ES2203436T3 - Composicion de vacuna a base de particulas. - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica que está adaptada para la administración a la superficie de una mucosa, que comprende microesferas que comprenden (i) un compuesto biológicamente activo capaz de generar una respuesta inmune; (ii)un material polimérico capaz de formar microesferas; y (iii) un inmunoestimulante que comprende un fosfolípido en una cantidad de 0, 1% a 20% p/p y en el que la relación entre el material polimérico y el fosfolípido es de 99:1 a 9:1% p/p.

Description

Composición de vacuna a base de partículas.

La presente invención trata de compuestos para usar como inmunoestimulantes, así como también de una composición que es útil para administrar medicamentos y particularmente vacunas, en particular en las superficies de las mucosas, por ejemplo en formulaciones orales. La invención comprende además métodos para tratar individuos usando la composición y los métodos de preparación de la composición.

Un objetivo primario en el campo de la vacunación es el desarrollo de un régimen de inmunización no parenteral, que facilite la inducción de niveles de inmunidad sistémica comparables a los que se obtienen con inyecciones convencionales subcutáneas e intramusculares.

Las vías nasofaríngeas y las regiones pulmonares del tracto respiratorio representan dianas potenciales para la administración sistémica de vacunas y fármacos peptidérgicos. La relativa facilidad con la que los agentes terapéuticos pueden inhalarse, o introducirse dentro la nariz, hace que estos modos de inmunización sean atractivos en términos de probable cumplimiento del paciente. Además, las mucosas respiratorias ofrecen ciertas ventajas morfológicas, fisiológicas e inmunológicas respecto a otros sitios no parenterales en términos de inmunización, particularmente contra entidades patogénicas que afectan o utilizan las superficies de las mucosas como portales de entrada. Esto se debe a que la vacunación efectiva contra estos patógenos normalmente requiere que las mucosas estén protegidas adecuadamente con anticuerpos producidos localmente del isotipo IgA secretora (sIgA). Mientras que las superficies de las mucosas usualmente están pobremente protegidas por las IgA después de la administración parenteral de vacunas, ahora resulta evidente que la administración exitosa de material antigénico con respecto a los elementos de respuesta inmune presentes en el tejido linfoide asociado a las mucosas (MALT) puede producir una vigorosa estimulación de la parte del sistema inmune constituido por las mucosas. Es factible que mediante el sistema inmune común de las mucosas (CMIS) diversas superficies de mucosas diferentes puedan resultar protegidas por la administración en las mucosas de una vacuna en un único sitio. La vacunación en la mucosa ofrece la ventaja añadida de que es posible inducir cierto grado de inmunidad sistémica junto a las respuestas locales debido a la translocación de material antigénico desde los compartimentos subepiteliales hacia los tejidos con respuesta inmune sistémica tales como el bazo.

A pesar de los factores logísticos e inmunológicos que favorecen la inmunización no parenteral, la simple aplicación en las mucosas de proteínas antigénicas, por ejemplo en los tractos respiratorios o gastrointestinales, es usualmente ineficaz en términos de vacunación. La destrucción química o enzimática, combinada con la absorción pobre en los compartimentos subepiteliales indican que las vacunas administradas en las mucosas requieren usualmente alguna forma de vehículo de administración o adyuvante. Un enfoque consiste en encapsular el material antigénico en soportes poliméricos microparticulados tales como microesferas de poli-DL-láctidos (PLA) (Vaccine 1994, 12, 5-11). Tales procedimientos sirven para proteger a las lábiles vacunas de la degradación en las cavidades y mejorar la absorción en los compartimentos sistémicos y en las mucosas (J.H. Eldridge et al., Seminars in Hematologogy, (1993), 30, 16-25). Existe buena evidencia de que la microencapsulación puede tener un papel adyuvante convirtiendo las moléculas antigénicas solubles en especies en partículas, promoviendo de este modo la absorción de la vacuna por las células presentadoras del antígeno (APC) (Y. Tabata et al., Adv. Polym. Sci. (1990), 94, 107-141. L. Vidard et al., J. Immunol. (1996), 156, 2809-2818, N. Van Rooijem, Immunol. Today (1990) 11, 436-439) o las células con micropliegues (células M) en los folículos linfoides (R.I. Walker et al., Vaccine, 12, 387, 1994, D.T. O'Hagan et al., Vaccine, 1989, 7, 421-424, P.G. Jenkins et al., J. Drug Targetting, 1995, 3, 79-81). También se ha descrito la administración nasal de formulaciones de vacunas en microesferas (A.J. Almeida et al., J. Pharm & Pharmacology, 25, 198-203, 1993, H.O. Alpar et al., J. Drug Targeting 2/2, 147-149, 1994, A.J. Almeida et al., J. Drug Targeting 3(b), 255-467, 1996).

