EA032102B1 - Ингибитор киназы aurora a - Google Patents
Ингибитор киназы aurora a Download PDFInfo
- Publication number
- EA032102B1 EA032102B1 EA201790838A EA201790838A EA032102B1 EA 032102 B1 EA032102 B1 EA 032102B1 EA 201790838 A EA201790838 A EA 201790838A EA 201790838 A EA201790838 A EA 201790838A EA 032102 B1 EA032102 B1 EA 032102B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- methyl
- cancer
- compound
- aigog
- fluoro
- Prior art date
Links
- 102000004000 Aurora Kinase A Human genes 0.000 title 1
- 108090000461 Aurora Kinase A Proteins 0.000 title 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 title 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 title 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 61
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 27
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 26
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 86
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 claims description 27
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 claims description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 12
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 11
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 5
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000003721 Triple Negative Breast Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000022679 triple-negative breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000030758 lung non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 2
- -1 aminopyridine compound Chemical class 0.000 abstract description 23
- YQQZZYYQTCPEAS-OYLFLEFRSA-N ClC=1C(=C(C=CC=1)CN1[C@@H](C[C@@](CC1)(C(=O)O)CC1=NC(=CC=C1F)NC1=NNC(=C1)C)C)F Chemical compound ClC=1C(=C(C=CC=1)CN1[C@@H](C[C@@](CC1)(C(=O)O)CC1=NC(=CC=C1F)NC1=NNC(=C1)C)C)F YQQZZYYQTCPEAS-OYLFLEFRSA-N 0.000 abstract 1
- YQQZZYYQTCPEAS-OWJWWREXSA-N ClC=1C(=C(C=CC=1)CN1[C@H](C[C@](CC1)(C(=O)O)CC1=NC(=CC=C1F)NC1=NNC(=C1)C)C)F Chemical compound ClC=1C(=C(C=CC=1)CN1[C@H](C[C@](CC1)(C(=O)O)CC1=NC(=CC=C1F)NC1=NNC(=C1)C)C)F YQQZZYYQTCPEAS-OWJWWREXSA-N 0.000 abstract 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 37
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 35
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 33
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 29
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 26
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 25
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 23
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 23
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 20
- 102100033636 Histone H3.2 Human genes 0.000 description 15
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical class CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 9
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 5
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000000634 powder X-ray diffraction Methods 0.000 description 4
- PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M sodium fluoride Chemical compound [F-].[Na+] PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- YBRBMKDOPFTVDT-UHFFFAOYSA-N tert-butylamine Chemical class CC(C)(C)N YBRBMKDOPFTVDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 208000020584 Polyploidy Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 238000003821 enantio-separation Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HYILLTADABKYHO-UHFFFAOYSA-N 1-(bromomethyl)-3-chloro-2-fluorobenzene Chemical compound FC1=C(Cl)C=CC=C1CBr HYILLTADABKYHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AUBAFPZVFLTWNE-UHFFFAOYSA-N 6-bromo-2-(bromomethyl)-3-fluoropyridine Chemical compound FC1=CC=C(Br)N=C1CBr AUBAFPZVFLTWNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N Adenosine triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- UARIIFVOZSXRPR-UHFFFAOYSA-N Cl.COC(=O)C1CCNC(C)C1 Chemical compound Cl.COC(=O)C1CCNC(C)C1 UARIIFVOZSXRPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IIZIIWXGBAIJDZ-UHFFFAOYSA-N ClC=1C(=C(C=CC=1)CN1C(CC(CC1)C(=O)OC)C)F Chemical compound ClC=1C(=C(C=CC=1)CN1C(CC(CC1)C(=O)OC)C)F IIZIIWXGBAIJDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910016523 CuKa Inorganic materials 0.000 description 2
- SRUWWOSWHXIIIA-UKPGNTDSSA-N Cyanoginosin Chemical compound N1C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](C)[C@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C(=C)N(C)C(=O)CC[C@H](C(O)=O)N(C)C(=O)[C@@H](C)[C@@H]1\C=C\C(\C)=C\[C@H](C)[C@@H](O)CC1=CC=CC=C1 SRUWWOSWHXIIIA-UKPGNTDSSA-N 0.000 description 2
- 208000031448 Genomic Instability Diseases 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MQUQNUAYKLCRME-INIZCTEOSA-N N-tosyl-L-phenylalanyl chloromethyl ketone Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N[C@H](C(=O)CCl)CC1=CC=CC=C1 MQUQNUAYKLCRME-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 2
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960001456 adenosine triphosphate Drugs 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N argon Substances [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N benzamidine Chemical compound NC(=N)C1=CC=CC=C1 PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 2
- QOPVNWQGBQYBBP-UHFFFAOYSA-N chloroethyl chloroformate Chemical compound CC(Cl)OC(Cl)=O QOPVNWQGBQYBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 2
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- ZCSHNCUQKCANBX-UHFFFAOYSA-N lithium diisopropylamide Chemical compound [Li+].CC(C)[N-]C(C)C ZCSHNCUQKCANBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 108010067094 microcystin Proteins 0.000 description 2
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- QNDVLZJODHBUFM-WFXQOWMNSA-N okadaic acid Chemical compound C([C@H](O1)[C@H](C)/C=C/[C@H]2CC[C@@]3(CC[C@H]4O[C@@H](C([C@@H](O)[C@@H]4O3)=C)[C@@H](O)C[C@H](C)[C@@H]3[C@@H](CC[C@@]4(OCCCC4)O3)C)O2)C(C)=C[C@]21O[C@H](C[C@@](C)(O)C(O)=O)CC[C@H]2O QNDVLZJODHBUFM-WFXQOWMNSA-N 0.000 description 2
- VEFJHAYOIAAXEU-UHFFFAOYSA-N okadaic acid Natural products CC(CC(O)C1OC2CCC3(CCC(O3)C=CC(C)C4CC(=CC5(OC(CC(C)(O)C(=O)O)CCC5O)O4)C)OC2C(O)C1C)C6OC7(CCCCO7)CCC6C VEFJHAYOIAAXEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 2
- LXNAVEXFUKBNMK-UHFFFAOYSA-N palladium(II) acetate Substances [Pd].CC(O)=O.CC(O)=O LXNAVEXFUKBNMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L palladium(ii) acetate Chemical compound [Pd+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 2
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000011775 sodium fluoride Substances 0.000 description 2
- 235000013024 sodium fluoride Nutrition 0.000 description 2
- CMZUMMUJMWNLFH-UHFFFAOYSA-N sodium metavanadate Chemical compound [Na+].[O-][V](=O)=O CMZUMMUJMWNLFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 229910000166 zirconium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDQGMCHKKYRKCB-UHFFFAOYSA-N 1-methoxycarbonylpiperidine-4-carboxylic acid Chemical compound COC(=O)N1CCC(C(O)=O)CC1 FDQGMCHKKYRKCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MOGQNVSKBCVIPW-UHFFFAOYSA-N 1-methylpyrazol-3-amine Chemical compound CN1C=CC(N)=N1 MOGQNVSKBCVIPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanopropan-2-yldiazenyl)-2-methylpropanenitrile Chemical compound N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004105 2-pyridyl group Chemical group N1=C([*])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLHFILGSQDJULK-UHFFFAOYSA-N 4-[[9-chloro-7-(2-fluoro-6-methoxyphenyl)-5H-pyrimido[5,4-d][2]benzazepin-2-yl]amino]-2-methoxybenzoic acid Chemical compound C1=C(C(O)=O)C(OC)=CC(NC=2N=C3C4=CC=C(Cl)C=C4C(=NCC3=CN=2)C=2C(=CC=CC=2F)OC)=C1 ZLHFILGSQDJULK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFQONZCQHGIKIY-UHFFFAOYSA-N 6-bromo-3-fluoro-2-methylpyridine Chemical compound CC1=NC(Br)=CC=C1F BFQONZCQHGIKIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100059607 Caenorhabditis elegans cec-3 gene Proteins 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQQZZYYQTCPEAS-UHFFFAOYSA-N ClC=1C(=C(C=CC=1)CN1C(CC(CC1)(C(=O)O)CC1=NC(=CC=C1F)NC1=NNC(=C1)C)C)F Chemical group ClC=1C(=C(C=CC=1)CN1C(CC(CC1)(C(=O)O)CC1=NC(=CC=C1F)NC1=NNC(=C1)C)C)F YQQZZYYQTCPEAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000402754 Erythranthe moschata Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001059454 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MARK2 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102100030817 Liver carboxylesterase 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- GKKYVDHUZBHXGE-UHFFFAOYSA-N O.O.O.O.O.O.[Na].[Na] Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Na].[Na] GKKYVDHUZBHXGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 1
- 241001085205 Prenanthella exigua Species 0.000 description 1
- 102100028904 Serine/threonine-protein kinase MARK2 Human genes 0.000 description 1
- 101710169844 Sesquipedalian-1 Proteins 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229950009447 alisertib Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000036878 aneuploidy Diseases 0.000 description 1
- 231100001075 aneuploidy Toxicity 0.000 description 1
- 230000002583 anti-histone Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L caesium carbonate Chemical compound [Cs+].[Cs+].[O-]C([O-])=O FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000024 caesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000012069 chiral reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LXCYSACZTOKNNS-UHFFFAOYSA-N diethoxy(oxo)phosphanium Chemical compound CCO[P+](=O)OCC LXCYSACZTOKNNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- GYQBBRRVRKFJRG-UHFFFAOYSA-L disodium pyrophosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])(=O)OP(O)([O-])=O GYQBBRRVRKFJRG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L disodium;(4-nitrophenyl) phosphate;hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[O-][N+](=O)C1=CC=C(OP([O-])([O-])=O)C=C1 KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- SACNIGZYDTUHKB-UHFFFAOYSA-N ditert-butyl-[2-[2,4,6-tri(propan-2-yl)phenyl]phenyl]phosphane Chemical group CC(C)C1=CC(C(C)C)=CC(C(C)C)=C1C1=CC=CC=C1P(C(C)(C)C)C(C)(C)C SACNIGZYDTUHKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- BDWMGYZSQKGUFA-UHFFFAOYSA-N methyl 2-chloro-6-methylpyridine-4-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1=CC(C)=NC(Cl)=C1 BDWMGYZSQKGUFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZVWBASHHLFBJF-UHFFFAOYSA-N methyl piperidine-4-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1CCNCC1 RZVWBASHHLFBJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 230000027291 mitotic cell cycle Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- DAZXVJBJRMWXJP-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylethylamine Chemical compound CCN(C)C DAZXVJBJRMWXJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003053 piperidines Chemical class 0.000 description 1
- 229940068918 polyethylene glycol 400 Drugs 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000000276 sedentary effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000010956 selective crystallization Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N trappsol cyclo Chemical compound CC(O)COC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)COCC(O)C)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1COCC(C)O ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000012808 vapor phase Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
- A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
- A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение обеспечивает аминопиридиновое соединение, выбранное из группы, состоящей из (2S,4S)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1H-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты(2R,4R)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1H-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновой кислотыили его фармацевтически приемлемую соль, которые ингибируют Aurora A и, следовательно, могут быть подходящими для лечения рака.
Description
Изобретение относится к аминопиридиновому соединению или его фармацевтически приемлемым солям, которые ингибируют Аигога А и могут быть подходящими для лечения рака.
Уровень техники
Киназы Аигога представляют собой семейство серин/треонинкиназ и являются ключевыми регуляторами митоза. Существует три человеческих гомолога киназ Аигога, А, В и С, из которых Аигога А участвует в раковых заболеваниях различного гистологического происхождения и в случае сверхэкспрессии может обладать онкогенными свойствами.
Анеуплодия или геномная нестабильность является одним из наиболее преобладающих признаков рака. В частности, эндоредупликация и последующая полиплоидия, вызванные ингибированием Аигога В, являются одним из главных путей геномной нестабильности. Кроме того, фенотип эндоредупликации ДНК/полиплоидии может сохраняться для многих клеточных делений без полного уничтожения раковых клеток. Альтернативно, селективное ингибирование Аигога А приводит к митотическому блоку во многих раковых клетках. В дальнейшем митотический блок зачастую развивается в апоптоз или гибель раковых клеток, что является гораздо более желательным качеством противоракового лекарства, чем эндоредупликация ДНК/полиплоидия под действием ингибиторов Аигога В или двойных ингибиторов Аигога А/В. Кроме того, описано, что некоторые ингибиторы Аигога В и двойные ингибиторы Аигога А/В, проходящие клинические испытания, приводят к нейтропении и цитотоксичности костного мозга у пациентов, тогда как некоторые относительно селективные ингибиторы Аигога А, проходящие клинические испытания, не вызывают указанных расстройств. Следовательно, необходимо селективно ингибировать Аигога А и снижать или избегать ингибирования Аигога В или двойного ингибирования Аигога А/В. Таким образом, селективное ингибирование Аигога А может быть полезно для противораковой терапии.
