1 Зег Не РКе тНг 61 и 61 и МеТ Не
115 120 125
А5П Ьеи нтз Агд 61 у 61п 61 у мет Азр ьеи туг Тгр Агд 61 и ТКг ьеи
130 135 140
тНг Суз Рго 5ег 61 и АЗР 61 и туг ьеи 61 и мет Уа1 Уа! нтз ьуз тКг
145 150 155 160
61 у 61 у ьеи РКе Агд 165 Ьеи А1а ьеи Агд Ьеи 170 мет ьеи Зег Уа1 А1а 175 зег
ьуз 61 η 61 и АЗР Нт 5 61 и ьуз 11е АЗП РКе Азр ьеи тКг нтз Ьеи тКг
180 185 190
Авр тКг Ьеи 61 у Уа1 11е Туг 61 η 11 е Ьеи АЗр Авр туг ьеи АвП Ьеи
195 200 205
61 η Зег тКг 61 и Ьеи ТНг 61 и АЗП ьуз 61 у рКе суз 61 и А5р 11е зег
210 215 220
61 и 61 у ьуз РЬе Зег РЬе Рго Ьеи 11 е нтз Зег 11е Агд ТКг АЗП РГО
225 230 235 240
Азр АЗП НТ 5 61 и 11 е Ьеи А5П 11е Ьеи ьуз 61 п Агд тКг зег Авр А1а
245 250 255
5ег ьеи ьуз Ьуз Туг л!а Уа1 АЗр туг мет Агд тКг 61 и тКг ьуз зег
260 265 270
рКе АЗр туг Суз ьеи ьуз Агд 11е 61 п А1а мет зег ьеи ьув А1а Зег
- 99 016258
275 280 £ег Туг 11е Аэр Азр кеи А1а А1а А1а
290 295
Агд А1а 11е Ьеи Нтз Туг РЬе Уа1 5ег 305 310
285 у нтз дзр \/а1 5ег ьуз иеи 300
ТЬг 5ег Азр Суз 61 и 61 и Агд 315 320 куз туг РКе 61 и Азр А1а 61 η
325 <210> 3 <211> 20 <212> ΟΝΑ <213> дгтт^тста!
<22О>
<223> РНтег <400> 3 скдддтдасс ТддаадссТТ <210> 4 <211> 23 <212> ΟΝΑ <213> АгЧпГтста!
<220>
<223> РНтег <400> 4 аада1саа1:с сдгадаадхг сад <210> 5 <211> 23 <212> ΟΝΑ <213> Агт1Гтста1 <220>
<223> РНтег <400> 5 аадсдаткас аатсттсстг тдд <210> 6 <211> 22 <212> ΟΝΑ <213> Αγειίίспа!
<220>
<223> РНтег <400> 6 ссадтссагс аастсадтст са <210> 7 <211> 23 <212> ϋΝΑ <213> ΑΓΐΉισίδΙ <22 0>
- 100 016258
<223> Ргттег
<400> 7
дсаНЬдсНа Пасдаадас 1ас 23
<210> 8
<211> 23
<212> ϋΝΑ
<213> АгГтТ1ста1
<220>
<223> Ргттег
<400> 8
ссасгдгссс ссасгасааа сас 23
<210> 9
<211> 31
<212> ΟΝΑ
<213> АгстТтс1а1
<220>
<223> ргт'тег
<400> 9
сасааасдсд ГИсасГдсдс агссгсааад ΐ 31
<210> 10
<211> 37
<212> ϋΝΑ
<213> АгхтГтста1
<220>
<223> Ргттег
<400> 10
сасаагсгад асасааахдд атхагаасад сдсддаг 37
<210> И
<211> 31
<212> ΟΝΑ
<213> АгТтТтста!
<220>
<223> ргттег
<400> 11
сасааасгад Шдссассг асаадссада г 31
<210> 12
<211> 31
<212> ϋΝΑ
<213> αγϊτ ίτ ст а1
<220>
<223> ргттег
<400> 12
сасааддгас саагдгдааа дгдсдсдхда г 31
<210> 13
<211> 28
<212> ΟΝΑ
- 101 016258
<213> αγχί Ή ста!
<22О>
<223> ргттег
<400> 13
сасааддхас сададассдд дххддсдд 28
<210> 14
<211> 40
<212> ϋΝΑ
<213> Агхт1Чста1
<22О>
<223> Ргттег
<400> 14
сасаадсддс сдсдсХадса Хддддахсда хсхсххахах 40
<210> 15
<211> 41
<212> ΟΝΑ
<213> АгХт-Нста1
<22О>
<223> ргттег
<400> 15
сасаадсддс сдсдсхадсд аахдаххсхх ахасхсадаа д 41
<210> 16
<211> 40
<212> ϋΝΑ
<213> ΑΓΧίίί ста!
<220>
<223> ргттег
<400> 16
сасаадсддс сдсасдсдхд сааххаасад ахадхххдсс 40
<210> 17
<211> 33
<212> ϋΝΑ
<213> Аихт^тста!
<220>
<223> ргттег
<400> 17
сасаадсхад сХддддаХдс даХсХсХХаХ аХс
<210> 1«
<211> 36
<212> ϋΝΑ
<213> Агхт Рт ст а1
<22О>
<223> Ргттег
<400> 18
сасааасдсд ХХХаааХддХ аХХХадаХХХ схсахх 36
- 102 016258 <210> 19 <211> 36 <212> ϋΝΑ <213> АгГтЕтстаТ <220>
<223> Ргттег <400> 19 сасаатхгад асасаааТдс ГдсГсассГа са1дда <210> 20 <211> 1906 <212> ϋΝΑ <213> АгГИтста!
<220>
<223> м. ст г*С1пе11о1с1е5 <400> 20
агдс1дсГса ссГасаТдда адГссассТс ТасГасасдс ТдссТдТдсг дддсдтссгд 60
ТссЬддссд! сдсддссдха схасасадсс ассдаГдсдс ТХаааСХсаа аНГсГдаса 120
сГддТГдссГ Гсасдассдс сГссдссгдд дасаасТаса тгдтсгасса сааддсдгдд 180
1сс±асхдсс ссасс1дсд1 сассдсЕдИс аххддсхасд ГдсссЕХдда ддадЬасаТд 240
ГГсИсаТса ТсаТдасТсг дггдассдгд дсаГТсасса аГс1ддТдаг дсдсЕддсас 300
сгдсасадс! ьсшахсад дсстдааасд сссдссахдс адхссдхссй ддкхдгсгс 360
дГссссаТаа садссГГаИ ааГсасТдса ГасааддсС! ддд!аадсаа асааасаааТ 420
дагдтдссдс агсдсагш ааганаасс андсагаса садсаихдд сддссссхдд 480
ааадссасТд МсСасдда! саГдса!111 дьддтасдсс 1д1ссддГГЬ ГддссХГаЬ! 540
дьддиьгдд! дсхддсдадх асатдатдсд 1сд1ссдсхд дсддгдсхсд ьсгссахгдс 600
дсТдсссасд с1д«1с±сх дсГдддТсда 1д1сд7сдс1 аГТддсдссд дсасаТддда 660
саитсдстд дссасаадса ссддсаадгг сдгсдгдссс сасстдсссд гддаддааи 720
ςβΐςΐΐεΐΐΐ дсдс!аа1Га агассдгси ддГаГСГддГ асдгдгдсда 1сда1сдсас 780
датддсдагс сгссассгд! гсааааасаа дадгссггаг садсдсссат ассадсасад 840
саадгсдгсс сгссассада гссгсдадаг дассЬдддсс 1Гс1д171ас ссдассаадс 900
дсхдсагхса дасасаггсс асдассьдгс сдгсадсгдд дасатссгдс дсааддсстс 960
саадгссгьг Тасасддсс! «дсГдгсИ гсссддсдас д!дсдссаад адсгсддгдх 1020
дстатасдсс гтгтдсадад ссасддасда тсгсгдсдас аасдадсадд гссстдтдса 1080
дасдсдааад дадсадсСда ТасГдасаса Тсадггсдгс адсдаТсгдс ГЕддссаааа 1140
дасаадсдсд ссдастдсса тгдастддда стгххасаас дассаасгдс с!дсс1сдгд 1200
саГсКйдсс ТГсаадИсдГ ТсасссдГТГ дсдсса!д!д с1ддаадсГд дадссаГсаа 1260
ддаасгдсьс дасдддхаса ад±дддаги ддадсдЬсдс 1сса1саддд аЬсаддадда 1320
тстсадагаг ГасТхадсИ дГдГсдссад садгдхгддг дааагдгдса сгсдсагсаг 1380
ас!ддсссас дссдасаадс ссдсс!сссд ссадсаааса сад!дда!са 1Гсадсд1дс 1440
- 103 016258
дсдхдааахд ддхсхддхас хссаахахас ааасаххдса ададасаххд хсассдасад 1500
сдаддаасхд ддсадахдсх ассхдссхса ддаххддсхх ассдадаадд аддхддсдсх 1560
даххсааддс ддссххдссс дадаааххдд сдаддадсда ХХдсХсХсас ХдХсдсаХсд 1620
ссхсахсхас саддсадасд адсхсахддх ддххдссаас аадддсахсд асаадсхдсс 1680
садссаххдх сааддсддсд хдсдхдсддс схдсаасдхс ХаХдсХХсса ХХддсассаа 1740
дсхсаадхсх хасаадсасс асхахсссад сададсасах дхсддсаахх сдааасдадх 1800
ддаааххдсх сххсххадсд хахасаассх ххасассдсд ссааХХдсда сХадХадХас 1860
сасасаххдс адасадддаа ааахдадааа хсхааахасс ахххаа 1906
<210> 21 <211? 613 <212> РКТ <213> Агт1Т1ста1 <220>
<223? М. ст гстпе11от без <400> 21
Мет 1 Ьеи Ьеи ТНг Туг 5 МеТ 61 и Уа1 Нтз Ьеи 10 Туг Туг ТНг Ьеи Рго 15 Уа1
Ьеи 61 у Уа1 Ьеи Бег Тгр Ьеи Бег лгд Рго Туг Туг ТНг А1а тНг Азр
20 25 30
А1а Ьеи ьуз РНе Ьуз РНе Ьеи ТЬг Ьеи Уа1 А1а РЬе ТЬг ТЬг А1а Бег
35 40 45
А1а Тгр Азр Азп Туг Пе Уа1 Туг Нт 5 Ьуз А1а тгр Бег туг Суз Рго
50 55 60
ТЬг Суз Уа1 ТНг А1а Уа1 11е С1у туг Уа1 Рго Ьеи С1и 61 и туг МеТ
65 70 75 80
РЬе РНе 11е 11е МеТ ТНг Ьеи Ьеи ТЬг Уа1 А1а РНе ТЬг Азп Ьеи Уа1
85 90 95
МеТ Агд тгр Нт 5 Ьеи Нтз Бег РНе РЬе Не Агд РГО 61 и ТЬг Рго Уа1
100 105 110
МеГ 61 η Бег Уа1 Ьеи Уа1 Агд Ьеи Уа1 Рго 11 е ТКг А1а Ьеи Ьеи 11 е
115 120 125
тЬг А1а туг ьуз А1а тгр НТ 5 Ьеи А1а Уа1 Рго С1у Ьуз Рго Ьеи РЬе
130 135 140
Туг 61 у Бег Суз Пе Ьеи тгр Туг А1а Суз Рго Уа1 Ьеи А1а Ьеи Ьеи
145 150 155 160
Тгр РНе 61 у А1а 61у 61 и Туг мет МеТ Агд Агд Рго Ьеи А1а Уа1 ьеи
165 170 175
- 104 016258
Уа1 Бег Не А1а 180 кеи Рго ТЬг кеи РИе кеи Суз Тгр 185 Уа1 Азр 190 Уа! Уа1
л1а 11 е 61 у А1а 61 у тЬг Тгр Азр Не Бег кеи А1а ТЬг Бег тЬг 61 у
195 200 205
ку5 рКе Уа1 Уа1 Рго Н15 кеи Рго Уа1 61 и 61 и РЬе мет РЬе РЬе А1а
210 215 220
кеи Не АЗП тНг Уа1 кеи Уа1 РЬе С1у ТЬг суз А1а 11 е Азр Агд тЬг
225 230 235 240
Μβΐ А1а 11е кеи нтз ьеи РЬе куз А5П куз Бег рго туг 61η Агд Рго
245 250 255
туг б!п Н1з Бег ьуз 5ег РЬе кеи ΗΊ5 61 η Не кеи 61 и мет ТЬг тгр
260 265 270
А1а РЬе су5 кеи рго Азр 61η Уа1 кеи нтз Бег Азр ТЬг РЬе Н1з Азр
275 280 285
кеи Бег уа1 Бег Тгр А5Р Не кеи Агд куз А1а Бег кУ5 Бег РЬе туг
290 295 300
ТЬг д1а Бег а! а уа! рНе Рго 61 у А5Р Уа1 Ага 61 η 61 и кеи 61 у ν.ι1
505 310 315 320
кеи туг А1а рНе суз Агд А1а ТЬг А$р Азр кеи СУ5 Азр АЗП 61 и 61 η
325 330 335
Уа1 РГО уа1 61п тЬг Агд куз 61 и 61 п кеи И е кеи ТЬг НТ 5 61 η РЬе
340 345 350
Уа1 Бег Азр кеи РЬе 01 у 61 η куз ТЬг Бег А1а Рго ТЬг А1а Не Аэр
555 360 365
Тгр Азр РНе Туг АЗП А5р 61 η кеи Рго А1а Бег Су 5 Не Бег А1а РЬе
570 375 380
куз Бег р|те тЬг Агд ьеи Агд НТ 5 Уа1 кеи 61 и А1а 61 у А1а Не куз
585 390 395 400
61 и кеи кеи Азр 61 у Туг куз Тгр Азр кеи 61 и Агд Агд Бег Не Агд
405 410 415
Азр 61 п 61 и Азр кеи Агд туг туг Бег А1а суз Уа! А1а Бег Бег Уа1
420 425 430
61у 61 и Мет Суз тЬг лгд 11 е 11 е кеи А1а нтз А1а Азр куз рго А1а
455 440 445
- 105 016258
5ег Агд О1п 61п ТНг С1п Тгр 11е 455 11е 61п Агд А1а Агд 460 61 и Мег 61 у
450
ьеи х/а! 1_еи 61 η туг тКг АЗП Не А1а Агд А5Р 11е Уа1 ТНг Азр 5ег
465 470 475 480
61 и 61 и ьеи 61 у Агд суз туг ьеи РГО 61 п А5Р тгр кеи тЬг 61 и ьуз
485 490 495
61и Уа1 А1а кеи Не 61 η 61 у 61 у Ьеи А1 а Агд 61и 11е 51 у 61 и 61 и
500 505 510
Агд кеи |_еи 5ег Ьеи Зег Н1 3 Агд Ьеи Не Туг 61 η А1а Азр 61 и Ьеи
515 520 525
Μ6Ϊ Уа1 Уа1 Д1а А$П кУ5 61 у 11 е Азр ЬУ5 Ьеи Рго Зег Н13 Суз 61 η
530 535 540
<31 у б!у Уа1 Агд А1а А1а суз АЗП Уа1 Туг А1а Зег 11 е 61 у тНг |_уз
545 550 555 560
кеи (_У5 5ег Туг куЗ ΗΊ3 Нт 3 Туг Рго Зег Агд А1а ΗΊ 5 Уа1 61 у АЗП
565 570 575
Зег «-У5 Агд Уа1 61 и 11е А1 а кеи Беи 5ег Уа1 Туг Азп Ьеи Туг ТНг
580 585 5У0
А1а Рго Пе Д1а ТКг Зег Зег ТКг тНг Н1 5 Суз Агд 61 η 61 у ьуз МеЬ
595 600 605
Агд АЗП Ьеи А5П ТКг
610 <210> 22 <211> 17 <212> ϋΝΑ <213> дт’-Нста!
<220>
<223> ргттег <400> 22 дгаааасдас ддссадк 17 <210> 23 <211> 38 <212> ОМА <213> Агст^1С1а1 <220>
<223> Ргттег <400> 23 сасасддтст сагдссаадс сгсдгатдса дгдагтаа 38
- 106 016258
<210> 24
<211> 19
<212> ΟΝΑ
<213> Аг1161ста1
<220>
<223> Ргттег
<400> 24
ссасбдГдбГ гдсгддсдд 19
<210> 25
<211> 34
<212> □ΝΑ
<213> АгСл^тста!
<220>
<223> Ргттег
<400> 25
сасасддгс! сгддсаПГд дсддбссссд дааа 34
<210> 26
<211> 35
<212> ΟΝΑ
<213> Аг1161’ста1
<220>
<223> Ргттег
<400> 26
сасааасдсд Шааагдас аНададНа Сдаас 35
<210> 27
<211> 37
<212> ϋΝΑ
<213> Αγϊτ ίη ст а1
<220>
<223> Ргттег
<400> 27
сасаабсбад асасааабдс ссаадаааса сагсдгс 37
<210> 28
<211> 17
<212> ΟΝΑ
<213> ΑγϊΙ61ст а1
<22Ο>
<223> Рг1тег
<400> 28
дтаааасдас ддссадт 17
<210> 29
<211> 31
<212> ϋΝΑ
<213> Агст61 ста!
<220>
<223> РНтег
<400> 29
- 107 016258
сасааддгст саадсасдса ТсссддаасГ 9 31
<210> 30
<211> 32
<212> ОНА
<213> АггтЕтста!
<22О>
<223> Ргттег
<400> 30
сасасддТсх саддсаЬдгс дсссхасдас дс 32
<210> 31
<211> 35
<212> ϋΝΑ
<213> АгГтЕтста!
<220>
<223> Ргттег
<400> 31
сасасддТсГ саЬдсгСдса сссасааада атадд 35
<210> 32
<211> 17
<212> ОМА
<213> ΑΠίΗείίΙ
<220>
<223> Ргттег
<400> 32
саддааасад сбаХдас 17
<210> 33
<211> 36
<212> ϋΝΑ
<213> ΑΓΐτГт ст а!
<220>
<223> Ргттег
<400> 33
сасасддГсГ сПдсссаГа гасаьддгсь дааасд 36
<210> 34
<211> 1740
<212> 0ΝΑ
<213> Ατΐτίτ ста!
<220>
<223> М. стгстпеИотдез
<400> 34
атдьссаада аасасаььдь саГГаГсддг дсГддсдТдд дГддсасддс гасадсгдст 60
сдтттддссс дсдааддсГГ сааддГсасГ дГддГддада аааасдасТТ Тддгддсддс 120
сдсьдсьссь гдаьссаьса ссадддссах сдсхыдахс адддсссдГс дсГс^ассьд 180
атдсссаадт асГТТдадда сдссТГТдсс даТсГддасд адсдсаТГса адассассГд 240
дадсьдсьдс даьдсдасаа саасьасаад дгдсастд асдасддгда дгсдагссад 300
- 108 016258
схдхсдхсхд асххдасасд сахдааддсх дааххддасс дсдхддаддд сссссххддх 360
хххддссдах хссхддаххх сахдааадад асасасахсс асхасдааад сддсасссхд 420
аххдсдсхса адаадааххх сдаахссахс хдддассхда ххсдсахсаа дХасдсХсса 480
дадахсхххс дсХХдсассХ дХХХддсаад аХсХасдасс дсдсХХссаа дхасххсаад 540
ассаадаада хдсдсахддс аххсасдххх садассахдх ахахдддсах дхсдсссхас 600
дахдсдссхд сХдХсХасад ссХдХХдсад ХасассдадХ ХсдсХдаадд сахсхддхах 660
ссссдХддсд дсХХсаасаХ ддХддХХсад аадсХададд сдаХХдсааа дсаааадгас 720
дахдссдадх ххахсхасаа хдсдссхдхх дссаадахха асассдахда хдссассааа 780
саадхдасад дхдхаассхх ддаааахддс сасахсахсд ахдссдахдс ддххдхдхдх 840
аасдсадаХс ХддХсХаХдс ХХаХсасааХ сХдХХдссХс ссХдссдаХд дасдсаааас 900
асасхддсхх ссаадааахх дасдХсХХсХ ХссаХХГссх хсхасхддхс сахдхссасс 960
ааддхдссхс ааххддасдх дсасаасахс хххххддссд аддсххахса ддададсххх 1020
дасдааахсх ХсааддасХХ ХддссХдссХ ХсХдаадссХ ссХХсХасдХ сааХдХдссс 1080
хсхсдсахсд ахссххсхдс хдсхсссдас ддсааддасХ схдхсаххдх сххддхдссх 1140
аххддхсаха хдаададсаа дасдддсдах дсххссассд адаасхассс ддссахддгд 1200
дасааддсас дсаадахддх дсхддсхдхд аххдадсдхс дХсХдддсаХ дхсдаахххс 1260
дссдасххда ХХдадсаХда дсаадХсааХ дахсссдсхд Хахддсадад саадххсаах 1320
схдхддадад дсхсааххсх дддхххдхсх сахдахдхдс ххсаддхдсх дхддххссдх 1380
сссадсасаа аддаххсхас сддхсдххах дахаассхах хсхххдхддд хдсаадсасд 1440
саТсссддаа сХддХдХХсс саххдхссхх дсаддаадса адсхсассхс ХдассаадХХ 1500
дХсаададсх ХХддааадас дсссаадсса адааадаХсд адахддадаа сасдсаадса 1560
ссхххддадд адссХдаХдс ХдааХсдаса ХХсссХдХдХ ддххсхддхх дсдсдсхдсс 1620
ХХХХдддХСа хдхххахдхх сХХХХасХХс ХХессХсааХ ссааХддсса аасдсссдса 1680
хсххххахса ахаахххдхх ассхдаадха ххссдсдххс ахаасхсхаа хдхсахххаа 1740
<210> 35 <211> 579 <212> РКТ <213> АГХтЬтСта!
<22О>
<223> Υ. 11ро1уХ1са <400> 35
мех 5ег ЬУ5 ьуз Н1 5 11 е Уа! 11 е Не 61у А1а 61у уа! 61 у 61 у тНг
1 5 10 15
А1а тНг А1а А1а Агд ьеи А1а Агд 61 и 61 у РНе ьуз Уа! ТЬг Уа1 Уа1
20 25 30
61 и ьуз Азп Азр РНе 61у 61 у 61 у Агд Суз 5ег Ьеи 11е ΗΊ 5 Н1 5 61 п
- 109 016258
35 40 45
61 у нтз 50 Агд РНе Азр 61 п 61 у 55 Рго Бег ьеи Туг Е_еи 60 мех Рго ьуз Туг
РНе 61 и Азр А1а рНе А1а Азр ьеи Азр 61 и Агд Не 61 п А5р НТ 5 Ьеи
65 70 75 80
61 и Ьеи Ьеи Агд суз 85 Азр АЗП АЗП Туг Ьуз 90 Уа1 Нтз РНе Азр Азр 95 61 у
61 и Бег Не 61 п Ьеи Бег Бег Азр Ьеи ТНг Агд Мех Ьуз А1а 61 и Ьеи
100 105 110
АЗр Агд Уа1 61 и 61 у Рго Ьеи б! у РНе 61 у Агд РНе Ьеи Аэр РНе Мех
115 120 125
1_У5 61 и тНг нтз Не Нтз Туг б! и Бег 61 у ТНг Ьеи Не А1а ьеи ьуз
130 135 140
ьуз Азп рНе 61 и Бег Не Тгр А5р ьеи Не Агд Не ьуз Туг А1а Рго
145 150 155 160
61 и 11е РНе Агд Ьеи НТВ Ьеи РНе б1у ьуз 11е Туг Аэр Агд А1а Бег
165 170 175
Ьуз Туг РНе ьуз тНг ьуз Ьуз Мех Агд Мех А1а РНе ТНг РНе 61 п тНг
180 185 190
мех Туг мет 61 у мех Бег Рго туг АЗР А1а рго А1а Уа1 туг Бег ьеи
195 200 205
Ьеи 61п 210 Туг ТНг 61 и рНе а! а 215 61 и 61 у Не Тгр Туг 220 Рго Агд 61 у 61 у
РНе Азп Мех Уа1 Уа! 61 п ьуз ьеи 61 и А1а Не А1а ьуз 61п ьуз Туг
225 230 235 240
Азр А1а 61 и рНе Не Туг А5П А1а Рго Уа! А1а Ьуз 11е АЗП тНг Азр
245 250 255
Азр А1 а тНг ьуз 61 п Уа! ТНг 61 у Уа1 ТНг Ьеи 61 и Азп 61 у Нтз Не
260 265 270
11е Азр А1а Азр А1а Уа! Уа1 Суз Азп А1а Азр Ьеи Уа1 Туг А1а Туг
275 280 285
НТЗ АЗП ьеи ьеи Рго рго суз Агд Тгр ТНг 61 п АЗП тНг ьеи А1а Бег
290 295 300
ьуз Ьуз ьеи тНг Бег Бег Бег 11е Бег РНе Туг Тгр Бег мех Бег тНг
305 310 315 320
- 110 016258
Ьу5 Уа1 РГО 61 η ьеи 325 А5р Уа1 нтз АЗП 11е рНе 330 Ьеи А1а 61 и А1а 335 Туг
61 и 61 и Зег РНе Азр 61 и 11е РНе ьуз Азр рКе 61 у Ьеи Рго Зег 61 и
340 345 350
А1а 5ег РНе Туг Уа1 Азп Уа1 Рго 5ег Агд Не Азр РГО 5ег А1а А1а
355 360 365
Рго АЗр 61 у Ьуз Азр Зег уа1 Не Уа1 Ьеи νβΐ Рго 11 е 61 у НТ 5 МеТ
370 375 380
Ьуз Зег ьуз тНг 61 у Азр А1а 5ег тНг 61 и А5П Туг Рго А1а МеТ Уа1
385 390 395 400
Азр Ьуз А1а Агд Ьуз 405 Мет Уа1 Ьеи А1а Уа1 410 11е 61 и Агд Агд ьеи 415 61 у
мег зег АЗП рНе А1а А5р ьеи т1е 61 и Нтз С1и 61 π Уа1 А5П А5р Рго
420 425 430
А1а Уа1 тгр 61п Зег Ьуз рНе Азп ьеи Тгр лгд 61 у Зег 11е ьеи 61 у
435 440 445
1 он Сог и-ϊ 5 Дер \/а1 кеи 61 п Уа1 1_8и -г г-г. рНе Лгл Саг ТЬг 1 т/е
450 455 460
Азр Зег ТНг 61 у Агд Туг Азр АЗП Ьеи РНе РНе Уа1 61 у А1а Зег ТНг
465 470 475 480
Н15 Рго 61 у ТНг 61 у Уа1 Рго Не Уа1 Ьеи А1а 61 у Зег Ьуз кеи ТНг
485 490 495
Зег Азр 61 η Уа1 Уа1 Ьуз зег рНе 61 у Ьуз ТНг РГО ьуз Рго Агд ьуз
500 505 510
11е 61 и мет 61 и А5П тНг 61 п А1а РГО ьеи 61 и 61 и РГО Азр А1а С1и
515 520 525
Зег ТНг рНе Рго Уа1 тгр рНе Тгр Ьеи Агд А1а А1а РНе тгр Уа1 МеТ
530 535 540
РНе мет РНе РНе Туг РНе рНе Рго 61 п 5ег АЗП 61 у 61 п ТНг РГО А1а
545 550 555 560
Зег РНе Не Азп А5П Ьеи Ьеи Рго 61 и Уа1 РНе Агд Уа1 Нтз АЗЛ Зег
565 570 575
Азп Уа1 11е
- 111 016258
<210> <211> <212> <213> 36 32 ϋΝΑ АгХтбтста!
<220>
<223> Ргтшег
<400> 36
саххсасхад хддхдхдххс ХдХддадсаХ 1С 32
<210> 37
<211> 36
<212> ϋΝΑ
<213> АгХ ι ΐί ст а!