El documento de patente WO 91/06282 describe ciertas composiciones de fármacos que son adecuadas para administración intranasal y que incluyen potenciadores de la absorción. Ejemplos de potenciadores adecuados son lisofosfatidilcolina.

El documento WO 94/15636 describe preparaciones de vacunas de liberación retardada diseñadas para ser administradas por vía parenteral, o mediante el uso de un implante. No divulga ninguna composición adecuada para administrar en la superficie de una mucosa.

O'Hagan et al., en "Intravaginal immunisation in sheep using a bioadhesive microsphere antigen delivery system" (Vaccine, vol. 11, nº6, 1993, páginas 660-664, XP002141394) describe una formulación a la que se añade lisofosfatidilcolina a un polvo preformado que consiste en microesferas degradables de almidón. La lisofosfatidilcolina no está comprendida dentro de las micropartículas. Está mezclada íntimamente pero no está unida físicamente a las microesferas degradables de almidón.

Sturesson, C et al., (Database Chemabs Chemical Abstracts Service Columbus, Ohio, US) enseña un método para encapsular partículas fijadas de rotavirus en microesferas de poli(láctido-co-glicólido) que contienen fosfatidilcolina (también conocida como lecitina) para administración oral. La fase orgánica usada en la preparación de las emulsiones usadas en la formación de las microesferas contiene muy pequeñas cantidades (0,1 ó 0,5% p/v) de fosfatidil-colina (PC) como un emulgente. Además, esta fase se diluye significativamente. Como resultado, la concentración
final de PC en las partículas es extremadamente baja, y no proveerá el efecto inmunoestimulante requerido en las reivindicaciones.

(Alonso et al.) describe una formulación, que es administrada subcutáneamente. Por lo tanto, no es capaz de ser administrada en la superficie de una mucosa como requieren las reivindicaciones de la presente solicitud. Además, el fosfolípido que se usa en la preparación se usa en cantidades muy bajas (200 \mul de una solución de 2 mg/ml) solamente como emulgente, y no como un inmunoestimulante.

Los solicitantes han encontrado que la presencia de un fosfolípido en la formulación de una vacuna tiene un efecto inmunoestimulante, superior al que puede explicarse por el efecto de potenciador de la
absorción.

De esta manera esta invención provee un fosfolípido para ser usado como un inmunoestimulante.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "inmunoestimulante" hace referencia a un adyuvante que estimula al sistema inmune de un animal hospedante al cual es administrado y por esa razón incrementa el efecto protector producido por un antígeno protector administrado a ese animal, comparado con el efecto que produciría la administración del antígeno protector solo.

En particular, se ha destacado que una formulación biológicamente activa microencapsulada, especialmente de inmunógenos, que comprende un fosfolípido además del material polimérico usado en la formación de las micropartículas, tiene un mayor efecto biológico. Esto puede verse particularmente cuando la formulación se administra por cualquier vía, incluyendo la vía parenteral u otras vías, pero es particularmente efectivo cuando se lo administra en la superficie de una mucosa.

Por lo tanto la invención proporciona una composición farmacéutica, que comprende micropartículas que comprenden

(i) un agente biológicamente activo que es capaz de generar una respuesta inmune en un animal al que es administrado;

(ii) un material polimérico capaz de formar microesferas; y

(iii) un inmunoestimulante que comprende un fosfolípido.

En una realización, la composición es adecuada para administración parenteral. Un ejemplo particular es la administración intramuscular (i.m.).

