EP2821138B2 - Flusszelle mit integrierter Trockensubstanz - Google Patents
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- EP2821138B2 EP2821138B2 EP13175335.2A EP13175335A EP2821138B2 EP 2821138 B2 EP2821138 B2 EP 2821138B2 EP 13175335 A EP13175335 A EP 13175335A EP 2821138 B2 EP2821138 B2 EP 2821138B2
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Definitions
- the invention relates to a flow cell with a dry substance arranged in a cavity within the flow cell, the flow cell having the features of claim 1 .
- Microfluidic flow cells as they are increasingly used as a "mini laboratory" for the analysis and/or synthesis of fluids, particularly in diagnostics, contain reaction substances in liquid and/or solid form that are to be introduced into the flow cells during the production of the flow cells.
- a reagent liquid to be dried ie a carrier liquid with a dissolved or suspended reagent.
- the entire component of the flow cell that is only partially wetted with the reagent liquid must be subjected to a drying process before further assembly, which is often combined with a heat treatment for the purpose of acceleration or is carried out as a freeze-drying process to protect the reagents and with regard to stability and resuspension properties.
- the disadvantage is that the component, whose dimensions usually far exceed those of the area that is only to be dried, occupies a lot of space in a drying chamber. Furthermore, the drying treatment can affect this component of the flow cell itself, particularly sensitive components mounted thereon. Above all, the dry substance formed can then be subject to impairments due to air contact, in particular humidity, and welding heat or the influence of adhesives used during assembly in the course of final assembly of the flow cell, through which the corresponding channel areas of a microfluidic flow cell must be hermetically sealed in many cases.
- a method for introducing a dry substance into a flow cell, as described above, is z. B. from the EP 2 198 964 B1 out.
- One from the WO 2012/154306 A1 known flow cell has a cavity that is accessible after opening a hatch or flap and has a recess in a floor for receiving a cuboid support element. The hatch or flap must be closed when the flow cell is in operation.
- a flow cell with the features of the preamble of claim 1 is in each case from WO 2011/051735 A2 and WO 2008/134462 A1 out.
- the object of the invention is to create a new microfluidic flow cell of the type mentioned at the outset with an integrated dry substance that can be produced more easily than in the prior art without adversely affecting the dry substance or other components of the flow cell due to the production environment.
- the dry substance can be formed by drying a reagent liquid separately from the rest of the flow cell on a carrier element, which is used solely to hold the dry substance and allows the dry substance to be introduced into the flow cell in a final assembly step. Impairment of flow cell components by the drying process and impairment of the dry reagent introduced by further assembly work on the flow cell are eliminated.
- the carrier element can have significantly smaller dimensions than the flow cell, with the dimensions of the carrier element being based on the size of the area carrying the dry reagent. Coatings that promote adhesion of the dry substance to its carrier surface can advantageously remain limited to the carrier surface of the carrier element, so that impairments of welded or adhesive connections by such coatings can be ruled out.
- the cavity can form a channel network for the transport, analysis and/or synthesis of a fluid.
- carrier elements possibly with different dry substances, can be used in the flow cell.
- the cavity is delimited by a recess in a plate-shaped substrate and a foil-like cover closing the recess.
- the passage is formed in the substrate, which is thicker than the film-like cover.
- the carrier element is preferably designed in such a way that it can be detachably and/or non-detachably connected to the flow cell while closing the cavity.
- the shape of the passage is preferably adapted to the shape of the carrier element. Fluid-tightness can be achieved in particular by welding and/or gluing, possibly also just by mechanically pressing the carrier element into the passage.
- the support element expediently fills the passage completely, at least in cross section, with the support element and the passage preferably having a circular shape in cross section, which is advantageous in terms of production technology.
- the carrier element tapers towards the cavity, while the passage narrows.
- a tight closure of the cavity in the form of a press fit can be achieved simply by mechanically pressing the carrier element into the passage.
- the carrier element preferably has a section which protrudes outwards from the flow cell and which can serve as a grip part to simplify manual handling or automated assembly.
- the protruding section can overlap the flow cell on the outside in the manner of a collar, with the collar being able to achieve an additional sealing of the cavity.
- the carrier element can be screwed into the passage.
- the support surface of the support member may be flush with or set back from an adjacent wall surface of the cavity. Alternatively, the support member protrudes into the cavity from the adjacent wall surface.
- the carrier surface expediently has a structuring, coating and/or surface modification that promotes adhesion of the dry substance.
- the carrier element and the carrier surface carrying the dry reagent are preferably made of plastic.
- the carrier surface can be formed by a separate surface component made of glass, silicon, ceramic or metal that is connected to the rest of the carrier element and can be applied by means of welding or gluing. This is advantageous if surface properties other than those that can be realized by a plastic surface or coating are necessary for the application of the dry reagent.
- Dry reagents include salts, buffers, e.g. for cell lysis, magnetic and non-magnetic beads, enzymes, antibodies, DNA fragments, proteins, PCR reagents or alternatively cells.
- the flow cell shown as a detail comprises a plate-shaped substrate 1 with a recess 2 which is covered by a film 4 bonded and/or welded to the substrate, forming a cavity 3 .