<22Ο>
<223> рттег
<400> 37
сасасддхсх сахсдаддхд хадхддхадх дсадгд 36
<210> 38 <211> 1740 <212> ϋΝΑ <213> АгХ16тста1 <220>
<223> Υ. 1тро1уХтса
<400> 38
ахптссаапа аасасаххдх сахтахсддх дсхддсдхдд л! ллг'^гляг' 3Э3'33* 60
сдхххддссс дсдааддсхх сааддхсасх дХддХддада аааасдасХХ ХддХддсддс 120
сдсхдсхссх хдахссахса ссадддссаХ сдсХХХдаХс адддсссдХс дсГсхассхд 180
аХдсссаадХ асХХХдадда сдссХХХдсс даХсХддасд адсдсаХХса адассассХд 240
дадсХдсХдс даХдсдасаа саасхасаад дгдсасХХХд асдасддхда дхсдахссад 300
сХдХсдХсХд асХХдасасд саХдааддсХ дааХХддасс дсдХддаддд сссссХХддХ 360
хххддссдах хссхддаххх саХдааадад асасасахсс асхасдааад сддсасссхд 420
аххдсдсхса адаадааххх сдаахссахс хдддассхда ххсдсахсаа дхасдсхсса 480
дадахсхххс дсххдсассх дХХХддсаад ахсхасдасс дсдсххссаа дХасХХсаад 540
ассаадаада ХдсдсаХддс аХХсасдХХХ садассаХдХ аХаХдддсаХ дХсдсссХас 600
дахдсдссхд схдхсхасад ссхдххдсад хасассдадх ХсдсХдаадд саХсХддХаХ 660
ссссдХддсд дсХХсаасаХ ддХддХХсад аадсХададд сдаХХдсааа дсаааадХас 720
даХдссдадХ ХХаХсХасаа хдсдссхдхх дссаадаХХа асассдаХда Хдссассааа 780
саадХдасад дхдхаассхх ддаааагддс сасахсахсд ахдссдахдс ддххдтдхдх 840
аасдсадахс хддхсхахдс ххахсасаах схдххдссхс ссхдссдахд дасдсаааас 900
асасхддсхх ссаадааахх дасдхсххсх хссахххссх хсхасхддхс сатдхссасс 960
ааддХдссХс ааХХддасдХ дсасаасахс ХХХХХддссд аддсххахса ддададсххх 1020
дасдаааХсХ ХсааддасХХ ХддссХдссХ ХсХдаадссХ ссХХсХасдХ сааХдХдссс 1080
- 112 016258
хсхсдсахсд ахссххсхдс хдсхсссдас ддсааддасС сХдХсаХХдХ с1гдд1дссг 1140
аХХддХсаХа Хдаададсаа дасдддсдах дсггссассд адаасхассс ддссаГдд1:д 1200
дасааддсас дсаадаХддХ дсХддсХдХд аГГдадсдИс дХсХдддсаХ дгсдаагс^с 1260
дссдасХХда ХхдадсаХда дсаадхсаах да-Есссдсгд хаХддсадад саадггсаа! 1320
сХдхддадад дсхсааххсх дддхххдхсх сагдагд1дс ххсаддхдсх дхддигссдг 1380
сссадсасаа аддаххсхас сддхсдххах дагаассга^г хсхххдхддд гдсаадсасд 1440
сахсссддаа схддтдххсс саххдхссхх дсаддаадса адсхсассхс хдассаадН: 1500
дхсаададсх ХХддааадас дсссаадсса адааадаГсд адаХддадаа сасдсаадса 1560
ссХХХддадд адссХдаХдс Хдаахсдаса ггсссгдтдг ддххсхддхх дсдсдсхдсс 1620
ххххдддхса хдхххахдхх сххххасххс ггссстсаах ссаахддсса аасдсссдса 1680
хсххххахса ахаахххдхх ассхдаадха «ссдсдггс ахаасхсхаа 1:дгсагггаа 1740
<210> 39 <211> 579 <212> РКТ <213> АгХтГтста!
<220>
<223> Υ. 1тро1уХтса <400> 39
мех 1 Зег ьуз ьуз НТЗ 5 11е Уа1 Не Це с1у А1а 10 б1у Уа1 61 у 61 у 15 ТНг
А1а тНг А1а А1а 20 Агд кеи А1а Агд 61 и 25 61 у РНе ьуз Уа1 ТНг 30 Уа1 Уа1
61 и ьуз АЗП АЗР РНе 61 у 61 у 61 у Агд Суз Зег Ьеи 11 е Нт 5 НТЗ 61 п
35 40 45
61 у НТЗ 50 Агд Рпе Азр б1п 61 у 55 Рго Зег Ьеи Туг Ьеи 60 Мех Рго ьуз туг
РНе 01и АЗр А1а РНе А1а Азр Ьеи Азр 61 и Агд Не 61 п Азр Нт 5 ьеи
65 70 75 80
б?и Ьеи Ьеи Агд суз АЗр Азп Азп Туг Ьуз Уа1 НТЗ РНе А5р Азр б1у
85 90 95
б!и зег 11 е 61 η ьеи зег зег Азр Ьеи тНг дгд Мех Ьуз А1а 61 и ьеи
100 105 110
Азр Агд Уа1 61 и 61 у Рго Ьеи 61 у РНе 61 у Агд РНе Ьеи Азр РНе мех
115 120 125
ίγ5 61 и тНг Нт 3 Не НТЗ Туг 61 и Зег 61 у тНг ьеи Не А1а ьеи ьуз
130 135 140
- 113 016258
Ьуз АЗП рНе 61 и Бег Не Тгр Азр Ьеи Не Агд Не ьуз Туг А1а РГО
145 150 155 160
С1и Не рКе Агд ьеи ΗΤ3 ьеи Рпе 61 у Ьуз 11 е Туг Азр Агд А1а Бег
165 170 175
Ьуэ Туг РНе Ьуз тНг ьуз Ьуз Μβΐ Агд мет А1а РНе ТНг рНе 61 η ТНг
180 185 190
Мег Туг Мег 61 у ме! Бег РГО Туг Азр А1а Рго А1а Уа1 Туг Бег Ьеи
195 200 205
Ьеи 61 п 210 Туг ТНг 61 и РНе А1 а 215 61 и 61 у Не тгр туг 220 РГО Агд 61 у 61 у
Рпе АЗП Ме1 Уа1 Уа1 61п ьуз Ьеи 61 и А1а 11 е А1а ьуз 61 η ьуз Туг
225 230 235 240
А5р А1а 61 и Рпе Не Туг А5П А1а РГО Уа1 А1а ьуз Не АЗП ТНг Азр
245 250 255
А5р А1а ТНг ьуз 61 п Уа1 тНг 61 у Уа1 Тпг ьеи 61 и АЗП 61 у Ηί 5 Не
260 265 270
11 е А5Р А1а АЗР А1а Уа1 να! суз АЗП А1а Α5Ρ ьеи уа1 туг А1а туг
275 280 285
ΗΊ 5 АЗП ьеи ьеи РГО РГО Су 5 Агд Тгр тНг 61 п Азп ТНг Ьеи А1 а Бег
290 295 300
ьуз ьуз ьеи ТНг Бег Бег Бег Не Бег рНе Туг Тгр Бег мег Бег тНг
305 310 315 320
ьуз Уа1 РГО 61 п ьеи АЗр уа! Нтз АЗП 11 е рНе ьеи А1а 61 и А1 а туг
325 330 335
с1п 61 и Бег Рпе Азр б1и 11 е рНе ьуз Азр рНе б!у Ьеи Рго Бег б1и
340 345 350
А1а Бег Рпе Туг Уа1 А5П Уа! Рго Бег Агд 11 е Азр Рго Бег А1а А1а
355 360 365
Рго Азр 61 у ьуз Азр Бег Уа! 11 е Уа1 ьеи Уа1 РГО Не 61 у Нт 5 мег
370 375 380
ьуз Бег ьуз ТНг 61у Азр А1а Бег ТНг 61 и АЗП Туг РГО А1а Μθΐ Уа1
385 390 395 400
Азр ьуз А1а Агд ьуз МеТ Уа! Ьеи А1а Уа1 11 е 61 и Агд Агд ьеи б!у
405 410 415
- 114 016258
ме! Бег Азп РЬе 420 А1а Азр Ьеи 11е 61и 425 Нтз 61 и 61 п Уа1 Азп 430 А5р РГО
А1а Уа! тгр 435 61 η Бег Ьуз РЬе Азп 440 Ьеи тгр Агд 61 у Бег 445 11е Ьеи 61 у
Ьеи Бег НТ 5 Азр иа1 Ьеи 61 п Уа! Ьеи Тгр РЬе Агд Рго Бег тЬг ьуз
450 455 460
АЗр Бег тЬг 61 у Агд туг АЗр АЗП Ьеи РЬе РЬе уа1 61 у А1а Бег ТЬг
465 470 475 480
Нтз Рго 61 у ТЬг 61 у Уа! Рго Не Уа1 ьеи А1а 61у Бег ьуз ьеи тЬг
485 490 495
Бег Азр 61 η Уа1 Уа1 ьуз Бег РЬе 61 у ьуз тНг РГО ьуз РГО Агд ьуз
500 505 510
11 е 61 и МеТ 61 и Азп ТЬг 61 п А1а Рго ьеи 61 и 61 и Рго Азр А1а 61 и
515 520 525
Бег ТЬг рЬе Рго Уа1 Тгр РНе Тгр Ьеи Агд А1а А1а РЬе Тгр Уа! мет
530 535 540
РЬе Меи РЬе РЬе Туг РЬе РЬе Рго 61 п Бег А5П б!у 61п ТЬг Рго А1а
545 550 555 560
Бег РЬе 11е АЗП Азп ьеи Ьеи Рго 61 и Уа1 РЬе Агд Уа1 НТЗ Азп Бег
565 570 575
Азп Уа1 11е <210> 40 <211> 36 <212> РИА <213> АгТт61ста1 <22О>
<223> Ргттег <400> 40
ТТсТадасас аааааТддсТ дсадассаат ТддТда <210> 41 <211> 33 <212> ΟΝΑ <213> АгТт6тста1 <220>
<223> Ргттег <400> 41 саттааттст тстаааддас дтаттттстт атс <210> 42
- 115 016258 <211> 21 <212> ϋΝΑ <213> АгЕтГтста1 <220>
<223> Ргттег <400> 42 дЕЕСЕсЕдса сдассЕадад д <210> 43 <211> 33 <212> ϋΝΑ <213> АгЕт^тста!
<220>
<223> Ргттег <400> 43 сасасасдсд ЕасассЕаЕд ассдЕаЕдса ааЕ 33 <210> 44 <211> 40 <212> ϋΝΑ <213> АгЕтЕтста!
<220>
<223> Ргттег <400> 44 сасасЕсЕад асасаааааГ дасссадЕсЕ дЕдааддЕдд <210> 45 <211> 1503 <212> ΟΝΑ <213> АгЕтГтста1 <220>
<223> Υ. 1тро1уЕтса <400> 45 аЕдасссадЕ сЕдЕдааддЕ ддЕЕдадаад сасдЕЕссЕа ЕсдЕсагЕда даадсссадс60 дадааддадд аддасассЕс ЕЕсЕдаадас ЕссаЕЕдадс ЕдасЕдЕсдд ааадсадссс120 аадсссдЕда ссдадасссд ЕЕсЕсЕддас дассЕададд сЕаЕсаЕдаа ддсаддЕаад180 ассаадсЕЕс Еддаддасса сдаддЕЕдЕс аадсЕСЕСЕС Есдадддсаа дсЕЕссЕЕЕд240
ЕаЕдсЕсЕЕд адаадсадсг ЕддЕдасаас асссдадсЕд ЕЕддсагссд асдаЕсЕаЕс300 аЕсЕсссадс адЕсЕааЕас саадасЕЕЕа дадассЕсаа адсЕЕссЕЕа ссЕдсасЕас360 дасЕасдасс дЕдЕЕЕЕЕдд адссЕдЕЕдс дадаасдЕЕа ЕЕддЕЕасаЕ дссЕсЕсссс420 дЕЕддЕдЕЕд сЕддссссаг даасаЕЕдаг ддсаадаасг ассасаЕЕсс ЕаЕддссасс480 асЕдадддЕЕ дЕсЕЕдЕЕдс сЕсаассаЕд сдаддЕЕдса аддссаЕсаа сдссддЕддс540 ддЕдЕЕасса сЕдЕдсЕЕас ЕсаддасддЕ аЕдасасдад дЕссЕЕдЕдЕ ЕЕссЕЕсссс600
ЕСЕСЕсаадс дддсЕддадс сдсЕаадаЕс ЕддсЕЕдаЕЕ ссдаддаддд ЕСЕсаадЕсс660 аЕдсдааадд ссЕЕсаасЕС саесЕСЕсда ЕЕЕдсЕсдЕе ЕссадЕсЕсЕ ЕсасЕсЕасс720 сЕЕдсЕддЕа ассЕдсЕдЕЕ ЕаЕЕсдаЕЕс сдаассасса сЕддЕдаЕдс саЕдддсаЕд780
- 116 016258
аасаХдаХсХ ссаадддсдх сдаасасхсх схддссдхса Хддхсаадда дХасддсХХс 840
ссхдахахдд асаХХдХдХс ХдХсХсдддХ аасХасХдса сХдасаадаа дсссдсадсд 900
ахсаасхдда хсдааддссд аддсаададх дххдххдссд аадссассах сссхдсхсас 960
аххдхсаадх схдххсхсаа аадхдаддхх дасдсХСХХд ХХдадсХсаа саХсадсаад 1020
аахсхдахсд дХадХдссаХ ддсХддсХсХ дХдддаддХХ ХсааХдсаса сдссдсааас 1080
сХддХдассд ссаХсХассХ ХдссасХддс саддагссХд сХсадааХдХ сдадХсХХсс 1140
аасХдсаХса сдсхдахдад саасдхсдас ддхаассхдс хсахсхссдх ххссахдссх 1200
хсхахсдадд ХсддХассаХ ХддХддаддХ асХаХХХХдд адссссаддд ддсХаХдсХд 1260
дадахдсххд дсдХдсдадд ХссХсасаХс дадасссссд дХдссаасдс ссаасадсХХ 1320
дсхсдсахса ХХдсХХсХдд адХХсХХдса дсддадсХХХ сдсХдХдХХс ХдсХсХХдсХ 1380
дссддссахс ххдхдсааад хсахахдасс сасаассддХ сссаддсХсс хасхссддсс 1440
аадсадХсХс аддссдахсх дсадсдХсХа саааасддХХ сдааХаХХХд саХасддХса 1500
Хад 1503
<210> 46 <211> 500 <212> ΡΚΤ <213> АгХтГтста1 <220>
<223> Υ. 1тро1уХтса <400> 46
мех 1 тНг 61 η зег Уа! 5 ьуэ Уа! Уа1 61 и ьуз 10 НТЗ Уа1 Рго 11е Уа1 15 11е
61 и Ьуз Рго Зег 61 и Ьуз 61 и 61 и Азр ТНг Зег Зег 61 и Азр Зег 11 е
20 25 30
61 и Хеи ТЬг Уа1 61 у ьуз 61 η РГО ьуз Рго Уа! ТЬг 61 и ТНг Агд Зег
35 40 45
ьеи Азр АЗр ьеи 61 и А1а 11 е мех ьуз А1а 61 у ьуз тЬг ьуз ьеи Ьеи
50 55 60
б!и А5Р НТЗ 61 и Уа1 Уа1 ьуз Ьеи Зег Ьеи 61 и 61 у Ьуз Ьеи Рго ьеи
65 70 75 80
Туг А1а ьеи 61 и ьуз 61 η Ьеи 61 у А5р Азп Т(1Г Агд А1а Уа! 61 у Не
85 90 95
Агд Агд зег 11е Не зег 61 η 61 η 5ег А5П ТЬг Ьуэ т!гг ьеи 61 и ТЬг
100 105 110
Зег ьуз Ьеи Рго Туг ьеи НТЗ Туг АЗР Туг Азр Агд Уа1 РНе б1у А1а
115 120 125
- 117 016258
Суз Суз 61 и Азп 130 Уа1 11е 61 у 13 5 Туг Μβΐ РГО Ьеи Рго 140 Уа1 61 у Уа1 А1а
61 у Рго Μβΐ Азп 11 е Азр 61 у ьуз Азп туг НТЗ 11е Рго Μθΐ А1а тНг
145 150 155 160
тКг 61 и 61 у Суз Ьеи Уа1 А1а Бег ТНг Μβΐ Агд 61 у суз ьуз А1а 11е
165 170 175
АЗП А1а 61 у 61 у 61 у Уа1 тКг ТНг Уа1 ьеи ТНг 61 п Аэр 61 у Μβΐ ТНг
180 185 190
Агд 61 у Рго Суз Уа1 Бег РНе Рго Бег Ьеи ьуз Агд А1а 61 у А1а А1а
195 200 205
ьуз 11е 210 Тгр ьеи Азр Бег 61 и 215 61 и 61 у Ьеи ьуз Бег 220 Μβΐ Агд ЬУ5 А1а
Рбе Азп Бег тНг Бег Агд РНе А1а Агд ьеи 61 п Бег Ьеи Н1 5 Бег ТНг
225 230 235 240
ьеи А1а 61 у А5П Ьеи 245 ьеи рНе 11е Агд РНе 250 Агд тЬг ТНг ТНг 61 у 255 Азр
А1а Μβΐ 61 у мег Азп Μβΐ 11 е Бег ЬУ5 61 у Уа1 61 и НТЗ Бег ьеи А1а
260 265 270
Уа1 Ме! Уа1 ьуз 61 и туг 61 у рНе Рго Азр Μβΐ Азр Не νβΐ Бег νδΐ
275 280 285
5ег 61 у Азп Туг Суз тйг Азр ьуз ьуз Рго А1а А1а 11е АЗП Тгр 11 е
290 295 300
61 и 61 у Агд 61у ьуз Бег Уа1 Уа1 А1а 61 и А1а ТЙГ 11 е Рго А1а НТ 5
305 310 315 320
11 е νβΐ ьуз Бег νβΐ ьеи ьуз Бег 61 и уа! АЗР А1а ьеи Уа1 61 и ьеи
325 330 335
Азп 11 е Бег ьуз АЗП ьеи 11 е 61 у Бег А1а Μβΐ А1а 61 у Бег Уа1 61 у
340 345 350
61 у Рбе Азп А1а Н1 5 А1 а А1а АЗП Ьеи Уа1 ТЬг А1а 11е Туг Ьеи А1а
355 360 365
тпг 61 у 61 п АЗр РГО А1а 61 п АЗП Уа1 61 и Бег Бег АЗП суз 11 е тНг
370 375 380
Ьеи Μβΐ Бег Азп Уа1 Аэр 61 у А5П ьеи Ьеи Не Бег νβΐ Бег Μβΐ Рго
385 390 395 400
- 118 016258
зег 11е <31 и уа! 61 у 405 тКг 11е 61 у 61 у 61 у 410 ТЬг Не Геи 61 и Рго 415 61 п
61у А1а МеХ геи 61 и Мех Геи 61 у Уа! Агд 61 у Рго ΗΊ5 Не 61 и ТКг
420 425 430
РГО 61 у А1а АЗП А1 а 61 η 61 η ьеи А1а Агд 11е 11е А1а 5ег 61 у Уа1
435 440 445
геи А1а А1а 61 и геи зег геи суз зег А1а ьеи а! а Д1а С1у Н15 Геи
450 455 460
Уа1 61 η Зег Н1 5 Мех ТНг НТ 5 Азп Агд 5ег 61 п А1 а Рго ТЬг Рго А1а
465 470 475 480
ьуз 6ΐη зег 61 п А1а А5р геи 61 п Агд Геи 61 п АЗП б!у Зег АЗП 11е
485 490 495
суз 11е дгд зег
500 <210> 47 <211> 551 <212> ϋΝΑ <213> ΑΓΐΊίιοδΙ <220>
<223> Υ. 11ро!уХтса <400> 47
ххсхадасас ааааахдддх ддадссаХдс адасссХсдс ХдсХаХссХд аХсдХссХсд 60
дхасадхдсх сдсхахддад хххдхсдсхх ддхсххсхса хаадхахахс ахдсахддсх 120
хсддахдддд ахддсахада дассахсасд адссссахда дддахххсхх дадаадаахд 180
асХХаХасдс саХсдХХддс дсХдсссХсХ сдаХасХсаХ дХХХдсссХс ддсХсХссса 240
хдахсахддд сдсхдасдсс хддхддсссд даассхддах сддасхсддх дхссхсххсх 300
ахддхдхсах схахасссхс дхдсасдасд дхсхддхдса ссаасдахдд хххадахддд 360
ХдссХааасд аддХХасдсс ааасдасХсд Хдсаддссса ХаадсХдсас сасдссасса 420
ххддсаадда аддаддсдхс хсаххсддхх хсдхдххсдс ссдадахссс дссдххсхда 480
адсаддадсх хсдадсхсаа сдадаадсад дхахсдссдх дсхдсдадад дсхдхддасд 540
дсХадасдсд х 551
<210> 48 <211> 815 <212> 0ΝΑ <213> Агх-Шста!
<22О>
<223> 5агда55 Зеа <400> 48 ххсхадасас ааааахдасх сдахсхаххх ссхддссххс сассхасхдд сассхссадс 60
- 119 016258
ссхссхдххс ххсххдддхс дсааасдаах хсхсхссхса адсссдаааа ддХсХсдХСс 120
хсдсхддхсх саХХддхгсс дсххддсхдс ххасхсхсдд асххддсххх ХСССХХСССС 180
хссахсааас дадсхддсхх схсахсддхх дхсхсдххсх ссххадахсх ххссхдсаса 240
ссддасхххх хахсдххдсс сахдасдсха хдсасдсххс хсххдххссх дассасссхд 300
дссххаассд ххддаххдда сдхдхсхдхс ххсхсахдха хдсхддасхс хссхасаааа 360
дахдсхдссд ааахсассдх сдасассасс аадссссхда аасадххдаа дасссхдасх 420
ассаасдахд сасХаасаас аахахссхсд асхддхасдх хсасхххахд ддаааххасс 480
хсддахддса асааххдсхх аахсхсхсхх дсдхххддсх сдсхсссасс ххссдхдххх 540
схдасхасхс хдсхсааххс ххссассхдс хссххххсхс хдхссххссх схсахсдхсх 600
ссхссхдхса асхсххссхс дхдддаассх ддсхдссаса ссдасдаддс дсхасхасхс 660
дасссддсдх хассасхсда хсссхдаасх хссасссхдс хсхххссххс дсхдсххдсх 720
ассасХХсдд ххассассдх даасассахд аахсхсссхс хасхссххдд ххссаасххс 780
схааасхссд адааддххсх схсахсхааа сдсдх 815
<210> 49 <211> 29 <212> ΟΝΑ <213> АгГтГтста!
<22О>
<223> Ргттег <400>49 сасасддтас стдгаддгтд ддгьдддтд29 <210>50 <211>45 <212> ϋΝΑ <213> АгГтГтста1 <220>
<223> ргттег <400>50 сасасддаьс ссдтаахх саадааьдаа ьаьададаад адаад45 <210>51 <211>42 <212> ЭМА <213> АгГтГтста!
<220>
<223> Ргттег <400> 51 сасасддатс сасаьсааса агддсагсгд ссасссЫхс сс42 <210>52 <211>31 <212> ΡΝΑ <213> ΑΓΐτГт ста1 <220>
- 120 016258 <223> Рптег <400>52 сасасддахс саадтдстда сдсддаасТХ д <210>53 <211>37 <212> ЭМА <213> АгТ1Г1С1а1 <220>
<223> рттег <400>53 сасассдХсГ саааТдасса аТГТссТдаг сдтхдхс <210>54 <211>29 <212> ΟΝΑ <213> АгХПЧста!
<220>
<223> Ргттег <400> 54 сасасадахс хсасдхдсдс хссхдсдсс <210> 55 <211> 32 <212> ΟΝΑ <213> АгХ1Р1ста1 <220>
<223> рттег <400> 55 сасасссХад дссаХдадсд сасахдсссх дс <210> 56 <211> 30 <212> РИА <213> АгХтТтста!
<220>
<223> Рптег <400> 56 сасасаадсХ ХХсаХдсддХ дХсссссХХд <210> 57 <211> 14 <212> ΟΝΑ <213> АгхтЫста!
<220>
<223> Рптег <400> 57 ааХХсдсддс сдсх
<210> 58 <211> 10 <212> ΟΝΑ
- 121 016258 <213> АгХтНста!
<220>
<223> Ргтгпег <400>58 адсддссдсд10 <210>59 <211> 23 <212> ϋΝΑ <213> АгХтНста!
<22О>
<22 3> Ргттег <400> 59 ссХХсХадХс дХасдгадгс аде 23 <210> 60 <211> 25 <212> ϋΝΑ <213> АгХтНста!
<220>
<223> Рттег <400>60 ссасхдахсх адаахсхсхх хехдд25 <21(Ъ«1 <211>24 <212> ϋΝΑ <213> лт’Нста!
<220>
<223> Рп'тег <400> 61 ддсхсаххдс дсахдсхаас ахсд 24 <210> 62 <211> 25 <212> ϋΝΑ <213> АгХ1Т1ста1 <220>
<223> Ргттег <400>62 сдасдаХдсХ ахдадеххех адасд25 <210>63 <211>34 <212> ϋΝΑ <213> АГ11Хпс1а1 <220>
<223> Рглтег <400> 63 сасасддаХс сХаХааХдсс ххссдсаасд ассд 34
- 122 016258 <210> 64 <211> 35 <212> ϋΝΑ <213> АгТИМста!
<220>
<223> РГ1тег <400>64 сасасасьад тгааатгтдд ассьсаасас дассс35 <210>65 <211> 40 <212> ОМА <213> ΑΓΐΉίσϊβΙ <220>
<223> Рп’тег <400>65 сасасддахс саахахааа! дхсхдсдаад адсаХссХсд40 <210> 66 <211>34 <212> ϋΝΑ <213> ΑΓΧίίΐχίαΊ <220>
<22 3> Ргттег <400>66 сасасдсаХд сххаадсххд даасХссасс дсас34 <210>67 <211>47 <212> ϋΝΑ <213> ΑΓΐιίιείβΙ <220>
<223> Ргттег <400> 67 сасасддахс сааХХХХсаа аааХХсХХас хххххххххд даХддас 47 <210> 68 <211> 41 <212> ϋΝΑ <213> АгхШста!
<220>
<223> Ргттег <400> 68 сасасддахс сХХХХХХсХс сХХдасдХХа аадхахадад д41 <210>69 <211>38 <212> ΟΝΑ <213> АШ'Е1ста1 <220>
<223> Рп'тег <400> 69
- 123 016258
сасасдадсХ сааааа1дда саахсаддсх асасадад 38
<210> 70
<211> 42
<212> ϋΝΑ
<213> дгхт-Гтоа!
<220>
<223> Ргятег
<400> 70
сасасссгад дхсасххххс ххсаахддхх схсххдааах хд 42
<210> 71
<211> 46
<212> ЭКА
<213> АгН Лся‘а1
<220^
<223> Рптег
<400> 71
сасасдадсх сддаахаххс аасхдххххх ьххгахсахд ххдахд 46
<210> 72
<211> 41
<212> ϋΝΑ
<213> АггН1*с1а1
<220>
<223> Рптег
<400> 72
сасасддаТс сттсттдааа аХаХдсасХс хахахсххха 9 41
<210> 73
<211> 43
<212> ϋΝΑ
<213> ΑγΧίϊί ста!
<220>
<223> Рптег
<400> 73
сасасдсхад сгасаааахд ххдхсасхса аасдсахадс аас 43
<210> 74
<211> 38
<212> 0ΝΑ
<213> АгНТпста!
<220>
<223> Рптег
<400> 74
сасасдТсда стгаатдагс хсддхахасд ададдаас 38
<210> 75
<211> 1124
<212> РКТ
<213> А5регд111и5 гпдег
<400> 75
- 124 016258
мет А1а 1 5ег Уа1 Ьеи 11е Агд Агд Ьу5 РНе 61у ТНг 61и 61 у 61у 15 Зег
5 10
Азр А1а 61 и Рго Зег Тгр Ьеи Ьу5 Агд 61 п Уа1 ТНг 61 у Су5 Ьеи 61 п
20 25 30
Зег 11е 5ег 35 Агд Агд А1а Суз И е 40 НТ 5 РГО И е НТ 5 тНг 45 Не Уа1 Уа1
11е А1а Ьеи Ьеи А1а Зег ТНг ТНг Туг Уа1 61у Ьеи Ьеи 61 и 61у 5ег
50 55 60
Ьеи РНе Азр Зег РНе Агд Азп 5ег А5П А5П Уа1 А1а 61 у Нтз Уа1 Азр
65 70 75 80
Уа1 Азр Зег Ьеи Ьеи 85 Ьеи 61 у Азп Агд Зег 90 Ьеи Агд Ьеи 61 у 61 и 95 61у
ТНг 5ег Тгр ьуз Тгр 61 η Уа1 61 и Азр Зег Ьеи Азп 61 п Азр Аэр 61 п
100 105 110
Ьуз Уа1 61 у АЗП Рго 61 и Ьеи Ьуз Агд б1и Уа1 Азр 61 п Нтз Ьеи А1а
115 120 125
Ьеи ТНг ТНг Ьеи Пе РНе Рго Азр Зег 11 е Зег ьуз Зег А1а Зег ТНг
130 135 140
А1а Рго А1а А1а А5р А1а Ьеи Рго Уа1 Рго А1а Азп А1а Зег А1 а 61 п
145 150 155 160
Ьеи Ьеи Рго Нтз ТНг Рго АЗП ьеи рНе Зег Рго РНе зег Н1 5 А5р Зег
165 170 175
Зег Ьеи Уа1 РНе ТНг Ьеи Рго РНе Азр 61 п уа! РГО 61 п рНе Ьеи Агд
180 185 190
А1а Уа1 61 η 61 и ьеи Рго Азр Рго ТНг Ьеи 61 и Азр Азр 61 и 61 у 61 и
195 200 205
61 η Ьуз 210 Агд Тгр 11е МеТ Агд 215 А1а ТНг Агд 61 у Рго 220 Уа1 Зег 61 у Рго
АЗП 61 у ТНг 11е Зег Зег Тгр Ьеи зег Азр А1а Тгр 5ег Зег РНе Уа1
225 230 235 240
Азр Ьеи 11е Ьуз Нтз А1а 61 и ТНг Пе Азр 11 е 11 е И е МеТ ТНг Ьеи
245 250 255
61 у Туг ьеи А1а МеТ Туг Ьеи Зег РНе А1а 5ег Ьеи 61 и РНе 5ег мет
260 265 270
- 125 016258
ьуз 61 η Ьеи 275 61у Зег ьуз РНе Тгр 280 Ьеи А1а ТНг ТНг Уа1 285 Ьеи РНе Зег
61 у Мет РНе А1а РНе ьеи РНе 61 у Ьеи Ьеи Уа1 ТНг ТНг Ьуз РНе 61у
290 295 300
Уа! Рго Ьеи Азп ьеи ьеи Ьеи ьеи Зег 61 и 61 у ьеи РГО 61 и ьеи Уа!