En una realización preferida, la composición es adecuada para administración no parenteral por ejemplo en las superficies de las mucosas.

La administración en las superficies de las mucosas puede efectuarse por aplicación oral, por aplicación pulmonar, por ejemplo por administración intratraqueal, o particularmente por aplicación intranasal. En particular, las composiciones de la invención son administradas por vía oral.

El material polimérico usado en las composiciones de la invención es adecuado para formar micropartículas (algunas veces conocidas como microcápsulas o microesferas). Puede ser un polímero de peso molecular bajo, medio o alto. Ejemplos de polímeros de bajo peso molecular son los polímeros que tienen pesos moleculares entre 0,1 y 10 kDa, más preferiblemente entre 1 y 5 kDa y típicamente aproximadamente 2-3 kDa.

Se ha descrito el uso de polímeros de alto peso molecular en la encapsulación de la vacuna del tétano para administración intramuscular (Vaccine 1994, 12, 4, 229-306). También se ha descrito una formulación de la vacuna del toxoide de la ricina microencapsulado (Vaccine 1994, 14, 11, 1031) que se aplica por vía intranasal. Sin embargo, en ese caso, las micropartículas de polímero de alto peso molecular (94 kDa) fueron menos efectivas que las que fueron preparadas a partir de un copolímero de peso molecular más bajo (72 kDa).

El material polimérico usado en la composición de la presente invención tiene convenientemente un peso molecular alto mayor a 94 kDa, por ejemplo de 100 kDa o más.

Un material polimérico particularmente conveniente para usar en las composiciones de la invención comprende un poli(hidroxi)ácido o un copolímero de éste. Un ejemplo particular es el poli-(L-láctido) o PLA pero también puede emplearse otro material polimérico de alto peso molecular tal como el poli(ácido láctido/glicólido), los policianoacrilatos, los polianhidridos, los policarbonatos o las policaprolactonas, como es conocido en la técnica.

Ejemplos de fosfolípidos convenientes para usar en las micropartículas de las composiciones de la invención incluyen muchos fosfolípidos aceptables farmacéuticamente o sus precursores, que pueden tener un carácter catiónico, aniónico o neutro. Estos incluyen la lecitina o su precursor la fosforilcolina, la diestearilfosfatidilcolina (DSPC) y la fosfatidinilserina (PS). Ejemplos de lípidos con carga positiva incluyen la dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) y el dioleoiltrimetilamoniopropano (DOTAP). Un fosfolípido preferido particularmente es la lecitina que está ampliamente disponible y se usa comúnmente en otros tipos de composiciones farmacéuticas.

Convenientemente se añade el fosfolípido a la composición en una cantidad de 0,1% a 20% p/p, y preferiblemente aproximadamente 5% p/p.

Las micropartículas pueden comprender además opcionalmente agentes que estabilicen las emulsiones, tales como poli(alcohol vinílico), metilcelulosa o dextranos.

Convenientemente tendrá un tamaño promedio de 0,1 \mum a 10 \mum de diámetro.

Estas composiciones pueden ser usadas para administrar agentes biológicamente activos que son capaces de generar una respuesta inmune protectora en un animal, particularmente un mamífero, al cual son administradas. Ejemplos de tales agentes incluyen polipéptidos antigénicos así como también secuencias de ácidos nucleicos que pueden codificar para estos polipéptidos y que se conocen como vacunas de "ADN desnudo".

Tal como se usa en la presente memoria el término "polipéptido" abarca proteínas o sus fragmentos epitópicos.

Polipéptidos covenientes son las vacunas subunitarias u otros tales como el toxoide tetánico, el toxoide diftérico y el antígeno protector (AP) del Bacillus anthracis.

En una realización, la composición de la invención comprende un agente biológicamente activo que es capaz de generar una respuesta inmune protectora contra Yersinia pestis. El agente es convenientemente una vacuna subunitaria, por ejemplo como se describe en documento WO 96/28551. La vacuna descrita y reivindicada allí comprende una combinación del antígeno V de Y. Pestis o su fragmento inmunológicamente activo o una variante de éstos, y el antígeno F1 de Y. Pestis o su fragmento inmunológicamente activo o una variante de éstos.

