ES2199450T3

ES2199450T3 - Particulas, en particular micro- o nanoparticulas de proteinas vegetales reticuladas, su procedimiento de preparacion y composiciones cosmeticas, farmaceuticas o alimentarias que las contienen.

Info

Publication number: ES2199450T3
Application number: ES98937610T
Authority: ES
Inventors: Eric Perrier; Marie-Christine Levy; Patricia Lacazette; Chantal Buffevant
Original assignee: Coletica SA
Current assignee: BASF Beauty Care Solutions France SAS
Priority date: 1997-07-15
Filing date: 1998-07-10
Publication date: 2004-02-16
Anticipated expiration: 2018-07-10
Also published as: KR100505322B1; DE69814826T2; EP0966268A1; WO1999003450A1; JP2000514842A; KR20010029505A; DE69814826D1; JP4135995B2; EP0966268B1

Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A PARTICULAS. ESTAS PARTICULAS SE CARACTERIZAN PORQUE COMPRENDE AL MENOS EN SUPERFICIE UNA PARED FORMADA POR PROTEINAS VEGETALES RETICULADAS, EN PARTICULAR MEDIANTE UNA RETICULACION INTERFACIAL ENTRE LAS PROTEINAS VEGETALES Y UN AGENTE RETICULANTE POLIFUNCIONAL ACILANTE,QUE COMPRENDE AL MENOS DOS GRUPOS ACILANTES, QUE REALIZAN ENLACES COVALENTES ENTRE LAS FUNCIONES ACILABLES DE LAS PROTEINAS Y LOS GRUPOS ACILOS DEL AGENTES RETICULANTE POLIFUNCIONAL ACILANTE. ESTAS PARTICULAS SE UTILIZAN PARA LA FABRICACION DE UNA COMPOSICION COSMETICA, FARMACEUTICA, DERMATOLOGICA O ALIMENTARIA.

Description

Partículas, en particular micro- o nanopartículas de proteínas vegetales reticuladas, su procedimiento de preparación y composiciones cosméticas, farmacéuticas o alimentarias que las contienen.

La presente invención se relaciona esencialmente con partículas, concretamente con micro- o nanopartículas de proteínas vegetales entrecruzadas, con su procedimiento de preparación y con composiciones cosméticas, farmacéuticas o alimentarias que las contienen.

Técnica anterior

Es bien sabido que la encapsulación de substancias activas ofrece ventajas importantes, tales como, por ejemplo, la protección de la substancia o su liberación lenta o diferida en el sitio de utilización.

Para aplicaciones en los ámbitos cosméticos, farmacéuticos o alimentarios, los materiales más investigados como constituyentes de la pared son substancias naturales, en particular proteínas o polisacáridos, debido a su compatibilidad.

Determinados procedimientos de encapsulación que utilizan proteínas o polisacáridos derivan del método de policondensación interfásico descrito por Chang (Chang T.M.S., Science, 1964, 146, 524-525). Según este método bien conocido, se emulsiona una solución acuosa de una diamina en una fase hidrofóbica y se añade después una solución de un cloruro de diácido a la emulsión. Los grupos amina forman uniones amida con el dicloruro de ácido en la interfase, lo que da una membrana que individualiza las microcápsulas. Se dice que la reacción de policondensación se ve favorecida por la alcalinización de la fase acuosa, ya que la reacción libera ácido clorhídrico, el cual, en ausencia de agente alcalino, protona una parte de los grupos amina haciéndolos así no acilables. Ocurre lo mismo cuando la diamina es reemplazada por una proteína para formar microcápsulas de proteína entrecruzada. En los procedimientos descritos en la literatura anterior, la solución acuosa inicial de proteína es alcalinizada de forma que todos los grupos amina libres de la proteína estén en forma no protonada, acilable. Así, por ejemplo, el documento LEVY US-4.780.321 se refiere a la preparación de microcápsulas de paredes mixtas formadas por polisacáridos y proteínas entrecruzadas. La solución acuosa inicial de polisacárido y proteína es alcalina, preferiblemente de un pH>10. Igualmente, en el documento HUC 5.395.620, que se relaciona con microcápsulas con pared de atelocolágeno y glicosaminoglicanos entrecruzados, el pH de la solución acuosa inicial es preferiblemente básico, utilizando todos los ejemplos de esta patente un tapón carbonato de pH 9,8.

En el documento Mars FR-A-2.444.497, se utiliza una solución acuosa de proteína sin adición de substancias alcalinas o tampones. Sin embargo, la fase acuosa contiene una fuerte concentración de proteína, al menos igual al 20% (p/p), de tal manera que una parte sirve para neutralizar el HCl formado (función de tampón), mientras que la fracción no protonada es utilizada para la formación de la membrana.

El glutaraldehído puede ser también utilizado para la fabricación de partículas a partir de proteínas. El entrecruzamiento es, en general, efectuado, en medio neutro o alcalino. Así, por ejemplo, la seroalbúmina puede ser entrecruzada en solución al 20% en un tampón fosfato a pH 7,5 (Sheu M.T. y col., J. Parenter. Sci. Tech-nol., 1986, 40, 253-258) con un 1% de glutaraldehído. Sin embargo, el mecanismo de la reacción del glutaraldehído con las proteínas es complejo y sigue estando mal elucidado. Se dice que la reacción hace intervenir no solamente el glutaraldehído libre, sino también formas poliméricas procedentes de la condensación del glutaraldehído sobre sí mismo, pudiendo existir estos derivados en forma lineal o cíclica. La composición de las soluciones de glutaraldehído en estas diferentes formas reactivas es variable y depende de diversos factores, aunque la naturaleza de las uniones formadas y el grado de entrecruzamiento no están completamente controlados, lo que resulta un obstáculo para el desarrollo industrial (Saleh A.M. y col., Int. J. Pharm., 1989, 57, 205-210). Además, este agente entrecruzante muy reactivo puede interferir con diversos principios activos y disminuir así su biodisponibilidad (Gupta P.K. y Hung C.T., J. Microencapsulation, 1989, 6. 427-462). Finalmente, pueden estar presentes grupos aldehído libres sobre las partículas (Magee G.A. y col., J. Controlled Release, 1995, 37, 11-19). La presencia de tales grupos reactivos sobre partículas destinadas a uso humano no es deseable. Por ejemplo, se han observado efectos tóxicos de partículas vacías sobre macrófagos (Suunders J. y col., Int. J. Pharm., 1991, 68, 265-270).

Las proteínas citadas en los documentos de la literatura anterior son proteínas animales, no mencionándose en ningún lado la utilización de proteínas vegetales.

Si se aplican a preparaciones de proteínas vegetales disponibles comercialmente las condiciones descritas en los documentos anteriores donde la fase acuosa utilizada para disolver dichas proteínas vegetales es un tampón de carbonato de sodio a pH = 9,8, no es posible obtener microcápsulas estables. Las microcápsulas son obtenidas en una cantidad muy débil. Tienen una membrana frágil: una parte de ellas aparece frecuentemente abierta al examen microscópico. Forman numerosos agregados y se deterioran muy rápidamente en unos cuantos días a 45ºC en estado de suspensión acuosa. Ocurre lo mismo cuando se utilizan para disolver las proteínas vegetales tampones fosfato a pH comprendidos entre 7 y 8, o simplemente agua destilada.

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Igualmente, no se obtienen microcápsulas estables si se utilizan directamente preparaciones líquidas que contienen proteínas vegetales, tales como leches de soja comerciales sin tamponar, o si se tamponan por adición de carbonato de sodio o de fosfato de sodio.

Resumen de la invención

De forma totalmente inesperada, se ha descubierto que, si se utilizan para preparar las partículas soluciones de proteínas vegetales de pH próximos a la neutralidad o incluso ligeramente ácidos, es decir, en un rango de pH de aproximadamente 4,5 a aproximadamente 8, y que contienen al menos una sal de ácido carboxílico, en particular una sal alcalina o alcalinotérrea, preferiblemente una sal alcalina, se pueden entonces preparar partículas, concretamente micro- o nanopartículas estables de proteínas vegetales entrecruzadas. Tales soluciones de proteínas vegetales pueden ser obtenidas, o bien utilizando soluciones tampón que contienen dichas sales para extraer las proteínas contenidas en preparaciones de proteínas vegetales pulverulentas, o bien añadiendo dichas sales a preparaciones líquidas que contienen proteínas vegetales tales como leches de soja comerciales.

Este resultado es tanto más inesperado cuanto que los pH de estas soluciones son poco elevados y cuanto que las concentraciones de proteínas disueltas en la fase acuosa son débiles, siempre inferiores a aproximadamente un 5% en peso.

Fines de la invención

Así, la presente invención tiene principalmente por objeto resolver el nuevo problema técnico consistente en disponer de una solución que permita preparar partículas, concretamente micro- o nanopartículas, micro- o nanocápsulas, micro- o nanoesferas, estables a partir de proteínas vegetales.

La presente invención tiene aún por objeto principal resolver el nuevo problema técnico consistente en disponer de una solución que permita preparar partículas, concretamente micro- o nanopartículas, micro- o nanocápsulas, micro- o nanoesferas, estables a partir de proteínas vegetales, permitiendo al mismo tiempo eventualmente la encapsulación de una o varias substancias activas en estado de solución, de suspensión o de emulsión.