305 310 315 320
Тпг Тпг Не 61 у РНе 61 и Ьуз Рго Не Не Ьеи ТНг Агд А1а Уа1 Ьеи
325 330 335
Бег А1 а Бег Не Азр ьуз Ьуз Агд 61 п 61 у Бег А1а ТНг Бег ТНг РГО
340 345 350
Бег Бег 11 е 61 п А5Р зег 11 е 61η ТНг А1а 11е Агд 61 и 61 η 61 у РНе
355 360 365
61 и Не Не Агд А5Р туг суз Не 61 и Не Бег Не Ьеи 11е А1а 61 у
370 375 380
А1а А1а Бег 61 у Уа1 61 п 61 у 61 у ьеи 61 п 61п РНе Су5 РНе Ьеи А1а
385 390 395 400
А1а Тгр Не Ьеи РНе РНе АЗр Суз Не Ьеи Ьеи РНе ТНг РНе Туг ТНг
405 410 415
ТНг Не Ьеи суз Не ьуз Ьеи 61 и 11 е тНг Агд 11 е Агд Агд НТ 5 Уа1
420 425 430
тНг ьеи Ага ЬУ5 А1 а Ьеи 61и 61 и Азр 61 у ТНг ТНг 61 п Бег Уа1 А1а
435 440 445
61 и ьуз Уа1 А1а Бег Бег Азп Азр Тгр РНе 61 у А1а 61 у Бег Азр Азп
450 455 460
Бег Азр А1а Азр А5р А1а Зег Уа1 РНе 61 у Агд Ьуз Не Ьуз 5ег АЗП
465 470 475 480
АЗП Уа1 Агд Агд РНе Ьуз РНе Ьеи МеТ Уа1 61 у 61 у РНе Уа1 ьеи Уа1
485 490 495
АЗП Уа! Уа1 АЗП мет ТНг А1а 11е РГО рНе Агд Азп Зег Зег Ьеи 5ег
500 505 510
Рго Ьеи Суз Азп Уа! РНе Зег Рго ТНг Рго Не Азр Рго рНе ьуз Уа1
515 520 525
А1а 61 и Азп 61 у Ьеи Азр А1а ТНг Туг Уа1 Бег А1а ьуз 5ег 61 п ьуз
530 535 540
ьеи 61 и ьеи Уа! ТНг Уа1 Уа! Рго Рго Не ьуз Уа! ьуз Ьеи 61 и туг
- 126 016258
545 550 555 560
Рго Бег Уа! Нтз Туг А1а 565 Ьуз Ьеи 61 у 61 и Бег 61п 570 Бег 11е б1и 575 т1е
С! и туг ТЬг Авр 61 п Ьеи Ьеи А5р А1а Уа1 61у 61у НТ 5 Уа1 Ьеи АЗП
580 585 590
61 у Уа! ьеи ьуз Бег Не 61 и Азр Рго Уа1 11 е Бег ьуз Тгр Не тпг
595 600 605
А1а Уа1 Ьеи ТКг Не Зег Не Уа1 Ьеи АЗП 61 у туг ьеи Ρίΐβ Азп А1а
610 615 620
А1а Агд Тгр Бег 11 е ЬУЗ 61 и Рго 61 п А1а А1а Рго А1а РГО ьуз 61 и
625 630 635 640
РГО А1а ьуз Рго ьуз Уа1 Туг Рго Ьуз ТНг Азр Ьеи А5П А1а 61у Рго
645 650 655
ЬУЗ Агд Бег МеТ 61 и 61 и Суз 61 и А1а мет ьеи ьуз А1а ьуз ьуз А1а
660 665 670
А1а Туг Ьеи Бег Азр 61 и Ьеи ьеи Не 61 и ьеи Бег ьеи Бег 61 у Ьуз
675 680 685
ьеи Рго 61 у туг А1а ьеи Ьеи Ьуз Бег Ьеи 61 и АЗП 61 и 61 и ьеи мет
690 695 700
Бег Агд Уа1 Азр А1 а РЬе Ьеи Агд А1а уа1 ьуз ьеи Агд Агд А1а Уа!
705 710 715 720
Уа1 Бег Агд тпг Рго А1а ТНг Бег А1а уа1 Ткг Бег Бег ьеи 61 и тЬг
725 730 735
Бег Ьуз ьеи Рго Туг ьуз АЗр Туг Азп Туг А1а ьеи Уа1 нтз 61 у А1а
740 745 750
Суз Суз 61 и АЗП уа1 11е 61у Тпг ьеи рго Ьеи Рго Ьеи 61у Уа1 А1 а
755 760 765
е!у РГО Ьеи Уа1 ТНг Азр 61у 61 п Бег Туг РЬе 11е Рго мет А1а ТНг
770 775 780
11е 61 и 61 у Уа! ьеи Уа1 А1а Бег А1а Бег Агд 61 у А1а ьуз А1а Не
785 790 795 800
АЗП А1а б!у б!у 61 у А1а Уа1 Не Уа1 Ьеи тНг 61 у Азр б1у мет тЬг
805 810 815
Агд 61 у рго Суз Уа1 б1у РНе РГО тКг Ьеи А1а Агд А1а А1 а А1а А1а
820 825 830
- 127 016258
ьуз Уа1 тгр 835 сей Азр Бег 61 и 61 и 61 у ьуз 840 Бег Уа1 МеЕ 845 ТКг А1а А1а
РНе Азп 850 Бег тКг Бег Агд РНе 855 А1а Агд ьеи 61 п НТ 5 860 ьеи ьуз ТНг А1а
Ьеи А1а 61 у тНг Туг Ьеи Туг Не Агд рНе ьуз тНг тНг тНг б1у Азр
865 870 875 880
А1а меЕ 61 у меЕ АЗП меЕ Не Бег ьуз 61 у Уа1 61 и Ьуз А1а ьеи НТ 5
885 890 895
Уа1 Мег А1а тНг 61 и Суз 61 у РНе АЗР Азр меь А1а ТНг Не Бег Уа1
900 905 910
Бег 61 у Азп РНе суз ТНг Азр ьуз ьуз А1а А1а А1а Ьеи А5П Тгр Не
915 920 925
Азр 61 у 930 Агд 61 у Ьуз Бег Уа1 935 Уа1 А1 а 61 и А1а И е 940 11е Рго 61у Аэр
Уа1 Уа1 Агд АЭП Уа1 Ьеи ьуз Бег Азр Уа1 Азр А1а Ьеи Уа1 61 и Ьеи
945 950 955 960
Азп Тпг Бег ьуз Азп ьеи 11е 61 у Бег А1а МеЕ А1а 61 у Бег ьеи 61 у
965 970 975
61 у РНе А5П А1а НТЗ А1а Бег А5П 11 е Уа1 ТНг А1а Не РЬе Ьеи А1а
980 985 990
ТНг б1у Азр Рго л1а 61η Азп Уа1 б1и Бег Бег Бег суз 11е тНг тпг 995 1000 1005
МеЕ Ьуз 1010 А5П тНг Азп 61у Азп 1015 ьеи 61 η тНг А1а Уа1 1020 Бег МеЕ Рго
Бег 11 е б1и Уа1 61 у ТНг Не 61 у 61 у 61 у тНг Не ьеи 61и А1а
1025 1030 1035
61 п 61 у А1а МеЕ Не Ьеи Аэр 11е Ьеи 61 у уа! Агд 61 у Бег нтз
1040 1045 1050
Рго ТНг АЗП Рго 61 у Азр А5П А1а Агд 61 п Ьеи А1а Агд Не Уа1
1055 1060 1065
А1а А1а А1а Уа! Ьеи Д1а 61 у рНе ьеи Бег Ьеи Суэ Бег А1а Ьеи
1070 1075 1080
А1а А1а С1у НТЗ ьеи Уа1 Агд А1а НТ 5 меь А1а НТ 5 Азп Агд Бег
1085 1090 1095
- 128 016258
А1а А1а рго тНг Агд 5ег А1а тНг рго Уа1 зег А1а А1а Уа! б!у 1100 11051110
А1а Тпг Агд 61у Ьеи 5ег Мех ТНг 5ег Зег Агд 11151120 <210>76 <211> 1210 <212> РКТ <213> 6тЬЬеге11а геае <400>76
мех 1 А1а зег 11 е ьеи 5 ьеи РГО 1_У5 ьуз РНе 10 Агд С1у 61 и тНг а! а 15 РГО
А1 а 61 и ьуз тНг 20 ТНг Рго 5ег тгр А1а 25 5ег ьуз Агд Ьеи ТНг 30 Рго 11 е
А1а 61 η РНе Не Зег Агд ьеи А1а Суз Зег НТЗ РГО 11 е НТЗ ТНг Уа!
35 40 45
Уа1 Ьеи 50 Уа1 А1а Уа1 ьеи А1а 55 Зег ТНг Зег Туг Уа1 60 61у ьеи Ьеи 61 п
61 и Зег РНе РНе Зег тНг Азр ьеи Рго ТНг Уа1 61 у ьуз А1а Азр тгр
65 70 75 80
Зег Зег Ьеи Уа1 61 и 61 у Зег Агд Уа1 Ьеи Агд А1а 61 у Рго 61 и ТНг
85 90 95
А1а Тгр Азп Тгр ьуз А1а 11 е 61 и 61 π Азр Зег Не 61 η Нт 5 А1а б!у
100 105 110
А1а Азр А1 а Азр НТ 5 Ьеи А1а ьеи Ьеи ТНг Ьеи Уа1 РНе Рго Азр ТНг
115 120 125
Н15 Зег А1а 61 и 5ег 5ег 5ег ТНг А1а Рго Агд Зег Зег НТЗ Уа1 Рго
130 135 140
Уа1 рго 61 п АЗП ьеи Зег 11е тНг РГО ьеи Рго Зег ТНг ьуз Азп Зег
145 150 155 160
РНе ТНг А1а Туг 5ег 61 п Азр 5ег Не ьеи А1а Туг Зег Ьеи Рго туг
165 170 175
А1а 61 и 61 у рго Азр Уа! уа! 61 п тгр А1а Азп А5П А1а Тгр ТНг 61 и
180 185 190
РНе Ьеи Азр Ьеи Ьеи ьуз А5П А1а 61 и ТНг ьеи АЗр 11е Уа! 11 е мет
195 200 205
РНе Ьеи 61 у Туг тНг А1а мех НТ 5 ьеи ТНг РНе Уа1 зег ьеи РНе Ьеи
- 129 016258
210 215 220
Бег Ме! Агд ьуз 11 е 61у Бег Ьуз РНе Тгр Ьеи 61 у Пе Суз ТНг ьеи
225 230 235 240
РНе Бег Бег Уа1 РНе А1 а рНе Ьеи РНе 61 у ьеи Не Уа1 ТНг ТНг Ьуз
245 250 255
ьеи б1у Уа! РГО 11 е Бег Уа1 Не Ьеи Ьеи Бег 61 и 61 у Ьеи РГО РНе
260 265 270
Ьеи Уа! Уа1 ТНг Пе 61 у РНе 61 и ьуз Азп 11 е Уа1 Ьеи ТНг лгд А1а
275 280 285
Уа! Ме! 290 Бег НТ5 А1а Пе 61 и 295 Нтз Агд Агд 61 п Пе 300 61 п Азп Бег ьуз
Бег 61 у ьуз 61 у Бег Рго 61 и Агд Бег ме! 61 п АЗП Уа1 11 е 61 п Туг
305 310 315 320
А1а Уа! 61 η Бег А1а 11 е ьуз 61 и ьуз 61 у РНе 6! и Пе ме! Агд Аэр
325 330 335
туг А1а Пе 61 и Пе Уа! Не ьеи А1а ьеи 61 у А1а А1а Бег 61 у Уа1
340 345 350
61 η <31 у 61 у Ьеи 61 η Нтз РНе суз РНе ьеи А1а А1а Тгр ТНг ьеи РНе
355 360 365
РНе Азр ₽Не Пе Ьеи Ьеи РНе ТНг РНе Туг тНг А1 а Пе Ьеи Бег Пе
370 375 380
ьуз ьеи 61 и Не А5П Агд 11 е Ьуз Агд НТЗ Уа1 Азр Ме! Агд Ме! А1а
385 390 395 400
ьеи 61 и Азр Азр 61 у 405 Уа! Бег Агд Агд Уа1 410 А1а 61 и Азп Уа! А1 а 415 ьуз
Бег А5р 61 у Аэр 420 Тгр ТНг Агд Уа1 ьуз 425 61 у Азр Бег Бег Ьеи 430 РНе 61 у
Агд ьуз Бег Бег Бег Уа! Рго тЬг РНе ьуз Уа1 Ьеи ме! Не ьеи 61 у
435 440 445
РНе Пе РНе Уа1 АЗП Не Уа1 Азп Пе суз Бег Не РГО РНе Агд Азп
450 455 460
РГО Агд Бег Ьеи Зег Тпг Не Агд тНг Тгр А1а Бег Бег Ьеи 61 у 61 у
465 470 475 480
Уа1 уа! А1а РГО ьеи Бег Уа1 Азр РГО РНе ьуз уа! А1а Бег АЗП б!у
485 490 495
- 130 016258
Ьеи Азр А1а 11е Ьеи 500 А1а А1а А1а Ьуз Бег Азп Азп Агд Рго тНг Ьеи
505 510
Уа1 ТНг Уа1 Ьеи ТНг Рго Не ьуз Туг 61 и Ьеи 61 и Туг рго Бег Пе
515 520 525
нтз Туг А1а Ьеи 61 у Бег А1а Не АЗП 61 у А5П АЗП А1а 61 и Туг ТНг
530 535 540
Азр А1а рНе Нт 5 Нтз нтз РНе 61 п 61 у Туг 61 у Уа1 61 у 61 у Агд мех
545 550 555 560
Уа! 61 у 61 у Не ьеи ьуз Бег Ьеи 61 и Азр Рго Уа1 Ьеи Бег суз тгр
565 570 575
Пе Уа1 Не А1а Ьеи А1а Ьеи Бег Уа1 А1а Ьеи Аэп 61 у Туг Ьеи РНе
580 585 590
Азп Уа1 А1а Агд Тгр 61 у Не Ьуз Азр Рго Азп Уа! Рго 61 и Нтз АЗП
595 600 605
11е Азр 610 Агд А5П 61 и ьеи А1а 615 Агд А1а 61 п 61 п РНе 620 Азп Аэр ТНг 61 у
Бег А1а ТНг Ьеи Рго ьеи 61 у 61 и туг Уа1 Рго Рго ТНг Рго Мех Агд
625 630 635 640
ТНг 61 и Рго Бег ТНг Рго А1а Не тНг Азр Азр 61 и А1а 61 и 61 у Ьеи
645 650 655
61 п Мег тНг ьуз 660 А1а Агд Бег Азр суз 665 Ьеи Рго А5П Агд Рго 670 Азп 61 и
61 и Ьеи 61 и 675 Ьуз ьеи ьеи А1а 61 и 680 ьуз Агд уа! суз 61 и 685 Мех Бег Азр
61 и 61 и 690 Ьеи Уа! Бег Ьеи Бег 695 Мех Агд суз суз Пе 700 Рго 61 у Туг А1а
Ьеи ьеи Ьуз ТНг Ьеи 61 у АЗр РНе ТНг Агд А1а Уа1 Ьуз 11 е Агд Агд
705 710 715 720
Бег 11 е 11 е А1а Агд Азп Агд А1а ТНг Бег Азр ьеи ТНг Нт 5 Бег Ьеи
725 730 735
61 и Агд Бег Ьуз ьеи РГО РНе 61 и суз Туг Азп Тгр 61 и Агд Уа! РНе
740 745 750
суз А1а суз суз 61 и А5П Уа1 11 е б1у туг мех Рго ьеи рго уа! 61 у
755 760 765
- 131 016258
Уа! А1а 61 у Агд 770 Ьеи Уа1 ТНг 775 Аэр 61 у 61п 5ег туг 780 РЬе 11е РГО Мех
А1а ТЬг ТЬг 61 и 61 у Уа! Ьеи Уа1 А1а 5ег А1а зег Агд 61 у Суз ьуз
785 790 795 800
А1а 11е АЗП А1а б!у б!у б!у А1а Уа1 ТЬг Уа1 ьеи тЬг А1а А5р 61 у
805 810 815
Мех тЬг Агд 61 у Рго Су 5 Уа! А1 а РЬе 61 и ТЬг ьеи 61 и Агд А1а 61 у
820 825 830
А1а А1а Ьуз ьеи Тгр 11 е Аэр Зег 61 и А1а 61 у зег А5Р И е Мех ьуз
835 840 845
Ьуз А1а РЬе Азп 5ег тЬг 5ег Агд РЬе А1а Агд Ьеи 61 п 5ег мех ьуэ
850 855 860
ТЬг А1а ьеи А1а 61у ТЬг АЗП Ьеи Туг 11е Агд РЬе ьуз ТЬг ТЬг ТЬг
865 870 875 880
61у Азр А1а Мех 61 у Мех Азп Не Не Зег ЬУ5 61 у Уа1 61 и Нтз А1а
885 890 895
ьеи зег Уа1 мех зег АЗП 61 и А1а 61 у РЬе АЗР Азр мех 61 п 11 е уа!
900 905 910
зег Уа1 эег 61у АЗП туг суз ТЬг Азр ьуз ьуз А1а А1а А1 а Ьеи Азп
915 920 925
Тгр 11 е Аэр 61 у Агд 61 у ьуз 61 у Уа1 уа! А1а 61 и А1а 11 е 11 е рго
930 935 940
61у Аэр Уа1 Уа1 Агд Зег Уа! ьеи ьуз эег Аэр Уа1 АЗр А1а ьеи Уа1
945 950 955 960
61и Ьеи Аэп т1е Зег Ьуз Азп 11е 11 е 61 у Зег А1а Мех А1 а 61 у Зег
965 970 975
Уа1 61 у 61 у рЬе АЗП А1а НТЗ А1а А1а АЗП 11е уа! А1а А1а 11 е РЬе
980 985 990
ьеи А1а ТЬг 61 у 61п Аэр Рго А1а 61 п Уа! Уа! [ 61 и Зег А1а Аэп С'
995 1000 1005
11е тЬг ьеи мех ьуэ Азл ьеи Агд С1у А1а ьеи 61 η тЬг зег Уа! 1010 1015 1020
5ег Мех Рго Зег Ьеи б!и Уа1 61у ТЬг Ьеи 61у 61у 61у ТЬг 11е
1025 1030 1035
- 132 016258
ьеи 61 и 1040 Рго 61η Бег А1 а Мет 1045 Ьеи Азр ьеи ьеи 61 у 1050 Уа1 лгд 61 у
Бег Н1з РГО ТЬг АЗП Рго 61 у Азр АЗП Бег Агд Агд Ьеи А1а Агд
1055 1060 1065
Не 11 е 61 у А1а Бег Уа! Ьеи А1а 61 у 61 и ьеи Бег Ьеи Суз Бег
1070 1075 1080
А1а Ьеи А1а А1а 61у Нтз Ьеи Уа1 Агд А1а нтз мет 61 η нтз АЗП
1085 1090 1095
Агд Бег А1а А1а Рго Бег Агд Бег ТЬг ТЬг Рго А1а Рго Мет ТЬг
1100 1105 1110
Рго уа! Агд Бег РЬе Азр ТЬг ьуз Уа1 Агд суз 61 п Рго АЗП Азп
1115 1120 1125
ьуз Азр Не Агд А5П Не Ьеи Ьеи тЬг 61 η Нтз Рго Бег ьуз Рго
изо 1135 1140
тЬг 11 е тЬг туг Бег ьуэ Агд Уа1 11е ьуз Бег ТЬг Не нтз ьеи
1145 1150 1155
А5П рго Ьеи Не Ьеи А1а Ьеи РЬе Азр АЗП Бег Уа1 61 η тЬг Агд
1160 1165 1170
Агр уа! 61 η ьеи 61 у А$р 61 η Уа1 Бег ТЬг Агд 61 у тЬг Ьеи АЗр
1175 1180 1185
А1а Уа1 61 у 61 у РГО 61 η 61 у 61 у 61 у уа! А1а А1а 61 у 61 у Уа!
1190 1195 1200
А1а Агд Агд Уа1 Уа1 61 у Бег
12051210 <210>77 <211>1173 <212> РКТ <213> иеигозрога сгазга <400>77
МеТ Не А1а Бег Бег Ьеи Ьеи Рго Бег Ьуз РЬе Агд 61 у 61 и 61 п Рго
1 5 10 15
А1а ТНг 61 п А1а А1а ТЬг Рго Бег Тгр 11 е Азп ьуз Ьуз уа! ТЬг Рго
20 25 30
РГО Ьеи 61 п Ьуз Ьеи Бег Ьуз Не ТЬг Бег Бег АЗП Рго 11 е нтз ТЬг
35 40 45
Не Уа1 11 е Уа! А1а Ьеи ьеи А1а Бег Бег Бег Туг Не 61 у Ьеи Ьеи
50 55 60
- 133 016258
61η азп зег 65 Ьеи РЬе азп Уа1 70 ТЬг Агд Зег Уа1 Агд 75 Ьуз А1а 61 и тгр 80
6ΐιι 5ег ьеи 61 η А1а 85 61 у Зег Агд Мех ьеи 90 Агд А1а 61 у А1 а Азп 95 ТЬг
61 и тгр АЗП Тгр 61 п АЗП нт 5 АЗР РГО 61 и а! а РГО Уа1 Рго А1 а АЗП
100 105 110
А1а АЗП НТЗ ьеи А1а ьеи Ьеи ТЬг Ьеи Уа! рКе Рго Азр ТЬг А1а 61 и
115 120 125
зег 61 у Рго Уа! Уа1 А1а 61 п ТЬг Азп тЬг Уа! РГО ьеи Рго Зег Азп
130 135 140
ьеи 5ег тЬг тЬг РГО Ьеи РГО зег тЬг А1а Не Зег РЬе тЬг туг зег
145 150 155 160
61 η Азр 5ег А1а Ьеи Д1а РЬе 5ег ьеи РГО туг зег 61 п А1а Рго 61 и
165 170 175
рЬе ьеи А1а АЗП А1а 61 η 61 и 11 е РГО АЗП а! а ма1 Зег Зег 61 п 61 и
180 185 190
тЬг 11 е 61 и тНг 61 и Агд 61 у нтз 61 и ьуз ьуз мех тгр 11 е мех ьуз
195 200 205
А1а А1а 210 Агд Уа1 61 п тЬг Агд 215 Зег Зег ТЬг Уа! ьуз 220 Тгр Уа1 61 п АЗП
А1а Тгр Уа1 61 и РЬе тЬг А5р Ьеи Ьеи Агд Α5Π А1а 61 и ТЬг Ьеи Аэр
225 230 235 240
Не 11 е Не мег А1а Ьеи 61 у Туг Не Зег мег Нтз Ьеи ТЬг РЬе Уа1
245 250 255
Зег ьеи рЬе ьеи 260 Зег Мех Агд Агд мех 265 61 у зег АЗП РЬе Тгр 270 ьеи А1а
тЬг 5ег \/а1 Не РЬе зег зег 11е РЬе А1а рпе Ьеи РЬе 61 у ьеи ьеи
275 280 285
Уа1 тпг тпг ьуз ьеи 61 у Уа1 РГО Мех АЗП Μθΐ Уа1 ьеи Ьеи 5ег 61 и
290 295 300
61 у Ьеи Рго РНе Ьеи Уа! Уа1 ТЬг Не 61 у Рпе 61 и ьуз Азп Не Уа1
305 310 315 320
ьеи тпг Агд А1а Уа1 ьеи Зег НТ 5 А1а 11е А5р нтз Агд Агд РГО ТЬг
325 330 335
- 134 016258
61 и Ьуз Бег 61 у ьуз рго Бег ьуз 61п А1а Азр 345 Бег А1 а НТЗ 350 Бег Не
340
6ΐη Бег А1а 355 11 е 61 п Ьеи А1а 11 е 360 ьуз 61и ьуз 61 у РЬе 365 А5р 11 е Уа1
ьуз Азр туг А1а 11е 61 и А1а 61 у 11е ьеи уа! ьеи б1у А1а А1а Бег
370 375 380
61 у Уа1 61 п 61 у 61 у ьеи 61 п 61 п рНе Суз рНе ьеи А1а А1а тгр И е
385 390 395 400
ьеи РНе РНе Азр суз Не Ьеи ьеи РНе Бег РНе туг тНг А1а И е ьеи
405 410 415
суз 11 е ьуз ьеи РНе 11е АЗП Агд 11е Ьуз Агд Н1з Уа1 61 п Μβΐ Агд
420 425 430
ьуз А1а ьеи 61 и 61 и А5р 61 у уа1 Бег Агд лгд Уа1 А1а 61 и ьуз Уа1
435 440 445
А1а 61 η Бег Азп АЗр тгр Рго Агд А1а Азр 61 у Ьуз Азр 61 п Рго 61 у
450 455 460
ТНг ТНг 11 е РНе 61 у Агд 61 п ьеи Ьуз Бег тНг НТЗ Не Рго ьуз РНе
465 470 475 480
ьуз Уа1 Μβΐ Μβΐ Уа1 тНг 61 у рНе уа1 ьеи 11е АЗП уа1 ьеи АЗП ьеи
485 490 495
Су5 ТНг 11е РГО рНе Агд Бег А1а Азп Бег 11 е Бег Бег Не Бег Зег
500 505 510
Тгр А1а Агд 61 у Ьеи 61 у 61 у Уа1 Уа1 ТКг Рго Рго Рго Уа! Азр Рго
515 520 525
РНе Ьуэ Уа1 А1а Бег Азп 61 у Ьеи Азр 11 е Не Ьеи 61и А1а А1а Агд
530 535 540
А1а дзр 61 у Агд 61 и ТНг тНг Уа1 ТНг Уа1 Ьеи ТНг рго 11е Агд туг
545 550 555 560
61 и Ьеи 61 и туг Рго Бег тНг нт 3 туг Азр ьеи Рго 61 п ьуз Бег А1а
565 570 575
61 и Уа1 61 и 61 у 61 у Азр туг А1а АЗП ьеи 61 у 61 у Туг 61 у 61 у Агд
580 585 590
МеЬ Уа1 61у Бег И е ьеи ьуз Бег Ьеи 61 и Азр Рго ТЬг Ьеи Бег ьуз
595 600 605
- 135 016258
тгр И е Уа1 Уа1 610 А1а Ьеи А1а ьеи 615 5ег уа1 А1а Ьеи 620 АЗП 61 у Туг Ьеи
РНе Азп А1а А1а Агд Тгр 61 у 11 е ьуз Азр Рго Азп уа1 Рго Азр ΗΊ3
625 630 635 640
Рго 11 е Азп Рго ьуз 61 и ьеи Азр 61 и А1а 61 п ьуз РНе Азп Азр ТНг
645 650 655
А1а Зег А1а ТНг Ьеи Рго Ьеи 61 у 61 и Туг Мех ьуз Рго ТНг А1а Рго
660 665 670
Зег Зег Рго Уа! А1а Рго Ьеи тНг Рго Зег Зег ТНг А5Р Азр 61 и АЗП
675 680 685
Азр А1а 61 п А1а ЬУЗ б1и А$П Агд А1а уа1 ТНг Ьеи А1а А1а 61 π Агд
690 695 700
А1а ТНг ТНг Не Агд 5ег 61 п 61 у 61 и Ьеи Азр ьуз Мех ТНг А1а 61 и
705 710 715 720
Ьуз Агд ТНг Н13 61 и Ьеи А5П Азр 61 и 61и тпг Уа1 Н15 Ьеи Зег Ьеи
725 730 735
ьуз 61 у ьуз Не Рго 61 у Туг А1а ьеи 61 и ьуз тНг ьеи ьуз Азр РНе
740 745 750
ТНг Агд А1а Уа1 ьуз Уа1 Агд Агд Зег Не Не Зег Агд ТНг ьуз А1а
755 760 765
тНг тНг 770 61 и Ьеи тНг АЗП 11 е 775 Ьеи Азр Агд 5ег ьуз 780 Ьеи Рго Туг 61 п
АЗП Уа1 Азп Тгр А1а 61 п Уа1 Н15 61 у А1а Суз Суз б1и А5П Уа1 Не
785 790 795 800
61 у Туг мех Рго ьеи Рго Уа1 61 у Уа! А1а 61 у Рго Ьеи Уа1 тНг АЗр
805 810 815
61 у 61 п Зег РНе рНе Уа1 Рго мех А1а ТНг тНг 61 и 61 у Уа1 Ьеи Уа1
820 825 830
А1а Зег ТНг 5ег Агд 61 у суз Ьуз А1а Не Азп Зег 61 у 61у 61у А1а
835 840 845
Уа1 тНг 850 Уа1 Ьеи Ткг А1 а Азр 855 61у Мех Тпг Агд 61 у 860 Рго суз Уа1 61 п
рНе 61 и ТНг ьеи 61 и Агд А1а 61 у А1а А1а ьуз ьеи тгр ьеи АЗр 5ег
865 870 875 880
61 и ьуз 61 у 61 п Зег Не Мех ьуз ьуз А1 а РНе Аэп Зег ТНг 5ег Агд
- 136 016258
885 890 895
рЬе Агд А1а Ьеи 61 и тНг МеТ 1-У5 тНг А1а мет А1а 61 у ТНг АЗП ьеи
900 905 910
Туг 11е Агд РЬе Ьуз Не тКг тЬг 61 у АБр А1а МеТ 61 у МеТ АБП МеТ
915 920 925
Не 5ег ьуз 61 у Уа1 61 и Η15 А1а Ьеи Зег Уа1 МеТ Туг Азп 61 и 61 у
930 935 940
Рпе 61 и Азр Мет А5П 11е Уа1 Зег Ьеи Зег 61 у Азп туг суз ТЬг Азр
945 950 955 960
ьуз ьуз А1а А1а А1а 11 е АЗП Уа1 И е АБр 61 у АГд 61 у Ьуз Зег Уа1
965 970 975
Уа! А1а 61 и А1а 11е Не Рго А1а Азр Уа1 Уа! ьуз Абп Уа1 ьеи ьуз
980 985 990
тКг Азр Уа1 АБр тЬг Ьеи Уа1 61 и Ьеи Абп Уа1 Абп ЬуБ Азп ТЬг 11е
995 1000 1005
б1у Зег 1010 А1а Мет А1а 61 у Зег 1015 мет б!у б!у рЬе АЗП 1020 А1а НТБ А1а
А1а АБП 11е Уа1 А1а А1а 11 е рЬе Ьеи А1а тЬг 61 у 61 п абр РГО
1025 1030 1035
А1а 61 п уа1 уа1 61 и Зег А1а Абп Суз 11е ТЬг Ьеи МеТ Агд АБП
1040 1045 1050
Ьеи Агд 61 у Азп Ьеи 61 п 11 е Бег Уа1 Зег МеТ Рго Зег Не 61 и
1055 1060 1065
Уа! 61 у ТНг Ьеи 61у 61 у 61 у тЬг 11е ьеи 61 и Рго 61 п Зег А1а
1070 1075 1080
МеТ Ьеи Азр МеТ Ьеи 61 у Уа! Агд 61 у РГО НТ5 рго тНг А5П Рго
1085 1090 1095
61 у 61 и АЗП А1а Агд Агд Ьеи А1а Агд 11е Уа1 А1а А1а А1а Уа!