Ингибиторы Аигога А известны в данной области техники. В АО 2008/026768, ЕР 2062887 и ΑΘ2009/104802 описаны некоторые аминопиридиновые соединения, обладающие селективным ингибирующим действием в отношении Аигога А. В АО 2013/129443 раскрыты некоторые пиперидиновые соединения, обладающие селективной ингибирующей активностью в отношении Аигога А.
Сохраняется потребность в обеспечении альтернативных ингибиторов Аигога А для лечения рака. Также сохраняется потребность в обеспечении селективных ингибиторов Аигога А, которые снижают или не вызывают ингибирование Аигога В или двойное ингибирование Аигога А/В. Соответственно, в настоящем изобретении предложены некоторые ингибиторы Аигога А, которые могут быть пригодны для лечения рака. Кроме того, в настоящем изобретении представлены некоторые селективные ингибиторы Аигога А, которые могут снижать ингибирование Аигога В или двойное ингибирование Аигога А/В.
Сущность изобретения
В настоящем изобретении представлено соединение, которое представляет собой 1-[(3-хлор-2фторфенил)метил] -4-[ [3-фтор-6- [(5 -метил-1 Н-пиразол-3 -ил)амино] -2-пиридил] метил] -2-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту
или ее фармацевтически приемлемую соль.
Подробное описание изобретения
Предпочтительно в настоящем изобретении представлено соединение, которое выбрано из группы, состоящей из (28,48)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2пиридил] метил] -2-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты
(2К,4К)-1 - [(3 -Хлор-2-фторфенил)метил] -4-[[3 -фтор-6-[(5 -метил-1 Н-пиразол-3 -ил)амино] -2пиридил] метил] -2-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты
- 1 032102
или ее фармацевтически приемлемой соли.
Более предпочтительно, в настоящем изобретении представлено соединение, которое представляет собой (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту
или ее фармацевтически приемлемую соль.
В качестве конкретного варианта реализации, в настоящем изобретении предложено соединение, которое представляет собой (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту.
В качестве конкретного варианта реализации, в настоящем изобретении предложено также соединение, которое представляет собой (28,48)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Нпиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту.
В настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая (2К,4К)-1-[(3хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество. В настоящем изобретении представлена фармацевтическая композиция, содержащая (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество.
В настоящем изобретении предложен способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5метил- 1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении предложен способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества (2К,4К)-1-[(3-хлор-2фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновлй кислоты.
В настоящем изобретении предложена (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5метил- 1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии. В настоящем изобретении предложена (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении рака. В настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения при лечении рака, содержащая (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Нпиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
В настоящем изобретении предложена также (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновая кислота для применения в терапии. В настоящем изобретении предложена (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновая кислота для применения для лечения рака. В настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения для лечения рака, содержащая (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5метил- 1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту.
В настоящем изобретении предложено применение (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли в производстве лекарственного средства для лечения рака. В настоящем изобретении предложено также применение (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты в производстве лекарственного средства для лечения рака.
В настоящем изобретении предложена трет-бутиламинная соль (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)
- 2 032102 метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4карбоновой кислоты в кристаллической форме. В настоящем изобретении предложена также третбутиламинная соль (2К,4К)-1-[(3 -хлор-2-фторфенил)метил] -4-[[3 -фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3 -ил) амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты в кристаллической форме, характеризующейся диаграммой порошковой рентгеновской дифракции с характеристическими пиками, выраженными в 28±0,2°, при 17,0° в комбинации с одним или более пиками, выбранными из группы, состоящей из 11,5, 23,2 и 15,0°.
В настоящем изобретении предложена аммониевая соль (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4[[3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты в кристаллической форме. В настоящем изобретении предложена также аммониевая соль (2К,4К)-1[(3 -хлор-2 -фторфенил)метил] -4-[[3 -фтор-6-[(5 -метил-1 Н-пиразол-3 -ил)амино] -2 -пиридил] метил] -2метилпиперидин-4-карбоновой кислоты в кристаллической форме, характеризующейся диаграммой порошковой рентгеновской дифракции с характеристическими пиками, выраженными в 28±0,2°, при 4,6° в комбинации с одним или более пиками, выбранными из группы, состоящей из 13,8, 17,2 и 15,9°.
Кроме того, в настоящем изобретении предложены предпочтительные варианты реализации способов и применений, описанных в настоящем документе, в которых рак выбран из группы, состоящей из мелкоклеточного рака легких, рака толстой и прямой кишки, рака желудка, рака предстательной железы, рака молочной железы, трижды негативного рака молочной железы, рака шейки матки, рака головы и шеи, рака пищевода, рака яичников, немелкоклеточного рака легких и неходжкинской лимфомы. Предпочтительные виды рака представляют собой мелкоклеточный рак легких, рак предстательной железы, трижды негативный рак молочной железы, рак шейки матки и рак головы и шеи.
В настоящем изобретении предложена также (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновая кислота или ее фармацевтически приемлемая соль для применения при одновременном, раздельном или последовательном введении в комбинации с одним или более химиотерапевтическими агентами при лечении рака.
Следует понимать, что следующие термины, упомянутые выше и по всему тексту настоящего изобретения, если не указано иное, имеют следующие значения.
Фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество представляет собой среду, общепринятую в данной области техники для доставки биологически активных агентов млекопитающим, например, людям.
Фармацевтически приемлемые соли или фармацевтически приемлемая соль относится к относительно нетоксичной неорганической и органической соли или солям соединения согласно настоящему изобретению.
Эффективное количество означает количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли согласно настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей соединение или его фармацевтически приемлемую соль согласно настоящему изобретению, которое вызывает биологический или медицинский ответ или требуемый терапевтический эффект в ткани, системе, организме животного, млекопитающего или человека, наблюдаемый исследователем, ветеринаром, врачом или иным клиницистом.
Термины лечение, лечить, лечащий и т.п. включают замедление или реверсирование развития расстройства. Указанные термины включают также облегчение, улучшение, снижение, исключение или ослабление одного или более симптомов расстройства или патологического состояния, даже если указанное расстройство или патологическое состояние фактически не исключено и даже если прогрессирование расстройства или патологического состояния само по себе не замедлено или не реверсировано.
Соединение согласно настоящему изобретению можно приводить во взаимодействие, например, с многочисленными неорганическими и органическими кислотами и основаниями с получением фармацевтически приемлемых солей. Такие фармацевтически приемлемые соли и общие методики их получения известны в данной области техники. См., например, Р. 81аЫ, е! а1., ΒΑΝΌΒΟΟΚ ΟΡ РНАКМАСЕИТ1САЬ 8АЬТ8: ΡΚΟΡΕΚΤΙΕ8, δΕΕΕΓΤΊΟΝ ΑΝΏ И8Е, (УСНАЖ11еу-УСН, 2002); 8.М. Негде, е! а1., Р11агтассиНеа1 8а115, 1оигиа1 оГ Рйагтасеибса1 8с1епсе5, том 66, № 1, январь 1977.
Соединение согласно настоящему изобретению предпочтительно составляют в виде фармацевтической композиции, используя фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество, и вводят различными способами. Предпочтительно, указанные композиции предназначены для перорального введения. Такие фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники. См., например, КеттдФп: Тйе 8с1епсе апб Ргасбсе οί Рйагтасу (А. Сеппаго, е! а1., ред., 21-ое изд., Маск РиЫЫппд Со., 2005).
Фактически вводимое количество соединения согласно настоящему изобретению определяет врач с учетом релевантных обстоятельств, включая патологическое состояние, подлежащее лечению, выбранный способ введения, фактическое вводимое соединение согласно настоящему изобретению, возраст, массу тела и реакцию индивидуального пациента, а также тяжесть симптомов пациента. Суточные дозы обычно составляют от примерно 1 до примерно 1000 мг. В некоторых случаях могут быть более подхо
- 3 032102 дящими уровни доз, которые меньше нижнего предела вышеуказанного диапазона, а в других случаях могут быть использованы более высокие дозы. Уровни доз могут быть определены специалистом в данной области техники.
Соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемые соли могут быть получены посредством многочисленных способов, известных в данной области техники, а также способов, описанных ниже в разделе Способы получения и примеры. Конкретные стадии синтеза каждого из описанных способов могут быть различным образом комбинированы с получением соединений согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемых солей.
Реагенты и исходные материалы обычно легкодоступны для специалистов в данной области техники. Другие реактивы могут быть получены по стандартным методикам органической и гетероциклической химии, методикам, известным специалистам в данной области техники, и способам, описанным ниже в разделе Примеры, включая все новые способы. Настоящее изобретение дополнительно иллюстрировано далее в разделе Способы получения и примеры. Если не указано иное, то названия и нумерация соединений, представленных в настоящем документе, были получены с помощью Ассс1гу§ Игате 4.1.
Индивидуальные изомеры, энантиомеры или диастереомеры могут быть выделены или разделены специалистами в данной области техники в любой удобной точке синтеза соединений при помощи таких способов, как технология селективной кристаллизации или хиральная хроматография (см., например, ЕпаШютсге. Касста1с8, апб Ке8о1и1юп8 (1. 1аес.|ис5. с1 а1., 1о1т \УПсу апб 8опз, 1пс., 1981)).
Специалистам в данной области техники понятно, что соединение согласно настоящему изобретению содержит по меньшей мере один хиральный центр. В частности, соединение согласно настоящему изобретению содержит два хиральных центра. Настоящее изобретение включает все отдельные энантиомеры или диастереомеры, а также смеси энантиомеров и диастереомеров указанных соединений, включая рацематы.
Предпочтительно, что соединение согласно настоящему изобретению существует в виде одного энантиомера или диастереомера. Отдельный энантиомер или диастереомер может быть получен, исходя из хиральных реагентов или технологиями стереоселективного или стереоспецифического синтеза. Альтернативно, отдельный энантиомер или диастереомер может быть выделен из смесей стандартными технологиями хиральной хроматографии или кристаллизации.
Специалистам в данной области техники известно, что соединение с пиразолильным кольцом может существовать в виде пары таутомеров, в которых атом водорода может мигрировать между двумя атомами азота в пиразолильном кольце.
Соединение согласно настоящему изобретению может быть получено в соответствии со способами синтеза, хорошо известными и принятыми в данной области техники. Подходящие условия реакций для стадий указанных реакций хорошо известны в данной области техники, и подходящие замены растворителей и совместных реагентов известны специалистам в данной области техники. Таким же образом, специалистам в данной области техники понятно, что синтетические промежуточные соединения, при необходимости или желании, могут быть выделены и/или очищены различными общеизвестными технологиями, и что зачастую можно использовать различные промежуточные соединения непосредственно на следующих стадиях синтеза с незначительной очисткой или без очистки. Кроме того, опытным специалистам понятно, что в некоторых случаях порядок введения фрагментов не критичен. Конкретный порядок стадий, необходимых для получения соединения согласно настоящему изобретению, зависит от конкретного синтезируемого соединения, исходного соединения и относительной подвижности замещенных фрагментов, что понятно опытным химикам. Все заместители, если не указано иное, являются такими, как определено ранее, и все реагенты являются общеизвестными и принятыми в данной области техники.
В данном контексте следующие термины имеют указанные значения: АДФ означает аденозин-5'дифосфат; АТФ означает аденозин-5'-трифосфат; В8А относится к альбумину бычьей сыворотки; ДНК относится к дезоксирибонуклеиновой кислоте; ДМСО относится к диметилсульфоксиду; ΌΤΤ относится к дитиотреитолу; ЭДТА относится к этилендиаминтетрауксусной кислоте; ЭГТК относится к этиленгликольтетрауксусной кислоте; ЕВ8 относится к эмбриональной бычьей сыворотке; 1УТ1 относится к 1п νίνο ингибированию мишени; НЕРЕ8 относится к 4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1этансульфоновой кислоте; МЕМ относится к минимальной необходимой среде; М8 относится к массспектроскопии; ЯМР относится к ядерному магнитному резонансу; РВ8 относится к фосфатносолевому буферному раствору; М8К. относится к минимальному значимому соотношению; РМ8Е относится к фенилметилсульфонилфториду; ΡΝΡΡ относится к гексагидрату динатриевой соли 4нитрофенилфосфата; ρά относится к фунтам на квадратный дюйм; 8СЬС относится к мелкоклеточному раку легких. ТАМЕ относится к гидрохлориду метилового эфира №альфа-4-тозил-Ь-аргинина; ТЕИ относится к предельной эффективной дозе; ТРСК относится к тозил-фенилаланил-хлорметилкетону.