- the cavity 3 is part of an in 1 Otherwise not shown channel network of the flow cell, in particular it forms a channel area in which a dry reagent 5 containing antibodies, for example, adheres to a channel wall 6 .
- the dry reagent 5 originates from a reagent liquid 7 introduced by dispensing before the recess 2 is covered by the film 4 into the recess 2 forming a channel or chamber region of the flow cell.
- a heat treatment or /and subjected to freeze drying was subjected to a heat treatment or /and subjected to freeze drying.
- Out 2 discloses a method for introducing a dry substance, in particular a dry reagent 5, into a flow cell, in which the dry reagent 5 is applied to a separate carrier part 8.
- a cavity 3 in a flow cell which is, for example, an area of an in 3 Channel 9 shown can act, has a through-opening 10 into which the carrier element 8 with a conical section 11 having a carrier surface 13 for the dry reagent 5 can be inserted with fluid-tight closure of the cavity 3 .
- the carrier surface 13 forms part of the wall surface of the cavity 3.
- a fluid transported or processed in the cavity 3 can thus interact with the dry reagent; in particular, the dry reagent can be dissolved and resuspended by the fluid.
- components of the fluid such as cells or analytes can interact with the dry reagent and/or bind to it, in that the fluid flows over the carrier surface, possibly several times changing the direction of transport.
- the carrier element 8 fitted into the through-opening 10 can be glued or welded to the substrate.
- a section 12 of the carrier element that protrudes beyond the through-opening 10 on the side of the substrate 1 facing away from the cavity 3 8 serves as the mounting of the carrier element 8 facilitating handle part.
- the meandering channel 9 serves to redissolve the dry reagents 5 introduced by the carrier elements 8 by flushing them alternately.
- the substrate 1 and the film 4 of the flow cell are preferably made of a plastic, in particular both of the same plastic, with PMMA, PC, PS, PEEK, PP, PE, COC and COP, for example, being suitable for this purpose.
- the carrier element 8 is also preferably a plastic part, which in particular consists of the same plastic as the substrate. The production of the substrate and the carrier elements from plastic is expediently carried out by injection molding.
- the carrier surface 13 of the carrier element 8 accommodating the dry reagent 5 can be flush with the adjacent wall surface 14 of the cavity 3 or set back to this wall surface.
- the carrier element 8 can also protrude with the carrier surface 13 into the cavity 3 .
- This can be advantageous in order to generate turbulence locally in a laminar flow that is normally present in microchannels by abruptly changing the channel cross section and/or in order to increase the flow rate of the fluid in the channel area into which the carrier element 8 is introduced by reducing the channel cross section achieve, for example, to accelerate and control a redissolution of the dry reagent.
- assembly and/or component tolerances can be compensated for.
- figure 5 shows further embodiments for carrier elements 8 according to Figure 5a cylindrical and according Figure 5b can be cylindrical with a collar 15 engaging behind the substrate 1 .
- Figure 5c shows an embodiment of a cylindrical support element 8 having a collar 13 and having an external thread 16 which engages in an internal thread in the passage opening in question.
- the carrier element 8 can advantageously be detached from the flow cell, provided that there is no adhesive bonding or welding to the substrate 1 in addition to the screw connection.
- the solubility can be advantageous if the dry reagent is to be separated from the flow cell again after interaction with the fluid and subjected to further analysis.
- a carrier element 8 which can be detached from the flow cell and has an extended handle part 17 is shown Figure 5e .
- the carrier element 8 can be pressed into the relevant through-opening in the substrate 1 while sealing the cavity 3 fluid-tight.
- the guidance of the carrier element 8 can be improved.
- Figure 5d shows a carrier element 8 with a conical section and a collar 15 protruding from a through-opening, which is sealed against the substrate 1 by an annular seal 18 .
- the rotationally symmetrical carrier elements can have a marking that makes it possible to insert the carrier elements into the passage in a desired rotational position.
- Figure 6a has a carrier element with a depression 19 for receiving a dry reagent 5 .
- a carrier surface 13 is formed with a multiplicity of receiving depressions in the form of grooves 20 arranged crosswise with typical cross-sectional dimensions of 0.01 ⁇ 0.01 mm 2 to 1 ⁇ 1 mm 2 for a dry reagent.
- the surface of the carrier surface 13 can be enlarged in a simple manner, so that either a larger quantity of dry reagent 5 can be accommodated with the same dimensions of the carrier element 8 and/or the dry substance can dry more homogeneously than a large drop on a smooth carrier surface and/or or the microstructure of the support surface 13 formed by the receiving depressions 20 can generate turbulence when the fluid flows over it, which positively influence the release behavior.
- the grooves could be in the form of concentric circles.
- Figure 6c shows a receiving surface with a porous element 21 applied to the support surface by clamping, gluing or welding, in which a dry substance can settle.
- the porous element 21 advantageously forms an enlarged surface for receiving the dry reagent 5.
- Figure 6d has a carrier element with a treated carrier surface, wherein the treatment can be, for example, a wet-chemical treatment, a plasma treatment or a corona treatment.