1100 1105 1110
Ьеи А1а 61 у 61 и ьеи Зег Ьеи Суз Зег А1а Ьеи А1а А1а 61 у Нтз
1115 1120 1125
ьеи Уа! ьуз А1а НТБ Мет А1а ΗΊ3 АБП Агд Зег А1а Рго Рго ТН г
ИЗО 1135 1140
Агд ТНг Бег тЬг рго А1а рго а! а А1а А1а А1а 61 у ьеи ТЬг МеТ
1145 1150 1155
- 137 016258 тЬг 5ег 5ег Азп Рго Азп А1а А1а А1а Уа1 61и Агд зег Агд Агд 1160 11651170 <210>78 <211>1045 <212> РКТ <213> ЗассЬаготусез сегеутзтае <400>78
Мет Зег 1 ьеи Рго ьеи 5 ьуз ТНг Не Уа1 нтз ьеи Уа1 10 ьуз РГО РЬе 15 А1а
Суз ТНг А1а Агд 20 РЬе Бег А1а Агд Туг 25 Рго Не нтз Уа1 Не 30 Уа1 Уа1
А1а Уа1 ьеи ьеи зег А1а А1а А1а туг ьеи зег Уа1 тНг 61η зег туг
35 40 45
ьеи А$П 61 и Тгр ьуз кеи АЗр Зег Азп 61 п Туг Зег ТНг Туг ьеи Зег
50 55 60
11е 65 Ьуз РГО Аэр 61 и кеи 70 РЬе б1и Ьуз суз тНг 75 НТВ Туг Туг Агд Зег 80
Рго Уа1 зег Азр тНг Тгр ьуз ьеи Ьеи Зег Зег ьуз 61 и А1 а А1а Азр
85 90 95
Не Туг тЬг Рго РЬе НТ 5 Туг Туг Ьеи Зег ТНг Не Зег РЬе 61п Зег
100 105 но
ьуз Азр А5П Зег тЬг ТЬг ьеи Рго Зег ьеи Азр Азр Уа1 Н е туг Зег
115 120 125
Уа1 Авр Ηί 5 ТНг Агд Туг Ьеи Ьеи Зег 61 и 61 и РГО Ьуз Не РГО ТЬг
130 135 140
61 и Ьеи Уа1 Зег 61 и А5П 61 у ТНг ьуз Тгр Агд ьеи Агд Азп АЗП Зег
145 150 155 160
Азп рНе 11е Ьеи Азр Ьеи Нтз Азп Пе туг Агд Азп МеТ Уа1 ьуз 61 п
165 170 175
РЬе Зег Αεη ьуз ТЫ Зег 61 и РЬе А5р 61 п РНе Азр Ьеи РЬе Не 11 е
180 185 190
Ьеи А1а А1а Туг Ьеи ТЬг Ьеи Рбе Туг ТЬг Ьеи суз Суз ьеи РЬе Азп
195 200 205
А5р мет Агд СУ 5 Не 61 у Зег ьуз РНе Тгр Ьеи Зег РЬе Зег А1а ьеи
210 215 220
- 138 016258
Бег Азп Бег А1а суб 225 А1а Ьеи 230 Туг Ьеи Бег Ьеи Туг 235 ТНг ТНг нтз Бег 240
Ьеи ьеи ьуз ьуз Рго А1а Бег ьеи Ьеи Бег Ьеи Уа! Не 61 у Ьеи Рго
245 250 255
РНе ТНг Уа1 Уа! 11 е 11 е 61 у 61 и ьуз НТ 5 ьуз Уа1 Агд ьеи А1а А1а
260 265 270
РНе Бег Ьеи 61 п ьуз рНе Нтз Агд Не Бег Не Азр ьуз ьуз 11 е ТНг
275 280 285
Уа1 Бег АЗП Не Не Туг 61 и А1 а МеТ РНе 61 п 61 и 61 у А1а туг Ьеи
290 295 300
Не Агд Азр Туг Ьеи РНе Туг Не Бег Бег РНе Не 61 у суз А1а Не
305 310 315 320
Туг А1а Агд Нт 5 Ьеи Рго 61 у Ьеи Уа1 АЗП РНе суз Не Ьеи Бег ТНг
325 330 335
РНе мет ьеи Уа1 РНе Азр ьеи ьеи ьеи Бег А1а тНг рНе туг Бег А1а
340 345 350
Не Ьеи Бег мет ьуз ьеи РНе Не Азп Не Не Нтз Агд Бег ТНг Уа!
355 360 365
Не Агд 370 61 п ТНг ьеи 61 и б1и 375 Аэр 61 у Уа1 Уа! Рго 380 ТНг ТНг А1а Азр
Не Не Туг ьуз Азр 61 и ТНг А1а Бег 61 и Рго нтз рНе ьеи Агд Бег
385 390 395 400
АЗП Уа1 А1а Не Не Ьеи 61 у Ьуз А1а Бег Уа1 Не 61 у Ьеи Ьеи ьеи
405 410 415
Ьеи Не Азп Ьеи туг Уа1 рНе ТНг Азр Ьуз ьеи АЗП А1а тНг Не ьеи
420 425 430
АЗП тНг Уа1 Туг РНе Азр Бег ТНг Не Туг Бег ьеи РГО АЗП РНе 11 е
435 440 445
АЗП Туг ьуз Азр Не 61 у А5П Ьеи Бег АЗП 61 п уа! Не Не Бег Уа1
450 455 460
Ьеи РГО Ьуз 61 η Туг Туг ТНг Рго Ьеи ьуз 1У5 Туг нтз 61 п 11е 61 и
465 470 475 480
Азр Бег Уа1 ьеи ьеи Не Не Азр Бег Уа1 Бег Азп А1а 11 е Агд Азр
485 490 495
С1п РНе 11 е Бег Ьуз ьеи ьеи РНе РНе А1а РНе А1а Уа1 Бег Не Бег
- 139 016258
500 505 510
Пе АЗП Уа1 Туг Ьеи ьеи Азп А1а А1а Ьуз Пе Нтз ТНг 61 у Туг МеТ
515 520 525
А5П РНе 61 п РГО 61 п Бег Азп Ьуз 11 е Азр Азр Ьеи Уа1 Уа1 61 п 61 п
530 535 540
ьуз Бег А1а тНг Пе 61 и РНе Бег 61 и ТНг Агд Бег мет Рго Ьеи А1а
545 550 555 560
Бег 61у Ьеи 61 и тНг Рго уа1 тНг Д1а ьуз Азр 11е 11 е 11е Бег 61 и
565 570 575
61 и Пе 61 п Азп 580 Азп 61 и Суз Уа1 туг 585 А1а Ьеи Бег Бег 61 п 590 Азр 61 и
Рго Пе Агд РГО Ьеи Бег А5П Ьеи Уа1 61 и Ьеи Нет 61 и ьуз 61 и 61 п
595 600 605
Ьеи ьуз Азп МеТ А5П Азп ТНг 61 и Уа1 Бег АЗП Ьеи Уа1 Уа1 Азп б1у
610 615 620
ьуз Ьеи Рго Ьеи туг Бег ьеи 61 и ьуз ьуз Ьеи 61 и Азр ТНг Ьеи Агд
625 630 635 640
А1а Уа1 ьеи Уа1 Агд Агд ьуз А1а ьеи Бег ТНг ьеи А1а 61 и Бег Рго
645 650 655
11 е Ьеи Уа! Бег 660 61 и ЬУЗ Ьеи РГО РНе 665 Агд Азп Туг Азр Туг 670 Азр Агд
Уа1 РНе 61 у А1а Суз Суз 61 и А5П Уа1 11 е 61 у Туг МеТ Рго Пе Рго
675 680 685
Уа1 б1у Уа1 11е 61 у Рго Ьеи 11е тНг А5р б1у тНг Бег Туг НТ 5 11е
690 695 700
Рго мет А1а тНг тНг 61 и <31у Суз Ьеи Уа1 А1а Бег А1а Мет РГО 61у
705 710 715 720
Суз ьуз А1а И е АЗП А1а 61 у 61 у 61 у А1а тНг ТНг уа1 ьеи тНг ьуз
725 730 735
Азр 61 у МеТ тНг 740 Агд 61 у Рго Уа1 Уа1 745 Агд РНе Рго тНг ьеи 750 11е Агд
Бег 61 у А1а Суз ьуз Пе тгр ьеи АЗр Бег 61 и 61 и 61 у 61 п Азп Бег
755 760 765
11 е ЬУЗ ьуз А1а РНе АЗП Бег ТНг Бег Агд РНе А1а Агд ьеи 61 п Нтз
770 775 780
- 140 016258
ТЬг 785 61 п ТЬг Суз ьеи А1а 790 61 у А5р ьеи ьеи РЬе мет 795 Агд РЬе Агд ТЬг 800
ТН г ТНг 61 у Азр А1а Мет 61 у мех Азп мет 11 е Бег 1-У$ 61 у Уа1 61 и
805 810 815
туг зег ьеи ьуз 820 61 п мет Уа1 61 и 61 и 825 туг 61 у тгр 61 и Азр 830 мет 61 и
уа1 уа! Бег уа! Бег 61у АЗП Туг суз ТЬг Азр ьуз ьуз Рго А1а А1 а
835 840 845
Не А5П Тгр 11 е 61 и 61 у Агд 61 у ьуз Бег Уа1 уа1 А1а 61 и А1а тЬг
850 855 860
Не рго 61 у Азр Уа1 Уа1 ьуз Бег Уа1 Ьеи ьуз Бег Азр Уа1 Бег А1 а
865 870 875 880
Ьеи Уа1 61 и Ьеи Азп 11 е Бег ьуз Азп Не Уа1 61у Бег А1а МеТ А1а
885 890 895
61 у Бег Уа1 б!у б!у РЬе Азп А1 а Н1 5 А1а А1а Азп Ьеи Уа1 тЬг А1 а
900 905 910
Ьеи РЬе Ьеи А1а Ьеи 61у 61 п Азр Рго А1а 61 п Азп УаТ 61и Бег Бег
915 920 925
Азп Суз 11е ТЬг Ьеи мет ьуз 61 и Уа1 Азр 61 у Азр Ьеи Агд Пе Бег
930 935 940
Уа1 Бег МеТ Рго Бег Пе 61 и Уа1 61 у ТЬг 11 е 61 у 61 у 61 у ТЬг Уа1
945 950 955 960
Ьеи 61 и Рго 61 п 61 у А1а МеТ Ьеи Азр Ьеи Ьеи 61 у Уа1 Агд 61 у Рго
965 970 975
Нт 5 Рго ТЬг 61 и Рго 61 у А1а Азп А1а Агд 61 п Ьеи А1а Агд Не Не
980 985 990
А1а Суз А1а Уа1 Ьеи А1а 61 у 61 и Ьеи Бег Ьеи Суз Бег А1а Ьеи А1. 995 10001005
А1а 61 у Нтз Ьеи Уа1 1010 η
азп ьуз А1а Азп 61 и ьеи 1025
Бег Нтз МеТ ТЬг Н15 Азп Агд Ьуз ТЬг 10151020
Рго 61п Рго Бег азп Ьуз б1у Рго Рго 10301035 суз ьуз тЬг Бег А1а ьеи 1040 ьеи 1045
- 141 016258 <210>79 <211>1052 <212> РКТ <213> зассЬаготусез сегеутзтае <400>79
Мех Рго Рго ьеи 1 рЬе 5 Ьуэ 61у ьеи ьуз 61 η 10 Мех А1а Ьуз Рго ьеи 15 А! а
Туг Уа1 5ег Агд РЬе Зег А1а ьуз Рго Рго 11е Нтз Не Не ьеи рЬе
20 25 30
зег ьеи Не Не зег А1а РЬе А1а туг ьеи зег уа! 11 е 61 п туг туг
35 40 45
рЬе АЗП 61 у Тгр 61 η ьеи Азр Зег А5П Зег Уа! РЬе 61 и ТЬг А1а Рго
50 55 60
АЗП ьуз Азр 5ег АЗП тЬг Ьеи РЬе 61 п 61 и суз Зег нтз Туг Туг Агд
65 70 75 80
Азр Зег Зег ьеи Азр 61 у тгр уа! Зег 11 е тЬг А1а Нтз 61и а! а Зег
85 90 95
61 и Ьеи Рго А1а Рго НТЗ Нтз Туг Туг Ьеи Ьеи АЗП Ьеи Азп РЬе Зег
100 105 110
Рго А5П 61 и ТЬг Аэр Зег 11 е Рго 61 и Ьеи А1а Азп ТЬг Уа! РЬе 61 и
115 120 125
ьуз Азр АЗП ТЬг ьуз Туг Ьеи ьеи 61 η 61 и Азр ьеи Зег Уа1 Зег ьуз
130 135 140
61 и тЬг 5ег Зег тЬг Азр 61 у тЬг ьуз Тгр Агд ьеи Агд 5ег Азр Агд
145 150 155 160
ьуз Зег Ьеи РЬе АЗр уа1 ьуз тЬг [_еи А1а Туг Зег ьеи Туг Азр Уа1
165 170 175
РНе Зег 61 и АЗП уа1 тИг 61 π А1а АЗО РГО РЬе АЗр уа1 ьеи 11 е Мех
180 185 190
Уа1 ТЬг А1а туг Ьеи Мех мех рЬе Туг тЬг 11 е рЬе 61 у ьеи РЬе АЗП
195 200 205
Азр Мех Агд Ьуз тЬг 61 у зет Азп РЬе тгр Ьеи Зег А1а Зег ТЬг Уа1
210 215 220
Уа1 АЗП 5ег А1а Зег Зег Ьеи РЬе ьеи А1а ьеи Туг Уа! ТЬг 61 п суз
225 230 235 240
Не Ьеи 61 у ьуз 61 и Уа1 Зег А1а Ьеи ТЬг ьеи рНе 61 и 61 у Ьеи Рго
- 142 016258
245 250 255
РНе Ьеи Уа1 Уа1 Уа1 Уа1 61 у рНе Ьуз Н13 ьуз Не ьуз Не А1а 61 п
260 265 270
туг А1а ьеи 61 и ьуз РНе 61 и Агд Уа1 61 у ьеи зег ьуз Агд 11 е тНг
275 280 285
ТНг Авр 61 и Не Уа! РНе 61 и Зег уа1 зег 61 и 61 и 61 у 61 у Агд ьеи
290 295 300
Пе С1п Аэр Н15 Ьеи Ьеи Суз 11 е РНе А1 а РНе Не 61 у Суз мех туг
305 310 315 320
А1а НТВ 61п ьеи ьуз ТНг ьеи тНг АЗП рНе Суз 11е ьеи Зег А1а РНе
325 330 335
Не Ьеи Не Рпе 61 и Ьеи Пе Ьеи ТНг Рго ТНг РНе Туг 5ег А1а Пе
340 345 350
Ьеи А1а Ьеи Агд Ьеи 61 и Мет Азп Уа1 Пе НТВ Агд Зег ТНг 11е 11 е
355 360 365
11 е 61 у 61 η тНг ьеи 61 и 61 и А5р б1у Уа1 Уа1 РГО зег тНг А1а Агд
370 375 380
Не Не Зег ьуз А1а 61 и Ьуз ьуз Зег Уа1 Зег Зег РНе Ьеи Аэп Ьеи
385 390 395 400
5ег Уа1 Уа1 Уа1 Не тНг мех ьуз Ьеи Зег Уа1 11 е Ьеи Ьеи РНе Уа!
405 410 415
рНе Пе АЗП РНе туг АЗП рНе 61 у А1а АЗП тгр Уа1 Азп Азр А1а РКе
420 425 430
АЗП зег ьеи туг РНе АЗр ьуз 61 и Агд Уа1 5ег Ьеи Рго Азр РНе Н е
435 440 445
ТНг 5ег А5П А1а зег 61 и Азп РНе ьуз 61 и 61 п А1а Пе Уа! Бег Уа1
450 455 460
тНг Рго Ьеи ьеи Туг Туг Ьуз Рго Пе Ьуз Зег Туг 61 п Агд Не 61 и
465 470 475 480
Азр Мет Уа1 Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Агд Азп Уа1 зег Уа1 А1а 11 е Агд Азр
485 490 495
Агд РКе Уа1 Зег ьуз Ьеи Уа1 Ьеи Зег А1а ьеи Уа1 суз Зег А1а Уа1
500 505 510
И е АЗП Уа1 Туг ьеи ьеи АЗП А1а А1а Агд 11е Н15 тНг зег туг ТНг
515 520 525
- 143 016258
А1а Азр 61 η Ьеи 530 Уа! Ьуз тНг 61 и Уа1 535 ТНг Ьуз Ьуз 540 Бег РЬе тЬг А1а
РГО Уа1 61 η ьуз А1а Бег ТНг Рго Уа1 Ьеи ТНг АЗП ьуз ТЬг Уа1 Не
545 550 555 560
Бег 61 у Бег ьуз уа1 ьуз Бег Ьеи Бег Бег А1а 61 п Бег Бег Бег Бег
565 570 575
61 у рго Бег Бег Бег Бег 61 и 61 и А$р А$р Бег Агд Азр Не 61 и Бег
580 585 590
Ьеи Азр ьуз ьуз Не Агд Рго Ьеи 61 и 61 и Ьеи 61 и А1а Ьеи Ьеи Бег
595 600 605
Бег 61 у Азп тНг ьуз 61 η Ьеи Ьуз АЗП ьуз С1и Уа1 А1а А1а Ьеи Уа1
610 615 620
тНг НТЗ 61 у ьуз Ьеи Рго Ьеи Туг А1а Ьеи 61 и ьуз ьуз Ьеи 61 у Азр
625 630 635 640
ТНг ТНг Агд А1а Уа! А1а Уа1 Агд Агд Ьуз А1а Ьеи Бег Не Ьеи А1а
645 650 655
61 и А1а РГО Уа1 Ьеи А1 а Бег Азр Агд Ьеи Рго туг ьуз Азп Туг Азр
660 665 670
Туг Азр Агд Уа1 РНе 61 у А1а Су5 суз 61 и Азп Уа1 11 е 61 у Туг ме!
675 680 685
Рго ьеи РГО Уа1 61у Уа1 Не 61 у Рго ьеи Уа1 ТНг А5р 61 у ТНг Бег
690 695 700
Туг Н13 Не Рго Ме! А1а ТНг ТНг 61 и 61 у суз ьеи Уа1 А1а Бег А1а
705 710 715 720
Ме! Агд 61 у суз ьуз А1а Не Азп А1а 61 у 61 у 61 у А1а ТЬг тНг Уа1
725 730 735
Ьеи тНг ьуз Азр 61 у Ме! Не Агд 61 у РГО Уа1 Уа1 Агд РНе Рго ТЬг
740 745 750
Ьеи ьуз Агд Бег 61 у А1а суз ьуз Не тгр ьеи АЗР Бег 61 и 61 и 61 у
755 760 765
61 η АЗП А1а Не ьуз ьуз А1а РНе Азп Бег ТНг Бег Агд рНе А1а Агд
770 775 780
Ьеи 61 η Нтз 11 е 61 η ТЬг Суз Ьеи А1а 61 у АЗр ьеи ьеи рНе ме! Агд
785 790 795 800
- 144 016258
РНе Агд тНг тНг ТНг 805 Бег Азр А1а МеЕ 61 у 810 МеЕ Азп МеЕ Не Бег 815 Ьуз
61у Уа! 61 и Туг 820 Бег Ьеи ьуз 61 п меь 825 Уа1 61 и 61 и туг 61 у 830 Тгр 61 и
Азр МеЕ 61 и Уа! Уа1 Бег Уа1 Бег 61 у Азп Туг суз ТНг Азр ьуз ьуз
835 840 845
Рго А1а А1а Не Азп Тгр Не 61 и 61 у Агд 61 у ьуз Бег Уа1 Уа1 А1а
850 855 860
61 и А1а тНг 11 е Рго 61 у Азр Уа1 Уа1 Агд ьуз Уа1 ьеи ьуз Бег Азр
865 870 875 880
Уа1 Бег А1а ьеи Уа! 61и ьеи Азп Не А1а ьуз Аэп ьеи уа1 61 у Бег
885 890 895
А1а МеЕ А1а 61 у Бег Уа1 61 у 61 у 61 и Азп А1а Нт 3 А1а А1а АЗП Ьеи
900 905 910
Уа1 ТНг А1а Уа1 РНе Ьеи А1а Ьеи 61 у Азр Рго А1а 61 п Азп Уа1 61 и
915 920 925
Бег Бег А5П суз Не тНг ьеи мег ьуз 61 и Уа1 Азр 61 у Азр Ьеи Агд
930 935 940
Не Бег Уа1 Бег МеЕ Рго Бег Не 61 и Уа1 61 у ТНг Не 61у 61у 61 у
945 950 955 960
ТНг Уа1 ьеи 61 и Рго 61п 61 у А1а меЕ ьеи Азр Ьеи Ьеи Бег Уа1 Агд
965 970 975
61у Рго НТ 5 А1а ТНг А1а РГО 61 у ТНг АЗП А1а лгд 61 п ьеи А1а Агд
980 985 990
11е Уа! А1а су5 А1а Уа1 ьеи А1а 61 у 61 и ьеи 5ег ьеи суз А1а А1а
995 1000 1005
Ьеи А1а А1а 61у НТЗ Ьеи Уа! 1015 61 п Бег Нт 3 МеЕ ТНг 1020 НТЗ Азп Агд
1010
ьуз Рго А1а 61 и Рго ТНг Ьуз Рго Аэп Азп ьеи Азр А1а ТНг АЗр
1025 1030 1035
11е АЗП Агд ьеи Ьуз Азр б1у Бег Уа1 ТНг суз Не Ьуз Бег
1040 1045 1050
<210> 80 <211> 999 <212> РКТ <213> Уаггоила НроТуЕтса
- 145 016258 <400> 80
Мет 1 Ьеи 61 η А1а А1а 5 Не 61у Туэ Не Уа1 б1у 10 РЬе А1а Уа! Азп 15 Агд
РГО Не НТЗ ТЬг Уа1 Уа1 Теи ТЬг Бег Не уа! А1а Бег ТНг А1а туг
20 25 30
Теи А1а Ьеи 35 Ьеи Азр Не А1а 11 е 40 Рго 61 у 61 и 61 и 61 у 45 ТНг С1п Рго
Не Бег Туг Туг Нтз Рго А1а А1а туз Бег туг А$р Азп РГО А1а Азр
50 55 60
тгр ТНг Н1 5 Не А1а 61и А1а Азр 11е Рго Бег Азр А1а Туг Агд теи
65 70 75 80
А1а РЬе А1а 61 η 11е 85 Агд Уа1 Бег Азр Уа! 90 61 п 61у 61 у 61 и А1а 95 Рго
ТНг Не РГО 61 у А1а Уа1 А1а Уа1 Бег Азр теи Азр Нтз лгд 11е Уа1
100 105 110
МеТ Азр Туг ьуз 61 п Тгр А1а Рго тгр ТЬг А1а Бег АЗП 61 и 61 п Не
115 120 125
А1а Бег 61 и АЗП НТЗ Не тгр ЬУ5 Нтз Бег РИе туз АЗр Нтз Уа1 А1а
130 135 140
РЬе Бег Тгр 11 е ьуз Тгр РЬе Агд Тгр А1а Туг Теи Агд Теи Бег тЬг
145 150 155 160
ьеи Не 61 η 61 у А1а Азр Азп РЬе АЗр Не А1а Уа1 Уа1 А1а теи 61 у
165 170 175
Туг теи А1а Мет 180 Нтз Туг тЬг РЬе рЬе 185 Бег теи РЬе Агд Бег 190 туз Агд
ьуз Уа1 61 у Бег Нтз РЬе Тгр Теи А1а Бег мет А1а теи Уа1 Бег Бег
195 200 205
РИе рЬе А1а РЬе Теи Теи А1а Уа1 Уа1 А1а Бег Бег Бег теи 61 у Туг
210 215 220
Агд Рго Бег Мет 11е тЬг мет Бег 61 и 61 у Теи Рго РИе Теи Уа1 Уа1
225 230 235 240
А1а 11 е 61 у РЬе Аэр Агд туз Уа1 АЗП теи А1а Бег б1и Уа1 Теи ТНг
245 250 255
Бег ьуз Бег Бег 61п Теи А1а Рго мет Уа! 61 п уа1 Не тЬг туз Не
260 265 270
- 146 016258
А1а Бег ьуз 275 А1а Ьеи РНе 61 и Туг Бег Ьеи 280 61 и Уа! А1а А1а 285 Ьеи РНе
А1а 61 у 290 А1а Туг тНг 61 у Уа1 295 РГО Агд ьеи Бег 61 п 300 РНе Суз РНе Ьеи
Бег А1а Тгр Не ьеи Пе РНе Азр туг мех РНе ьеи ьеи ТНг РНе Туг
305 310 315 320
Бег А1а Уа1 Не А1а 11 е ьуз РНе ьеи 11е А5П Нтз Не ьуз РНе Азп
325 330 335
Агд Мех Пе 61 η А5р А1а ьеи ьуз 61 и АЗр 61 у уа1 Бег А1а А1 а Уа1
340 345 350
А1а 61 и Ьуз 355 Уа1 А1а АЗр Бег Бег 360 Рго Азр А1а ьуз ьеи 365 Азр Агд ьуз
Бег Азр Уа1 Бег Ьеи РНе 61у А1а Бег 61 у А1а Не А1а Уа1 РНе ьуз
370 375 380
11е РНе мех Уа1 ьеи 61 у РНе ьеи 61 у Ьеи Азп ьеи 11е Аэп Ьеи ТНг
385 390 395 400
А1а Пе Рго Н15 ьеи 61 у ьуз А1а А1а А1а А1а А1а 61 п Бег Уа! ТНг
405 410 415
Рго 11 е тНг ьеи Бег РГО 61 и Ьеи ьеи НТ5 А1а Не Рго А1а Бег Уа1
420 425 430
РГО Уа1 Уа1 Уа1 ТНг РНе Уа1 Рго Бег Уа1 Уа1 Туг 61 и НТ 5 Бег 61 п
435 440 445
ьеи Не ьеи 61 η Ьеи б1и А5р А1а Ьеи ТНг РНе РНе Ьеи А1а А1а Суз
450 455 460
Бег ьуз тНг Не 61 у Азр Рго Уа1 Пе Бег ьуз Туг Пе рНе Ьеи Суз
465 470 475 480
ьеи мех Уа1 Бег тНг А1а ьеи Азп Уа1 Туг Ьеи РНе 61 у А1а ТНг Агд
485 490 495
61 и Уа1 Уа1 Агд ТНг 61 η Бег Уа1 ьуз Уа1 Уа! 61 и ьуз Нтз уа! Рго
500 505 510
Не Уа1 Не 61 и ьуз Рго Бег 61 и ьуз 61 и 61 и Азр ТНг Бег Бег 61 и
515 520 525
Азр Бег Не 61 и Ьеи ТНг Уа1 61у Ьуз 61 п Рго Ьуз РГО уа! ТНг 61 и
530 535 540
- 147 016258
ТЬг Агд зег ьеи Азр А5Р ьеи 61 и А1а ТЬг Мех Ьуз А1а 61 у ьуз ТЬг
545 550 555 560
Ьуз Ьеи ьеи 61 и Азр НТЗ 61 и Уа! Уа! ьуз Ьеи зег ьеи б1и 61 у ьуз
565 570 575
Ьеи Рго Ьеи Туг А1а Ьеи РЬе Ьуз 61 π Ьеи 61 у Азр А5П ТЬг Агд А1а
580 585 590
Уа! 61 у 11 е Агд Агд Зег 11 е Не зег 61 п 61 п зег Азп ТЬг ьуз ТЬг
595 600 605
ьеи 61 и 610 тНг зег ьуз ьеи Рго 615 туг ьеи Н15 Туг АЗр 620 Туг Азр Агд Уа1
РЬе 61 у А1а Суз Суз 61 и АЗП Уа1 Пе 61 у Туг Мех Рго Ьеи Рго Уа1
625 630 635 640
61 у Уа! А1а 61у рго мех АЗП ТЬг Азр 61 у ьуз АЗП туг нтз 11е Рго
645 650 655
Мех А1а тЬг тЬг 61 и С1у Суз Ьеи Уа1 А1а Зег ТЬг мех Агд 61 у Суз
660 665 670
ьуз А1а Не А5П А1а 61 у 61 у 61 у Уа1 ТЬг ТЬг Уа1 ьеи ТЬг 61 п Α5Ρ
675 680 685
61 у Мех ТЬг Агд 61 у Рго Суз Уа! зег РЬе Рго 5ег ьеи ьуз Агд А1а
690 695 700
61 у А1а А1а ьуэ 11 е тгр ьеи Азр 61 и Зег 61 и 61 у ьеи ьуз 5ег Мех
705 710 715 720
Агд ьуз А1а рЬе АЗП зег тЬг зег Агд РЬе А1а лгд ьеи 61 π Зег Ьеи
725 730 735
Нтз Зег тЬг ьеи А1а 61 у АЗП ьеи Ьеи РЬе Пе Агд ₽Ье Агд ТЬг ТЬг
740 745 750
ТЬг 61 у Азр А1а мех 61 у мех Азп Мех 11 е Зег ьуз 61 у Уа1 61 и Нтз
755 760 765
Зег Ьеи 770 А1а Уа1 Мех Уа1 ьуз 775 61 и туг 61у РЬе Рго 780 Ьеи Мех Азр Не
Уа1 Зег уа! Зег 61 у А5П Туг Суз ТЬг Аэр ьуэ ьуз Рго А1а А1а Не
785 790 795 800
Азп Тгр Не 61 и 61 у Агд 61у ьуз Зег Уа1 Уа! А1а 61 и А1а ТЬг Не
805 810 815
- 148 016258
Рго А1а НТЗ 11 е Уа1 820 ьуз Зег Уа! ьеи ьуз 5ег 825 61 и Уа1 Азр 830 А1а Ьеи
уа! 61 и Ьеи Азп Не 5ег ьуз АЗП ьеи Не 61 у Зег А1а Мех А1а 61 у
835 840 845
Зег Уа1 61у 61у РЬе Азп А1а Нтз А1а А1а Азп ьеи Уа1 тЬг А1а Не
850 855 860
Туг Ьеи А1а ТЬг 61 у 61 п Азр Рго А1а 61 п АЗП Уа1 61 и Зег зег Азп
865 870 875 880
суз Не ТЬг Ьеи МеТ Зег АЗП Уа1 АЗр 61 у Азп Ьеи Ьеи Не Зег Уа1
885 890 895
зег мех Рго зег Не б1и уа! 61у тЬг Не 61у 61у 61у ТЬг 11е ьеи
900 905 910
61 и Рго 61 п 61 у А1а мех Ьеи 61 и Мех Ьеи 61 у Уа1 Агд 61 у РГО Н15
915 920 925
Не б1и ТЬг Рго 61 у А1а А5П А1а 61 п 61 п Ьеи А1а Агд Не Не А1а
930 935 940
Зег б1у Уа1 Ьеи А1а А1а 61 и ьеи Зег Ьеи Суз Зег А1а Ьеи А1а А1а
945 950 955 960
61 у НТЗ ьеи УаТ 61 п зег нтз мех ТЬг Нтз А5П Агд Зег 61 п А1а Рго
965 970 975
ТЬг РГО А1а Ьуз 61 п 5ег С1п А1а Азр Ьеи 61 п Агд Ьеи 61 п Азп 61 у
980 955 990
5ег Азп 11 е Суз Не Агд зег
995 <210> 81 <211> 1199 <212> РКТ <213> Агхт'-Нста!