Способ получения 1. Метил-2-метилпиперидин-4-карбоксилата гидрохлорид
- 4 032102
В реакционную емкость загружали ΡΐΟ2 (11,5 г). Затем емкость продували Ν2 и смачивали уксусной кислотой (225 мл). К суспензии добавляли метил-2-хлор-6-метилпиридин-4-карбоксилат (125 г) и уксусную кислоту (1000 мл). Закрывали реакционную емкость, продували Ν2, а затем продували Н2 и повышали давление Н2. Нагревали реакционную смесь при 60°С при 60 ρδΐ водорода в течение 7 ч. Проводили две отдельные реакции в одинаковом масштабе и при одинаковых условиях. Фильтровали реакционную смесь после каждой реакции и объединяли фильтраты. Концентрировали фильтраты под вакуумом с получением густого маслянистого вещества, содержащего небольшое количество уксусной кислоты. К густому маслянистому веществу добавляли метил-трет-бутиловый эфир (2 л) и перемешивали при комнатной температуре. Собирали полученное твердое вещество, промывали метил-трет-бутиловым эфиром (2х 1000 мл) и сушили под вакуумом при 35 °С с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (400 г). 1Н ЯМР (СОС13) δ 1,55 (д, 1=6,3 Гц, 3Н); 1,85 (к, 1=12,3 Гц, 1Н); 2,23-1,98 (м, 3Н); 2,59-2,46 (м, 1Н); 2,85 (дт, 1=13,0, 3,5 Гц, 1Н); 3,20-3,06 (м, 1Н); 3,53 (ш д, 1=12,6 Гц, 1Н); 3,69 (с, 3Н); 9,7 (ш с, 1Н)
Способ получения 2. Метил-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-2-метилпиперидин-4-карбоксилат
В трехгорлую круглодонную колбу (1 л) добавляли метил-2-метилпиперидин-4-карбоксилата гидрохлорид (205,4 г, 1,06 моль), 1-(бромметил)-3-хлор-2-фторбензол (261 г, 1,17 моль), ацетонитрил (2050 мл) и карбонат калия (293 г, 2,12 моль). Реакционную смесь перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение 18 ч. Затем прекращали нагревание, отфильтровывали твердые вещества, а затем промывали твердые вещества ацетонитрилом (2х250 мл). Концентрировали фильтрат под вакуумом с получением зеленого неочищенного продукта. Растворяли в метил-трет-бутиловом эфире (2500 мл), добавляли СЕПТЕ®, перемешивали, затем фильтровали. Промывали фильтрат водой. Экстрагировали органические соединение 1,25н. водным раствором хлористоводородной кислоты (200 мл), затем 1М водным раствором хлористо-водородной кислоты (1000 мл). Объединяли водные экстракты и подщелачивали до рН ~ 12 с помощью 48% водного раствора гидроксида натрия (250 г). Экстрагировали метил-трет-бутиловым эфиром (3 л). Сушили органические вещества над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого маслянистого вещества (272,8 г). МС (т/ζ): 300 (М+1).
Способ получения 3. Метил-(2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-2-метилпиперидин-4карбоксилат
Разделяли энантиомеры метил-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-2-метилпиперидин-4-карбоксилата (272,8 г), используя сверхкритическую жидкостную хиральную хроматографию. Неподвижная фаза: СЫга1рак 1С, подвижная фаза: 3% изопропилового спирта и 0,2% диметилэтиламина. Собирали первый элюированный энантиомер (Кт = 1,73 мин.). Собирали второй элюированный энантиомер в качестве указанного в заголовке соединения (158 г, выход 49,7%; Кт = 2,19 мин.; МС (т/ζ): 300 (М+1).). Аналитические условия: Неподвижная фаза: СЫга1рак 1С, подвижная фаза: 5% изопропилового спирта / 0,2% изопропиламина, поток 3 мл/мин., температура: 35°С.
Способ получения 4. Метил-(2К,4К)-2-метилпиперидин-4-карбоксилата гидрохлорид
- 5 032102
В трехгорлую колбу объемом 4000 мл добавляли метил-(2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-2метилпиперидин-4-карбоксилат (250 г, 0,834 моль), 1,2-дихлорэтан (1200 мл) и 1-хлорэтилхлорформиат (112 мл, 1,04 моль). Перемешивали при 70 °С с помощью механической мешалки в течение 72 ч. Добавляли 1-хлорэтилхлорформиат (30 мл, 0,227 моль) и перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение 6 ч. Оставляли смесь охлаждаться до 60°С и через капельную воронку добавляли метанол (250 мл) в течение 30-45 мин. Перемешивали при 60-65°С в течение 18 ч. Добавляли метанол (400 мл) и перемешивали при 65-68°С в течение 5 ч. Оставляли смесь охлаждаться до температуры окружающей среды и перемешивали в течение ночи. Концентрировали под вакуумом до суспензии. Разбавляли суспензию этилацетатом (1500 мл) и перемешивали при 0°С в течение 30 мин. Собирали твердые вещества и промывали этилацетатом (1000 мл) с получением указанного в заголовке соединения в виде серого твердого вещества (136,5 г, выход 84,5%). Н1 ЯМР (399,81 МГц, б6-ДМСО): δ 1,22 (д, 1= 6,5 Гц, 3Н), 1,531,43 (м, 1Н), 1,73-1,62 (м, 1Н), 1,99-1,91 (м, 2Н), 2,71-2,63 (м, 1Н), 2,89-2,83 (м, 1Н), 3,15-3,12 (м, 1Н), 3,23-3,20 (м, 1Н), 3,59 (с, 3Н), 9,03 (ш с, 1Н), 9,44 (ш с, 1Н).
Способ получения 5. О1-трет-Бутил-О4-метил-(2К,4К)-2-метилпиперидин-1,4-дикарбоксилат
Добавляли метил-(2К,4К)-2-метилпиперидин-4-карбоксилата гидрохлорид (136 г, 0,702 моль) и дихлорметан (1500 мл) в трехгорлую круглодонную колбу объемом 4 л, оснащенную верхнеприводной мешалкой. Добавляли диизопропилэтиламин (250 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение нескольких минут. Добавляли 4-пиридинамин-№,Н-диметил (9,0 г, 0,74 моль). Охлаждали на бане изо льда/воды. Медленно добавляли раствор ди-трет-бутилдикарбоната (192 г, 0,88 моль) в дихлорметане (300 мл) в течение ~30 мин, поддерживая температуру от 5 до 10°С. Оставляли смесь нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Добавляли раствор 10% щавелевой кислоты (2 л) и перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин. Разделяли слои. Промывали органические вещества 5% щавелевой кислотой (1 л). Промывали органические вещества водой, затем насыщенным раствором ЫаС1, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Растворяли в дихлорметане (250 мл). Наносили на слой диоксида кремния (250 мг), смоченный дихлорметаном. Элюировали дихлорметаном (3 л). Концентрировали фильтрат под вакуумом и выдерживали под вакуумом в течение нескольких часов с получением указанного в заголовке соединения (146 г, выход 80,8%) в виде бледно-желтого маслянистого вещества. Н1 ЯМР (399,80 МГц, СЭС13): 5 1,05 (д, 1= 6,8 Гц, 3Н), 1,42 (с, 9Н), 1,76-1,66 (м, 1Н), 1,99-1,94 (м, 3Н), 2,55 (квинтет, 1= 5,8 Гц, 1Н), 3,10-3,02 (м, 1Н), 3,67 (с, 3Н), 3,85-3,78 (м, 1Н), 4,18-4,10 (м, 1Н).
Способ получения 6. 6-Бром-2-(бромметил)-3-фторпиридин
Вг
В трехгорлую круглодонную колбу объемом 1000 мл, оснащенную обратным холодильником и отверстием для подачи азота, добавляли 6-бром-3-фтор-2-метилпиридин (50 г, 0,263 моль), Ν-бромсукцинимид (100 г, 0,562 моль) и тетрахлорид углерода (500 мл). Перемешивая при комнатной температуре, частями добавляли 2,2'-азобис(изобутиронитрил). Перемешивали реакционную смесь в течение 72 ч при 75°С. Оставляли смесь охлаждаться до комнатной температуры и отфильтровывали твердые вещества. Промывали твердые вещества толуолом (2x100 мл). Концентрировали фильтрат до ~ 250 мл, разбавляли тетрагидрофураном (300 мл) и охлаждали до 0-5°С. В атмосфере азота медленно добавляли раствор диэтилфосфита (37 мл, 0,288 моль) и триэтиламина (40 мл, 0,287 моль) в тетрагидрофуране (100 мл) в течение 30 мин. Оставляли смесь медленно нагреваться до комнатной температуры в течение 1 ч. Концентрировали под вакуумом. Добавляли ледяную воду и перемешивали смесь до ее нагревания до комнатной температуры. Собирали твердые вещества и промывали водой (2x200 мл). Сушили твердые вещества под вакуумом. Растворяли в дихлорметане (500 мл) и фильтровали через слой диоксида кремния. Промывали указанный слой дихлорметаном (250 мл). Концентрировали фильтрат под вакуумом, разбавляли гексанами (500 мл) и концентрировали под вакуумом до ~100 мл. Собирали твердые вещества и промывали гексанами (100 мл) с получением указанного в заголовке соединения (48,0 г, выход 67,8%) в виде белого твердого вещества. Собирали твердые вещества из маточного раствора и сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (5,2 г, выход 7,35%) в виде белого твердого вещества. Н1 ЯМР (399,80 МГц, СЭС13): δ 4,51 (д, 1= 2,1 Гц, 2Н), 7,31-7,25 (м, 1Н), 7,42 (дд, 1= 3,5, 8,6 Гц, 1Н).
Способ получения 7. О1-трет-Бутил-О4-метил-(2К,4К)-4-[(6-бром-3-фтор-2-пиридил)метил]-2метилпиперидин-1,4-дикарбоксилат
- 6 032102
В трехгорлую круглодонную колбу объемом 3 л добавляли О1-трет-бутил-О4-метил-(2К,4К)-2метилпиперидин-1,4-дикарбоксилат (48,1 г, 0,187 моль) в тетрагидрофуран (470 мл) и охлаждали смесь до -78°С. По каплям добавляли диизопропиламид лития (10 мас.%) в гексанах (112,2 мл, 0,224 моль) в течение 30 мин, поддерживая внутреннюю температуру ниже -71°С. Перемешивали при -78°С в течение 1,5 ч. По каплям добавляли раствор 6-бром-2-(бромметил)-3 -фторпиридина (60,4 г, 0,225 моль) в тетрагидрофуране (470 мл) в течение 1 ч, поддерживая внутреннюю температуру ниже -71°С. Перемешивали при -78°С в течение 1 ч. Гасили реакцию добавлением насыщенного водного раствора хлорида аммония (150 мл). Собирали полученные твердые вещества, растворяли в воде (500 мл) и экстрагировали этилацетатом (1000 мл). Объединяли экстракты, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Реакцию повторяли, используя 57,22 г О1-трет-бутил-О4-метил-(2К,4К)-2-метилпиперидин-1,4-дикарбоксилата, в таких же реакционных условиях и объединяли полученные вещества для очистки. Очищали объединенное вещество хроматографией на силикагеле (градиент 5-15% гексаны/этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (168,2 г) в виде светло-желтого маслянистого вещества. Н1 ЯМР (399,80 МГц, СОС^): δ 0,98 (д, 1= 7,1 Гц, 3Н), 1,43 (с, 9Н), 1,76 (дд, 1= 6,0, 13,8 Гц, 1Н), 2,02 (с, 2Н), 2,23 (дт, 1= 13,9, 2,1 Гц, 1Н), 3,09-2,98 (м, 3Н), 3,71 (с, 3Н), 3,90-3,87 (м, 1Н), 4,40-4,37 (м, 1Н), 7,19 (т, 1= 8,5 Гц, 1Н), 7,29 (дд, 1= 3,4, 8,6 Гц, 1Н).
Способ получения 8. Метил-(2К,4К)-4-[(6-бром-3-фтор-2-пиридил)метил]-1-[(3-хлор-2-фторфенил) метил]-2-метилпиперидин-4-карбоксилат
В трехгорлую круглодонную колбу объемом 4 л добавляли О1-трет-бутил-О4-метил-(2К,4К)-4-[(6бром-3-фтор-2-пиридил)метил]-2-метилпиперидин-1,4-дикарбоксилат (168,2 г, 0,378 моль) в 1,4-диоксан (945 мл). Медленно добавляли хлористоводородную кислоту (4 М в 475 мл 1,4-диоксана, 1,9 моль) в течение 20 мин. Перемешивали при комнатной температуре в течение 21 ч, затем при 50°С в течение 4 ч. Собирали твердые вещества и сушили под вакуумом при 45°С в течение 1 ч. Концентрировали фильтрат до твердого вещества и высушивали до конца. Добавляли объединенные твердые вещества, карбонат калия (105 г, 0,76 моль) и ацетонитрил (1200 мл) в трехгорлую круглодонную колбу объемом 3 л. Перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин, затем добавляли 3-хлор-2-фторбензилбромид (101,3 г, 0,453 моль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Фильтровали смесь через СБЫТЕ®. Концентрировали фильтрат до желтого маслянистого вещества. Очищали маслянистое вещество хроматографией на силикагеле (градиент от 100% дихлорметана до 7% метил-трет-бутилового эфира в дихлорметане за 70 мин) с получением указанного в заголовке соединения (153 г, 0,314 моль) в виде желтого маслянистого вещества). МС (т/ζ): 489 (М+1).