Como se usa en la presente memoria, el término "fragmento" se refiere a una porción de la secuencia básica que incluye al menos un determinante antigénico. Éstos pueden ser mutantes por deleción. Se pueden juntar una o más regiones epitópicas de la secuencia.

La expresión "variante" se refiere a secuencias de ácidos nucleicos que difieren de la secuencia de base de la cual derivan en que uno o más aminoácidos de la secuencia están sustituidos por otros aminoácidos. Las sustituciones de aminoácidos pueden ser consideradas como "conservadoras" cuando un aminoácido es reemplazado por un aminoácido diferente con propiedades muy parecidas. Las sustituciones no conservadoras son aquellas en las que los aminoácidos están sustituidos por aminoácidos de un tipo diferente. Hablando en términos generales, serán posibles pocas sustituciones no conservadoras de los aminoácidos sin alterar la actividad biológica del polipéptido. Convenientemente, las variantes serán homólogas al menos en un 60%, preferiblemente homólogas al menos en un 75%, y más preferiblemente homólogas al menos en un 90% respecto a la secuencia de base. La homología se puede juzgar en esta instancia usando el algoritmo de Lipman-Pearson con Ktuplas:2, penalización por huecos:4, penalización por la longitud de los huecos:12, matriz PAM estándar de asignación de puntuación (Lipman, D.J. and Pearson, W.R., Rapid and Sensitive Protein Similarity Searches, Science, 1985, vol. 227, 1435-1441).

Preferiblemente, las composiciones de la vacuna comprenderán además un adyuvante convencional para aumentar o mejorar la respuesta inmune con respecto al material biológicamente activo administrado. Entre los adyuvantes convenientes se incluyen adyuvantes aceptables farmacéuticamente como el adyuvante incompleto de Freund, Alhydrogel, compuestos de aluminio, y preferiblemente adyuvantes conocidos por aumentar la respuesta en las mucosas, tal como el CTB, la subunidad B pentamérica no tóxica de la toxina del cólera (TC).

También pueden comprender otros componentes conocidos en la composición tales como agentes colorantes y conservantes y en particular cetrimida. Estos están presentes convenientemente en cantidades de 0,1 a 0,7% p/v.

En una realización particular, las microesferas usadas en las composiciones pueden comprender además proteínas de la capa S, en particular proteínas de la capa S derivadas de una bacteria contra la que el agente biológicamente activo produce una respuesta inmune protectora. Estas proteínas convenientemente recubren la superficie de las partículas. Se ha mostrado (Sleyr et al., Crystallline bacterial cell surface proteins. Biotechnology Intelligence Unit, 1996, R.G. Landes Company and Academic Press Inc.) que se puede aumentar la estabilidad de los liposomas mediante estos recubrimientos. Las proteínas de la capa S se encuentran en la superficie de la mayoría de las bacterias y forman una estructura regular en dos dimensiones conocida como capa S. Las proteínas de la capa S aisladas pueden formar, impulsadas por la entropía, estructuras monomoleculares en suspensión y sobre la superficie de estructuras tales como los liposomas.

Las composiciones de la invención pueden ser convenientes para aplicaciones intranasales y orales. Son particularmente efectivas cuando se aplican oralmente.

Pueden comprender micropartículas per se que son conservadas opcionalmente, por ejemplo por liofilización, o las micropartículas pueden combinarse con un soporte aceptable farmacéuticamente o un excipiente. Ejemplos de soportes adecuados incluyen soportes sólidos o líquidos como se entiende en la técnica.

La invención además proporciona un método para producir una composición farmacéutica, método que comprende la encapsulación de un agente biológicamente activo como se describió anteriormente en un material polimérico que convenientemente tiene un peso molecular alto y en particular un peso molecular de 100 kDa o más, en la presencia de un fosfolípido como la lecitina. El fosfolípido puede incorporarse dentro de la micropartícula, o en su superficie, o preferiblemente se distribuye en toda la partícula.

Los métodos para formar liposomas son bien conocidos en la técnica. Incluyen la dispersión de láminas de lípidos deshidratados en un medio acuoso, las técnicas de emulsión y los métodos de liofilización son bien conocidos en la técnica.