- the treatment can be carried out, for example, by means of plasma polymerisation or lead to a coating 22 by means of a PVD process, for example a glass or metal coating.
- the carrier component shown is formed in two parts with a separate surface component 26 .
- the surface component 26 forming the support surface does not consist, for example, of a plastic, as is preferred for the rest of the support component, but of glass, silicon, metal or ceramic. If the functionalization, ie the application of the dry reagent to the carrier surface, requires such materials, as is the case with protein (e.g. antibodies) or nucleic acid-based analysis technologies, the use of these materials, which are often significantly more expensive than plastic, is limited. advantageously only on a surface area, with dimensions of 0.5 ⁇ 0.5 mm to 5 ⁇ 5 mm and thicknesses between 0.1 and 1 mm being considered.
- the surface component 26 can be attached to the rest of the support component by means of clamps or by gluing or welding.
- a large number of carrier elements 8 can be processed simultaneously by the carrier elements 8 being arranged in step 7a on a carrier tablet 24 having rows of holes 23.
- a layer 22 that improves the adhesion of a substance is produced simultaneously on all carrier surfaces 13 of the carrier elements 8 .
- the coating can also cover other surface areas of the carrier element 8 that are not intended for application of the dry reagent 5 .
- a drying treatment takes place, so that the dry substance 5 adhering thereto is deposited on the layers 22.
- step 7e the finished carrier elements 8 provided with a dry substance 5 can be removed for processing.
- the carrier element 8 has a carrier surface for a dry substance 5 which is formed by a membrane 27 .
- This membrane can be connected in one piece to the rest of the carrier element 8 or formed by a separate component connected to the rest of the carrier element, which preferably consists of the same plastic as the rest of the carrier element.
- the membrane 27 is transparent, which closes off a through opening 28 formed in the carrier element 8 at one end, there is the possibility of optical detection of the interaction of the fluid with the dry substance 5 in accordance with Figure 8b to control. Furthermore, according to Figure 8c the possibility of forming the membrane 27 convex or concave by pneumatic or mechanical pressurization.
- the interaction between the dry substance and the fluid can be stimulated in particular by alternating bulging and inward arching of the membrane 27 and both improved resuspension of dry substances and improved accumulation of components of the fluid on dry substances, eg in the case of antibodies, can be achieved.
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Description
- Die Erfindung betrifft eine Flusszelle, mit einer innerhalb der Flusszelle in einem Hohlraum angeordneten Trockensubstanz, wobei die Flusszelle die Merkmale des Anspruchs 1 aufweist.
- Mikrofluidische Flusszellen, wie sie zunehmend als "Minilabor" zurAnalyse oder/und Synthese von Fluiden insbesondere in der Diagnostik zum Einsatz kommen, enthalten Reaktionssubstanzen in flüssiger oder/und fester Form, die während der Herstellung der Flusszellen in die Flusszellen einzubringen sind.
Zur Einbringung einer Trockenreagenz wird in einem Montageschritt, in welchem der für die Aufnahme der Trockenreagenz innerhalb der Flusszelle vorgesehene Bereich, z.B. eines Kanals oder einer Kammer, noch zugänglich ist, an die betreffende Stelle eine zu trocknende Reagenzflüssigkeit gebracht, d.h. eine Trägerflüssigkeit mit darin gelöster oder suspendierter Reagenz. Danach ist das gesamte, mit der Reagenzflüssigkeit nur stellenweise benetzte Bauteil der Flusszelle vor deren weiterer Montage einem Trocknungsprozess zu unterziehen, der zwecks Beschleunigung oftmals mit einer Wärmebehandlung verbunden ist oder zur Schonung der Reagenzien sowie im Hinblick auf Stabilität und Resuspendierungseigenschaften als Gefriertrocknungsprozess erfolgt. Nachteilig belegt das Bauteil, dessen Abmessungen diejenigen des nur zu trocknenden Bereichs zumeist weit überschreiten, in einer Trocknungskammer viel Raum. Ferner kann die Trocknungsbehandlung dieses Bauteil der Flusszelle selbst beeinträchtigen, insbesondere daran montierte empfindliche Komponenten. Vor allem kann die gebildete Trockensubstanz dann im Zuge der Fertigmontage der Flusszelle Beeinträchtigungen durch Luftkontakt, insbesondere Luftfeuchtigkeit, und Schweißwärme oder dem Einfluss bei der Montage verwendeter Klebemittel unterliegen, durch die entsprechende Kanalbereiche einer mikrofluidischen Flusszelle in vielen Fällen hermetisch zu verschließen sind. Ein Verfahren zum Einbringen einer Trockensubstanz in eine Flusszelle, wie es vorangehend beschrieben ist, geht z. B. aus derEP 2 198 964 B1 hervor. - Aus der
DE 10 2008 021 364 A1 geht eine Flusszelle hervor, bei der Ausnehmungen in einem Substrat durch eine Folienabdeckung verschlossen sind. Die Folienabdeckung trägt auf der Innenseite Trockenreagenzien, die den durch die abgedeckten Ausnehmungen gebildeten Hohlräumen zugewandt sind. - Eine aus der
WO 2012/154306 A1 bekannte Flusszelle weist einen Hohlraum auf, der nach Öffnung einer Luke oder Klappe zugänglich ist und in einem Boden eine Vertiefung für die Aufnahme eines quaderförmigen Trägerelements aufweist. Im Betrieb der Flusszelle ist die Luke bzw. Klappe zu verschließen. Eine Flusszelle mit den Merkmalen des Oberbegriffs des Anspruchs 1 geht jeweils aus derWO 2011/051735 A2 undWO 2008/134462 A1 hervor. - Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine neue mikrofluidische Flusszelle der eingangs genannten Art mit einer integrierten Trockensubstanz zu schaffen, die sich leichter als nach dem Stand der Technik ohne Beeinträchtigungen der Trockensubstanz oder anderer Bestandteile der Flusszelle durch die Fertigungsumgebung herstellen lässt.