Способ получения 9. Метил-(2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[(3-фтор-6-[(5-метил-1Нпиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоксилат
В реакционную емкость для работы под микроволновым излучением добавляли трет-бутиловый спирт (9,4 мл) и удаляли кислород продуванием азота в течение 5 минут. Добавляли ацетат палладия (II) (0,044 г, 0,196 ммоль) и 2-ди-трет-бутилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенил (0,251 г, 0,58 моль). Добавляли воду (0,014 мл) под поверхностью раствора. Нагревали смесь, используя инициирующие микроволны, до 100°С в течение 2 мин. Добавляли полученный раствор катализатора через шприц к следующей смеси.
В трехгорлую круглодонную колбу объемом 3 л добавляли метил-(2К,4К)-4-[(6-бром-3-фтор-2пиридил)метил]-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-2-метилпиперидин-4-карбоксилат (9,4 г, 0,019 моль), 5- 7 032102 метил-1Н-пиразол-3-амин (2,07 г, 0,021 моль) и трет-бутиловый спирт (65 мл). Нагревали смесь до 40-45 °С и продували азотом в течение 10 мин. К указанной смеси добавляли карбонат цезия (14,5 г, 0,045 моль) и раствор катализатора, полученный выше. Перемешивали при 40-45°С в течение 3,5 ч. Реакция не была завершена. Получали дополнительную смесь ацетата палладия (II) (0,0088 г, 0,039 ммоль), 2-дитрет-бутилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенила (0,050 г, 0,103 ммоль), воды (2,8 мкл) и третбутилового спирта (2 мл). Нагревали полученную смесь, используя инициирующие микроволны, до 100°С в течение 2 мин, а затем добавляли ее к полученной выше смеси, в которой реакция протекла не до конца. Перемешивали реакционную смесь при 40-45°С в течение 2 ч. Разбавляли смесь этилацетатом (100 мл), фильтровали через слой СБЫТЕ® и промывали указанный слой этилацетатом (100 мл). Концентрировали под вакуумом. Повторяли реакцию, используя 129,35 г метил-(2К,4К)-4-[(6-бром-3-фтор-2пиридил)метил]-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-2-метилпиперидин-4-карбоксилата, в таких же реакционных условиях, как описаны выше, и объединяли неочищенные вещества для очистки.
Объединяли два неочищенных продукта реакции. Очищали материал хроматографией на силикагеле, используя градиент от 30% этилацетата в смеси 1:1 дихлорметана/гексанов до 100% этилацетата, с получением 95 г розового твердого вещества. Добавляли твердое вещество в колбу объемом 4 л, содержащую тиол 81Б1АМЕТ8® (120 г) и дихлорметан (2 л). Перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Фильтровали смесь через СЕБ1ТЕ®. Концентрировали фильтрат досуха с получением указанного в заголовке соединения (93,3 г) в виде белого пенистого вещества. МС (т/ζ): 504 (М+1).
Пример 1. (2К,4К)-1-[(3-Хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]2-пиридил]метил] -2-метилпиперидин-4-карбоновая кислота р
С1
В трехгорлую круглодонную колбу объемом 1 л добавляли метил-(2Б,4Б)-1-[(3-хлор-2-фторфенил) метил]-4-[(3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоксилат (19,95 г, 0,040 моль), хлористоводородную кислоту (36,5 мас.%) и воду (140 мл, 1,63 моль). Перемешивали при 93-96°С в течение 17 ч. Охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Растворяли остаток в воде (1000 мл) и охлаждали на ледяной бане. Доводили рН до 6,5 с помощью 5н. гидроксида натрия. Собирали полученные твердые вещества и промывали водой. Экстрагировали водный фильтрат 10% смесью изопропанола/дихлорметана (3x500 мл). Сушили и концентрировали до твердого вещества. Объединяли оба твердых вещества и растворяли в этаноле (200 мл). Разбавляли этилацетатом (1500 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Фильтровали и концентрировали под вакуумом до твердого вещества. Растворяли твердое вещество в 5% смеси метанола/дихлорметана, разбавляли этилацетатом (500 мл) и концентрировали до 300 мл. Отфильтровывали твердые вещества. Повторяли реакцию, используя 61,9 г метил-(2Б,4Б)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]4-[(3 -фтор-6-[(5 -метил-1Н-пиразол-3 -ил)амино] -2-пиридил]метил] -2-метилпиперидин-4-карбоксилата, в таких же реакционных условиях, как описаны выше. Объединяли фильтраты из обеих реакций. Концентрировали объединенные фильтраты до ~ 600 и разбавляли гексанами (600 мл). Собирали твердые вещества и сушили под вакуумом при 50°С в течение ночи. Концентрировали маточные растворы под вакуумом досуха и сушили твердые вещества под вакуумом при 50°С в течение ночи. Объединяли твердые вещества с получением указанного в заголовке соединения (63,44 г). МС (т/ζ): 490 (М+1). [α]20 ο + 17,3° (с 1,00, ЕЮН).
Пример 2. трет-Бутиламинная соль (2Б,4Б)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил1 Н-пиразол-3 -ил)амино] -2-пиридил]метил] -2-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты
Добавляли (2Б,4Б)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту (580 мг) в 4 мл ацетона. Твердое вещество растворялось с образованием прозрачного желтого раствора при перемешивании при 60°С (температура плиты)/1000 об/мин. К раствору добавляли трет-бутиламин (150 мкл, 1,20 экв., 99,5%) и наблюдали образование осадка. Суспендировали смесь в течение еще 10 мин при 60°С, а затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Фильтровали твердое вещество вакуумной фильтрацией и сушили твердое вещество в вакуумной печи при 60 °С с получением указанного в заголовке соединения (635 мг, выход 95,26%).
- 8 032102
Пример 3. Аммониевая соль (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Нпиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты
Добавляли (2Е,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1И-пиразол-3-ил)амино]2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту (154 мг) в 2 мл ацетона. Твердое вещество растворялось с образованием прозрачного желтого раствора при перемешивании при 60 °С (температура шшты)/1000 об/мин. К раствору добавляли гидроксид аммония (29,8%, 50 мкл, 1,22 экв.) и наблюдали образование осадка. Суспендировали смесь в течение еще двух часов при 60°С, а затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Наблюдали образование густой суспензии ярко-белого твердого вещества. Фильтровали твердое вещество вакуумной фильтрацией и сушили твердое вещество в вакуумной печи при 60°С с получением указанного в заголовке соединения (145 мг, выход 90,81%).
Порошковая рентгеновская дифракция примеров 2 и 3.
Диаграммы ПРД кристаллических твердых веществ получали на рентгеновском порошковом дифрактометре Вгикег Ό4 ЕпТеауог, оснащенном источником СиКа (λ = 1,54060 А) и детектором Уап1ее, работающем при 35 кВ и 50 мА. Образец сканировали от 4 до 40° 2Θ с шагом 0,009° 2Θ и скоростью сканирования 0,5 с/шаг, и с дивергенцией 0,6 мм, с неподвижной 5,28 мм антирассеивающей и 9,5 мм детекторной щелями. Сухой порошок укладывали на кварцевый держатель образца и при помощи предметного стекла обеспечивали гладкую поверхность. Диаграммы дифракции кристаллической формы получали при температуре и относительной влажности окружающей среды. В области кристаллографии хорошо известно, что для любой данной кристаллической формы относительные интенсивности пиков дифракции могут варьироваться из-за предпочтительной ориентации, обусловленной такими факторами, как морфология и форма кристалла. При наличии эффекта предпочтительной ориентации, интенсивности пиков являются переменными, но положения характеристических пиков полиморфа не меняются. См., например, фармакопею США №23, национальный формуляр №18, страницы 1843-1844, 1995. Кроме того, в области кристаллографии также хорошо известно, что для любой данной кристаллической формы угловые положения пиков могут незначительно варьироваться. Например, положения пиков могут смещаться вследствие изменения температуры или влажности, при которых анализируют образец, вследствие смещения образца или наличия или отсутствия внутреннего стандарта. В представленном случае вариабельность положения пика, составляющая ± 0,2 в градусах 2Θ, учитывает указанные возможные отклонения, не препятствуя точному определению указанной кристаллической формы. Подтверждение кристаллической формы может быть основано на любой уникальной комбинации характеристических пиков (в единицах °2Θ), как правило, более выраженных пиков. Диаграммы дифракции кристаллической формы, полученные при температуре и влажности окружающей среды, корректировали в соответствии со стандартными пиками ΝΙ8Τ 675 при 8,853 и 26,774 градусах 2-тета.
Характеристики полученного образца примера 2 получали с помощью диаграммы ПРД, используя излучение СиКа, имеющей пики дифракции (значения 2-тета), представленные ниже в табл. 1, и, в частности, имеющей пики при 17,0° в комбинации с одним или более пиками, выбранными из группы, состоящей из 11,5°, 23,2 ° и 15,0°; с допуском углов дифракции 0,2°.
Таблица 1. Пики порошковой рентгеновской дифракции примера 2
| Пик | Угол (°2-тета) +/- 0,2° | Относительная интенсивность (% от наиболее интенсивного пика) |
| 1 | 8,0 | 24,6 |
| 2 | П,5 | 57,1 |
| 3 | 14,0 | 26,4 |
| 4 | 15,0 | 42,3 |
| 5 | 17,0 | 100,0 |
| 6 | 19,3 | 24,9 |
| 7 | 21,0 | 37,1 |
| 8 | 23,2 | 45,1 |
| 9 | 24,0 | 30,9 |
| 10 | 26,1 | 23,7 |
Характеристики полученного образца примера 3 получали с помощью дифрактограммы ПРД, используя излучение СиКа, имеющей пики дифракции (значения 2-тета), представленные ниже в таблице 2, и, в частности, имеющей пики при 4,6° в комбинации с одним или более пиками, выбранными из группы, состоящей из 13,8°, 17,2° и 15,9°; с допуском углов дифракции 0,2°.
- 9 032102
Таблица 2. Пики порошковой рентгеновской дифракции примера 3
| Пик | Угол (°2-тета) +/- 0,2° | Относительная интенсивность (% от наиболее интенсивного пика) |
| 1 | 4,6 | 100,0 |
| 2 | 9,3 | 38,1 |
| 3 | 9,9 | 26,1 |
| 4 | 10,5 | 39,4 |
| 5 | 13,8 | 72,2 |
| 6 | 15,9 | 62,7 |
| 7 | 17,2 | 66,6 |
| 8 | 18,5 | 40,3 |
| 9 | 21,3 | 52,3 |
| 10 | 28,1 | 49,8 |
Рентгеновская кристаллическая структура киназы Аигога А с применением примера 3.
Каталитический домен киназы Аигога А (остатки 125-391 последовательности ΝΡ_003591) экспрессировали в клетках насекомых 8(9 с Ν-концевой полигистидиновой меткой, расщепляемой протеазой ТЕУ. Экспрессированный белок выделяли связыванием с никель-хелатообразующей колонкой. После расщепления гистидиновой метки белок дополнительно очищали, пропуская через эксклюзионную хроматографическую колонку (16/600 8200; СЕ ЫГезшепеез), уравновешенную в буфере, содержащем 50 мМ фосфата натрия с рН 7,0, 250 мМ №С1, 1 мМ ЭДТА, 5 мМ ЭТТ и 0,1 мМ Р,у-имидоаденозин-5'трифосфата (АМР-ΡΝΡ). В очищенный белок киназы Аигога А в концентрации 8,3 мг/мл добавляли дополнительное количество АМР-ΡΝΡ до конечной концентрации 2 мМ и кристаллизовали при 21°С посредством диффузии из паровой фазы. Кристаллизацию проводили смешиванием 0,8 мкл белка с 0,8 мкл резервуарного раствора, содержащего 100 мМ МЕ8 с рН 4,6, 23% ПЭГ 3350 и 150 мМ сульфата аммония, и уравновешивали относительно того же резервуара в лотках сидячей капли. Монокристалл киназы Аигога А в комплексе с АΜΡ-ΡNΡ пропитывали в течение ночи в растворе, содержащем 2 мМ примера 3, и переносили в раствор, содержащий 20% полиэтиленгликоля 400, и замораживали быстрой заморозкой в жидком азоте. Данные рентгеновской дифракции до 1,96 А получали из замороженного кристалла на установке для проведения рентгеновских исследований группы совместного доступа лаборатории Ш1у Кезеагсй ЬаЬога1опе8 (ЬКЬ-САТ ΛΡ8 31ΙΏ) в компании Айуапеей Ρ^σΐθη 8оигсе, Аргонн, штат Иллинойс. Использовали рентгеновские лучи с длиной волны 0,9793 А для получения 180 кадров в 1° осцилляциях, с расстоянием до детектора 185 мм. Структуру киназы Аигога А с применением примера 3 определяли с помощью молекулярного замещения и уточняли до К-фактора 20,6% и свободного К-фактора 25,6%. Результат представлен с примером 3 и обеспечивает данные о стереохимии. Он также обеспечивает данные о стереохимии примеров 1 и 2, поскольку пример 1 использовали в качестве исходного вещества для получения примеров 2 и 3.
