ES2205001T3 - Procedimiento analitico quimioluminiscente. - Google Patents

Procedimiento analitico quimioluminiscente.

Info

Publication number
ES2205001T3
ES2205001T3 ES96305212T ES96305212T ES2205001T3 ES 2205001 T3 ES2205001 T3 ES 2205001T3 ES 96305212 T ES96305212 T ES 96305212T ES 96305212 T ES96305212 T ES 96305212T ES 2205001 T3 ES2205001 T3 ES 2205001T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
luminol
perborate
reagent
molar amount
luminescent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES96305212T
Other languages
English (en)
Inventor
Malcolm Robert Summers
Graham Delisle Yearwood
Tracey Michelle Booth
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ortho Clinical Diagnostics Inc
Original Assignee
Ortho Clinical Diagnostics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ortho Clinical Diagnostics Inc filed Critical Ortho Clinical Diagnostics Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2205001T3 publication Critical patent/ES2205001T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/968—High energy substrates, e.g. fluorescent, chemiluminescent, radioactive
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/975—Kit

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

SE DESCRIBE UN METODO ANALITICO QUIMILUMINISCENTE EL CUAL COMPRENDE USAR UN CATALIZADOR ADECUADO EN LA REACCION CON LUMINOL O UN LUMINOL SUSTITUIDO Y UN PERBORATO EN UN SOLVENTE ACUOSO Y DETECTAR Y MEDIR LA LUMINISCENCIA PRODUCIDA POR LA REACCION.EN EL METODO, EL SOLVENTE ACUOSO COMPRENDE UN AGENTE QUELANTE NO LUMINISCENTE PARA LA QUELACION DE UN ATOMO DE BORO DEFIECIENTE EN ELECTRONES EN EL PERBORATO.