Las micropartículas de la invención se preparan convenientemente usando un método de evaporación del solvente en doble emulsión. Brevemente, el agente biológicamente activo, en solución o en un estado convenientemente liofilizado, se suspende o disuelve en una solución acuosa de un material polimérico como poli (alcohol vinílico) (PVA) y el fosfolípido tal como lecitina. Se añade una solución del polímero en un solvente orgánico tal como diclorometano mezclando vigorosamente. Luego, la solución resultante se vierte sobre una fase acuosa secundaria, que también contiene material polimérico (PVA o similar) y opcionalmente también el fosfolípido, agitando vigorosamente. Después de la adición, se evapora el disolvente orgánico y se separan las microesferas resultantes.

La composición de la invención comprenderá convenientemente una unidad apropiada de dosificación del agente activo. Ésta variará dependiendo del agente activo que se está empleando, de la naturaleza del paciente, de los estados que se están tratando y de otros factores clínicos. Sin embargo en general, la composición de la invención comprenderá aproximadamente un 0,1 a un 10% en peso del principio activo.

La cantidad de polímero de la composición estará en el orden del 70 al 99% en peso de la composición, y convenientemente del 90 al 99% en peso de los componentes de las micropartículas será el material polimérico. La cantidad de fosfolípido, será del orden de 0,1 a 10% en peso de la composición. Preferiblemente, la relación entre el material polimérico y el fosfolípido será de 99:1 a 9:1% p/p.

Las composiciones de la presente invención comprenden preferiblemente vacunas profilácticas o terapéuticas.

En uso, una dosificación razonable para administración nasal sería de 0,05 g a 0,2 g. Una formulación para administración oral a seres humanos contendrá generalmente, por ejemplo, de 0,5 mg a 2 g de agente activo dentro de una composición como se definió anteriormente.

Composiciones preferidas de las invenciones son composiciones de vacunas en las que el agente biológicamente activo es capaz de producir una respuesta inmune protectora frente a un organismo patogénico como se describió anteriormente. De esta manera, además, la invención proporciona un método para proteger a un mamífero contra una infección, método que comprende la administración de la composición de la vacuna al mamífero, como se describió anteriormente. En particular, la composición se aplica a la superficie de una mucosa, en particular a la superficie gastrointestinal, de un mamífero.

Los solicitantes han mostrado que mediante la administración oral del toxoide tetánico de acuerdo con la presente invención, se han alcanzado niveles de anticuerpo que superan aquellos asociados a protección frente a la toxina relevante, y se proporcionó protección frente a la estimulación subcutánea con el toxoide tetánico.

Otro aspecto de la invención comprende el uso de un fosfolípido como un inmunoestimulante en la producción de una vacuna para uso en el tratamiento terapéutico o profiláctico.

Ahora se describirá la invención particularmente mediante un ejemplo con referencia a las figuras acompañantes en las que:

La figura 1 ilustra la respuesta inmune del suero de ratón frente al toxoide tetánico administrado oralmente microencapsulado y libre con 50 unidades de floculación (Lf) los días 1, 3, 5 y con dosis de refuerzo los días 28, 30 y 50;

La figura 2 ilustra la respuesta inmune del suero después de 86 días; y

La figura 3 ilustra la respuesta inmune del suero luego de 62 días después de una "estimulación simulada" con el toxoide tetánico.

Ejemplo 1 Microencapsulación del toxoide tetánico

Se usó poli-L-láctido de peso molecular 100 kDa (Polysciences Inc. EE.UU.)en una modificación del método de evaporación del solvente en emulsión doble (Y. Ogawa et al., Chem. Pharm. Bull., 36 (1988) 1095-1103). Brevemente, se prepararon 1,5 ml de una solución acuosa al 1,5% p/v de alcohol polivinílico (PVA) (13,25k) que contenía el toxoide tetánico (4000 unidades de floculación). Ésta era la fase acuosa. Se preparó separadamente una fase orgánica mezclando 200 mg de polímero de PLA de 100 K disuelto en 5 ml de diclorometano (DCM) de grado HPLC, con lecitina al 5% p/p. Las dos fases fueron homogeneizadas conjuntamente usando un homogeneizador Silverson (Silverson, RU) durante 1 minuto. La emulsión primaria resultante se añadió, gota a gota, a una fase acuosa secundaria (75 ml) que comprendía PVA 1,5% p/p y lecitina 0,1% p/v. Después se homogeneizó la mezcla usando un homogeneizador Silverson durante 5 minutos. Esta fase secundaria fue agitada suavemente durante la noche hasta la evaporación del diclorometano. Las microesferas se recuperaron por centrifugación, fueron lavadas tres veces con agua doblemente destilada y después fueron liofilizadas.

