ES2198739T3 - Caspasas y apoptosis. - Google Patents

Caspasas y apoptosis.

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Abstract

La presente invención se refiere a los nuevos compuestos de la fórmula (I), sus composiciones farmacéuticas y a la nueva inhibición de carpases para empleo en el tratamiento de la apoptosis y estados de enfermedad producidos por una excesiva o inapropiada muerte celular.

Description

Caspasas y apóptosis
Campo de la invención
La presente invención se refiere al descubrimiento de un nuevo procedimiento para bloquear una apóptosis excesiva o inapropiada en un mamífero.
Antecedentes de la invención
Se ha reconocido durante un siglo que existen diferentes formas de muerte celular. Una forma de muerte celular, la necrosis, es normalmente el resultado de traumatismo severo y es un proceso que implica pérdida de la integridad de la membrana y liberación incontrolada de contenido celular, con frecuencia dando lugar a respuestas inflamatorias. Por el contrario, la apóptosis es un proceso más fisiológico que se produce de una forma controlada y por lo general tiene naturaleza no inflamatoria. Por esta razón, la apóptosis se denomina frecuentemente muerte celular programada. El propio nombre (apóptosis; Griego "caer", por ejemplo, las hojas de los árboles) conlleva una muerte celular que es parte de un proceso fisiológico normal (Kerr, et al., Br. J. Cancer, 26: 239-257 (1972)).
La apóptosis parece ser una serie cuidadosamente controlada de sucesos celulares que conducen finalmente a la muerte de la célula. Este proceso para la eliminación de células indeseadas es activo y requiere gasto de energía celular. Las características morfológicas de la apóptosis incluyen contracción celular y pérdida del contacto célula-célula, condensación de la cromatina celular seguida de fragmentación, la aparición de arrugas en la membrana, formación de ampollas en la membrana y cuerpos apoptóticos. Al finalizar el proceso, las células vecinas y macrófagos fagocitan los fragmentos de la célula apoptótica. El proceso puede ser muy rápido, produciéndose en tan solo unas pocas horas (Bright et al., Biosc. Rep., 14, 67-82 (1994)).
El suceso bioquímico mejor definido de la apóptosis implica la destrucción ordenada del DNA nuclear. Las señales de apóptosis promueven la activación de endonucleasas específicas dependientes del calcio y del magnesio que escinden el DNA de doble cadena en regiones engarce entre nucleosomas. Esto origina la producción de fragmentos de DNA que son múltiples fragmentos de 180-200 pares de bases (Bergamaschi et al., Haematologica, 79, 86-93 (1994); Stewart, JNCI, 86: 1286-1296 (1994)). Cuando se examinan por electroforesis en gel de agarosa, estos fragmentos múltiples forman un modelo de escalera que es característico para la mayoría de células que sufren apóptosis.
Existen numerosos estímulos que pueden indicar a las células que inicien o promuevan la apóptosis celular, y éstos pueden ser diferentes en diferentes células. Estos estímulos pueden incluir glucocorticoides, TNFa, limitación del factor de crecimiento, algunas proteínas virales, radiación y fármacos anticancerígenos. Algunos de estos estímulos pueden inducir sus señales a través de una diversidad de receptores de la superficie celular, tales como la familia de receptores TNF/factor de crecimiento nervioso, que incluyen CD40 y Fas/Apo-1 (Bright et al, supra). Dada esta diversidad en los estímulos que causan apóptosis, ha sido difícil trazar las vías de transducción de señal y los factores moleculares implicados en la apóptosis. No obstante, existen evidencias de moléculas específicas que están implicadas en la apóptosis.
La mejor evidencia de moléculas específicas que son esenciales para la apóptosis llega del estudio del nematodo C. elegans. En este sistema, los genes que parecen ser requeridos para la inducción de apóptosis son Ced-3 y Ced- 4. Estos agentes deben funcionar en las células en destrucción y, si se inactiva cualquier gen por mutación, la muerte celular no puede producirse (Yuan et al., Devel. Biol., 138: 33-41 (1990)). En mamíferos, los genes que se han asociado con la inducción de apóptosis incluyen el proto-oncogen c-myc y el gen supresor tumoral p53 (Bright et al., supra; Symonds et al., Cell, 78: 703-711 (1994)).
En esta determinación crítica de si se sufre o no apóptosis no resulta sorprendente que existan genes que programan proteínas que inhiben la apóptosis. Un ejemplo en C. elegans es Ced-9. Cuando está anormalmente activado, las células que sobreviven son las que normalmente morirían y, por el contrario, cuando Ced-9 está inactivado, las células que mueren son las normalmente vivirían (Stewart, B. W., supra). Un homólogo en mamíferos es bcl-2, que se ha identificado como oncogen causante del cáncer. Este gen inhibe la apóptosis cuando su producto es sobreexpresado en una diversidad de células de mamífero, haciéndole menos sensible a la radiación, fármacos citotóxicos y señales apoptóticas tales como c-myc (Bright et al, supra). Algunas proteínas virales aprovechan su capacidad de proteínas específicas para bloquear la apóptosis produciendo proteínas virales homólogas con funciones análogas. Un ejemplo de dicha situación es una proteína producida por el virus de Epstein Barr que es similar a bcl-2, que previene la muerte celular y potencia de este modo la producción viral (Wells, et al., J. Reprod. Fertil., 101: 385-391 (1994)). Por el contrario, algunas proteínas pueden unirse a, e inhibir la función de la proteína bcl-2, siendo un ejemplo la proteína bax (Stewart, B. W., supra). La descripción general que se ha desarrollado es que la entrada en apóptosis está regulada por una acción de equilibrio cuidadoso entre productos génicos específicos que promueven o inhiben la apóptosis (Barinaga, Science, 263: 754-756 (1994)).
La apóptosis es una parte importante de la fisiología normal. Los dos ejemplos citados más frecuentemente de esta son el desarrollo fetal y el desarrollo de células inmunes. En el desarrollo del sistema nervioso fetal, más de la mitad de las neuronas que existen en el feto prematuro se pierden por apóptosis durante el desarrollo para formar el cerebro maduro (Bergamaschi et al., Haematologica, 79: 86-93 (1994)). En la producción de células T inmunes competentes (y en menor grado existen evidencias en células B), se produce un proceso de selección que elimina las células que reconoce y reacciona contra ellas mismas. Se cree que este proceso de selección se produce de una forma apoptótica en áreas de maduración de células inmunes (Williams, G. T., J. Pathol., 173: 1-4 (1994); Krammer et al., Curr. Opin. Immunol., 6: 279-289 (1994)).
La desregulación de la apóptosis puede jugar un papel clave en estados de enfermedad y las enfermedades pueden estar causadas por la aparición de apóptosis excesiva o reducida. Un ejemplo de enfermedades asociadas con baja apóptosis serían ciertos tipos de cánceres. Existe un linfoma de células B foliculares asociado con expresión aberrante de bcl-2 funcional y una inhibición de apóptosis en dichas células (Bergamaschi et al. supra). Existen numerosos informes que asocian la eliminación o mutación de p53 con la inhibición de apóptosis y la producción de células cancerosas (Kerr et al., Cancer, 73: 2013-2026 (1994); Ashwell et al., Immunol Today, 15: 147-151 (1994)). Por el contrario, un ejemplo de apóptosis excesiva o inapropiada es la pérdida de células neuronales que se produce en la enfermedad de Alzheimer, inducida posiblemente por péptidos \beta-amiloides (Barr et al., BioTechnology, 12: 487-493 (1994)). Otros ejemplos incluyen apóptosis excesiva de células T CD4^{+} que se produce en infección por VIH, de miocitos cardíacos durante infarto /reperfusión y de células neuronales durante isquemia (Bergamaschi et al., supra); Barr et al., supra.