La presente invención tiene aún por objeto resolver los nuevos problemas técnicos antes citados con el uso de procedimientos de fabricación simples, utilizables a escala industrial, en particular en la industria cosmética, farmacéutica o alimentaria. Preferiblemente, esta solución debe permitir preparar partículas que tengan un tamaño de partícula regulable a voluntad, en particular en un rango de dimensiones que vaya del nanometro a varios milímetros, en particular de aproximadamente 10 nanometros a aproximadamente 3 mm.

Breve descripción de la invención

En el marco de la invención, se entiende por partícula una partícula de forma esencialmente esférica, que puede tener o bien una estructura vesicular, o bien una estructura homogénea. Las partículas comprenden, pues, cualquier esfera o cápsula. Para las partículas de estructura vesicular, que llevan un revestimiento externo distinto que forma una membrana alrededor del contenido, se habla generalmente de cápsulas y, en particular, de micro- o nanocápsulas, en el caso de una dimensión del orden del micrómetro o del nanometro, respectivamente. Para las partículas de estructura homogénea, monolítica, se habla habitualmente de esferas y, en particular, de micro- o de nanoesferas, en el caso de una dimensión del orden del micrómetro o del nanometro, respectivamente. El conjunto de estas partículas forma parte integrante de la presente invención.

Preferiblemente del mismo modo, esta solución debe permitir preparar partículas biocompatibles y biodegradables.

Así, según la presente invención, se ha descubierto de forma totalmente inesperada que se podían obtener partículas estables mediante una reacción de entrecruzamiento interfásico entre proteínas vegetales y un agente entrecruzante acilante polifuncional, en particular un haluro de diácido, preferiblemente un cloruro de diácido, en la interfase de las fases de una emulsión, en particular de tipo ``agua-en-aceite'' o ``aceite-en-agua''.

En el caso de una emulsión de tipo ``agua-en-aceite'', según un primer modo de realización de la invención, se emulsiona primeramente una fase acuosa que contiene las proteínas vegetales y al menos una sal de ácido carboxílico en una fase hidrofóbica y se añade después la solución de agente entrecruzante a la emulsión. Se constata entonces que se forman en la interfase gotitas acuosas de las membranas constituidas por moléculas entrecruzadas de la proteína vegetal.

Las partículas son suficientemente estables para resistir a una incubación prolongada en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa sin destrucción de su estructura.

Las partículas se lisan rápidamente en presencia de una proteasa, lo que demuestra su biodegradabilidad.

Según las condiciones elegidas para la emulsión, el tamaño de las partículas puede variar de menos de 1 micra, es decir, que son de tamaño nanométrico, por ejemplo utilizando un homogeneizador de alta presión, a varias centenas de micrómetros o incluso a uno o varios milímetros.

Se ha descubierto también que se pueden obtener partículas, en particular cápsulas, de proteínas vegetales entrecruzadas de gran tamaño, cuyo tamaño medio sobrepasa los 500 \mum, pudiendo una fracción de estas partículas tener un diámetro que sobrepase el milímetro. Para ello, es necesario dispersar la fase acuosa que contiene las proteínas vegetales y al menos una sal de ácido carboxílico en el seno de una fase hidrofóbica utilizando condiciones de agitación suave, eventualmente sin tensoactivo, de forma que se obtengan gotitas dispersas de un tamaño conveniente. Se procede luego a añadir agente entrecruzante de modo que se forme la membrana de proteínas entrecruzadas.

Se ha descubierto así mismo que se puede aumentar el diámetro medio de las partículas y la proporción de partículas de tamaño superior al mm incorporando a la fase acuosa, o a la fase hidrofóbica, o a una y a otra de las fases, antes de proceder a la emulsión, una pequeña cantidad de una substancia insoluble y lipofílica, tal como, por ejemplo, óxido de titanio u óxido de zinc o talco o estearato de calcio, o también un colorante insoluble en forma de pigmento o de laca.

También se ha descubierto que se podían obtener partículas llevando a cabo la reacción de entrecruzamiento en el seno de una emulsión de tipo ``aceite-en-agua''. En este caso, se emulsiona una fase hidrofóbica que contiene un agente entrecruzante polifuncional con al menos dos grupos acilantes, preferiblemente un haluro de diácido, en particular un cloruro de diácido, en el seno de una fase acuosa que contiene proteínas vegetales y al menos una sal de ácido carboxílico y que se utiliza como fase dispersante. Se deja proceder a la reacción en la interfase y se mantiene la agitación durante un tiempo conveniente. Se constata que se forma una membrana alrededor de las gotitas hidrofóbicas dispersas, obteniéndose así partículas con contenido hidrofóbico, que se constituyen en cápsulas.

Es así que, a partir de diversas preparaciones pulverulentas de proteínas vegetales disponibles comercialmente, tales como harinas, concentrados o aislados, se pueden obtener soluciones convenientes utilizando tampones, que incluyen, por ejemplo, acetato de sodio o succinato de sodio o citrato de sodio. Para preparar las soluciones de proteínas vegetales, se dispersa una muestra de la harina o del concentrado o del aislado en la solución tampón y se instaura una agitación, ayudándose eventualmente de calentamiento a una temperatura moderada, por ejemplo comprendida entre 30 y 50ºC. Después de un tiempo conveniente, generalmente comprendido entre 5 min y 30 min, se elimina la fracción insoluble, por ejemplo por centrifugación. Se utiliza entonces el sobrenadante que contiene las proteínas vegetales en solución en el tampón como fase acuosa para preparar partículas por entrecruzamiento interfásico por medio de agentes entrecruzantes, en particular haluros de diácidos.

Igualmente, la adición de al menos una sal alcalina de un ácido carboxílico, tal como acetato de sodio o citrato de sodio, a preparaciones liquidas de proteínas vegetales, tales como las leches de soja, da una fase acuosa que permite obtener partículas estables a partir de estas leches.

Se ha descubierto también que se podían obtener partículas de proteínas vegetales entrecruzadas de un tamaño muy pequeño, inferior al micrómetro, de tamaño intermedio, micrométrico, o de gran tamaño, es decir, con un diámetro próximo al milímetro o incluso que sobrepase el milímetro y que presentan una estabilidad y una resistencia mecánica elevadas. El diámetro medio de estas partículas, aquí microcápsulas o cápsulas, puede sobrepasar los 500 \mum e incluso alcanzar los 800 a 900 \mum, teniendo una fracción de las partículas entonces un diámetro que sobrepasa el milímetro.

Tales partículas de gran tamaño pueden ser obtenidas, por ejemplo, emulsionando una fase acuosa que contiene las proteínas vegetales y al menos una sal alcalina de un ácido carboxílico en el seno de una fase hidrofóbica, en condiciones compatibles con la obtención de gotitas dispersas de tamaño adecuado, especialmente utilizando condiciones suaves de agitación y eventualmente suprimiendo la adición de tensoactivo. Se obtienen entonces, de forma sorprendente, vesículas visibles a simple vista, cuya membrana es elástica y resiste a la presión y que permanecen estables durante tiempos prolongados a una temperatura de 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Además, se ha descubierto que, en las condiciones dadas, incluyendo las condiciones anteriores que dan partículas, microcápsulas o cápsulas de diámetro medio superior a 500 \mum, se puede aumentar el diámetro medio de las partículas y la proporción de partículas de diámetro superior a 1 mm incorporando a la fase acuosa o a la fase hidrofóbica o a una fase y a la otra, antes de proceder a la emulsión, una pequeña cantidad de una substancia insoluble y lipofílica, tal como, por ejemplo, óxido de titanio u óxido de zinc o estearato de calcio, o también un colorante insoluble en forma de pigmento o de laca. Cuando está en estado de emulsión, se pone la substancia insoluble lipofílica en la interfase aceite/agua y se estabilizan así las grandes gotitas, lo que permite un entrecruzamiento interfásico alrededor de estas grandes gotitas tras la adición posterior del agente entrecruzante. Se forma así una membrana que da partículas de un tamaño aumentado, en particular cápsulas y especialmente microcápsulas o cápsulas que tienen una dimensión del orden del milímetro, pudiendo incluso alcanzar los 2 mm ó 3 mm.

Las partículas obtenidas son perfectamente visibles a simple vista y, según la naturaleza de la substancia insoluble lipofílica utilizada, se presentan como vesículas de color blanco o del color de la substancia coloreada.

El acceso a partículas estables y sólidas de un gran tamaño y eventualmente coloreadas representa un progreso técnico importante. Por ejemplo, el hecho de que las partículas sean perfectamente visibles permite una verificación facilitada de la homogeneidad de las mezclas que contienen estas partículas cuando se las utiliza en estado de dispersión en diversos medios. Los controles de estabilidad de las preparaciones que las contienen están también facilitados.

Descripción detallada de la invención

Según un primer aspecto, la presente invención cubre partículas caracterizadas por tener al menos en superficie una pared formada por proteínas vegetales entrecruzadas, en particular por medio de un entrecruzamiento interfásico entre las proteínas vegetales y un agente entrecruzante polifuncional acilante, que tiene al menos dos grupos acilantes, formando uniones covalentes entre las unciones acilables de las proteínas y los grupos acilo del agente entrecruzante polifuncional acilante.

Las funciones acilables de las proteínas son, en particular, las funciones amina y los grupos hidroxilo, tiol y carboxilato.

En el marco de la invención, se puede utilizar cualquier proteína vegetal sin limitación. Igualmente, se puede utilizar cualquier agente entrecruzante polifuncional con al menos dos funciones acilantes sin limitación.