<220>
<223> Ргттег зупхЬехтс <220>
<221> ттзс_Теахиге <222> (4)..(4) <223> Хаа сап Ье апу пахига11у оссиггтпд аттпо астс!
<220>
<221> ттзс_£еаХиге <222> т . да <223> хаа сап Ье апу пахига11у оссиггтпд аттпо астд <220>
<221> ттзс_ГеаТиге
- 149 016258
<222> <223> СИ) . . ¢12) Хаа сап Ье апу па'СигаПу оссиггтпд аттпо астб
<220>
<221> ш15с_ЕеаГиге
<222> (14)..(19)
<223> хаа сап Ье апу паГига11у оссиггтпд апл по астб
<220>
<221> пп5с_£еаСиге
<222> (21)..(21)
<223> хаа сап Ье апу паИигаПу оссиггтпд апл по астб
<220>
<221> гпт'5с_6еагиге
<222> (25)..(26)
<223> хаа сап Ье апу па1ига11у оссиггтпд апл* по астб
<220>
<221> ттзс_ГеаГиге
<222> (28)..(28)
<223> Хаа сап Ье апу ла1ига)1у оссиггтпд апл* по астЬ
<220>
<221> пл 5с„6еагиге
<222> (31)..(31)
<223> Хаа сап Ье апу па1ига!1у оссиггтпд апл по астЬ
<220>
<221> тт5с_ТеаГиге
<222> (35)..(35)
<223> хаа сап Ье апу паГигаПу оссиггтпд апл по ас1б
<220>
<221> п1тзс_6еа1иге
<222> (42) . . (42)
<223> Хаа сап Ье апу пагига11у оссиггтпд апл по астб
<220>
<221> ппзс-беаГиге
<222> (65)..(65)
<223> Хаа сап Ье апу пагигаПу оссиггтпд алл по астб
<220>
<221> п>1 зс_£еагиге
<222> (69).. (69)
<223> Хаа сап Ье апу паТигаПу оссиггтпд апл по астб
<220>
<221> ттзс_£еа±иге
<222> (71)..(71)
<223> Хаа сап Ье апу пасигаПу оссиггтпд апл по астб
<22О>
<221> пл зс_£еагиге
<222> (73)..(73)
<223> Хаа сап Ье апу пабигаПу оссиггтпд апппо астб
<22О>
<221> ттзс Ееатиге
<222> (76) .. (81)
<223> Хаа сап Ье апу паГигаПу оссиггтпд апл* по астб
<220>
<221> ттзс_6еасиге
<222> (83)..(83)
<223> Хаа сап Ье апу паТигаПу оссиггтпд агтп' по астб
<220>
- 150 016258 <221> ппзс-ГеаТиге <222> (87)..(88) <223> Хаа сап Ье апу паГигаПу оссиггтпд апп'по астс!
<220>
<221> пп'5С_£еаТиге <222> (92)..(92) <223> Хаа сап Ье апу пагига11у оссиггтпд апл по аст <1 <220>
<221> ггп5с_ГеаТиге <222> (95)..(95) <223> хаа сап Ье апу паГигаПу оссиггтпд апп'по астс1 <220>
<221> тт5с_Геа1иге <222> (97)..(98) <223> хаа сап Ье апу патига11у оссиггтпд аттпо аст с1 <220>
<221> ттзС-кеаТиге <222> (100)..(100) <223> Хаа сап Ье апу па^ига!1 у оссиггтпд аттпо ас10 <220>
<221> ттзс_Геагиге <222> (104).,(105) , <223> Хаа сап Ье апу патигаПу оссиггтпд аттпо астб <220>
<221> тт зс-Реатиге <222> (108)..(110) <223> Хаа сап Ье апу паГига11у оссиггтпд аттпо астс!
<220>
<221> тт5с_Реаьиге <222> (112)..(122) <223> Хаа сап Ье апу паЬигаПу оссиггтпд аттпо астс!
<22О>
<221> штзс_Геа1иге <222> (127)..(127) <223> хаа сап Ье апу паТигаПу оссиггтпд аттпо астс!
<220>
<221> штзс_Геа1иге <222> (132)..(132) <223> хаа сап Ье апу па1ига11у оссиггтпд аттпо астб <220>
<221> пп5С_ГеаГиге <222> (142)..(142) <223> Хаа сап Ье апу пагигаПу оссиггтпд аттпо астс!
<22О>
<221> ттзс_(еаГиге <222> (144)..(144) <223> Хаа сап Ье апу паЬигаПу оссиггтпд аттпо астс!
<220>
<221> ιιπί 5с_ГеаЬиге <222> (150)..(150) <223> хаа сап Ье апу пагигаПу оссиггтпд аттпо астс!
<22О>
<221> ттзс_£еатиге <222> (152)..(153) <223> Хаа сап Ье апу паЬигаПу оссиггтпд апп'по астс!
- 151 016258
<220> <221> <222> <223> пп 5с_(еаХиге (158)..(158) Хаа сап Ье апу пахига11у оссиггтпд апппо аст'б
<220> <221> <222> <223> пп'5с_Теахиге (160)..(160) Хаа сап Ье апу паХигаПу оссигп'пд апппо апб
<220> <221> <222> <223> пп Бс^еахиге (163)..(163) Хаа сап Ье апу пахигаПу оссиггтпд апппо астб
<220> <221> <222> <223> гтп зс_£еахиге (167)..(167) хаа сап Ье апу пахигаПу оссигппд апппо астб
<220> <221> <222> <223> тт5с_Теахиге (169)..(170) хаа сап Ье апу пахигаПу оссигппд апп'по астб
<220> <221> <222> <223> пп5С_/еахиге (174)..(174) Хаа сап Ье апу пахигаПу оссиггппд апппо астб
<22О> <221> <222> <223> пп 5с_Теагиге (182)..(182) Хаа сап Ье апу пахигаПу оссигппд апппо ас Ή
<220> <221> <222> <223> пн 5С_£еаХиге (189)..(231) Хаа сап Ье апу пахигаПу оссигппд апппо астб
<220> <221> <222> <223> тт5С_-(еагиге (235)..(235) Хаа сап Ье апу пахигаПу оссигппд апппо аст'с!
<220> <221> <222> <223> пп'зсйеахиге (237)..(238) Хаа сап Ье апу пахигаПу оссигппд апппо аспб
<220> <221> <222> <223> ттзс„-(еагиге (242)..(243) Хаа сап Ье апу пахигаПу оссигппд апппо астб
<220> <221> <222> <223> пнзс_ТеаХиге (290)..(290) хаа сап Ье апу пахигаПу оссигппд апп'по астб
<220> <221> <222> <223> нпзс^Геахиге (310)..(310) Хаа сап Ье апу паХигаНу оссигппд апппо аспс!
<22О> <221> <222> <223> ппзс_ГеаХиге (344)..(344) Хаа сап Ье апу пахигаПу оссигппд апппо аспб
- 152 016258 <220>
<221> пн зс_ГеаТиге <222> (348)..(348) <223> хаа сап Ье апу па1ига11у оссиггтпд аштпо астб <220>
<221> пн зс_£еатиге <222> (351)..(364) <223> Хаа сап Ье апу патигаПу оссиггтпд апнпо астб <220>
<221> ΐϊΐί 5с_£еаТиге <222> (366)..(368) <223> Хаа сап Ье апу пагигаПу оссиггтпд апнпо ас5б <220>
<221> тт5с_Теагиге <222> (372)..(372) <223> Хаа сап Ье апу паТигаПу оссиггтпд апнпо асяб <220>
<221> пп зс_£еасиге <222> (376)..(376) <223> хаа сап Ье апу пагигаПу оссиггнпд аггппо ас1б <220>
<221> 1гп'зс_£еатиге <222> (381)..(381) <223> Хаа сап Ье апу паТигаПу оссиггнпд аттпо аст'б <220>
<221> плзс-Деатиге <222> (408)..(408) <223> Хаа сап Ье апу патигаПу оссигппд агтппо астб <220>
<221> пл‘зс„-реагиге <222> (410)..(410) <223> Хаа сап Ье апу патига11у оссиггтпд аггппо астб <220>
<221> пн зс„£еаТиге <222> (424)..(424) <223> Хаа сап Ье апу паТигаПу оссиггтпд аггппо астб <220>
<221> пп*5С_Геатиге <222> (452)..(452) <223> Хаа сап Ье апу пагига11у оссигппд апнпо астб <220>
<221> пн 5с_ТеаТиге <222> (461) .. (461) <223> Хаа сап Ье апу паТигаПу оссигглпд апнпо астб <220>
<221> пп зс_!еатиге <222> (472)..(472) <223> Хаа сап Ье апу паТигаПу оссиггтпд апнпо астб <220>
<221> плзс-Геатиге <222> (475)..(477) <223> Хаа сап Ье апу патигаПу оссиггтпд апнпо астб <220>
<221> пн зс_Геатиге <222> (483)..(483)
- 153 016258
<223> Хаа сап Ье апу паХигаНу оссигглпд апл по астс1
<220>
<221> ттзс_ЕеаХиге
<222> (485)..(494)
<223> хаа сап Ье апу паХигаНу оссигглпд атл по астс!
<220>
<221> пн зс_ХеаХиге
<222> (497),.(497)
<223> Хаа сап Ье апу паХигаНу оссигглпд атл по асМ
<220>
<221> ттэС-Ееахиге
<222> (500)..(500)
<223> Хаа сап Ье апу паХигаНу оссигглпд апл по ас! 6
<220>
<221> т15с_Ееахиге
<222> (526)..(526)
<223> хаа сап Ье апу пахита!1 у оссигглпд атл по ас! ά
<220>
<221> штзс_Ееахиге
<222> (528). .(528)
<223> Хаа сап Ье апу пахита!!у оссиггл пд атл по астс!
<220>
<221> пп'зс_ЕеаХиге
<222> (530)..(539)
<223> Хаа сап Ье апу паХигаНу оссиггтпд атл по аст<3
<220>
<221> т1зс_ГеаХиге
<222> (541)..(541)
<223> Хаа сап Ье апу паХигаНу оссигглпд атл по ас! ά
<220>
<221> пл5С_Геахиге
<222> (544)..(544)
<223> Хаа сап Ье апу пахита!!у оссиггтпд атл по астс!
<22О>
<221> пл' 5С_ХеаХиге
<222> (547)..(548)
<223> Хаа сап Ье апу паХигаНу оссиггтпд атл по астс1
<220>
<221> пп'зс-Ееахиге
<222> (556)..(556)
<223> Хаа сап Ье апу паХигаНу оссигглпд апл* по ас!с1
<22О>
<221> т15с_ГеаХиге
<222> (562)..(562)
<223> Хаа сап Ье апу паХигаНу оссигтпд атл по ас1с!
<220>
<221> тт5С_Геахиге
<222> (568)..(569)
<223> Хаа сап Ье апу паХигаНу оссигп’пд атл по асгс!
<220>
<221> т1зс_ЕеаХиге
<222> (592)..(592)
<223> Хаа сап Ье апу паХигаНу оссиггЗпд атл по астб
<220>
<221> штвс-ЕеаХиге
- 154 016258
<222> <223> (594)..(596) хаа сап Ье апу паТигаПу оссиггтпд ат1 по ас) б
<22О>
<221> пп$с_£еагиге
<222> (598)..(605)
<223> Хаа сап Ье апу паТигаПу оссигппд апл по ас1б
<220>
<221> пп5с_£еаГиге
<222> ¢607)..¢614)
<223> Хаа сап Ье апу паТига! 1у оссигп пд аш1 по ас1‘б
<220>
<221> пи* зс_£еатиге
<222> (616)..(616)
<223> Хаа сап Ье апу паТигаПу оссиггтпд атт по аС1б
<220>
<221> 1тп'5с_ГеаТиге
<222> (619)..(619)
<223> хаа сап Ье апу пагигаПу оссигппд алппо асй
<220>
<221> шт 5с_ГеаГиге
<222> ¢658)..(658)
<223> Хаа сап Ье апу паТигаПу оссиггтпд ат1 по ас) б
<220>
<221> шт 5с_£еатиге
<222> (665)..(669)
<223> Хаа сап Ье апу паТигаПу оссиггтпд апл по астб
<220>
<221> т1зс_£еасиге
<222> ¢672)..(672)
<223> Хаа сап Ье апу паТига! 1у оссигп пд апл по ас ι’ά
<220>
<221> та5С_ГеаТиге
<222> ¢675)..(677)
<223> Хаа сап Ье апу пагига11у оссигппд атт по астб
<220>
<221> Ш15с_ГеаТиге
<222> (679)..(680)
<223> Хаа сап Ье апу па1ига!1у оссигппд апл по ас1б
<220>
<221> та5с_£еатиге
<222> (682)..(684)
<223> Хаа сап Ье апу паГигаНу оссигппд ат1 по ас1 б
<220>
<221> та 5с_ГеаТиге
<222> (687)..(687)
<223> Хаа сап Ье апу пагигаПу оссигппд апл по ас1б
<220>
<221> пп‘5с_£еатиге
<222> (689)..(693)
<223> хаа сап Ье апу паГигаПу оссигппд апл по ас1б
<22О>
<221> та зс_£еагиге
<222> ¢695)..(696)
<223> Хаа сап Ье апу паТига11у оссигппд атт по астб
<22О>
- 155 016258 <221> ηιί БС-'РеаТиге <222> (698)..(706) <223> Хаа сап Ье апу паСигаПу оссиггтпд аттпо астс!
<220>
<221> пп'5с_Геатиге <222> (710)..(710) <223> Хаа сап Ье апу паГигаПу осситпд апппо астЬ <22О>
<221> пл5с_Геа1иге <222> (715)..(716) <223> хаа сап Ье апу патигаПу оссит'пд ат!по астб <220>
<221> т15с_Геа1иге <222> (718)..(719) <223> хаа сап Ье апу пагигаПу оссиггтпд апппо астб <220>
<221> т!зс_!еатиге <222> (721)..(724) <223> хаа сап Ье апу паТигаПу оссигг!пд ат!по астс!
<220>
<221> плзс_Реа1иге <222> (726)..(726) <223> Хаа сап Ье апу па1ига11у осситпд апппо астб <22О>
<221> тт5с_1еа1иге <222> (729)..(734) <223> Хаа сап Ье апу паКигаПу оссит'пд апппо астб <220>
<221> Ш15С_6еаТиге <222> (752)..(752) <223> Хаа сап Ье апу па Гига Пу осситпд ат! по ас!б <220>
<221> п115С_!еаТиге <222> (754)..(754) <223> Хаа сап Ье апу па!ига11у осситпд ат!по ас1с1 <220>
<221> ппзС-’РеаГиге <222> (760)..(760) <223> Хаа сап Ье апу патигаПу осситпд ат!по ас!б <22О>
<221> ттзс-ГеаТиге <222> (764)..(764) <223> хаа сап Ье апу пабигаПу осситпд апппо ас1с1 <220>
<221> т!5С_6еаТиге <222> (778)..(786) <223> Хаа сап Ье апу пагига11у осситпд апппо астс!
<220>
<221> ттзс-Геагиге <222> (802)..(803) <223> Хаа сап Ье апу па1ига11у осситпд апппо астс!
<220>
<221> пп'зс-беаТиге <222> (810)..(810) <223> Хаа сап Ье апу паСигаПу осситпд ат!по астб
- 156 016258 <220>
<221> пл'$ схвати ге <222> (900),.(900)
<223> хаа сап Ье апу пагига11у оссигппд атт по астс1
<220> <221> шп 5с_Теа1иге
<222> (905)., .(905) астН
<223> хаа сап Ье апу па1ига11у оссигппд апл по
<220> <221> ттзс_Теагиге
<222> (921).. (921)
<223> хаа сап Ье апу пахигаПу оссигппд апл по ас16
<22О> <221> по 5с_ГеаХиге
<222> (978).. (978)
<223> Хаа сап Ье апу паХигаПу оссигппд ат! по ас1‘ 6
<220> <221> пл5С_-Геахиге
<222> (1186). .. (1187)
<223> Хаа сап Ье апу паХигаПу оссиггтпд атт по астб
<220> <221> ш15с_,ГеаХиге
<222> (1189) . ..(1194)
<223> хаа сап Ье апу пахигаПу оссигппд атт по астс1
<220> <221> ттзсТеаьиге
<222> (1196). ..(1196)
<223> Хаа сап Ье апу паХигаПу оссигппд атт по ася с1
<220> <221> шт5с_Теахиге
<222> (1198). .. (1198)
<223> хаа сап Ье апу пахигаИу 0СО1ГГ1 пд ат! по астб
<400> 81
мех А)а зег хаа ьеи ьеи хаа хаа Агд 61 и хаа хаа 61 и хаа хаа 15 хаа
1 5 10
хаа хаа хаа А1а хаа РГО зег Тгр Хаа Хаа ьуз хаа ьеи тНг хаа РГО
20 25 30
11е 61 у Хаа 11 е Зег Агд РЬе А1а А1а Хаа Нтз Рго 11 е нтз ТЬг 11 е
35 40 45
Уа1 ьеи Уа1 А1а ьеи ьеи А1а зег тЬг А1а туг ьеи 61 у ьеи ьеи 61 п
50 55 60
Хаа 5ег Ьеи РЬе хаа Тгр хаа Ьеи Хаа Зег Азп Хаа Хаа хаа Хаа Хаа
65 70 75 80
хаа Азр хаа тНг 5ег ьеи хаа хаа 61 у 5ег Агд хаа ьеи Агд хаа 61 у
85 90 95
Хаа Хаа ТЬг Хаа Тгр Агд тгр хаа Хаа И е Азр Хаа Хаа Хаа Не Хаа
100 105 110
- 157 016258
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа А1а А1а Азр А1а Хаа НТЗ
115 120 125
Ьеи А1а Ьеи Хаа тНг Ьеи Уа1 РКе Рго Азр тНг 61 п Бег Хаа 61 и Хаа
130 135 140
А1а Бег тНг Пе РГО хаа А1а хаа хаа Уа1 РГО Уа1 РГО хаа АЗП хаа
145 150 155 160
Бег Пе хаа Ьеи ьеи Рго Хаа ТНг хаа Хаа Не РКе ТНг хаа туг Бег
165 170 175
61 η Азр Бег Бег Ьеи Хаа РКе Бег ьеи Рго Туг Бег Хаа хаа Хаа хаа
180 185 190
Хаа Хаа Хаа хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа
195 200 205
хаа хаа Хаа Хаа Хаа хаа Хаа хаа Хаа хаа хаа Хаа Хаа хаа хаа хаа
210 215 220
Хаа Хаа Хаа Хаа хаа Хаа Хаа Аэр 11 е Уа1 хаа Тгр Хаа Хаа Азп А1а
225 230 235 240
Тгр Хаа Хаа РКе Бег 245 А5р Ьеи 11е ьуз Азп 250 А1а Аэр ТНг РНе Аэр 255 11е
11е 11е МеЬ Азп Ьеи 61 у Туг Ьеи А1а Мет НТЗ Туг ТНг РКе АЗП Бег
260 265 270
Ьеи Рпе Азп Бег мет Агд ьуз ьеи 61 у Бег ьуз РНе Тгр ьеи А1а ТНг
275 280 285
Бег Хаа Ьеи РКе Бег Бег Не РКе А1а РКе Ьеи Ьеи 61 у Ьеи ьеи Уа1
290 295 300
тНг тНг Ьуз Ьеи 61 у Хаа Уа1 Рго Не Бег Мет ьеи Ьеи Ьеи Бег 61 и
305 310 315 320
61 у Ьеи Рго РКе Ьеи Уа! Уа1 ТКг Не 61 у РКе 61 и Ьуз Ьуз Не Уа1
325 330 335
ьеи тНг Агд А1а Уа1 ьеи Бег хаа А1а 11 е Азр Хаа Агд Агд Хаа Хаа
340 345 350
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа хаа хаа Хаа Хаа хаа хаа Бег хаа хаа Хаа
355 360 365
Бег Не 61 у Хаа А1а 11 е 61 п хаа А1 а И е ьуз 61 и Хаа 61 у РНе 61 и
370 375 380
- 158 016258
Пе 385 11е Агд Азр туг А1а Не б!и 11е Бег Не Ьеи 11е А1а 61 у А1а 400
390 395
А1а Бег 61 у Уа1 61 п 61 у 61 у Хаа ьеи Хаа 61 п РЬе суз рЬе ьеи А1а
405 410 415
А1а Тгр Не Ьеи РЬе рЬе АЗр хаа 11 е ьеи ьеи рЬе тЬг рЬе туг Бег
420 425 430
А1а Не Ьеи А1а 11 е ьуз Ьеи 61 и 11 е Азп Агд 11е ьуз Агд Нт 5 уа1
435 440 445
11е Пе Агд Хаа А1 а Ьеи 61и 61 и Азр 61 у Уа1 Бег Хаа Бег УаТ А1а
450 455 460
61 и ьуз Уа1 А1а ьуз Бег 61 и хаа Азр тгр хаа хаа хаа ьуз 61 у Бег
465 470 475 480
А5Р Бег Хаа РЬе хаа хаа хаа хаа хаа Хаа Хаа Хаа Хаа хаа ьуз Бег
485 490 495
хаа А1а Не Хаа Не РЬе ьуз уа! ьеи ме! Пе Ьеи 61 у РЬе Уа1 Ьеи
500 505 510
Не АЗП Ьеи Уа1 Азп Ьеи ТЬг А1а Не Рго рЬе Агд АЗП хаа А1а Хаа
515 520 525
Бег Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа ьеи Хаа рЬе Уа! Хаа
530 535 540
Бег РГО Хаа Хаа Уа! Азр РГО рЬе ьуз Уа! А1а хаа А5П ьеи ьеи Азр
545 550 555 560
А1а Хаа А1а А1а А1а ьуз Бег Хаа хаа Агд 61 и ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1
565 570 575
Уа1 тЬг РГО 11е ьуз Туг 61 и Ьеи 61 и Туг Рго Бег Не НТ 5 туг хаа
580 585 590
61 и хаа Хаа Хаа Бег Хаа Хаа Хаа хаа хаа Хаа хаа Хаа Ьеи Хаа Хаа
595 600 605
Хаа хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 61 у хаа 61 у 61 у хаа мет ьеи 61 у Бег Уа1
610 615 620
Бег ьуз Бег 11е 61 и Азр РГО уа1 Пе Бег ьуз тгр Не Уа! 11 е А1а
625 630 635 640
Ьеи А1а Ьеи Бег Не А1а Ьеи Азп Уа! туг Ьеи рЬе АЗП А1а А1а Агд
645 650 655
Тгр Хаа 11е ьуз АЗр Рго Азп Уа1 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 61 и Уа1 хаа
- 159 016258
660 665 670
61 и Ьеи Хаа Хаа Хаа 61 п Хаа хаа АЭП Хаа хаа хаа Бег А1а хаа Ьеи
675 680 685
Хаа хаа Хаа хаа хаа Не Хаа Хаа тНг хаа Хаа хаа Хаа хаа хаа Хаа
690 695 700
Хаа Хаа ТНг Рго А1а Хаа ТНг Азр Азр 61 и Хаа Хаа Бег Хаа Хаа Бег
705 710 715 720
хаа хаа хаа хаа Уа1 хаа ьуз 11е хаа хаа хаа хаа хаа хаа 11 е Агд
725 730 735
Бег Ьеи 61 и 61 и Ьеи 61 и А1 а Ьеи Ьеи А1а А1а ьуз ьуз ТНг ьуз Хаа
740 745 750
Ьеи Хаа Азр 61 и 61 и Уа1 Уа1 Хаа Ьеи Бег Ьеи Хаа 61у ьуз Ьеи РГО
755 760 765
Ьеи Туг А1а ьеи 61 и ьуз тНг Ьеи 61 у Хаа Хаа хаа хаа хаа Хаа хаа
770 775 780
хаа хаа Азр РНе ТНг Агд А1а уа1 ьуз Не Агд Агд Бег Не Не Бег
785 790 795 800
Агд хаа хаа А1а ТНг Бег А1а ьеи тНг Хаа Бег ьеи 61 и Бег Бег ьуз
805 810 815
ьеи Рго туг Ьуз Азп Туг Азп Туг Азр Агд Уа1 РНе 61 у А1а Суз Суз
820 825 830
61 и Азп уа! Не 61 у Туг меь Рго ьеи РГО Уа1 61 у Уа1 А1а 61 у Рго
835 840 845
ьеи Уа1 И е АЗр 61 у 61 п Бег туг НТЗ Не рго меь А1а тНг ТНг 61 и
850 855 860
61 у Уа! Ьеи Уа1 А1а Бег А1а Бег Агд 61 у суз ьуз А1а Не Азп А1а
865 870 875 880
61 у 61 у 61 у А1а Уа1 ТНг Уа1 ьеи тНг А1а Азр 61 у Меь тНг Агд 61 у
885 890 895
РГО суз Азп Хаа РНе Рго ТНг Ьеи Хаа Агд А1а 61 у А1а А1а Ьуз Не
900 905 910
тгр ьеи Азр Бег 61 и 61и 61 у 61п Хаа Бег Меь ьуз Ьуз А1 а РНе Азп
915 920 925
5ег тНг Бег Агд РНе А1а Агд ьеи 61 п Нт 5 Н е ьуз ТНг А1а Ьеи А1а
930 935 940
- 160 016258
61 у тНг Ьеи Ьеи РНе 11е Агд РНе Ьуз тНг ТЬг ТНг 61 у Азр А1а Мех
945 950 955 960
61 у мех АЗП мех 11е зег ьуз 61 у Уа1 61 и ΗΊ5 А1а Ьеи 5ег ν*Ί Мех
965 970 975
Уа1 Хаа 61 и туг 61 у рНе АЗр Мех 61 и 11е Уа1 Зег Уа1 зег 61у
980 985 990
Азп туг Суз ТНг Азр ьуз ьуз Рго А1а А1а 11 е Азг ι Тгр 1' 1е Азр 61у
995 1000 1005
Агд 61 у 1010 Ьуз Зег Уа! Уа1 А1а 1015 61 и А1а ТНг Пе Рго 1020 61 у Азр Уа!