- Diese Aufgabe wird mit den Merkmalen des Anspruchs 1 gelöst.
- Vorteilhaft kann die Bildung der Trockensubstanz durch Trocknung einer Reagenzflüssigkeit getrennt von der gesamten übrigen Flusszelle an einem Trägerelement erfolgen, das allein der Aufnahme der Trockensubstanz dient und die Einbringung der Trockensubstanz in die Flusszelle in einem abschließenden Montageschritt erlaubt. Beeinträchtigungen von Bauteilen der Flusszelle durch den Trocknungsprozess sowie Beeinträchtigungen der eingebrachten Trockenreagenz durch weitere Montagearbeiten an der Flusszelle entfallen. Das Trägerelement kann wesentlich kleinere Abmessungen als die Flusszelle aufweisen, wobei sich die Abmessungen des Trägerelements an der Größe des die Trockenreagenz tragenden Bereichs orientieren. Die Anhaftung der Trockensubstanz an ihrer Trägerfläche fördernde Beschichtungen können vorteilhaft auf die Trägerfläche des Trägerelements beschränkt bleiben, sodass Beeinträchtigungen von Schweiß- oder Klebeverbindungen durch solche Beschichtungen auszuschließen sind.
- Es versteht sich, dass der Hohlraum ein Kanalnetzwerk zum Transport, zur Analyse oder/und Synthese eines Fluids bilden kann. In die Flusszelle können mehrere Trägerelemente, ggf. mit unterschiedlichen Trockensubstanzen, einsetzbar sein.
- In einer Ausführungsform der Erfindung ist der Hohlraum durch eine Ausnehmung in einem plattenförmigen Substrat und eine die Ausnehmung verschließende, folienartig ausgebildete Abdeckung begrenzt. Der Durchgang ist in dem im Vergleich zur folienartigen Abdeckung dickeren Substrat gebildet.
- Es versteht sich, dass der Durchgang zweckmäßig zu einer Außenfläche der Flusszelle geführt ist, sodass die Einbringung der Trockensubstanz in die Flusszelle bei deren Herstellung in einem letzten Montageschritt erfolgen kann.
- Das Trägerelement ist vorzugsweise so gestaltet, dass es sich unter Verschluss des Hohlraums mit der Flusszelle lösbar und/oder unlösbar verbinden lässt. Vorzugsweise ist der Durchgang in seiner Form an die Form des Trägerelements angepasst. Fluiddichtheit kann insbesondere durch Einschweißen oder/und Einkleben erreicht werden, ggf. auch nur durch mechanisches Eindrücken des Trägerelements in den Durchgang.
- Entsprechend füllt zweckmäßig das Trägerelement den Durchgang zumindest im Querschnitt vollständig aus, wobei das Trägerelement und der Durchgang im Querschnitt vorzugsweise eine fertigungstechnisch vorteilhafte Kreisform aufweisen.
- In weiterer Ausgestaltung der Erfindung verjüngt sich das Trägerelement zu dem Hohlraum hin, während sich der Durchgang verengt. Insbesondere kann so allein durch mechanisches Eindrücken des Trägerelements in den Durchgang ein dichter Verschluss des Hohlraums in Form einer Presspassung erreicht werden.
- Vorzugsweise weist das Trägerelement einen von der Flusszelle nach außen vorstehenden Abschnitt auf, der als Griffteil zur Vereinfachung einer manuellen Handhabung oder automatisierten Montage dienen kann.
- Der vorstehende Abschnitt kann die Flusszelle in der Art eines Kragens außenseitig übergreifen, wobei durch den Kragen eine zusätzliche Abdichtung des Hohlraums erreicht werden kann.
- In einer weiteren Ausführungsform ist das Trägerelement in den Durchgang einschraubbar.
- Die Trägerfläche des Trägerelements kann bündig oder zurückversetzt zu einer angrenzenden Wandoberfläche des Hohlraums angeordnet sein. Alternativ steht das Trägerelement von der angrenzenden Wandoberfläche in den Hohlraum hinein vor.
- Zweckmäßig weist die Trägerfläche eine die Anhaftung der Trockensubstanz fördernde Strukturierung, Beschichtung oder/und Oberflächenmodifizierung auf.