Según un modo de realización ventajoso de la invención, las proteínas vegetales antes citadas son extraídas especialmente de leguminosas, en particular de las plantas siguientes: altramuz (género Lupinus), soja (género Glycine), guisante (género Pisum), garbanzo (Cicer), alfalfa (Medicago), haba (Vicia), lenteja (Lens), judía (Phaseolus), colza (Brassica) o girasol (Helianthus); o también de cereales, como el trigo, el maíz, la cebada, la malta y la avena.

Según otro modo de realización ventajosa de la invención, las proteínas vegetales antes citadas son utilizadas en forma de preparaciones pulverulentas, tales como harinas, concentrados, aislados o preparaciones líquidas, tales como leches de soja.

Según otro modo de realización ventajoso de la invención, la solución acuosa utilizada para disolver las proteínas vegetales contenidas en las preparaciones pulverulentas es una solución acuosa tampón de pH comprendido entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 8.

Esta solución de pH comprendido entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 8 es preferiblemente obtenida con una sal de un ácido carboxílico, en particular una sal alcalina o alcalinotérrea de un ácido carboxílico. Preferiblemente, se utiliza una sal alcalina de un ácido carboxílico, en particular una sal de sodio o de potasio, preferiblemente de sodio, a una concentración en peso del 0,1% al 20%.

El ácido carboxílico antes citado puede tener un solo grupo carboxílico o varios de estos grupos. Los ácidos carboxílicos utilizables son, en particular, los ácidos acético, oxálico, malónico, succínico, glutárico, dimetilglutárico, adípico, fumárico, maleico, tartárico, málico, cítrico, láctico y salicílico.

Según otro modo de realización ventajoso de la invención, la concentración de proteína vegetal en la fase acuosa está comprendida entre el 0,5 y el 5% en peso.

Según otro modo de realización ventajoso de la invención, la cantidad de sal de ácido carboxílico a añadir a las preparaciones líquidas de proteínas vegetales, tales como la leche de soja está comprendida entre el 0,1% y el 20%, preferiblemente entre el 5 y el 15%, preferiblemente de aproximadamente el 10% en peso.

Según otro modo de realización ventajoso de la invención, la substancia insoluble lipofílica a incorporar a la fase acuosa o a la fase hidrofóbica o a una y otra fase para aumentar el tamaño de las partículas es seleccionada entre el grupo de las sales insolubles de ácidos grasos y de metales bivalentes, como el estearato de calcio o de magnesio, o talco u óxidos metálicos, tales como el óxido de titanio o el óxido de zinc, o substancias coloreadas insolubles en forma de pigmentos, tales como el Rojo DC 30, o en forma de lacas de calcio, de aluminio, de bario o de zirconio de diversos colorantes. Esta substancia insoluble lipofílica puede también estar presente en la masa de las partículas y/o adsorbida en la superficie de estas partículas.

Como ejemplos de sales insolubles de ácidos grasos utilizables, se citarán las sales de calcio, magnesio, estroncio o bario de ácidos carboxílicos de un número de carbonos igual o mayor de 12, tales como los ácidos láurico, mirístico, palmítico, esteárico, oleico o linoleico.

Como ejemplos de lacas utilizables, se citarán: la laca de indigocarmín aluminio (de color azul), la laca Ponceau 4 R de aluminio (rojo) o la laca Sunset amarillo FCF de aluminio (naranja).

Según otro modo de realización ventajoso de la invención, la cantidad de dicha substancia insoluble lipofílica a incorporar a la fase acuosa o a la fase hidrofóbica, o a una y otra fase, para aumentar el tamaño de las partículas, está comprendida entre el 0,01% y el 2% en peso de la fase en cuestión.

Según otro modo de realización ventajoso de la invención, el agente entrecruzante polifuncional acilante antes citado está preferiblemente constituido por un dihaluro de ácido o un dianhídrido de ácido. Como dihaluro de ácido, éste puede ser seleccionado entre el grupo consistente en dihaluro de ftaloílo, de tereftaloílo, de sebacoílo, de glutarilo, de adipoílo o de succinilo. Se prefiere utilizar un dicloruro de estos ácidos.

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Según un segundo aspecto, la presente invención cubre también la utilización de estas partículas para la fabricación de una composición cosmética, farmacéutica, y en particular dermatológica, o alimentaria.

Según un tercer aspecto, la presente invención cubre aún una composición cosmética, farmacéutica, especialmente dermatológica, o alimentaria que contiene tales partículas.

En estas composiciones, la proporción de incorporación de las partículas de la invención podrá variar dentro de amplios límites y estará comprendida, preferiblemente, entre el 0,01 y el 10% en peso con respecto al peso total de la composición final.

Según un cuarto aspecto, la presente invención cubre también un procedimiento de fabricación de las partículas antes citadas con pared formada por proteínas vegetales entrecruzadas, caracterizado por consistir en:

a) la formación de una solución acuosa de pH comprendido entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 8 que contiene, en solución, al menos una proteína vegetal y al menos una sal de ácido carboxílico;

b) la formación de una fase oleosa;

c) la formación de una emulsión por mezcla en agitación de la fase acuosa y de la fase oleosa anteriores;

d) el entrecruzamiento interfásico de dicha proteína vegetal con ayuda de un agente entrecruzante polifuncional acilante de al menos dos grupos acilantes durante un período de tiempo suficiente para obtener partículas que tienen al menos en superficie paredes formadas por proteínas vegetales entrecruzadas por dicho agente entrecruzante, y

e) si se desea, la separación de las partículas así preparadas.

Según otro modo de realización ventajoso del procedimiento de la invención, la solución acuosa antes citada es preparada a partir de preparaciones pulverulentas de proteínas vegetales utilizando un tampón de pH comprendido entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 8 que contiene una sal de ácido carboxílico a una concentración en peso comprendida, en general, entre el 0,1 y el 20%. Las sales de ácidos carboxílicos utilizadas para fabricar la solución acuosa tampón han sido descritas con anterioridad.

Como tampón actualmente preferido, se podrá utilizar un tampón obtenido con ayuda de un ácido carboxílico, preferiblemente biocompatible, por ejemplo seleccionado entre el grupo consistente en un acetato, un succinato o un citrato.

Según un modo de realización ventajoso de la invención, la solución acuosa antes citada es obtenida a partir de una preparación líquida de proteínas vegetales por adición de una sal de ácido carboxílico a una concentración en peso del 0,1% al 20%.

Según un modo de realización ventajoso de la invención, el agente entrecruzante polifuncional antes citado es seleccionado entre un dihaluro de ácido o un dianhídrido de ácido. Como se ha indicado anteriormente, el dihaluro es preferiblemente un dicloruro y se utilizará preferiblemente un ácido entre la lista antes indicada.

Según un modo de realización ventajoso de la invención, la razón utilizada del peso de agente entrecruzante al peso de la proteína es de 0,03 a 70 partes en peso de agente entrecruzante por parte en peso de proteína. La reacción de entrecruzamiento interfásico es ventajosamente llevada a cabo a una temperatura de entre 4 y 80ºC, preferiblemente de entre 15 y 30ºC, y a presión atmosférica.

Según un modo de realización ventajoso del procedimiento de la invención, se utilizará para formar la fase oleosa preferiblemente un solvente orgánico que pueda ser fácilmente eliminado, tal como ciclohexano o una mezcla de cloroformo/ciclohexano, en particular a una razón de 1:4 v/v, o bien preferiblemente un aceite biocompatible, en particular un aceite vegetal o mineral, o un éster, o una mezcla de ésteres de ácidos grasos, en particular un aceite de coco o cocoato de 2-etilhexilo.

Según un modo de realización particular de la invención, se realizará un procedimiento en emulsión de tipo agua-en-aceite.

Según otro modo de realización, se realizará un procedimiento en emulsión de tipo aceite-en-agua.

En el marco de cualquiera de los procedimientos de la invención, se podrá utilizar ventajosamente un agente tensoactivo para facilitar o estabilizar la emulsión, seleccionado entre un agente tensoactivo conocido para el experto en la técnica. Se utilizará, dentro del marco de la invención, preferiblemente un tensoactivo de tipo éster de sorbitol tal como el trioleato de sorbitol, comercializado bajo la denominación comercial Span 85® de la sociedad ICI.

Por otra parte, en el marco de la invención, se podrá utilizar un aditivo insoluble, tal como un pigmento, para obtener grandes partículas, en particular cápsulas, es decir, que tengan un tamaño al menos igual a aproximadamente 1 mm o incluso de 2 ó 3 mm. A modo de aditivo particularmente interesante dentro del alcance de la invención, se pueden citar, sin limitación, óxidos metálicos tales como óxido de titanio, óxido de zinc, talco o substancias coloreadas insolubles en forma de pigmentos o de lacas.

Dentro del marco de la invención, se pueden obtener así partículas que tienen una dimensión regulable a voluntad, desde los tamaños más pequeños hasta los grandes tamaños, es decir, de tamaño nanométrico hasta grandes tamaños superiores a 1 mm, es decir, que pueden ir hasta aproximadamente 2 mm o incluso 3 mm. La invención incluye también en la definición de las ``partículas'' cápsulas o esferas, especialmente nanocápsulas o nanoesferas y microcápsulas o microesferas.