Description

Procedimiento analítico quimioluminiscente.
Esta invención se refiere al campo de la química analítica y de diagnóstico para la detección de una serie de analitos en fluidos biológicos. En particular, se refiere a una composición generadora de señal útil en ensayos quimioluminiscentes, a kits de ensayo que la contiene y a procedimientos analíticos en los cuales se pueden usar la composición y los kits de ensayo.
Los ensayos luminiscentes y luminométricos son aquellos que producen una emisión de luz como resultado de la presencia de un analito de interés. La emisión de luz generalmente es de duración suficiente para ser medida o detectada y permitir por ello la determinación del analito.
Hay varios tipos principales de ensayos en los que se puede usar una señal quimioluminiscente con ventaja para determinar un analito:
1.
Ensayos donde un compuesto quimioluminiscente se usa para marcar directamente ligandos de unión específicos tales como proteínas, oligonucleótidos, antígenos, haptenos, hormonas, ácidos nucleicos y otros compuestos de interés biológico. La quimioluminiscencia se puede detectar añadiendo una peroxidasa y un oxidante al ligando marcado.
2.
Ensayos donde se usan catalizadores o cofactores de reacciones luminiscentes como marcadores para ligandos de unión específicos. Por ejemplo, la peroxidasa se puede conjugar con ligandos y usarse para proporcionar una señal quimioluminiscente.
3.
Ensayos donde se usan reacciones quimioluminiscentes para determinar los productos formados por acción de una enzima marcador que no sea peroxidasa en sustratos adecuados. Un ejemplo de este tipo de ensayo es la determinación de un ligando de unión específico de glucosa oxidasa marcada mediante generación de peróxido de hidrógeno en presencia de peroxidasa.
4.
Ensayos que no sean inmunoensayos para determinar un catalizador tal como peroxidasa o un oxidante tal como peróxido de hidrógeno generado como resultado de un analito no inmunoreactivo.
Se proporcionan detalles adicionales de tales ensayos en la extensa bibliografía tales como la patente de Estados Unidos número 4.729.950 (Kricka et al) y publicaciones allí mencionadas.
Habitualmente la fuente del peróxido de hidrógeno implicado en la reacción luminiscente es un perborato, y el sustrato para la acción peroxidativa es un 2,3-dihidro-1,4-ftalazinadiona tal como el luminol. Se observa un bajo nivel de emisión espontánea de luz cuando se mezcla el luminol con una sal de perborato en disolución acuosa. Dicha emisión de luz "de fondo" no es deseable en sistemas químicos (tales como ensayos quimioluminiscentes) en donde la luz de la oxidación controlada de luminol se mide para determinar el punto final de la reacción. Por tanto cuando se diseñan inmunoensayos enzimáticos es importante que tal emisión de luz "de fondo" se reduzca tanto como sea posible.
Según la presente invención, los autores proporcionan un procedimiento analítico quimioluminiscente que comprende el uso de un catalizador adecuado, tal como una enzima peroxidasa, en una reacción con luminol o un luminol sustituido y un perborato en un disolvente acuoso y la deteccción y medición de la luminiscencia producida por la reacción, que se caracteriza por que el disolvente acuoso comprende un agente quelante no luminiscente para quelación de un átomo de boro deficiente de electrones en el perborato.
Además según la presente invención los autores proporcionan un reactivo útil en un procedimiento analítico quimioluminiscente que comprende iones perborato en un disolvente acuoso que se caracteriza por que el disolvente acuoso comprende también un agente quelante no luminiscente para quelación de átomos de boro deficientes de electrones en los iones perborato.
Además según la presente invención los autores proporcionan un kit útil en un procedimiento analítico quimioluminiscente que comprende un primer reactivo que comprende luminol o un luminol sustituido en disolución acuosa y un segundo reactivo que comprende iones perborato en disolución acuosa que se caracteriza por que el segundo reactivo también comprende un agente quelante no luminiscente para quelación de átomos de boro deficientes de electrones en los iones perborato.
El primer y segundo reactivos del kit de la presente invención puede proporcionarse conjunta o separadamente, siendo mezclado en última instancia antes de usarse o añadido simultáneamente o secuencialmente a los otros compuestos de la reacción luminiscente. Los autores han demostrado a través del análisis de las disoluciones de luminol-perborato por espectroscopia de fluorescencia, que una proporción de las moléculas implicadas coexisten en disolución en forma de complejo. Un mecanismo probable para la formación del complejo es por quelación del átomo de boro del perborato deficiente en electrones por el luminol. Los autores creen que el complejo formado no es estable y que contribuye a la luminiscencia de fondo por descomposición con la emisión de luz.
Los autores han encontrado ahora que la luminiscencia de fondo de las disoluciones de luminol-perborato se puede reducir por adición de un agente quelante no luminiscente de geometría molecular apropiada, por ejemplo un agente quelante no luminiscente para quelación de un átomo de boro deficiente en electrones en un ion perborato. Los autores creen que el agente quelante añadido compite con el luminol por la unión del perborato, minimizando por tanto la formación del complejo inestable luminol-perborato.