- 10 032102
Таблица 3. Атомные координаты лиганда в комплексе, полученном в результате обработки кристаллов
| Аигога А приме] | ром 3 | |||
| АТОМ | X | Υ | Ζ | В-Фактор |
| С1 | 112,063 | -22,352 | 4,479 | 42,62 |
| С2 | 112,093 | -21,548 | 5,620 | 40,92 |
| СЗ | 106,478 | -13,876 | 6,709 | 30,97 |
| С4 | 112,494 | -21,851 | 3,250 | 39,63 |
| С5 | 106,509 | -14,173 | 5,352 | 32,26 |
| Сб | 109,743 | -16,303 | 3,016 | 23,86 |
| С7 | 112,557 | -20,234 | 5,530 | 49,20 |
| С8 | 107,454 | -14,403 | 7,543 | 30,71 |
| С9 | 112,992 | -19,735 | 4,307 | 46,02 |
| СЮ | 112,961 | -20,539 | 3,170 | 49,13 |
| С11 | 108,433 | -15,216 | 6,985 | 29,52 |
| С12 | 110,350 | -16,658 | 1,793 | 21,45 |
| С13 | 107,527 | -15,000 | 4,893 | 27,64 |
| С14 | 108,526 | -15,780 | 2,647 | 22,41 |
| С15 | 107,800 | -17,220 | 8,960 | 40,44 |
| С16 | 109,027 | -18,128 | 6,966 | 34,87 |
| С17 | 110,137 | -17,883 | 9,201 | 32,43 |
| С18 | 110,391 | -18,481 | 6,358 | 28,24 |
| С19 | 111,482 | -18,224 | 8,537 | 32,71 |
| С20 | 109,128 | -17,256 | 8,229 | 32,98 |
| С21 | 111,684 | -17,267 | 1,564 | 24,45 |
| С22 | 112,398 | -18,885 | 9,578 | 37,45 |
| С23 | 112,608 | -19,345 | 6,737 | 32,82 |
| С24 | 109,500 | -15,812 | 7,858 | 33,06 |
| N25 | 108,492 | -15,529 | 5,670 | 28,42 |
| N26 | 108,483 | -15,845 | 1,290 | 23,85 |
| N27 | 109,585 | -16,379 | 0,739 | 22,58 |
| N28 | 111,302 | -19,083 | 7,346 | 32,56 |
| N29 | 107,540 | -15,286 | 3,509 | 30,18 |
| 030 | 106,690 | -17,266 | 8,449 | 39,38 |
| 031 | 108,001 | -17,113 | 10,295 | 42,47 |
| Р32 | 107,438 | -14,126 | 8,849 | 36,03 |
| РЗЗ | 113,435 | -18,468 | 4,239 | 56,09 |
| СЬ34 | 113,500 | -19,908 | 1,663 | 70,06 |
Результаты следующих анализов демонстрируют, что соединение примера 1 согласно настоящему изобретению является ингибитором Аигога А. Кроме того, результаты следующих анализов демонстрируют, что соединение примера 1 является селективным ингибитором Аигога А, который может обеспечивать снижение ингибирования Аигога В или двойного ингибирования Аигога А/В. Кроме того, результаты следующих анализов демонстрируют, что соединение примера 1 вызывает митотический блок клеточного цикла посредством ингибирования активности киназы Аигога А. Кроме того, соединение примера 1 демонстрирует направленное ингибирование ΐη у1уо киназы Аигога А, но не Аигога В, в образцах ксенотрансплантатной опухоли, а также значительную эффективность против роста опухоли в модели мелкоклеточного рака легких N01-4446 на бестимусных мышах.
Анализ киназы Аигога А
В данном анализе измеряли способность исследуемых соединений ингибировать активность киназы Аигога А ΐη У1!го посредством измерения поляризации АДФ-флуоресценции ТИА^СИЕТАЕР® в формате 96-луночного черного планшета (ΟΟΚΝΙΝΟ® СО8ТАК® 3694). В киназном буфере [50 мМ 4-(2гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислоты (ИЕРЕ8) с рН 7,4, 4 мМ МдС12, 0,01% ΤΡΊΤΟΝ™ Х-100 и 2 мМ дитиотреитола (ΌΤΤ)] получали раствор аденозинтрифосфата (АТФ) и активационной петли киназы Аигога А (ΕΝΟΟΕΝ®, №326861) в конечных концентрациях 20 мкМ АТФ и 150 мкМ активационной петли киназы Аигога А, соответственно. К раствору добавляли фермент Аигога А в конечной концентрации 0,096 нг/мкл. Исследуемые соединения серийно разбавляли 1:3 в 20% диметилсульфоксиде (ДМСО) с получением 10-точечной кривой зависимости от дозы в конечных концентрациях, начинающихся с 20 мкМ. Буфер ДМСО без исследуемого соединения использовали в качестве положительного контроля (полная активность Аигога А в отсутствие ингибитора). В качестве отрицательного контроля использовали полную реакционную смесь с 100 нМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) для определения фонового содержания аденозин-5'-дифосфата (АДФ). Добавляли полученный раствор фермента Аигога А на планшет, содержащий исследуемые соединения и положительный и отрицательные контроли, и предварительно инкубировали смесь в течение 30 мин при 22°С. Реакцию инициировали добавлением раствора АТФ и активационной петли киназы Аигога А и продолжали в течение 30 минут при 22°С. Затем реакцию останавливали добавлением 25 мкл (1:1 об.:об.) смеси для обнаружения АДФ, содержащей метку для отслеживания АДФ в дальней красной области, антитело АДФ и буфер для оста
- 11 032102 новки и обнаружения (Ве11Ьгоок ЬаЬк, кат. № 3003-10К). Планшеты выдерживали в темноте в течение по меньшей мере 2 часов для обеспечения возможности вытеснения метки АДФ Α1еxа633 (связанной с антителом АДФ2) АДФ, полученным в реакции с киназой, и определяли снижение поляризации флуоресценции (И1!га384, Тесап). В описанном выше киназном буфере использовали стандартную кривую АТФ/АДФ для определения превращения АДФ для исследуемых соединений.
Разность между средним значением положительного и отрицательного контролей принимали за 100% активность. Для получения значений 1С50 применяли построение четырехпараметрической логистической кривой с помощью программного обеспечения АсЙУЙуВаке™ (ШВ8, Аламеда, штат Калифорния). Анализы показали минимальное значимое соотношение (М8Р) <3.
Соединение, входящее в границы объема настоящего изобретения, испытывали в указанном анализе, по существу, так, как описано выше. Определили, что соединение примера 1 имеет 1С50 1,12±0,15 нМ (п=4). Биохимический анализ Аигога А достиг нижнего предела аналитического обнаружения, поэтому указанная 1С50 может не отражать абсолютную ингибирующую эффективность соединения ίη νίΐτο; однако сам анализ является статистически обоснованным, поэтому представленные данные демонстрируют результат 1С50, который указанное соединение проявляет в данном анализе. Таким образом, полученные результаты демонстрируют, что пример 1 ингибирует активность киназы Аигога А ίη νίΐτο.
Анализ киназы Аигога В.
В данном анализе измеряли способность исследуемых соединений ингибировать активность киназы Аигога И ίη νίΙΐΌ посредством измерения поляризации АДФ-флуоресценции ТРА^СРЕЕХЕР в формате 96-луночного черного планшета (ί,ΌΡΝΙΝΟ СО8ТАР 3694). Получали раствор фермента Аигога В в киназном буфере (37,5 мМ НЕРЕ8 с рН 7,4, 6,25 мМ М§С12, 0,0075% ΤΡΙΤΟΝ™ Х-100 и 2,5 мМ ΌΤΤ) с ферментом Аигога В (конечные концентрации 0,39 нг/мкл), 0,1 мкМ пептида ΙΝί,ΈΡ (Сеп8спр1. №92480_1, конечные концентрации 0,1 мкМ), АТФ (конечная концентрация 10 мкМ) и гистона Н3 (Апакрес, №КЬН08-4, конечная концентрация 5 мкМ). Исследуемые соединения серийно разбавляли 1:3 в 20% ДМСО с получением 10-точечной кривой зависимости от дозы в конечных концентрациях, начинающихся с 20 мкМ. Буфер ДМСО без исследуемого соединения использовали в качестве положительного контроля (полная активность Аигога В в отсутствие ингибитора). В качестве отрицательного контроля использовали полную реакционную смесь с 100 нМ ЭДТА для определения фонового содержания АДФ. Добавляли полученный раствор фермента Аигога В на планшет, содержащий исследуемые соединения и положительный и отрицательный контроли. Предварительно инкубировали смесь в течение 30 мин при 22°С. Добавляли полученные ранее растворы АТФ и гистона Н3 для инициации реакции и инкубировали планшет в течение 45 мин при 22°С. Реакцию останавливали добавлением 25 мкл (1:1 об.:об.) смеси для обнаружения АДФ, содержащей метку для отслеживания АДФ в дальней красной области, антитело АДФ и буфер для остановки и обнаружения (Ве11Ьгоок ЬаЬк, кат. № 3003-10К). Планшеты выдерживали в темноте в течение по меньшей мере 2 часов для обеспечения возможности вытеснения метки АДФ А1еха633 (связанной с антителом АДФ2) АДФ, полученным в реакции с киназой, с последующим определением поляризации флуоресценции (и11та384, Тесап). В описанном выше киназном буфере использовали стандартную кривую АТФ/АДФ для определения превращения АДФ для исследуемого соединения.
Разность между средним значением положительного и отрицательного контролей принимали за 100% активность. Для получения значений 1С50 применяли построение четырехпараметрической логистической кривой с помощью программного обеспечения АсШйуВаке™ (ШВ8, Аламеда, штат Калифорния). Анализы показали минимальное значимое соотношение (М8Р) < 3.
Соединение, входящее в границы объема настоящего изобретения, испытывали в указанном анализе, по существу, так, как описано выше. Определили, что соединение примера 1 имеет 1С50 1510 ± 668 нМ (п=5). Полученный результат демонстрирует, что пример 1 ингибирует активность киназы Аигога В ш νίΙΐΌ слабее, чем он ингибирует активность киназы Аигога А ш νίΙΐΌ.
Клеточный фенотипический мультиплексный анализ фосфо-8ет10 гистона Н3 и содержания ДНК.