Igualmente, las partículas obtenidas en el marco de la invención, en particular las microcápsulas, nanocápsulas o cápsulas, pueden tener indiferentemente un contenido acuoso u oleoso y presentan un aspecto satisfactorio. Son sólidas y fáciles de dispersar en diversos medios hidrofílicos o lipofílicos. Las partículas según la invención son estables a 45ºC en estado de suspensión acuosa, ya tengan un contenido acuoso o un contenido oleoso.

Se puede incorporar también igualmente en caso de los procedimientos de la invención diversas substancias en suspensión, por ejemplo pigmentos, o en solución, como por ejemplo un azúcar tal como glucosa, o en emulsión, por ejemplo un aceite, en particular un aceite de parafina.

Las partículas según la invención son también biodegradables, ya que pueden lisarse rápidamente por la acción de una enzima tal como la tripsina u otra enzima conocida para el experto en la técnica.

Para la fabricación de nanopartículas, nanoesferas o nanocápsulas, se podrá utilizar el procedimiento descrito en la solicitud anterior del solicitante FR-A-2 683 159 = WO 93/08908.

Se entiende que la invención permite producir partículas, en particular esferas o cápsulas, tales como nanoesferas o nanocápsulas, microesferas o microcápsulas, que permiten encapsular substancias, en particular principios activos, tales como principios activos lipófilos, tales como aceite vegetal, mineral o sintético, derivados de la vitamina A y de la vitamina E, etc., así como principios activos hidrófilos, tales como extractos vegetales, ácido ascórbico o vitamina C, PMG, glucosa, pigmentos orgánicos y pigmentos minerales.

La estabilidad de estas partículas bajo diferentes condiciones ha podido ser observada a temperaturas de entre 4ºC y 90ºC, para pH de 3 a 11. Así, se ha podido observar una estabilidad de duración superior a 6 meses a 45ºC, ya sea en medio seco o hidratado.

La biodegradación de las partículas ha sido demostrada con ayuda de diferentes enzimas, pudiendo ser estas enzimas tripsina, quimotripsina u otra proteasa.

Estas partículas son también perfectamente biocompatibles y no producen ninguna irritación cutánea u ocular y ninguna toxicidad oral.

Las partículas según la invención pueden ser utilizadas, cualquiera que sea su tamaño, en composiciones cosméticas para producir formulaciones de tipo emulsión de agua-en-aceite o aceite-en-agua, o geles hidrófilos, geles hidrófobos, champúes y geles de ducha.

Así, como se ha dicho anteriormente, estas partículas o cápsulas pueden ser utilizadas para preparar composiciones cosméticas, farmacéuticas, en particular dermatológicas, o alimentarias combinándolas con diversos ingredientes activos o excipientes conocidos para el experto en la técnica.

Otros fines, características y ventajas de la invención aparecerán claramente con ayuda de los ejemplos siguientes, dados simplemente a título ilustrativo y que no habrán de limitar en modo alguno el alcance de la invención. Los ejemplos forman parte integrante de la invención. Así, toda característica que parezca ser novedosa con respecto a un estado de la técnica cualquiera forma parte integrante de la invención en su función y su característica general. En los ejemplos, los porcentajes son dados en peso, salvo indicación en contrario. Además, la temperatura es la temperatura ambiente, o bien es expresada en grados Celsius, salvo indicación en contrario. La presión es la presión atmosférica, salvo indicación en contrario.

Ejemplo 1 de la invención

Preparación de microcápsulas de pared formada por proteínas de altramuz entrecruzadas a) Preparación de la fase acuosa:

Se dispersan 0,75 g de harina de altramuz (Harina ultrafina de altramuz blanco dulce (CANA) con un 45% de proteínas) en 15 ml de tampón acetato a pH 7,4. Se somete a agitación magnética durante 10 min, se centrifuga luego y se separa el sobrenadante.

b) Emulsión

Se dispersan 6 ml del sobrenadante en 30 ml de ciclohexano con un 2% de trioleato de sorbitán (Span 85®) con agitación durante 5 min a 2.000 rpm.

c) Entrecruzamiento

Se añaden 40 ml de una solución de cloruro de tereftaloílo al 5% (p/v) en una mezcla de cloroformo:ciclohexano (1:4 v/v). Después de agitar durante 30 min, se separan las microcápsulas por centrifugación y se lavan luego volviendo a suspender en ciclohexano, después en alcohol al que se ha añadido un 2% de polisorbato, después en alcohol al 95% y después en agua.

Se obtiene un sedimento blanco. El examen microscópico muestra bellas microcápsulas esféricas, transparentes, muy ligeramente manchadas, con membrana neta y regular, sólidas, de un tamaño comprendido entre 20 y 50 \mum.

Las microesferas están intactas después de 5 meses de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ejemplo 2 de la invención

Microcápsulas con pared formada de proteínas de altramuz entrecruzadas

Se reproduce el protocolo del ejemplo 1 substituyendo el tampón acetato a pH 7,4 por un tampón acetato a pH 6,8. Se obtiene igualmente un sedimento blanco formado por bellas microcápsulas esféricas, sólidas, de un tamaño comprendido entre 20 y 60 \mum. Las microcápsulas están intactas después de 16 semanas de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ejemplo 3 de la invención

Microcápsulas con pared formada por proteínas de altramuz entrecruzadas

Se reproduce el protocolo del ejemplo 1 substituyendo el tampón acetato a pH 7,4 por un tampón acetato a pH 5,9. Se obtiene igualmente un sedimento blanco formado por bellas microcápsulas esféricas, sólidas, de un tamaño comprendido entre 20 y 60 \mum. Las microcápsulas están intactas después de 16 semanas de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ejemplo 4 de la invención

Microcápsulas con pared formada de proteínas de altramuz entrecruzadas

Se reproduce el protocolo del ejemplo 1 substituyendo el tampón acetato a pH 7,4 por un tampón succinato a pH 6. Se obtienen bellas microcápsulas esféricas, sólidas, de un tamaño comprendido entre 10 y 50 \mum. Las microcápsulas están intactas después de 16 semanas de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ejemplo 5 de la invención

Microcápsulas con pared formada de proteínas de altramuz entrecruzadas

Se reproduce el protocolo del ejemplo 1 substituyendo el tampón acetato a pH 7,4 por un tampón citrato a pH 6. Se obtienen bellas microcápsulas esféricas, sólidas, de un tamaño comprendido entre 20 y 60 \mum. Las microcápsulas están intactas después de 15 semanas de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ejemplo 6 de la invención

Microcápsulas con pared formada de proteínas de guisante entrecruzadas

Se reproduce el protocolo del ejemplo 1 utilizando, en lugar de harina de altramuz, un aislado de proteínas de guisante (con un 90% de proteínas: Pisane HD® , COSUCRA). Se obtienen bellas microcápsulas esféricas, sólidas, de un tamaño comprendido entre 20 y 70 \mum. Las microcápsulas permanecen intactas después de 4 semanas de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ejemplo 7 de la invención

Microcápsulas con pared formada de proteínas de haba entrecruzadas

Se reproduce el protocolo del ejemplo 1 utilizando, en lugar de harina de altramuz, un concentrado de proteínas de haba (con un 50% de proteínas: Concentrat 50® , Gemef Industrie). Se obtienen bellas microcápsulas esféricas, sólidas, de un tamaño comprendido entre 20 y 60 \mum. Las microcápsulas permanecen intactas después de 4 meses de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ejemplo 8 de la invención

Microcápsulas con pared formada de proteínas de altramuz entrecruzadas a) Preparación de la fase acuosa:

Se dispersan 0,75 g de harina de altramuz (Harina ultrafina de altramuz blanco dulce (CANA) con un 45% de proteínas) en 15 ml de tampón acetato a pH 7,4, llevado a una temperatura de 35ºC. Se somete a agitación magnética durante 15 min, se centrifuga luego y se separa el sobrenadante.

b) Emulsión

Se dispersan 6 ml del sobrenadante en 30 ml de cocoato de 2-etilhexilo con un 2% de trioleato de sorbitán (Span 85®) con agitación durante 5 min a 2.000 rpm.

c) Entrecruzamiento

Se procede para el entrecruzamiento como se ha descrito en el ejemplo 1.

Se obtienen microcápsulas con un tamaño comprendido entre 20 y 60 \mum perfectamente esféricas.

Éstas resisten más de 14 semanas a una temperatura de 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ensayo de lisis en tripsina:

Se introducen 250 mg de microcápsulas húmedas en un tubo que contiene 7,5 ml de una solución al 0,4% de tripsina (tipo II-S, de páncreas porcino, Sigma) en un tampón a pH 7,5. Se incuba el tubo a 37ºC y se instaura una agitación magnética. Se sigue la lisis por examen microscópico hasta la desaparición completa de las microcápsulas.

Resultado: las microcápsulas han desaparecido por completo después de 20 minutos.

Ejemplo 9 de la invención:

Microcápsulas con pared formada de proteínas de altramuz entrecruzadas que contienen un principio activo hidrosoluble a) Preparación de la fase acuosa:

Se dispersan 0,75 g de harina de altramuz (Harina ultrafina de altramuz blanco dulce (CANA) con un 45% de proteínas) en 15 ml de tampón succinato a pH 6 llevado a una temperatura de 35ºC. Se instaura una agitación magnética durante 15 min, se centrifuga luego y se separa el sobrenadante. Se disuelve glucosa en el sobrenadante a una concentración del 3%.