Algunos agentes farmacológicos intentan contrarrestar la falta de apóptosis que se observa en cánceres. Ejemplos incluyen inhibidores de topoisomerasa II, tales como epipodofilotoxinas y antimetabolitos, tales como ara-c, que se ha descrito que potencia la apóptosis en células cancerosas (Ashwell et al, supra). En muchos casos con estos fármacos anticancerosos, el mecanismo exacto de la inducción de la apóptosis sigue sin desentrañarse.
En los últimos años, las evidencias han demostrado que ICE y proteínas similares a ICE (Caspasas) desempeñan un papel importante en la apóptosis. Esta área de investigación se ha visto estimulada por la observación de homología entre la proteína codificada por Ced-3, un gen conocido por ser crítico para la apóptosis por C. Elegans, e ICE (Caspasa 1). Estas dos proteínas comparten el 29% de la identidad de aminoácidos y la identidad completa en la porción de 5 aminoácidos que se cree que es responsable de actividad de proteasa (QACRG) (Yuan et al, Cell, 75: 641-652 (1993)). Se observan otras homologías entre ICE y el producto del gen nedd-2 en ratones, un gen del que se sospecha está implicado en la apóptosis en el cerebro en desarrollo (Kumar et al., Genes Dev., 8: 1613-1626 (1994)) e Ich- 1 (Caspasa 2) y CPP32 (Caspasa 3), homólogos humanos de nedd-2 aislado de genotecas de cDNA de cerebro humano (Wang et al., Cell, 78: 739-750 (1994)); Fernandes-Alnemiri et al, J. Biol. Chem., 269: 30761-30764 (1994)).
Otra prueba de la función de estas proteínas en la apóptosis llega de estudios de transfección. La sobreexpresión de ICE murina causada por fibroblastos para que sufran la muerte celular programada en un ensayo de transfección transitoria (Miura et al, Cell, 75: 653-660 (1993)). La muerte celular podría prevenirse por mutaciones puntuales en el gen transfectado en la región de mayor homología entre ICE y Ced-3. Puesto que es un apoyo muy fuerte para la función de ICE en la apóptosis, los autores demostraron que la apóptosis inducida por transfección de ICE podría antagonizarse por sobreexpresión de bcl-2, el oncogen de mamífero que puede prevenir la muerte celular programada (Miura et al., supra). Se llevaron a cabo otros experimentos usando el gen crmA. Este gen del virus de la viruela codifica una proteína serpina, una familia de proteínas que son inhibidoras de proteasas (Ray et al., Cell 69: 597-604 (1992)). De forma específica, la proteína de crmA ha demostrado inhibir el procesamiento de pro-interleuquina-1b por ICE. (Gagliardini et al, Science, 263: 826-828 (1994)) demostró que la microinyección del gen crmA en neuronas del ganglio de la raíz dorsal evitaba la muerte celular inducida por la falta de factor de crecimiento nervioso. Este resultado demuestra que ICE está implicada en la apóptosis de células neuronales. Una demostración más directa de la implicación de ICE llega de experimentos en los que se asocia la transfección de ICE con la coexpresión de crmA, demostrando una supresión inducida por crmA de la respuesta apoptótica inducida por ICE (Miura et al, supra: Wang et al., supra).
Además de ICE, los investigadores han examinado la capacidad de Caspasas para promover apóptosis. (Kumar et al., supra) demostraron que la sobreexpresión de nedd-2 en fibroblastos y células de neuroblastoma producía la muerte celular por apóptosis y que esta apóptosis también se podría suprimir por expresión del gen bcl-2. Más recientemente, Wang et al., (Wang et al., supra) examinaron la sobreexpresión de Ich-1 en una serie de células de mamífero. La expresión tenía como resultado la apóptosis celular, que se podía antagonizar por la expresión conjunta de bcl-2. La mutación de un residuo cisteína, contenido en el motivo QACRG y que se supone es crítica para la función de proteasas, a serina evitó la actividad apoptótica.
Otras evidencias de la función de una cisteína proteasa en la apóptosis llega de un reciente informe de Lazebnik et al., (Nature, 371: 346- 347 (1994)). Estos autores han usado un sistema exento de células para emular y estudiar la apóptosis. En su sistema, existe una actividad de proteasa que escinde la enzima poli(ADP-ribosa)polimerasa en un sitio idéntico a un sitio de escisión en pre-interleuquina-1b. No obstante, todavía existe proteasa aislada e ICE parece ser diferente y actuar en diferentes proteínas substrato. El bloqueo de la actividad de proteasa en el sistema, usando inhibidores de cisteína proteasa no selectivos produjo la inhibición de la apóptosis.
Tomadas conjuntamente, las evidencias anteriores proporcionan una implicación determinante de Caspasas en la inducción de apóptosis en células de mamíferos. La interleuquina-1 cerebral se ha descrito por ser elevada en la enfermedad de Alzheimer y en el síndrome de Down (Griffin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 86: 7611-7615 (1989)). También existen informes de que la interleuquina-1 puede aumentar el mRNA y la producción de proteína \beta-amiloide, un componente mayoritario de las placas seniles en la enfermedad de Alzheimer así como en cerebros de personas con síndrome de Down y con envejecimiento (Forloni et al., Mol. Brain Res., 16: 128-134 (1992); Busbaum et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 89: 10075- 10078 (1992)); Goldgaber et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 86: 7606-7610 (1989)). Estos informes pueden considerarse como evidencias adicionales para la implicación de ICE en estas enfermedades y la necesidad de usar un nuevo agente terapéutico y terapia para el mismo.
Hasta la fecha, ninguna de las estrategias terapéuticas útiles han bloqueado la apóptosis excesiva o inapropiada. En una solicitud de patente, EPO 0 533 226 se describe una nueva estructura peptídica que se dice es útil para determinar la actividad de ICE y, por tanto, en el diagnóstico y control de enfermedades mediadas por IL-1. Por tanto, existe una necesidad de descubrir mejores agentes terapéuticos que tengan perfiles farmacológicos y toxicológicos no tóxicos para usar en mamíferos. Estos compuestos bloquearán la apóptosis excesiva o inapropiada en células y, por ello, proporcionarán un tratamiento para enfermedades y estados patológicos en los que se produzca este estado.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a nuevos compuestos de Formula (I), a sus composiciones farmacéuticas y a la nueva inhibición de Caspasas para usar en el tratamiento de apóptosis y estados de enfermedad causados por muerte celular excesiva o inapropiada. Los compuestos de Fórmula (I) con más eficaces para inhibir las Caspasas tres y siete.
Otro aspecto de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
Otro aspecto de la presente invención es el uso de un compuesto de Fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la fabricación de un medicamento para usar en el tratamiento de enfermedades o trastornos asociados con la actividad excesiva de convertasa de IL-1b.
Otro aspecto de la presente invención es el uso de un compuesto de Fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la fabricación de un medicamento para usar en el tratamiento y/o profilaxis de trastornos en los que un factor es bloquear la apóptosis excesiva o inapropiada.
Otro aspecto de la presente invención es el uso de un compuesto de Fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la fabricación de un medicamento para usar en el tratamiento de, y el tratamiento y/o profilaxis de trastornos en los que es un factor el bloqueo o reducción de la producción de IL-1\beta y/o TNF.
Los compuestos de Fórmula (I) se representan por la estructura
1
en la que
R_{1} es hidrógeno o alquilo (C_{1}-C_{4});
R_{2} es alquilo (C_{1}-C_{10}), aril(alquilo (C_{1}-C_{4})) opcionalmente sustituido una a tres veces independientemente con hidroxi, halógeno, alquilo o alcoxi, heteroaril-alquilo (C_{1}-C_{4}), cicloalquilo (C_{3}-C_{7}), o R_{1} y R_{2} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 3 a 10 miembros que opcionalmente contiene un heteroátomo adicional seleccionado de oxígeno, nitrógeno o azufre;
R_{3} y R_{4} son alquilo (C_{1}-C_{6}), hidrógeno, nitro o halógeno, y
R_{5} es alquilo (C_{1}-C_{6}), hidrógeno, arilalquilo o heteroarilalquilo;
siendo el heteroarilo de dicho heteroaril-alquilo (C_{1}-C_{4}) y dicho heteroarilalquilo un sistema de anillo aromático de 5 a 10 miembros en el que uno o más anillos contienen uno o más heteroátomos seleccionados del grupo formado por N, O o S; y
siendo el arilo de dicho aril-alquilo (C_{1}-C_{4}) y dicho arilalquilo un anillo fenilo o naftilo.