В данном анализе измеряли митотический блок, вызванный ингибированием Аигога А. Митотический блок, вызванный ингибированием Аигога А, измеряли по повышению митотического маркера фосфо-8ет10 гистона Н3, увеличению содержания 4Ν ДНК (О2/М) и по фенотипам ингибирования клеточной пролиферации при 24-часовой обработке соединением с применением прибора Аситеп Ехр1огег™ (лазерного сканирующего флуоресцентного цитометра для микропланшетов (ТТР ЬаЬТесй ЬТО, Великобритания)). Клетки Не1а, приобретенные в Американской коллекции типовых культур (АТСС), в количестве 5000 клеток/лунку помещали на 96-луночные планшеты ВО В1ОСОАТ™, покрытые поли-Элизином (Вес1оп Пюкшкоп, кат. № 356640) и инкубировали при 37°С в течение 24 ч в атмосфере с 5% СО2 в минимальной необходимой среде (МЕМ) (например, 01Ьсо, кат. №31095) с 10% эмбриональной бычьей сыворотки (ЕВ8) (например, 01Ьсо, кат. №16000), 1% заменимых аминокислот (например, 01Ьсо, кат. №11140), 1% пирувата натрия (например, 01Ьсо, кат. №11360) и 1% пенициллина-стрептомицина (например, 01Ьсо, кат. №15140). Клетки обрабатывали добавлением исследуемых соединений к среде, введением доз в 10 точках серийных разбавлений 1:3 в диапазоне от 20 мкМ до 0,001 мкМ и с конечной концентрацией ДМСО 0,25%. Через 24 ч воздействия соединений клетки фиксировали препаратом РРЕ
- 12 032102
РЕК™ (Лпа1сс11 ЬТЭ.. кат. № 414) в течение 30 мин при комнатной температуре, один раз промывали фосфатно-солевым буферным раствором (ΡΒ8) и пермеабилизировали 0,1% раствором ΤΚΙΤΟΝ® Х100 в растворе ΡΒ8 в течение 15 мин при комнатной температуре. Клетки дважды промывали ΡΒ8 и блокировали 1% раствором альбумина бычьей сыворотки (Β8Ά) в ΡΒ8 (например, 81дта, кат. № А7030) в течение 30 мин при комнатной температуре. К клеткам добавляли первичное кроличье поликлональное антитело против фосфо-8ег10 гистона Н3 (Мййроге, кат. № 06-570) в разбавлении 1:1000 в ΡΒ8 с 1% Β8Ά и инкубировали в течение ночи при 4°С. После двух промываний ΡΒ8 клетки инкубировали с козьим антикроличьим меченным вторичным антителом ГдО А1еха 488 в разбавлении 1:1000 в ΡΒ8 (Гпуйгодеп, кат. № А11008) в течение 1 ч при комнатной температуре. После дополнительных двух промываний ΡΒ8 добавляли раствор, содержащий 10 мкг/мл йодида пропидия (1пу1!годеп, кат. № Р3566) и 50 мкг/мл рибонуклеазы А (81дта, кат. № К-6513) в ΡΒ8, для окрашивания ядер. Сканировали флуоресценцию планшетов с помощью ΑΟΌΜΕΝ ΕΧΡΕΟΚΕΚ™ [лазерного сканирующего флуоресцентного цитометра для микропланшетов (с аргоновым ионным лазерным возбуждением при 488 нм и обнаружением в нескольких фотоэлектронных умножителях, производства компании ТТР ЬаЬТесй Ь!б.) для измерения фосфо-8ег10 гистона Н3 и содержания ДНК. Анализ изображения основан на клеточных флуоресцентных сигналах для идентификации клеток в различных субпопуляциях. Результатом анализа является процент ингибирования клеточной пролиферации, процент клеток, положительных к фосфо-8ег10 гистона Н3, процент 2Ν (содержание ДНК в фазе С1 клеточного цикла или диплоидных ДНК, где N относится к одному набору хромосом, содержанию гаплоидной ДНК) и процент 4Ν и >4Ν (фаза клеточного цикла О2/М и далее) на профилях гистограммы ДНК. Значения 1С50 и ЕС50 определяли посредством построения черырехпараметрической логистической кривой для каждого значения, используя АСТГУГТУ ΒΑ8Ε™.
Соединение, входящее в границы объема настоящего изобретения, испытывали в указанном анализе, по существу, так, как описано выше. Соединение примера 1 демонстрирует митотический блок с ЕС50 108±15 нМ (п=4) для повышения й-8ег10 гистона Н3, ЕС50 108±27 нМ (п=4) для повышения содержания 4№ДНК и ГС50 52,9±27 нМ (п=4) для ингибирования клеточной пролиферации, соответственно.
Клеточный анализ ингибирования фосфо-8ег10 гистона Н3 Аигога В.
В данном анализе измеряли снижение фосфо-8ег10 гистона Н3, вызванное ингибированием Аигога В в течение одного часа обработки исследуемым соединением. Клетки ΝΟΉ446 из Американской коллекции типовых культур (АТСС) помещали в количестве 12000 клеток/лунку в 96-луночные планшеты ΒΌ ΒЮСΟΑТ™, покрытые поли-Э-лизином ЩеСоп Эюкшкоп, кат. № 356640), и инкубировали при 37°С в течение 24 ч в атмосфере с 5% СО2 в среде, разработанной онкологическим институтом Розуэлла Парка (ΚΡΜΙ) (например, 01Ьсо, кат. № 52400) с добавлением 10% ΡΒ8 (например, 01Ьсо, кат. №16000) и 1% пенициллина-стрептомицина (например, 01Ьсо, кат. №15140). Клетки обрабатывали добавлением исследуемых соединений к среде, введением доз в 10 точках серийных разбавлений 1:3 в диапазоне от 40 мкМ до 0,002 мкМ, с конечной концентрацией ДМСО 0,2%. Через один час воздействия исследуемых соединений клетки фиксировали 16% формальдегидом в ΡΒ8 (конечная концентрация 4% из исходного 37% раствора формальдегида, 81дта, кат. № Р1635) в течение 45 мин при комнатной температуре, один раз промывали ΡΒ8 и пермеабилизировали холодным метанолом в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем клетки один раз промывали 0,1% ΤΚΙΤΟΝ® Х100 в растворе ΡΒ8, дважды промывали ΡΒ8 и блокировали 3% обезжиренным молоком в ΡΒ8 (ЭИсо, кат. № 232100) в течение 30 мин при комнатной температуре. К клеткам добавляли первичное кроличье поликлональное антитело против фосфо-8ег10 гистона Н3 (Мййроге, кат. № 06-570) в разбавлении 1:1000 в 3% растворе обезжиренного молока в ΡΒ8 и инкубировали в течение ночи при 4°С. После однократного промывания 0,1% раствором ΤΚΙΤΟΝ® Х100 в растворе ΡΒ8 и двух промываний ΡΒ8 клетки инкубировали с козьим антикроличьим меченным вторичным антителом ГдО А1еха 488 в разбавлении 1: 1000 в ΡΒ8 (Гпуйгодеп, кат. № А11008) в течение одного часа при комнатной температуре. После дополнительных двух промываний ΡΒ8 добавляли раствор, содержащий 10 мкг/мл йодида пропидия (Гпуйгодеп, кат. № Р3566) и 50 мкг/мл рибонуклеазы А (81дта, кат. № Κ-6513) в ΡΒ8, для окрашивания ядер. Сканировали флуоресценцию планшетов с помощью АСυΜΕΝ ΕΧΡΕΟΚΕΚ™ [лазерного сканирующего флуоресцентного цитометра для микропланшетов (с аргоновым ионным лазерным возбуждением при 488 нм и обнаружением в нескольких фотоэлектронных умножителях, производства компании ТТР ^ΑΒΤΕСН ЬТЭ) для измерения фосфорилирования белка гистона Н3 и содержания ДНК. Анализ изображения основан на клеточных флуоресцентных сигналах для идентификации клеток в различных субпопуляциях. Результат анализа представляет собой процент клеток, положительных к фосфо-8ег10 гистона Н3. Значения ГС50 определяли посредством построения черырехпараметрической логистической кривой для каждого значения, используя Оепеба!а 8сгеепег®.
Соединение, входящее в границы объема настоящего изобретения, испытывали в указанном анализе, по существу, так, как описано выше. Соединение примера 1 демонстрирует значение ГС50 ингибирования Аигога В при 1467 ±456 нМ (п=4). Вместе с результатами клеточного анализа Μ8Ό фосфор-Тйг288 Аигога А, представленного ниже, пример 1 демонстрирует селективность в отношении Аигога А по сравнению с Аигога В.
Получение клеточных лизатов и выделение гистона.
- 13 032102
Ниже представлена методика получения надосадочных растворов клеточного лизата для применения в следующем твердофазном иммуноферментном анализе ингибирования фосфорилирования Аигога А компании Мезо Зса1е ОЬеоусгу (Μ8Ό). Лизат клеток Н446 мелкоклеточного рака легких (ЗСЬС) получали в соответствии с описанием производителя Μ8Ό (ΗΐΙρ: тезо-зса1е.сот/Са1а1одЗуз1етШеЬ/
Ооситеп1з/Р1юзр1то Аигога А ТЬг288 ШСЬ.рбГ). используя лизисный буфер (Тпз 25 мМ с рН 7,5; лейпептин 10 мкг/мл; трипсин-химотрипсин 10 мкг/мл; тозил-фенилаланил-хлорметил-кетон (ТРСК) 10 мкг/мл; апротинин 10 мкг/мл; β-глицерофосфат 60 мМ; ТгИоп Х-100 1%; пирофосфат натрия (Ыа2Н2Р2О7) 2,5 мМ; ЫаС1 150 мМ; ЭДТА 15 мМ; этиленгликольтетрауксусную кислоту (ЭГТК) 5 мМ; гидрохлорид метилового эфира Х-альфа-4-тозил-Ь-аргинина (ТАМЕ) 2 мМ; гексагидрат динатриевой соли 4нитрофенилфосфата (ΡΝΡΡ) 15 мМ; бензамидин 5 мМ; ванадат натрия 1 мМ; фторид натрия 10 мМ; фенилметансульфонилфторид (РМ8Е) 50 мкг/мл; ОТТ 1 мМ; окадаиковую кислоту 1 мкМ; микроцистин 1 мкМ). Концентрацию белка в надосадочном растворе измеряли с помощью белкового анализа Вюгаб ОС (№500-0111, ВюЯаб) и использовали 25 мкл клеточного лизата с концентрацией 1 мг/мл для анализа Μ8Ό фосфор-ТЬг288 Аигога А.
Клеточный анализ Μ8Ό фосфор-ТЬг288 Аигога А.
Цель данного анализа заключается в измерении ингибирующей активности в отношении киназы Аигога А в клеточной культуре. Анализ проводили, используя 96-луночные планшеты для иммуноферментного твердофазного анализа компании Мезо 8са1е ОЬсоуегу (Μ8Ό) (набор для цельноклеточного лизата №К150 1СЭ. Мезо 8са1е ОЬсоуегу. штат Мэриленд).
Планшет для фосфо-Ашота А Зтд1ер1ех МиЬТ1-8РОТ® блокировали добавлением 150 мкл/лунку блокирующего раствора А (конечная концентрация 3% В8А). Встряхивали планшет при комнатной температуре в течение 1 часа и промывали буфером Μ8Ό ТпзШазЬ три раза. В планшет для фосфо-Ашота А МИЕП-ЗРОТ® добавляли 25 мкл клеточных лизатов с концентрацией 1 мг/мл. Инкубировали смесь в течение еще 3 часов при комнатной температуре и три раза промывали смесь буфером Μ8Ό Тпз\Уаз11. Детекторное антитело (фосфо-Т288 анти-Ашота А ЗиЬЕО-ТАСТМ) разбавляли 50х в буфере для разбавления антитела с 1% ВЗА (1 часть 3% ВЗА с 2 частями промывочного буфера Μ8Ό; 0,02% блокатора ΌЯ) и добавляли на планшет 25 мкл/лунку, встряхивая в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшет 3 раза промывали буфером Μ3Ό ТпзШазЬ, затем на планшет добавляли 150 мкл/лунку 2Х буфера считывания Μ3Ό Яеаб ВиГГег Т и считывали планшеты на приборе Μ3Ό ЗЕСТОЯТМ 1тадег 6000. Процент ингибирования определяли как [(100-(значение МЗИ-максимальное ингибирующее значение МЗИ)/(минимальное ингибирующее значение Μ3Ό - максимальное ингибирующее значение МЗИ)]х 100.
Максимум и минимум определяли с помощью 2 мкМ раствора соединения положительного контроля, алисертиба, против отрицательного контроля, содержащего только ДМСО.
Соединение, входящее в границы объема настоящего изобретения, испытывали в указанном анализе, по существу, так, как описано выше. Соединение примера 1 демонстрирует ингибирование Аигога А в клетке в течение 1 часа обработки соединением с 1С50 1,4±1,1 нМ (п=2). Полученные данные указывают на то, что пример 1 демонстрирует ингибирующую активность в отношении киназы Аигога А в клеточной культуре.
Получение лизата опухолевого белка и выделение гистона.
Ниже представлена методика получения лизатов ксенотрансплантатной опухоли и экстракта гистона, используемых в следующих ίη у1уо анализах направленного ингибирования (1УТ1). Образцы опухоли охлаждали в жидком азоте и помещали на листы фольги, и измельчали с помощью ступки и пестика, охлаждая в контейнере с сухим льдом. Образцы опухолевой ткани измельчали пестиком, и растертые в порошок опухолевые ткани переносили в пробирку, содержащую гранулы лизирующей матрицы Ό (№6913-500; Вютебюа1з МР, Ьузтд Мах1пх Ό) и 0,6 мл лизисного буфера (Тпз 25 мМ, рН 7,5; лейпептин 10 мкг/мл; трипсин-химотрипсин 10 мкг/мл; ТРСК 10 мкг/мл; апротинин 10 мкг/мл; βглицерофосфат 60 мМ; ТгПоп Х-100 1%; пирофосфат натрия Ща2Н2Р2О7) 2,5 мМ; №1С1 150 мМ; ЭДТА 15 мМ; ЭГТК 5 мМ; гидрохлорид метилового эфира Жальфа-4-тозил-Ь-аргинина (ТАМЕ) 2 мМ; Р№Р 15 мМ; бензамидин 5 мМ; ванадат натрия 1 мМ; фторид натрия 10 мМ; РМЗЕ 50 мкг/мл; ЭТТ 1 мМ; окадаиковая кислота 1 мкМ; микроцистин 1 мкМ) с целой не содержащей ЭДТА таблеткой (№1873580; Яоске). Пробирки энергично встряхивали в течение 30 с со скоростью 6,0 в Вю101 Газ1Ргер (№Вю 101; ТНегто Зе\\'еап1). Опухолевый лизат получали в соответствии со спецификацией производителя Μ3Ό (Ы1р://тетете.тезо-зса1е.сот/Са1а1одЗуз1етШеЬ/Поситеп1з/РЬозрко_Ашота_А_ТЬг288_ШСЕ.рбГ). Концентрацию белка в надосадочном растворе определяли с помощью белкового анализа Вюгаб ИС (№5000111).