Se opera luego para la emulsión y el entrecruzamiento como se ha descrito en el ejemplo 8.

Se separan las microcápsulas por centrifugación y se lavan después varias veces con cocoato de etilhexilo. Se obtienen microcápsulas perfectamente formadas, de un tamaño comprendido entre 20 y 70 \mum, que contienen glucosa.

Ejemplo 10 de la invención:

Microcápsulas con pared formada de proteínas de guisante entrecruzadas

Se reproduce el protocolo descrito en el ejemplo 8 substituyendo la harina de altramuz por un aislado de proteínas de guisante (con un 90% de proteínas: Pisane HD®, Cosucra) y substituyendo el tampón acetato a pH 7,4 por un tampón succinato a pH 6.

Se obtienen microcápsulas esféricas de un tamaño comprendido entre 10 y 60 \mum, que resisten más de 8 semanas a una temperatura de 45ºC en estado de suspensión acuosa. Estas microcápsulas son lisadas en tripsina en las condiciones descritas en el ejemplo 8, en 8 min.

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Ejemplo 11 de la invención:

Microcápsulas con pared formada de proteínas de haba entrecruzadas

Se reproduce el protocolo descrito en el ejemplo 8 substituyendo la harina de altramuz por un concentrado de proteínas de haba (con un 50% de proteínas: Concentrat 50® , Gemef Industrie). Se obtienen microcápsulas esféricas de un tamaño comprendido entre 10 y 50 \mum, que resisten más de 8 semanas a una temperatura de 45ºC en estado de suspensión acuosa. Las microcápsulas son lisadas en tripsina en las condiciones descritas en el ejemplo 8, en 75 min.

Ejemplo 12 de la invención:

Microcápsulas de proteínas de haba entrecruzadas de gran tamaño

Se reproduce el protocolo descrito en el ejemplo 11 substituyendo el tampón acetato por tampón citrato a pH 6, suprimiendo la adición de trioleato de sorbitán y disminuyendo la velocidad de agitación a 600 rpm. Se obtiene un sedimento voluminoso de cápsulas opacas, visibles a simple vista y que sedimentan rápidamente.

El análisis del tamaño de 300 cápsulas, realizado al microscopio con un ocular provisto de una escala micrométrica, da un margen de tamaño comprendido entre 217 y 1.643 \mum, con un diámetro medio de 735 \mum y una proporción del 18% de las microcápsulas de un tamaño superior al mm.

Se observa que la membrana de las microcápsulas es elástica y sólida: si se ejerce una presión sobre la laminilla de observación microscópica, el diámetro de las microcápsulas aumenta mientras se ejerce la presión, para volver a recuperar su valor inicial cuando la presión cesa.

Las microcápsulas están intactas después de 7 semanas de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ejemplo 13 de la invención:

Microcápsulas de proteínas de haba entrecruzadas: aumento del tamaño por adición de óxido de titanio a la fase hidrofóbica

Se reproduce el protocolo descrito en el ejemplo 12 dispersando un 0,1% de óxido de titanio en la fase oleosa antes de la emulsión. Se obtienen microcápsulas de membrana sólida y elástica que sedimentan rápidamente.

El análisis del tamaño, efectuado como en el ejemplo 12, da un margen de tamaño de 217 a 2.170 \mum, con un diámetro medio de 899 \mum y una proporción del 43% de las microcápsulas de un tamaño superior al mm.

Este ejemplo demuestra que la adición de óxido de titanio a la fase oleosa permite aumentar de forma importante el diámetro medio de las microcápsulas y la proporción de microcápsulas de tamaño superior al mm.

Ejemplo 14 de la invención:

Microcápsulas de proteínas de altramuz entrecruzadas: aumento del tamaño por adición de colorante Rojo DC 30 a la fase acuosa

Se reproduce el protocolo descrito en el ejemplo 8 substituyendo el tampón acetato por tampón succinato a pH 6, dispersando en la fase acuosa un 0,1% de pigmento Rojo DC 30, suprimiendo el trioleato de sorbitán y disminuyendo la velocidad de agitación a 600 rpm. Se obtiene un sedimento formado por vesículas de color rojo, esféricas. Se observa que la membrana es elástica y sólida: si se ejerce una presión sobre la laminilla de observación microscópica, el diámetro de las microcápsulas aumenta mientras se ejerce la presión, para volver a tomar su valor inicial cuando la presión cesa.

Las microcápsulas están intactas después de 3 meses de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa. Estas microcápsulas son lisadas por la tripsina en 12 min en las condiciones descritas en el ejemplo 8.

Un ensayo comparativo efectuado en condiciones idénticas, pero omitiendo la adición del pigmento Rojo DC 30, da microcápsulas de diámetro muy netamente inferior, con un margen de tamaño de 150 a 800 \mum, un diámetro medio de 322 \mum y ninguna cápsula de diámetro superior al mm.

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Ejemplo 15 de la invención:

Microcápsulas de proteínas de altramuz entrecruzadas de gran tamaño obtenidas por adición de laca de indigocarmín a la fase acuosa

Se reproduce el protocolo seguido en el ejemplo 14 substituyendo el pigmento Rojo DC 30 por la laca: laca de indigocarmín aluminio (Colorcon). Se obtienen microcápsulas coloreadas de azul con membrana sólida y elástica. Las microcápsulas están intactas después de 5 semanas de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

El análisis del tamaño da un margen de tamaño de 217 a 1.023 \mum, un diámetro medio de 536 \mum y una proporción de un 0,3% de microcápsulas de tamaño superior al mm.

Ejemplo Nº 16:

Microcápsulas de proteínas de altramuz entrecruzadas de gran tamaño obtenidas por adición de estearato de calcio a la fase acuosa

Se reproduce el protocolo descrito en el ejemplo 14 substituyendo el pigmento Rojo DC 30 por estearato de calcio. Se obtienen microcápsulas blancas, que permanecen intactas después de 3 semanas de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

El análisis del tamaño da un margen de tamaño de 279 a 1.240 \mum, un diámetro medio de 679 \mum y una proporción del 7% de las microcápsulas de un tamaño superior al mm.

Ejemplo 17 de la invención:

Microcápsulas de proteínas de altramuz entrecruzadas de gran tamaño obtenidas por adición de talco a la fase acuosa

Se reproduce el protocolo descrito en el ejemplo 14 substituyendo el pigmento Rojo DC 30 por talco. Se obtienen microcápsulas blancas que permanecen intactas después de 7 semanas de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

El análisis del tamaño da un margen de tamaño de 217 a 1.147 \mum, un diámetro medio de 666 \mum y una proporción del 5% de las microcápsulas de un tamaño superior al mm.

Ejemplo 18 de la invención:

Microcápsulas de proteínas de altramuz entrecruzadas de gran tamaño obtenidas por adición de óxido de titanio a la fase acuosa

Se reproduce el protocolo descrito en el ejemplo 14 substituyendo el pigmento Rojo DC 30 por óxido de titanio. Se obtienen microcápsulas blancas. El análisis del tamaño, efectuado como en el ejemplo 12, da un margen de tamaño de 248 a 1.271 \mum, un diámetro medio de 620 \mum y una proporción del 2% de las microcápsulas de un tamaño superior al mm.

Ejemplo 19 de la invención:

Microcápsulas de proteínas de altramuz entrecruzadas de gran tamaño obtenidas por adición de óxido de titanio a la fase hidrofóbica

Se reproduce el protocolo descrito en el ejemplo 18 incorporando óxido de titanio, no a la fase acuosa, sino a la fase hidrofóbica y utilizándolo a una concentración del 0,05%. Se obtienen microcápsulas blancas. El análisis del tamaño da un margen de tamaño de 155 a 1.674 \mum, un diámetro medio de 679 \mum y una proporción del 17% de las microcápsulas de un tamaño superior al mm.

Ejemplo Nº 20:

Se reproduce el protocolo descrito en el ejemplo 19 utilizando óxido de titanio a una concentración del 0,1%. Se obtienen microcápsulas blancas. El análisis del tamaño da un margen de tamaño de 217 a 1.860 \mum, un diámetro medio de 852 \mum y una proporción del 37% de las microcápsulas de un tamaño superior al mm.

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Ejemplo 21 de la invención:

Microcápsulas de proteínas de altramuz entrecruzadas de gran tamaño obtenidas por adición de óxido de titanio a la fase acuosa y a la fase hidrofóbica

Se reproduce el protocolo descrito en el ejemplo 20 incorporando óxido de titanio a una concentración del 0,05% a la fase acuosa y del 0,05% a la fase hidrofóbica.

Se obtienen microcápsulas blancas. El análisis de tamaño da un margen de tamaño de 248 a 1.798 \mum, un diámetro medio de 825 \mum y una proporción del 26% de las microcápsulas con un tamaño superior al mm.

Ejemplo 22 de la invención:

Microcápsulas de proteínas de guisante entrecruzadas de gran tamaño obtenidas por adición de óxido de titanio a la fase hidrofóbica

Se reproduce el protocolo descrito en el ejemplo 10, suprimiendo el trioleato de sorbitán, disminuyendo la velocidad de agitación a 1.000 rpm e incorporando el óxido de titanio a la fase hidrofóbica a una concentración del 0,1%. Se obtienen microcápsulas blancas. El análisis de tamaño da un margen de tamaño de 144 a 1.147 \mum, un diámetro medio de 565 \mum y una proporción del 6% de las microcápsulas con un tamaño superior al mm.