- Das Trägerelement und die die Trockenreagenz tragende Trägerfläche besteht bevorzugt aus Kunststoff. Alternativ kann die Trägerfläche durch ein separates, mit dem übrigen Trägerelement verbundenes Oberflächenbauteil aus Glas, Silizium, Keramik oder Metall gebildet sein und mittels Schweißen oder Kleben aufgebracht werden. Dies ist vorteilhaft, wenn andere als durch eine Kunststoffoberfläche oder Beschichtung realisierbare Oberflächeneigenschaften für das Aufbringen der Trockenreagenz notwendig sind.
- Als Trockenreagenzien kommen unter anderem Salze, Puffer z.B. für die Zelllyse, magnetische und nicht magnetische Beads, Enzyme, Antikörper, DNA-Fragmente, Proteine, PCR-Reagenzien oder alternativ auch Zellen in Betracht.
- Die Erfindung wird nachfolgend anhand von Ausführungsbeispielen und der beiliegenden, sich auf diese Ausführungsbeispiele beziehenden Zeichnungen weiter erläutert. Es zeigen:
- Fig. 1
- eine die Herstellung von Flusszellen mit integrierter Trockensubstanz nach dem Stand der Technik erläuternde Darstellung,
- Fig. 2
- eine die Herstellung einer Flusszelle erläuternde Darstellung,
- Fig. 3
- eine Detaildarstellung der in
Fig. 2 gezeigten Flusszelle, - Fig. 4
- Ausführungsbeispiele für die Anordnung einer Trägerfläche eines Träger-elements innerhalb eines Hohlraums einer Flusszelle,
- Fig. 5
- weitere Ausführungsbeispiele für Trägerelemente,
- Fig. 6
- Ausführungsbeispiele für Trägeroberflächen von Trägerelementen,
- Fig. 7
- eine die Aufbringung einer Trockensubstanz auf Trägerelemente erläuternde Darstellung, und
- Fig. 8
- ein Ausführungsbeispiel für ein erfindungsgemäßes Trägerelement.
- Eine in
Fig. 1 ausschnittsweise gezeigte Flusszelle umfasst ein plattenförmiges Substrat 1 mit einer Ausnehmung 2, die unter Bildung eines Hohlraums 3 durch eine mit dem Substrat verklebte oder/und verschweißte Folie 4 abgedeckt ist. Der Hohlraum 3 ist Teil eines inFig. 1 im Übrigen nicht dargestellten Kanalnetzwerks der Flusszelle, insbesondere bildet er einen Kanalbereich, in dem eine z.B. Antikörper aufweisende Trockenreagenz 5 an einer Kanalwand 6 anhaftet. - Die Trockenreagenz 5 entstammt einer vor der Abdeckung der Ausnehmung 2 durch die Folie 4 in die einen Kanal- oder Kammerbereich der Flusszelle bildende Ausnehmung 2 durch Dispensierung eingebrachten Reagenzflüssigkeit 7. Zur Bildung der Trockenreagenz 5 aus der Reagenzflüssigkeit 7 wurde das gesamte Substrat 1 einer Wärmebehandlung oder/und Gefriertrocknung unterzogen.
- Aus
Fig. 2 geht ein Verfahren zur Einbringung einer Trockensubstanz, insbesondere einer Trockenreagenz 5, in eine Flusszelle hervor, bei welchem die Trockenreagenz 5 auf ein separates Trägerteil 8 aufgebracht wird. Ein Hohlraum 3 in einer Flusszelle, bei dem es sich z.B. um einen Bereich eines inFig. 3 gezeigten Kanals 9 handeln kann, weist eine Durchgangsöffnung 10 auf, in welche das Trägerelement 8 mit einem konischen, eine Trägerfläche 13 für die Trockenreagenz 5 aufweisenden Abschnitt 11 unter fluiddichtem Verschluss des Hohlraums 3 einsetzbar ist. Die Trägerfläche 13 bildet nach der Montage einen Teil der Wandfläche des Hohlraums 3. Ein im Hohlraum 3 transportiertes oder verarbeitetes Fluid kann so in Wechselwirkung mit der Trockenreagenz treten, insbesondere kann die Trockenreagenz von dem Fluid aufgelöst und resuspendiert werden. Andererseits können Bestandteile des Fluids wie Zellen oder Analyten mit der Trockenreagenz interagieren und/oder daran binden, indem das Fluid, ggf. mehrmals unter Wechsel der Transportrichtung, die Trägerfläche überströmt. - Das in die Durchgangsöffnung 10 eingepasste Trägerelement 8 kann mit dem Substrat verklebt oder verschweißt sein. Ein über die Durchgangsöffnung 10 hinaus auf der dem Hohlraum 3 abgewandten Seite des Substrats 1 vorstehender Abschnitt 12 des Trägerelements 8 dient als die Montage des Trägerelements 8 erleichternder Griffteil.