Использовали набор для полной экстракции гистона (№ОР-0006; Ер10шк) для полного извлечения гистона из осадка опухолевой ткани, полученного на описанной выше стадии центрифугирования, в соответствии со спецификацией производителя (11Цр:/Л\л\л\\ерщеп1ек.сот/босз/ОР-0006.рбГ). Концентрацию белка измеряли с помощью белкового анализа Вюгаб ИС (№500-0111; ВюЯаб), и 25 мкл раствора с концентрацией белка экстракта гистона 0,25 мг/мл использовали для !УТ! анализов фосфо-Зег10 гистона
- 14 032102
Н3.
Анализ М8Э направленного ингибирования фосфор-Тйг288 Аигога Α ίη νΐνο (ίνΤΙ).
Цель данного анализа заключается в измерении ингибирования киназы Аигога Α ίη νΐνο с применением образцов ксенотрансплантатной опухоли. Анализ проводили в формате 96-луночного планшета для твердофазного иммуноферментного анализа компании Мезо 8са1е Эксоуегу (Μ8Ό). В планшет для фосфо-Аигога А 8шд1ер1ех МИЬТ1-8РОТ® (набор для цельноклеточного лизата К150 1СЭ; Мезо 8са1е Эксоусгу. штат Мэриленд) добавляли 150 мкл/лунку блокирующего раствора А (конечная концентрация 3% В8А). Встряхивали планшет при комнатной температуре в течение 1 ч и промывали буфером Тгк\Уаз11 три раза. Опухолевые лизаты разбавляли по описанному выше протоколу получения опухолевого лизата до 1 мг/мл и добавляли 25 мкл/лунку на планшет Μ8Ό для фосфо-Аигога МиЬТ1-8РОТ®. Инкубировали смесь в течение еще 3 ч при комнатной температуре и 3 раза промывали буфером Тгк\Уаз11. Детекторное антитело фосфо-Т288 анти-Ашота А 8иЬРО-ТАОТМ в буфере для разбавления антитела с 1% В8А (антитело, разбавленное 50х в буфере с 1 частью 3% В8А и 2 частями промывочного буфера; 0,02% блокатора Ό-Κ.) добавляли на планшет в количестве 25 мкл/лунку и встряхивали планшет в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшет 3 раза промывали буфером Тгк\Уаз11. добавляли на планшет 150 мкл/лунку 2Х буфера считывания Реаб ВиГГег Т, а затем сразу считывали на приборе М8Э 8ЕСТОРТМ 1тадег 6000. Процентное ингибирование определяли как [100-(среднее значение М8Э в группе, обработанной соединением/среднее значение М8Э в группе, обработанной носителем)] х 100.
Соединение, входящее в границы объема настоящего изобретения, испытывали в указанном анализе, по существу, так, как описано выше. Соединение примера 1 демонстрирует ТЕЭ5) 2,13 мг/кг в модели ксенотрансплантата Н446 на бестимусных мышах (предельная эффективная доза) в исследовании зависимости эффекта от дозы через 3 часа после введения дозы. Полученные данные показывают, что пример 1 демонстрирует ингибирование киназы Аигога А ίη угуо в образцах ксенотрансплантатной опухоли с указанной ТЕЭ.
Анализ М8Э направленного ингибирования фосфо-8ег10 гистона Н3 Аигога В ίη угуо (ίνΠ).
Цель данного анализа заключается в измерении ингибирующей активности ίη угуо в отношении киназы Аигога В в образцах ксенотрансплантатной опухоли посредством определения ингибирования фосфо-8ег10 гистона Н3, поскольку он является непосредственно следующим киназным субстратом Аигога В. Анализ проводили в формате 96-луночного планшета для твердофазного иммуноферментного анализа компании Мезо 8са1е Эксоуегу (М8Э). Блокирующий раствор А (конечная концентрация 3% В8А) добавляли на 4-ячеечный планшет для гистона Н3 МЦЕТ1-8РОТ® (набор для цельноклеточного лизата кат. №
К150 Е\УЭ-3 1СЭ, Мезо 8са1е Э|зсоусгу. штат Мэриленд) в количестве 150 мкл/лунку и встряхивали планшет при комнатной температуре в течение 1 ч. После 3-кратного промывания буфером М8Э Тгк\Уаз11 гистоновый экстракт разбавляли до 0,25 мг/мл по описанному выше протоколу получения опухолевого лизата и добавляли на планшет М8Э в количестве 25 мкл/лунку. Инкубировали смесь в течение еще 3 часов при комнатной температуре, 3 раза промывали буфером М8Э Тгк\Уаз11. Детекторное антитело 8иЬРО-ТАО анти-гистон Н3 фосфо-8ег10 разбавляли 50х в 3 мл буфера для разбавления антитела с 1% В8А (1 мл 3% В8А с 2 мл промывочного буфера М8Э; 0,01% блокатора Ό-М) и добавляли на планшет в количестве 25 мкл/лунку, и встряхивали планшет при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем планшет 3 раза промывали буфером М8Э Тгк\Уаз11. На планшет добавляли 150 мкл/лунку 2Х буфера считывания М8Э Реаб ВиГГег Т. Сразу считывали планшет на приборе М8Э 8ЕСТОКТМ 1тадег 6000. Процентное ингибирование определяли как [100-(среднее значение М8Э в группе, обработанной соединением/среднее значение М8Э в группе, обработанной носителем)] х 100.
Соединение, входящее в границы объема настоящего изобретения, испытывали в указанном анализе, по существу, так, как описано выше. Соединение примера 1 не приводит к ингибированию фосфо8ег10 гистона Н3 более 50% в анализе зависимости эффекта от дозы в концентрации 30 мг/кг через 3 ч после введения дозы, а также в исследовании зависимости от времени в дозе 50 мг/кг через 1 ч после введения дозы. Полученный результат позволяет предположить, что пример 1 не ингибирует Аигога В ίη угуо в образах ксенотрансплантатой опухоли в указанных дозах.
Эффективность против роста опухоли в модели ксенотрансплантата 8СЬС NСI-Н446 на бестимусных мышах.
Цель данного анализа заключается в измерении ίη угуо ингибирования роста опухоли в моделях ксенотрансплантата 8СЬС NСI-Н446 и 8СЬС NСI-Н69 на бестимусных мышах. Все ίη угуо исследования проводили в соответствии протоколами Институционального комитета по уходу за животными и их использованию. Для ксенотрансплантатных моделей, клетки мелкоклеточного рака легких человека ΝΟΙН446 и клетки мелкоклеточного рака легких человека NСI-Н69 сохраняли в соответствии с рекомендациями поставщика. Клетки собирали, промывали и повторно суспендировали в 1:1 смеси не содержащей сыворотки среды и Ма1гще1 (354234, Всс1оп Пккшзоц). Затем клетки имплантировали самкам бестимус
- 15 032102 ных голых мышей (Наг1ап ЬаЬога1опе§) посредством подкожного введения в заднюю боковую область в количестве 5х106 клеток/мышь. Объем опухоли оценивали с помощью формулы: ν= 1x^2x0,536, где 1 = наибольший измеренный диаметр, и а = наименьший перпендикулярный диаметр. Данные анализировали с помощью программного обеспечения 8Л8 (8Л8 1п§1йи1е§ 1пс, Кэрри, штат Северная Каролина).
По достижении объема опухоли 150 мм3 у бестимусных мышей, животных случайным образом разделяли на группы по объему опухоли и вводили исследуемое соединение в виде состава, используя в качестве носителя 20% гидроксипропил-бета-циклодекстрин (НРВСИ)/25 мМ фосфатно-солевой буферный раствор с рН 8, с конечным рН, доведенным до рН 9 с помощью 1н. ИаОН. В группах с носителем и в экспериментальных группах использовали по десять животных. В каждой выбранной точке времени экспериментальные группы сравнивали с контрольной группой, которой вводили носитель. Объемы опухоли указаны как средние значения вместе со стандартными ошибками для каждой экспериментальной группы.
Соединение, входящее в границы объема настоящего изобретения, испытывали в указанном анализе, по существу, так, как описано выше. Соединение примера 1 демонстрирует значительную эффективность против роста опухоли в модели ксенотрансплантата мелкоклеточного рака легких ИС1-Н446 на бестимусных мышах и в модели ксенотрансплантата мелкоклеточного рака легких ИС1-Н69 на бестимусных мышах.
Таблица 4. Ингибирование роста ксенотрансплантатной опухоли 8СЬС Н446 ΐη νίνο при лечении по примеру 1
| Схема введения доз | Средний объем опухоли (мм3) | СО объема опухоли (мм3) | р- значение | Дельта Т/С (%) | Регрессия (%) |
| носитель | 698,61 | 319,434 | НП | НП | НП |
| Пример 1 30 мг/кг; ВЮ (два раза в сутки)х21 | 106,19 | 22,729 | <001* | НП | -45,8 |
| Пример 1 50 мг/кг; ВГОх21 | 31,62 | 4,340 | <001* | НП | -83,9 |
Анализ объема опухоли основан на Ьод 10 и обобщенной ковариационной структуре авторегрессии 1-го порядка.
*:3начимое (р < 0,05); НП: не применимо.
Дельта Т/С (%) рассчитывали на 30 день, когда объем опухоли в экспериментальной группе был равен или превышал исходный объем опухоли (16 день).
Формула: 100х(Т-Т0)/(С-С0), где Т и С представляют собой средние конечные значения объема опухоли в экспериментальных или контрольных группах, соответственно. Т0 и С0 представляют собой средние исходные объемы опухоли в указанных группах.
Регрессию (%) рассчитывали, если конечный объем был меньше исходного значения. Формула: 100х(Т-Т0)/Т0, где Т0 представляют собой средний исходный объем опухоли в экспериментальных группах.
Таблица 5. Ингибирование роста ксенотрансплантатной опухоли 8СЬС Н69 ΐη νίνο
| при лечении по примеру 1 | |||||
| Схема введения доз | Средний объем опухоли (мм3) | СО объема опухоли (мм3) | рзначение | Дельта Т/С (%) | Регрессия (%) |
| носитель | 687,61 | 95,175 | НП | НП | НП |
| Пример 1 30 мг/кг; ВГОх14 | 73,35 | 9,269 | <001* | НП | -63,6 |
| Пример 1 50 мг/кг; ВГОх14 | 72,32 | 8,035 | <001* | НП | -63,1 |
Анализ объема опухоли основан на Ьод 10 и обобщенной ковариационной структуре авторегрессии 1-гопорядка.
*:3начимое (р < 0,05); НП: не применимо.
Дельта Т/С (%) рассчитывали на 30 день, когда объем опухоли в экспериментальной группе был равен или превышал исходный объем опухоли (16 день).
Формула: 100х(Т-Т0)/(С-С0), где Т и С представляют собой средние конечные значения объема опухоли в экспериментальных или контрольных группах, соответственно. Т0 и С0 представляют собой средние исходные объемы опухоли в указанных группах.
Регрессию (%) рассчитывали, если конечный объем был меньше исходного значения. Формула: 100х (Т-Т0)/Т0, где Т0 представляют собой средний исходный объем опухоли в экспериментальных группах.
- 16 032102
Claims (12)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Соединение, выбранное из группы, состоящей из (28,48)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил] метил] -2-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6-[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил] метил] -2-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты или их фармацевтически приемлемой соли.
- 2. Соединение по п.1, представляющее собой (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.
- 3. Соединение по п.2, представляющее собой (2К,4К)-1-[(3-хлор-2-фторфенил)метил]-4-[[3-фтор-6[(5-метил-1Н-пиразол-3-ил)амино]-2-пиридил]метил]-2-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту
- 4. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая соединение или соль по любому из пп.1-3 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество.
- 5. Применение соединения или соли по любому из пп.1-3 для ингибирования активности киназы Аигога А.
- 6. Применение соединения или соли по любому из пп.1-3 для лечения рака.
- 7. Применение по п.6, отличающееся тем, что рак выбран из группы, состоящей из мелкоклеточного рака легких, рака толстой и прямой кишки, рака желудка, рака предстательной железы, рака молочной железы, трижды негативного рака молочной железы, рака шейки матки, рака головы и шеи, рака пищевода, рака яичников, немелкоклеточного рака легких и неходжкинской лимфомы.
- 8. Применение по п.7, отличающееся тем, что рак представляет собой мелкоклеточный рак легких.