El mecanismo por el que se cree que la invención reduce la luminiscencia de fondo usando dos agentes quelantes preferidos se muestra después en los esquemas de interacción 1 y 2 propuestos. En el esquema 1 el agente quelante es glicina, mientras que en el esquema 2 el agente quelante es ácido sulfosalicílico (abreviadamente en inglés SSA). En ambos esquemas de interacción el luminol forma un complejo inestable con perborato uniéndose libremente a través de los átomos de nitrógeno y oxígeno por el átomo de boro deficiente de electrones del ion perborato. En presencia del agente quelante (glicina en el esquema 1 o SSA en el esquema 2) se forma un complejo alternativo porque los agentes quelantes tienen geometrías moleculares apropiadas para reemplazar al luminol del complejo. Por ello los autores creen que la luminiscencia de fondo se puede reducir sustancialmente.
Interacciones propuestas entre perborato, luminol y glicina
1
Interacciones propuestas entre perborato, luminol y ácido sulfosalicílico (SSA)
2
La presente invención se puede aplicar a cualquier procedimiento analítico quimioluminiscente sin ninguna limitación particular en tanto que se use y se haga reaccionar un catalizador adecuado tal como una enzima peroxidasa con luminol o un luminol sustituido y perborato en un disolvente acuoso, y la luminiscencia sea entonces detectada y medida. Preferiblemente el catalizador es una enzima peroxidasa que es bien conocida como sustancia marcadora y que se ha usado ampliamente en procedimientos de ensayo basados en reacciones inmunológicas y técnicas de hibridación de ácidos nucleicos. Por ejemplo, la peroxidasa se puede unir a una diana usando un reactivo de unión específico de diana, la diana de unión a peroxidasa se aísla y se hace reaccionar con luminol y perborato en un disolvente acuoso. Se prefieren el luminol o el luminol sustituido y el perborato en disolución acuosa como reactivo de señal.
El término "reactivo de unión específico de diana" como se usa aquí significa una sustancia que se puede unir específicamente a una diana para ser analizada. La diana puede incluir un péptido activo fisiológicamente, una hormona, un ácido nucleico y sustancias similares. Cuando la diana para analizar es capaz de actuar como un antígeno, un anticuerpo (incluyendo anticuerpos policlonales y monoclonales, fragmentos de anticuerpos y similares) puede convertir un reactivo de unión específico de diana. Cuando la diana para analizar es un ácido nucleico, su ácido nucleico complementario (cadena sencilla) o fragmento de ácido nucleico puede ser un reactivo de unión específico de diana.
Se pueden usar como agentes quelantes en la invención agentes quelantes no luminiscentes que tengan geometrías moleculares apropiadas, es decir cualesquiera agentes quelantes no luminiscentes para quelación de un átomo de boro deficiente en electrones en un ion perborato. Son agentes quelantes adecuados compuestos que tienen una denticidad de al menos dos. Los reordenamientos de unión preferidos son bidentados siendo preferido especialmente con el tamaño de anillo quelado de cinco o seis miembros. Se prefiere que para la unión con estos sistemas al menos un grupo de ligando lleve una carga electronegativa. Los ligandos polidentados o macrocíclicos reducen la probabilidad del perborato para desunirse y hacer entonces sistemas favorecidos. Los agentes quelantes preferidos son glicina y ácido sulfosalicílico (abreviadamente en inglés SSA) pero se pueden emplear otros. La concentración adecuada del agente quelante presente en un reactivo de señal típico está en el intervalo de 4 a 15 mmoles/l, pero esta concentración depende hasta cierto punto de los otros componentes del reactivo de señal. De modo adecuado, el agente quelante está presente en un exceso estequiométrico sobre el perborato y el luminol en el reactivo de señal. En un reactivo de señal típico el agente quelante estará presente en una cantidad molar entre 2 y 10 veces las cantidades molares de luminol y perborato presentes allí.
El disolvente acuoso usado en el procedimiento analítico de la invención y por tanto presente en el reactivo de señal generalmente es agua o un tampón. Tampones adecuados incluyen aquellos tampones usados habitualmente en reacciones bioquímicas que incluyen en particular tampón fosfato y tampón borato. Se puede mencionar que en presencia de tampón borato y peróxido de hidrógeno se pueden formar los complejos mencionados en los esquemas de reacción 1 y 2 (J Flanagan et al, J Chem Soc., Dalton Trans, 1651, 1989: B N Chernyshov, Russian J. Inorg. Chem, 35(9), 1333, 1990). Adecuadamente el tampón tiene un pH en el intervalo de 5 a 12 y preferiblemente en el intervalo de 7 a 11. Los valores de pH por debajo de 5 están fuera de este intervalo de pH óptimo para las enzimas peroxidasa, de modo que la luminiscencia emitida es menor. Los valores de pH por encima de 12 están también fuera del intervalo óptimo de pH para las enzimas, pero en este caso resulta una luminiscencia más fuerte que no se basa en la actividad de la peroxidasa, es decir, que da lugar a luminiscencia no específica.
El catalizador preferido es una enzima peroxidasa, pero se pueden usar otros catalizadores, incluyendo porfirinas tales como MP11 (microperoxidasa). La enzima peroxidasa usada como sustancia de marcaje es adecuadamente una isoenzima básica de rábano (peroxidasa de rábano o abreviadamente en inglés HRP). Las isoenzimas adecuadas de peroxidasa de rábano incluyen la Tipo VI y la Tipo IX, disponibles comercialmente en Sigma Chemical, Poole, Dorset, prefiriéndose la Tipo VI para uso en esta invención.