Con preferencia, R_{1} y R_{2} están unidos formando un anillo que contiene nitrógeno de cinco miembros. Se sabe que el grupo alquilo del resto arilalquilo o heteroalquilo puede ser ramificado o lineal, tal como metileno o un grupo metileno sustituido, es decir, -CH(CH_{3})-arilo.
R_{5} es preferiblemente bencilo.
Compuestos ejemplificados por la Fórmula (I) incluyen, aunque no quedan limitados a:
5-clorosulfonil-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-bencilaminosulfonil-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(1-metil-3-fenilpropilamino)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-bencil-2-cianoetilamino)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(2-(3-piridil)etilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(2-furfurilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(2-isopropoxietilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(2-metoxietilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(2-tetrahidrofurfurilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(-)-5-[N-(cis-mirtanilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[(1-bencilpiperidinil-4-amino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(2-indanamino)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(ciclopropilmetilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(1,5-dimetilhexilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-metilbencilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[N-(3-(N-acetil-N-metilamino)pirrolidinil)sulfonil]-3,3-dicloro-2- oxoindol
5-[2-(1,2,3,4-tetrahidroisoquinolino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(decahidroisoquinolino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-metil-2-cianoetilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-metilcianometilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(pirrolidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-metilfenetilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(azaciclooctano) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(3-azabiciclo[3.2.2]nonano) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[1-(2-etoxicarbonilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(morfolino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(S)-(+)-5-[1-(2-metoximetilpirrolidinil)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-metil-2-(4-piridinil)etilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-metil-2-hidroxietilamino)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(S)-(+)-5-[N-(2-hidroximetilpirrolidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(3-hidroxipirrolidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(3-aminocarbonilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(2-metilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(4-metilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[1-(4-hidroxipiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(2-(2-hidroxietil)piperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(3-hidroximetilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[1-(4-fenilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[1-(4-bencilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[1-(4-(1-piperidinil)piperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-bencilaminosulfonil-N-metil-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-clorosulfonil-N-metil-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-bencilaminosulfonil-N-metil-3,3-dicloro-2-oxoindol
N-metil-5-(1-piperidinilsulfonil)-3,3-dicloro-2-oxoindol
El término "actividad IL-1b convertasa excesiva" se usa en la presente memoria para indicar una expresión excesiva de proteína, o activación de la enzima.
El término "alquilo (C_{1}-C_{6})" o "alquilo" se usa en la presente memoria para indicar radicales tanto de cadena lineal como ramificada de 1 a 6 átomos de carbono, a no ser que se indique otra longitud de cadena, incluyendo, aunque sin quedar limitados a los mismos, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, sec-butilo, iso-butilo, terc-butilo y similares.
El término "heteroarilo" (o el mismo en cualquier combinación tal como "heteroariloxi" o "heteroarilalquilo"), se usa en la presente memoria para indicar un sistema de anillo aromático de 5 a 10 miembros en el que uno o más anillos contienen uno o más heteroátomos seleccionados del grupo formado por N, O o S, tal como, pero sin estar limitado a, pirrol, pirazol, furano, tiofeno, quinolina, isoquinolina, quinazolinilo, piridina, pirimidina, oxazol, oxadiazol, tetrazol, tiazol, tiadiazol, triazol, imidazol, bencimizadol, benzotiofeno, benzopirrol o benzofurano.
El término "arilo" (o el mismo en cualquier combinación tal como "ariloxi" o "arilalquilo") se usa en la presente memoria para indicar un anillo fenilo o naftilo.
El término "cicloalquilo" se usa en la presente memoria para indicar radicales cíclicos, preferiblemente de 3 a 7 carbonos, incluyendo aunque sin estar limitados a los mismos, ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo y similares.
El término "halo" o "halógenos" se usa en la presente memoria para que incluya, a no ser que se indique de otro modo, cloro, fluoro, bromo y yodo.
La presente invención contiene la inhibición de Caspasas por compuestos de Fórmula (I). Lo que se entiende por el término "Caspasas" son fragmentos, homólogos, análogos y derivados de los polipéptidos enzima conversora de interleuquina-1 b (o convertasa). Estos análogos están estructuralmente relacionados con la familia de Caspasas. Por lo general codifican una proteína o proteínas que presentan alta homología con ICE humana en toda la secuencia. Preferiblemente, se conserva el pentapéptido QACRG. Las Caspasas, que pueden incluir muchas variantes alélicas naturales (tales como sustituciones, eliminaciones o adiciones de nucleótidos) no alteran sustancialmente la función del polipéptido codificado. Es decir, retienen esencialmente la misma función o actividad biológica que la proteasa ICE, aunque se sabe que la función biológica puede potenciarse o reducirse en actividad. La actividad adecuada no es actividad IL-1b convertasa, sino la capacidad para inducir apóptosis o implicarse en la muerte celular programada de alguna forma. Las Caspasas adecuadas incluidas en esta invención son las descritas en los documentos PCT US94/07127, presentado el 23 de junio de 1994, número de expediente del agente: 325800-184; y en USSN 08/334.251, presentado el 1 de noviembre de 1994, número de expediente del agente: 325800-249, cuyas descripciones se incorporan en la presente memoria como referencia en su totalidad.
El término "bloqueo o inhibición, o reducción de la producción de IL-1b y/o TNF" tal y como se usa en la presente memoria se refiere a:
a) una reducción de niveles excesivos, o una regulación a niveles menores, de la citoquina en un ser humano hasta niveles normales o inferiores a los normales inhibiendo la liberación in vivo de citoquina; o
b) una regulación a niveles inferiores, al nivel genómico, de niveles excesivos in vivo de la citoquina (IL-1 o TNF) en un ser humano hasta niveles normales o inferiores a los normales; o
c) una regulación a niveles inferiores, mediante la inhibición de la síntesis directa de la citoquina (IL-1 o TNF) como suceso postraducción; o
d) una regulación a niveles inferiores, al nivel de traducción, de niveles excesivos in vivo de la citoquina (IL-1 o TNF) en un ser humano hasta niveles normales o inferiores a los normales.
El bloqueo o inhibición, o reducción de la producción de IL-1 y/o TNF es un descubrimiento de que los compuestos de Fórmula (I) son inhibidores de las citoquinas. IL-1 y TNF se basan en los efectos de los compuestos de Fórmula (I) sobre la producción de IL-1 y TNF en ensayos in vitro e in vivo que son bien conocidos y reconocidos en la técnica, algunos de los cuales se describen en la presente memoria.
El compuesto de la presente invención se puede sintetizar conforme a los esquemas ilustrados a continuación.
5-Alquilaminosulfonil-3,3-dicloro-2-oxoindoles
2
Se trata la isatina o su derivado N-alquilo con ácido clorosulfónico a temperaturas que varían de 0 a 10ºC con el fin de obtener 5-clorosulfonil-3,3- dicloro-2-oxoindol, el precursor directo de los compuestos de esta invención. El tratamiento del derivado clorosulfonilo con una amina primaria o secundaria en disolventes orgánicos tales como tetrahidrofurano, cloruro de metileno o dimetilformamida con o sin la adición de una base de amina terciaria tal como trietilamina, proporciona el 5-alquilaminosulfonil-3,3-dicloro-2-oxoindol.