- 9. Применение по п.7, отличающееся тем, что рак представляет собой рак предстательной железы.
- 10. Применение по п.7, отличающееся тем, что рак представляет собой трижды негативный рак молочной железы.
- 11. Применение по п.7, отличающееся тем, что рак представляет собой рак шейки матки.
- 12. Применение по п.7, отличающееся тем, что рак представляет собой рак головы и шеи.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201462079742P | 2014-11-14 | 2014-11-14 | |
| PCT/US2015/059390 WO2016077161A1 (en) | 2014-11-14 | 2015-11-06 | Aurora a kinase inhibitor |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201790838A1 EA201790838A1 (ru) | 2017-12-29 |
| EA032102B1 true EA032102B1 (ru) | 2019-04-30 |
Family
ID=54697647
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201790838A EA032102B1 (ru) | 2014-11-14 | 2015-11-06 | Ингибитор киназы aurora a |
Country Status (41)
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7227968B2 (ja) * | 2018-05-29 | 2023-02-22 | 大鵬薬品工業株式会社 | 抗腫瘍剤及び腫瘍治療方法 |
| KR20210084555A (ko) * | 2018-11-30 | 2021-07-07 | 일라이 릴리 앤드 캄파니 | 신경모세포종의 치료에 사용하기 위한 오로라 a 키나제 억제제 |
| CN112239465A (zh) * | 2019-07-16 | 2021-01-19 | 微境生物医药科技(上海)有限公司 | 极光激酶抑制剂及其用途 |
| CN112898292A (zh) | 2019-12-03 | 2021-06-04 | 微境生物医药科技(上海)有限公司 | 新型极光激酶抑制剂及其用途 |
| TWI785474B (zh) * | 2020-01-22 | 2022-12-01 | 大陸商北京加科思新藥研發有限公司 | 用作選擇性Aurora A抑制劑的新型雜環化合物 |
| AU2022280845A1 (en) | 2021-05-24 | 2023-12-14 | Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. | Nitrogen-containing heterocyclic compound, preparation method therefor, and application thereof in medicines |
| CN117836285A (zh) * | 2021-07-28 | 2024-04-05 | 北京加科思新药研发有限公司 | Aurora a选择性抑制剂的多晶型及其用途 |
| CA3247183A1 (en) | 2022-04-08 | 2023-10-12 | Eli Lilly And Company | TREATMENT METHOD INCLUDING KRAS G12C INHIBITORS AND AURORA A INHIBITORS |
| KR20250103773A (ko) | 2022-11-23 | 2025-07-07 | 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드 | 질소 함유 헤테로시클릭계 화합물의 약학적으로 사용 가능한 염, 결정형 및 제조 방법 |
| KR20260019479A (ko) | 2023-05-04 | 2026-02-10 | 레볼루션 메디슨즈, 인크. | Ras 관련 질환 또는 장애를 위한 병용 요법 |
| WO2024230647A1 (zh) * | 2023-05-05 | 2024-11-14 | 苏州信诺维医药科技股份有限公司 | 杂环类化合物、其药物组合物和其应用 |
| CN121889155A (zh) | 2023-08-07 | 2026-04-17 | 锐新医药公司 | 用于治疗ras蛋白相关疾病或病症的rmc-6291 |
| AU2024360465A1 (en) | 2023-10-12 | 2026-04-09 | Revolution Medicines, Inc. | Macrocyclic ras inhibitors |
| WO2025171296A1 (en) | 2024-02-09 | 2025-08-14 | Revolution Medicines, Inc. | Ras inhibitors |
| WO2025240847A1 (en) | 2024-05-17 | 2025-11-20 | Revolution Medicines, Inc. | Ras inhibitors |
| US20250375445A1 (en) | 2024-06-07 | 2025-12-11 | Revolution Medicines, Inc. | Methods of treating a ras protein-related disease or disorder |
| WO2025265060A1 (en) | 2024-06-21 | 2025-12-26 | Revolution Medicines, Inc. | Therapeutic compositions and methods for managing treatment-related effects |
| WO2026006747A1 (en) | 2024-06-28 | 2026-01-02 | Revolution Medicines, Inc. | Ras inhibitors |
| WO2026015801A1 (en) | 2024-07-12 | 2026-01-15 | Revolution Medicines, Inc. | Methods of treating a ras related disease or disorder |
| WO2026015825A1 (en) | 2024-07-12 | 2026-01-15 | Revolution Medicines, Inc. | Use of ras inhibitor for treating pancreatic cancer |
| WO2026015790A1 (en) | 2024-07-12 | 2026-01-15 | Revolution Medicines, Inc. | Methods of treating a ras related disease or disorder |
| WO2026015796A1 (en) | 2024-07-12 | 2026-01-15 | Revolution Medicines, Inc. | Methods of treating a ras related disease or disorder |
| WO2026050446A1 (en) | 2024-08-29 | 2026-03-05 | Revolution Medicines, Inc. | Ras inhibitors |
| WO2026072904A2 (en) | 2024-09-26 | 2026-04-02 | Revolution Medicines, Inc. | Compositions and methods for treating lung cancer |
| WO2026090116A2 (en) | 2024-10-21 | 2026-04-30 | Revolution Medicines, Inc. | Ras inhibitors |
| US20260108528A1 (en) | 2024-10-22 | 2026-04-23 | Revolution Medicines, Inc. | Methods of treating a ras protein-related disease or disorder |
| WO2026090245A1 (en) | 2024-10-22 | 2026-04-30 | Revolution Medicines, Inc. | Use of ras inhibitors for treating cancer |
| WO2026106912A1 (en) | 2024-11-12 | 2026-05-21 | Revolution Medicines, Inc. | Ras inhibitors |
| WO2026112260A1 (en) | 2024-11-21 | 2026-05-28 | Revolution Medicines, Inc. | Ras inhibitors |
| WO2026122764A2 (en) | 2024-12-06 | 2026-06-11 | Revolution Medicines, Inc. | Ras inhibitors |
| WO2026128688A2 (en) | 2024-12-13 | 2026-06-18 | Revolution Medicines, Inc. | Ras inhibitors |
| WO2026161839A1 (en) | 2025-01-27 | 2026-07-30 | Revolution Medicines, Inc. | Ras inhibitors |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009104802A1 (en) * | 2008-02-22 | 2009-08-27 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Novel aminopyridine derivatives having aurora a selective inhibitory action |
| WO2013129443A1 (ja) * | 2012-02-29 | 2013-09-06 | 大鵬薬品工業株式会社 | 新規ピペリジン化合物又はその塩 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2006008874A1 (ja) * | 2004-05-21 | 2008-05-01 | 萬有製薬株式会社 | アミノチアゾ−ル骨格を有するＣｄｋ４、６選択的阻害剤 |
| WO2006046734A2 (ja) * | 2004-10-29 | 2006-05-04 | Banyu Pharma Co Ltd | オーロラa選択的阻害作用を有する新規アミノピリジン誘導体 |
| JP2008081492A (ja) | 2006-08-31 | 2008-04-10 | Banyu Pharmaceut Co Ltd | オーロラａ選択的阻害作用を有する新規アミノピリジン誘導体 |
| AU2010229140A1 (en) * | 2009-03-24 | 2011-11-10 | Msd K.K. | Novel aminopyridine derivatives having Aurora A selective inhibitory action |
-
2015
- 2015-10-28 TW TW104135473A patent/TWI693218B/zh active
- 2015-10-29 JO JOP/2015/0265A patent/JO3488B1/ar active
- 2015-10-29 AR ARP150103501A patent/AR102463A1/es unknown
- 2015-11-06 ES ES15798602T patent/ES2716732T3/es active Active
- 2015-11-06 HR HRP20190324TT patent/HRP20190324T1/hr unknown
- 2015-11-06 SI SI201531347T patent/SI3473619T1/sl unknown
- 2015-11-06 KR KR1020177012611A patent/KR101930182B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2015-11-06 WO PCT/US2015/059390 patent/WO2016077161A1/en not_active Ceased
- 2015-11-06 EP EP15798602.7A patent/EP3218366B1/en active Active
- 2015-11-06 ES ES18204389T patent/ES2826448T3/es active Active
- 2015-11-06 CA CA2963473A patent/CA2963473C/en active Active
- 2015-11-06 JP JP2016533687A patent/JP6159029B2/ja active Active
- 2015-11-06 RS RS20201310A patent/RS60999B1/sr unknown
- 2015-11-06 PL PL15798602T patent/PL3218366T3/pl unknown
- 2015-11-06 EP EP18204389.3A patent/EP3473619B8/en active Active
- 2015-11-06 BR BR112017007239-4A patent/BR112017007239B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2015-11-06 SG SG11201703394RA patent/SG11201703394RA/en unknown
- 2015-11-06 ME MEP-2019-44A patent/ME03325B/me unknown
- 2015-11-06 LT LTEP15798602.7T patent/LT3218366T/lt unknown
- 2015-11-06 PT PT15798602T patent/PT3218366T/pt unknown
- 2015-11-06 EA EA201790838A patent/EA032102B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2015-11-06 MY MYPI2017701669A patent/MY188313A/en unknown
- 2015-11-06 HU HUE15798602A patent/HUE043759T2/hu unknown
- 2015-11-06 TN TN2017000116A patent/TN2017000116A1/en unknown
- 2015-11-06 NZ NZ730771A patent/NZ730771A/en not_active IP Right Cessation
- 2015-11-06 PT PT182043893T patent/PT3473619T/pt unknown
- 2015-11-06 CR CR20170158A patent/CR20170158A/es unknown
- 2015-11-06 US US14/934,201 patent/US9637474B2/en active Active
- 2015-11-06 LT LTEP18204389.3T patent/LT3473619T/lt unknown
- 2015-11-06 RS RS20190161A patent/RS58347B1/sr unknown
- 2015-11-06 MX MX2017006275A patent/MX377560B/es active IP Right Grant
- 2015-11-06 CN CN201580061585.0A patent/CN107108567B/zh active Active
- 2015-11-06 HU HUE18204389A patent/HUE051530T2/hu unknown
- 2015-11-06 SI SI201530564T patent/SI3218366T1/sl unknown
- 2015-11-06 DK DK15798602.7T patent/DK3218366T3/en active
- 2015-11-06 TR TR2019/02686T patent/TR201902686T4/tr unknown
- 2015-11-06 PE PE2017000824A patent/PE20170898A1/es unknown
- 2015-11-06 UA UAA201704577A patent/UA117983C2/uk unknown
- 2015-11-06 DK DK18204389.3T patent/DK3473619T3/da active
- 2015-11-06 AU AU2015347043A patent/AU2015347043B2/en not_active Ceased
-
2017
- 2017-01-17 US US15/407,766 patent/US10010540B2/en active Active
- 2017-03-27 IL IL251406A patent/IL251406B/en active IP Right Grant
- 2017-03-29 ZA ZA2017/02199A patent/ZA201702199B/en unknown
- 2017-03-31 SV SV2017005418A patent/SV2017005418A/es unknown
- 2017-05-02 DO DO2017000111A patent/DOP2017000111A/es unknown
- 2017-05-11 CL CL2017001209A patent/CL2017001209A1/es unknown
- 2017-05-11 PH PH12017500881A patent/PH12017500881B1/en unknown
- 2017-05-12 EC ECIEPI201729203A patent/ECSP17029203A/es unknown
- 2017-05-12 CO CONC2017/0004784A patent/CO2017004784A2/es unknown
-
2019
- 2019-03-06 CY CY20191100271T patent/CY1121334T1/el unknown
-
2020
- 2020-10-19 HR HRP20201681TT patent/HRP20201681T1/hr unknown
- 2020-11-16 CY CY20201101083T patent/CY1123592T1/el unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009104802A1 (en) * | 2008-02-22 | 2009-08-27 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Novel aminopyridine derivatives having aurora a selective inhibitory action |
| WO2013129443A1 (ja) * | 2012-02-29 | 2013-09-06 | 大鵬薬品工業株式会社 | 新規ピペリジン化合物又はその塩 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10010540B2 (en) | Aurora A kinase inhibitor | |
| JP6633254B2 (ja) | Ｃｄｋ７を阻害するのに有用な化合物 | |
| JP6064079B2 (ja) | Ｃｄｃ７阻害剤 | |
| US11465986B2 (en) | Crystal form of c-MET inhibitor and salt form thereof and preparation method therefor | |
| JP5877064B2 (ja) | ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤 | |
| AU2016369835B2 (en) | Pyrido[1,2-a]pyrimidone analog, crystal form thereof, intermediate thereof and preparation method therefor | |
| CN115894500B (zh) | 一种作为btk激酶抑制剂的化合物及其制备方法与用途 | |
| HK1236952B (en) | Aurora a kinase inhibitor | |
| HK1236952A1 (en) | Aurora a kinase inhibitor | |
| HK1212696B (en) | Cdc7 inhibitors |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AZ BY KG TJ TM |