Уа1 Ьуэ Зег Уа1 Ьеи Ьуз Зег Азр Уа1 Азр А1а Ьеи Уа1 61 и Ьеи
1025 1030 1035
АЗП Пе Зег ьуз А5П Ьеи Не б!у Зег А1а Мех А1а 61 у зег Уа1
1040 1045 1050
61 у 61 у рНе АЗП А1а Нтз А1а А1а АЗП Пе Уа1 ТНг А1а Пе РНе
1055 1060 1065
Ьеи А1а тНг 61 у 61 п Аэр рго А1а 61 п АЗП Уа1 61 и 5ег 5ег АЗП
1070 1075 1080
Суз 11е ТНг Ьеи мех ьуз Азп Уа1 АЗр 61 у Азп Ьеи 61 п Пе 5ег
1085 1090 1095
Уа1 Зег мех РГО 5ег Пе 61 и уа1 61 у тНг Пе 61 у С1у 61 у ТНг
1100 1105 1110
11 е Ьеи 61 и Рго 61 п 61 у А1а мех Ьеи Азр ьеи Ьеи 61 у Уа1 Агд
1115 1120 1125
61 у Рго нтз Рго тНг АЗП Рго 61 у Азр Азп А1а Агд 61 п Ьеи А1а
ИЗО 1135 1140
Агд Пе 11е А1а А1а А1а Уа1 Ьеи А1а 61 у 61 и Ьеи Зег Ьеи Суз
1145 1150 1155
Зег А1а Ьеи А1а А1а 61 у Нтз Ьеи Уа! 61 п А1а Нтз МеТ ТЬг Нтз
1160 1165 1170
Азп Агд Зег А1а А1а рго тЬг Агд зег АЗП тНг РГО хаа хаа А1а
1175 1180 1185
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа ТНг Хаа И е Хаа зег
1190 1195
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (67)

1. Рекомбинантный гриб, характеризующийся тем, что:
а) указанный гриб является олеагенным и способен аккумулировать липид по меньшей мере примерно до 20% от своей сухой клеточной массы;
б) указанный гриб продуцирует по меньшей мере один каротиноид и способен аккумулировать продуцированный каротиноид по меньшей мере примерно до 1% от своей сухой клеточной массы;
при этом указанный гриб содержит по меньшей мере одну модификацию, выбранную из группы, включающей каротиногенные модификации, олеагенные модификации и их комбинации, и при этом указанная по меньшей мере одна модификация изменяет олеагенность гриба, придает грибу олеагенность, придает грибу способность продуцировать по меньшей мере один каротиноид до уровня по меньшей мере примерно 1% от своей сухой клеточной массы или придает грибу способность продуцировать по меньшей мере один каротиноид, который гриб не продуцирует в естественных условиях.
2. Гриб Уагго\\'1а. характеризующийся тем, что:
а) указанный гриб является олеагенным и способен аккумулировать липид по меньшей мере примерно до 20% от своей сухой клеточной массы;
б) указанный гриб продуцирует по меньшей мере один каротиноид и способен аккумулировать продуцированный каротиноид по меньшей мере примерно до 1% от своей сухой клеточной массы;
при этом указанный гриб содержит по меньшей мере одну модификацию, выбранную из группы,
- 161 016258 включающей каротиногенные модификации, олеагенные модификации и их комбинации, и при этом указанная по меньшей мере одна модификация изменяет олеагенность гриба, придает грибу олеагенность, придает грибу способность продуцировать по меньшей мере один каротиноид до уровня по меньшей мере примерно 1% от своей сухой клеточной массы или придает грибу способность продуцировать по меньшей мере один каротиноид, который гриб не продуцирует в естественных условиях.
3. Гриб Уагго\г1а по п.2, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна каротиногенная или олеагенная модификация представляет собой генетическую модификацию.
4. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по любому из пп.2, 3, отличающийся тем, что указанный гриб Уагго^1а представляет собой штамм Υ;·ιπΌ\νί;·ι ΙίροΙνΙίοα.
5. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по любому из пп.2, 3, отличающийся тем, что указанный гриб содержит по меньшей мере одну олеагенную модификацию.
6. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.5, отличающийся тем, что по меньшей мере одна олеагенная модификация изменяет олеагенность гриба.
7. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.5, отличающийся тем, что указанный гриб содержит дополнительно более одной каротиногенной модификации.
8. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.5, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна олеагенная модификация увеличивает экспрессию или активность по меньшей мере одного олеагенного полипептида.
9. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.5, отличающийся тем, что по меньшей мере одна олеагенная модификация уменьшает экспрессию или активность по меньшей мере одного олеагенного полипептида.
10. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.5, отличающийся тем, что по меньшей мере одна олеагенная модификация увеличивает экспрессию или активность по меньшей мере одного олеагенного полипептида и уменьшает экспрессию или активность по меньшей мере одного другого олеагенного полипептида.
11. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.8 или 9, отличающийся тем, что по меньшей мере один олеагенный полипептид выбран из группы, включающей полипептиды ацетил-КоА-карбоксилазы, полипептиды пируватдекарбоксилазы, полипептиды изоцитратдегидрогеназы, полипептиды АТФ (аденозинтрифосфат)цитратлиазы, полипептиды малатдегидрогеназы, полипептиды АМФ (аденозинмонофосфат)деаминазы и их комбинации.
12. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.8 или 9, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один олеагенный полипептид является по меньшей мере одним полипептидом, выбранным из группы, включающей полипептиды, которые представлены в табл. 1-6.
13. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по любому из пп.8-10, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна олеагенная модификация включает экспрессию по меньшей мере одного гетерологичного олеагенного полипептида в грибе.
14. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.13, отличающийся тем, что по меньшей мере одна олеагенная модификация включает экспрессию по меньшей мере одного гетерологичного гена, кодирующего по меньшей мере один гетерологичный олеагенный полипептид.
15. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.13, отличающийся тем, что по меньшей мере один гетерологичный олеагенный полипептид включает полипептид животного, в частности полипептид млекопитающего, полипептид насекомого, полипептид растения, грибной полипептид, дрожжевой полипептид, водорослевый полипептид, бактериальный полипептид, цианобактериальный полипептид, архебактериальный полипептид или протозойный полипептид.
16. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.13, отличающийся тем, что указанный гриб экспрессирует по меньшей мере два гетерологичных олеагенных полипептида.
17. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.16, отличающийся тем, что указанные по меньшей мере два гетерологичных олеагенных полипептида происходят из одного организма-источника.
18. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.16, отличающийся тем, что указанные по меньшей мере два гетерологичных олеагенных полипептида происходят меньшей мере из двух различных организмов-источников.
19. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по любому из пп.2, 3, отличающийся тем, что указанный гриб содержит более одной каротиногенных модификаций.
20. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.19, отличающийся тем, что указанные каротиногенные модификации придают грибу способность продуцировать по меньшей мере один каротиноид до уровня по меньшей мере примерно 1% от его сухой клеточной массы.
21. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.19, отличающийся тем, что указанные каротиногенные модификации придают грибу способность продуцировать по меньшей мере один каротиноид, который указанный гриб не продуцирует в природных условиях.
22. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.19, отличающийся тем, что указанный гриб дополнительно содержит по меньшей мере одну олеагенную модификацию, при этом указанная олеагенная модификация изменяет олеагенность гриба.
23. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι п.19, отличающийся тем, что указанные каротиногенные модификации придают указанному грибу способность продуцировать по меньшей мере один каротиноид до уровня, выбранного из группы, включающей по меньшей мере примерно 2%, по меньшей мере примерно 3%, по меньшей мере примерно 5% и по меньшей мере примерно 10% от сухой клеточной массы гриба.
- 162 016258
24. Гриб Υ;·ιπΌ\νί;·ι по п.19, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один каротиноид выбран из группы, состоящей из астаксантина, β-каротина, кантаксантина, зеаксантина, лютеина, ликопина и их комбинации.
25. Гриб ΥαΓΓονία по п.19, отличающийся тем, что преобладающий тип каротиноида выбран из группы, состоящей из астаксантина, зеаксантина и ликопина.
26. Гриб ΥαΓΓονία по п.19, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна каротиногенная модификация увеличивает экспрессию или активность каротиногенного полипептида.
27. Гриб ΥαΓΓονία по п.19, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна каротиногенная модификация уменьшает экспрессию или активность каротиногенного полипептида.
28. Гриб ΥαΓΓονία по п.19, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна каротиногенная модификация увеличивает экспрессию или активность по меньшей мере одного каротиногенного полипептида и уменьшает экспрессию или активность по меньшей мере одного другого каротиногенного полипептида.
29. Гриб ΥαΓΓονία по любому из пп.26-28, отличающийся тем, что указанные каротиногенные модификации включают экспрессию по меньшей мере одного гетерологичного каротиногенного полипептида.
30. Гриб ΥαΓΓονία по п.29, отличающийся тем, что каротиногенные модификации включают экспрессию по меньшей мере одного гетерологичного гена, кодирующего по меньшей мере один гетерологичный каротиногенный полипептид.
31. Гриб ΥαΓΓονία по п.26 или 27, отличающийся тем, что каротиногенный полипептид выбран из группы, включающей полипептид биосинтеза изопреноидов, полипептид биосинтеза каротиноидов, конкурентный полипептид биосинтеза изопреноидов и их комбинации.
32. Гриб ΥαΓΓονία по п.31, отличающийся тем, что полипептиды биосинтеза изопреноидов выбраны из группы, включающей полипептиды ацетоацетил-КоА-тиолазы, полипептиды НМС-СоА-синтазы, полипептиды НМС-СоА-редуктазы, полипептиды мевалонаткиназы, полипептиды фосфомевалонаткиназы, полипептиды мевалонатпирофосфатдекарбоксилазы, полипептиды ΙΡΡ-изомеразы, полипептиды РРРсинтазы и полипептиды ССРР-синтазы.
33. Гриб ΥαΓΓονία по п.31, отличающийся тем, что полипептиды биосинтеза каротиноидов выбраны из группы, включающей полипептиды фитоенсинтазы, полипептиды фитоендегидрогеназы, полипептиды ликопинциклазы, полипептиды каротиноидкетолазы, полипептиды каротиноидгидроксилазы, полипептиды астаксантинсинтазы, полипептиды каротиноидэпсилонгидроксилазы, полипептиды каротиноидглюкозилтрансферазы, полипептиды ликопинциклазы (субъединицы бета и эпсилон) и полипептиды ацил-КоА: диацилглицеринтрансферазы.
34. Гриб ΥαΓΓονία по п.31, отличающийся тем, что конкурентные полипептиды биосинтеза изопреноидов выбраны из группы, включающей полипептиды скваленсинтазы, полипептиды пренилдифосфатсинтазы и полипептида ПГБ-полипренилтрансферазы.
35. Гриб ΥαΓΓονία по п.31, отличающийся тем, что каротиногенный полипептид выбран из группы, включающей полипептиды, представленные в табл. 7-25, 29 и 30, а также комбинации указанных полипептидов.
36. Гриб ΥαΓΓονία по любому из пп.26-28, отличающийся тем, что каротиногенные модификации включают полипептид животного, в частности полипептид млекопитающего, полипептид насекомого, полипептид растения, грибной полипептид, дрожжевой полипептид, водорослевый полипептид, бактериальный полипептид, цианобактериальный полипептид, архебактериальный полипептид или протозойный полипептид.
37. Гриб ΥαΓΓονία по любому из пп.26-28, отличающийся тем, что каротиногенные модификации включают экспрессию по меньшей мере двух гетерологичных каротиногенных полипептидов.
38. Гриб ΥαΓΓονία по п.37, отличающийся тем, что указанные по меньшей мере два гетерологичных каротиногенных полипептида происходят из одного организма-источника.
39. Гриб ΥαΓΓονία по п.37, отличающийся тем, что указанные по меньшей мере два гетерологичных каротиногенных полипептида происходят по меньшей мере из двух различных организмов-источников.
40. Гриб ΥαΓΓονία по любому из пп.2, 3, отличающийся тем, что указанный гриб аккумулирует продуцированный по меньшей мере один каротиноид до уровня, выбранного из группы, включающей более примерно 1%, более примерно 2%, более примерно 3%, более примерно 5% и более примерно 10% от сухой клеточной массы гриба.
41. Гриб ΥαΓΓονία по любому из пп.2, 3, отличающийся тем, что указанный гриб аккумулирует липид в форме цитоплазматических телец.
42. Гриб ΥαΓΓονία по п.41, отличающийся тем, что по меньшей мере один каротиноид аккумулируется в форме цитоплазматических масляных телец.
43. Штамм ΥαΓΓονία ΙίροΙνΙίοα, содержащий одну или более модификаций, выбранных из группы, включающей олеагенную модификацию, каротиногенную модификацию и их комбинации, при этом указанный штамм аккумулирует по меньшей мере один каротиноид в количестве от 1 до 10% от сухой клеточной массы штамма.
- 163 016258
44. Штамм по п.43, отличающийся тем, что он аккумулирует липид в количестве от 20 до 50% от своей сухой клеточной массы.
45. Штамм по п.44, отличающийся тем, что указанный штамм аккумулирует липид в количестве от 20 до 50% от своей сухой клеточной массы в форме цитоплазматических масляных телец.
46. Штамм по п.43, отличающийся тем, что указанный штамм содержит каротиногенную модификацию, выбранную из группы, включающей:
а) экспрессию полипептида, выбранного из группы, состоящей из усеченного эндогенного полипептида НМС-СоА-редуктазы, в котором отсутствует Ν-концевой мембранный домен, ацетоацетил-КоАтиолазы, НМС-СоА-синтазы, ЕРР-синтазы и ССРР синтазы;
б) экспрессию гетерологичного полипептида, выбранного из группы, включающей фитоинсинтазу, фитоиндесатуразу, ликопинциклазу, каротиноидкетолазу, каротиноидгидроксилазу и их комбинации.
47. Штамм по любому из пп.43-46, отличающийся тем, что указанный штамм аккумулирует каротиноид в количестве 1-10% от своей сухой клеточной массы, при этом каротиноид выбран из группы, состоящей из β-каротина, астаксантина, зеаксантина и ликопина.
48. Штамм по п.43, отличающийся тем, что указанный штамм содержит каротиногенную модификацию, выбранную из группы, включающей:
а) экспрессию полипептида, выбранного из группы, включающей усеченный эндогенный полипептид НМС-СоА-редуктазы, в котором отсутствует Ν-концевой мембранный домен, ацетоацетил-КоАтиолазы, НМС-СоА-синтазы, ЕРР-синтазы и ССРР синтазы;
б) экспрессию гетерологичного полипептида, выбранного из группы, включающей фитоенсинтазу, фитоендесатуразу, ликопинциклазу, каротиноидкетолазу, каротиноидгидроксилазу, астаксантинсинтазу, каротиноидэпсилонгидроксилазу, ликопинциклазу (субъединицы бета и эпсилон), каротиноидглюкозилтрансферазу, ацил-КоА: диацилглицеринацилтрансферазу и их комбинации.
49. Способ продуцирования каротиноида, включающий культивирование генетически модифицированного гриба в условиях, которые обеспечивают продуцирование каротиноида, причем указанный гриб характеризуется тем, что:
а) указанный гриб является олеагенным и способен аккумулировать липид по меньшей мере примерно до 20% от своей сухой клеточной массы;
б) указанный гриб продуцирует по меньшей мере один каротиноид и способен аккумулировать продуцированный каротиноид по меньшей мере примерно до 1% от своей сухой клеточной массы;
при этом указанный гриб содержит по меньшей мере одну модификацию, выбранную из группы, включающей каротиногенные модификации, олеагенные модификации и их комбинации, и при этом указанная по меньшей мере одна модификация изменяет олеагенность гриба, придает грибу олеагенность, придает грибу способность продуцировать по меньшей мере один каротиноид до уровня по меньшей мере примерно 1% от своей сухой клеточной массы или придает грибу способность продуцировать по меньшей мере один каротиноид, который гриб не продуцирует в естественных условиях.
50. Способ по п.49, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает выделение продуцируемого каротиноида.
51. Способ по п.50, отличающийся тем, что выделение включает фракционирование среды культивирования с получением по меньшей мере одной фракции, обогащенной каротиноидом.
52. Способ по п.50, отличающийся тем, что стадия культивирования включает культивирование гриба в условиях, которые обеспечивают аккумулирование каротиноида в цитоплазматических масляных тельцах, а выделение включает получение масла из цитоплазматических телец.
53. Способ по п.49, отличающийся тем, что каротиноид выбран из группы, включающей астаксантин, β-каротин, кантаксантин, зеаксантин, лютеин, ликопин и их комбинации.
54. Способ по п.49, отличающийся тем, что указанный каротиноид включает астаксантин.
55. Способ по п.49, отличающийся тем, что указанный каротиноид включает β-каротин.
56. Способ по п.49, отличающийся тем, что указанный каротиноид включает ликопин.
57. Способ по п.49, отличающийся тем, что указанный каротиноид включает зеаксантин.
58. Способ получения пищевой или кормовой добавки, включающей каротиноид, который содержит следующие стадии:
а) культивирование гриба по любому из пп.1-4 в условиях, которые обеспечивают продуцирование каротиноида;
б) выделение каротиноида и
в) объединение выделенного каротиноида с одним или более другими кормовыми или пищевыми дополнительными компонентами.
59. Способ продуцирования каротиноида, включающий культивирование генетически модифицированного гриба Уагго\\за в условиях, которые обеспечивают продуцирование каротиноида;
при этом указанный генетически модифицированный гриб Уагго\\'1а характеризуется следующим:
а) указанный гриб является олеагенным и способен аккумулировать липид по меньшей мере примерно до 20% от своей сухой клеточной массы;
- 164 016258
б) в результате генетической модификации указанный гриб продуцирует по меньшей мере один каротиноид и способен аккумулировать продуцированный каротиноид по меньшей мере примерно до 1% от своей сухой клеточной массы.
60. Способ по п.59, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает выделение продуцируемого каротиноида.
61. Способ по п.60, отличающийся тем, что указанное выделение включает фракционирование среды культивирования с получением по меньшей мере одной фракции, обогащенной каротиноидом.
62. Способ по п.60, отличающийся тем, что стадия культивирования включает культивирование гриба в условиях, которые обеспечивают аккумулирование каротиноида в цитоплазматических масляных тельцах, а выделение включает получение масла из цитоплазматических телец.
63. Способ по п.59, отличающийся тем, что каротиноид выбран из группы, включающей астаксантин, β-каротин, кантаксантин, зеаксантин, лютеин, ликопин и их комбинации.
64. Способ по п.59, отличающийся тем, что указанный каротиноид включает астаксантин.
65. Способ по п.59, отличающийся тем, что указанный каротиноид включает β-каротин.
66. Способ по п.59, отличающийся тем, что указанный каротиноид включает ликопин.
67. Способ по п.59, отличающийся тем, что указанный каротиноид включает зеаксантин.
EA200701974A 2005-03-18 2006-03-20 Рекомбинантные грибы, продуцирующие каротиноиды, и способы их применения EA016258B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US66362105P 2005-03-18 2005-03-18
PCT/US2006/010271 WO2006102342A2 (en) 2005-03-18 2006-03-20 Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200701974A1 EA200701974A1 (ru) 2008-08-29
EA016258B1 true EA016258B1 (ru) 2012-03-30

Family

ID=37024534

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200701974A EA016258B1 (ru) 2005-03-18 2006-03-20 Рекомбинантные грибы, продуцирующие каротиноиды, и способы их применения

Country Status (15)

Country Link
US (3) US7851199B2 (ru)
EP (2) EP1866428A2 (ru)
JP (4) JP2008537878A (ru)
KR (1) KR101482081B1 (ru)
CN (2) CN103589650A (ru)
AU (1) AU2006227165B2 (ru)
BR (1) BRPI0609040B1 (ru)
CA (1) CA2602183C (ru)
EA (1) EA016258B1 (ru)
ES (1) ES2546484T3 (ru)
IL (1) IL185713A0 (ru)
NO (1) NO20075200L (ru)
UA (1) UA94038C2 (ru)
WO (1) WO2006102342A2 (ru)
ZA (1) ZA200707651B (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2723620C2 (ru) * 2012-07-13 2020-06-16 Калиста, Инк. Система, способы и композиции для биопереработки

Families Citing this family (138)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8577205B2 (en) * 1998-07-30 2013-11-05 Tivo Inc. Digital video recording system
WO2006055920A2 (en) * 2004-11-19 2006-05-26 Tivo Inc. Method and apparatus for secure transfer of previously broadcasted content
EP1866428A2 (en) 2005-03-18 2007-12-19 Microbia, Inc. Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi
TR201802449T4 (tr) 2005-10-26 2018-03-21 Novartis Ag Ailesel akdeniz hummasının anti ıl-1beta antikorları ile tedavisi.
WO2007120423A2 (en) * 2006-03-20 2007-10-25 Microbia Precision Engineering Production of quinone derived compounds in oleaginous yeast and fungi
EP2078092A2 (en) 2006-09-28 2009-07-15 Microbia, Inc. Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi
US8846374B2 (en) * 2006-12-12 2014-09-30 E I Du Pont De Nemours And Company Carotenoid production in a recombinant oleaginous yeast
US20090004715A1 (en) 2007-06-01 2009-01-01 Solazyme, Inc. Glycerol Feedstock Utilization for Oil-Based Fuel Manufacturing
JP2009000046A (ja) * 2007-06-21 2009-01-08 Hitachi Zosen Corp トチュウのメバロン酸経路の酵素をコードする遺伝子
WO2009006386A2 (en) * 2007-06-29 2009-01-08 The Regents Of The University Of California Host cells and methods for producing isoprenyl alkanoates
WO2009010826A2 (en) * 2007-07-13 2009-01-22 Ocean Nutrition Canada Ltd. Novel genes and methods of producing carotenoids
CN103290035B (zh) 2007-10-26 2015-01-21 三得利控股株式会社 新型atp:柠檬酸裂解酶基因
US8455239B2 (en) 2007-12-23 2013-06-04 Gevo, Inc. Yeast organism producing isobutanol at a high yield
CA2710359C (en) 2007-12-23 2018-02-20 Gevo, Inc. Yeast organism producing isobutanol at a high yield
MY153731A (en) 2007-12-27 2015-03-13 Gevo Inc Recovery of higher alcohols from dilute aqueous solutions
CN102057048B (zh) 2008-04-09 2015-01-21 索拉兹米公司 微生物生物质和微生物油的直接化学修饰
EP2294193A4 (en) * 2008-04-10 2012-11-28 Dsm Ip Assets Bv PRODUCTION OF CAROTENOIDS IN YEAST AND OLEAGINOUS FUNGI
CA2725175A1 (en) * 2008-05-23 2009-11-26 Cibus Oils, Llc Production of squalene using yeast
WO2010019696A2 (en) 2008-08-12 2010-02-18 Allylix, Inc. Method for production of isoprenoids
WO2010062707A1 (en) * 2008-10-30 2010-06-03 Joule Unlimited, Inc. Methods and compositions for producing carbon-based products of interest in micro-organisms
WO2010053636A1 (en) * 2008-11-06 2010-05-14 Tate & Lyle Technology Ltd Enhanced production and purification of a natural high intensity sweetener
MY182693A (en) 2008-11-28 2021-01-29 Terravia Holdings Inc Production of tailored oils in heterotrophic microorganisms
CN102422469B (zh) 2009-05-01 2015-04-08 日产自动车株式会社 燃料电池用气体扩散层
CA2763424C (en) 2009-06-16 2018-06-12 E.I. Du Pont De Nemours And Company Improvement of long chain omega-3 and omega-6 polyunsaturated fatty acid biosynthesis by expression of acyl-coa lysophospholipid acyltransferases
EP2292741A1 (en) * 2009-08-26 2011-03-09 OrganoBalance GmbH Genetically modified organisms for the production of lipids
HUE034245T2 (en) * 2009-11-23 2018-02-28 Nucelis Llc Methods and preparations for the preparation of squalene using yeast
WO2011133610A1 (en) 2010-04-22 2011-10-27 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for obtaining polyunsaturated fatty acid-containing compositions from microbial biomass
SG10201504187YA (en) 2010-05-28 2015-06-29 Solazyme Inc Tailored oils produced from recombinant heterotrophic microorganisms
KR101283149B1 (ko) 2010-08-06 2013-07-05 문기혁 만가닥버섯 느타리버섯 팽이버섯 새송이 버섯과 파피아 로도자이마 효모의 혼합배양기술 개발과 아스타잔틴이 함유된 항산화효과가 있는 사료첨가용 생균제의 개발
US20120040076A1 (en) 2010-08-11 2012-02-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Aquaculture feed compositions
JP2013535988A (ja) 2010-08-26 2013-09-19 イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー 変異ｈｐｇｇモチーフおよびｈｄａｓｈモチーフδ５デサチュラーゼおよび多価不飽和脂肪酸の製造におけるそれらの使用
AU2011293180B2 (en) 2010-08-26 2017-03-02 E. I. Du Pont De Nemours And Company Recombinant microbial host cells for high eicosapentaenoic acid production
KR20140008295A (ko) 2010-08-26 2014-01-21 이 아이 듀폰 디 네모아 앤드 캄파니 돌연변이 델타-9 연장효소 및 다중불포화 지방산의 제조에서의 그들의 용도
CN108823254A (zh) 2010-11-03 2018-11-16 柯碧恩生物技术公司 具有降低倾点的微生物油、从其中产生的介电流体、以及相关方法
CN102071154B (zh) * 2010-12-08 2013-05-22 江南大学 一种产α-酮戊二酸酵母工程菌及其构建方法
CN103502461A (zh) * 2010-12-30 2014-01-08 纳幕尔杜邦公司 在含油酵母中通过提高yap1转录因子活性提高油含量
CN103459610A (zh) * 2011-01-28 2013-12-18 阿迈瑞斯公司 凝胶包裹的微集落筛选
MX344012B (es) 2011-02-02 2016-12-02 Terravia Holdings Inc Aceites adaptados producidos a partir de microorganismos oleaginosos recombinantes.
KR101944841B1 (ko) * 2011-02-28 2019-02-01 노보자임스 에이/에스 테르펜을 생산하기 위한 효모 세포와 이의 용도
WO2012135773A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 E. I. Du Pont De Nemours And Company Yarrowia diacylglycerol acyltransferase promoter regions for gene expression in yeast
WO2012135777A1 (en) 2011-04-01 2012-10-04 E. I. Du Pont De Nemours And Company Yarrowia esterase/lipase promoter regions for gene expression in yeast
US20120247066A1 (en) 2011-04-01 2012-10-04 Ice House America, Llc Ice bagging apparatus and methods
WO2012138613A1 (en) 2011-04-05 2012-10-11 E. I. Du Pont De Nemours And Company Yarrowia n-alkane-hydroxylating cytochrome p450 promoter regions for gene expression in yeast
WO2012138612A1 (en) 2011-04-07 2012-10-11 E. I. Du Pont De Nemours And Company Yarrowia peroxisomal 2,4-dienoyl-coa reductase promoter regions for gene expression in yeast
US8846352B2 (en) 2011-05-06 2014-09-30 Solazyme, Inc. Genetically engineered microorganisms that metabolize xylose
CN102250958B (zh) * 2011-07-08 2013-01-02 山东大学 一种体外酶反应生成的类胡萝卜素的快速提取方法
CN102286593B (zh) * 2011-07-08 2013-03-13 山东大学 一种提高八氢番茄红素脱氢酶体外反应速率的方法
MX355028B (es) 2012-01-23 2018-03-28 Dsm Ip Assets Bv Produccion de diterpeno.