Ejemplo 1 a) 5-Clorosulfonil-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se calentó una solución de isatina (1,6 g, 10 mmol) en ácido clorosulfónico (6,6 ml) hasta 70ºC durante 3 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, se vertió la solución en hielo y se extrajo con cloruro de metileno. La solución orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se eliminó el disolvente a presión reducida proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido naranja con rendimiento cuantitativo. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) d 7,25 (d, J= 10,5 Hz, 1 H), 8,12 (d, J= 10,5 Hz, 1 H), 8,29 (s, 1 H), 8,74 (s ancho, 1 H ).
b) 5-Bencilaminosulfonil-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se añadió bencilamina (135 \mul, 1,2 mmol) gota a gota a una solución de 5-clorosulfonil-3,3-dicloro-2-oxoindol (100 mg, 400 \mumol) en cloruro de metileno (3 ml). Después de agitar durante 4 horas, se añadió ácido clorhídrico 3N junto con un volumen adicional de cloruro de metileno (20 ml). Se secó la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se filtró y se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (25% a 35% de acetato de etilo / hexanos) proporcionando el compuesto del epígrafe. ES (-) MS m/e = 369 (M - H).
Ejemplo 2 5-[N-(1-Metil-3-fenilpropilamino)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 3-fenilpropilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla con un 32% de rendimiento. ES (+) MS m/e = 413 (M + H).
Ejemplo 3 5-[N-(N-Bencil-2-cianoetilamino)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por N-(2-cianoetil)-bencilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido blanco con un 19% de rendimiento. ES (+) MS m/e = 424 (M - H).
Ejemplo 4 5-[N-(2-(3-piridil)etilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 2-(3-piridil)-etilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un aceite amarillo con un 4% de rendimiento. ES (+) MS m/e = 386 (M + H).
Ejemplo 5 5-[N-(2-furfurilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 2-furfurilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo con un 17% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 359 (M - H).
Ejemplo 6 5-[N-(2-Isopropoxietilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 2-isopropoxietilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla con un 33% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 365 (M - H).
Ejemplo 7 5-[N-(2-Metoxietilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 2-metoxietilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla con un 27% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 337 (M - H).
Ejemplo 8 5-[N-(2-Tetrahidrofurfurilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 2-tetrahidrofurfurilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla clara con un 30% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 363 (M - H).
Ejemplo 9 (-)-5-[N-(Cis-mirtanilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por (-)-cis-mirtanilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla clara con un 8% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 415 (M - H).
Ejemplo 10 5-[(1-Bencilpiperidinil-4-amino) aminosulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 4-amino-1-bencilpiperidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un aceite amarillo con un 5% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 452 (M - H).
Ejemplo 11 5-[N-(2-Indanamino)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 2-indanamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma marrón con un 50% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 395 (M - H).
Ejemplo 12 5-[N-(Ciclopropilmetilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por ciclopropilmetilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla con un 21% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 333 (M - H).
Ejemplo 13 5-[N-(1,5-Dimetilhexilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 1,5-dimetilhexilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla con un 12% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 391 (M - H).
Ejemplo 14 5-[N-(N-Metilbencilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por N-metilbencilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo con un 38% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 384 (M - H).
Ejemplo 15 (+/-)-5-[N-(3-(N-Acetil-N-metilamino)pirrolidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2- oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 3-(N-acetil-N-metilamino)pirrolidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla con un 39% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 404 (M - H).
Ejemplo 16 5-[2-(1,2,3,4-Tetrahidroisoquinolino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo con un 47% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 395 (M - H).
Ejemplo 17 (+/-)-5-[1-(Decahidroisoquinolino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por decahidroisoquinolina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla con un 27% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 401 (M - H).
Ejemplo 18 5-[N-(N-Metil-2-cianoetilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por N-metil-beta-alaninanitrilo, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo claro con un 28% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 346 (M - H).
Ejemplo 19 5-[N-(N-Metilcianometilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por N-metilaminoacetonitrilo, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo con un 7% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 332 (M - H).
Ejemplo 20 5-[N-(Pirrolidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por pirrolidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo claro con un 21% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 333 (M - H).
Ejemplo 21 5-[N-(N-Metilfenetilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por N-metilfenetilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla clara con un 45% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 397 (M - H).
Ejemplo 22 5-[N-(Azaciclooctano) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por azaciclooctano, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla con un 49% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 375 (M - H).
Ejemplo 23 5-[N-(3-Azabiciclo[3.2.2]nonano) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 3-azabiciclo[3.2.2]nonano, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla con un 60% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 387 (M - H).
Ejemplo 24 5-[1-(2-Etoxicarbonilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por piperidina-2-carboxilato de etilo, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla clara con un 69% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 419 (M - H).
Ejemplo 25 5-[N-(Morfolino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por morfolina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo claro con un 56% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 349 (M - H).
Ejemplo 26 (S)-(+)-5-[1-(2-Metoximetilpirrolidinil)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por (S)-(+)-2-(metoximetil)pirrolidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla clara con un 38% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 377 (M - H).
Ejemplo 27 5-[N-(N-Metil-2-(4-piridina)etilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por N-metil-2-(4-piridina)etilamina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido marrón con un 38% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 398 (M - H).
Ejemplo 28 5-[N-(N-Metil-2-hidroxietilamino)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por N-(metil)aminoetanol, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla clara con un 27% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 337 (M - H).
Ejemplo 29 (S)-(+)-5-[N-(2-Hidroximetilpirrolidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por (S)-(+)-2-(hidroximetil)pirrolidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma amarilla clara con un 31% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 363 (M - H).
Ejemplo 30 (+/-)-5-[1-(3-Hidroxipirrolidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 3-hidroxipirrolidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido blanco con un 9% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 351 (M - H).
Ejemplo 31 (+/-)-5-[1-(3-Aminocarbonilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 3-carboxamidapiperidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido blanco con un 53% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 390 (M - H).
Ejemplo 32 (+/-)-5-[1-(2-Metilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 2-metilpiperidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como una espuma blanca con un 10% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 361 (M - H).
Ejemplo 33 (+/-)-5-[1-(4-Metilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 4-metilpiperidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido blanquecino con un 32% de rendimiento. ES (-) MS m/e = 361 (M - H).
Ejemplo 34 5-[1-(4-Hidroxipiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 4-hidroxipiperidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido blanquecino. ES (+) MS m/e = 365 (M + H).
Ejemplo 35 (+/-)-5-[1-(2-(2-Hidroxietil)piperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por (+/-)-2-(2-hidroxietil)piperidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido blanquecino. ES (-) MS m/e = 391 (M - H).
Ejemplo 36 (+/-)-5-[1-(3-Hidroximetilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por (+/-)-3-hidroximetilpiperidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido blanquecino. ES (-) MS m/e = 377 (M - H).
Ejemplo 37 5-[1-(4-Fenilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por (+/-)-3-hidroximetilpiperidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido blanquecino. ES (-) MS m/e = 423 (M - H).
Ejemplo 38 5-[1-(4-Bencilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 4-bencilpiperidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido blanquecino. ES (-) MS m/e = 437 (M - H).
Ejemplo 39 5-[1-(4-(1-Piperidinil)piperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 1b) salvo porque se sustituyó la bencilamina por 4-(1-piperidinil)piperidina, proporcionando el compuesto del epígrafe como un sólido blanquecino. ES (-) MS m/e = 430 (M - H).
