EP3349741A1 - Zusammensetzung mit antiviralem effekt - Google Patents

Zusammensetzung mit antiviralem effekt

Info

Publication number
EP3349741A1
EP3349741A1 EP16767247.6A EP16767247A EP3349741A1 EP 3349741 A1 EP3349741 A1 EP 3349741A1 EP 16767247 A EP16767247 A EP 16767247A EP 3349741 A1 EP3349741 A1 EP 3349741A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
pharmaceutical composition
viral infection
benzocaine
benzalkonium chloride
tyrothricin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP16767247.6A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Richard Ammer
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Medice Arzneimittel Puetter & Co KG GmbH
Original Assignee
Medice Arzneimittel Puetter & Co KG GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Medice Arzneimittel Puetter & Co KG GmbH filed Critical Medice Arzneimittel Puetter & Co KG GmbH
Publication of EP3349741A1 publication Critical patent/EP3349741A1/de
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/14—Quaternary ammonium compounds, e.g. edrophonium, choline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/235—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids having an aromatic ring attached to a carboxyl group
    • A61K31/24—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids having an aromatic ring attached to a carboxyl group having an amino or nitro group
    • A61K31/245—Amino benzoic acid types, e.g. procaine, novocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising rothricin, benzalkonium chloride, and / or benzocaine for use in anti-viral therapy or in the treatment of a viral infection.
  • Viruses and bacteria are the causative agents of very common acute pharyngitis.
  • Dorithricin ® throat tablets Classic These are usually used with the antiseptic and antibacterial agents contained therein for clinically effective relief of the typical pharyngitis symptoms swallowing pain and pharyngeal redness.
  • Tyrothricin is a mixture of various antibacterial linear and cyclic polypeptides from the groups of gramicidines and tyrocidines. They are endotoxin-like formed by the anaerobic spore-forming Bacillus aneurinolyticus (Syn. Bacillus brevis). The range of action includes predominantly Gram-positive bacteria, but also some Gram-negative bacteria and various types of fungi, such as Candida albicans. Tyrothricin contains 50 to 70% tyrocidines and 25 to 50% gramicidines, which together make up at least 85% of the active substance. In addition, other structurally related polypeptides are present in small quantities.
  • Benzalkonium chloride is a mixture of alkylbenzyldimethylammonium chlorides whose alkyl moiety consists of C8 to C18 chains. It generally has disinfecting and preserving effect and is effective against bacteria, fungi, yeasts and algae (to a lesser extent also antiviral).
  • Benzocaine (4-Aminobenzoeklathylester) is a local anesthetic and is mainly for local pain therapy of the skin and mucous membranes, such as in the mouth and throat area, as well as medicines for colds, antitussive preparations, painkillers such as solutions or lozenges in cervical, gastric and Teething problems, astringents, application.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising rothricin, benzalkonium chloride, and / or benzocaine for use in anti-viral therapy or in the treatment of a viral infection.
  • the composition comprises all three active ingredients in combination.
  • Figure 1. - 4 Percent inhibition of the viral activity of viruses HR14, H1N1 and RSV by variously diluted solutions of Dorithricin®.
  • Fig.l synergistic, antiviral effect of all 3 active ingredients tyrothricin, benzalkonium chloride and benzocaine in combination in increasing dilution. Synergistic effect is demonstrated in comparison to Fig. 2-4.
  • Fig.2 weak antiviral effect of tyrothricin alone in increasing dilution.
  • Fig.3 very weak antiviral effect of benzalkonium chloride alone in increasing dilution.
  • Tyrothricin as an antibiotic is classified as active against bacteria, benzalkonium chloride and benzocaine are classified as analgesics for pain acting (1-4).
  • the present invention thus relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising
  • composition of the present invention may comprise, consist of, or consist essentially of the above-mentioned active ingredients.
  • the phrase "consists essentially of” means that the pharmaceutical composition contains these ingredients as effective ingredients. However, it may further contain one or more solvents, adjuvants, etc., which, while necessary for the preparation of a pharmaceutical composition, do not or do not significantly contribute to the pharmacological activity.
  • pharmaceutical composition as used herein includes in particular peroral dosage forms, for example solid, semi-liquid or liquid compositions for oral administration In a preferred embodiment, the composition is in the form of a tablet, in particular a lozenge.
  • solid oral dosage forms such as powder or capsules.
  • limited additions of magnesium stearate or calcium behenate can be used as lubricant and of starch as disintegrant.
  • aqueous lactose solution, ethanol and suitable concentrations of starch pastes may be used.
  • Common excipients for preparing a throat tablet include, for example, sorbitol (E 420), talc, sucrose fatty acid esters, saccharin sodium dihydrate, mint oil, povidone 25, and carmellose sodium.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain parenteralia, i. liquid dilutions for injection, as well as liquid liniments and ointments, suppositories, eye drops, nose drops.
  • the composition is used to treat an infection caused by rhinoviruses, influenza viruses, and / or pneumoviruses.
  • the pharmaceutical composition finds use in a method of treating a viral infection, wherein the viral infection is by HRV14 (human rhinovirus type 14), RSV (human respiratory syncytial virus), and / or H1N1 (influenza A virus H1N1) is caused.
  • HRV14 human rhinovirus type 14
  • RSV human respiratory syncytial virus
  • H1N1 influenza A virus H1N1
  • a single dose of the pharmaceutical composition contains about 0.5 mg of tyrothricin, about 1.0 mg of benzalkonium chloride and / or about 1.5 mg of benzocaine, and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • the term "approximately” in this context means a range of ⁇ 50%, preferably ⁇ 20%, most preferably ⁇ 10%, based on the active substance indicated above.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is administered in a daily dose of about 2-4 mg of tyrothricin, 4-8 mg of benzalkonium chloride and 6-12 mg of benzocaine.
  • Viruses and bacteria are the causative agents of very common acute pharyngitis.
  • This disease also known as pharyngeal catarrh, is an inflammation of the pharyngeal mucosa and underlying pharyngeal structures, accompanied by the typical symptoms of sore throat, scratching, burning, dryness in the throat and redness of the pharyngeal mucosa (1).
  • acute pharyngitis requires symptomatic treatment to alleviate the pain.
  • Antibiotic therapy is less frequently indicated and should only be used in 10-15% of patients with streptococcal pharyngitis (1-3), or in cases where long-term effects such as haemorrhagic fever are to be prevented.
  • Throat painkillers such as Dorithricin ® have repeatedly proven clinically useful in symptomatic treatment (4).
  • the combination of the antibacterial and analgesic active ingredients tyrothricin, benzalkonium chloride and benzocaine effectively reduces typical pharyngitis symptoms (4).
  • Soluble Dorithricin ® tablets were tested in various dilution stages for viruses that cause respiratory infections in humans.
  • One tablet contains tyrothricin 0.5 mg, benzalkonium chloride 1.0 mg, and benzocaine 1.5 mg.
  • a tablet of Dorithricin ® was first pulverized, then mixed with 1 ml of dimethyl sulfoxide (DMSO) dissolved with distilled water, diluted to 1: 100, and sterile filtered (0.45 ⁇ filter). From the filtrate adjusted to pH 7.4 dilution series were prepared by means of complete nutrient medium in log2 or log10 stages.
  • the solvent (DMSO) prepared according to the procedure described was used as the solvent control.
  • test solutions were subjected to a vitality test in the cell culture in a first step.
  • test solutions were added in all dilution stages and the solvent control to growing virus-sensitive HeLa, MDCK and HEp-2 cells and for a total of
  • MTT 4,5-dimethylthiazol-2-y
  • the optical density of the cell culture supernatants was determined photometrically at a wavelength of 570 nm. A higher optical density indicates a higher number of vital cells.
  • a possible change in cell morphology was assessed microscopically on day 3 (HeLa, MDCK) and day 6 (HEp-2) after substance addition.
  • OD values of the test sample batches were normalized to the OD values of the untreated controls defined as 100% vitality and reported as percentages.
  • IC 50 mean inhibitory concentration across several parallel samples in dose response curves of the test samples could be determined, up to the concentration, which had no test substance-related impairment of cell vitality and thus suitable for use in the antiviral tests.
  • the antiviral activity was tested against HRV14, FluA and RSV.
  • the virus-sensitive cells were infected with the corresponding viruses in a mean infection dose (MOI) between 0.0004 and 0.0008 (HeLa with HRV14, MDCK with FluA, HEp-2 with RSV).
  • MOI mean infection dose
  • the virus-infected cells were treated 1 h after infection with the test solutions in physiological substance concentrations in the semipermeable agarose supernatant.
  • test solutions were used with drug concentrations corresponding to the dilution of 1: 400 and higher of a Dorithricin ® tablet (Table 1). At these concentrations of active substance, no vitality-reducing effects on the HeLa, MDCK and HEp2 cells used could be detected in the vitality test.
  • the 1: 100 and 1: 400 diluted Dorithricin ® drug combination exhibited significant antiviral activity and markedly reduced the plaques of RNA viruses HRV14, HlNl and RSV by 97% and 68%, 53% and 74, respectively %.
  • This effect on PIa formation decreased with increasing dilution. Only at high dilutions was an effect no longer detectable: with HRV14 from 1: 3200, with RSV from 1: 6400 and with HlNl from 1: 64000.
  • the relative inhibitory effect depending on the Dorithricin ® -Verkowsgrad is shown in Figure 1.
  • the ribavirin (RIBA) used for the control produced a 5.3% viruspiaque reduction for HRV14 (RIBA 10 ⁇ g / ml), 96% for FluA (RIBA 3 ⁇ g / ml) and 97% for RSV (RIBA 1 ⁇ g) / ml).
  • the pharmaceutical composition of the present invention additionally exhibits pronounced, dose-dependent and synergistic antiviral properties against the viruses RSV, HRV14 and H1N1.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft eine pharmazeutische Zusammensetzung umfassend Tyrothricin, Benzalkoniumchlorid, und/oder Benzocain zur Verwendung in der anti-viralen Therapie bzw. in der Behandlung einer Virus-Infektion.

Description

Zusammensetzung mit antiviralem Effekt
Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft eine pharmazeutische Zusammensetzung umfassend Ty- rothricin, Benzalkoniumchlorid, und/oder Benzocain zur Verwendung in der anti-viralen Therapie bzw. in der Behandlung einer Virus-Infektion.
Hintergrund der Erfindung
Viren und Bakterien sind die Erreger der sehr häufig auftretenden akuten Pharyngitis. Zur Behandlung derselben sind bereits seit Jahrzehnten Medikamente auf dem Markt verfügbar, beispielsweise Dorithricin® Halstabletten Classic. Diese werden üblicherweise mit den darin enthaltenen antiseptischen und antibakteriellen Wirkstoffen zur klinisch effektiven Linderung der typischen Pharyngitis-Symptome Schluckschmerzen und Rachenschleimhautrötung eingesetzt.
Tyrothricin ist ein Gemisch verschiedener antibakteriell wirksamer linearer und cyclischer Polypeptide aus den Gruppen der Gramicidine und Tyrocidine. Sie werden endotoxinartig durch den anaeroben sporenbildenden Bacillus aneurinolyticus (Syn. Bacillus brevis) gebildet. Der Wirkungsbereich umfasst vorwiegend grampositive Bakterien, aber auch einige gramnegative Bakterien und verschiedene Pilzarten, wie beispielsweise Candida albicans. Tyrothricin enthält 50 bis 70 % Tyrocidine und 25 bis 50 % Gramicidine, die insgesamt mindestens 85 % des Wirkstoffs ausmachen. Daneben kommen in kleinen Mengen weitere strukturverwandte Polypeptide vor.
Benzalkoniumchlorid ist ein Gemisch von Alkylbenzyldimethylammoniumchloriden, deren Alkylteil aus C8- bis C18-Ketten besteht. Es besitzt allgemein desinfizierende und konservie- rende Wirkung und wirkt gegen Bakterien, Pilze, Hefen und Algen (in geringem Maße auch antiviral).
Benzocain (4-Aminobenzoesäureethylester) ist ein Lokalanästhetikum und findet hauptsächlich zur lokalen Schmerztherapie der Haut und Schleimhaut, wie beispielsweise im Mund- und Rachenbereich, ebenso in Arzneimitteln gegen Erkältungskrankheiten, hustenstillende Zubereitungen, schmerzstillende Mittel wie Lösungen oder Lutschtabletten bei Hals-, Magen- und Zahnungsbeschwerden, Adstringenzien, Anwendung.
Zusammenfassung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft eine pharmazeutische Zusammensetzung umfassend Ty- rothricin, Benzalkoniumchlorid, und/oder Benzocain zur Verwendung in der anti-viralen Therapie bzw. in der Behandlung einer Virus-Infektion. In einer bevorzugten Ausführungsform umfasst die Zusammensetzung alle drei genannten Wirkstoffe in Kombination.
Kurze Beschreibung der Figuren
Abbildung 1. - 4.: Prozentuale Hemmung der viralen Aktivität der Viren HR14, H1N1 und RSV durch verschieden verdünnte Lösungen von Dorithricin®.
Abb.l.: synergistische, antivirale Wirkung von allen 3 Wirkstoffen Tyrothricin, Benzalkoniumchlorid und Benzocain in Kombination in aufsteigender Verdünnung. Synergistische Wirkung belegt im Vergleich zu Abb. 2-4.
Abb.2.: schwache antivirale Wirkung von Tyrothricin alleine in aufsteigender Verdünnung.
Abb.3.: sehr schwache antivirale Wirkung von Benzalkoniumchlorid alleine in aufsteigender Verdünnung.
Abb.4.: sehr schwache antivirale Wirkung von Benzocain alleine in aufsteigender Verdünnung. Ausführliche Beschreibung der Erfind
In einer ln-vitro- Studie wurde die dosisabhängige antivirale Wirkung der oben genannten Wirkstoffe gegen die humanpathogenen Viren RSV, HRV14 und HlNl untersucht. Die Daten dieser Studie demonstrieren, dass eine aus den Wirkstoffen hergestellte und auf eine hohe physiologische Wirkstoffkonzentration eingestellte Lösung die virale Aktivität um 68,4% (HRV14), 52,7% (HlNl) bzw. 74,3% (RSV) reduziert. Erst bei sehr hoher Wirkstoffverdünnung war der antivirale Effekt nicht mehr nachweisbar. Eine pharmazeutische Zusammensetzung umfassend Tyrothricin, Benzalkoniumchlorid und Benzocain zeichnet sich somit durch ausgeprägte, dosisabhängige und synergistische antivirale Eigenschaften gegen die Viren RSV, HRV14 und HlNl aus.
Diese Beobachtung ist neu und unerwartet, weil die aktiven Wirkstoffe
Tyrothricin als Antibiotikum als aktiv gegen Bakterien wirkend eingestuft wird, Benzalkoniumchlorid und Benzocain als Analgetika gegen Schmerzen wirkend klassifiziert sind (1-4).
Die vorliegende Erfindung betrifft also eine pharmazeutische Zusammensetzung umfassend
Tyrothricin,
Benzalkoniumchlorid, und/oder
Benzocain
zur Verwendung in der anti-viralen Therapie bzw. in der Behandlung einer Virus-Infektion.
Die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann die oben genannten Wirkstoffe umfassen, aus diesen bestehen oder im Wesentlichen aus diesen bestehen. Die Formulierung "besteht im Wesentlichen aus" bedeutet, dass die pharmazeutische Zusammensetzung diese Bestandteile als wirksame Bestandteile enthält. Sie kann jedoch weiterhin ein oder mehrere Lösungsmittel, Hilfsstoffe etc. enthalten, die zwar zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung notwendig sind, jedoch nicht oder nicht wesentlich zur pharmakologischen Wirksamkeit beitragen. Der Begriff„pharmazeutische Zusammensetzung" wie hierin verwendet, umfasst insbesondere perorale Darreichungsformen, beispielsweise feste, halbflüssige oder flüssige Zusammensetzungen zur oralen Verabreichung. In einer bevorzugten Ausführungsform liegt die Zusammensetzung in Form einer Tablette, insbesondere einer Lutschtablette bzw. Halstablette vor.
Alternativ sind jedoch auch andere Darreichungsformen möglich, beispielsweise feste perorale Darreichungsformen wie Pulver oder Kapseln. Hierbei können begrenzte Zusätze von Mag- nesiumstearat oder Calciumbehenat als Gleitmittel und von Stärke als Zerfallsbeschleuniger verwendet werden. Im Falle der Granulation können wässrige Lactose- Lösung, Ethanol und geeignete Konzentrationen von Stärkekleistern eingesetzt werden.
Übliche Hilfsstoffe zur Herstellung einer Halstablette umfassen beispielsweise Sorbitol (E 420), Talkum, Saccharose- Fettsäureester, Saccharin-Natrium-Dihydrat, Minzöl, Povidon 25, und Carmellose-Natrium.
Neben peroralen Arzneiformen kann die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung Parenteralia, d.h. flüssige Verdünnungen zur Injektion sowie flüssige Einreibungen sowie Salben, Suppositorien, Augentropfen, Nasentropfen umfassen.
In einer bevorzugten Ausführungsform wird die Zusammensetzung zur Behandlung einer durch Rhinoviren, Influenzaviren, und/oder Pneumoviren hervorgerufenen Infektion verwendet.
In einer Ausführungsform findet die pharmazeutische Zusammensetzung Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung einer viralen Infektion, wobei die virale Infektion durch HRV14 (humanes Rhinovirus Typ 14), RSV (humanes Respiratory-Syncytial-Virus), und/oder H1N1 (Influenza-A-Virus H1N1) hervorgerufen wird.
Bevorzugt enthält eine Einzeldosis der pharmazeutischen Zusammensetzung ungefähr 0,5 mg Tyrothricin, ungefähr 1,0 mg Benzalkoniumchlorid und/oder ungefähr 1,5 mg Benzocain sowie einen oder mehrere pharmazeutisch verträgliche Hilfsstoffe. Der Begriff "ungefähr" be- deutet in diesem Zusammenhang eine Variationsbreite von ± 50%, bevorzugt ± 20%, am meisten bevorzugt ± 10% bezogen auf die oben angegebene Wirkstoff masse.
Die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung wird in einer täglichen Dosis von ungefähr 2-4 mg Tyrothricin, 4-8 mg Benzalkoniumchlorid und 6-12 mg Benzocain verabreicht.
Die vorliegende Erfindung wird nunmehr unter Bezugnahme auf die nachfolgenden Ausführungsbeispiele erläutert, in denen die Effekte der erfindungsgemäßen Zusammensetzung dargelegt werden.
Ausführungsbeispiele
1 Einleitung
Viren und Bakterien sind die Erreger der sehr häufig auftretenden akuten Pharyngitis. Bei dieser auch als Rachenkatarrh bekannten Erkrankung handelt es sich um eine Entzündung der Rachenschleimhaut und der darunterliegenden pharyngealen Strukturen, die mit den typischen Symptomen Schluckschmerzen, Kratzen, Brennen, Trockenheitsgefühl im Hals und Rötung der Rachenschleimhaut einhergeht (1).
Vorrangig erfordert die akute Pharyngitis eine symptomatische Behandlung zur Linderung der Schmerzen. Die antibiotische Therapie ist seltener indiziert und sollte nur bei den 10-15% der Patienten angewendet werden, die von einer Streptokokken-Pharyngitis betroffen sind (1-3), bzw. in den Fällen, in denen Spätfolgen wie hämorrhagisches Fieber verhindert werden sollen. Halsschmerztabletten wie Dorithricin® haben sich bei der symptomatischen Behandlung wiederholt klinisch bewährt (4). Die darin enthaltene Kombination aus den antibakteriellen und analgetischen Wirkstoffen Tyrothricin, Benzalkoniumchlorid und Benzocain lindert effektiv die typischen Pharyngitis-Beschwerden (4).
Interessanterweise wirken einzelne Bestandteile dieser Kombination nicht nur antibakteriell, sondern wie wir hier beschreiben auch antiviral. Fraglich, ob von der in Dorithricin® enthalte- nen Wirkstoffkombination als Ganze eine antivirale Wirkung ausgeht. Vor diesem Hintergrund wurde die im Folgenden vorgestellte Untersuchung durchgeführt mit dem Ziel, die dosisabhängige antivirale Wirkung von Dorithricin® Halstabletten Classic gegen humanpathogene Viren in vitro zu untersuchen.
2 Material und Methoden
Getestet wurden in Lösung gebrachte Dorithricin®-Tabletten (MEDICE, Iserlohn, Deutschland) in verschiedenen Verdünnungsstufen auf Viren, die beim Menschen Infektionen der Atemwege hervorrufen. Eine Tablette enthält Tyrothricin 0,5 mg, Benzalkoniumchlorid 1,0 mg, und Benzocain 1,5 mg. Es handelte sich hierbei um folgende Viren: humanes Rhinovirus Typ 14 (HRV14, unbehülltes RNA-Virus), das Respiratory Syncytial Virus (RSV, Paramyxovirus, behüll- tes RNA-Virus) und das Influenza-A-Virus H1N1 (FluA, H1N1, Orthomyxovirus, behülltes RNA- Virus).
Zur Herstellung einer Prüflösung wurde eine Dorithricin®-Tablette zunächst pulverisiert, dann mit 1 ml Dimethylsulfoxid (DMSO) angelöst, mit destilliertem Wasser auf 1:100 verdünnt und sterilfiltriert (0,45 μηΊ-Filter). Von dem auf pH 7,4 eingestellten Filtrat wurden mittels Komplettnährmedium in log2- bzw. loglO-Stufen Verdünnungsreihen hergestellt. Das gemäß der beschriebenen Prozedur aufbereitete Lösungsmittel (DMSO) wurde als Lösungsmittelkontrolle verwendet.
Um Artefakte aufgrund von vitalitäts- bzw. stoffwechselreduzierenden Effekten der Prüflösungen auf die Zellen für die antivirale Testung auszuschließen, wurden in einem ersten Schritt die Prüflösungen einem Vitalitätstest in der Zellkultur unterzogen. In Parallelansätzen wurden die Prüflösungen in sämtlichen Verdünnungsstufen sowie die Lösungsmittelkontrolle zu wachsenden virussensitiven HeLa-, MDCK- und HEp-2-Zellen gegeben und für insgesamt
3 Tage (HeLa, MDCK) bzw. 6 Tage (HEp-2) bei 37°C und 5% C02 kultiviert. Als weitere Kontrolle wurden nur mit dem Zellkulturmedium kultivierte Zellen in der Zellkultur mitgeführt. Die Beurteilung möglicher vitalitätsreduzierender Effekte erfolgte an den Tagen 1, 2, 3 und 6 nach Substanzgabe mittels des MTT-Tests. Dazu wurden die behandelten Zellen für 45 Minuten (HEp-2, HeLa) bzw. für 60 Minuten mit der MTT-Lösung inkubiert. Die Reduktion des da- rin enthaltenen gelben Farbstoffs 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-y)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid (MTT) in blau-violettes Formazan kann nur von intakten, vitalen Zellen durchgeführt werden und ist ein Nachweis für Zellvitalität. Nach Solubilisierung der Formazankristalle in 1% DMSO wurde die optische Dichte der Zellkulturüberstände photometrisch bei einer Wellenlänge von 570 nm bestimmt. Eine höhere optische Dichte deutet auf eine höhere Anzahl von vitalen Zellen hin. Des Weiteren wurde eine eventuelle Veränderung der Zellmorphologie am Tag 3 (HeLa, MDCK) und Tag 6 (HEp-2) nach Substanzzugabe mikroskopisch beurteilt. Die OD- Werte der Prüfmusteransätze wurden auf die als 100% Vitalität definierten OD-Werte der unbehandelten Kontrollen normiert und entsprechend als Prozentwerte angegeben. Somit konnte die mittlere inhibitorische Konzentration (IC50) über mehrere Parallelproben in Dosiswirkungskurven der Prüfmuster bestimmt werden, bis hin zu der Konzentration, die keinerlei testsubstanzbedingte Beeinträchtigung der Zellvitalität aufwies und sich somit für den Einsatz in den antiviralen Prüfungen eignete.
Im Anschluss an die Vitalitätsprüfungen erfolgte die Testung der antiviralen Aktivität gegen HRV14, FluA und RSV. Dazu wurden die virussensitiven Zellen mit den entsprechenden Viren in einer mittleren Infektionsdosis (MOI) zwischen 0,0004 und 0,0008 infiziert (HeLa mit HRV14; MDCK mit FluA; HEp-2 mit RSV). Die virusinfizierten Zellen wurden 1 h post infectio- nem mit den Prüflösungen in physiologischen Substanzkonzentrationen im semipermeablen Aga roseüberstand behandelt. An Tag 2 (FluA), Tag 3 (HRV14) und Tag 5 (RSV) nach Testansatz wurden im Plaquereduktionsassay (plaque forming units/ml; PFU/ml) die im Zellrasen gebildeten Virusplaques mittels eines AID EliSpot Reader Systems (Autoimmun Diagnostika GmbH, Strassberg, Deutschland) ausgezählt und als prozentuale Hemmung gegenüber der als vollständige Virusinfektion definierten Plaquezahl im keinen Wirkstoff enthaltenden Kontrollansatz ausgewertet.
Zur Verifizierung des beschriebenen Testverfahrens wurde neben den Virus- und Negativkontrollen der antivirale Wirkstoff Ribavirin Virazole® gegen RNA-Viren als laborinterne Kontrollen mitgeführt. Die Effektivität der Referenzsubstanzen konnte im Testsystem bestätigt werden. Alle Kontrollen waren sämtlichen Kultivierungsbedingungen der antiviralen Assays unterworfen. 3 Ergebnisse
Für den antiviralen Test wurden die Prüflösungen mit Wirkstoffkonzentrationen verwendet, die der Verdünnung von 1:400 und höher einer Dorithricin®-Tablette entspricht (Tabelle 1). Bei diesen Wirkstoffkonzentrationen konnten im Vitalitätstest keine Vitalitätsreduzierenden Effekte auf die verwendeten HeLa-, MDCK- und HEp2-Zellen nachgewiesen werden.
Im Ergebnis wies die 1:100 und die 1:400 verdünnte Dorithricin®-Wirkstoffkombination eine beachtliche antivirale Wirkung auf und reduzierte deutlich die Plaques der RNA-Viren HRV14, HlNl und RSV um 97% bzw. um 68%, 53% bzw. 74%. Dieser Effekt auf die PIaquebildung nahm mit zunehmender Verdünnung ab. Erst bei hohen Verdünnungen war eine Wirkung nicht mehr nachweisbar: bei HRV14 ab 1:3200, bei RSV ab 1:6400 und bei HlNl ab 1:64000. Die relative Hemmwirkung in Abhängigkeit von dem Dorithricin®-Verdünnungsgrad ist in Abbildung 1 dargestellt.
Die synergistische Wirkung der 3 aktiven Substanzen wird belegt durch die selbige Versuchsreihe mit jeweils der Einzelsubstanz, die jeweils nur sehr schwache antivirale Aktivität bei Verdünnung 1:100 zeigen (Abbildung 2, 3, 4).
Das zur Kontrolle eingesetzte Ribavirin (RIBA) erbrachte eine Viruspiaque-Reduktion von 53% bei HRV14 (RIBA 10 μg/m\), von 96% bei FluA (RIBA 3 μg/m\) und von 97% bei RSV (RIBA 1 μg/ml).
Der zugrundeliegende Wirkmechanismus wurde durch weitere Versuche aufzuklären versucht. Dabei wurde geprüft, ob diesem ein synergistischer Effekt zugrunde liegt und welche der drei Komponenten gegen welche Viren die Hauptwirkung besitzt. Tabelle 1: Die in der antiviralen Prüfung eingesetzten Wirkstoffkonzentrationen in Mg/ml, gegliedert nach den Dorithricin ^-Bestandteilen
Wirkstoffkonzentrationen [pg/ml]
Dorithricin -Verdünnungen
1:400 1:800 1:1600 1:3200 1:6400 1:64000
Dorithricin®-
Bestandteile
Tyrothricin 1,25 0,62 0,31 0,16 0,08 0,008
Benzalkoniumchlorid 2,5 1,25 0,62 0,31 0,16 0,016
Benzocain 3,8 1,9 0,95 0,48 0,24 0,024
4 Fazit
Die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung zeichnet sich neben den bereits bekannten antibakteriellen und analgetischen Wirkungen zusätzlich durch ausgeprägte, dosisabhängige und synergistische antivirale Eigenschaften gegen die Viren RSV, HRV14 und H1N1 aus.
5 Literatur
(1) Posfay-Barbe KM. Infections in pediatrics: old and new diseases. Swiss Med Wkly 2012;142:wl3654.
(2) Bisno AL, Gerber MA, Gwaltney JM, Jr., Kaplan EL, Schwartz RH. Practice guidelines for the diagnosis and management of group A streptococcal Pharyngitis. Infectious Diseases Society of America. Clin Infect Dis 2002 Jul 15;35(2):113-25.
(3) Shulman ST, Bisno AL, Clegg HW, Gerber MA, Kaplan EL, Lee G, et al. Clinical practice guideline for the diagnosis and management of group A streptococcal Pharyngitis: 2012 update by the Infectious Diseases Society of America. Clin Infect Dis 2012 Nov 15;55(10):1279-82. (4) Schölten T, Pautler M, Kober G. Dorithricin bei akuter Pharyngitis. Deutsche Apothekerzeitung 2005;145(l):93-4.

Claims

Patentansprüche:
1. Pharmazeutische Zusammensetzung umfassend
Tyrothricin,
Benzalkoniumchlorid, und/oder
Benzocain
zur Verwendung in der anti-viralen Therapie oder in der Behandlung einer Virus-Infektion.
2. Pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung einer viralen Infektion nach Anspruch 1, wobei die virale Infektion durch Rhinoviren, Influenzaviren, und/oder Pneumoviren hervorgerufen wird.
3. Pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung einer viralen Infektion nach Anspruch 1 oder 2, wobei die virale Infektion durch HRV14 (humanes Rhinovirus Typ 14), RSV (humanes Respiratory-Syncytial-Virus), und/oder HlNl (Influenza-A-Virus HlNl) hervorgerufen wird.
4. Pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung einer viralen Infektion nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, umfassend
ungefähr 0,5 mg Tyrothricin,
ungefähr 1,0 mg Benzalkoniumchlorid,
ungefähr 1,5 mg Benzocain
als Einzeldosis und einen oder mehrere pharmazeutisch verträgliche Hilfsstoffe.
5. Pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung einer viralen Infektion nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, bei der es sich um eine Halstablette handelt.
6. Pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung einer viralen Infektion nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, wo- bei die Zusammensetzung in einer täglichen Dosis von ungefähr 2-4 mg Tyrothricin, 4-8 mg Benzalkoniumchlorid und 6-12 mg Benzocain verabreicht wird.
EP16767247.6A 2015-09-17 2016-09-16 Zusammensetzung mit antiviralem effekt Withdrawn EP3349741A1 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15185764 2015-09-17
PCT/EP2016/071944 WO2017046312A1 (de) 2015-09-17 2016-09-16 Zusammensetzung mit antiviralem effekt

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP3349741A1 true EP3349741A1 (de) 2018-07-25

Family

ID=54151132

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP16767247.6A Withdrawn EP3349741A1 (de) 2015-09-17 2016-09-16 Zusammensetzung mit antiviralem effekt

Country Status (6)

Country Link
EP (1) EP3349741A1 (de)
AR (1) AR106057A1 (de)
DE (1) DE202016008745U1 (de)
EA (1) EA039000B1 (de)
UA (1) UA123054C2 (de)
WO (1) WO2017046312A1 (de)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2021245379A1 (en) * 2020-04-02 2022-11-10 Inflamed Pharma Gmbh Active substances for medical use
LU101724B1 (de) * 2020-04-02 2021-10-04 Inflamed Pharma Gmbh Wirkstoffe zur medizinischen Verwendung
EP4091608B1 (de) * 2021-05-21 2024-04-17 Medice Arzneimittel Pütter GmbH & Co. KG Zusammensetzung mit antiviraler wirkung
EP4275681A1 (de) * 2022-05-10 2023-11-15 inflamed pharma GmbH Wirkstoffe zur medizinischen verwendung

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19823318A1 (de) * 1998-05-26 1999-12-02 Karl Engelhard, Fabrik Pharm.- Praeparate Gmbh & Co. Kg Verwendung eines Arzneimittels mit einem Gehalt an Tyrothricin zur Behandlung von Virusinfektionen
DE19823319A1 (de) * 1998-05-26 1999-12-02 Karl Engelhard, Fabrik Pharm.- Praeparate Gmbh & Co. Kg Topisch anwendbares Arzneimittel zur Behandlung von Virusinfektionen

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Annex to document D1", 9 November 2016, article ANONYMOUS: "Annex to document D1", XP055611942 *

Also Published As

Publication number Publication date
EA201890653A1 (ru) 2018-08-31
UA123054C2 (uk) 2021-02-10
WO2017046312A1 (de) 2017-03-23
DE202016008745U1 (de) 2019-06-21
AR106057A1 (es) 2017-12-06
EA039000B1 (ru) 2021-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE60318237T2 (de) Pharmazeutische zusammensetzungen enthaltend flavonoide und menthol
DE69401763T2 (de) Chondroprotektive Flavone
DE69837474T2 (de) Antimikrobielle vorbeugung gegen und behandlung von aids und anderer infektiöser krankheiten
DE69715862T2 (de) Verwendung eines k-252a derivats zur behandlung von periphärer oder zentraler nervenerkrankungen und übermässiger cytokinbildung
CH692477A5 (de) Zusammensetzung zur Stimulation von Wiederherstellungsvorgängen, enthaltend L-Lysil-L-Glutaminsäure.
DE69210802T2 (de) Pharmazeutische aerosolzubereitung sowie deren verwendung zur behandlung und prophylaxe viraler erkrankungen
DE112013001457T5 (de) Transdermales Applikationssystem
CH660969A5 (de) Verwendung von thiadiazinverbindungen.
EP3349741A1 (de) Zusammensetzung mit antiviralem effekt
DE19709897A1 (de) Wismutsalze von Antibiotika der Moenomycin-Gruppe, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung und solche Salze enthaltende Arzneimittel
EP0655249A1 (de) Moenomycin als Arzneimittel zur Behandlung von Magengeschwüren
DE4300969C2 (de) Verwendung von Malotilat zum Beschleunigen der Wundheilung bei Hautverbrennungen
EP2818167A1 (de) Antiviral wirksame pharmazeutische Zusammensetzung
DE60216292T2 (de) Calciumtrifluoracetat mit zytotoxischer wirkung
WO2011101113A1 (de) Arzneimittel enthaltend myramistin
Susilawati et al. Activity of Karehau (Callicarpa longifolia Lamk.) leaves ethanolic extract as a wound healing
EP3352763B1 (de) Substanz zur prophylaxe und behandlung von infektionen durch influenzaviren
EP0403575B1 (de) Acyl-carnitin zur behandlung und zur verhütung von virusinfektionen
DE1917283B2 (de) Herstellung antimikrobieller Präparate
WO1998058639A1 (de) Synergistisch wirkende zusammensetzungen zur selektiven bekämpfung von tumorgewebe
DE3141970A1 (de) Arzneimittel zur behandlung der durch den virus der herpes-gruppe erzeugten erkrankungen
DE2250032A1 (de) Arzneimittel auf der basis von lysinderivaten zur bekaempfung von leukopenien und anomalien der weissen blutkoerperchen unterschiedlicher aetiologie
DE2221281C3 (de) Pharmazeutische Zubereitungen mit entzündungshemmender und analgetischer Wirkung
DE69922808T2 (de) Antivirale Zusammensetzungen enthaltend Yohimbin als therapeutischen Wirkstoff
DE69114261T2 (de) Pharmazeutische zusammensetzungen zur behandlung der parkinson'schen krankheit.

Legal Events

Date Code Title Description
STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE INTERNATIONAL PUBLICATION HAS BEEN MADE

PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: REQUEST FOR EXAMINATION WAS MADE

17P Request for examination filed

Effective date: 20180411

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR

AX Request for extension of the european patent

Extension state: BA ME

DAV Request for validation of the european patent (deleted)
DAX Request for extension of the european patent (deleted)
STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: EXAMINATION IS IN PROGRESS

17Q First examination report despatched

Effective date: 20190814

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION IS DEEMED TO BE WITHDRAWN

18D Application deemed to be withdrawn

Effective date: 20200225