La unión entre el reactivo de unión específico de diana y la enzima peroxidasa (es decir, el marcaje del agente de unión con la enzima) puede llevarse cabo mediante cualquier manera adecuada. El agente de unión y el marcaje de peroxidasa pueden unirse juntos directamente mediante procedimientos descritos en M. Brinkley, Bioconj. Chem., 3, página 2, (1992) o técnicas similares. Alternativamente se puede proporcionar el agente de unión específico de diana con un primer grupo químico tal como un grupo biotinilo seguido por reacción con peroxidasa que contiene un segundo grupo químico, reactivo con el primer grupo, tal como un residuo de avidina o estreptoavidina, de tal modo que el agente de unión se marca indirectamente.
El luminol para uso en esta invención es adecuadamente luminol de sodio. El perborato usado preferiblemente es perborato de sodio. Está presente en forma de una fuente de peróxido de hidrógeno, un sustrato para la enzima peroxidasa.
Preferiblemente el agente señal contiene un compuesto que puede potenciar la reacción quimioluminiscente tal como aquel descrito en la USP 4842997 y USP 5279940. En la presente invención se puede usar cualquier potenciador que pueda facilitar la transferencia de electrones desde el peróxido de hidrógeno (derivado del perborato) vía peroxidasa a luminol y puede exhibir una acción potenciada. Potenciadores adecuados incluyen 4-yodofenol, 4-bromofenol, 4-clorofenol, 4-fenilfenol, 2-cloro-fenilfenol, 6-hidiroxibenzotiazol, 4-[4'-(2'-metil)tiazolil]fenol, 4-[2'-[4'-metil)tiazolil]fenol, 4-(2'-benzotiazolil)fenol, 3-(10-fenotiazil)-n-propilsulfanota y 3-cloro, 4-hidroxiacetanilida. Cuando se lleva a cabo la reacción entre el luminol y el peróxido de hidrógeno por la peroxidasa en presencia de un potenciador adecuado, el potenciador aumenta la velocidad de oxidación de la enzima.
Además del agente quelante no luminiscente incluido en el reactivo de señal para competir con el luminol, se pueden incluir también otros agentes quelantes para retirar iones metálicos no requeridos y para otros propósitos.
La invención se ilustra mediante los siguientes ejemplos, cuyos resultados se muestran gráficamente en las figuras 1 y 2 de los dibujos que se acompañan, siendo los dibujos:
Figura 1: una gráfica del porcentaje de luminiscencia control, luminiscencia de fondo y relación señal-ruido que muestra el efecto de la adición de glicina a la reacción quimiolumniscente peroxidasa/luminol/perborato potenciada en el ejemplo 1; y
Figura 2: una gráfica de la emisión de luz en unidades de luz arbitrarias frente a la concentración de hormona estimulante del tiroides (TSH) que muestra el efecto de la adición de glicina en la curva de respuesta del inmunoensayo de TSH quimioluminiscente en el ejemplo 2.
\newpage
Ejemplo 1
Se añadió glicina a luminol perborato de sodio a pH 8,5 en un tampón borato que contenía citrato y 3-cloro, 4-hidroxiacetanilida (un potenciador quimioluminiscente):
Fórmula del reactivo
Producto químico Concentración
(mmoles por litro en agua)
Ácido bórico 57,5
Tetraborato de sodio 17,5
Perborato de sodio 2,00
Citrato de tri-sodio 4,65
Ácido cítrico 2,15
Cloruro potásico 100,0
3-cloro,4-hidroxiacetanilida 0,15
Luminol de sodio 1,00
Glicina 0 a 15,00
Al aumentar la concentración de glicina, se observó una reducción de la quimioluminiscencia de fondo. A concentraciones de glicina por encima de 4 mmoles/l, la salida de luz de fondo se estabilizó en aproximadamente un 40% de su nivel inicial. La luminiscencia catalizada por la adición de aproximadamente 100 atomoles (10-16 moles) de peroxidasa de rábano a 250 microlitros de la formación quimioluminiscente no fue afectada por la presencia de glicina, produciendo esta última un aumento útil de la relación señal-ruido (véase Figura 1).
La luminiscencia se midió en pocillos de microtitulación usando un "Armelite" como analizador de marca comercial registrada, Johnson & Johnson Clinical Diagnostics Limited (J & JCDL), Amersham, UK.
Ejemplo 2
La formulación quimioluminiscente del ejemplo 1, que contiene tanto cero como 5 moles de glicina por litro, se sustituyó por el reactivo comercial quimioluminiscente en el kit de inmunoensayo ultrasensible TSH-30 "Armelite" (TSH es hormona humana estimulante del tiroides), disponible en J & JCDL, Amersham, UK. Los siguientes resultados se obtuvieron usando el protocolo de ensayo publicado:
3
* La sensibilidad del ensayo se define como la concentración de TSH equivalente a dos desviaciones estándar (obtenidas a partir de 20 determinaciones duplicadas del patrón cero) sobre una señal de luz de cero.
Con la glicina, se observó una señal disminuida del patrón cero debido a una reducción de la quimioluminiscencia de fondo no específica. Consecuentemente, hubo una relación más alta entre el primer y segundo patrones (relación "B"/"A"). Asumiendo una característica lineal de la respuesta a la dosis entre dos patrones, los análisis estadísticos demostraron que el límite de detección más bajo para TSH (sensibilidad del ensayo) mejoró desde 0,0023 a 0,0014 miliunidades internacionales por litro con presencia de glicina. Esto implica una mayor capacidad del ensayo para resolver bajos niveles de TSH - una ventaja significativa en este tipo de ensayo.
Otros parámetros de realización del ensayo no se vieron afectados por la adición de glicina (véase la figura 2).

Claims (8)

1. Un procedimiento analítico quimioluminiscente que comprende el uso de un catalizador adecuado en una reacción con luminol o un luminol sustituido y un perborato en un disolvente acuoso y la detección y medida de la luminiscencia producida por la reacción, caracterizado porque el disolvente acuoso comprende un agente quelante no luminiscente presente en una cantidad molar entre 2 y 10 veces la cantidad molar de luminol o un luminol sustituido y entre 2 y 10 veces la cantidad molar de perborato para quelación de un átomo de boro deficiente en electrones en el perborato.
2. Un procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque el catalizador es una enzima peroxidasa.
3. Un procedimiento según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, caracterizado porque el agente quelante no luminiscente es un compuesto que tiene una denticidad de al menos dos.
4. Un procedimiento según la reivindicación 3, caracterizado porque el tamaño del anillo quelato es de cinco o de seis miembros.
5. Un procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado porque el agente quelante no luminiscente es glicina o ácido sulfosalicílico.
6. Un reactivo que comprende iones perborato en un disolvente acuoso caracterizado porque el disolvente acuoso también comprende un agente delante no luminiscente presente en una cantidad molar entre 2 y 10 veces la concentración molar de luminol o un luminol sustituido y entre 2 y 10 veces la cantidad molar de perborato para quelación de átomos de boro deficientes en electrones en los iones perborato.
7. Un reactivo según la reivindicación 6, caracterizado porque el agente quelante no luminiscente es glicina o ácido sulfosalicílico.
8. Un kit útil en un procedimiento analítico quimioluminiscente que comprende en una o más partes un primer reactivo que comprende luminol o un luminol sustituido en disolución acuosa y un segundo reactivo que comprende iones perborato en disolución acuosa caracterizado porque el segundo reactivo también comprende un agente quelante no luminiscente presente en una cantidad molar entre 2 y 10 veces la cantidad molar de luminol o un luminol sustituido y entre 2 y 10 veces la cantidad molar de perborato para quelación de átomos de boro deficientes en electrones en los iones perborato.
ES96305212T 1995-07-17 1996-07-16 Procedimiento analitico quimioluminiscente. Expired - Lifetime ES2205001T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9514594.2A GB9514594D0 (en) 1995-07-17 1995-07-17 Chemiluminescent analytical method
GB9514594 1995-07-17
US08/685,399 US5846756A (en) 1995-07-17 1996-07-23 Chemiluminescent analytical method

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2205001T3 true ES2205001T3 (es) 2004-05-01

Family

ID=26307417

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES96305212T Expired - Lifetime ES2205001T3 (es) 1995-07-17 1996-07-16 Procedimiento analitico quimioluminiscente.

Country Status (11)

