EP0270968A2 - Röntgen-Mikroskop - Google Patents
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- G21K—HANDLING OF PARTICLES OR IONISING RADIATION NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; IRRADIATION DEVICES; GAMMA RAY OR X-RAY MICROSCOPES
- G21K7/00—Gamma- or X-ray microscopes
Definitions
- the present invention relates to an X-ray microscope in which the object is illuminated coherently or partially coherently with quasi monochromatic X-ray radiation via a condenser and is magnified in the image plane by means of a high-resolution X-ray objective.
- each imaging element ie condenser and X-ray lens
- a zone plate consists of a large number of very thin rings, for example made of gold, which are applied to a thin carrier film (for example made of polyimide). These rings form a circular grid with a radially increasing line density.
- the zone plates diffract the incident monochromatic X-ray radiation of the wavelength and thus cause an image.
- the contrast in the image is mediated by photoelectric absorption in the object, i.e. structures are imaged which effect an amplitude modulation of the X-rays passing through.
- the wavelength range of the X-rays which is between 2.4 nm and 4.5 nm, ie between the oxygen K edge and the carbon K edge, is particularly suitable.
- This area is also known as the water window, since water has a transmission that is about ten times higher than that of organic materials. It can be used in this wavelength range examine organic materials and thus cells and cell organelles in living condition.
- the resolution achieved so far in X-ray microscopy is about a factor of 10 better than in light microscopy, with a further increase in X-ray microscope resolution by about an order of magnitude being still possible.
- the limit resolution in X-ray microscopy of amplitude structures will be given by the radiation exposure of the objects to be examined.
- This object is achieved, starting from an X-ray microscope according to the invention, in that an element is arranged in the Fourier plane of the X-ray objective, which element extends over the area affected by the zero or a preselectable other order of the radiation deflected by the object, and gives the radiation passing through a phase shift.
- phase-shifting properties of object structures are used to form contrast.
- the phase-shifting element arranged in the beam path gives the preselected order of the X-ray radiation coming from the object a phase shift with respect to the other radiation coming from the object that does not pass through the element.
- the phase-shifted and the unaffected radiation components interfere in the image plane and create a high-contrast, enlarged picture of the object.
- the quantity ⁇ describes the absorption, which becomes smaller as the wavelength ⁇ of the X-ray radiation becomes shorter.
- the size ⁇ is decisive for the phase shift which is given to the continuous X-ray radiation.
- the size ⁇ generally varies very slowly with the wavelength. For this reason, if the phase shift is used by the object, a significant improvement in the contrast in the image can be achieved.
- images can also be generated with a lower radiation exposure to the object, the contrast of which is no worse than when the amplitude contrast is used with a higher radiation exposure.
- phase-shifting element is designed according to claim 5.
- phase-shifting element used in the X-ray microscope according to the invention. It may therefore be necessary to adjust the intensities of the interfering orders in the image plane of the radiation coming from the object.
- the phase-shifting and the absorbing effect of the phase-shifting element is advantageously distributed over different corresponding surfaces in the Fourier plane of the X-ray objective. The radiation passing through these corresponding surfaces is influenced independently of one another in phase and amplitude, specifically in such a way that the intensities of the radiation interferences in the image plane are matched to one another.
- the radiation coming from an X-ray source is designated by (1).
- a synchrotron or another source described in Part 1 of the book “X-Ray Microscopy” by Schmahl and Rudolph, Springer-Verlag 1984 can be used as the X-ray source.
- the x-ray radiation passes through an x-ray condenser (2) and is guided by this to the object (3) to be observed, which is arranged on a central diaphragm (4).
- the X-ray radiation deflected by the object (3) passes through a high-resolution X-ray lens (5) and is imaged by the latter into the image plane (6).
- the Fourier plane of the lens (5) is designated, in which the decomposition of the radiation passing through the object (3) is found in harmonic Fourier components. This distribution is represented again in the image plane (6) by a Fourier inverse transformation as a real image.
- Zone plates such as are shown, for example, in FIG. 2 are advantageously used as imaging elements (2) and (5).
- This zone plate consists of a large number of rings which are placed on a very thin carrier foil, e.g. are applied from polyimide.
- the rings are usually made of gold or chrome and have a low layer thickness of approx. 0.1 ⁇ m.
- the rings form a circular grid with a radially increasing line density.
- a phase-shifting and / or absorbing element (8) is arranged in the Fourier plane (7) of the objective (5).
- This consists, as shown in FIG. 3, of a thin carrier film (9) which is contained in a ring (10) and on which a thin layer of phase-shifting material, for example chrome in the form a central circular disc (11) is applied.
- the zero-order X-ray radiation (1) coming from the object (3) penetrates the central circular disk (11).
- This radiation is given a phase shift of 90 ° with respect to the orders diffracted by the object structures.
- the image plane (6) there is interference between the phase-shifted radiation and the uninfluenced radiation and thus a high-contrast, enlarged image of the object (3) is created, which can be captured directly on a photosensitive layer, for example.
- Fig. 4 shows an embodiment of an element (8) serving for phase shift and / or absorption, in which a ring (12) made of the appropriate material, for example chrome, is attached to the carrier film (9).
- This ring gives higher orders of the radiation deflected by the object a phase shift. Which order is to be influenced is determined by the diameter and the width of the ring (12).
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Abstract
Description
- Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Röntgen-Mikroskop, bei dem das Objekt uber einen Kondensor mit quasi monochromatischer Röntgenstrahlung kohärent oder teilkohärent beleuchtet und mittels eines hochauflösenden Röntgenobjektivs vergrößert in die Bildebene abgebildet wird.
- Solche Röntgen-Mikroskope sind beispielsweise in Teil IV des Buches "X-Ray Microscopy" von Schmahl und Rudolph, Springer-Verlag 1984 beschrieben. Auf den Seiten 192/202 dieses Buches findet sich die Beschreibung eines Röntgen-Mikroskops bei dem jedes abbildende Element, d.h. also Kondensor und Röntgenobjektiv als Zonenplatte ausgebildet ist. Eine solche Zonenplatte besteht aus einer Vielzahl von sehr dünnen Ringen, beispielsweise aus Gold, die auf eine dünne Trägerfolie (z.B. aus Polyimid) aufgebracht sind. Diese Ringe bilden ein Zirkular-Gitter mit radial ansteigender Liniendichte. Die Zonenplatten beugen die auftreffende monochromatische Röntgen-Strahlung der Wellenlänge und bewirken damit eine Abbildung. Unter quasi monochromatischer Strahlung wird hier Strahlung einer gewissen Bandweite Δλ verstanden, wobei im Zusammenhang mit Zonenplatten diese Bandweite gegeben ist durch die Beziehung λ/Δλχ p . m ( p = Linienzahl, m = Nummer der noch zu erfassenden Beugungsordnüng).
- Bei solchen bekannten Röntgen-Mikroskopen wird der Kontrast im Bild durch photoelektrische Absorption im Objekt vermittelt, d.h. es werden Strukturen abgebildet, die eine Amplitudenmodulation der hindurchgehenden Röntgenstrahlen bewirken.
- Besonders geeignet ist dabei der Wellenlängenbereich der Röntgenstrahlung, der zwischen 2.4 nm und 4.5 nm liegt, d.h. zwischen der Sauerstoff-K-Kante und der Kohlenstoff-K-Kante. Dieses Gebiet wird auch als Wasserfenster bezeichnet, da hier Wasser eine etwa zehnmal höhere Transmission hat als organische Materialien. Damit lassen sich in diesem Wellenlängenbereich organische Materialien und damit Zellen und Zellorganellen in lebendem Zustand untersuchen.
- Die bisher erreichte Auflösung in der Röntgen-Mikroskopie ist etwa um einen Faktor 10 besser als in der Lichtmikroskopie, wobei eine weitere Steigerung der röntgenmikroskopischen Auflösung um etwa eine Größenordnung noch möglich ist. Dabei wird die Grenzauflösung in der Röntgenmikroskopie von Amplitudenstrukturen durch die Strahlenbelastung der zu untersuchenden Objekte gegeben sein.
- Es ist nun die Aufgabe der vorliegenden Erfindung ein Röntgenmikroskop zu schaffen, das es ermöglicht Untersuchungen, insbesondere von biologischen Strukturen mit einer Strahlendosis durchzuführen, die zu einer geringeren Strahlenbelastung der Objekte führt als die bisher üblichen Verfahren, ohne daß eine Verschlechterung des Bildkontrastes in Kauf genommen werden muß.
- Diese Aufgabe wird, ausgehend von einem Röntgenmikroskop nach dem Oberbegriff des Anspruches 1 erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß in der Fourierebene des Röntgenobjektivs ein Element angeordnet ist, das sich über den von der nullten oder einer vorwählbaren anderen Ordnung der vom Objekt abgebeugten Strahlung beaufschlagten Flächenbereich erstreckt und der hindurchgehenden Strahlung eine Phasenverschiebung erteilt.
- Bei dem Röntgen-Mikroskop nach der Erfindung werden phasenschiebende Eigenschaften von Objektstrukturen zur Kontrastbildung benutzt. Das im Strahlengang angeordnete phasenschiebende Element erteilt der durch die Form des Elements vorgewählten Ordnung der vom Objekt kommenden Röntgen-Strahlung eine Phasenverschiebung gegenuber der anderen, nicht durch das Element tretenden, vom Objekt kommenden Strahlung. Die phasenverschobenen und die nicht beeinflußten Strahlungsanteile interferieren in der Bildebene und erzeugen dabei ein kontrastreiches, vergrößertes Bild des Objekts.
- Es hat sich als besonders vorteilhaft erwiesen der Röntgenstrahlung nullter Ordnung der vom Objekt kommenden Strahlung gegenüber den von den Objektstrukturen abgebeugten Ordnungen eine Phasenverschiebung von 90° zu geben. Dies kann besonders einfach geschehen, da die Strahlung nullter Ordnung in der Fourierebene des Röntgenobjektivs eine zentrale Kreisscheibe beleuchtet. Eine dazu geeignete Ausbildung des phasenschiebenden Elementes ist in den Ansprüchen 3 und 4 beschrieben.
- Die Erfindung geht aus von der Erkenntnis, daß sich der Brechungsindex n eines Elements im Röntgenbereich aus zwei unterschiedlich wirkenden Größen zusammensetzt, was sich schematisch durch die Beziehung n = 1 - δ - i β ausdrücken läßt. Die Größe β beschreibt dabei die Absorption, die mit kürzer werdender Wellenlänge λ der Röntgen-Strahlung kleiner wird. Die Größe δ ist maßgebend für die Phasenverschiebung, die der durchgehenden Röntgenstrahlung erteilt wird. Die Größe δ variiert im allgemeinen nur sehr langsam mit der Wellenlänge. Aus diesem Grunde kann also bei Ausnutzung der Phasenverschiebung durch das Objekt eine deutliche Verbesserung des Kontrastes im Bild erreicht werden.
- Es lassen sich insbesondere auch bei geringerer Strahlenbelastung des Objekts Bilder erzeugen, deren Kontrast nicht schlechter ist als bei Ausnutzung des Amplitudenkontrast bei höherer Strahlenbelastung.
- Aus dieser Betrachtung ergibt sich auch der weitere wesentliche Vorteil des Röntgen-Mikroskops nach der Erfindung. Da sich die Größe δ mit der Wellenlänge λ nur wenig ändert, läßt sich bei Ausnutzung der Phasenverschiebung der Wellenlängenbereich der Röntgenstrahlung zu kürzeren Wellenlängen hin verschieben, bei denen infolge der geringen Absorption, d.h. kleinem β eine Röntgenmikroskopie wegen der geringen erreichbaren Kontraste im Bild bisher nicht sinnvoll möglich war.
- Es kann unter Umständen auch möglich sein nicht die Röntgenstrahlung nullter Ordnung in der Phase zu beeinflussen, sondern höhere Ordnungen der vom Objekt abgebeugten Strahlung. Diese Ordnungen bilden in der Fourierebene des Röntgenobjektivs Ringe, so daß das phasenschiebende Element nach Anspruch 5 ausgebildet wird.
- Wie die Formel für den Brechungsindex n im Röntgenbereich, nämlich n = 1 - δ - i β zeigt ist mit einer Phasenverschiebung stets auch eine absorbierende Wirkung verbunden. Dies gilt natürlich auch für das bei dem Röntgenmikroskop nach der Erfindung verwendete phasenschiebende Element. Deshalb kann es erforderlich werden die Intensitäten der in der Bildebene interferierenden Ordnungen der vom Objekt kommenden Strahlung einander anzugleichen. Dazu wird vorteilhaft die phasenschiebende und die absorbierende Wirkung des phasenschiebenden Elementes auf verschiedene korrespondierende Flächen in der Fourierebene des Röntgenobjektivs verteilt. Die durch diese korrespondierenden Flächen tretende Strahlung wird dabei unabhängig voneinander in Phase und Amplitude beeinflußt und zwar so, daß die Intensitäten der in der Bildebene interferierenden Ordnungen der Strahlung aneinander angeglichen sind.