US10059974B2 (en) * 2012-02-06 2018-08-28 The Research Foundation Of The City University Of New York Cells and methods for producing lutein
CN104204853A (zh) * 2012-03-30 2014-12-10 皇家飞利浦有限公司 包括运动传感器的具有gui接口的便携式医学成像仪
US8916365B2 (en) 2012-04-03 2014-12-23 E I Du Pont De Nemours And Company Expression of cytosolic malic enzyme in transgenic Yarrowia to increase lipid production
KR20150001830A (ko) 2012-04-18 2015-01-06 솔라짐, 인코포레이티드 맞춤 오일
CA2877334A1 (en) 2012-06-19 2013-12-27 E. I. Du Pont De Nemours And Company Mutant acyl-coa:lysophosphatidylcholine acyltransferases
US10738328B1 (en) 2012-11-27 2020-08-11 University Of Kentucky Research Foundation Method and system for terpene production platforms in yeast
CA2895166C (en) 2012-12-20 2022-10-04 Dsm Ip Assets B.V. Acetyl transferases and their use for producing carotenoids
US10081797B2 (en) 2012-12-20 2018-09-25 Dsm Ip Assets B.V. Carotene hydroxylases and their use for producing carotenoids
US9828609B2 (en) 2013-03-12 2017-11-28 International Park Of Creativity Biological devices and methods for increasing the production of lycopene from plants
EA035489B1 (ru) 2013-03-15 2020-06-24 ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. Применение термофильных нуклеаз для разрушения нуклеиновых кислот в клетках-хозяевах
EP2993993A2 (en) 2013-04-26 2016-03-16 Solazyme, Inc. Low polyunsaturated fatty acid oils and uses thereof
DE102013209950A1 (de) 2013-05-28 2014-12-04 Technische Universität Dresden Hefestamm und Verfahren zur Produktion von Lycopin
CA2853585A1 (en) * 2013-06-05 2014-12-05 Vale S.A. Process for obtaining copper nanoparticles from rhodotorula mucilaginosa and use of rhodotorula mucilaginosa in bioremediation of wastewater and production of copper nanoparticles
SG11201602638SA (en) 2013-10-04 2016-05-30 Solazyme Inc Tailored oils
BR112016012891B8 (pt) 2013-12-06 2022-01-04 Dsm Ip Assets Bv Formulação sólida e processo para a preparação da mesma
BR112016017468A2 (pt) 2014-01-31 2017-10-10 Dsm Ip Assets Bv promotores adequados para a expressão de genes heterólogos em leveduras
CN106795477A (zh) * 2014-05-16 2017-05-31 中央研究院 用以制备虾红素的重组多核苷酸序列及其应用
CN105316246B (zh) * 2014-06-03 2019-10-01 上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司 β-胡萝卜素高产菌种及其应用
CN106574255A (zh) 2014-07-10 2017-04-19 泰拉瑞亚控股公司 酮脂酰acp合酶基因及其用途
CN104152473B (zh) * 2014-08-18 2019-07-12 中国烟草总公司郑州烟草研究院 烟草类胡萝卜素异构酶基因及其应用
CN104293874B (zh) * 2014-09-23 2017-12-01 中国海洋大学 一种制备游离虾青素的方法
JP6436417B2 (ja) * 2014-12-01 2018-12-12 住友ゴム工業株式会社 アモルファ−４，１１−ジエン増産方法及び天然ゴム増産方法
ES2761689T3 (es) 2014-12-09 2020-05-20 Dsm Ip Assets Bv Métodos para producir abienol
ES2787225T3 (es) * 2014-12-15 2020-10-15 Temasek Life Sciences Laboratory Ltd Métodos para ajustar los niveles de producción de carotenoides y composiciones en géneros de Rhodosporidium y Rhodotorula
WO2016110512A1 (en) 2015-01-06 2016-07-14 Dsm Ip Assets B.V. A crispr-cas system for a yeast host cell
CN104673813B (zh) * 2015-03-24 2017-07-28 武汉大学 一种蛇孢假壳素类化合物母核合成基因AuOS及其应用
BR112017022488A2 (pt) 2015-04-21 2018-07-17 Dsm Ip Assets Bv produção microbiana de terpenoides
CN105087406B (zh) * 2015-07-22 2019-03-05 天津大学 一种重组酵母菌株及其构建方法和应用
CN104962488B (zh) * 2015-07-22 2019-03-05 天津大学 一种重组酵母菌株及其构建方法和应用
CN108779451A (zh) * 2016-01-08 2018-11-09 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 解脂耶氏酵母的交配型转换
JP2019165635A (ja) * 2016-08-10 2019-10-03 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
CN109890961B (zh) 2016-10-27 2024-03-08 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 香叶基香叶基焦磷酸酯合酶
CN106676019B (zh) * 2016-11-28 2019-09-17 无锡新和源发酵技术研究院有限公司 一种利用微生物发酵生产虾青素的方法
CN108118007A (zh) * 2016-11-30 2018-06-05 上海医药工业研究院 一种基因工程菌生产β-胡萝卜素的方法及其基因工程菌
CN106858552B (zh) * 2017-01-21 2020-07-31 湖北工业大学 一种富含类胡萝卜素的油橄榄酱的制备方法
EP3574105B1 (en) 2017-01-25 2021-04-21 Amyris Bio Products Portugal, Unipessoal, LDA Co-production of a sesquiterpene and a carotenoid
CN107058526B (zh) * 2017-03-21 2020-12-29 济南大学 一种基于基因对共表达模式动态关联解析玉米籽粒类胡萝卜素代谢调控机制的方法
CN109234216B (zh) * 2017-07-10 2022-05-20 上海医药工业研究院 一种生产鲨烯的基因工程菌及其方法
WO2019055326A1 (en) 2017-09-12 2019-03-21 Biocapital Holdings, Llc BIOLOGICAL DEVICES AND METHODS OF USE FOR PRODUCING CAROTENOIDS
BR112020005770A2 (pt) 2017-09-25 2020-09-24 Dsm Ip Assets B.V. produção de trans-retinal
BR112020005769A2 (pt) * 2017-09-25 2020-09-24 Dsm Ip Assets B.V. produção de ésteres retinílicos
EP3687487A1 (en) 2017-09-25 2020-08-05 DSM IP Assets B.V. Production of retinyl esters
JP7513520B2 (ja) 2017-09-25 2024-07-09 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． レチノールの生産
CN111107834A (zh) 2017-09-25 2020-05-05 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 类视黄醇的生物合成
WO2020060948A1 (en) 2018-09-17 2020-03-26 Levadura Biotechnology, Inc. Production of cannabinoids in yeast using a fatty acid feedstock
CN109536518A (zh) * 2018-10-31 2019-03-29 昆明理工大学 一种八氢番茄红素脱氢酶基因RKcrtI及其应用
CN111321156B (zh) * 2018-12-14 2021-05-25 华中农业大学 OsLUT1基因在调控水稻光保护中的应用
WO2020141168A1 (en) 2018-12-31 2020-07-09 Dsm Ip Assets B.V. Novel acetyl-transferases
EP4646937A3 (en) * 2019-01-03 2026-01-14 Corbion Biotech, Inc. Process for manufacturing lysed cell suspension
CN109666683B (zh) * 2019-02-27 2021-10-29 昆明理工大学 乙酰辅酶A乙酰转移酶基因RKAcaT2及其应用
CN109777815B (zh) * 2019-03-28 2021-10-29 昆明理工大学 HMG-CoA合成酶基因RKHMGCS及其应用
WO2021009194A1 (en) 2019-07-16 2021-01-21 Dsm Ip Assets B.V. Novel beta-carotene oxidases
CN110499259B (zh) * 2019-07-22 2021-07-27 浙江工业大学 一种解酯耶氏酵母yw100-1及其应用
US12270065B2 (en) 2019-08-01 2025-04-08 Dsm Ip Assets B.V. Methods for improving titer and purity of beta carotene fermentation in Blakeslea trispora (beta-carotene fermentation method)
CN110540952B (zh) * 2019-09-09 2021-05-11 北京科技大学 产叶黄素原核微生物及其在生产叶黄素中的应用
CN110747206B (zh) * 2019-11-05 2021-11-23 昆明理工大学 3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶a还原酶基因rkhmgr及其应用
EP4085132A1 (en) 2019-12-30 2022-11-09 DSM IP Assets B.V. Lipase-modified strain
CN111171129B (zh) * 2020-03-09 2022-02-01 山东省农业科学院作物研究所 小麦类胡萝卜素合成途径关键基因Lcye突变体及其应用
CN111454854B (zh) * 2020-05-02 2022-05-06 昆明理工大学 一株产虾青素的红冬孢酵母基因工程菌株
WO2022003130A2 (en) 2020-07-01 2022-01-06 Dsm Ip Assets B.V. Yeast expression system
EP4179067A1 (en) * 2020-07-08 2023-05-17 The Regents of University of California Modified yeast host cells useful for producing isoprenol
WO2023006179A1 (en) 2020-07-27 2023-02-02 Dsm Ip Assets B.V. Method to produce retinyl acetate
US20230265443A1 (en) 2020-07-27 2023-08-24 Dsm Ip Assets B.V. Reduction of fatty acid retinyl ester formation
US20240018564A1 (en) 2020-10-30 2024-01-18 Dsm Ip Assets B.V. In situ two-phase extraction system
WO2022090547A1 (en) 2020-10-30 2022-05-05 Dsm Ip Assets B.V. Production of carotenoids by fermentation
WO2022090548A1 (en) 2020-10-30 2022-05-05 Dsm Ip Assets B.V. Fermentative production of isoprenoids
CN113151340B (zh) * 2020-11-25 2023-03-24 广州智特奇生物科技股份有限公司 一种提高β-胡萝卜素产量的基因工程菌及其应用
CN113308387B (zh) * 2021-03-31 2023-01-03 南京工业大学 联产不饱和脂肪酸和类胡萝卜素的菌株及其应用
CA3215316A1 (en) 2021-04-16 2022-10-20 Andrew P. MAGYAR Methods of isoprenoid synthesis using a genetically engineered hydrocarbonoclastic organism in a biofilm bioreactor
KR102600520B1 (ko) * 2021-06-09 2023-11-09 씨제이제일제당 주식회사 제라닐제라닐 피로포스페이트 신타아제 변이체 및 이를 이용한 테트라테르펜, 이의 전구체, 및 테트라테르펜을 전구체로 하는 물질의 생산방법
WO2023006851A1 (en) 2021-07-27 2023-02-02 Dsm Ip Assets B.V. Fermentative production of retinyl acetate in the presence of ethanol
CN113621631A (zh) * 2021-08-11 2021-11-09 昆明理工大学 一种甲羟戊酸激酶基因rkmk及其应用
US20250002873A1 (en) 2021-10-19 2025-01-02 Dsm Ip Assets B.V. Retinoid production
CN114540403B (zh) * 2021-11-12 2024-04-05 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 酯化虾青素的制造方法及酯化基因的应用
CA3249441A1 (en) * 2022-01-28 2023-08-03 Massachusetts Institute Of Technology PROCESSES FOR PRODUCING CAROTENOIDS FROM ACID WHEY
US20250109422A1 (en) 2022-02-02 2025-04-03 Dsm Ip Assets B.V. Yarrowia production process
KR102828744B1 (ko) * 2022-03-23 2025-07-03 씨제이제일제당 주식회사 두날리엘라 살리나 유래의 제라닐제라닐 피로포스페이트 신타아제를 포함하는 카로티노이드 또는 이를 전구체로 하는 물질 생산 미생물 및 이를 이용한 카로티노이드 또는 레티노이드 생산방법
KR102828745B1 (ko) * 2022-03-23 2025-07-03 씨제이제일제당 주식회사 헤마토코쿠스 플루비알리스 유래의 제라닐제라닐 피로포스페이트 신타아제를 포함하는 카로티노이드 또는 이를 전구체로 하는 물질 생산 미생물 및 이를 이용한 카로티노이드 또는 레티노이드 생산방법
CN115029257B (zh) * 2022-05-05 2023-09-26 南京工业大学 产β-胡萝卜素的重组解脂耶氏酵母及其构建方法和应用
CN114806914B (zh) * 2022-05-20 2024-01-30 南京工业大学 一种高产β-胡萝卜素的解脂耶氏酵母菌及其应用
CN115160443B (zh) * 2022-06-21 2026-04-07 广州智特奇生物科技股份有限公司 一种提高玉米黄质产量的基因工程菌及其构建方法与应用
CN115851861A (zh) * 2022-11-11 2023-03-28 中国农业科学院油料作物研究所 酯化基因用于对虾青素进行酯化的应用
US20240216321A1 (en) 2022-12-02 2024-07-04 Dsm Ip Assets B.V. Fermentatively-produced retinoid containing compositions, and the methdos of making and using the same
CN120603950A (zh) 2023-01-30 2025-09-05 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 Carrp酶变体及其在生产类胡萝卜素和脱辅基类胡萝卜素中的用途
JP2026502491A (ja) 2023-01-30 2026-01-23 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． アセチルトランスフェラーゼの新規変異体ｓｂ－ａｔｆ
JP2026502490A (ja) 2023-01-30 2026-01-23 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． 新規なアセチルトランスフェラーゼ
CN118064533B (zh) * 2023-07-04 2024-11-29 广东筑美生物医疗科技有限公司 一种强化解脂耶氏酵母生产β-胡萝卜素的方法
WO2025228974A1 (en) 2024-04-30 2025-11-06 Basf Se Improved method and enzymes for the production of vitamin a
CN118909806A (zh) * 2024-09-24 2024-11-08 广东芭薇生物科技股份有限公司 一种高产类胡萝卜素的红酵母及其发酵产物及应用
CN119736365B (zh) * 2025-03-06 2025-06-17 云南西草资源开发有限公司 一种含类胡萝卜素的发酵产物的制备方法及其应用

Family Cites Families (274)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ190194A (en) 1978-05-08 1982-02-23 Cpc International Inc Production of oil by fermenting yeast in fatty acids
US4318987A (en) 1979-11-16 1982-03-09 Murillo Araujo Francisco J β-Carotene producing strains of the fungus phycomyces blakesleenus
EP0052777A1 (de) 1980-11-20 1982-06-02 F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft Verfahren zur Extraktion von beta-Carotin aus Algen
US4880741A (en) 1983-10-06 1989-11-14 Pfizer Inc. Process for transformation of Yarrowia lipolytica
US5071764A (en) 1983-10-06 1991-12-10 Pfizer Inc. Process for integrative transformation of yarrowia lipolytica
IN163393B (ru) 1983-10-06 1988-09-17 Pfizer
DE3572688D1 (en) 1984-06-26 1989-10-05 Agronomique Inst Nat Rech Transformation vector for yeast yarrowia lipolytica, transformation process and transformed yeast
DE3587044T2 (de) 1985-01-22 1993-06-03 Japan As Represented By Direct Verfahren zur herstellung von lipiden aus fungusmassen.
US4680314A (en) 1985-08-30 1987-07-14 Microbio Resources, Inc. Process for producing a naturally-derived carotene/oil composition by direct extraction from algae
US4937189A (en) 1985-10-18 1990-06-26 Pfizer Inc. Expression and secretion of heterologous proteins by Yarrowia lipolytica transformants
US4851339A (en) 1986-04-01 1989-07-25 Hills Christopher B Extraction of anti-mutagenic pigments from algae and vegetables
DK199887D0 (da) 1987-04-15 1987-04-15 Danisco Bioteknologi As Gaerstamme
US5356810A (en) 1987-04-15 1994-10-18 Gist-Brocades N.V. Astaxanthin-producing yeast cells, methods for their preparation and their use
US5360730A (en) 1987-06-05 1994-11-01 Universal Foods Corporation Zeaxanthin producing strains of Neospongiococcum Excentricum
US5356809A (en) 1988-08-08 1994-10-18 Igene Biotechnology, Inc. Processes for in vivo production of astaxanthin and phaffia rhodozyma yeast of enhanced astaxanthin content
EP0436562B1 (en) 1988-08-08 1997-01-15 Igene Biotechnology, Inc. Process for in vivo production of astaxanthin and Phaffia rhodozyma yeast of enhanced astaxanthin content
US5182208A (en) 1988-08-08 1993-01-26 Igene Biotechnology, Inc. Processes for in vivo production of astaxanthin and phaffia rhodozyma yeast of enhanced astaxanthin content
US6849434B2 (en) 1988-08-31 2005-02-01 University Of Florida Research Foundation, Inc. Ethanol production in recombinant hosts
JP2950888B2 (ja) 1989-04-21 1999-09-20 麒麟麦酒株式会社 カロチノイドの合成に有用なｄｎａ鎖
US5429939A (en) 1989-04-21 1995-07-04 Kirin Beer Kabushiki Kaisha DNA sequences useful for the synthesis of carotenoids
NZ232366A (en) 1989-07-28 1991-08-27 Igene Biotechnology Inc Production of astaxanthin and the enhancement of its content in yeast
EP0427405A1 (en) 1989-10-27 1991-05-15 Enzymatix Ltd. Yeasts and their use in astaxanthin production
US5164308A (en) 1990-05-21 1992-11-17 Martek Corporation Preparation of labelled triglyceride oils by cultivation of microorganisms
US5306862A (en) 1990-10-12 1994-04-26 Amoco Corporation Method and composition for increasing sterol accumulation in higher plants
US5212088A (en) 1990-10-23 1993-05-18 Phillips Petroleum Company Spheroplast fusions of phaffia rhodozyma cells
US5460949A (en) 1990-11-15 1995-10-24 Amoco Corporation Method and composition for increasing the accumulation of squalene and specific sterols in yeast
ES2157898T3 (es) 1991-01-24 2001-09-01 Martek Corp Aceites microbianos y usos de los mismos.
CA2088667A1 (en) 1991-06-06 1992-12-07 Tetsuro Kuga Process for producing astaxanthin by fermentation
US5648261A (en) 1991-12-17 1997-07-15 Gist-Brocades, N.V. Strains of Phaffia rhodozyma containing high levels of astaxanthin and low levels of 3-hydroxy-3',4'-didehydro-β, Ψ-caroten-4-one (HDCO)
US5328845A (en) 1992-03-27 1994-07-12 Universal Foods Corporation Fungal negative microorganism capable of producing high levels of beta-carotene
IL104736A0 (en) 1992-03-27 1993-06-10 Zeagen Inc Method for producing beta-carotene using a fungal mated culture
CN1079001A (zh) 1992-04-03 1993-12-01 吉斯特·布罗卡迪斯公司 间性杂合的须霉属(phycomyces)
EP0587872B1 (en) 1992-04-03 2000-05-31 Dsm N.V. Intersexual heterozygous phycomyces
NZ248628A (en) 1992-09-11 1996-02-27 Gist Brocades Nv Transformed phaffia (yeast) strains and methods and vectors used
US5310554A (en) 1992-10-27 1994-05-10 Natural Carotene Corporation High purity beta-carotene
FR2700552B1 (fr) 1993-01-19 1995-04-21 Pernod Ricard Mutants de Phaffia rhodozyma, procédé de production de beta-carotène et utilisation de biomasse riche en beta-carotène.
ZA94614B (en) 1993-02-11 1994-08-12 Sasol Chem Ind Pty Solvent extraction
US5466599A (en) 1993-04-19 1995-11-14 Universal Foods Corporation Astaxanthin over-producing strains of phaffia rhodozyma
US5607839A (en) 1993-07-22 1997-03-04 Nippon Oil Company, Ltd. Bacteria belonging to new genus process for production of carotenoids using same
EP0716704A1 (en) 1993-09-02 1996-06-19 Pfizer Inc. MULTIPLE INTEGRATIVE VECTORS AND $i(YARROWIA LIPOLYTICA) TRANSFORMANTS
US5792903A (en) 1993-10-25 1998-08-11 Yissum Research Development Company Of Hebrew University Of Jerusalem Lycopene cyclase gene
WO1995018220A1 (en) 1993-12-27 1995-07-06 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Dna chain useful for xanthophyll synthesis and process for producing xanthophylls
JPH07242621A (ja) 1994-03-02 1995-09-19 Nippon Oil Co Ltd カロチノイド化合物の抽出方法
JP3198842B2 (ja) 1994-03-24 2001-08-13 トヨタ自動車株式会社 ゲラニルゲラニル二リン酸合成酵素およびそれをコードするｄｎａ
JPH08173170A (ja) 1994-05-25 1996-07-09 Kirin Brewery Co Ltd キャンディダ・ユティリス酵母の形質転換系、およびそれによる異種遺伝子の発現
WO1998055632A1 (en) 1997-06-05 1998-12-10 Calgene Llc FATTY ACYL-CoA: FATTY ALCOHOL ACYLTRANSFERASES
JP3087575B2 (ja) 1994-07-29 2000-09-11 トヨタ自動車株式会社 ヘプタプレニル二リン酸合成酵素およびそれをコードするｄｎａ
EP0776356B1 (de) 1994-08-16 1999-06-30 Dr. Frische GmbH Verfahren zur gewinnung von nicht wasserlöslichen, nativen produkten aus nativen stoffgemengen mit hilfe der zentrifugalkraft
WO1996006172A1 (en) 1994-08-23 1996-02-29 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Keto group introducing enzyme, dna coding for the same, and process for producing ketocarotenoid
ATE218162T1 (de) 1994-08-23 2002-06-15 Kirin Brewery Ketogruppe-einführendes enzym, dafür kodierende dna und verfahren zur herstellung von ketocarotenoid
JP3727077B2 (ja) 1994-09-27 2005-12-14 新日本石油株式会社 バクテリア菌体からのカロチノイド化合物の抽出方法
EP0785995A1 (en) 1994-10-14 1997-07-30 Novo Nordisk A/S A novel enzyme with beta-1,3-glucanase activity
US5786193A (en) 1995-01-11 1998-07-28 Human Genome Sciences, Inc. Human geranylgeranyl pyrophosphate synthethase
EP0812360A4 (en) 1995-01-11 2000-08-09 Human Genome Sciences Inc HUMAN GERANYL-GERANYL-PYROPHOSPHATE SYNTHETASE
US5583019A (en) 1995-01-24 1996-12-10 Omegatech Inc. Method for production of arachidonic acid
JP3120684B2 (ja) 1995-02-14 2000-12-25 トヨタ自動車株式会社 ゲラニルゲラニル二リン酸を合成する変異型ファルネシル二リン酸合成酵素及びそれをコードするｄｎａ
JP3151371B2 (ja) 1995-03-10 2001-04-03 麒麟麦酒株式会社 カロチノイド生産量の増量に有用なｄｎａ鎖
AU5552396A (en) 1995-04-21 1996-11-07 Human Genome Sciences, Inc. Nucleotide sequence of the haemophilus influenzae rd genome, fragments thereof, and uses thereof
EP0747484A1 (en) 1995-06-08 1996-12-11 Institut National De La Recherche Agronomique (Inra) Upstream activator sequences and recombinant promoter sequences functional in yarrowia and vectors containing them
DE69631924T2 (de) 1995-06-09 2004-08-12 Dsm Ip Assets B.V. Fermentative Herstellung von Carotenoiden
AU724054B2 (en) 1995-08-17 2000-09-14 Regents Of The University Of California, The Genes and proteins controlling cholesterol synthesis
JP3538998B2 (ja) 1995-09-01 2004-06-14 トヨタ自動車株式会社 長鎖プレニル二燐酸合成酵素
JPH09107974A (ja) 1995-10-19 1997-04-28 Toyota Motor Corp 耐熱性ゲラニルゲラニル二燐酸合成酵素
US5916791A (en) 1995-11-24 1999-06-29 Hirschberg; Joseph Polynucleotide molecule from Haematococcus pluvialis encoding a polypeptide having a β--C--4--oxygenase activity for biotechnological production of (3S,3S)astaxanthin
CA2241267C (en) 1995-12-22 2012-12-04 Gist-Brocades B.V. Improved methods for transforming phaffia strains, transformed phaffia strains so obtained and recombinant dna in said methods
IL116995A (en) 1996-02-01 2000-08-31 Univ Ben Gurion Procedure for large-scale production of astaxanthin from haematococcus
WO1997029114A1 (en) 1996-02-08 1997-08-14 Board Of Regents Of The University Of Washington Biotin-containing compounds, biotinylation reagents and methods
US6255505B1 (en) 1996-03-28 2001-07-03 Gist-Brocades, B.V. Microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
AU2568697A (en) 1996-04-12 1997-11-07 Novo Nordisk A/S An enzyme with beta-1,3-glucanase activity
WO1997044470A1 (en) 1996-05-21 1997-11-27 Novo Nordisk A/S Novel yeast promoters suitable for expression cloning in yeast and heterologous expression of proteins in yeast
US6174715B1 (en) 1996-06-14 2001-01-16 Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha Prenyl diphosphate synthetase genes
JP3209103B2 (ja) 1996-07-03 2001-09-17 トヨタ自動車株式会社 変異型プレニル二燐酸合成酵素
JP3379344B2 (ja) 1996-07-24 2003-02-24 トヨタ自動車株式会社 ファルネシル二リン酸合成酵素
WO1998007830A2 (en) 1996-08-22 1998-02-26 The Institute For Genomic Research COMPLETE GENOME SEQUENCE OF THE METHANOGENIC ARCHAEON, $i(METHANOCOCCUS JANNASCHII)
JP4469026B2 (ja) 1996-10-31 2010-05-26 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ，インコーポレイテッド Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの抗原およびワクチン
JP3376838B2 (ja) 1996-11-05 2003-02-10 トヨタ自動車株式会社 プレニル二リン酸合成酵素
DE69722766T2 (de) 1996-12-02 2004-04-22 Dsm Ip Assets B.V. Verbesserte fermentative Herstellung von Carotenoide
PL335227A1 (en) 1997-02-20 2000-04-10 Dsm Nv Industrial-scale production of valuable compounds by fermentation in a chemically defined medium
EP2175031A3 (en) 1997-03-04 2010-07-07 Suntory Holdings Limited Process for preparing highly unsaturated fatty acid and lipid containing highly unsaturated fatty acid
US6131086A (en) 1997-04-02 2000-10-10 Walker Digital, Llc Method and system for allowing viewers to purchase program products
US5858700A (en) 1997-04-03 1999-01-12 Kemin Foods, Lc Process for the isolation and purification of lycopene crystals
US5968809A (en) 1997-04-11 1999-10-19 Abbot Laboratories Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids
JP4346692B2 (ja) 1997-05-02 2009-10-21 コニンクリーケ デーエスエム ナムローゼ フェンノートシャップ 微生物バイオマスからのカロテノイド結晶の単離
CA2289116A1 (en) 1997-05-06 1998-11-12 Human Genome Sciences, Inc. Enterococcus faecalis polynucleotides and polypeptides
AU8151898A (en) 1997-06-20 1999-01-04 Human Genome Sciences, Inc. Lyme disease vaccines
US5935808A (en) 1997-07-29 1999-08-10 Yissum Research And Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Carotenoid-producing bacterial species and process for production of carotenoids using same
AU748220C (en) 1997-08-01 2003-02-27 Martek Biosciences Corporation DHA-containing nutritional compositions and methods for their production
US6600089B1 (en) 1998-04-24 2003-07-29 E. I. Du Pont De Nemours And Company Carotenoid biosynthesis enzymes
AU3749199A (en) 1998-04-24 1999-11-16 E.I. Du Pont De Nemours And Company Carotenoid biosynthesis enzymes
TWI250210B (en) 1998-05-06 2006-03-01 Dsm Ip Assets Bv An isolated DNA sequence coding for an enzyme involved in the mevalonate pathway or the pathway from isopentenyl pyrophosphate to farnesyl pyrophosphate
DE19821009A1 (de) 1998-05-11 1999-11-18 Siegfried Peter Verfahren zur Extraktion von Carotinen aus Fetten und Ölen biologischen Ursprungs
JP2002516117A (ja) 1998-05-22 2002-06-04 ユニバーシティ オブ メリーランド カロチノイド・ケトラーゼ遺伝子及び遺伝子生成物、ケトカロチノイドの生成及び遺伝子を用いてカロチノイドを変成する方法
US20020012979A1 (en) 1998-06-08 2002-01-31 Alan Berry Vitamin c production in microorganisms and plants
US6531303B1 (en) 1998-07-06 2003-03-11 Arkion Life Sciences Llc Method of producing geranylgeraniol
JP4579415B2 (ja) 1998-07-06 2010-11-10 ディーシーブイ・インコーポレイテッド・ドゥーイング・ビジネス・アズ・バイオ−テクニカル・リソーシィズ ビタミン製造方法
WO2000005382A2 (en) 1998-07-23 2000-02-03 Genset A nucleic acid encoding a geranyl-geranyl pyrophosphate synthetase (ggpps) and polymorphic markers associated with said nucleic acid
EP0982404A1 (en) 1998-08-27 2000-03-01 Wallaart, Thorvald Eelco DNA encoding amorpha-4,11-diene synthase
FR2782733B1 (fr) 1998-09-01 2002-02-08 Agronomique Inst Nat Rech Procede de transformation non-homologue de yarrowia lipolytica
US6166231A (en) 1998-12-15 2000-12-26 Martek Biosciences Corporation Two phase extraction of oil from biomass
DE69924005T2 (de) 1998-12-22 2006-04-13 National Research Council Canada, Ottawa Transgene pflanzen mit konditional lethalem gen
WO2000037660A1 (en) 1998-12-22 2000-06-29 Dow Agrosciences Llc Methods and genetic compositions to limit outcrossing and undesired gene flow in crop plants
JP4307609B2 (ja) 1999-02-10 2009-08-05 株式会社カネカ コエンザイムｑ１０の製造法
DE19909637A1 (de) 1999-03-05 2000-09-07 Peter Beyer Verfahren zur Verbesserung des agronomischen Wertes und der ernährungsphysiologischen Eigenschaften von Pflanzen
US6365386B1 (en) 1999-03-09 2002-04-02 Roche Vitamins Inc. Astaxanthin synthase
DE19916140A1 (de) 1999-04-09 2000-10-12 Basf Ag Carotinhydroxylase und Verfahren zur Herstellung von Xanthophyllderivaten
NO309386B1 (no) 1999-04-19 2001-01-22 Norsk Hydro As Pigment
FR2792651B1 (fr) 1999-04-21 2005-03-18 Centre Nat Rech Scient Sequence genomique et polypeptides de pyrococcus abyssi, leurs fragments et leurs utilisations
DE19919751A1 (de) 1999-04-29 2000-11-09 Basf Ag Stabile, wäßrige Dispersionen und stabile, wasserdispergierbare Trockenpulver von Xanthophyllen, deren Herstellung und Verwendung
WO2000078935A1 (en) 1999-06-22 2000-12-28 Smithkline Beecham Corporation Mevalonate pathway genes
ES2157166B1 (es) 1999-08-12 2002-02-16 Antibioticos Sau Procedimiento para la obtencion de licopeno.