Country Link
US (1) US5846756A (es)
EP (1) EP0754761B1 (es)
JP (2) JP3863223B2 (es)
AT (1) ATE249519T1 (es)
CA (1) CA2181131C (es)
DE (1) DE69629880T2 (es)
DK (1) DK0754761T3 (es)
ES (1) ES2205001T3 (es)
GB (1) GB9514594D0 (es)
PT (1) PT754761E (es)
SI (1) SI0754761T1 (es)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA05013865A (es) * 2003-07-25 2006-02-28 Wyeth Corp Formulaciones liofilizadas de cci-779.
CN1825093A (zh) * 2004-02-25 2006-08-30 先进科技股份有限公司 对样品中元素进行定量或者半定量性测定的流动分析系统
KR101940612B1 (ko) * 2017-06-16 2019-01-23 대한민국 혈흔 탐지용 조성물
CN112326636A (zh) * 2020-10-26 2021-02-05 通山县金瑞生物科技研发中心 一种高灵敏度的ecl试剂盒及其制备方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU558939B2 (en) * 1982-03-03 1987-02-12 British Technology Group Limited Enhanced luminescent and luminometric assay
EP0116454B1 (en) * 1983-02-11 1987-04-29 National Research Development Corporation Enhanced luminescent or luminometric assay
GB8420053D0 (en) * 1984-08-07 1984-09-12 Secr Social Service Brit Enhanced luminescent/luminometric assay
DE3545398A1 (de) * 1985-12-20 1987-06-25 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur steigerung der quanten-ausbeute bei der oxidation von luminol durch peroxide in gegenwart von peroxidase
JP2558450B2 (ja) * 1986-03-13 1996-11-27 和光純薬工業株式会社 キサンチンオキシダ−ゼの安定化方法
FR2602592B1 (fr) * 1986-08-06 1989-06-30 Alain Baret Utilisation du systeme enzymatique xanthine-oxydase en immuno-analyse, procedes de dosage correspondants et coffrets de reactifs necessaires pour la mise en oeuvre de ces procedes.
GB9209571D0 (en) * 1992-05-02 1992-06-17 Kodak Clinical Diagnostics Ltd Signal generating reagent
US5340714A (en) * 1992-05-08 1994-08-23 Monitor Diagnostics, Inc. Use of nonmetallic tetrapyrrole molecules and novel signal solutions in chemiluminescent reactions and assays
US5279940A (en) * 1992-08-03 1994-01-18 Eastman Kodak Company Chemiluminescent composition containing cationic surfactants or polymers and 4'-hydroxyacetanilide, test kits and their use in analytical methods
US5552298A (en) * 1992-10-23 1996-09-03 Lumigen, Inc. Enzyme-catalyzed chemiluminescence from hydroxyaryl cyclic diacylhydrazide compounds
US5512451A (en) * 1993-04-01 1996-04-30 British Technology Group Limited Enhancement of chemiluminescent reactions

Also Published As

Publication number Publication date
EP0754761A2 (en) 1997-01-22
PT754761E (pt) 2004-02-27
EP0754761B1 (en) 2003-09-10
EP0754761A3 (en) 1998-07-01
JPH09107991A (ja) 1997-04-28
CA2181131C (en) 2009-05-19
ATE249519T1 (de) 2003-09-15
DE69629880T2 (de) 2005-02-03
US5846756A (en) 1998-12-08
CA2181131A1 (en) 1997-01-18
JP3863223B2 (ja) 2006-12-27
SI0754761T1 (en) 2004-02-29
JP2006242966A (ja) 2006-09-14
GB9514594D0 (en) 1995-09-13
DE69629880D1 (de) 2003-10-16
DK0754761T3 (da) 2003-11-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH06100597B2 (ja) 改良発光分析
JPS60200167A (ja) 化学発光法による過酸化水素の定量法
Paul Recent analytical developments using chemiluminescence in solution
CN102313732A (zh) 增强和调节化学发光反应的光发射的方法
JPH05500902A (ja) ハロペルオキシターゼ酸至適化学的発光分析系
Veiopoulou et al. Comparative study of fluorescent ternary terbium complexes. Application in enzyme amplified fluorimetric immunoassay for α-fetoprotein
CA2181131C (en) Chemiluminescent analytical method
US11879148B2 (en) Methods for detection, determination, and activity measurement of peroxidase based on chemiluminescence
JP3711544B2 (ja) 化学発光測定試薬
US7067275B2 (en) Bioanalytical measuring method for determining catalases and peroxidases, as well as conjugates, substrates, activators and inhibitors thereof
US20020110842A1 (en) Photochemical amplified immunoassay
JP3632990B2 (ja) 化学発光測定試薬及び化学発光測定方法
JP3792898B2 (ja) ペルオキシダーゼ活性の測定方法
GB2289334A (en) Eneyme linked chemiluminescent assay utilising acridinium compounds or analogues thereof involving photon detection
GB2086042A (en) Process for Carrying Out Analytical Determinations by Means of Chemiluminescence, and the Use of the Process for Immunoassay
JP5048889B2 (ja) ペルオキシダーゼ活性の測定方法
JP4028648B2 (ja) ペルオキシダーゼ活性の測定方法
JP3792897B2 (ja) 新規化学発光試薬及びその製造方法
JPS6342470A (ja) ペルオキシダ−ゼまたはｈ↓２ｏ↓２の測定方法
JP3776229B2 (ja) 化学発光試薬及びその製造方法
JP3815905B2 (ja) 酵素免疫測定法
JP3792908B2 (ja) ペルオキシダーゼ活性の測定方法
RU1803832C (ru) Способ селективного определени биогенных порфиринов
JP2000063819A (ja) 新規化学発光試薬及びその製造方法
JPH11246853A (ja) 新規化学発光試薬及びその製造方法