- Im Unterschied zu dem den Stand der Technik betreffenden Beispiel von
Fig. 1 braucht zur Bildung der Trockenreagenz 5 aus einer Reagenzflüssigkeit 7 nicht wie bei dem Beispiel vonFig. 1 das gesamte Substrat 1 einer Trocknung ausgesetzt zu werden, sondern lediglich das Trägerelement 8, was Platz in einer Trockenkammer spart. Die Hauptbauteile der Flusszelle, das Substrat 1 und die Folie 4 unterliegen keiner Beanspruchung durch den Trocknungsvorgang und die abschließend in die Flusszelle eingebrachte Trockensubstanz 5 keiner Beeinträchtigung durch eine nachträglich erfolgende Fertigstellung der Flusszelle unter Verschweißung von Substrat 1 und Folie 4. - Wie
Fig. 3 erkennen lässt, können in dem Kanal 9 mehrere Öffnungen für die Aufnahme von Trägerelementen 8 mit ggf. unterschiedlichen darauf angeordneten Trockenreagenzien 5 vorhanden sein. In dem Beispiel vonFig. 3 dient der mäanderförmige Kanal 9 der Rücklösung der durch die Trägerelemente 8 eingebrachten Trockenreagenzien 5 durch wechselseitiges Überspülen. - Das Substrat 1 und die Folie 4 der Flusszelle bestehen vorzugsweise aus einem Kunststoff, insbesondere beide aus dem gleichen Kunststoff, wobei hierfür z.B. PMMA, PC, PS, PEEK, PP, PE, COC und COP in Betracht kommen. Auch bei dem Trägerelement 8 handelt es sich vorzugsweise um ein Kunststoffteil, das insbesondere aus dem gleichen Kunststoff wie das Substrat besteht. Die Herstellung des Substrats und der Trägerelemente aus Kunststoff erfolgt zweckmäßig durch Spritzgießen.
- Wie sich
Fig. 4 entnehmen lässt, kann die die Trockenreagenz 5 aufnehmende Trägerfläche 13 des Trägerelements 8 zu der angrenzenden Wandfläche 14 des Hohlraums 3 bündig oder zu dieser Wandfläche zurückversetzt sein. GemäßFig. 4b kann das Trägerelement 8 mit der Trägerfläche 13 auch in den Hohlraum 3 hinein vorstehen. Dies kann vorteilhaft sein, um in einer in Mikrokanälen normalerweise vorliegenden laminaren Strömung lokal durch abrupte Änderung des Kanalquerschnitts Turbulenzen zu erzeugen und/oder um in dem Kanalbereich, in den das Trägerelement 8 eingebracht ist, durch Verkleinerung des Kanalquerschnitts eine Vergrößerung der Fließgeschwindigkeit des Fluids zu erreichen, z.B. zur Beschleunigung und Steuerung einer Rücklösung der Trockenreagenz. Ferner ergibt sich der Vorteil, dass bei einer automatisierten Montage des Trägerelements 8 Montage- und/oder Bauteiltoleranzen ausgleichbar sind. -
Fig. 5 zeigt weitere Ausführungsformen für Trägerelemente 8, die gemäßFig. 5a zylindrisch und gemäßFig. 5b zylindrisch mit einem das Substrat 1 hintergreifenden Kragen 15 ausgebildet sein können. -
Fig. 5c zeigt eine Ausführungsform eines zylindrischen, einen Kragen 13 aufweisenden Trägerelements 8 mit einem Außengewinde 16, das in ein Innengewinde in der betreffenden Durchgangsöffnung eingreift. Vorteilhaft lässt sich bei letzterer Ausführungsform das Trägerelement 8 von der Flusszelle lösen, sofern nicht zusätzlich zur Schraubverbindung auch noch eine Verklebung oder Verschweißung mit dem Substrat 1 erfolgt. Die Lösbarkeit kann vorteilhaft sein, wenn die Trockenreagenz nach Wechselwirkung mit dem Fluid wieder von der Flusszelle getrennt und einer weiteren Analyse unterzogen werden soll. - Ein von der Flusszelle lösbares Trägerelement 8 mit einem verlängerten Griffteil 17 zeigt
Fig. 5e . Das Trägerelement 8 lässt sich unter fluiddichtem Verschluss des Hohlraums 3 in die betreffende Durchgangsöffnung in dem Substrat 1 eindrücken. - Durch einen erhabenen Rand 25 gemäß
Fig. 5f am Substrat 1, dessen Dicke typischerweise zwischen 0,5 und 3 mm beträgt, lässt sich die Führung des Trägerelements 8 verbessern. -
Fig. 5d zeigt ein Trägerelement 8 mit einem konischen Abschnitt und einem aus einer Durchgangsöffnung vorstehenden Kragen 15, der gegen das Substrat 1 durch eine Ringdichtung 18 abgedichtet ist. - Die rotationssymmetrischen Trägerelemente können eine Markierung aufweisen, die es ermöglicht, die Trägerelemente in einer gewünschten Drehposition in den Durchgang einzuführen.