Ejemplo 40 5-Bencilaminosulfonil-N-metil-3,3-dicloro-2-oxoindol a) 5-Clorosulfonil-N-metil-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó el compuesto del epígrafe conforme al ejemplo 1a) salvo porque se sustituyó la isatina por N-metilisatina. El producto se obtuvo como un sólido naranja con rendimiento cuantitativo. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) d 3,37 (s, 3 H), 7,09 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 8,16 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 8,28 (s, 1 H).
b) 5-Bencilaminosulfonil-N-metil-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se añadió bencilamina (50 \mul, 458 \mumol) gota a gota a una solución de 5-clorosulfonil-N-metil-3,3-dicloro-2-oxoindol (120 mg, 382 \mumol) en cloruro de metileno (5 ml). Después de agitar durante toda la noche, se añadió ácido clorhídrico 3N junto con un volumen adicional de cloruro de metileno (20 ml). La fase orgánica se seco sobre sulfato de magnesio, se filtró y se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (35% a 55% de acetato de etilo / hexanos) proporcionando el compuesto del epígrafe. ES (-) MS m/e = 383 ( M - H).
Ejemplo 41 N-Metil-5-(1-piperidinilsulfonil)-3,3-dicloro-2-oxoindol
Se preparó conforme al procedimiento del ejemplo 41 b, salvo porque se sustituyó la bencilamina por piperidina. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) d 1,45 (m, 2 H), 1,67 (m, 4 H), 3,00 (m, 4 H), 3,36 (s, 3 H), 7,01 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 7,84 (d,J = 10,5 Hz, 1 H), 7,99 (s, 1 H).
Preparación de Caspasa 3 activa
Se expresó Caspasa 3 de longitud completa intracelularmente en E. coli con el marcador hexa His en N-terminal. Las células de E. coli se lisaron en 10 ml/g de células de tampón de lisis (fosfato sódico 50 mM, pH 7,2, NaCl 0,1 M, Tween 20 al 0,1% y \beta-mercaptoetanol 10 mM) usando un homogeneizador Microfluidics M110Y a 69 x 10^{6} Pa. Después de centrifugar, se detectó la actividad de Caspasa 3 en el sobrenadante del lisado. Se sometió a intercambio de tampón el sobrenadante en una columna Sephadex G25 equilibrada con Tris HCl 20 mM, sacarosa al 10%, CHAPS al 0,1%, DTT 2 mM, pH 7,8 (TSDC). Las fracciones que contenían actividad Caspasa 3 se aplicaron a DEAE Toyopearl 650 M (Supelco Inc.) equilibrada con tampón TSCD. La columna eluyó con un gradiente lineal de 20 mM a 120 mM de Tris HCl pH 7,8 en TSCD. La Caspasa 3 eluyó al principio del gradiente antes de eluir la mayoría de impurezas. Esta Caspasa 3 parcialmente purificada se usó para el rastreo del inhibidor. Todas las operaciones se llevaron a cabo a 4ºC y se midió la actividad Caspasa 3 usando substrato, DEVD-AMC y lector de placas Dynatach Fluolite 1000.
Ensayo de inhibición de Caspasa 3
Se ensayó la Caspasa 3 a 30ºC en placas de 96 pocillos usando sustrato tetrapéptido fluorógeno N-acetil-L-aspartil-L-glutanil-L-valil-L- aspartil-7-amido-4-metilcumarina (Av-DEVD-AMC). Los ensayos se llevaron a cabo a pH 7,5 en un sistema tamponado que contenía Hepes 25 mM, sacarosa al 10%, CHAPS al 0,1% y DTT 1-50 \muM. La concentración de sustrato se fijó a 10 \muM. Se controló de forma continua la fluorescencia de la 7-amino-4-metilcumarina liberada a 460 nm después de excitación a 360 nm.
Ensayo de compuestos
Los compuestos se ensayaron en una única dosis de 50 a 100 \muM. La actividad se controló como se ha descrito antes durante un período de 30 a 60 minutos después de la adición simultánea de sustrato e inhibidor a la enzima para iniciar la reacción. Las curvas de progreso así generadas se ajustaron por ordenador a una ecuación de primer orden para valorar la potencia y/o dependencia del tiempo.
V=\frac{(Vo (1-e^{-k_{obs}t})}{k_{obs}}\eqnum{(1)}
Los compuestos representativos de fórmula (I) han demostrado actividad inhibidora positiva en el ensayo indicado antes.
Ensayo de apóptosis (células Jurkat) Materiales: Compuestos
Los compuestos se prepararon en forma de solución madre (5 - 100 mM) en dimetilsulfóxido (DMSO) y se diluyeron en DMSO proporcionando las concentraciones finales, con concentraciones en DMSO que variaban de 0,1 a 1%.
Preparación de la células
Se obtuvieron células Jurkat de American Type Culture Collection y se desarrollaron en medio RPMI-1640 suplementado con suero bovino fetal al 10% a 37ºC, CO_{2} al 5%. Las células se sembraron en matraces en T a 0,03 a 0,08 x 10^{6} células /ml y se usaron para experimentos a 0,5 a 1,0 x 10^{6} células/ml. Se pueden usar otras células proliferativas con apóptosis inducida por anti-fas, cantotecina, cerimida o TNF.
Ensayo de apóptosis
Un procedimiento para medir la apóptosis es cuantificar la cantidad de fragmentos de DNA rotos usando un procedimiento de marcado del extremo fluorescente, un sistema usado en el kit ApopTag de Oncor (Gaithersburg, MD). En resumen, la enzima desoxinucleotidil transferasa terminal extiende fragmentos de DNA con nucleótidos que contienen digoxigenina, que se detectan entonces con un anticuerpo antidigoxigenina que lleva fluoresceína permitiendo la detección por fluorescencia (494 nm en excitación y 523 nm en emisión). Se usa yoduro de propidio como colorante complementario para medir el contenido de DNA total. Se realizó análisis citométrico de flujo en un aparato Becton-Dickinson (Rutherford, NJ) FACScan usando el programa CelQuest.
Procedimientos de tratamiento
Para uso terapéutico, los compuestos de la presente invención se administrarán por lo general en una composición farmacéutica convencional obtenida mezclando con un vehículo o diluyente farmacéutico seleccionado con respecto a la vía deseada de administración y a la práctica farmacéutica convencional. Por ejemplo, se pueden administrar oralmente en forma de comprimidos que contienen excipientes tales como almidón o lactosa, o en cápsulas, óvulos o pastillas solos o mezclados con excipientes, o en forma de elixires o suspensiones que contienen aromatizantes o colorantes. Se pueden inyectar parenteralmente, por ejemplo, por vía intravenosa, intramuscular o subcutánea. Para administración parenteral, se usan mejor en forma de una solución acuosa estéril que puede contener otras sustancias, por ejemplo, sales o glucosa suficientes para hacer la solución isotónica con la sangre. La elección de la forma de administración, así como las dosis eficaces variarán dependiendo, entre otros, del trastorno que se vaya a tratar. La elección del modo de administración y dosificación está dentro de la práctica de los técnicos.
Los compuestos de la presente invención, en particular los indicados en la presente memoria o sus sales farmacéuticamente aceptables que son activos cuando se administran por vía oral, se pueden formular como líquidos, por ejemplo, jarabes, suspensiones o emulsiones, comprimidos, cápsulas o pastillas.
Una formulación líquida comprenderá normalmente una solución o suspensión del compuesto o sal farmacéuticamente aceptable en un vehículo(s) acuoso(s), por ejemplo, etanol, glicerina, disolvente no acuoso, por ejemplo, polietilenglicol, aceites o agua con un agente de suspensión, conservante, aromatizante o colorante.
Se puede preparar una composición en forma de un comprimido usando cualquiera de los vehículos farmacéuticamente adecuados usados de forma habitual para preparar formulaciones sólidas. Ejemplos de tales vehículos incluyen estearato de magnesio, almidón, sacarosa y celulosa.
Se puede preparar una composición en forma de una cápsula usando procedimientos de encapsulación habituales. Por ejemplo, se pueden preparar péllets que contienen ingrediente activo usando vehículos convencionales y luego rellenarse en una cápsula de gelatina dura; como alternativa, se puede preparar una dispersión o suspensión usando cualquiera de los vehículos farmacéuticos convencionales, por ejemplo, gomas acuosas, celulosas, silicatos o aceites y la dispersión o suspensión se rellena entonces en una cápsula de gelatina blanda. Con preferencia, la composición está en forma de unidad de dosis tal como una cápsula o comprimido.
Composiciones parenterales típicas comprenden una solución o suspensión de compuesto o sal farmacéuticamente aceptable en un vehículo acuoso estéril o aceite parenteralmente aceptable, por ejemplo, polietilenglicol, polivinilpirrolidona, lecitina, aceite de cacahuete o aceite de sésamo. Como alternativa, la solución se puede liofilizar y luego reconstituirse con un disolvente adecuado antes de la administración.
Una formulación de supositorio típica comprende un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo que es activo cuando se administra de este modo, con un agente ligante y/o lubricante tal como glicoles poliméricos, gelatina o manteca de cacao u otras ceras o grasas vegetales o sintéticas de bajo punto de fusión.
Los compuestos farmacéuticamente aceptables de la invención se administrarán normalmente a un sujeto en una pauta de administración diaria. Para un paciente, esta puede ser por ejemplo, de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 100 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal del animal. Una dosis diaria, para un mamífero mayor varía preferiblemente de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 1000 mg, preferiblemente de 1 mg a 500 mg o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, calculada como la base libre, administrándose el compuesto de 1 a 4 veces al día. Las formas de unidad de dosis pueden contener de aproximadamente 25 \mug a aproximadamente 500 mg del compuesto.
Existen muchas enfermedades y estados patológicos en los que la desregulación de la apóptosis desempeña una importante función. Todos estos estados patológicos implican pérdida no deseada, perjudicial de células específicas con las consecuencias patológicas resultantes.
La remodelación ósea implica la resorción inicial por osteoclastos, seguida por la formación de hueso por los osteoclastos. Recientemente, ha habido una serie de informes de sucesos apoptóticos que se producen durante este proceso. Los sucesos apoptóticos se han observado tanto en las células de formación de hueso como de la resorción de hueso in vitro y, de hecho, en los sitios de estas unidades de remodelación in vivo.
La apóptosis ha sido sugerida como uno de los mecanismos posibles de la desaparición de osteoclastos de sitios inversos entre la resorción y formación. El TGF-\beta1 induce la apóptosis (aproximadamente 30%) en osteoclastos de cultivos de médula ósea de murino desarrollados durante 6 días in vitro. (Hughes, et al. J. Bone Min. Res., 9, S138 (1994)). Los bisfosfonatos antiresorción (cidronato, pamidronato o residronato) promueven la apóptosis en osteoclastos de ratones in vitro e in vivo. (Hughes et al, supra, en S347). M-CSF que se ha encontrado con anterioridad que es esencial para la formación de osteoclastos puede suprimir la apóptosis, sugiriendo no solo que se mantiene la población de osteoclastos, sino también que la formación de estas células multinucleares puede determinarse por sucesos de apóptosis. (Fuller et al, J. Bone Min. Res, 8, S384 (1993); Perkin et al, J. Bone Min. Res, 8, S390 (1993)). Las inyecciones locales de IL-1 en la bóveda del cráneo de ratones una vez al día durante 3 días inducen una intensa y agresiva remodelación. (Wright, et al, J. Bone Min. Res,9,S174 (1994)). En estos estudios, el 1% de osteoclastos eran apoptóticos 1 día después del tratamiento, que aumentó 3 días después al 10%. Un alto porcentaje (95%) de estos osteoclastos apoptóticos estaban en el sitio inverso. Estos datos sugieren que Caspasas son funcionalmente muy importantes en la apóptosis de osteoclastos.
Por tanto, un aspecto de la presente invención es promover la apóptosis en osteoclastos como una nueva terapia para inhibir la resorción en enfermedades de excesiva pérdida ósea, tales como osteoporosis, usando compuestos de Fórmula (I) como los definidos en la presente memoria.
La apóptosis puede inducirse por bajos niveles séricos en células del tipo osteoblastos de rata altamente diferenciados (Ros 17/2.8) (Ihbe, et al., (1994), J. Bone Min. Res, 9, S167)). Esto estaba asociado con una pérdida temporal de fenotipo de osteoblastos, sugiriendo que el mantenimiento de la expresión y apóptosis de genes de linajes específicos están fisiológicamente asociadas. Osteoblastos derivados de bóveda de cráneo de rata fetal desarrollados in vitro sufrieron apóptosis y esta se localizó en áreas de formación de nódulos como se indica por el marcado in vivo de extremos de DNA fragmentado. (Lynch et al,(1994) J. Bone Min. Res, 9, S352). Se ha demostrado que los genes inmediatamente anteriores c-fos y c-jun se expresan antes de la apóptosis: d-fos y c-jun-Lac Z en ratones transgénicos muestran la expresión constitutiva de estos factores de transcripción en muy pocos tejidos, uno de los cuales es el óseo (Smeyne et al., (1992) Neuron, 8, 13- 23; y Morgan J,. (1993), Apoptotic Cell Death: Functions and Mechanisms. Colg Spring Harbor 13-15 de octubre). La apóptosis se observó en estos animales en la placa de crecimiento epifíseal y en zonas condrogénicas como calficicaciones de ligamentos petulares. La apóptosis condrogénica también se ha observado en ratones con menos PTHRP y estos transgénicos presentan una formación de hueso endocondral anómala (Lee et al, (1994) J. Bone Min. Res, 9, S159). Un artículo muy reciente examinó una línea de células de osteosarcoma humano que sufría apóptosis espontánea. Usando esta línea de células, LAP-4, pero no ICE, se podía detectar y se podía bloquear la apóptosis in vitro mediante la inhibición o agotamiento de LAP-4 (Nicholson, et al, (1995) Nature, 376, 37-43). Así, la apóptosis pede desempeñar un papel en la pérdida de osteoblastos y condrocitos y en la inhibición de la apóptosis podría proporcionar un mecanismo para mejorar la formación de hueso.
Por tanto, otro aspecto de la presente invención es la inhibición de la apóptosis como nueva terapia para mejorar la formación de hueso usando compuestos de Fórmula (I) como los definidos en la presente memoria.
La osteoartritis (OA) es una enfermedad degenerativa caracterizada por erosión progresiva del cartílago articular. Los condrocitos son los únicos tipos de células encontrados en el cartílago articular y las perturbaciones en el metabolismo de estas células puede implicarse en la patogénesis de OA. Las lesiones al cartílago inician una respuesta reparadora específica que implica un aumento en la producción de proteoglucano y colágeno en un intento por reestablecer la homeostasis normal de la matriz. Sin embargo, con el progreso de la enfermedad, la red tridimensional de colágeno se rompe y se produce muerte celular de condrocitos en lesiones de OA (Malemud, et al: Regulation of chondrocytes in osteoarthritis. In: Adolphe, M. ed. Biological Regulation of Chondrocytes. Boca Raton: CRC Press, 1992, 295-319). Se ha demostrado que en la OA, los condrocitos adyacentes a defectos del cartílago expresan altos niveles de bcl-2 (Erlacher, et al, (1995), J. of Rheumatology, 926-931). Esto representa un intento por proteger los condrocitos de la apóptosis inducida por el proceso de la enfermedad.
La protección de condrocitos durante los primeros cambios degenerativos en el cartílago mediante inhibición de apóptosis puede proporcionar una nueva técnica terapéutica a esta enfermedad común. Por tanto, otro aspecto de la presente invención es la inhibición de la apóptosis como una nueva terapia para tratar osteoartritis, usando compuestos de Fórmula (I) como los definidos en la presente memoria.
Recientes evidencias demuestran que los estados degenerativos crónicos del hígado están asociados a apóptosis hepatocelular. Estos estados patológicos incluyen degeneración hepatocelular inducida por infecciones, compuestos químicos y respuestas inmunes/inflamatorias. La apóptosis de células hepáticas se ha observado en estados degenerativos del hígado inducidos por una serie de agentes químicos, incluyendo paracetamol (Ray, et al, 1993), FASEB . J., 7, 453-463), cocaína (Cascales et al, (1994), Hepatology, 20, 992-1001) y etanol (Baroni et al, (1994), J. Hepatol., 20, 508-513). Los agentes infecciosos y sus componentes químicos que han demostrado inducir apóptosis incluyen hepatitis (Hiramatsu, et al, (1994), Hepatology, 19, 1354-1359; Mita et al, (1994) Biochem. Biophys. Res. Commun., 204, 468-474)), factor de necrosis tumoral y endotoxina (Leist, et al, (1995), J. Immunol., 154, 1307-1316; y Decker, K., (1993) Gastroenterology, 28(S4}), 20-25). La estimulación de las respuestas inmunes / inflamatorias por mecanismos tales como el transplante de haloinjertos y la hipoxia seguida por reperfusión han demostrado inducir apóptosis de hepatocitos (Krams, et al, (1995) Transplant. Proc., 27, 466-467). Juntas, estas evidencias apoyan que la apóptosis hepatocelular es vital en enfermedades hepáticas degenerativas.
Por tanto, otro aspecto de la presente invención es la inhibición de la apóptosis como nueva terapia para tratar enfermedades hepáticas degenerativas, usando compuestos de Fórmula (I) como los definidos en la presente memoria.
La apóptosis se reconoce como un proceso fundamental en el sistema inmune en el que la muerte celular configura el sistema inmune y efectúa funciones inmunes. La apóptosis también está implicada en enfermedades virales (por ejemplo, SIDA). Informes recientes indican que la infección por VIH puede producir un exceso de apóptosis, contribuyendo a la pérdida de células T CD4^{+}. Es de interés especial la observación de que APO-1/Fas comparte homología de secuencia con gp120 de VIH-1.
Por tanto, otro aspecto de la presente invención es la inhibición de apóptosis como una nueva terapia para tratar enfermedades virales, usando compuestos de Fórmula (I) como los definidos en la presente memoria.
Instrucciones terapéuticas adicionales y otras indicaciones en las que la inhibición de cisteína proteasas apoptóticas sea de utilidad terapéutica, junto con citas relevantes que apoyan la implicación de la apóptosis en cada indicación se presentan a continuación en la Tabla 1.
TABLA 1 Indicaciones terapéuticas relacionadas con apóptosis
Indicación Citas
Isquemia / reperfusión Barr et al, (1994) Biotechnology, 12,
487-493; Thompson, C. B. (1995) Science, 267, 1456-1462
Ictus Barr et al, supra; y Thompson, C. supra
Enfermedad renal poliquística Barr et al, supra; y Mondain et al
(1995) ORL J. Otorhinolaryngol. Relat. Spec. 57, 28-32
Glomerulonefritis Barr et al, supra
Osteoporosis Lynch et al(1994) J. Bon. Min. Res. 9, S352;
;Nicholson et al, (1995) Nature, 376, 37-43
Eritopoyesis / anemia aplásica Thompson, C. supra; Koury et al
(1990) Science, 248, 378-381
Degeneración hepática crónica Thompson, C, supra; Mountz et al,
(1994), Arthritis Rheum., 37, 1415-1420; Goldin et al, 1993)
Am.J. Phatol., 171, 73-76
Muerte de células T Thompson, C. supra; Ameison et al, (1995)
Trends Cell Biol. 5, 27-32
Osteoartritis –condrocitos Ishizaki et al, (1994), J. Cell Biol.,
126 1069-1077; Blanco et al, (1995), Am. J. Pathol., 146, 75-85
Calvicie de patrón masculino Mondain et al, supra; Seiberg et al.,
(1995) J. Invest Dermatol. 104, 78-82; Tamada et al., (1994)
Br. J. dermatol., 131, 521-524
Enfermedad de Alzheimer Savill, J., (1994) Eur. J. Clin. Invest,
24 715-723; Su et al, (1994), Neuroreport, 5, 2529-2533;
Johnson, E., (1994) Neurobiol. Aging, 15 suple 2, S187-S189
Enfermedad de Parkinson Savill, J. supra; Thompson, C. supra
Diabetes tipo I Barr et al., supra
Los efectos inhibidores de IL-1 y TNF de los compuestos de la presente invención se determinan por el siguiente ensayo in vitro:
Interleuquina - 1 (IL-1)
Se aíslan monocitos humanos de sangre periférica y purifican de preparaciones de sangre nueva de donantes voluntarios, o de linfa cuajada de bancos de sangre, conforme al procedimiento de Colotta et al., J. Immunol.,132, 936 (1984). Estos monocitos (1 x 10^{6} se siembran en placas de 24 pocillos en una concentración de 1 - 2 millones/ml por pocillo. Las células se dejan adherirse durante 2 horas, tiempo después del cual se separan las células no adherentes por lavado suave. Los compuestos de ensayo se añaden entonces a las células durante aproximadamente 1 hora antes de la adición de lipopolisacárido (50 ng/ml) y se incuban los cultivos a 37ºC durante otras 24 horas. Al finalizar este período, se separan los sobrenadantes de los cultivos y se aclaran de células y otros restos. Los sobrenadantes de los cultivos se ensayan entonces inmediatamente para determinar la actividad biológica de IL-1, bien por el procedimiento de Simon et al, J. Immunol. Methods, 84, (1985) (en base a la capacidad de IL-1 para estimular una línea de células que produzca IL-2 (EL-4) para secretar IL-2, en concierto con ionóforo A23187) o el procedimiento de Lee et al., J. ImmunoTherapy, 6(1), 1-12 (1990) (ensayo ELISA).
Factor de necrosis tumoral (TNF)
Se aíslan monocitos de sangre periférica humana y purificados de linfa cuajada de bancos de sangre o de residuos de feresis de plaquetas, conforme al procedimiento de Colotta, R., et al., J. Immunol., 132(2), 936 (1984). Los monocitos se cultivan a una densidad de 1 x 10^{6} células/ml de medio por pocillo en discos de 24 pocillos. Las células se dejan adherirse durante 1 hora después de que el sobrenadante se haya aspirado y añadido medio limpio (1 ml, RPMI-1640, Whitaker Biomedical Products, Whitaker, CA), que contenía suero de ternero fetal al 1% y penicilina y estreptomicina (10 unidades/ml). Las células se incuban durante 45 minutos en presencia o ausencia de un compuesto de ensayo en dosis que varían de 1 nM-10 mM (los compuestos se solubilizan en dimetil sulfóxido / etanol, tal que la concentración final de disolvente en el medio de cultivo sea 0,5% de dimetil sulfóxido /0,5% de etanol). Se añade entonces lipopolisacárido bacteriano (E. coli, 055:B5 [LPS] de Sigma Chemicals Co.) (100 ng/ml en 10 ml de solución salina tamponada con fosfato) y se incuban los cultivos durante 16-18 horas a 37ºC en un incubador de CO_{2} al 5%. Al finalizar el período de incubación, se separan los sobrenadantes del cultivo de las células, se centrifugan a 3.000 rpm para separar los restos celulares. Se ensaya entonces el sobrenadante para determinar la actividad TNF usando radioinmunoensayo o un ensayo ELISA, como se describe en el documento WO 92/10190 y por Becker et al., J. Immunol. 1991, 147, 4307.
La descripción anterior desvela totalmente la invención incluyendo realizaciones preferidas de la misma. Dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones se pueden realizar modificaciones y mejoras de las realizaciones desveladas de forma específica en la presente memoria. Sin más elaboración, se cree que un experto en la técnica puede, usando la descripción anterior, utilizar la presente invención en toda su amplitud. Por tanto, los ejemplos presentes se considerarán meramente ilustrativos y no limitantes del alcance de la presente invención en modo alguno. Las realizaciones de la invención en las que se reivindica una propiedad o privilegio exclusivo se definen a continuación.

Claims (11)

1. Un compuesto de fórmula (I) o una sale farmacéuticamente aceptable del mismo
3
en la que
R_{1} es hidrógeno o alquilo (C_{1}-C_{4});
R_{2} es alquilo (C_{1}-C_{10}), aril-alquilo (C_{1}-C_{4}) opcionalmente sustituido una a tres veces independientemente con hidroxi, halógeno, alquilo o alcoxi, heteroaril-alquilo (C_{1}-C_{4}), cicloalquilo (C_{3}-C_{7}), o R_{1} y R_{2} junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo de 3 a 10 miembros que opcionalmente contiene un heteroátomo adicional seleccionado de oxígeno, nitrógeno o azufre;
R_{3} y R_{4} son alquilo (C_{1}-C_{6}), hidrógeno, nitro o halógeno, y
R_{5} es alquilo (C_{1}-C_{6}), hidrógeno, arilalquilo o heteroarilalquilo;
siendo el heteroarilo de dicho heteroaril-alquilo (C_{1}-C_{4}) y dicho heteroarilalquilo un sistema de anillo aromático de 5 a 10 miembros en el que uno o más anillos contienen uno o más heteroátomos seleccionados del grupo constituido por N, O o S; y
siendo el arilo de dicho aril-alquilo (C_{1}-C_{4}) y dicho arilalquilo un anillo fenilo o naftilo.
2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{5} es bencilo sustituido.
3. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} es hidrógeno o metilo.
4. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R_{1} y R_{2} están unidos formando un anillo de cinco miembros que contiene nitrógeno.
5. El compuesto según la reivindicación 1, que es
5-clorosulfonil-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-bencilaminosulfonil-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(1-metil-3-fenilpropilamino)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-bencil-2-cianoetilamino)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(2-(3-piridil)etilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(2-furfurilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(2-isopropoxietilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(2-metoxietilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(2-tetrahidrofurfurilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(-)-5-[N-(cis-mirtanilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[(1-bencilpiperidinil-4-amino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(2-indanamino)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(ciclopropilmetilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(1,5-dimetilhexilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-metilbencilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[N-(3-(N-acetil-N-metilamino)pirrolidinil)sulfonil]-3,3-dicloro-2- oxoindol
5-[2-(1,2,3,4-tetrahidroisoquinolino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(decahidroisoquinolino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-metil-2-cianoetilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-metilcianometilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(pirrolidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-metilfenetilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(azaciclooctano) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(3-azabiciclo[3.2.2]nonano) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[1-(2-etoxicarbonilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(morfolino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(S)-(+)-5-[1-(2-metoximetilpirrolidinil)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-metil-2-(4-piridinil)etilamino) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[N-(N-metil-2-hidroxietilamino)sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(S)-(+)-5-[N-(2-hidroximetilpirrolidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(3-hidroxipirrolidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(3-aminocarbonilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(2-metilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(4-metilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[1-(4-hidroxipiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(2-(2-hidroxietil)piperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
(+/-)-5-[1-(3-hidroximetilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[1-(4-fenilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[1-(4-bencilpiperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-[1-(4-(1-piperidinil)piperidinil) sulfonil]-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-bencilaminosulfonil-N-metil-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-clorosulfonil-N-metil-3,3-dicloro-2-oxoindol
5-bencilaminosulfonil-N-metil-3,3-dicloro-2-oxoindol
N-metil-5-(1-piperidinilsulfonil)-3,3-dicloro-2-oxoindol
6. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su uso en terapia.
7. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
8. El uso de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en la fabricación de un medicamento para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de trastornos en los que es un factor el bloqueo de apóptosis excesiva o inapropiada.
9. El uso de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en la fabricación de un medicamento para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de trastornos asociados con una excesiva actividad IL-1\beta convertasa.
10. El uso de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en la fabricación de un medicamento para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de trastornos en los que es un factor el bloqueo o reducción de la producción de IL-1\beta y/o TNF.
11. El uso de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en la fabricación de un medicamento para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de trastornos en los que es un factor la inhibición de la producción de caspasa 3 y 7.
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6808902B1 (en) 1999-11-12 2004-10-26 Amgen Inc. Process for correction of a disulfide misfold in IL-1Ra Fc fusion molecules
EP1261364A1 (en) * 2000-02-10 2002-12-04 Wyeth Method of treating or inhibiting cellular injury or cell death
US9219708B2 (en) * 2001-03-22 2015-12-22 DialwareInc. Method and system for remotely authenticating identification devices
EP2295081B1 (en) 2001-06-26 2018-10-31 Amgen Inc. Antibodies to OPGL
AU2003225088A1 (en) * 2002-04-19 2003-11-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Regulation of tnf-alpha
CA2490409A1 (en) 2002-06-28 2004-01-08 Centocor, Inc. Mammalian ch1 deleted mimetibodies, compositions, methods and uses
KR101317045B1 (ko) 2002-09-06 2013-10-16 암젠 인코포레이티드 치료학적 인체 항-ｉｌ-1ｒ1 모노클로날 항체
RU2233326C1 (ru) * 2002-11-26 2004-07-27 Институт органической химии им. Н.Д. Зелинского РАН Способ ингибирования каспаз
RU2232809C1 (ru) * 2002-11-26 2004-07-20 Институт органической химии им. Н.Д. Зелинского РАН Способ прямого ингибирования каспаз
US20060251638A1 (en) * 2003-06-06 2006-11-09 Volkmar Guenzler-Pukall Cytoprotection through the use of hif hydroxylase inhibitors
BRPI0415616A (pt) * 2003-10-21 2006-12-12 Aga Ab uso do xenÈnio para a prevenção da morte programada da célula
US7256198B2 (en) 2004-02-18 2007-08-14 Wyeth Pyrimidoindolones and methods for using same
AU2005228950B2 (en) * 2004-03-23 2012-02-02 Genentech, Inc. Azabicyclo-octane inhibitors of IAP
RU2311180C2 (ru) * 2005-04-28 2007-11-27 Галина Викторовна Сукоян Средство для предотвращения прогрессирования апоптотических и купирования некротических изменений в тканях организма
SG10201500180RA (en) * 2009-05-29 2015-03-30 Xoma Us Llc CARDIOVASCULAR RELATED USES OF IL-1ß ANTIBODIES AND BINDING FRAGMENTS THEREOF
US20130109672A1 (en) * 2010-04-29 2013-05-02 The United States Of America,As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Service Activators of human pyruvate kinase
US12403181B2 (en) 2018-08-13 2025-09-02 Iltoo Pharma Combination of interleukin-2 with an interleukin 1 inhibitor, conjugates and therapeutic uses thereof
WO2023222565A1 (en) 2022-05-16 2023-11-23 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for assessing the exhaustion of hematopoietic stems cells induced by chronic inflammation
CN120661507B (zh) * 2025-08-25 2025-11-11 广州市老人院(加挂广州市第二老人院和广州市老年医院牌子) 1-((4-环己基苯基)磺酰基)-n-(4-氟苄基)-4-甲基哌啶-4-甲酰胺在制备治疗神经系统疾病药物中的应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5164404A (en) * 1991-03-15 1992-11-17 Neurosearch A/S Hydrazone derivatives and their use
EP0533226A3 (en) * 1991-08-16 1993-08-18 Merck & Co. Inc. Novel chromophore containing compounds
US5763220A (en) 1996-12-12 1998-06-09 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human apoptosis-related calcium-binding protein
AR016384A1 (es) * 1997-07-30 2001-07-04 Smithkline Beecham Corp Inhibidores de caspasas, composiciones farmaceuticas que comprenden dichos inhibidores de caspasas y uso de los inhibidores de caspasas para prepararun medicamento util para el tratamiento de apoptosis y desordenes asociados con excesiva actividad de la convertosa il-1 beta.

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