ES2206580T3

ES2206580T3 - Sintesis de compuestos opticamente puros utiles como inhibidores de injerto y sus intermediarios.

Info

Publication number: ES2206580T3
Application number: ES96919095T
Authority: ES
Inventors: Michael D. Varney; William H. Romines; Cynthia L. Palmer
Original assignee: Agouron Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Agouron Pharmaceuticals LLC
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-06-07
Publication date: 2004-05-16
Anticipated expiration: 2016-06-07
Also published as: PT846111E; CA2224211A1; DE69629703D1; ATE248158T1; US5981748A; EP0846111A1; EP0846111B1; AU6152796A; WO1996040674A1; DE69629703T2; DK0846111T3; US5831100A; JPH11507054A

Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A METODOS DE FABRICAR COMPUESTOS DE FORMULA (VII) Y SUS ENANTIOMEROS, EN LOS QUE AR ES UN GRUPO AROMATICO SUSTITUIDO O NO SUSTITUIDO DE CINCO O SEIS MIEMBROS, Y B ES BIEN UN AMINOACIDO UNIDO A TRAVES DE LA PORCION AMINO PARA FORMAR UNA AMIDA O UN ALCOHOL C1 PORCION ALCOHOL PARA FORMAR UN ESTER. ESTOS COMPUESTOS PRESENTAN VENTAJAS EN SU USO COMO INTERMEDIARIOS PARA PREPARAR COMPUESTOS OPTICAMENTE PUROS QUE SON INHIBIDORES GARFT ACTIVOS. EN UN METODO, UN COMPUESTO DE FORMULA (III) O (XVII) SE HACE REACCIONAR CON UN COMPUESTO DE FORMULA (IV), EN EL QUE X ES UN HALOGENO.

Description

Síntesis de compuestos ópticamente puros útiles como inhibidores de injerto y sus intermediarios.

La presente invención se relaciona con métodos de preparación de compuestos ópticamente puros que inhiben la enzima glicinamida ribonucleótido formil transferasa (GARFT). La invención se relaciona también con los intermediarios ópticamente puros útiles para preparar los compuestos inhibidores de la GARFT ópticamente puros y con las síntesis de estos intermediarios.

La GARFT es una enzima dependiente de folato en la ruta de biosíntesis de novo de purinas. Esta ruta es crítica para la división y la proliferación celular. Se sabe que la interrupción de esta ruta tiene un efecto antiproliferativo, en particular un efecto antitumoral. Los compuestos que inhiben la GARFT inhiben, en consecuencia, el crecimiento y la proliferación de las células de organismos superiores o de microorganismos tales bacterias, levaduras y hongos.

Una serie de análogos de folato han sido sintetizados y estudiados en cuanto a su capacidad para inhibir la GARFT. Se ha descrito que un inhibidor prototípico de fuerte unión específica de la GARFT, el ácido 5,10-didesazatetrahidrofólico, muestra actividad antitumoral. Véase F.M. Muggia, "Folate antimetabolites inhibitor to de novo purine synthesis", New Drugs, Concepts and Results in Cancer Chemotherapy, Kluwer Academic Publishers, Boston (1992), 65-87.

Los antifolatos o antifoles son una subclase de antimetabolitos antiproliferativos y son antagonistas de la vitamina ácido fólico. Típicamente, los antifolatos tienen un estrecho parecido con la estructura del ácido fólico e incorporan el característico resto p-benzoilglu-tamato del ácido fólico. El resto glutamato del ácido fólico adopta una doble carga negativa a pH fisiológico. Así, este compuesto y sus análogos tienen un sistema de transporte activo accionado por energía para cruzar la membrana celular y ejercen un efecto metabólico.

Se han desarrollado recientemente compuestos útiles como agentes antiproliferativos o inhibidores de la GARFT, tales como determinados derivados del ácido glutámico, según se describe en la Solicitud EE.UU. Nº de Serie 08/282.
293 de Varney y col., presentada el 28 de Julio de 1994, y en la Solicitud Internacional PCT/US94/00418 de Varney y col., presentada el 18 de Enero de 1994. Dichos compuestos tienen también una actividad antitumoral, antiinflamatoria, antipsoriásica y/o inmunosupresora.

Se describen otros compuestos útiles como agentes antiproliferativos o inhibidores de la GARFT en WO 96/03406. Este documento describe también diversas rutas de reacción para preparar los compuestos deseados, que incluyen un derivado de tiofeno dihidroxialquil-substituido como intermediario. Los compuestos así obtenidos son sólo asequibles en forma de mezclas diastereoméricas. En WO 94/13295 se describen derivados de 5-tiapirimidinona y 5-selenopirimidinona que resultan inhibir las enzimas GARFT y aminoimidazolcarboxamida ribonucleótido formil transferasa (AICARFT).

La presente invención se relaciona con métodos ventajosos de preparación de dichos compuestos en formas ópticamente puras con buenos rendimientos. La invención se relaciona también con intermediarios ópticamente puros útiles para preparar los agentes antiproliferativos/inhibidores de la GARFT y con métodos de preparación de estos intermediarios.