Se prepararon otras microesferas usando lecitina al 10% p/p en lugar de la solución al 5% p/p usando un procedimiento similar (10% LEC PLA MS). Además se prepararon por un método análogo otras microesferas en las que la lecitina fue completamente omitida de la preparación pero se usó lecitina al 5% p/p en lugar de agua sola para la administración oral de las microesferas (PLA MS en 5% LEC)

Además, este método se usó para preparar microesferas comparativas en las que se reemplazó la lecitina en la emulsión primaria por saponina (SAP) al 5% p/p o al 10% p/p o por esterail amina (SA) al 20% p/p y en la preparación se omitió completamente la lecitina. Finalmente, se prepararon microesferas de PLA sin ningún adyuvante.

Ejemplo 2 Estudio de inmunización

Se suministraron oralmente las microesferas preparadas en el Ejemplo 1 que contenían 50 unidades de floculación (Lf) de toxoide tetánico los días 1, 3 y 5 del ensayo a grupos de tres ratones hembra Balb/c, y se les administró una dosis de refuerzo los días 28 y 30. A otro grupo de ratones se le administraron oralmente cantidades similares de toxoide tetánico pero en solución libre.

Se controlaron las respuestas inmunes en el suero. Se tomaron muestras de sangre de la vena de la cola de todos los animales los días 14 y 35 del experimento. La valoración de los isotipos del anticuerpo IgG en las muestras de suero se hizo usando ELISA. Brevemente, se sembraron alícuotas de muestras individuales de suero en placas de microtitulación precubiertas con toxoide tetánico. Se detectó la unión del anticuerpo sérico mediante un anticuerpo anti IgG de ratón (Sigma A4416) secundario marcado con peroxidasa. El nivel de anticuerpo se calculó como la dilución máxima de suero que da una lectura de absorbancia mayor que la densidad óptica máxima (DO) de suero que no ha entrado en contacto con el antígeno valorado. A partir de esto, se calcularon las titulaciones promedio \pm desviación estándar (SD) por grupo de tratamiento.

El día 162, se controló la respuesta inmune después de una "estimulación simulada" subcutánea con TT.

Los resultados se muestran en las Figuras 1-3. En estas figuras, las letras siguientes representan composiciones preparadas como se describió anteriormente como sigue:

a)

composición de microesferas de PLA que contiene lecitina al 5%:

b)

composición de microesferas de PLA que contiene lecitina al 10%;

c)

microesferas de PLA en presencia de lecitina al 5%;

d)

composición de microesferas que contiene saponina (SAP) al 5% p/p;

e)

composición de microesferas que contiene saponina (SAP) al 10% p/p;

f)

composición de microesferas que contiene estearil amina (SA) al 10% p/p;

g)

composición de microesferas que contiene estearil amina (SA) al 20% p/p;

h)

microesferas de PLA;

i)

microesferas de PLA en leche;

j)

microesferas de PLA que han sido sonicadas;

k)

Toxoide tetánico libre.

Las formulaciones de microesferas que contenían lecitina mostraron una amplificación de > 3000 comparadas con el toxoide tetánico libre y otras formulaciones de microesferas. Las microesferas que no contenían lípido en un vehículo fofolipídico dieron resultados similares al toxoide tetánico libre.

Incluso 86 días después de la administración de la dosis y después de la estimulación subcutánea el día 162, los niveles estaban por encima de los niveles de protección (Figuras 2 y 3) cuando se emplearon formulaciones de acuerdo con la invención.