SE9903336D0 (sv) 1999-09-17 1999-09-17 Astacarotene Ab DNA construct and its use
CA2324625C (en) 1999-12-01 2011-09-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Recombinant production of carotenoids, particularly astaxanthin
AU2257401A (en) 1999-12-08 2001-06-18 California Institute Of Technology Directed evolution of biosynthetic and biodegration pathways
EP1244696A2 (en) 1999-12-16 2002-10-02 BASF Plant Science GmbH Moss genes from physcomitrella patens encoding proteins involved in the synthesis of tocopherols, carotenoids and aromatic amino acids
US20030157592A1 (en) 1999-12-16 2003-08-21 Jens Lerchl Moss genes from physcomitrella patens encoding proteins involved in the synthesis of tocopherols and carotenoids
GB2358862B (en) 1999-12-21 2004-07-21 Fermentron Ltd Processes for Extracting Carotenoids from Biomass Carotenoid Sources
US20040038209A1 (en) 1999-12-24 2004-02-26 Lintig Johannes Von Method for the production of vitamin a
CA2397655C (en) 2000-01-19 2012-06-05 Craig M. Ruecker Solventless extraction process
US7015014B2 (en) 2000-01-27 2006-03-21 Dsm Ip Assets B.V. Isolation of carotenoid crystals
WO2001066703A1 (en) 2000-03-07 2001-09-13 Cargill, Incorporated Production of lutein in microorganisms
KR100388110B1 (ko) 2000-05-04 2003-06-18 해태제과식품주식회사 효모 균주에서 아스타산틴 색소 추출방법 및 추출된 색소
DE60115757T2 (de) 2000-05-24 2006-07-27 Dsm Ip Assets B.V. Verfahren zur Herstellung von Astaxanthin
JP4427167B2 (ja) 2000-06-12 2010-03-03 新日本石油株式会社 カロテノイド色素の製法
ES2168971B1 (es) 2000-07-19 2003-11-01 Antibioticos Sau Procedimiento de produccion de beta-caroteno.
US6807568B1 (en) 2000-07-27 2004-10-19 Union Beach, L.P. Recipient selection of information to be subsequently delivered
WO2002010398A2 (en) 2000-07-31 2002-02-07 Hahn Frederick M Manipulation of genes of the mevalonate and isoprenoid pathways to create novel traits in transgenic organisms
US6818424B2 (en) 2000-09-01 2004-11-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Production of cyclic terpenoids
US6660507B2 (en) 2000-09-01 2003-12-09 E. I. Du Pont De Nemours And Company Genes involved in isoprenoid compound production
NZ524869A (en) 2000-09-22 2005-06-24 Mars Uk Ltd Food supplement
AU9635901A (en) 2000-09-29 2002-04-08 Cargill Inc Isoprenoid production
US6645767B1 (en) 2000-10-03 2003-11-11 Carnegie Mellon University Cells engineered to contain genes of interest without expressed bacterial sequences and materials and methods therefor
US20050260699A1 (en) 2000-11-22 2005-11-24 Desouza Mervyn L Carotenoid biosynthesis
JP3838033B2 (ja) 2000-12-28 2006-10-25 トヨタ自動車株式会社 プレニルアルコールの製造方法
JP4013535B2 (ja) 2000-12-28 2007-11-28 トヨタ自動車株式会社 微生物によるプレニルアルコールの高生産方法
JP2002253284A (ja) 2000-12-28 2002-09-10 Toyota Motor Corp 微生物によるゲラニルゲラニオール及びその類縁化合物の製造方法
EP1354956A4 (en) 2000-12-28 2004-10-27 Toyota Motor Co Ltd PROCESS FOR PRODUCING PRENYL ALCOHOL
US7501268B2 (en) 2000-12-28 2009-03-10 Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha Methods of producing prenyl alcohols
US7238514B2 (en) 2001-01-05 2007-07-03 William Marsh Rice University Diterpene-producing unicellular organism
JP2002209574A (ja) 2001-01-19 2002-07-30 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd 遺伝子破壊酵母
DE60239386D1 (de) 2001-01-25 2011-04-21 Evolva Ltd Zellbibliothek
DE60228935D1 (de) 2001-01-25 2008-10-30 Evolva Ltd Verfahren zur entwicklung einer zelle mit einem gewünschten phänotyp und entwickelte zellen
US20050003474A1 (en) 2001-01-26 2005-01-06 Desouza Mervyn L. Carotenoid biosynthesis
EP1377598A4 (en) 2001-01-26 2005-08-03 Cargill Inc Carotenoid biosynthesis
US20040078846A1 (en) 2002-01-25 2004-04-22 Desouza Mervyn L. Carotenoid biosynthesis
WO2002094867A2 (fr) 2001-02-07 2002-11-28 Institut Pasteur Sequence du genome de photorhabdus luminescens souche tto1 et utilisations
US20030207947A1 (en) 2001-03-07 2003-11-06 Desouza Mervyn L. Production of lutein in microorganisms
IL157788A0 (en) 2001-03-08 2004-03-28 Jose Arnau Recombinant dimorphic fungal cell
US20030134353A1 (en) 2001-03-08 2003-07-17 Bioteknologisk Institut Recombinant dimorphic fungal cell
GB0107661D0 (en) 2001-03-27 2001-05-16 Chiron Spa Staphylococcus aureus
JP2002345469A (ja) 2001-04-25 2002-12-03 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd コエンザイムｑ１０の製造法
ITMI20011019A1 (it) 2001-05-17 2002-11-17 Carlo Ghisalberti Sostanze furiliche per uso topico
AU2002316966B2 (en) 2001-06-06 2007-05-17 Dsm Ip Assets B.V. Improved isoprenoid production
US7252964B2 (en) 2001-06-12 2007-08-07 Institut De Recherche Pour Le Developpement (I.R.D.) Isolated carotenoid biosynthesis gene cluster involved in canthaxanthin production and applications thereof
JPWO2003000902A1 (ja) 2001-06-21 2004-10-21 独立行政法人 科学技術振興機構 アフィディコリン生合成遺伝子クラスター
US6984523B2 (en) 2001-08-02 2006-01-10 E.I. Du Pont De Nemours And Company Carotenoid ketolase gene
US20030148319A1 (en) * 2001-08-15 2003-08-07 Brzostowicz Patricia C. Genes encoding carotenoid compounds
JP3935876B2 (ja) 2001-08-23 2007-06-27 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． 新規安定化カロテノイド組成物
US7635798B2 (en) 2001-08-31 2009-12-22 Dow Agrosciences, Llc Nucleic acid compositions conferring altered metabolic characteristics
US20040077068A1 (en) 2001-09-04 2004-04-22 Brzostowicz Patricia C. Carotenoid production from a single carbon substrate
US6797303B2 (en) 2001-09-04 2004-09-28 Lycored Natural Products Industries Ltd. Carotenoid extraction process
US20030054070A1 (en) 2001-09-07 2003-03-20 Aquasearch, Inc. Edible solvent extraction of carotenoids from microorganisms
DE10145043A1 (de) 2001-09-13 2003-04-03 Degussa Verfahren und Herstellung von Feinchemikalien
EP1457561A1 (en) 2001-09-26 2004-09-15 Vitatene, S.A. Biosynthetic genes of blakeslea trispora beta-carotene that code for lycopene cyclase/phytoene synthase (carrp) and phytoene dehydrogenase (carb)
US7026460B2 (en) 2001-10-09 2006-04-11 Microbia, Inc. lovE variant regulator molecules
US7196189B2 (en) 2001-10-09 2007-03-27 Microbia, Inc. love variant regulator molecules
RU2211862C2 (ru) 2001-10-29 2003-09-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (-) ШТАММ ГЕТЕРОТАЛЛИЧНОГО ФИКОМИЦЕТА Blakeslea trispora, ПРОДУЦИРУЮЩИЙ ЛИКОПИН В ПАРЕ С РАЗНЫМИ (+)ШТАММАМИ Blakeslea trispora, И СПОСОБ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО СИНТЕЗА ЛИКОПИНА
CN1277038C (zh) * 2001-11-05 2006-09-27 多玛两合有限公司 配件系统
IL146449A0 (en) 2001-11-12 2002-07-25 Lycored Natural Prod Ind Ltd Method and pharmaceutical preparations for reducing the activity of cells
US7063955B2 (en) 2001-11-20 2006-06-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for production of asymmetric carotenoids
EP1318192A2 (en) 2001-12-06 2003-06-11 greenovation Biotech GmbH Prenyltransferase from Arabidopsis
ES2195758B1 (es) 2001-12-31 2005-03-01 Antibioticos, S.A.U. Procedimiento mejorado de produccion de licopeno mediante la fermentacion de cepas seleccionadas de blakeslea trispora, formulaciones y usos del licopeno obtenido.
WO2003062416A1 (fr) 2002-01-21 2003-07-31 Takeda Chemical Industries, Ltd. Procede de criblage d'agents preventifs et de remedes pour l'arteriosclerose
CA2511229A1 (en) 2002-01-25 2003-07-31 Evolva Ltd. Methods for multiple parameter screening and evolution of cells to produce small molecules with multiple functionalities
ES2195766B1 (es) 2002-01-29 2005-04-01 Antibioticos, S.A.U. Procedimiento de produccion de beta-caroteno por fermentacion en cultivo mixto utilizando cepas (+) 4 (-) de blakeslea trispora.
JP3665904B2 (ja) 2002-01-31 2005-06-29 関西ティー・エル・オー株式会社 ヒトガン予防用組成物及びヒトガン予防方法
MX247604B (es) 2002-02-06 2007-07-30 Dsm Ip Assets Bv Esteres de astaxantina.
US7105634B2 (en) 2002-02-11 2006-09-12 E. I. Du Pont De Nemours And Company Genetic constructs encoding carotenoid biosynthetic enzymes
AU2003222249A1 (en) 2002-03-04 2003-09-22 Fidelity Systems, Inc., Et Al. The complete genome and protein sequence of the hyperthermophile methanopyrus kandleri av19 and monophyly of archael methanogens and methods of use thereof
JPWO2003095651A1 (ja) 2002-05-10 2005-09-15 協和醗酵工業株式会社 メバロン酸の製造方法
ATE473284T1 (de) 2002-05-14 2010-07-15 Martek Biosciences Corp Carotinsynthase-gen und dessen verwendung
CA2487144C (en) 2002-06-21 2012-06-12 Dsm Ip Assets B.V. Increased carotenoid production by inhibition of squalene biosynthesis
DE10234126A1 (de) 2002-07-26 2004-02-05 Basf Ag Verfahren zur Biotransformation von Carotinoiden
EP2392562B1 (en) 2002-07-29 2018-03-07 Cardax Pharma, Inc. Structural carotenoid analogs for the inhibition and amelioration of disease
US20050049248A1 (en) 2002-07-29 2005-03-03 Lockwood Samuel Fournier Carotenoid ether analogs or derivatives for controlling C-reactive protein levels
AU2003247270A1 (en) 2002-08-01 2004-03-03 Evolva Ltd Methods of mixing large numbers of heterologous genes
AU2003258622A1 (en) 2002-08-20 2004-03-11 Sungene Gmbh And Co. Kgaa Method for the production of $g(b)-carotinoids
EP1532263B1 (de) 2002-08-20 2006-10-11 Sungene GmbH & Co. KGaA Verfahren zur hydrolyse von carotinoidestern
EP1532265A2 (de) 2002-08-20 2005-05-25 Sungene GmbH & Co. KGaA Verfahren zur herstellung von ketocarotinoiden in genetisch veränderten organismen
ES2305501T3 (es) 2002-09-27 2008-11-01 Dsm Ip Assets B.V. Gen escualeno sintasa (sqs).
ATE361372T1 (de) 2002-09-27 2007-05-15 Dsm Ip Assets Bv Produktion von zeaxanthin und beta-cryptoxanthin durch phaffia
AU2003273889A1 (en) 2002-09-27 2004-04-19 Dsm Ip Assets B.V. Process for actinol production from ketoisophorone
EP1543132A2 (en) 2002-09-27 2005-06-22 DSM IP Assets B.V. Production of canthaxanthin by phaffia
WO2004029232A2 (en) 2002-09-27 2004-04-08 Dsm Ip Assets B.V. Acc gene
MXPA05004237A (es) 2002-10-25 2005-07-05 Prodemex Sa De Cv Metodo para producir la astaxantina esterificada, a partir de la zeaxantina esterificada.
EP1572117A4 (en) 2002-11-25 2006-07-19 Cargill Inc PREPARATION OF UBICHINONES
US20040219629A1 (en) 2002-12-19 2004-11-04 Qiong Cheng Increasing carotenoid production in bacteria via chromosomal integration
US7232665B2 (en) 2002-12-19 2007-06-19 E. I. Du Pont De Nemours And Company Mutations affecting carotenoid production
US7252942B2 (en) 2002-12-19 2007-08-07 E.I. Du Pont De Nemours And Company Parallel chromosomal stacking of traits in bacteria
UA55331C2 (ru) 2002-12-23 2006-07-17 Товариство З Обмеженою Відповідальністю "Науково-Виробниче Підприємство "Вітан" ШТАММ (ТКСТ) BLAKESLEA TRISPORA ІМВ F-100022-ПРОДУЦЕНТ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--КАРОТИНА
US20060234333A1 (en) 2003-01-09 2006-10-19 Basf Aktiengesellschaft Patents, Trademarks And Licenses Method for producing carotenoids or their precursors using genetically modified organisms of the blakeslea genus, carotenoids or their precursors produced by said method and use thereof
US20060099670A1 (en) 2003-01-09 2006-05-11 Markus Matuschek Method for the genetic modification of organisms of the genus blakeslea, corresponding organisms and the use of the same
DE10300649A1 (de) 2003-01-09 2004-07-22 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Ketocarotinoiden durch Kultivierung von genetisch veränderten Organismen
WO2004067709A2 (en) 2003-01-17 2004-08-12 Elitra Pharmaceuticals, Inc. Identification of essential genes of aspergillus fumigatus and methods of use
EP1587927A2 (en) 2003-01-17 2005-10-26 E.I. du Pont de Nemours and Company Regulator/promoter for tunable gene expression and metabolite sensing
WO2004065609A1 (ja) * 2003-01-22 2004-08-05 Showa Denko K.K. アシルコエンザイムａを用いるアシル基転移酵素反応方法
WO2004070035A2 (en) 2003-02-03 2004-08-19 Sungene Gmbh & Co. Kgaa Method for increasing efficiency of homologous recombination in plants
EP1597371A2 (en) 2003-02-17 2005-11-23 Metanomics GmbH Preparation of organisms with faster growth and/or higher yield
WO2004074490A2 (en) 2003-02-24 2004-09-02 Genoclipp Biotechnology B.V. Method for transforming blakeslea strains
NZ542933A (en) 2003-05-05 2009-08-28 Dow Agrosciences Llc Stable immunoprophylactic and therapeutic compositions derived from transgenic plant cells and methods for production
US7070952B2 (en) 2003-05-07 2006-07-04 E. I. Du Pont Nemours And Company Genes encoding carotenoid compounds
US7125672B2 (en) 2003-05-07 2006-10-24 E. I. Du Pont De Nemours And Company Codon-optimized genes for the production of polyunsaturated fatty acids in oleaginous yeasts
US8313911B2 (en) * 2003-05-07 2012-11-20 E I Du Pont De Nemours And Company Production of polyunsaturated fatty acids in oleaginous yeasts
US7238482B2 (en) * 2003-05-07 2007-07-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Production of polyunsaturated fatty acids in oleaginous yeasts
US7214491B2 (en) 2003-05-07 2007-05-08 E. I. Du Pont De Nemours And Company Δ-12 desaturase gene suitable for altering levels of polyunsaturated fatty acids in oleaginous yeasts
US7064196B2 (en) 2003-05-20 2006-06-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company Genes encoding carotenoid compounds
US20040234579A1 (en) 2003-05-22 2004-11-25 Mark D. Finke, Inc. Dietary supplements and methods of preparing and administering dietary supplements
US6929928B2 (en) 2003-06-12 2005-08-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Genes encoding carotenoid compounds
US7422884B2 (en) 2003-06-12 2008-09-09 Dsm Ip Assetts B.V. Feedback-resistant mevalonate kinases
US7259255B2 (en) 2003-06-25 2007-08-21 E. I. Du Pont De Nemours And Company Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and phosphoglycerate mutase promoters for gene expression in oleaginous yeast
US7132257B2 (en) 2003-07-10 2006-11-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Production or aromatic carotenoids in gram negative bacteria
EP1646713A2 (en) 2003-07-17 2006-04-19 E.I. Dupont De Nemours And Company Genes encoding carotenoid compounds
DE602004013160T2 (de) 2003-07-17 2009-07-02 University Of Dundee, Dundee Verfahren zur anwendung eines an lkb1/strad/mo25-komplexes
EP1684776A1 (en) 2003-07-25 2006-08-02 Washington State University Research Foundation Natural astaxanthin extract reduces dna oxidation
AU2004262656A1 (en) 2003-08-01 2005-02-17 Basf Plant Science Gmbh Process for the production of fine chemicals in plants
DE102004007622A1 (de) 2004-02-17 2005-08-25 Sungene Gmbh & Co. Kgaa Verfahren zur Herstellung von Ketocarotinoiden in genetisch veränderten, nicht-humanen Organismen
US20050078123A1 (en) * 2003-09-28 2005-04-14 Denny Jaeger Method for creating and using text objects as control devices
US7202356B2 (en) 2003-11-14 2007-04-10 E. I. Du Pont De Nemours And Company Fructose-bisphosphate aldolase regulatory sequences for gene expression in oleaginous yeast
US7262257B2 (en) * 2004-02-17 2007-08-28 The Penn State Research Foundation Telechelic polymers containing reactive functional groups
JPWO2005085415A1 (ja) 2004-03-04 2007-12-13 株式会社カネカ 新規形質転換体およびそれを用いたポリエステルの製造方法
JP2006134855A (ja) 2004-03-11 2006-05-25 Nissan Motor Co Ltd 燃料電池用セパレータ、燃料電池スタック、燃料電池車両、及び燃料電池用セパレータの製造方法
US7598521B2 (en) * 2004-03-29 2009-10-06 Sanyo Electric Co., Ltd. Semiconductor device in which the emitter resistance is reduced
JP4428121B2 (ja) 2004-04-15 2010-03-10 凸版印刷株式会社 パターン形成方法及びパターン形成装置
JP2005301149A (ja) 2004-04-15 2005-10-27 Ricoh Co Ltd 画像形成方法および画像形成装置
JP2005301157A (ja) 2004-04-15 2005-10-27 Toyoda Gosei Co Ltd 面状発光体
JP2005301148A (ja) 2004-04-15 2005-10-27 Fuji Photo Film Co Ltd 熱現像感光材料
JP4464184B2 (ja) 2004-04-15 2010-05-19 キヤノン株式会社 光学フィルタ
JP4212509B2 (ja) 2004-04-15 2009-01-21 シャープ株式会社 液晶表示装置
JP4120940B2 (ja) 2004-04-15 2008-07-16 ソニー株式会社 レンズ鏡筒および撮像装置
JP2005301156A (ja) 2004-04-15 2005-10-27 Sony Corp マスク欠陥検査方法、マスク欠陥検査装置、並びにマスク検査基準作成方法
JP2005301150A (ja) 2004-04-15 2005-10-27 Ricoh Co Ltd 画像形成方法および画像形成装置
JP2005301154A (ja) 2004-04-15 2005-10-27 Canon Inc 画像形成装置
JP2005301153A (ja) 2004-04-15 2005-10-27 Canare Electric Co Ltd プラグ
JP4340186B2 (ja) 2004-04-15 2009-10-07 カナレ電気株式会社 アダプタユニット及び光プラグ
JP2005301151A (ja) 2004-04-15 2005-10-27 Canare Electric Co Ltd 光コンタクトユニット及び光プラグ
US7260790B2 (en) 2004-04-27 2007-08-21 International Business Machines Corporation Integrated circuit yield enhancement using Voronoi diagrams
US20050266132A1 (en) 2004-06-01 2005-12-01 Feral Temelli Supercritical carbon dioxide extraction of carotenoids from natural materials using a continuous co-solvent
US7908445B2 (en) 2004-07-19 2011-03-15 Infortrend Technology, Inc. Redundant controller dynamic logical media unit reassignment
BRPI0403102A (pt) 2004-07-26 2006-03-07 Ricardo Ernesto Levy adega pantográfica
EP2298859A3 (en) 2004-07-27 2011-05-25 The Regents of the University of California Genetically modified host cells and use of same for producing isoprenoid compounds
JP4559151B2 (ja) 2004-07-29 2010-10-06 富士通株式会社 終端回路、半導体装置、及び電子機器
US7145380B2 (en) 2004-09-27 2006-12-05 Etron Technology, Inc. Low power consumed and small circuit area occupied temperature sensor
WO2006091924A2 (en) 2005-02-24 2006-08-31 Regents Of The University Of Minnesota Producing carotenoids
WO2006096392A2 (en) 2005-03-04 2006-09-14 Diversa Corporation Enzymes involved in astaxanthin, carotenoid and isoprenoid biosynthetic pathways, genes encoding them and methods of making and using them
JP2006008714A (ja) 2005-03-17 2006-01-12 Yamaha Motor Co Ltd マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤
EP1866428A2 (en) 2005-03-18 2007-12-19 Microbia, Inc. Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi
JP2006008712A (ja) 2005-03-24 2006-01-12 Yamaha Motor Co Ltd 血管新生阻害剤
JP2006008713A (ja) 2005-03-24 2006-01-12 Yamaha Motor Co Ltd 血管内皮細胞増殖阻害剤
JP2006008715A (ja) 2005-05-17 2006-01-12 Yamaha Motor Co Ltd ホスホリパーゼａ２阻害剤
JP2006008716A (ja) 2005-05-20 2006-01-12 Yamaha Motor Co Ltd リポキシゲナーゼ阻害剤
JP2006008717A (ja) 2005-05-31 2006-01-12 Yamaha Motor Co Ltd インターロイキン阻害剤
JP2006008718A (ja) 2005-06-03 2006-01-12 Yamaha Motor Co Ltd シクロオキシゲナーゼ活性阻害剤
JP2006016407A (ja) 2005-06-15 2006-01-19 Yamaha Motor Co Ltd ホスホジエステラーゼ阻害剤
KR100664065B1 (ko) 2005-06-20 2007-01-03 엘지전자 주식회사 전동기의 마그네트 고정 구조
JP2006016408A (ja) 2005-06-23 2006-01-19 Yamaha Motor Co Ltd 血中中性脂肪抑制剤
JP2006008719A (ja) 2005-06-23 2006-01-12 Yamaha Motor Co Ltd 血中過酸化脂質抑制剤
JP2006016409A (ja) 2005-06-28 2006-01-19 Yamaha Motor Co Ltd 疲労回復剤
JP2006022121A (ja) 2005-07-04 2006-01-26 Yamaha Motor Co Ltd アトピー性皮膚炎抑制剤
JP2006008720A (ja) 2005-07-06 2006-01-12 Yamaha Motor Co Ltd 腎臓機能改善剤
WO2007095007A2 (en) 2006-02-14 2007-08-23 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Systematic genomic library and uses thereof
EP2078092A2 (en) 2006-09-28 2009-07-15 Microbia, Inc. Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi
US8846374B2 (en) 2006-12-12 2014-09-30 E I Du Pont De Nemours And Company Carotenoid production in a recombinant oleaginous yeast
WO2008076758A2 (en) 2006-12-13 2008-06-26 William Marsh Rice University Nerolidol, terpene, and terpene derivative synthesis
WO2009010826A2 (en) 2007-07-13 2009-01-22 Ocean Nutrition Canada Ltd. Novel genes and methods of producing carotenoids
EP2294193A4 (en) 2008-04-10 2012-11-28 Dsm Ip Assets Bv PRODUCTION OF CAROTENOIDS IN YEAST AND OLEAGINOUS FUNGI

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BHOSALE P.V. ET AL.: "Production of beta-carotene by a mutant of Rhodotorula glutinis", APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, vol. 55, no. 4, May 2001 (2001-05), pages 423-427, XP002442975, ISSN: 0175-7598 *
CERDA-OLMEDO E. ET AL.: "Oleaginous fungi: Carotene-rich oil from Phycomyces", PROGRESS IN LIPID RESEARCH, vol. 33, no. 1, 2, 1994, pages 185-192, XP002442974, ISSN: 0163-7827 *
LEE P.S. ET AL.: "Metabolic engineering towards biotechnological production of carotenoids in microorganisms", APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, SPRINGER VERLAG, BERLIN, DE, vol. 60, no. 1, 2, October 2002 (2002-10), pages 1-11, XP002280186, ISSN: 0175-7598 *
MISAWA N. ET AL.: "Metabolic engineering for the production of carotenoids in non-carotenogenic bacteria and yeasts", JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS, AMSTERDAM, NL, vol. 59, no. 3, 3 January 1998 (1998-01-03), pages 169-181, XP004113748, ISSN: 0168-1656 *
SCHMIDT-DANNERT S.: "ENGINEERING NOVEL CAROTENOIDS IN MICROORGANISMS", CURRENT OPINION IN BIOTECHNOLOGY, LONDON, GB, vol. 11, no. 3, June 2000 (2000-06), pages 255-261, XP000985860, ISSN: 0958-1669 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2723620C2 (ru) * 2012-07-13 2020-06-16 Калиста, Инк. Система, способы и композиции для биопереработки

Also Published As

Publication number Publication date
ZA200707651B (en) 2011-05-25
JP2008537878A (ja) 2008-10-02
JP6267679B2 (ja) 2018-01-24
UA94038C2 (ru) 2011-04-11
JP2009112320A (ja) 2009-05-28
WO2006102342A3 (en) 2007-10-11
US9909130B2 (en) 2018-03-06
CN101218352A (zh) 2008-07-09
AU2006227165A1 (en) 2006-09-28
JP2013128497A (ja) 2013-07-04
CA2602183A1 (en) 2006-09-28
AU2006227165B2 (en) 2011-11-10
US20130045504A1 (en) 2013-02-21
CA2602183C (en) 2014-05-06
EP1866428A2 (en) 2007-12-19
EP2371967B1 (en) 2015-06-03
WO2006102342A2 (en) 2006-09-28
CN103589650A (zh) 2014-02-19
EP2371967A1 (en) 2011-10-05
US7851199B2 (en) 2010-12-14
US8288149B2 (en) 2012-10-16
KR101482081B1 (ko) 2015-01-13
CN101218352B (zh) 2013-09-04
IL185713A0 (en) 2008-12-29
KR20070121679A (ko) 2007-12-27
US20070015237A1 (en) 2007-01-18
JP2015226550A (ja) 2015-12-17
NO20075200L (no) 2007-10-11
BRPI0609040B1 (pt) 2018-07-31
EA200701974A1 (ru) 2008-08-29
BRPI0609040A2 (pt) 2010-01-12
ES2546484T3 (es) 2015-09-24
US20110021843A1 (en) 2011-01-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA016258B1 (ru) Рекомбинантные грибы, продуцирующие каротиноиды, и способы их применения
US11332724B2 (en) Microbial production of terpenoids
Sandmann Genetic manipulation of carotenoid biosynthesis: strategies, problems and achievements
Dharmapuri et al. Metabolic engineering of xanthophyll content in tomato fruits
Cunningham Jr et al. Elucidation of the pathway to astaxanthin in the flowers of Adonis aestivalis
US8633009B2 (en) Production of quinone derived compounds in oleaginous yeast and fungi
Chang et al. Integrating an algal β-carotene hydroxylase gene into a designed carotenoid-biosynthesis pathway increases carotenoid production in yeast
Ye et al. Defining the biosynthesis of ketocarotenoids in Chromochloris zofingiensis
JP2008537878A5 (ru)
Csernetics et al. Expression of Xanthophyllomyces dendrorhous cytochrome-P450 hydroxylase and reductase in Mucor circinelloides
KR20190079575A (ko) 세포 소기관이 변이된 재조합 효모 및 이를 이용한 아이소프레노이드 생산 방법
Yu et al. Advances in metabolic engineering for the accumulation of astaxanthin biosynthesis
Liu et al. The biosynthesis of astaxanthin esters in Schizochytrium sp. is mediated by a bifunctional diacylglycerol acyltransferase
Dufossé Current carotenoid production using microorganisms
US12037630B2 (en) Production of lipids and terpenoids in Auxenochlorella protothecoides
Rosales-Mendoza Algae-Made Nutraceuticals Produced Using Genetic Engineering Approaches
Roy et al. Astaxanthin in Microalgae: Occurrence, Biosynthesis, Extraction and Enhancement, Current and Future Prospects
Dufossé CURRENT PRODUCTION CAROTENOID USING MICROORGANISMS
MX2007011219A (en) Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM