EP1845963A2 - Isolierung von n-butylbenzolsulfonamid, synthese von benzolsulfonamid-derivaten sowie verwendung von n-butylbenzolsulfonamid und benzolsulfonamid-derivaten zur behandlung der benignen prostatahyperplasie und/oder des prostatakarzinoms - Google Patents

Isolierung von n-butylbenzolsulfonamid, synthese von benzolsulfonamid-derivaten sowie verwendung von n-butylbenzolsulfonamid und benzolsulfonamid-derivaten zur behandlung der benignen prostatahyperplasie und/oder des prostatakarzinoms

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Publication number
EP1845963A2
EP1845963A2 EP06706462A EP06706462A EP1845963A2 EP 1845963 A2 EP1845963 A2 EP 1845963A2 EP 06706462 A EP06706462 A EP 06706462A EP 06706462 A EP06706462 A EP 06706462A EP 1845963 A2 EP1845963 A2 EP 1845963A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
hydrogen
treatment
butylbenzenesulfonamide
aliphatic
prostate
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP06706462A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Hans-Rainer Hoffmann
Rudolf Matusch
Aria Baniahmad
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
LTS Lohmann Therapie Systeme AG
Original Assignee
LTS Lohmann Therapie Systeme AG
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Filing date
Publication date
Application filed by LTS Lohmann Therapie Systeme AG filed Critical LTS Lohmann Therapie Systeme AG
Publication of EP1845963A2 publication Critical patent/EP1845963A2/de
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
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    • A61K36/736—Prunus, e.g. plum, cherry, peach, apricot or almond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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    • A61K31/18—Sulfonamides
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • BPS benign prostate syndrome
  • BPH benign prostatic hyperplasia
  • prostate cancer prostate cancer
  • Benign prostatic hyperplasia is closely linked to the development of prostate cancer, the most common cancer in middle-aged men in Western countries, and the second most common cause of death from cancer in men.
  • BPH and prostate cancer are characterized among other things by a progressive enlargement of the prostate.
  • obstruction narrowed
  • urinary retention In the advanced stage, a complete closure of the urethra, the so-called urinary retention, leads to an emergency, which must be treated immediately.
  • the growth of the prostate is through the male
  • Sex hormones the androgens, controlled.
  • Several methods are available for the effective treatment of prostate cancer, including hormone therapy.
  • a cure of the prostate cancer is no longer possible if a spread of the cancer has already taken place. This is already the case at the time of the first diagnosis in more than one third of the patients.
  • the prevention of tumor growth and the alleviation of concomitant symptoms are the focus of therapy.
  • the current therapies have essentially the goal of inactivating the androgen receptor (AR).
  • the androgen receptor regulates male sexual development, is responsible for male fertility, and promotes the growth of the normal prostate gland as well as the proliferation of prostate cancer cells. Therefore, the androgen receptor has become a major target for the treatment of prostate cancer.
  • the AR induces the expression of androgen-responsive genes when it has an androgen bound.
  • the inactivation of the androgen receptor is achieved either by a reduction in androgen synthesis or by administration of androgen antagonists. So far, bicalutamide, flutamide, hydroxyflutamide (OH-F), nilutamide and cyproterone acetate (CPA) as androgen antagonists for the Treatment of prostate cancer used.
  • the purpose of administering these substances is to inactivate transactivation of the human androgen receptor.
  • Prostate cancer begins to grow again sometime during therapy and has resistance to the hormone deficiency. It was found that androgen receptors are present and still active regardless of the therapy. The underlying causes of this phenomenon are still largely unexplained.
  • Plant extracts for the treatment of enlargement of the prostate are traditionally widespread in many countries.
  • the most common are extracts of the African plum tree (Pygeum africanum), which according to recent nomenclature as Prunus africana (Hook F) Kalkm. Saw Palmetto (Serenoa repens) and pumpkin (Cucurbita pepo).
  • the standardized lipophilic extracts of these plants contain sterols, saturated and unsaturated fatty acids and n-docosanol.
  • the exact mechanism of action of these plant extracts is not yet known, but it has been suggested that the improvement in the symptoms associated with prostate enlargement is attributable to the sterol compound ⁇ -sitosterol, which predominates quantitatively in the extracts.
  • chloroform Extracts made from its bark.
  • This chloroform extract contains phytosterols, short-chain unsaturated fatty acids (lauric acid, myristic acid) and long-chain unsaturated fatty acids (oleic acid, linoleic acid). It is approved under the name Tadenan ® in Italy, France and other European countries, but not in Germany for the symptomatic treatment of BPH.
  • Object of the present invention was the provision of new drugs for the treatment of a benign or malignant prostate enlargement, d. H. Benign prostatic hyperplasia and / or prostate cancer.
  • the object was achieved by isolating a substance with antiandrogenic action from the bark of the African plum tree P. africana and synthesizing structural variants of these substances.
  • N-butylbenzenesulfonamide was isolated from the bark of P. africana and found that this substance has a high antiandrogenic activity. NBBS is even able to inhibit the growth of prostate cancer cells that do not respond to hydroxyflutamide treatment.
  • NBBS is a lipophilic substance used as a plasticizer in the production of polyamides and copolyamides, and is also used in the synthesis of sulfonylcarbamate herbicides.
  • NBBS is practically insoluble in water but has moderate solubility in alcohols and benzene.
  • NBBS is very stable and stable in the environment. NBBS has already been detected in groundwater, river water, wine and snow in concentrations of up to 100 ⁇ g / l. Therefore, when using NBBS as the active ingredient for
  • NBBS is a compound that could treat BPH and / or prostate cancer.
  • NBBS may serve as a lead compound for the development of new agents for the treatment of BPH and / or prostate cancer.
  • Prostate carcinoma is also solved by the provision of sulfonamide derivatives of NBBS in which the butyl side chain and the benzene ring have been modified by substituents.
  • Fig. 1 shows the inhibition of the activity of an androgen by different extracts of P. africana.
  • FIG. 2 shows the antiandrogenic effect of fractions of the selective methylene chloride extract of P. africana.
  • FIG. Figure 3 shows a comparison of the antiandrogenic activity of compounds found in P. africana.
  • FIG. Figure 4 illustrates the inhibition of NBBS growth of human prostate carcinoma cells.
  • FIG. Figure 5 represents the structural formulas of the synthesized benzenesulfonamide derivatives.
  • FIG. Figure 6 is a graph illustrating the antiandrogenic activity of the synthesized benzenesulfonamide derivatives.
  • the ethanol and methylene chloride extract almost completely prevented androgen-induced luciferase activity in the experiments. These two extracts showed the highest biological activity.
  • the selective methylene chloride extract was fractionated by silica gel chromatography. The resulting fractions were again tested for their antiandrogenic activity in the reporter gene-based assay. Part of the results of this test is shown in FIG. 2 shown. In particular, the fractions F7 and F8 showed an antiandrogenic effect in the cell culture test. Both fractions were used for further analysis.
  • N-butylbenzenesulfonamide inhibited androgen-induced luciferase activity in the cell culture experiment (see FIG. 3).
  • the effect of NBBS was oleanolic acid, ferulic acid, benzoic acid and beta-sitosterol, which are of the discussed from P. africana obtained phytopharmaceutical (Tadenan ®) for the effectiveness of known with the effect of the contained also in P. africana compounds ursolic acid or at least could have come into question.
  • the results of this comparative study are shown in FIG. 3 shown.
  • N-butylbenzenesulfonamide has an antiandrogenic activity higher than the antiandrogenic activity of the P. africana substances, which are considered for the efficacy of the standardized chloroform extract from this plant species.
  • the present invention therefore relates to the use of NBBS for the treatment of benign prostatic hyperplasia or for the manufacture of a medicament for the treatment of benign prostatic hyperplasia.
  • LNCaP human prostate cancer cell line
  • FIG. 4 shows that the cells treated with 100 ⁇ M NBBS already showed significantly slower growth on the 5th day of treatment than the untreated cells. This effect was even more pronounced on day 8 of treatment.
  • LNCaP cells showed reduced growth on day 8 of treatment, while treatment with OH-F resulted in no decrease in cell proliferation. The latter might be due to the fact that LNCaP cells have a point mutation in the ligand binding domain of the human AR that prevents OH-F from acting antiandrogenically in these cells.
  • NBBS is able to inhibit the growth of LNCaP cells. Therefore, NBBS could also be used to treat prostate cancers that are resistant to known antiandrogenic agents such as hydroxyflutamide.
  • the present invention therefore also relates to the use of NBBS for the treatment of prostate cancer or Preparation of a medicament for the treatment of prostate cancer, especially prostate cancer, which are resistant to treatment with known androgen antagonists such as bicalutamide, flutamide, hydroxyflutamide, nilutamide or cyproterone acetate.
  • known androgen antagonists such as bicalutamide, flutamide, hydroxyflutamide, nilutamide or cyproterone acetate.
  • the invention also provides the use of NBBS as a lead compound for the development of new drugs for the treatment of benign prostatic hyperplasia and / or prostate carcinoma.
  • the present invention further relates to a process for the isolation of NBBS from biological material, in particular from the bark of the African plum tree P. africana.
  • the plant material is first crushed, then extracted with a solvent in which NBBS is soluble, and purified from the resulting extract, for example, by fractionation by appropriate chromatography methods and segregating NBBS from the fractions containing the substance by removing the solvent becomes.
  • the extraction is carried out as a selective extraction by means of a series of successive solvents of increasing polarity.
  • the fractionation of the extract preferably takes place by means of gradient extrarography, wherein the polarity of the eluents increases.
  • the isolation of NBBS can then be carried out by preparative HPLC from the NBBS-containing fractions.
  • NBBS antiandrogenic, lipophilic substance from the selective methylene chloride extract be isolated.
  • NBBS was, analyzes showed, also in the ethanol extract, which also showed antiandrogenic effect.
  • Suitable solvents for the extraction of NBBS from vegetable material are therefore solvents which are selected from the group consisting of monohydric C 1 - to C 4 -alcohols (alcohols having one to four carbon atoms), and volatile, (partially) -halogenated C j ⁇ hydrocarbon substances, preferably methylene chloride and chloroform.
  • prostate hyperplasia and / or prostate cancer is also solved by starting from the isolated from P. africana NBBS further structural variants of this compound were synthesized.
  • the ratio of amine: sulfonyl chloride in the reactions was 2: 1, in the case of the gaseous amines methyl and ethylamine an aqueous solution and four times the equivalent of amine compared to the acid chloride was used.
  • N-monoalkylbenzenesulfonamides with various alkyl chains was first prepared.
  • the educts used were the liquid benzenesulfonic acid chloride and the corresponding primary amine component.
  • the structural formulas of the variable alkyl sulfonamides are shown in FIG. Also listed here is N-geranylbenzenesulfonamide (S4). This substance was synthesized, as it was hoped that the terpenoid side chain would allow better membrane permeability.
  • the next series of synthesized sulfonamides involves the introduction of aromatic substituents (S5 and S6) as well as a variation of the aminoalkyl chain with a terminal hydroxyl group (S7 and S8).
  • the compounds S5 and S6 were prepared starting from 4-toluenesulfonyl chloride and 4-fluorobenzenesulfonyl chloride with N-butylamine in the same manner as the compounds S1 to S7, S9 and S12.
  • the sulfonic acid ester has no acidic properties and remains dissolved in the xylene phase. Subsequently, the separated sulfonamide was mixed with aqueous alkali until a clear solution was formed. By acidification with concentrated hydrochloric acid, the sulfonamide fell out again in purified form as a yellow syrup. After separation of the sulfonamide this was mixed with acetone. The sulfonamide went into solution and the acid precipitated with saline remained as sediment and could be removed by filtration. The acetone was stripped off on a rotary evaporator and the purified product was obtained. In the third set of structural variants of NBBS, an orientation on the structure of the antiandrogenic substance 2 -hydroxyfluidamide took place. 2-hydroxyflutamide is the active metabolite of flutamide (Fugerel ⁇ ).
  • the introduction of a trifluoromethyl group in the meta position increases the lipophilicity of the molecule. This should ensure a better patency through the cell membrane.
  • the additional nitro group at S13 and S14 in the para position causes a further improvement of the lipophilic properties.
  • the geranyl side chain is intended to improve anchoring in biological membranes.
  • S10 to S14 The synthesis of S10 to S14 was carried out starting from 3-trifluoromethylbenzenesulfonamide or 4-nitro-3-trifluoromethylbenzenesulfonamide and W-butylamine or N-geranylamine. 4-Nitro-3-trifluoromethylbenzenesulfonamide is present as a solid at room temperature, so that dichloromethane had to be used as solvent.
  • each of the synthesized compounds was compared to that of NBBS at a concentration of 10 ⁇ M (FIG. 6). It was a high concentration (3xlO ⁇ 8 M) used by R1881 in which 10 .mu.M NBBS no specific inhibition of AR-mediated transactivation showed.
  • the compounds Sl to S3 and S5 to S8 showed at the concentration used no significant antiandrogenic effect, which went beyond the antiandrogenic effect of NBBS.
  • the modifications of compounds S1 to S3 and S5 to S8 included either a shortening of the butyl Side chain (Sl to S3 and S7) or a substitution of the benzene ring at the para position (S5, S6 and S8).
  • the results of the antiandrogenic activity of these compounds illustrate the importance of the length of the side chain and the presence of a benzene ring unsubstituted at the para position for the antiandrogenic activity of benzenesulfonamide derivatives.
  • substitutions at the meta position of the benzene ring also increased antiandrogenic activity (SlO, Sil, S13 and S14), with additional substitution on the benzene ring in the para position not significantly enhancing the enhanced antiandrogenic activity of the compounds with meta position substitution impaired, like a
  • the present invention therefore provides a process for the preparation of benzenesulfonamide derivatives of the formula
  • R 1 is an aliphatic C 1 to C 12 hydrocarbon
  • R 2 is hydrogen or a fully or partially halogenated C 1 -ReSt
  • R 3 is hydrogen or a nitro group, which is characterized in that a benzenesulfonic acid derivative of the formula
  • R 1 is halogen
  • R 2 is hydrogen or a fully or partially halogenated C 1 radical
  • R 3 is hydrogen or nitro, reacted with a primary aliphatic amine and the reaction product is partitioned with dichloromethane, the primary aliphatic amine preferably being selected from the group comprising C 1 to C 12 aliphatic hydrocarbons. Most preferably, butylamine or geranylamine is used as the primary aliphatic amine.
  • the shaking out of the reaction product can also be carried out with ether, so that the approval of the synthesized compounds does not fail due to the use of halogenated solvents.
  • aliphatic organic compounds are to be understood, whose carbon atoms are arranged in straight or branched chains, which compounds may have saturated and / or unsaturated C-C bonds and / or functional groups, but also only one carbon-containing organic compounds.
  • the invention therefore also benzenesulfonamide derivatives for the treatment of benign prostatic hyperplasia and / or prostate carcinoma, represented by the formula
  • R 1 is an aliphatic C 1 to C 12 hydrocarbon
  • R 2 is hydrogen or a fully or partially halogenated C 1 radical
  • R 3 is hydrogen or nitro.
  • the invention also relates to the use of a benzenesulfonamide derivative of the formula
  • R 1 is an aliphatic C 1 to C 12 hydrocarbon
  • R 2 is hydrogen or a fully or partially halogenated C 1 -ReSt
  • R 3 is hydrogen or nitro, for the treatment or for the preparation of a Medicament for the treatment of benign prostatic hyperplasia and / or prostate cancer / as well as a lead compound for the development of further / new agents for the treatment of benign prostatic hyperplasia and / or prostate cancer, in particular for the treatment of
  • the invention also relates to pharmaceutical preparations for the treatment of benign prostatic hyperplasia and / or of prostatic carcinoma, which are characterized in that they contain at least a benzenesulfonamide derivative of the formula
  • R 1 is an aliphatic C 1 to C 12 hydrocarbon
  • R 2 is hydrogen or a fully or partially halogenated C 1 radical
  • R 3 is hydrogen or a nitro group.
  • ethanol extract 300 grams of P. africanum bark material was triturated and extracted three times with 5. 0 liters of ethanol (EtOH) each time. After filtration of the extract through filter paper with a pore size of 0, 7 microns, the solvent of the entire extract was removed by means of a rotary evaporator at 40 0 C. The resulting extract had a dry matter of 16, 02 grams.
  • the selective methylene chloride extract of P. africanum was fractionated using silica gel (Machery-Nagel Si60, 15-25 ⁇ m).
  • silica gel Machery-Nagel Si60, 15-25 ⁇ m.
  • the extract was dissolved in 2000 ml CH 2 Cl 2 and filtered through filter paper with a pore size of 0, 7 microns (Schleicher & S ⁇ hüll).
  • Twenty five grams of silica gel (Merck Si 60, 0, 063-0.2 mm) was added to the extract and then the solvent was evaporated in vacuo at 40 ° C.
  • the silica gel so coated was placed on top of a dry packed silica gel column (Merck
  • Prepbar ® 400 X 100 mm is placed and at a flow rate of 120 ml min "1 with a linear gradient of 0 min hexane (100: 0), 50 min hexane (100: 0), 350 min CH 2 Cl 2 (100: 0), 500 min CH 2 Cl 2 (100: 0), 700 min CH 2 Cl 2 -MeOH (80:20), 750 min MeOH (100: 0), 800 min MeOH (100: 0), 850 min H 2 O (100: 0), 885 min H 2 O. Chromatography afforded 35 fractions which resulted in detection with UV light at a wavelength of 245 nm (Table 1). Table 1: Fractionation of the selective methylene chloride extract of P. africana
  • NBBS was prepared from fraction F8 by preparative HPLC (250 x 21 mm, 100-5 C18 HD Machery - Nagel, 22 ml min -1 , UV detection at 220 nm, gradient: 0 min ACN-H 2 O (with addition of 0 , 1% TFA) ((20:80), 40 minutes of ACN-H 2 O (80:20), 45 minutes of ACN (100: 0).) NBBS was collected from 12:06 to 14 minutes Structure was based on the 1 H and
  • Monkey kidney cells, CVI line having no endogenous androgen receptor were cultured in Dulbecco ⁇ s modified Eagle's medium (DMEM) supplemented with 10% (v / v) fetal calf serum, penicillin (100 UI / ml) and streptomycin (100 UI / ml) were cultured at 37 ° C. and 5% CO 2 .
  • DMEM Dulbecco ⁇ s modified Eagle's medium
  • penicillin 100 UI / ml
  • streptomycin 100 UI / ml
  • the cells were seeded in 6-well cell culture plates (Nunc, Roskilde, DK) at a density of 1.2 ⁇ 10 5 cells per well and cultured in DMEM medium containing 10% (v / v). Dextran-coated activated carbon reduced serum was supplemented. Six hours after seeding, the cells were transfected by the Ca 3 (PO 4 ) 2 method.
  • Androgen receptor (hAR) (0.2 ⁇ g) was cotransfected with 1 ⁇ g of the reporter plasmid MMTV-luc and 0.2 ⁇ g of the cytomegalovirus (CMV) driven ⁇ -galactosidase expression virus as an internal control for transfection efficiency.
  • CMV cytomegalovirus
  • the medium was added either without (white columns in Figures 1 to 3) or with addition of methyltrienolone (R1881, 3x10 "10 M final concentration, black columns in Figures 1 to 3) together with the indicated extracts (FIG 2) or substances ( Figure 3), and after a further 48 hours the cells were harvested and assayed for luciferase and ⁇ -glactosidase activity.
  • Luciferase activity was determined by injection of luciferin and measurement of light emission at 562 microns and reported as relative light units (RLU) using the values for ⁇ -galactosidase activity to normalize luciferase activity. All transfection experiments were performed twice and repeated at least twice. To determine the antiandrogenic activity in various extracts of the bark of P. africanum, the extracts were used in a concentration of 300 ug / ml. The results are shown in FIG. 1 shown.
  • Fractions of the selective methylene chloride extract were used two microliters of the respective fraction, which corresponds to a final concentration of 30 ⁇ g / ml.
  • fractions F6 to FlO experiments were additionally carried out with 4 ⁇ l, corresponding to 60 ⁇ g / ml final concentration.
  • the active fractions F7 and F8 were used for further studies. Part of the results is shown in FIG. 2 shown.
  • Example 5 Inhibition of growth of human prostate carcinoma cells by NBBS
  • LNCaP cell line Human prostate carcinoma cells (LNCaP cell line) were supplemented in RPMI-1640 medium supplemented with 10% (v / v) fetal calf serum, penicillin (100 IU / ml), streptomycin (100 IU / ml), 2 mM glutamine, and 1 ⁇ M sodium pyruvate , held .
  • the LNCaP cells were seeded at a density of 5 x 10 3 cells per well in a 24-well cell culture plate and cultured in RPMI-1640 medium containing 5% fetal calf serum. On day 2, the culture medium was changed and used to treat the cells
  • Ethanol / DSMO control
  • NBBS 10 ⁇ M and 100 ⁇ M
  • OH-F known antiandrogen hydroxyflutamide

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Isolierung von N-Butylbenzolsulfonamid (NBBS) aus biologischem Material insbesondere aus Prunus africana, die chemische Synthese von Benzolsulfonamid-Derivaten sowie die Verwendung von NBBS und Benzolsulfonamid-Derivaten zur Behandlung bzw. zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung der benignen Prostatahyperplasie und/oder des Prostatakarzinoms sowie als Leitsubstanz zur Entwicklung von Wirkstoffen zur Behandlung der vorgenannten Erkrankungen.

Description

Isolierung von N-Butylbenzolsulfonamid, Synthese von
Benzolsulfonamid-Derivaten sowie Verwendung von N- Butylbenzolsulfonamid und Benzolsulfonamid-Derivaten zur Behandlung der benignen Prostatahyperplasie und/oder des
Prostatakarzinoms
Die gutartige Vergrößerung der Prostata, auch benignes Prostata-Syndrom (BPS) oder benigne Prostatahyperplasie (BPH) genannt, und der Prostatakrebs (= Prostatakarzinom) gehören zu den häufigsten Erkrankungen, von denen Männer im Alter betroffen sind.
Etwa die Hälfte der Männer im Alter von über 60 Jahren sind von einer gutartigen Form der Prostatavergrößerung betroffen . Die benigne Prostatahyperplasie steht in engem Zusammenhang mit der Entwicklung von Prostatakrebs, der häufigsten Krebserkrankung bei Männern mittleren Alters in westlichen Ländern und der zweithäufigsten durch Krebserkrankungen bedingte Todesursache bei Männern.
BPH und Prostatakrebs sind unter anderem durch eine progressive Vergrößerung der Prostata gekennzeichnet . Bei einer Vergrößerung der Prostata wird die Harnröhre zunehmend eingeengt (= Obstruktion) und der Blasenausgang behindert, was zu Problemen beim Wasserlassen führt . Im fortgeschrittenen Stadium führt ein völliger Verschluss der Harnröhre, die so genannte Harnverhaltung, zu einem Notfall, der sofort behandelt werden muss .
Das Wachstum der Prostata wird durch die männlichen
Sexualhormone, die Androgene, gesteuert . Für die effektive Behandlung des Prostatakarzinoms stehen mehrere Verfahren zur Verfügung, u. a. die Hormontherapie . Eine Heilung des Prostatakrebses ist nicht mehr möglich, wenn bereits eine Streuung des Krebses stattgefunden hat . Dies ist zum Zeitpunkt der ersten Diagnose bereits bei mehr als einem Drittel der Patienten gegeben. Dann stehen eine Eindämmung des Tumorwachstums und die Linderung der begleitenden Beschwerden im Vordergrund der Therapie . Durch die Unterdrückung der Produktion männlicher Sexualhormone (Testosteron) , um der Transaktivierungsfunktion des
Androgen-Rezeptors entgegenzuwirken, kann eine zeitlich begrenzte Wachstumshemmung erzielt werden.
Die gegenwärtigen Therapien haben im Wesentlichen das Ziel , den Androgen-Rezeptor (AR) zu inaktivieren. Der Androgen- Rezeptor reguliert die männliche Sexualentwicklung, ist für die männliche Fertilität verantwortlich und fördert das Wachstum der normalen Prostata-Drüse ebenso wie die Proliferation der Prostata-Krebszellen. Daher wurde der Androgen-Rezeptor zu einem bedeutenden Angriffspunkt für die Therapie des Prostatakarzinoms .
Allerdings erfahren die gegenwärtigen Therapien deutliche Grenzen, da ein Prostatakarzinom irgendwann resistent gegen die Therapie wird.
Der AR induziert die Expression von auf Androgene reagierenden Genen, wenn er ein Androgen gebunden hat . Die Inaktivierung des Androgen-Rezeptors wird entweder durch eine Verringerung der Androgen-Synthese oder durch Gabe von Androgen-Antagonisten erreicht . Bisher werden Bicalutamid, Flutamid, Hydroxyflutamid (OH-F) , Nilutamid und Cyproteronacetat (CPA) als Androgen-Antagonisten für die Behandlung von Prostatakrebs eingesetzt . Ziel der Verabreichung dieser Substanzen ist das Inaktivieren der Transaktivierung des menschlichen Androgen-Rezeptors .
Das Prostatakarzinom beginnt j edoch während der Therapie irgendwann wieder zu wachsen und weist eine Resistenz gegen den Hormonmangel auf . Dabei wurde gefunden, dass Androgen- Rezeptoren ungeachtet der Therapie vorhanden und auch noch aktiv sind. Welche Ursachen diesem Phänomen zugrunde liegen, ist noch weitgehend ungeklärt .
Es ist j edoch offensichtlich, dass neue Wirkstoffe für eine erfolgreiche Behandlung der BPH und/oder des Prostatakarzinoms benötigt werden.
Pflanzenextrakte zur Behandlung von mit einer Vergrößerung der Prostata einhergehenden Symptomen sind in vielen Ländern traditionell verbreitet . Am gebräuchlichsten sind Extrakte aus dem afrikanischen Pflaumenbaum (Pygeum africanum) , der nach neuerer Nomenklatur auch als Prunus africana (Hook. F . ) Kalkm. bezeichnet wird, der Sägepalme (Serenoa repens) und dem Kürbis (Cucurbita pepo) . Die standardisierten lipophilen Extrakte dieser Pflanzen enthalten Sterole, gesättigte und ungesättigte Fettsäuren sowie n-Docosanol . Der genaue Wirkmechanismus dieser Pflanzenextrakte ist noch nicht bekannt, es wurde aber vermutet, dass die Verbesserung der mit der Prostatavergrößerung einhergehenden Symptome der in den Extrakten mengenmäßig überwiegenden Sterolverbindung ß- Sitosterol zuzuschreiben sei .
Die meisten klinischen Studien zur Wirksamkeit von Extrakten aus dem afrikanischen Pflaumenbaum wurden mit Chloroform- Extrakten aus dessen Rinde durchgeführt . Dieser Chloroform- Extrakt enthält unter anderem Phytosterole, kurzkettige ungesättigte Fettsäuren (Laurinsäure, Myristinsäure) und langkettige ungesättigte Fettsäuren (Ölsäure, Linolsäure) . Er ist unter der Bezeichnung Tadenan® in Italien, Frankreich und weiteren europäischen Staaten, nicht aber in Deutschland zur symptomatischen Behandlung der BPH zugelassen.
Die Placebo-kontrollierten Kurzzeitstudien mit den Chloroform-Extrakten aus P. africana zeigten zwar eine moderate klinische Wirksamkeit, entsprachen in ihrer Konzeption aber noch nicht einmal den Minimalanforderungen seitens der International Consultations on BPH. Daher sind die Ergebnisse dieser Studien leider nicht eindeutig zu beurteilen.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung war die Bereitstellung neuer Wirkstoffe zur Behandlung einer gut- oder bösartigen Prostatavergrößerung, d. h. der benignen Prostatahyperplasie und/oder des Prostatakarzinoms .
Die Aufgabe wurde dadurch gelöst, dass eine Substanz mit antiandrogener Wirkung aus der Rinde des afrikanischen Pflaumenbaums P. africana isoliert und Strukturvarianten dieser Substanzen synthetisiert wurden.
Überrascherderweise wurde die Substanz N-Butylbenzol- sulfonamid (NBBS) aus der Rinde von P. africana isoliert und gefunden, dass diese Substanz eine hohe antiandrogene Aktivität hat . NBBS ist sogar in der Lage, das Wachstum von Prostata-Krebszellen, die nicht auf eine Hydroxyflutamid- Behandlung ansprechen, zu inhibieren. Bei NBBS handelt es sich um eine lipophile Substanz , die als Weichmacher in der Produktion von Polyamiden und Copolyamiden verwendet und auch bei der Synthese von Sulfonylcarbamat-Herbiziden eingesetzt wird. NBBS ist praktisch unlöslich in Wasser, weist aber eine mäßige Löslichkeit in Alkoholen und Benzol auf . NBBS ist sehr stabil und beständig in der Umwelt . So konnte NBBS bereits im Grundwasser, Flusswasser, Wein und Schnee in Konzentrationen von bis zu 100 μg/1 nachgewiesen werden . Daher wäre bei Verwendung von NBBS als Wirkstoff zur
Behandlung der BPH kaum mit Toxizitätsproblemen zu rechnen.
NBBS stellt aufgrund seiner antiandrogenen Wirksamkeit jedoch eine Verbindung dar, mit der BPH und/oder Prostatakrebs behandelt werden könnten. Zumindest kann NBBS als Leitsubstanz für die Entwicklung neuer Wirkstoffe zur Behandlung der BPH und/oder Prostatakarzinoms dienen.
Die Aufgabe, neue antiandrogene Wirkstoffe zur Behandlung der benignen Prostatahyperplasie und/oder des
Prostatakarzinoms bereitzustellen, wird auch durch die Bereitstellung von Sulfonamid-Derivaten des NBBS gelöst, bei denen die Butyl-Seitenkette und der Benzol-Ring durch Substituenten modifiziert wurden .
Fig. 1 zeigt die Inhibition der Aktivität eines Androgens durch unterschiedliche Extrakte von P. africana .
FIG.2 stellt die antiandrogene Wirkung von Fraktionen des selektiven Methylenchlorid-Extrakts von P. africana dar .
FIG. 3 zeigt einen Vergleich der antiandrogenen Wirkung von Verbindungen, die in P. africana vorkommen. FIG. 4 verdeutlicht die Inhibition des Wachstums menschlicher Prostatakarzinomzellen durch NBBS .
FIG. 5 gibt die Strukturformeln der synthetisierten Benzolsulfonamid-Derivate wieder .
FIG. 6 zeigt ein Diagramm, welches die antiandrogene Wirkung der synthetisierten Benzolsulfonamid-Derivate veranschaulicht .
Um den oder einen für die Behandlung der BPH und/oder des
Prostatakarzinoms wirksamen Bestandteil aus der Rinde von P. africana identifizieren zu können, wurde dessen Rinde mit verschiedenen Lösungsmitteln selektiv extrahiert und die gewonnenen Extrakte auf antiandrogene Aktivität hin untersucht, indem ihr Potential, die Aktivität des menschlichen, durch Hormon aktivierten Androgen-Rezeptors in einem Reportergen-basierten Test zu inhibieren, gemessen wurde . Die Ergebnisse dieser Untersuchung sind in FIG. 1 dargestellt .
Es wurde gefunden, dass der Wasser- und der Methanol-Extrakt der P. africana Rinde keine antiandrogene Aktivität im Test zeigten . Der selektive Hexan-Extrakt führte im Vergleich zu den nicht mit einem Extrakt behandelten Kontrollen nur etwa zur Hälfte der durch Androgen induzierten Luciferase- Aktivität .
Der Ethanol- und der Methylenchlorid-Extrakt verhinderten eine durch Androgen induzierte Luciferase-Aktivität in den Versuchen fast vollständig . Diese beiden Extrakte zeigten die höchste biologische Aktivität . Zur weiteren Identifizierung antiandrogener Wirkstoffe aus P. africana wurde der selektive Methylenchlorid-Extrakt mit Hilfe einer Silikagel-Chromatographie fraktioniert . Die erhaltenen Fraktionen wurden in dem Reportergen-basierten Test wiederum auf ihre antiandrogene Wirkung hin untersucht . Ein Teil der Ergebnisse dieses Tests ist in FIG . 2 dargestellt . Insbesondere die Fraktionen F7 und F8 zeigten eine antiandrogene Wirkung im Zellkultur-Test . Beide Fraktionen wurden für die weitere Analyse verwendet .
Aus Fraktion F8 wurde mittels präparativer HPLC N-Butyl- benzolSulfonamid isoliert, wie die analytischen Daten zeigten.
N-Butylbenzolsulfonamid inhibierte die Androgen-induzierte Luciferase-Aktivität im Zellkultur-Versuch (siehe FIG . 3) . Die Wirkung von NBBS wurde mit der Wirkung von den ebenfalls in P. africana enthaltenen Verbindungen Ursolsäure, Oleanolsäure, Ferulasäure, Benzoesäure und ß-Sitosterol , welche für die Wirksamkeit des bekannten, aus P. africana gewonnenen Phytopharmakons (Tadenan®) diskutiert werden oder zumindest hätten in Frage kommen können. Die Ergebnisse dieser Vergleichsuntersuchung sind in FIG. 3 dargestellt .
Abgesehen von ß-Sitosterol hatte keine der Vergleichs-
Verbindungen einen signifikanten Einfluss auf die Androgen- induzierte Reportergen-Aktivität .
N-Butylbenzolsulfonamid hat eine antiandrogene Aktivität, die höher ist als die antiandrogene Aktivität der Substanzen aus P. africana, welche für die Wirksamkeit des standardisierten Chloroform-Extrakts aus dieser Pflanzenart in Betracht gezogen werden. Die vorliegende Erfindung betrifft daher die Verwendung von NBBS zur Behandlung der benignen .Prostatahyperplasie bzw. zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung der benignen Prostatahyperplasie .
Das Wachstum von Prostata-Zellen und Prostatakrebs-Zellen ist ursprünglich abhängig von Androgenen. Um zu untersuchen, ob der Androgen-Antagonismus von NBBS auch das Zellwachstum beeinträchtigt, wurde die menschliche Prostata- Krebszelllinie LNCaP verwendet, von der bekannt ist, dass sie Androgen-abhängig wächst . LNCaP-Zellen wurden in Kultur in Anwesenheit von NBBS kultiviert . FIG . 4 zeigt, dass die Zellen, die mit 100 μM NBBS behandelt wurden, bereits am 5. Behandlungstag eine deutlich langsamere Vermehrung zeigten als die unbehandelten Zellen. Dieser Effekt war am Tag 8 der Behandlung noch deutlicher . Auch in Gegenwart von 10 μM NBBS zeigten die LNCaP Zellen ein verringertes Wachstum an Tag 8 der Behandlung, während die Behandlung mit OH-F zu keiner Verringerung der Zellvermehrung führte . Letzteres könnte dadurch bedingt sein, dass LNCaP Zellen eine Punktmutation in der Ligandbindungsdomäne des menschlichen AR haben, die verhindert, dass OH-F antiandrogen in diesen Zellen wirkt .
Diese Ergebnisse zeigen, dass der Androgen-Antagonsimus von NBBS auch bei einem mutierten menschlichen Androgen-Rezeptor wirksam ist. Somit ist NBBS in der Lage, das Wachstum von LNCaP Zellen zu inhibieren . Daher könnte NBBS auch zur Behandlung von Prostatakarzinomen verwendet werden, die resistent gegen bekannte antiandrogene Wirkstoffe wie Hydroxyflutamid sind.
Die vorliegende Erfindung betrifft daher auch die Verwendung von NBBS zur Behandlung des Prostatakarzinoms bzw. zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung des Prostatakarzinoms, insbesondere von Prostatakarzinomen, die resistent gegen eine Behandlung mit bekannten Androgen- Antagonisten wie beispielsweise Bicalutamid, Flutamid, Hydroxyflutamid, Nilutamid oder Cyproteronacetat sind.
Gegenstand der Erfindung ist auch die Verwendung von NBBS als Leitsubstanz für die Entwicklung neuer Wirkstoffe zur Behandlung der benignen Prostatahyperplasie und/oder des Prostatakarzinoms .
Die vorliegende Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Isolierung von NBBS aus biologischem Material, insbesondere aus der Rinde des afrikanischen Pflaumenbaums P. africana .
Bei dem Verfahren wird das pflanzliche Material zunächst zerkleinert, anschließend mit einem Lösungsmittel, in dem NBBS löslich ist, extrahiert und aus dem resultierenden Extrakt gereinigt, beispielsweise durch Fraktionierung mittels geeigneter Chromatographieverfahren und Absondern von NBBS aus den diese Substanz enthaltenden Fraktionen, indem das Lösungsmittel entfernt wird.
Vorzugsweise erfolgt die Extraktion als selektive Extraktion mittels einer Reihe von aufeinander folgenden Lösungsmitteln mit zunehmender Polarität . Die Fraktionierung des Extraktes erfolgt vorzugsweise mittels Gradientenextrographie, wobei die Polarität der Eluenten zunimmt . Die Isolierung von NBBS kann anschließend mittels präparativer HPLC aus den NBBS enthaltenden Fraktionen erfolgen.
Auf diese Weise konnte die antiandrogen wirkende, lipophile Substanz NBBS aus dem selektiven Methylenchlorid-Extrakt isoliert werden . NBBS war, wie Analysen zeigten, auch in dem Ethanol-Extrakt nachzuweisen, der ebenfalls antiandrogene Wirkung zeigte .
Als Lösungsmittel für die Extraktion von NBBS aus pflanzlichem Material kommen daher Lösungsmittel in Frage, die aus der Gruppe ausgewählt sind, die einwertige C1- bis C4-Alkohole (Alkohole mit einem bis vier Kohlenstoffatomen) , und leichtflüchtige, (teil) -halogenierte Cj^-Kohlenwasser- Stoffe, vorzugsweise Methylenchlorid und Chloroform umfasst .
Als Chromatographie-Verfahren wird die säulenchromato- graphische Praktionierung mittels Silikagel und die präparative HPLC bevorzugt .
Die Aufgabe, neue Wirkstoffe zur Behandlung der benignen
Prostatahyperplasie und/oder des Prostatakarzinoms bereitzustellen wird auch dadurch gelöst, dass ausgehend von dem aus P. africana isolierten NBBS weitere Strukturvarianten dieser Verbindung synthetisiert wurden.
Zur Synthese der Strukturvarianten von NBBS wurde direkt vom Arylsulfonsäurechlorid und dem primären aliphatischen Amin ausgegangen . Die Reaktion eines Säurechlorids mit dem Amin könnte ohne Lösungsmittel durch einfaches Mischen der beiden Komponenten im Mörser mit Pistill erfolgen. Da allerdings im Fall der NBBS-Strukturvarianten beide Ausgangsverbindungen meistens in flüssiger Form vorlagen, wurde ein Dreihalskolben mit Rührer, Rückflußkühler, Thermometer und Tropftrichter bevorzugt . Das Amin wurde im Überschuss vorgelegt und das Sulfonsäurechlorid langsam unter Rühren hinzugetropft . Die Reaktion ist stark exotherm und verläuft quantitativ. Nach Abkühlen des Reaktionsansatzes wurde mit Wasser versetzt und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan ausgeschüttelt . Das Fortschreiten der Reaktion wurde per Dünnschichtchromatographie verfolgt .
Das Verhältnis Amin : Sulfonsäurechlorid betrug in den Reaktionen 2 : 1, bei den gasförmigen Aminen Methyl- und Ethylamin wurde eine wässrige Lösung und das vierfache Äquivalent an Amin im Vergleich zum Säurechlorid eingesetzt .
Bei dieser Reaktion eines primären aliphatischen Amins mit einem Sulfonsäurechlorid greift das freie Elektronenpaar des Amin-Stickstoffs nucleophil am Schwefel des Sulfonsäurechlorids an. Dabei entsteht neben dem Reaktionsprodukt auch Salzsäure, die das überschüssige Amin protoniert. Das Amin-Salz verbleibt beim Ausschütteln des Sulfonamides mit Dichlormethan in der wässrigen Phase und kann so abgetrennt werden.
Auf diese Weise wurde zunächst eine Reihe von N-Monoalkyl- benzolSulfonamiden mit verschiedenen Alkylketten hergestellt . Als Edukte dienten das flüssige Benzolsulfon- säurechlorid und die entsprechende primäre Aminkomponente . Die Strukturformeln der Sulfonamide mit variabler Alkylkette sind in Figur 5 dargestellt . Hier ist außerdem das N- Geranylbenzolsulfonamid (S4) aufgeführt . Diese Substanz wurde synthetisiert, da man sich aufgrund der terpenoiden Seitenkette eine bessere Membrandurchgängigkeit erhoffte .
Die nächste Reihe an synthetisierten Sulfonamiden beinhaltet sowohl die Einführung von Substituenten am Aromaten (S5 und S6) als auch eine Variation der Aminoalkylkette mit einer endständigen Hydroxyl-Gruppe (S7 und S8) . Die Verbindungen S5 und S6 wurden ausgehend von 4-Toluol- sulfonsäurechlorid und 4-Fluorbenzolsulfonsäurechlorid mit N-Butylamin auf die gleiche Weise wie die Verbindungen Sl bis S7 , S9 und S12 hergestellt .
Die Synthese der Verbindungen S7 und S8 konnte nicht auf diese Weise erfolgen, da hier die Hydroxyl-Gruppe des eingesetzten Ethanolamins mit der Amino-Gruppe konkurriert . Es entsteht also neben dem Sulfonsäureamid auch eine gewisse Menge an Sulfonsäureester.
Allerdings gelang die Synthese von S7 und S8 , indem zunächst ein Äquivalent Benzolsulfonsäurechlorid bzw. 4- Fluorbenzolsulfonsäurechlorid mit 2 , 2 Äquivalenten Ethanolamin in ortho-Xylol fünf Stunden unter Rückfluss behandelt wurden. Nach Beendigung der Reaktion setzte sich am Boden eine viskose Flüssigkeit ab, die abgetrennt wurde . Hierbei handelte es sich um das Sulfonamid, das aufgrund des Aminüberschusses und seines aciden Charakters deprotoniert vorliegt und sich damit von der organischen Phase absetzt .
Der Sulfonsäureester hingegen hat keine sauren Eigenschaften und verbleibt gelöst in der Xylol-Phase . Anschließend wurde das abgetrennte Sulfonamid mit wässrigem Alkali versetzt bis eine klare Lösung entstand. Durch Ansäuern mit konzentrierter Salzsäure fiel das Sulfonamid wieder in gereinigter Form als gelber Sirup aus . Nach Abtrennen des Sulfonamides wurde dieses mit Aceton versetzt . Das Sulfonamid ging dabei in Lösung und das beim Ansäuern entstandene mit ausgefällte Kochsalz verblieb als Bodensatz und konnte durch Filtration entfernt werden. Das Aceton wurde am Rotationsverdampfer abgezogen und das gereinigte Produkt erhalten. Bei der dritten Reihe an Strukturvarianten von NBBS fand eine Orientierung an der Struktur der antiandrogenen Substanz 2 -Hydroxyflutamid statt . 2-Hydroxyflutamid ist der aktive Metabolit von Flutamid (FugerelΘ) .
Die Einführung einer Trifluormethyl-Gruppe in meta-Stellung erhöht die Lipophilie des Moleküls . Dadurch sollte eine bessere Durchgängigkeit durch die Zellmembran gewährleistet sein. Die zusätzliche Nitro-Gruppe bei S13 und S14 in para- Stellung bewirkt eine weitere Verbesserung der lipophilen Eigenschaften. Die Geranyl-Seitenkette soll die Verankerung in biologischen Membranen verbessern.
Die Synthese von SlO bis S14 erfolgte ausgehend vom 3 - Trifluormethylbenzolsulfonamid bzw. 4-Nitro-3 -trifluor- methylbenzolsulfonamid und W-Butylamin bzw. N-Geranylamin. 4-Nitro-3 -trifluormethylbenzolsulfonamid liegt bei Raumtemperatur als Feststoff vor, so dass Dichlormethan als Lösungsmittel verwendet werden musste .
Um die Wirksamkeit der Benzolsulfonamid-Derivate hinsichtlich einer Inhibition der AR-vermittelten Transaktivierung zu untersuchen, wurde j ede der synthetisierten Verbindungen bei einer Konzentration von 10 μM mit der von NBBS verglichen (FIG. 6) . Es wurde eine hohe Konzentration (3xlO~8 M) von R1881 verwendet, bei der 10 μM NBBS keine spezifische Inhibition der AR-vermittelten Transaktivierung zeigte .
Die Verbindungen Sl bis S3 und S5 bis S8 zeigten bei der eingesetzten Konzentration keine signifikante antiandrogene Wirkung, die über die antiandrogene Wirkung des NBBS hinausging. Die Modifikationen der Verbindungen Sl bis S3 und S5 bis S8 umfassten entweder eine Verkürzung der Butyl- Seitenkette (Sl bis S3 und S7) oder eine Substitution des Benzol-Rings an der para-Position (S5 , S6 und S8) . Die Ergebnisse zur antiandrogenen Wirksamkeit dieser Verbindungen verdeutlichen die Bedeutung der Länge der Seitenkette und des Vorhandenseins eines an der para- Position nicht substituierten Benzolrings für die antiandrogene Wirkung von Benzolsulfonamid-Derivaten.
Überraschenderweise verstärkte eine Verlängerung der Seitenkette durch Ersetzen der Butyl-Seitenkette mit einer Pentyl- oder Geranyl-Gruppe (S4 und S9) die antiandrogene Aktivität . Eine hydrophobe Seitenkette ist daher für die Androgen-antagonisierende Wirkung wichtig . Jedoch schwächte eine weitere Verlängerung der Seitenkette durch Einführen einer Laurylgruppe (S12) das Androgen-antagonisierende
Potential ab . Daher ist eine Verstärkung der Hydrophobizität allein nicht ausreichend, um die antiandrogene Wirkung von NBBS zu erhöhen.
Unerwarteterweise erhöhten auch Substitutionen an der meta- Position des Benzolrings die antiandrogene Aktivität (SlO, Sil, S13 und S14) , wobei eine zusätzliche Substitution am Benzolring in para-Position die erhöhte antiandrogene Aktivität der Verbindungen mit einer Substitution an der meta-Position nicht wesentlich beeinträchtigt, wie ein
Vergleich der antiandrogenen Wirkungen von Substanz S14 mit Sil und S13 mit SlO veranschaulicht .
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher ein Verfahren zur Herstellung von Benzolsulfonamid-Derivaten der Formel
wobei R1 für einen aliphatischen C1- bis C12-Kohlenwasserstoff steht, R2 Wasserstoff oder ein vollständig oder teilweise halogenierter C1-ReSt ist; und R3 Wasserstoff oder eine Nitrogruppe bedeutet, das dadurch gekennzeichnet ist, dass ein Benzolsulfonsäure-Derivat der Formel
•wobei R1 für Halogen steht, R2 Wasserstoff oder ein vollständig oder teilweise halogenierter C1-ReSt ist; und R3 Wasserstoff oder Nitro bedeutet, mit einem primären aliphatischen Amin umgesetzt und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan ausgeschüttelt wird, wobei das primäre aliphatische Amin vorzugsweise aus der Gruppe ausgewählt ist, die C1- bis C12-aliphatische Kohlenwasserstoffe umfasst . Besonders bevorzugt wird Butylamin oder Geranylamin als primäres aliphatisches Amin verwendet .
Das Ausschütteln des Reaktionsproduktes kann auch mit Ether erfolgen, so dass die Zulassung der synthetisierten Verbindungen nicht an der Verwendung halogenierter Lösemittel scheitert . Unter aliphatisch sind organische Verbindungen zu verstehen, deren Kohlenstoffatome in geraden oder verzweigten Ketten angeordnet sind, wobei diese Verbindungen gesättigte und/oder ungesättigte C-C- Bindungen und/oder funktionelle Gruppen aufweisen können, aber auch lediglich ein Kohlenstoffatom aufweisende organische Verbindungen.
Gegenstand der Erfindung sind daher auch Benzolsulfonamid- Derivate zur Behandlung der benignen Prostatahyperplasie und/oder des Prostatakarzinoms, die durch die Formel
gekennzeichnet sind, wobei R1 für einen aliphatischen C1- bis C12-Kohlenwasserstoff steht, R2 Wasserstoff oder ein vollständig oder teilweise halogenierter C1-ReSt ist; und R3 Wasserstoff oder Nitro bedeutet .
Insofern betrifft die Erfindung auch die Verwendung eines Benzolsulfonamid-Derivats der Formel
wobei R1 für einen aliphatischen C1- bis C12-Kohlenwasserstoff steht, R2 Wasserstoff oder ein vollständig oder teilweise halogenierter C1-ReSt ist; und R3 Wasserstoff oder Nitro bedeutet, zur Behandlung bzw. zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung der benignen Prostatahyperplasie und/oder des Prostatakarzinoms/ sowie als Leitsubstanz für die Entwicklung weiterer/neuer Wirkstoffe zur Behandlung der benignen Prostathyperplasie und/oder des Prostatakarzinoms, insbesondere zur Behandlung des gegen
Androgen-Antagonisten therapieresistenten Prostatakarzinoxns .
Gegenstand der Erfindung sind auch pharmazeutische Zubereitungen zur Behandlung der benignen Prostata- hyperplasie und/oder des Prostatkarzinoms, die dadurch gekennzeichnet sind, dass sie zumindest, ein Benzolsulfon- amid-Derivat der Formel
enthält, wobei R1 für einen aliphatischen C1- bis C12- Kohlenwasserstoff steht, R2 Wasserstoff oder ein vollständig oder teilweise halogenierter C1-ReSt ist; und R3 Wasserstoff oder eine Nitrogruppe bedeutet .
Beispiel 1 ; Extraktion des Pflanzenmaterials
Getrocknete Rinde des afrikanischen Pflaumenbaums (P. africanum) wurde pulverisiert und 1, 73 kg der pulverisierten Rinde wurden in 1 Liter n-Hexan mittels eines Ultra Turrax mit Eis gekühlt homogenisiert . Das Pflanzenmaterial wurde in eine Säule (Merck Prepbar" 400 X 100 mm) gefüllt und nacheinander selektiv mit 25 , 0 Liter n-Hexan, 26 , 0 Liter Methylenchlorid, 25 , 0 Liter Methanol (MeOH) und 12 , 5 Liter Wasser bei Raumtemperatur extrahiert . Die Lösungsmittel der resultierenden Extrakte wurden unter Vakuum bei 40 0C verdampft . Es wurden 4 , 8 Gramm des selektiven Hexan- Extrakts , 11 , 03 Gramm des selektiven Methylenchlorid- Extrakts , 116 , 81 Gramm des selektiven Methanol -Extrakts und 7 , 0 Gramm des selektiven Wasser-Extrakts erhalten.
Zur Herstellung eines Ethanol-Extrakts wurde 300 Gramm Rindenmaterial von P. africanum pulverisiert und dreimal mit je 5 , 0 Litern Ethanol (EtOH) extrahiert . Nach Filtration des Extrakts durch Filterpapier mit einer Porengröße von 0, 7 μm wurde das Lösungsmittel des gesamten Extrakts mittels eines Rotationsverdampfers bei 40 0C entfernt . Der resultierende Extrakt wies eine Trockenmasse von 16 , 02 Gramm auf .
Beispiel 2 : Fraktionierung des Methylenchlorid-Extrakts
Der selektive Methylenchlorid-Extrakt von P. africanum wurde mit Hilfe von Silikagel (Machery - Nagel Si60 , 15 - 25 μm) fraktioniert . Zu diesem Zweck wurde der Extrakt in 2000 ml CH2Cl2 gelöst und durch Filterpapier mit einer Porengröße von 0 , 7 μm (Schleicher & Sσhüll) filtriert . Fünfundzwanzig Gramm Silikagel (Merck Si60, 0, 063 - 0, 2 mm) wurden zu dem Extrakt gegeben und anschließend wurde das Lösungsmittel im Vakuum bei 40 0C verdampft . Das so beschichtete Silikagel wurde oben auf ein trocken gepackte Silikagel-Säule (Merck
Prepbar® 400 X 100 mm) platziert und bei einer Flussrate von 120 ml min"1 mit einem linearen Gradienten von 0 min Hexan (100 : 0) , 50 min Hexan (100 : 0) , 350 min CH2Cl2 (100 : 0) , 500 min CH2Cl2 (100 : 0) , 700 min CH2Cl2-MeOH (80 : 20) , 750 min MeOH (100 : 0) , 800 min MeOH (100 : 0) , 850 min H2O (100 : 0) , 885 min H2O eluiert . Die Chromatographie ergab 35 Fraktionen, die zu einem Nachweis mit UV-Licht bei einer Wellenlänge von 245 rnn führten (Tabelle 1) . Tabelle 1 : Fraktionierung des selektiven Methylenchlorid- Extrakts von P. africana
Fraktion Min Masse (mg) Fraktion Min Masse (mg)
Fl 0-148 3 F19 615- 630 799
F2 149-184 52 F20 631-638 292
F3 185-204 33 F21 639- 659 1338
F4 205-229 63 F22 660- 663 20
F5 230-238 14 F23 664- 671 327
F6 239-261 61 F24 672-692 634
F7 262-266 30 F25 693 -703 157
F8 267-293 243 F26 704 -724 333
F9 294- 331 380 F27 725-749 350
FlO 332 -338 17 F28 750-771 393
FIl 339-356 164 F29 772 -784 316
F12 357-369 119 F30 785- 803 141
F13 370- 373 38 F31 804 - 820 57
F14 374- 375 71 F32 821- 828 58
F15 376-562 110 F33 829- 836 1
F16 563 - 581 44 F34 837 -858 126
F17 582- 592 24 F35 859- 880 1
F18 593- 614 1537 Beispiel 3 ; Isolierung von N-Butylbenzolsulfonamid
NBBS wurde aus Fraktion F8 durch präparative HPLC (250 x 21 mm, 100-5 C18 HD Machery - Nagel, 22 ml min"1, UV-Nachweis bei 220 nm, Gradient : 0 min ACN-H2O (mit Zusatz von 0, 1 % TFA) ( (20 : 80) , 40 min ACN-H2O (80 : 20) , 45 min ACN (100 : 0) isoliert . NBBS wurde von Minute 12 , 6 bis Minute 14, 0 gesammelt . Seine Struktur wurde auf Grundlage der 1H- und
13 C- NMR, EI-MS, HR-EI-MS, IR- und UV-Spektren aufgeklärt .
Beispiel 4 : Zellkultur und Luciferase-Assay
Nierenzellen von Affen, Linie CVl, die keinen endogenen Androgen-Rezeptor aufweisen, wurden in Dulbecco ^s modifiziertem Eagle's Medium (DMEM) , ergänzt mit 10 % (v/v) fötalem Kälberserum, Penicillin (100 Ul/ml) und Streptomycin (100 Ul/ml) bei 37 0C und 5 % CO2 kultiviert .
Für die Transfektionsexperimente wurden die Zellen in 6 -Loch Zellkultur-Platten (Nunc, Roskilde, DK) in einer Dichte von 1, 2 x 105 Zellen pro Loch ausgesät und in DMEM-Medium kultiviert, das mit 10 % (v/v) Dextran-beschichteter Aktivkohle verminderte Serum ergänzt war . Sechs Stunden nach Aussaat wurden die Zellen mittels der Ca3 (PO4) 2-Methode transfiziert . Der Expressionsvektor für den menschlichen
Androgen-Rezeptor (hAR) (0 , 2 μg) wurde mit 1 μg des Reporter- Plasmids MMTV-luc und 0 , 2 μg des Cytomegalovirus (CMV) getriebenen ß-Galactosidase Expressionsvirus, als interne Kontrolle für die Transfektionseffizienz , cotransfiziert . Nach 14 h wurde das Medium entweder ohne (weiße Säulen in den Figuren 1 bis 3 ) oder mit Zugabe von Methyltrienolon (R1881, 3xlO"10 M Endkonzentration; schwarze Säulen in den Figuren 1 bis 3) zusammen mit den angegebenen Extrakten (FIG. 1) , Fraktionen (FIG . 2) oder Substanzen (FIG. 3) ersetzt . Nach weiteren 48 Stunden wurden die Zellen geerntet und auf Luciferase- und ß-Glaktosidase-Aktivität hin untersucht .
Die Luciferase-Aktivität wurde durch Injektion von Luciferin und Messung der Lichtemission bei 562 um bestimmt und als relative Lichteinheiten (RLU) angegeben, indem die Werte für ß-Galaktosidase-Aktivität zur Normalisierung der Luciferase- Aktivität verwendet wurden . Sämtliche Transfektionsversuche wurden doppelt durchgeführt und zumindest zweimal wiederholt . Zur Bestimmung der antiandrogenen Aktivität in verschiedenen Extrakten aus der Rinde von P. africanum wurden die Extrakte in einer Konzentration von 300 μg/ml eingesetzt . Die Ergebnisse sind in FIG. 1 dargestellt .
Zur Bestimmung der antiandrogenen Aktivität in den
Fraktionen des selektiven Methylenchlorid-Extrakts wurden zwei Mikroliter der j eweiligen Fraktion, was einer Endkonzentration von 30 μg/ml entspricht, verwendet . Bei den Fraktionen F6 bis FlO wurden zusätzlich Versuche mit 4 μl, entsprechend 60 μg/ml Endkonzentration, durchgeführt . Die aktiven Fraktionen F7 und F8 wurden für die weiteren Untersuchungen verwendet . Ein Teil der Ergebnisse ist in FIG. 2 dargestellt .
Für den Vergleich der antiandrogenen Wirkung von in P. africanum vorkommenden Verbindungen, die Zellen in Anwesenheit von ß-Sitosterol, Benzoesäure, NBBS, Ferulasäure, Oleanolsäure oder Ursolsäure bei einer Endkonzentration von 10"5 M im Zellkulturmedium sowie bei An- oder Abwesenheit von Methyltrienolon (3xlO"10 M) . Die Ergebnisse sind in FIG. 3 dargestellt .
Beispiel 5 : Inhibition des Wachstums von menschlichen Prostatakarzinomzellen durch NBBS
Menschliche Prostatakarzinomzellen (Zelllinie LNCaP) wurden in RPMI-1640 Medium, das mit 10 % (v/v) fötalem Kälberserum, Penicillin (100 IU/ml) , Streptomycin (100 IU/ml) , 2 mM Glutamin und 1 πiM Natriumpyruvat ergänzt wurde, gehalten . Für die Wachstums-Untersuchungen wurden die LNCaP-Zellen mit einer Dichte von 5 x 103 Zellen pro Loch in eine 24-Loch Zellkultur-Platte gesät und in RPMI-1640 Medium mit 5 % fötalem Kälberserum kultiviert . Am 2. Tag wurde das Kulturmedium gewechselt und zur Behandlung der Zellen
Ethanol/DSMO (Kontrolle) , NBBS (10 μM und 100 μM) oder dem bekannten Antiandrogen Hydroxyflutamid (OH-F) (0 , 1 μM) zugesetzt . Jeden zweiten Tag wurde das Medium mit den Zusätzen erneuert . An den angegebenen Tagen wurden die Zellen mit Trypsin behandelt und mit Hilfe einer Zählkammer gezählt . Die Ergebnisse sind in FIG . 4 dargestellt .
Beispiel 6 : Synthese von Methylbenzolsulfonamid (= Sl)
IUPAC : JJ-Methylbenzolsulfonamid
Summenformel : C7H9NO2S (MG = 171, 04)
Synthese:
Zu 31, 06 g einer wässrigen Lösung (40%) von Methylamin (0, 4 mol) wurden unter Rühren 17 , 662 g Benzolsulfonsäurechlorid (0 , 1 mol) hinzugetropft . Nach dem Abkühlen des Reaktionsansatzes wurden 20 ml Wasser hinzugegeben und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan ausgeschüttelt (3 x 20 ml) . Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser gewaschen (2 x 20 ml) und am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck eingeengt .
Erscheinungsform: Farbloses Öl
Ausbeute: 15,940 g (93%) UV (MeOH) A^ax um: 220, 265
IR (KBr) vax cm"1: 3300, 3070, 2980, 1450, 1320, 1160 1H-NMR- (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 7,80 (2H, d, 3J = 7,5 Hz, C-2-H und C-6-H) 7,51 (IH, t, 3J = 6,5 Hz, C-4-H) 7,45 (2H, t, 3J = 6,5 Hz, C-3-H und C-5-H) 4,87 (IH, S1 N-H)
2,57 (3H, S, C-I--H)
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 138,8 ( C-I) 29,3 (C-I") 132,7 (C-4)
129.1 (C-3 und C-5)
127.2 (C-2 und C-6)
EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) : 171 [M]+ (81), 141 (52), 77 (100)
Massenf einbestimmung (HR-EI-MS) : Berechnet: 171,0354 für [M+] Gefunden: 171,0338
Beispiel 7 : Synthese von Ethylbenzolsulfonamid (= S2)
IUPAC : N-Ethylbenzolsulfonamid Summenformel : C8H11NO2S (MG = 185, 05)
Synthese :
Zu 25 , 76 g einer wässrigen Lösung (70%) von Ethylamin (0, 4 mol) wurden unter Rühren 17, 662 g Benzolsulfonsäurechlorid (0 , 1 mol) hinzugetropft . Nach dem Abkühlen des Reaktionsansatzes wurden 20 ml Wasser hinzugegeben und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan ausgeschüttelt (3 x 20 ml) . Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser gewaschen (2 x 20 ml) und am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck eingeengt .
Erscheinungsform: Farblose Kristalle
Ausbeute: 17,373 g (94%)
Schmelzpunkt (0C) : 51
UV (MeOH) λmax um: 220, 264
IR (KBr) vmax cm"1: 3300, 2980, 2940, 1450, 1320, 1160
1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 7,81 (2H, d, 3J = 8,0 Hz, C-2-H und C-6-H)
7,51 (IH, t, 3J = 6,2 Hz, C-4-H)
7,45 (2H, t, 3J = 6,9 Hz, C-3-H und C-5-H)
4,43 (IH, s, N-H)
2,95 (2H, q, 3J = 6,0 Hz, C-I--H) 1,04 (3H, t, 3J = 5,5 Hz, C-2'-H)
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 140,0 ( C-I) ■ 38,2 (C-I')
132,5 (C-4) 15,0 (C-2') 129,0 (C-3 und C-5) 127,0 (C-2 und C-6)
EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) :
185 [M]+ (67), 170 (100), 141 (87) , .77 (55)
Massenfeinbestimmung (HR-EI-MS) :
Berechnet : 185, 0511 für [M+] Gefunden : 185 , 0512 Beispiel 8; Synthese von Propylbenzolsulfonamid (= S3)
IÜPAC: N- Propylbenzolsulfonamid Summenformel: C9H13NO2S (MG = 199,07)
Synthese :
Zu 11, 822 g Propylamin (O72 mol) wurden unter Rühren 8 , 831 g Benzolsulfonsäurechlorid (0 , 05 mol) hinzugetropft . Nach dem Abkühlen des Reaktionsansatzes wurden 20 ml Wasser hinzugegeben und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan ausgeschüttelt (3 x 20 ml) . Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser gewaschen (2 x 20 ml) und am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck eingeengt .
Erscheinungsform: Gelbes Öl
Ausbeute : 9 , 517 g (96%)
UV (MeOH) λmax nm: 220, 265
IR (KBr) vmax cm"1: 3290, 2970, 2940, 1450, 1320, 1160
1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
7,81 (2H, d, 3J = 7,5 Hz, C-2-H und C-6-H) 7,50 (IH, t, 3J = 3,3 Hz, C-4-H)
7,45 (2H, t, 3J = 3,0 Hz, C-3-H und C-5-H)
4,81 (IH, s, N-H)
2,84 (2H, q, 3J = 4,0 Hz, C-l'-H)
1,42 (2H, m, 3J = 7,5 Hz , C-2'-H) 0,78 (3H, t, 3J = 4,5 Hz , C-3"-H)
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
140,1 ( C-I) 45,0 (C-I")
132,5 (C-4) 23,0 (C-2') 129,1 (C-3 und C-5) 11,0 (C-3') 127,0 (C-2 und C-6)
EI-MS (70 eV) : m/z (rel . int . ) : 199 [M] + (39) , 170 (100) , 141 (84) , 77 (51)
MassenfeinbeStimmung (HR-EI-MS) : Berechnet : 199 , 0667 für [M+] Gefunden: 199 , 0666
Beispiel 9 : Synthese von GeranylbenzolSulfonamid (= S4)
IUPAC : N- [ (2B) -3 , 7-Dimethylocta-2 , 6-dien-l-yl] benzolsulfon- amid Summenformel: C16H23NO2S (MG = 293,14)
Synthese :
Zu 307 mg Geranylamin (2 mmol) wurden unter Rühren 177 mg Benzolsulfon-säurechlorid (1 mmol) hinzugetropft . Nach dem Abkühlen des Reaktionsansatzes wurden 10 ml Wasser hinzugegeben und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan ausgeschüttelt (3 x 10 ml) . Die vereinigten organischen Phasen wurden mit 0 , 1 mM Salzsäure gewaschen (3 x 5 ml) und am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck eingeengt .
Erscheinungsform: Bräunliches Öl
Ausbeute: 281 mg (96%)
UV (MeOH) λmax um: 205, 221, 264
IR (KBr) vmax cm'1: 3280, 2900, 1450, 1330, 1160
1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 7,82 (2H, d, 3J = 7,0 Hz, C-2-H und C-6-H) ,51 (IH, t, 3J = 6,4 Hz, C-4-H)
7,45 (2H, t, 3J = 7,6 Hz, C-3-H und C-5-H)
4,95 (2H, m, 3J = 7,0 Hz, C-2"-H und C-6'-H)
4,31 (IH, t, 3J = 6,0 Hz, N-H) 3,52 (2H, g, 3J = 6,5 Hz, C-l'-H)
1,90 (2H, g, 3J = 8,0 Hz , C-5'-H)
1,84 (2H, t, 3J = 8,0 Hz, C-4'-H)
1,60 (3H, S1 0-3'-Me)
1,50 (3H, s, C-7'-Me) 1,46 (3H, s, C-8")
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
141,3 ( C-3") 127,1 (C-2 und C-6) 26,2 (C-8")
140,1 (C-I) 123,6 (C-2') 25,6 (C-7'-Me)
132,6 (C-7') 118,5 (C-6") 17,7 (C-5") 131,9 (C-4) 41,0 (C-I') 16,2 (C-3'-Me)
129,0 (C-3 und C-5) 39,3 (C-4")
EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) :
293 [M]+ (47), 210 (72) , 170 (100), 152 (83), 141 (80), 77 (46)
Massenf einbe Stimmung (HR-EI-MS) : Berechnet: 293,1450 für [M+] Gefunden: 293,1413
Beispiel 10 : Synthese von Butyltoluolsulfonamid (= S5)
IUPAC: JW-Butyl-4-methylbenzolsulfonamid Suπimenf ormel : C11H17NO2S (MG = 227,10)
Synthese:
Zu 1, 463 g Butylamin (0 , 02 mol) wurden unter Rühren und Erwärmen 1, 908 g Toluolsulfonsäurechlorid (0 , 01 mol) hinzugetropft . Nach dem Abkühlen des Reaktionsansatzes wurden 10 ml Wasser hinzugegeben und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan ausgeschüttelt (3 x 10 ml) . Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser gewaschen (3 x 5 ml) und am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck eingeengt ..
Erscheinungsform: Farbloses Öl
Ausbeute : 2 , 071 g (91%)
UV (MeOH) λmax nm: 226, 263
IR (KBr) vmax cm"1: 3290, 2960, 1600, 1330, 1160
1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
7,67 (2H, d, 3J = 8,5 Hz, C-2-H und C-6-H)
7,24 (2H, d, 3J = 8,0 Hz, C-3-H und C-5-H)
4,34 (IH, t, 3J = 5,5 Hz, N-H)
2,87 (2H, g, 3J = 6,5 Hz, C-l'-H) 2,36 (3H, s, C-4-Me)
1,36 (2H, m, 3J = 8,0 Hz, C-2'-H)
1,21 (2H, m, 3J = 8,0 Hz C-3"-H)
0,78 (3H, t, 3J = 7,5 Hz , C-4'-H)
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
142,2 ( C-4) * 42,9 (C-I') 13,5 (C-4')
137.0 (C-I) 31,5 (C-2') 129,6 (C-3 und C-5) 21,5 (C-4-Me)
127.1 (C-2 und C-6) 19,6 (C-3")
EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) :
227 [M]+ (42), 184 (100), 155 (90), 91 (49)
Massenf einbe Stimmung (HR-EI-MS) : Berechnet: 227,0980 für [M+] Gefunden: 227,0986
Beispiel 11: Synthese von Butyl-4-f luorbenzolsulfonamid (= Sβ)
IUPAC: jV-Butyl-4-f luorbenzolsulf onamid Summen f o ntiel : C10H14NO2SF (MG = 231,07)
Synthese:
Zu 0 , 732 g Butylamin (0 , 01 mol) wurden unter Rühren und Erwärmen 0 , 973 g 4-Fluorbenzolsulfonsäurechlorid (0, 005 mol) hinzugetropft . Nach dem Abkühlen des Reaktionsansatzes wurden 10 ml Wasser hinzugegeben und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan ausgeschüttelt (3 x 10 ml) . Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser gewaschen (2 x 5 ml) und am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck eingeengt .
Erscheinungsform: Hellbrauner Feststoff
Ausbeute : 1, 081 g (93%)
Schmelzpunkt (0C) : 33
UV (MeOH) λmax nm: 221, 260
IR (KBr) V1113x cm"1: 1600, 1500, 1330, 1150
1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
7,81 (2H, dd, 4J (H, F) = 5,0 Hz, 3J (H, H) = 8,3 Hz, C-2-H und
C-6-H)
7,13 (2H, t, 3J (H, F) = 3J (H, H) = 8,3 Hz, C-3-H und C-5-H)
4,26 (IH, S1 N-H) 2,89 (2H, t, 3J = 7,5 Hz, C-l'-H)
1,36 (2H, m, 3J = 7,5 Hz, C-2'-H)
1,22 (2H, in, 3J = 7,5 Hz C-3'-H)
0,79 (3H, fc, 3J = 7,5 Hz , C-4"-H)
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
164.0 (C-4) 42,9 (C-I')
136.1 (C-I) 31,5 (C-2") 129,7 (C-2 und C-6) 19,7 (C-3") 116,2 (C-3 und C-5) 13,4 (C-4")
EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) :
231 [M]+ (20), 188 (100), 159 (86), 95 (44)
Massenfeinbestimmung (HR-EI-MS) : Berechnet: 231,0729 für [M+] Gefunden: 231,0736
Beispiel 12 : Synthese von Hydroxyethylbenzol Sulfonamid v (= S7)
IUPAC: JW- (2-Hydroxyethyl)benzolsulfonamid Summen f o rmel : C8H11NO3S (MG = 201,05)
Synthese:
8, 831 g Benzolsulfonsäurechlorid (0 , 05 mol) und 6 , 720 g Ethanolamin wurden 5 Stunden in 30 ml ortήσ-Xylol bei 1400C unter Rückfluss behandelt . Nach dem Abkühlen setzte sich eine viskose Flüssigkeit am Boden ab, die mittels Scheidetrichter abgetrennt wurde . Die viskose Flüssigkeit wurde in 40 ml NaOH (10%) gelöst . Anschließend wurde das Produkt mit konzentrierter Salzsäure ausgefällt und im Scheidetrichter abgetrennt . Das Produkt wurde mit 50 ml Aceton versetzt und filtriert (0 , 2 μm) . Das Aceton wurde am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck entfernt .
Erscheinungsform: Gelbliches Öl
Ausbeute : 2 , 739 g (27%)
UV (MeOH) λmax nm: 221, 265
IR (KBr) vmax cm"1: 3290, 1450, 1320, 1160
1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
7,81 (2H, d, 3J = 7,5 Hz, C-2-H und C-6-H)
7,51 (IH, t, 3J = 7,5 Hz, C-4-H) 7,46 (2H, t, 3J = 7,5 Hz, C-.3-H und C-5-H)
5,26 (IH, s, N-H)
3,64 (2H, fc, 3J = 5,0 Hz, C-2"-H)
3,03 (2H, q, 3J = 5,0 Hz, C-l'-H)
2,31 (IH, S, O-H)
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
140,6 (C-I) 59,8 (C-2')
132,2 (C-4) 45,0 (C-I')
129,0 (C-3 und C-5) 126,3 (C-2 und C-6)
EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) :
201 [M]+ (4), 170 (100), 141 (84), 77 (52)
Massenf einbestimmung (HR-EI-MS) : Berechnet: 201,0460 für [M+] Gefunden: 201,0460 Beispiel 13; Synthese von 4-Fluor-Hydroxyethylbenzol- sulfonamid (= S8)
IUPAC: 4-Fluor-N- (2-hydroxyethyl)benzolsulfonamid Summen f o rmel : C8H10NO3SF (MG = 219,04)
Synthese :
9 , 731 g 4-Fluorbenzolsulfonsäurechlorid (0 , 05 mol) und 6, 720 g Ethanolamin wurden 5 Stunden in 30 ml ortho-Xylol bei 1400C unter Rückfluss behandelt . Nach dem Abkühlen setzte sich eine viskose Flüssigkeit am Boden ab, die mittels Scheidetrichter abgetrennt wurde . Die viskose Flüssigkeit wurde in 40 ml NaOH (10%) gelöst . Anschließend wurde das Produkt mit konzentrierter Salzsäure ausgefällt und abfiltriert (0 , 7 μm) . Das Produkt wurde mit Wasser gewaschen (3 x 5 ml) .
Erscheinungsform: Weißes Pulver
Ausbeute : 3 , 6.56 g (33%)
Schmelzpunkt ( 0C) : 77
UV (MeOH) λmax nm: 220, 270
IR (KBr) vmax cm"1: 3430, 1590, 1320, 1150
1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
7,81 (2H, dd, 4J (H, F) = 5,2 Hz, 3J (H, H) = 8,3 Hz, C-2-H und C-6-H)
7,13 (2H7 t, 3J (H, F) = 3J (H, H) = 8,3 Hz, C-3-H und C-5-H)
5,03 (IH, s, N-H)
3,66 (2H, fc, 3J = 6,2 Hz, 0-2'-H)
3,05 (2H, t, 3J = 4,2 Hz, C-l"-H) 1,96 (IH, s, 0-H)-
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm) : 164,1 (C-4) 61,2 (C-2") 135,8 (C-I) 45,1 (C-I")
129,9 (C-2 und C-6) 116,4 (C-3 und C-5)
EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) : 219 [M]+ (5), 188 (100), 159 (91), 95 (56)
Massenf einbe Stimmung (HR-EI-MS) : Berechnet: 219,0365 für [M+] Gefunden: 219,0367
Beispiel 14 : Synthese von Pentylbenzolsulfonamid (= S9)
IUPAC: JW- Pentylbenzolsulfonamid Summenf orπiel : C11H17NO2S (MG = 227,10)
Synthese:
Zu 1, 744 g Pentylamin (0, 02 mol) wurden unter Rühren 1, 766 g Benzolsulfonsäurechlorid (0, 01 mol) hinzugetropft . Nach dem Abkühlen des Reaktionsansatzes wurden 10 ml Wasser hinzugegeben und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan ausgeschüttelt (3 x 10 ml) . Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser gewaschen (3 x 5 ml) und am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck eingeengt .
Erscheinungsform: Hellbraunes Öl
Ausbeute : 2 , 193 g (96%)
UV (MeOH) λraax nm: 216 , 264 IR (KBr) vmax cm"1: 3290, 2960, 2930, 1450, 1330, 1160
1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
7,80 (2H, d, 3J = 7,0 Hz, C-2-H und C-6-H) 7,51 (IH, t, 3J = 7,0 Hz, C-4-H)
7,45 (2H, t, 3J = 7,0 Hz, C-3-H und C-5-H)
4,32 (IH, S, N-H)
2,89 (2H, g, 3J = 7,0 Hz, C-l'-H)
1,39 (2H, m, 3J = 6,1 Hz , C-2'-H) 1,18 (2H, m, 3J = 3,0 Hz , C-3'-H)
1,17 (2H, m, 3J = 3,0 Hz , C-4'-H)
0,77 (3H, t, 3J = 7,0 Hz , C-5'-H)
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm): 142,1 ( C-I) 44,0 (C-I') 14,2 (C-5")
133,5 (C-4) 30,3 (C-2")
130,1 (C-3 und C-5) 29,8 (C-3")
127,9 (C-2 und C-6) 23,2 (C-4")
EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) :
227 [M]+ (81), 170 (100), 141 (82), 77 (48)
Massenfeinbestimmung (HR-EI-MS) : Berechnet: 227,0976 für [M+] Gefunden: 227,0980
Beispiel 15: Synthese von Butyl-3-trif luormethylbenzol- sulfonamid (= SlO)
IUPAC: N-Butyl-3 - ( trif luoromethyl)benzolsulf onamid Summenf ormel : C11H14NO2SP3 (MG = 281,07)
Synthese: Zu 585 mg Butylamin (8 mmol) wurden unter Rühren 978 mg 3 - Trifluormethyl-benzolsulfonsäurechlorid (4 mmol) hinzugetropft . Nach dem Abkühlen des Reaktionsansatzes wurden 20 ml Wasser hinzugegeben und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan ausgeschüttelt (3 x 10 ml) . Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser gewaschen (3 x 5 ml) und am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck eingeengt .
Erscheinungsform: Farbloses Öl
Ausbeute : 1, 112 g (99%)
UV (MeOH) λmax nm: 205, 220, 265
IR (KBr) vmax cm'1: 3290, 2960, 2940, 1610, 1330, 1160
1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
8,07 (IH, s, C-2-H) 7,99 (IH, d, 3J = 7,5 Hz, C-4-H)
7,77 (IH, d, 3J = 8,0 Hz, C-6-H)
7,62 (IH, t, 3J = 8,0 Hz, C-5-H)
2,93 (2H, t, 3J = 7,0 Hz, C-l'-H)
1,38 (2H, m, 3J = 7,3 Hz C~2'-H) 1,24 (2H, m, 3J = 7,3 Hz , C-3""-H)
0,79 (3H, t, 3J = 7,5 Hz, C-4'-H)
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
140,4 (C-I) 128,2 (C-5) 30,5 (C-2') 130,6 (g, 2J (C, F) = 33 Hz, C-3) 123,1 (C-4)
18,7 (C-3')
129,2 (C-2) 122,1 (g, 2J (C, F) = 220 Hz, CF3)
128,9 (C-6) 42,0 (C-I') 12,5 (C-4') EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) :
281 [M] + (8) , 238 (100) , 209 (84) , 145 (58)
Massenfeinbestimmung (HR-EI-MS) : Berechnet : 281, 0697 für [M+] Gefunden: 281, 0705
Beispiel 16 : Synthese von Geranyl-3 -trifluormethylbenzol- sulfonamid (= Sil)
IUPAC: N- [ (2S) -3 ,7-Dimethylocta-2 , 6-dien-l-yl] -3- (tri- f luoromethyl) benzolsulf onamid Summenf ormel : C17H22NO2SP3 (MG = 361,13)
Synthese:
Zu 919 mg Geranylamin (6 mmol) in 40 ml Dichlormethan wurden unter Rühren 1, 233 g 3 -Trifluormethylbenzolsulfonsäure- chlorid (5 mmol) hinzugetropft . Nach Beendigung der Reaktion wurde das überschüssige Amin mit Salzsäure (0 , ImM) ausgeschüttelt (3 x 10 ml) . Das Dichlormethan wurde am
Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck entfernt und das Produkt erhalten.
Erscheinungsform: Hellbraunes Öl
Ausbeute : 1, 770 g (98%)
UV (MeOH) λmax im: 205, 220, 265
IR (KBr) vmax cm4: 3290, 2970, 2930, 1440, 1330, 1160
1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
8,07 (IH, s, C-2-H)
8,00 (IH, d, 3J = 8,0 Hz, C-4-H) 7,77 (IH, d, 3J = 8,0 Hz, C-6-H)
7,61 (IH, t, 3J = 8,0 Hz, C-5-H)
4,95 (2H, m, 3J = 7,0 Hz, C-2"-H und C-6"-H)
4,44 (IH, t, 3J = 6,0 Hz, N-H) 3,57 (2H, q, 3J = 6,5 Hz, C-l"-H)
1,89 (2H, g, 3J = 8,0 Hz, C-5'-H)
1,83 (2H, t, 3J = 8,0 Hz, C-4'-H)
1,59 (3H, s, C-3'-Me)
1,49 (3H, s, C-7"-Me) 1,48 (3H, s, C-8")
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
141,7 (C-3") 129,8 (C-6) 41,1 (C-I") 16,2 (C-3"-Me)
141,6 (C-I) 129,2 (C-5) 39,3 (C-4")
131,9 (C-3) 124,2 (C-2") 26,1 (C-8") 131,6 (C-7") 123,5 (C-4) 25,6 (C-7"-Me)
130,3 (C-2) 118,1 (C-6') 17,6 (C-5")
EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) :
361 [M]+ (39), 238 (100), 209 (67), 152 (75), 145 (58)
MassenfeinbeStimmung (HR-EI-MS) :
Berechnet : 361, 1323 für [M+] Gefunden: 361, 1333
Beispiel 17 : Synthese von LaurylbenzolSulfonamid (= S12)
IUPAC : JNT-Dodecylbenzolsulfonamid Summenformel : C18H31NO2S (MG = 325 , 21)
Synthese :
Zu 370 mg Dodecylamin (2 mmol) in 10 ml Dichlormethan wurden unter Rühren 177 mg Benzolsulfon-säurechlorid (1 mmol) hinzugetropft . Nach dem Abkühlen des Reaktionsansatzes wurden 10 ml Wasser hinzugegeben und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan ausgeschüttelt (3 x 10 ml) . Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser gewaschen (3 x 5 ml) und am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck eingeengt .
Erscheinungsform: Farblose Kristalle
Ausbeute: 323 mg (99%)
Schmelzpunkt (0C) : 59-61
UV (MeOH) λ^ rnn: 221, 265
IR (KBr) vmax cm"1: 3280, 2850, 1470, 1330, 1160
l 1τH-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
7,86 (2H, d, 3J = 8,0 Hz, C-2-H und C-6-H)
7,49 (IH, t, 3J = 6,9 Hz, C-4-H)
7,44 (2H, t, 3J = 8,0 Hz, C-3-H und C-5-H) 5,61 (IH, t, 3J = 6,0 Hz, N-H)
2,86 (2H, q, 3J = 7,0 Hz, C-l"-H)
1,39 (2H, m, 3J = 7,1 Hz , C-2'-H)
1,19 (18H, m, C-3"-H bis C-ll"-H)
0,82 (3H, t, 3J = 6,8 Hz , C~12'-H)
13C-NMR- (125 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
139,9 ( C-I) 43,0 (C-I') 13,9 (C-12")
132,4 (C-4) 31,7 (C-2')
128,7 (C-3 und C-5) 29,2 (7C, m, C-3" bis C-10") 126,8 (C-2 und C-6) 22,5 (C-Il")
EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) :
325 [M] + (9) , 184 (88) , 170 (100) , 158 (58) , 141 (64) , 77
(21) Massenfeinbestiinmung (HR-EI-MS) : Berechnet : 325 , 2076 für [M+] Gefunden: 325 , 2080
Beispiel 18 : Synthese von Butyl-4-nitro-3 - trifluormethyl- benzolsulfonamid (= S13)
IUPAC : N-Butyl-4-nitro-3 ~ (trifluoromethyl) benzolSulfonamid Summenformel : C11H13N2O4SF3 (MG = 326 , 05)
Synthese:
Zu 146 mg Butylamin (2 mmol) wurden unter Rühren 290 mg 4- Nitro-3 -trifluormethylbenzolsulfonsäurechlorid (1 mmol) in 10 ml Dichlormethan hinzugetropft . Nach dem Abkühlen des Reaktionsansatzes wurden 20 ml Wasser hinzugegeben und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan ausgeschüttelt (3 x 10 ml) . Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser gewaschen (3 x 5 ml) und am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck eingeengt .
Erscheinungsform: Weißes Pulver
Ausbeute : 323 mg (99%)
Schmelzpunkt ( 0C) : 99
UV (MeOH) λmax nm: 205 , 250
IR. (KBr) vmax cm"1: 3280, 2960, 1550, 1430, 1310, 1160, 1150
1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
8,28 (IH, s, C-2-H)
8,19 (IH, d, 3J = 8,3 Hz, C-5-H)
7,98 (IH, d, 3J = 8,3 Hz, C-6-H) ,62 (IH, s, N-H)
3,03 (2H, q, 3J = 6,3 Hz, C-I "-H)
1,49 (2H, m, 3J = 7,3 Hz C-2'-H)
1,31 (2H, m, 3J = 7,3 Hz , C-3"-H) 0,87 (3H, fc, 3J = 7,3 Hz, C-4'-H)
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
149,9 (C-4) 126,8 (C-5) 31,7 (C-2")
144,9 (C-I) 125,0 (C-3) 19,6 (C-3") 131,8 (C-2) 123,5 (g, 2J (C, F) = 188 Hz, CF3)
126,9 (C-6) 43,2 (C-I') 13,4 (C-4")
EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) :
326 [M]+ (14), 285 (22), 283 (100), 254 (82), 190 (53), 55 (17)
Massenfeinbestiiranung (HR-EI-MS) : Berechnet: 326,0548 für [M+] Gefunden: 326,0553
Beispiel 19: Synthese von Geranyl-4-nitro-3-trif luormethyl- benzolsulfonamid (= S14)
IUPAC: N- [(2E) -3 , 7-Dimethylocta-2, 6-dien-l-yl] - 4 -nitro- 3- (trif luoromethyl) -benzolsulfonamid
Suinmenf ormel : C17H21N2O4SF3 (MG = 406,12)
Synthese :
Zu 307 mg Geranylamin (2 mmol) wurden unter Rühren 290 mg 4- Nitro-3 - trifluormethylbenzolsulfonsäurechlorid (1 mmol) in 20 ml Dichlormethan hinzugetropft . Nach Beendigung der Reaktion wurde das überschüssige Amin mit Salzsäure (0 , ImM) ausgeschüttelt (3 x 10 ml) . Das Dichlormethan wurde am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck entfernt und das Produkt erhalten .
Erscheinungsform: Gelbliches Öl
Ausbeute : 386 mg (95%)
UV (MeOH) λmax um: 205, 250
IR (KBr) vmax cm"1: 3300, 2920, 1610, 1430, 1160
1H-NMR (500 MHz, CDCl3), δ (ppm) :
8,23 (IH, S1 C-2-H)
8,14 (IH, d, 3J = 8,5 Hz, C-5-H) 7,92 (IH, d, 3J = 8,5 Hz, C-6-H)
4,97 (2H, m, C-2"-H und C-6'~H)
4,48 (IH, t, 3J = 5,8 Hz, N-H)
3,63 (2H, g, 3J = 5,8 Hz, C-l'-H)
1,88 (2H, g, 3J = 7,5 Hz, C-5'-H) 1,85 (2H, t, 3J = 7,5 Hz, C-4'-H)
1,61 (3H, s, C-3'-Me)
1,53 (3H, s, C-7"-Me) 1,50 (3H, s, C-8")
13C-NMR (125 MHz, CDCl3), δ (ppm): 149,9 (C-4) 131,8 (C-7') 123,3 (C-2') 26,1 (C-8')
145,2 (C-I) 127,0 (C-6) 117,7 (C-6') 25,6 (C^-Me)
142,4 (C-3") 126,9 (C-5) 41,2 (C-I-) 17,6 (C-5')
132,1 (C-2) 124,7 (C-3) 39,3 (C-4") 16,2 (C-3'-Me)
EI-MS (70 eV) : m/z (rel. int.) :
406 [M] + (77) , 363 (55) , . 152 (96) , 136 (51) , 123 (100) , 99 ( 99 )
Massenfeinbestimmung (HR-EI-MS) : Berechnet : 406 , 1174 für [M+] Gefunden: 406 , 1175

Claims

Ansprüche
1. Verwendung eines Benzolsulfonamid-Derivats der Formel
wobei R1 für einen aliphatischen C1- bis C12-Kohlenwasserstoff steht, R2 Wasserstoff oder ein vollständig oder teilweise halogenierter C1-ReSt ist; und R3 Wasserstoff oder eine Nitrogruppe bedeutet, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung der benignen Prostatahyperplasie und/oder des Prostatakarzinoms .
2. Verwendung eines Benzolsulfonamid-Derivats der Formel
wobei R1 für einen aliphatischen C1- bis C12-Kohlenwasserstoff steht, R2 Wasserstoff oder ein vollständig oder teilweise halogenierter C1-ReSt ist; und R3 Wasserstoff oder eine Nitrogruppe bedeutet, zur Behandlung der benignen Prostatahyperplasie und/oder des Prostatakarzinoms .
3. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2 , dadurch gekennzeichnet, dass das Prostatakarzinom therapieresistent gegen Androgen-Antagonisten ist .
4. Verwendung nach Anspruch 3 , dadurch gekennzeichnet, dass der Androgen-Antagonist aus der Gruppe ausgewählt ist, die Bicalutamid, Flutamid, Hydroxyflutamid, Nilutamid und Cyproteronacetat umfasst .
5. Verwendung eines Benzolsulfonamid-Derivats der Formel
wobei R1 für einen aliphatischen C1- bis C12-Kohlenwasserstoff steht, R2 Wasserstoff oder ein vollständig oder teilweise halogenierter C1-ReSt ist; und R3 Wasserstoff oder eine
Nitrogruppe bedeutet, als Leitsubstanz zur Entwicklung von Wirkstoffen zur Behandlung der benignen Prostatahyperplasie und/oder des Prostatakarzinoms .
6. Pharmazeutische Zubereitung zur Behandlung der benignen Prostatahyperplasie und/oder des Prostatakarzinoms, dadurch gekennzeichnet, dass die Zubereitung zumindest ein Benzolsulfonamid-Derivat der Formel
enthält, wobei R1 für einen aliphatischen C1- bis C12-
Kohlenwasserstoff steht, R2 Wasserstoff oder ein vollständig oder teilweise halogenierter C1-ReSt ist; und R3 Wasserstoff oder eine Nitrogruppe bedeutet .
7. Verfahren zur Isolierung von N-Butylbenzolsulfonamid aus biologischem Material, umfassend die Schritte : a . Zerkleinern des biologischen Materials, b . Extrahieren des biologischen Materials mit einem Lösungsmittel, das aus der Gruppe ausgewählt ist, die einwertige C1- bis C4-Alkohole und leichtflüchtige, (teil) - halogenierte (^-Kohlenwasserstoffe umfasst; c . Fraktionieren des Extrakts, d. Isolierung von N-Butylbenzolsulfonamid aus den N- Butylbenzolsulfonamid enthaltenden Fraktionen .
8. Verfahren nach Anspruch 7 , dadurch gekennzeichnet, dass das biologische Material Rinde des afrikanischen Pflaumenbaums P. africana ist .
9. Verfahren nach Anspruch 7 oder 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Extraktion eine selektive Extraktion mittels einer Reihe von aufeinander folgenden Lösungsmitteln mit zunehmender Polarität ist .
10. Verfahren nach einem der Ansprüche 7 bis 9 , dadurch gekennzeichnet, dass die Fraktionierung des Extraktes mittels Gradientenextrographie erfolgt, wobei die Polarität der Eluenten zunimmt .
11. Verfahren nach einem der Ansprüche 7 bis 10 , dadurch gekennzeichnet, dass die Isolierung von N- Butylbenzolsulfonamid aus den Fraktionen mittels präparativer HPLC erfolgt .
12. Benzolsulfonamid-Derivate zur Behandlung der benignen
Prostatahyperplasie und/oder des Prostatakarzinoms, gekennzeichnet durch die Formel
wobei R1 für einen aliphatisehen C1- bis C12-Kohlenwasserstoff steht, R2 Wasserstoff oder ein vollständig oder teilweise halogenierter C1-ReSt ist; und R3 Wasserstoff oder eine Nitrogruppe bedeutet
13. Verfahren zur Herstellung von Benzolsulfonamid-Derivaten der Formel
wobei R1 für einen aliphatischen C1- bis C12-Kohlenwasserstoff steht, R2 Wasserstoff oder ein vollständig oder teilweise halogenierter C1-ReSt ist; und R3 Wasserstoff oder eine Nitrogruppe bedeutet, dadurch gekennzeichnet,, dass ein Benzolsulfonsäure-Derivat der Formel
wobei R1 für Halogen steht, R2 Wasserstoff oder ein vollständig oder teilweise halogenierter C1-ReSt ist; und R3 Wasserstoff oder Nitro bedeutet, mit einem primären aliphatischen Amin umgesetzt und das Reaktionsprodukt mit Dichlormethan oder Ether ausgeschüttelt wird.
14. Verfahren nach Anspruch 13 , dadurch gekennzeichnet, dass das primäre aliphatische Amin aus der Gruppe ausgewählt ist, die C1- bis C12- aliphatische Kohlenwasserstoffe umfasst, und vorzugsweise Butylamin oder Geranylamin ist .
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