- Die Erfindung wird im folgenden anhand der Figuren 1-4 der beigefügten Zeichnungen näher erläutert. Im einzelnen zeigen:
- Fig. 1 ein Ausführungsbeispiel für den prinzipiellen Aufbau eines Röntgen-Mikroskops nach der Erfindung;
- Fig. 2 die Draufsicht auf eine als abbildendes Element verwendete Zonenplatte;
- Fig. 3 das im Mikroskop der Fig. 1 enthaltene phasenschiebende Element in Draufsicht;
- Fig. 4 eine Draufsicht eines anderen Ausführungsbeispiels für ein phasenschiebendes Element.
- In Fig. 1 ist die von einer Röntgenquelle kommende Strahlung mit (1) bezeichnet. Als Röntgenquelle kann beispielsweise ein Synchrotron oder eine andere in Teil 1 des Buches "X-Ray Microscopy" von Schmahl und Rudolph, Springer-Verlag 1984 beschriebene Quelle verwendet werden.
- Die Röntgenstrahlung tritt durch einen Röntgenkondensor (2) und wird von diesem zu dem zu beobachtenden Objekt (3) geleitet, das auf einer Zentralblende (4) angeordnet ist. Die vom Objekt (3) abgebeugte Röntgenstrahlung tritt durch ein hochauflösendes Röntgenobjektiv (5) und wird von diesem in die Bildebene (6) abgebildet.
- Mit (7) ist die Fourierebene des Objektivs (5) bezeichnet, in der sich die Zerlegung der durch das Objekt (3) tretenden Strahlung in harmonische Fourierkomponenten findet. In der Bildebene (6) wird diese Verteilung durch Fourier-Rücktransformation als reelles Bild wieder dargestellt.
- Als abbildende Elemente (2) und (5) finden vorteilhaft Zonenplatten Verwendung, wie sie beispielsweise in Fig. 2 dargestellt sind. Diese Zonenplatte besteht aus einer Vielzahl von Ringen, die auf einer sehr dunnen Tragefolie, z.B. aus Polyimid aufgebracht sind. Die Ringe sind meist aus Gold oder Chrom und haben eine geringe Schichtdicke von ca. 0.1 µm. Die Ringe bilden ein Zirkular-Gitter mit radial ansteigender Liniendichte.
- In der Fourierebene (7) des Objektivs (5) ist ein phasenschiebendes und/oder absorbierendes Element (8) angeordnet. Dieses besteht, wie Fig. 3 zeigt aus einer dünnen Trägerfolie (9), die in einem Ring (10) gefaßt ist und auf die eine dünne Schicht aus phasenschiebenen Material, beispielsweise Chrom in Form einer zentralen Kreisscheibe (11) aufgebracht ist.
- Wie aus Fig. 1 zu erkennen ist durchdringt, die vom Objekt (3) kommende Röntgenstrahlung (1) nullter Ordnung die zentrale Kreisscheibe (11). Dabei wird dieser Strahlung gegenüber den von den Objektstrukturen abgebeugten Ordnungen eine Phasenverschiebung von 90° erteilt. In der Bildebene (6) entsteht Interferenz zwischen der phasenverschobenen Strahlung und der unbeeinflußten Strahlung und damit entsteht ein kontrastreiches, vergrößertes Bild des Objektes (3), das beispielsweise direkt auf einer photoempfindlichen Schicht festgehalten werden kann.
- Verwendet man zum Beispiel Röntgenstrahlung einer Wellenlänge λ = 4.5 nm und besteht der zentralen Kreisscheibe (11) des Elementes (8) aus einer 0.09 µm dicken Chromschicht, so liefert eine Proteinstruktur von 10 nm Dicke in Wasser bei dem Röntgen-Mikroskop der Fig. 1 einen etwa 20 mal besseren Kontrast als die bisher übliche Abbildung im Amplitudenkontrast.
- Fig. 4 zeigt ein Ausführungsbeispiel für ein zur Phasenverschiebung und/oder zur Absorption dienendes Element (8), bei dem auf der Trägerfolie (9) ein Ring (12) aus entsprechendem Material, beispielsweise Chrom angebracht ist. Dieser Ring erteilt höheren Ordnungen der vom Objekt abgebeugten Strahlung eine Phasenverschiebung. Welche Ordnung beeinflußt werden soll, wird durch den Durchmesser und die Breite des Rings (12) festgelegt.
Claims (5)
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