Un ensayo comparativo efectuado en condiciones idénticas, pero omitiendo la adición de óxido de titanio, da microcápsulas de diámetro muy claramente inferior, con un margen de tamaño de 124 a 868 \mum, un diámetro medio de 345 \mum y ninguna cápsula de diámetro superior al mm.

Ejemplo 23 de la invención:

Microcápsulas de proteínas de altramuz entrecruzadas con contenido oleoso - Preparación de la fase acuosa:

Se dispersan 2 g de harina de altramuz en 40 ml de tampón succinato a pH 6, llevado a una temperatura de 35ºC. Se somete a agitación magnética durante 15 min, se centrifuga después y se separa el sobrenadante.

- Preparación de la fase oleosa:

se añaden a 6 ml de aceite de parafina fluido 0,3 ml de cloruro de sebacoílo.

- Emulsión-entrecruzamiento:

Se dispersa la fase oleosa en 30 ml de la fase acuosa por agitación a 5.000 rpm y se deja proceder a la reacción de entrecruzamiento durante 60 min. Se lavan luego las microcápsulas varias veces con agua destilada.

Se obtiene un sobrenadante formado por microcápsulas bien formadas, esféricas, de un tamaño de 10-150 \mum. Todo el aceite es encapsulado. Las microcápsulas están intactas después de 3 meses de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ejemplo 24 de la invención:

Microcápsulas de proteínas de haba entrecruzadas con contenido oleoso

Se aplica el protocolo descrito en el ejemplo 23 substituyendo la harina de altramuz por la preparación de proteínas de haba: Concentrat 50® , y utilizando el tampón acetato a pH 7,4 en lugar del tampón succinato a pH 6. Se obtiene un sobrenadante formado por microcápsulas bien formadas, de un tamaño de 30-150 \mum. Todo el aceite es encapsulado.

Las microcápsulas están intactas después de 2 meses de conservación en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ejemplo 25 de la invención:

Microcápsulas preparadas a partir de leche de soja a) Preparación de la fase acuosa:

Se disuelve 1 g de acetato de sodio trihidrato en 1 ml de agua destilada y se mezcla esta solución con 10 ml de leche de soja Bjorg® (Distriborg).

b) Emulsión

Se dispersan 6 ml de fase acuosa en 30 ml de ciclohexano con un 2% de trioleato de sorbitán con agitación durante 5 min a 2.000 rpm.

c) Entrecruzamiento

Se añaden 40 ml de una solución de cloruro de tereftaloílo al 5% (p/v) en una mezcla de cloroformo:ciclohexano (1:4 v/v). Después de agitar durante 30 min, se separan las microcápsulas por centrifugación y se lavan luego como se describe en el ejemplo 1.

Se obtiene tras la centrifugación un importante sedimento blanco crema. El examen microscópico muestra bellas microcápsulas esféricas con un contenido finamente manchado, de membrana neta, de un tamaño de 10-70 \mum. Incubadas en estufa a 45ºC, las microcápsulas siguen intactas después de un año de conservación en estado de suspensión acuosa, después de 8 meses y medio en estado de suspensión en un gel de Carbopol o de xantano o en aceites de silicona o de cacahuete gelificados, o en una microemulsión lipídica gelificada.

Se realizaron estudios toxicológicos y éstos forman el objeto del ejemplo 43.

Ejemplo 26 de la invención:

Preparación de microcápsulas a partir de leche de soja

Se aplica el protocolo descrito en el ejemplo 25 substituyendo la leche de soja BJORG por leche de soja CE-REAL®. Se obtienen microcápsulas esféricas de un tamaño de 10-60 \mum, intactas después de 5 meses y medio de permanencia en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ejemplo 27:

Preparación de microcápsulas a partir de leche de soja

Se aplica el protocolo descrito en el ejemplo 25 substituyendo la leche de soja BJORG por leche de soja GAY-LORD HAUSER®. Se obtienen microcápsulas esféricas de un tamaño de 10-70 \mum, intactas después de 5 meses y medio de permanencia en estufa a 45ºC en estado de suspensión acuosa.

Ejemplo 28 de la invención:

Preparación de microcápsulas a partir de leche de soja

Se aplica el protocolo descrito en el ejemplo 25 substituyendo el acetato de sodio por citrato de sodio dihidrato añadido a razón de 0,65 g por 1 ml de agua, dispersando en la fase acuosa previamente llevada a una temperatura de 35ºC un 0,1% de óxido de titanio, substituyendo el ciclohexano por cocoato de 2-etilhexilo, suprimiendo la adición de trioleato de sorbitán y disminuyendo la velocidad de agitación a 600 rpm.

Se obtiene un sedimento voluminoso blanco formado por bellas microcápsulas de membrana sólida y elástica de un tamaño de 100-900 \mum.

Ejemplo 29 de la invención:

Microcápsulas preparadas a partir de leche de soja y que contienen una emulsión de aceite a) Preparación de la fase acuosa:

Se disuelven 2 g de acetato de sodio trihidrato en 2 ml de agua destilada y se mezcla esta solución con 20 ml de leche de soja Bjorg® .

b) Primera emulsión:

Aceite/Agua

Se dispersan 5 ml de aceite de parafina fluida en 15 ml de la fase acuosa anterior por agitación durante 5 min a 5.000 rpm.

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c) Segunda emulsión:

Agua/Aceite

Se toman 6 ml de la emulsión precedente y se dispersan en 30 ml de cocoato de 2-etilhexilo con un 1% de trioleato de sorbitán con agitación durante 5 min a 1.200 rpm.

d) Entrecruzamiento

Se añaden 40 ml de una solución de cloruro de tereftaloílo al 5% (p/v) en cocoato. Después de agitar durante 30 min, se separan las microcápsulas por centrifugación y se lavan luego como se describe en el ejemplo 1.

Se obtienen microcápsulas de un tamaño de 10-100 \mum, que encierran gotitas refringentes de aceite de parafina.

Ejemplo 30 de la invención:

Preparación de microcápsulas con contenido oleoso a partir de leche de soja a) Preparación de la fase acuosa:

Se disuelven 5 g de acetato de sodio trihidrato en 5 ml de agua destilada y se mezcla esta solución con 50 ml de leche de soja Bjorg®.

b) Preparación de la fase oleosa:

Se añaden a 12 ml de aceite de parafina fluido 0,6 ml de cloruro de sebacoílo.

c) Emulsión-entrecruzamiento:

Se dispersa la fase oleosa en la fase acuosa con agitación a 5.000 rpm y se deja que la reacción de entrecruzamiento proceda durante 60 min. Se lavan luego las microcápsulas varias veces con agua destilada.

Se obtiene un sobrenadante de color crema formado por microcápsulas bien formadas, esféricas, de un tamaño de 100-200 \mum. Todo el aceite está encapsulado.

Incubadas en la estufa a 45ºC, las microcápsulas están intactas al cabo de 8 meses de conservación en estado de suspensión acuosa y de 2 meses y medio en estado de suspensión en aceites de silicona o de cacahuete gelificados.

Ejemplo 31 de la invención:

Preparación de nanocápsulas con pared de proteínas vegetales a) Fabricación de la solución de proteínas vegetales necesaria para la fabricación de las nanocápsulas

Se dispersan 200 g de harina de altramuz en 4 L de tampón succinato a pH 6 llevado a una temperatura de 35ºC. Después de someter a agitación magnética durante 15 min, se centrifuga la solución y se recupera el sobrenadante. Se utiliza para las etapas siguientes.

b) Preparación de la fase oleosa

Se añaden 30 ml de cloruro de sebacoílo a 100 ml de aceite de parafina fluida. Se efectúa la mezcla a temperatura ambiente y se utiliza la solución homogénea para las etapas siguientes.

c) Emulsión/entrecruzamiento

Se añaden las soluciones preparadas en a) y b) de forma continua y se llevan en un homogeneizador de alta presión a una presión de homogeneización comprendida entre 300 y 1.200 bares, por ejemplo 800 bares. Las nanocápsulas obtenidas son de tamaños inferiores a 1 micra, son notablemente estables y son utilizables en un gran número de formulaciones cosméticas, incluyendo las formulaciones cosméticas hidratadas, sin problemas de degradación en el curso del tiempo. Se visualizan como intactas después de un mes de conservación en estufa a 45ºC.

Ejemplo 32 de la invención:

Los 100 ml de aceite de parafina fluido utilizados en el ejemplo 31-b) pueden ser substituidos ventajosamente por una cantidad de 100 a 500 ml de aceite de parafina fluida.

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Ejemplo 33 de la invención:

Los 100 ml de aceite de parafina fluido utilizados en el ejemplo 31-b) pueden ser substituidos ventajosamente por 100 ml de miristato de etilo, ó 100 ml de miristato de isopropilo, ó 100 ml de oleato de etilo, ó 100 ml de acetato de vitamina E, ó 100 ml de palmitato de vitamina A, ó 100 ml de benzoato de bencilo. Se puede encapsular igualmente cualquier otro principio activo oleoso o aceite vegetal o combinación de estos últimos de esta forma.

Ejemplo 34 de la invención:

Es posible substituir la fase a) del ejemplo 31 por la preparación siguiente: 200 g de concentrado de proteínas de haba, dispersos en 41 de tampón acetato a pH 7,4. Después de mezclar y de calentar ligeramente durante 15 min a 35ºC, se centrifuga la solución y se utiliza el sobrenadante para seguir el proceso.

Ejemplo 35 de la invención:

Preparación de nanoesferas con pared de proteínas vegetales a) Fabricación de la mezcla necesaria para la fabricación de las nanoesferas

Se dispersan 75 g de harina de altramuz (harina ultrafina de altramuz blanco dulce (CANA) con un 45% de proteínas) en 1,5 L de tampón acetato a pH 7,4. Después de agitar a temperatura ambiente durante 10 min, se centrifuga la solución y se utiliza el sobrenadante para continuar el proceso.

b) Preparación del agente entrecruzante

Se trituran 400 g de cloruro de tereftaloílo en un mortero y se añaden a un litro de vaselina viscosa CODEX. Se agita el conjunto por agitación mecánica.

c) Emulsión

Se introducen 61 de aceite de vaselina viscosa CODEX (índice de viscosidad: 250 centipoises) en una cuba con agitación y se añaden 320 ml de un tensoactivo (por ejemplo, hidroxiisoestearato de glicerol sorbitán ARLACEL 780, ICI) al conjunto. Se agita el conjunto durante varios minutos. Se introduce entonces 1 kg de la solución preparada en a) con agitación, realizándose la emulsión en unos cuantos minutos a 20.000 rpm con ayuda de un Ultra-Turax.

d) Entrecruzamiento

Se introduce entonces la solución que contiene el agente entrecruzante preparado en la etapa b) en la emulsión, se añaden luego igualmente las partículas sólidas presentes en ésta y se disolverán a lo largo del tiempo. Después de 5 min de agitación a 20.000 rpm con ayuda del Ultra-Turax, se somete la solución a agitación mecánica a una velocidad de rotación reducida durante 18 h al menos a temperatura ambiente. Se separan las nanoesferas por centrifugación discontinua y se elimina el sobrenadante (4.000 rpm durante 15 min).

e) Lavado

Se lavan las nanoesferas mediante lavados sucesivos realizados con ayuda de una fase orgánica miscible con el aceite de vaselina. Cítense, por ejemplo, el DRAGOXAT® (DRAGOCO), el miristato de isopropilo (STEARINERIE DUBOIS) y triglicéridos de cadena media (STEARINERIE DUBOIS). En el curso de cada lavado, se añaden 100 ml de nanocápsulas a 500 ml de fase orgánica. Se agita el conjunto durante varios minutos y se centrifuga después (4.000 rpm durante 15 min). Se pueden suspender las nanoesferas obtenidas, por ejemplo en geles de proteína o de polisacáridos, en una fase oleosa o en un gel de polímeros carboxivinílicos (carbómero).

Ejemplo 36 de la invención:

Preparación de nanoesferas que contienen un principio activo hidrosoluble o insoluble

Se procede como se ha descrito en el ejemplo 35, salvo por el hecho de que se pueden añadir a la solución fabricada en a) numerosos principios activos, por ejemplo glucosa; un aminoácido tal como glutamina, serina, glicina, cisteína; principios activos tales como cafeína o teofilina, y extractos de plantas, como los extractos de Gingko biloba, de centella asiática o de castaño de indias.

Ejemplo 37 de la invención

Se procede como se ha descrito en el ejemplo 36. Sin embargo, la preparación de la fase descrita en a) es modificada de la forma siguiente:

37-A) Substitución del tampón acetato a pH 7,4 por un tampón acetato a pH 6,8.

37-B) Substitución del tampón acetato a pH 7,4 por un tampón acetato a pH 5,9.

37-C) Substitución del tampón acetato a pH 7,4 por un tampón succinato a pH 6.

37-D) Substitución del tampón acetato a pH 7,4 por un tampón citrato a pH 6.

37-E) Substitución de la harina de altramuz por un aislado de proteínas de guisante.

38-F) Substitución de la harina de altramuz por un concentrado de proteínas de haba (con un 50% de proteínas: Concentrat 50® de GEMEF INDUSTRIE).

Ejemplo 38 de la invención:

Emulsión de agua-en-aceite para uso cosmético o farmacéutico

Utilización de las micropartículas o nanopartículas en formulaciones de tipo agua-en-aceite

Formulación 38-A
A	Agua	csp 100
	Butilenglicol	2
	Glicerina	3
	Dihidroxicetilfosfato de sodio	2
	Isopropil hidroxicetil éter

B	Estearato de glicol SE	14
	Triisononanoína	5
	Cocoato de octilo	6

C	Butilenglicol	2
	Metilparabén
	Etilparabén
	Propilparabén
	pH ajustado a 5,5

D	Productos de la invención	0,01-10%

Formulación 38-B
A	Agua	csp 100
	Butilenglicol	2
	Glicerina	3
	Poliacrilamida	2,8
	Isoparafina
	Laureth-7

B	Butilenglicol	2
	Metilparabén
	Etilparabén
	Propilparabén
	Fenoxietanol	0.5
	Metilparabén
	Propilparabén
	Butilparabén
	Etilparabén

	Butilenglicol	0.5
C	Productos de la invención	0,01-10%

Formulación 38-C
A	Carbómero	0,50
	Propilenglicol	3,00
	Glicerol	5,00
	Agua	csp 100

B	Cocoato de octilo	5,00
	Bisabolol	0,30
	Dimeticona	0,30

C	Hidróxido de sodio	1,60

D	Fenoxietanol	0,50
	Metilparabén
	Etilparabén
	Propilparabén
	Butilparabén

E	Perfume	0,3
	Producto de la invención	0,01-10%

Ejemplo 39 de la invención:

Emulsión de aceite-en-agua para uso cosmético o farmacéutico

Utilización de las micropartículas y nanopartículas en una formulación de tipo aceite-en-agua

A	Dipolihidroxiestearato de PEG 30	3
	Triglicéridos cápricos	3
	Octanoato de cetearilo	4
	Adipato de dibutilo	3
	Aceite de pepita de uva	1,5
	Aceite de jojoba	1,5
	Fenoxietanol	0,5
	Metilparabén
	Etilparabén
	Propilparabén
	Butilparabén

B	Glicerina	3
	Butilenglicol	3
	Sulfato de magnesio	0,5
	EDTA	0,05
	Agua	csp 100

C	Ciclometicona	1
	Dimeticona	1

D	Perfume	0,3

E	Producto de la invención	0,01-10%

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Ejemplo 40 de la invención:

Composición cosmética

Utilización de las micropartículas y nanopartículas en una formulación de tipo champú o gel de ducha

A	Goma xantano	0,8
	Agua	csp 100

B	Fenoxietanol	0,5
	Metilparabén
	Etilparabén
	Propilparabén
	Butilparabén

	Butilenglicol	0,5
	Metilparabén
	Etilparabén
	Propilparabén

C	Ácido cítrico	0,8

D	Laureth sulfato de sodio	40,0

E	Producto de la invención	0,01-10%

Ejemplo 41 de la invención:

Composición cosmética

Utilización de las micropartículas y nanopartículas en una formulación de tipo carmín de labios y otros productos anhidros

A	Cera mineral	17,0
	Isoestearato de isoestearilo	31,5
	Dipelargonato de propilenglicol	2,6
	Isoestearato de propilenglicol	1,7
	PEG 8 Cera de abejas	3,0
	Aceite de almendra de palma hidrogenado	3,4
	Glicéridos, glicérido de palma hidrogenado
	Aceite de lanolina	3,4
	Aceite de sésamo	1,7
	Tribehenina	1,7
	Lactato de cetilo	1,7
	Aceite mineral, alcohol de lanolina	3,0

B	Aceite de ricino	csp 100

	Dióxido de titanio	3,9
	CI 15850:1	0,616
	CI 45410:1	0,256
	CI 19140:1	0,048
	CI 77491	2,048

C	Producto de la invención	0,01-5

Ejemplo 42 de la invención:

Composición cosmética

Utilización de las micropartículas y nanopartículas en una formulación de geles acuosos (contornos de ojos, adelgazantes, etc.)

Agua	csp 100

Carbómero	0,5

Butilenglicol	15

Fenoxietanol	0,5
Metilparabén
Etilparabén
Propilparabén
Butilparabén
Producto de la invención	0,01-10

Ejemplo 43 de la invención:

Estudios toxicológicos realizados sobre los productos del ejemplo 25 de la invención a) Toxicidad oral

Las pruebas fueron efectuadas siguiendo el protocolo según la línea directriz de la OCDE concerniente al estudio de la toxicidad oral aguda (nº 401 del 24 de febrero de 1987) a dosis máximas de 5 g/kg de peso corporal y no provocaron ninguna lesión macroscópica que pudiera ser atribuida a un efecto tóxico del producto.

Los productos de la invención (microcápsulas de soja), tales como los obtenidos en el ejemplo 25, son utilizados por vía oral a una dosis inferior a 5 g/kg y presentan, pues, una toxicidad nula.

b) Irritación ocular

Las pruebas fueron efectuadas según el método oficial definido por la resolución del 3 de mayo de 1990 (Diario Oficial de la República Francesa del 14 de noviembre de 1990) con el producto de la invención (microcápsulas de soja) y no provocaron ninguna lesión del iris o de la córnea.

Los productos de la invención (microcápsulas de soja), instilados puros, resultaron no irritantes y la tolerancia ocular puede ser considerada como muy buena.

c) Irritación cutánea

Las pruebas fueron efectuadas según el método oficial definido por la resolución del 1 de febrero de 1982 (Diario Oficial de la República Francesa del 21 de febrero de 1982) con el producto de la invención (microcápsulas de soja) y no provocaron ningún efecto irritativo.

Los productos de la invención (microcápsulas de soja), instilados puros, resultaron no irritantes y la tolerancia cutánea puede ser considerada como excelente.

d) Investigación del poder sensibilizante

Se realizaron pruebas de maximización según un protocolo adaptado del método descrito por MAGNUSSON y KLIGMAN (J. INVEST. DERM. 1969, 52, 268-276).

Los productos de la invención (microcápsulas de soja) no provocaron ninguna reacción macroscópica significativa de una reacción de sensibilización. Pueden ser considerados, por lo tanto, como hipoalergénicos (clase I).

Claims

1. Partículas, caracterizadas por tener, al menos en superficie, una pared formada por proteínas vegetales entrecruzadas, en particular por medio de un entrecruzamiento interfásico entre las proteínas vegetales y un agente entrecruzante acilante que tiene al menos dos grupos acilantes, que forman uniones covalentes entre las funciones acilables de las proteínas y los grupos acilo del agente entrecruzante polifuncional acilante.

2. Partículas según la reivindicación 1, caracterizadas por el hecho de que las proteínas vegetales antes citadas son extraídas especialmente de leguminosas, en particular de las plantas siguientes: altramuz (género Lupinus), soja (género Glycine), guisante (género Pisum), garbanzo (Cicer), alfalfa (Medicago), haba (Vicia), lenteja (Lens), judía (Phaseolus), colza (Brassica) o girasol (Helianthus); o también de cereales, como el trigo, el maíz, la cebada, la malta y la avena.

3. Partículas según la reivindicación 1 ó 2, caracterizadas por utilizar las proteínas vegetales antes citadas en forma de preparaciones pulverulentas tales como harinas, concentrados o aislados, o de preparaciones líquidas tales como leches de soja.

4. Partículas según la reivindicación 3, caracterizadas por disolver las proteínas vegetales a una concentración en peso del 0,5 al 5% en una solución acuosa de pH comprendido entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 8.

5. Partículas según la reivindicación 4, caracterizadas por el hecho de que la solución acuosa de proteína vegetal de pH comprendido entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 8 encierra al menos una sal de ácido carboxílico a una concentración en peso del 0,1 al 20%.

6. Partículas según la reivindicación 5, caracterizadas por el hecho de que la sal de ácido carboxílico es una sal alcalina o alcalinotérrea de un ácido carboxílico seleccionado entre el grupo consistente en ácido acético, oxálico, malónico, succínico, glutárico, dimetilglutárico, adípico, fumárico, maleico, tartárico, málico, cítrico, láctico y salicílico.

7. Partículas según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizadas por contener una substancia insoluble lipofílica, en particular seleccionada entre el grupo consistente en sales insolubles de ácidos grasos y de metales bivalentes, como el estearato de calcio o de magnesio; óxidos metálicos, tales como óxido de titanio u óxido de zinc; o talco; o substancias coloreadas insolubles en forma de pigmentos o en forma de lacas de calcio, de aluminio, de bario o de zirconio de diversos colorantes.

8. Partículas según la reivindicación 7, caracterizadas por seleccionar las sales insolubles de ácidos grasos antes citadas entre el grupo consistente en sales de calcio, magnesio, estroncio o de bario de ácidos carboxílicos con un número de carbonos igual o superior a 12, tales como los ácidos láurico, mirístico, palmítico, esteárico, oleico y linoleico, y por seleccionar las lacas antes citadas entre el grupo consistente en laca de indigocarmín aluminio (de color azul), la laca Ponceau 4 R de aluminio (rojo) o la laca Sunset amarillo FCF de aluminio (naranja).

9. Partículas según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizadas por el hecho de que el agente entrecruzante polifuncional acilante antes citado está constituido por un dihaluro de ácido o un dianhídrido de ácido.

10. Partículas según la reivindicación 9, caracterizadas por seleccionar el dihaluro de ácido entre dihaluro de ftaloílo, de tereftaloílo, de sebacoílo, de glutarilo, de adipoílo o de succinilo.

11. Partículas según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizadas por contener un principio activo cosmético, farmacéutico o alimentario, tal como un aceite vegetal, mineral o sintético; derivados de la vitamina A y de la vitamina E; principios activos hidrófilos, tales como extractos vegetales, ácido ascórbico o vitamina C; PMG; glucosa; pigmentos orgánicos, y pigmentos minerales.

12. Partículas según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizadas por tener un tamaño comprendido entre aproximadamente 10 nanometros y aproximadamente 3 milímetros.

13. Utilización de las partículas según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para la fabricación de una composición cosmética, farmacéutica, y especialmente dermatológica, o alimentaria.

14. Composición cosmética, farmacéutica, en particular dermatológica, o alimentaria, que contiene partículas según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12.

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15. Procedimiento de fabricación de partículas de proteínas vegetales entrecruzadas, caracterizado por consistir en:

b) la formación de una fase oleosa;

e) si se desea, la separación de las partículas así preparadas.

16. Procedimiento según la reivindicación 15, caracterizado por el hecho de que la concentración en peso de la proteína vegetal en la fase acuosa está comprendida entre aproximadamente un 0,5 y aproximadamente un 5%.

17. Procedimiento según la reivindicación 15 ó 16, caracterizado por el hecho de que la solución acuosa antes citada de pH comprendido entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 8 encierra una cantidad de una sal de ácido carboxílico comprendida generalmente entre aproximadamente un 0,1 y un 20% en peso.

18. Procedimiento según una de las reivindicaciones 15 a 17, caracterizado por seleccionar el agente entrecruzante polifuncional acilante entre un dihaluro de ácido o un dianhídrido de ácido.

19. Procedimiento según una de las reivindicaciones 15 a 18, caracterizado por el hecho de que la razón del peso del agente entrecruzante polifuncional antes citado al peso de proteína vegetal utilizada está comprendida entre 0,03 y 70 partes en peso de agente entrecruzante por una parte en peso de proteínas.

20. Procedimiento según una de las reivindicaciones 15 a 19, caracterizado por utilizar para formar la fase oleosa, o bien un solvente orgánico que puede ser fácilmente eliminado, tal como ciclohexano o una mezcla de cloroformo/ciclohexano, en particular a una razón de 1:4 v/v, o bien preferiblemente un aceite biocompatible, en particular un aceite vegetal biocompatible, tal como un aceite de coco o cocoato de 2-etilhexilo o un aceite de parafina.

21. Procedimiento según una de las reivindicaciones 15 a 20, caracterizado por realizar un procedimiento en emulsión del tipo agua-en-aceite.

22. Procedimiento según una de las reivindicaciones 15 a 20, caracterizado por realizar un procedimiento en emulsión del tipo aceite-en-agua.

23. Procedimiento según una de las reivindicaciones 15 a 22, caracterizado por utilizar un agente tensoactivo para facilitar o estabilizar la emulsión, preferiblemente un tensoactivo de tipo sorbitán, tal como el trioleato de sorbitán.

24. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 23, caracterizado por el hecho de que, para aumentar el tamaño de las partículas, se añade a la fase acuosa o a la fase hidrofóbica o a una y otra fase una substancia insoluble lipofílica seleccionada preferiblemente entre el grupo de las sales insolubles de ácidos grasos y de metales bivalentes, del talco, de los óxidos metálicos o de las substancias coloreadas insolubles en forma de pigmento o en forma de laca.

25. Procedimiento según la reivindicación 24, caracterizado por seleccionar las sales insolubles de ácidos grasos y de metales bivalentes antes citadas entre el grupo consistente en sales de calcio, magnesio, estroncio o de bario de ácidos carboxílicos con un número de carbonos igual o superior a 12, tales como los ácidos láurico, mirístico, palmítico, esteárico, oleico y linoleico; por seleccionar los óxidos metálicos antes citados entre el grupo consistente en óxido de titanio y óxido de zinc; por seleccionar las substancias coloreadas insolubles entre el grupo de los pigmentos orgánicos, tales como el Rojo DC 30, o de las lacas seleccionadas entre las lacas de calcio, de aluminio, de bario o de zirconio de colorantes tales como la laca de indigocarmín aluminio de color azul, la laca Ponceau 4 R de aluminio roja o la laca Sunset amarillo FCF de aluminio naranja.

26. Procedimiento según la reivindicación 24 ó 25, caracterizado por incorporar la substancia insoluble lipófila antes citada en una cantidad del 0,01% al 2% en peso de la fase en cuestión.

27. Procedimiento según una de las reivindicaciones 15 a 26, caracterizado por llevar a cabo la reacción de entrecruzamiento interfásico a una temperatura comprendida entre 4 y 80ºC, preferiblemente entre 15 y 30ºC, y a presión atmosférica.

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28. Procedimiento según una de las reivindicaciones 15 a 27, caracterizado por el hecho de que la sal de ácido carboxílico es una sal alcalina o alcalinotérrea de un ácido carboxílico seleccionado entre el grupo consistente en ácido acético, oxálico, malónico, succínico, glutárico, dimetilglutárico, adípico, fumárico, maleico, tartárico, málico, cítrico, láctico y salicílico.