- Aus
Fig. 6 gehen Ausführungsbeispiele von Trägerelementen 8 mit unterschiedlich gestalteten Trägerflächen 13 hervor, wobeiFig. 6a ein Trägerelement mit einer Vertiefung 19 für die Aufnahme einer Trockenreagenz 5 aufweist. Bei dem Ausführungsbeispiel vonFig. 6b ist eine Trägerfläche 13 mit einer Vielzahl von Aufnahmevertiefungen in Form von kreuzartig angeordneten Rillen 20 mit typischen Querschnittsabmessungen von 0,01 x 0,01 mm2 bis 1 x 1 mm2 für eine Trockenreagenz gebildet. Vorteilhaft lässt sich dadurch die Oberfläche der Trägerfläche 13 auf einfache Art und Weise vergrößern, sodass entweder eine größere Menge an Trockenreagenz 5 bei gleichen Abmessungen des Trägerelements 8 aufgenommen werden oder/und die Trockensubstanz homogener als ein großer Tropfen auf einer glatten Trägerfläche eintrocknen kann und/oder die durch die Aufnahmevertiefungen 20 gebildete Mikrostruktur der Trägerfläche 13 beim Überströmen durch das Fluid Turbulenzen erzeugen kann, welche das Rücklöseverhalten positiv beeinflussen. Die Rillen könnten alternativ auch die Form konzentrischer Kreise aufweisen.Fig. 6c zeigt eine Aufnahmefläche mit einem auf die Trägerfläche durch Klemmen, Kleben oder Schweißen aufgebrachten porösen Element 21, in dem sich eine Trockensubstanz absetzen kann. Vorteilhaft bildet das poröse Element 21 eine vergrößerte Oberfläche für die Aufnahme der Trockenreagenz 5. -
Fig. 6d weist ein Trägerelement mit einer behandelten Trägerfläche auf, wobei es sich bei der Behandlung z.B. um eine nasschemische Behandlung, eine Plasmabehandlung oder Koronabehandlung handeln kann. Alternativ kann die Behandlung z.B. mittels Plasmapolymerisation oder mittels PVD-Prozess zu einer Beschichtung 22 führen, z.B. einer Glas- oder Metallbeschichtung. - Ein in
Fig. 6e gezeigtes Trägerbauteil ist zweiteilig mit einem gesonderten Oberflächenbauteil 26 ausgebildet. Das die Trägeroberfläche bildende Oberflächenbauteil 26 besteht z.B. nicht wie vorzugsweise das übrige Trägerbauteil aus einem Kunststoff, sondern aus Glas, Silizium, Metall oder Keramik. Wenn die Funktionalisierung, d.h. die Aufbringung der Trockenreagenz auf die Trägerfläche, solche Materialien erfordert, wie das z.B. bei Protein- (z.B. Antikörper) oder Nukleinsäurebasierten Analysetechnologien der Fall ist, so beschränkt sich die Verwendung dieser Materialien, die oft deutlich teurer als Kunststoff sind, vorteilhaft nur auf einen Oberflächenbereich, wobei Abmessungen von 0,5 x 0,5 mm bis 5 x 5 mm und Dicken zwischen 0,1 und 1 mm in Betracht kommen. Das Oberflächenbauteil 26 kann auf dem übrigen Trägerbauteil mittels Klemmen oder durch Kleben oder Schweißen befestigt werden. - Zum Aufbringen der Trockensubstanz 5 lässt sich eine Vielzahl von Trägerelementen 8 gleichzeitig bearbeiten, indem die Trägerelemente 8 im Schritt 7a auf einem Reihen von Löchern 23 aufweisenden Trägertablet 24 angeordnet werden. Im nächstfolgenden Verfahrensschritt 7b wird gleichzeitig auf allen Trägerflächen 13 der Trägerelemente 8 eine die Haftung einer Substanz verbessernde Schicht 22 erzeugt. Die Beschichtung kann dabei auch andere, nicht zum Aufbringen der Trockenreagenz 5 vorgesehene Oberflächenbereiche des Trägerelements 8 bedecken. In den Verfahrensschritten 7c und 7d erfolgt nach Auftragen einer Reagenzflüssigkeit 7 auf die Schichten 22 eine Trocknungsbehandlung, sodass sich auf den Schichten 22 die daran anhaftende Trockensubstanz 5 absetzt. Schließlich können im Schritt 7e die fertiggestellten, mit einer Trockensubstanz 5 versehenen Trägerelemente 8 zur Verarbeitung entnommen werden.
- Es wird nun auf
Fig. 8 Bezug genommen, wo ein weiteres Ausführungsbeispiel für ein Trägerelement 8 gezeigt ist. - Das Trägerelement 8 weist eine Trägerfläche für eine Trockensubstanz 5 auf, die durch eine Membran 27 gebildet ist. Diese Membran kann einstückig mit dem übrigen Trägerelement 8 verbunden oder durch ein separates, mit dem übrigen Trägerelement verbundenes Bauteil gebildet sein, das vorzugsweise aus dem gleichen Kunststoff wie das übrige Trägerelement besteht.
- Bei Transparenz der Membran 27, die eine in dem Trägerelement 8 gebildete Durchgangsöffnung 28 an einem Ende abschließt, besteht die Möglichkeit, durch optische Detektion die Wechselwirkung des Fluids mit der Trockensubstanz 5 gemäß
Fig. 8b zu kontrollieren.
Ferner besteht gemäßFig. 8c die Möglichkeit, durch pneumatische oder mechanische Druckbeaufschlagung die Membran 27 konvex oder konkav zu formen. Insbesondere durch alternierende Aus- und Einwölbung der Membran 27 lässt sich die Wechselwirkung zwischen der Trockensubstanz und dem Fluid stimulieren und sowohl eine verbesserte Resuspendierung von Trockensubstanzen als auch verbesserte Anlagerung von Bestandteilen des Fluids auf Trockensubstanzen, z.B. im Fall von Antikörpern, erreichen.
Claims (11)
- Mikrofluidische Flusszelle, mit einer innerhalb der Flusszelle in einem Hohlraum (3) angeordneten Trockensubstanz (5) zur Wechselwirkung mit einem in dem Hohlraum (3) befindlichen Fluid, wobei der Hohlraum (3) durch eine Ausnehmung (2) in einem Substrat (1) und eine die Ausnehmung (2) verschließende Abdeckung (4) begrenzt ist und wobei die Flusszelle ein separates Trägerelement (8) mit einer zur Anordnung angrenzend an den Hohlraum (3) vorgesehenen Trägerfläche (13) für die Trockensubstanz (5) umfasst, wobei in den Hohlraum (3) ein zu einer Außenfläche der Flusszelle geführter, nach außen offener Durchgang (10) mündet und das separate Trägerelement (8) von außen unter Verschluss des Hohlraums (3) und unter Anordnung der Trägerfläche (13) angrenzend an den Hohlraum (3) in den Durchgang (10) einsetzbar ist,
dadurch gekennzeichnet,
dass die Trägerfläche (13) für die Trockensubstanz (5) durch eine Membran (27) gebildet ist, welche eine Durchgangsöffnung (28) in dem Trägerelement (8) zu dem Hohlraum (3) hin abschließt. - Flusszelle nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet,
dass der Hohlraum (3) ein Kanalnetzwerk (9) zum Transport, zur Analyse oder/und Synthese eines Fluids bildet und dass ggf. mehrere solcher Trägerelemente (8) in mehrere Durchgänge (10) einsetzbar sind. - Flusszelle nach Anspruch 1 oder 2,
dadurch gekennzeichnet,
dass die Ausnehmung (2) in einem plattenförmigen Substrat (1) gebildet und durch eine folienartige Abdeckung (4) verschlossen ist und dass der Durchgang (10) in dem plattenförmigen Substrat gebildet ist. - Flusszelle nach Anspruch 3,
dadurch gekennzeichnet,
dass der Durchgang (10) zu einer Plattenfläche des plattenförmigen Substrats (1) geführt ist. - Flusszelle nach einem der Ansprüche 1 bis 4,
dadurch gekennzeichnet,
dass sich das Trägerelement (8) unter fluiddichtem Verschluss des Hohlraums (3) mit der Flusszelle lösbar oder/und unlösbar verbinden lässt. - Flusszelle nach einem der Ansprüche 1 bis 5,
dadurch gekennzeichnet,
dass das Trägerelement (8) den Durchgang (10) zumindest im Querschnitt vollständig ausfüllt, wobei vorzugsweise das Trägerelement (8) und der Durchgang (10) im Querschnitt kreisförmig sind und sich das Trägerelement (8) zu dem Hohlraum (3) hin verjüngt und der Durchgang (10) zu dem Hohlraum hin verengt. - Flusszelle nach einem der Ansprüche 1 bis 6,
dadurch gekennzeichnet,
dass das Trägerelement (8) einen von der Flusszelle nach außen vorstehenden Abschnitt (12;15;17) aufweist, wobei ggf. der Abschnitt die Flusszelle außenseitig in der Art eines Kragens (15) hintergreift. - Flusszelle nach einem der Ansprüche 1 bis 7,
dadurch gekennzeichnet,
dass die Trägerfläche (13) des Trägerelements (8) bündig oder zurückversetzt zu einer angrenzenden Wandoberfläche (14) des Hohlraums (3) angeordnet ist oder dass das Trägerelement (8) von der angrenzenden Wandfläche (14) des Hohlraums (3) in den Hohlraum (3) hinein vorsteht. - Flusszelle nach einem der Ansprüche 1 bis 8,
dadurch gekennzeichnet,
dass die Trockensubstanz an der Trägerfläche (13) anhaftet und die Trägerfläche (13) vorzugsweise eine die Anhaftung fördernde Strukturierung (19-21), Beschichtung (22) oder/und Oberflächenmodifizierung aufweist. - Flusszelle nach einem der Ansprüche 1 bis 9,
dadurch gekennzeichnet,
dass die Trägerfläche (13) für die Trockensubstanz (5) durch ein separates, mit dem übrigen Trägerelement (8) verbundenes, im Material von dem übrigen Trägerelement (8) verschiedenes Bauteil (21;26) gebildet ist. - Flusszelle nach einem der Ansprüche 1 bis 10,
dadurch gekennzeichnet,
dass die Membran (27) transparent ist.
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