Claims (26)

1. Una composición farmacéutica que está adaptada para la administración a la superficie de una mucosa, que comprende microesferas que comprenden

(i)

un compuesto biológicamente activo capaz de generar una respuesta inmune;

(ii)

un material polimérico capaz de formar microesferas; y

(iii)

un inmunoestimulante que comprende un fosfolípido en una cantidad de 0,1% a 20% p/p y en el que la relación entre el material polimérico y el fosfolípido es de 99:1 a 9:1% p/p.

2. Una composición de acuerdo con la reivindicación 2 que está adaptada para la administración oral.

3. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que el material polimérico tiene un peso molecular de más de 94 kDa.

4. Una composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que el material polimérico tiene un peso molecular de 100 kDa o más.

5. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el material polimérico comprende un poli(hidroxiácido) o su copolímero.

6. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el fosfolípido se selecciona entre lecitina o su precursor la fosforilcolina, la diestearilfosfatidilcolina (DSPC) y la fosfatidinilserina (PS).

7. Una composición de acuerdo con la reivindicación 6, en la que el fosfolípido es lecitina.

8. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la cantidad de fosfolípido es 5% p/p.

9. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el compuesto biológicamente activo capaz de generar una respuesta inmune en un animal al que es administrado comprende un polipéptido o un ácido nucleico.

10. Una composición de acuerdo con la reivindicación 9 en la que el agente biológicamente activo comprende el toxoide tetánico, el toxoide diftérico, el antígeno protector (AP) del Bacillus anthracis o un agente que es capaz de generar una respuesta inmune protectora contra Yersinia pestis.

11. Una composición de acuerdo con la reivindicación 9 o con la reivindicación 10 que comprende además un adyuvante convencional con el fin de aumentar la respuesta inmune respecto al material biológicamente activo administrado.

12. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además un conservante.

13. Una composición de acuerdo con la reivindicación 12, en la que el conservante es cetrimida y éste está presente en cantidades de 0,1 a 0,7% p/v.

14. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que las microesferas usadas en las composiciones pueden comprender además una proteína de la capa S.

15. Una composición de acuerdo con la reivindicación 14, en la que el agente biológicamente activo es como se ha definido en la reivindicación 9 y en la que las proteínas de la capa S derivan de una bacteria contra la que el agente biológicamente activo produce una respuesta inmune protectora.

16. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que las microesferas están suspendidas en un diluyente o vehículo.

17. Un método para producir una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1, método que comprende encapsular un agente biológicamente activo que es capaz de generar una respuesta inmune protectora, en un material polimérico, en presencia de un fosfolípido en una cantidad de 0,1% a 20% p/p, en donde la relación entre el material polimérico y el fosfolípido es de 99:1 a 9:1% p/p.

18. Un método de acuerdo con la reivindicación 17, en el que el agente biológicamente activo, en disolución o en un estado convenientemente liofilizado, es suspendido o disuelto en una disolución acuosa del material polimérico y el fosfolípido, se añade agitando vigorosamente una disolución del polímero en un disolvente orgánico, la emulsión resultante se añade con agitación vigorosa a una fase acuosa secundaria que contiene un material polimérico, después de lo cual se deja evaporar el solvente orgánico y se separan las microesferas resultantes.

19. Un método de acuerdo con la reivindicación 18, en el que la fase acuosa secundaria también comprende un fosfolípido.

20. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19, en el que el fosfolípido está distribuido por toda la microesfera.

21. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 20, en el que la composición comprende una vacuna terapéutica o profiláctica.

22. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para usar en un método para proteger un mamífero contra la infección por un patógeno.

23. Una composición de acuerdo con la reivindicación 22, en la que la composición se aplica a la superficie de una mucosa de dicho mamífero.

24. Una composición de acuerdo con la reivindicación 23, en la que la superficie de la mucosa comprende una superficie gastrointestinal.

25. El uso de un fosfolípido en la producción de una microesfera para usar en la composición de acuerdo con la reivindicación 1.

26. El uso de un fosfolípido como inmunoestimulante en la producción de microesferas para usar en una vacuna profiláctica o terapéutica para la administración a la superficie de una mucosa.