A la vista de la actividad farmacológica de los compuestos inhibidores de la GARFT o antiproliferativos, sería deseable desarrollar un método para preparar convenientemente dichos compuestos en formas ópticamente puras. Como entenderán, en general, los expertos en la técnica, un compuesto ópticamente puro que tiene un centro quiral (es decir, un átomo de carbono asimétrico), es uno que consiste primariamente en uno de los dos enantiómeros posibles (es decir, que es enantioméricamente puro) y un compuesto ópticamente puro que tiene más de un centro quiral es uno que es diastereoméricamente puro. Tal como se usa aquí, el término "ópticamente puro" pretende significar un compuesto que consiste en al menos una cantidad suficiente de un solo enantiómero (o diastereómero en el caso de una pluralidad de centros quirales) para obtener un compuesto que tiene la actividad farmacológica deseada. Preferiblemente, "ópticamente puro" pretende significar un compuesto que consiste en al menos un 90% de un solo isómero (exceso enantiomérico o diastereomérico del 80%), preferiblemente al menos un 95% (90% e.e. o d.e.), más preferiblemente al menos un 97,5% (95% e.e. o d.e.) y, más preferiblemente aún, al menos un 99% (98% e.e. o d.e.).

Un objeto de la presente invención es desarrollar métodos para preparar con buenos rendimientos compuestos antiproliferativos inhibidores de la GARFT en formas ópticamente puras. Más concretamente, un objeto de la invención es desarrollar un método para sintetizar compuestos ópticamente puros de fórmula

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donde A es un átomo de oxígeno, azufre o selenio; Ar es un grupo aromático de cinco o seis miembros substituido o no substituido, y R_{1} y R_{2} son independientemente un átomo de hidrógeno o un resto que forma, junto con el CO_{2} unido, un grupo éster fácilmente hidrolizable. Objetos y ventajas adicionales de la invención serán evidentes gracias a la descripción detallada que se da a continuación.

Los objetos de la invención han sido alcanzados mediante un método de preparación de compuestos ópticamente puros de fórmula I

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por reacción de un compuesto de fórmula

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o su enantiómero,

donde Ar es un grupo aromático de cinco o seis miembros substituido o no substituido y B es un aminoácido unido a través de la porción amino para formar una amida o un alcohol C_{1}-C_{6} unido a través de la porción alcohólica para formar un éster, en condiciones adecuadas para formar un compuesto de fórmula I ópticamente puro.

Se consigue también este objeto mediante un compuesto ópticamente puro de fórmula

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donde:

Ar es un grupo aromático de cinco o seis miembros substituido o no substituido y B es un aminoácido unido a través de la porción amino para formar una amida, o un alcohol C_{1}-C_{6} unido a través de la porción alcohólica para formar un éster,

que tiene la configuración (R), y mediante un compuesto ópticamente puro de fórmula

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donde:

que tiene la configuración (S).

Los compuestos diólicos de fórmula VII y sus enantiómeros son intermediarios ópticamente puros útiles para preparar los inhibidores de la GARFT y agentes antiproliferativos ópticamente puros. En la fórmula VII, preferiblemente Ar es un grupo aromático de 5 miembros que tiene un átomo de anillo de azufre. Un aminoácido preferido para B es el dietilglutamato y un alcohol C_{1}-C_{6} preferido para B es metanol o etanol. Un intermediario preferido es el éster etílico del ácido 5-(3(S)-4-dihidroxibutil)tiofeno-2-carboxílico.

Los compuestos intermediarios de fórmula VII y sus enantiómeros son ventajosamente preparados según la invención por un método consistente en:

(a) la reacción de un compuesto de fórmula III

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o su enantiómero

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con un compuesto de fórmula IV

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donde X es bromo, fluoro, cloro o yodo y B y Ar son como se ha definido antes, para formar un compuesto de fórmula V

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donde Ar y B son como se ha definido antes, o su enantiómero;

(b) la reacción del compuesto de fórmula V o de su enantiómero con un agente reductor para obtener un compuesto de fórmula VI

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donde Ar y B son como se ha definido antes, o su enantiómero, y

(c) la reacción del compuesto de fórmula VI o de su enantiómero con un ácido en condiciones adecuadas para formar el compuesto de fórmula VII o su enantiómero.

Preferiblemente, en la etapa (a) la reacción es llevada a cabo en presencia de (i) un catalizador metálico de transición que contiene uno o más metales seleccionados entre paladio, cobre y níquel y (ii) un solvente en el que al menos uno de los compuestos reaccionantes es al menos parcialmente solubles; en la etapa (b), el agente reductor es hidrógeno gaseoso en presencia de un catalizador metálico que contiene paladio o platino y, en la etapa (c), el ácido es ácido p-toluensulfónico monohidrato y la reacción es llevada a cabo en metanol o etanol.

Otras características y ventajas de la invención resultarán obvias gracias a la siguiente descripción detallada, que ilustra realizaciones preferidas de la invención.

Tal como se ha explicado anteriormente, la invención se relaciona, en general, con un método de preparación de formas ópticamente puras de compuestos antiproliferativos capaces de inhibir la GARFT de fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables:

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donde:

A es un átomo de oxígeno, azufre o selenio;

Ar es un grupo aromático de cinco o seis miembros substituido o no substituido, y

R_{1} y R_{2} son independientemente un átomo de hidrógeno o un resto que forma, junto con el CO_{2} unido, un grupo éster fácilmente hidrolizable. El carbono en la posición 6 mostrado en la fórmula I está en la configuración R pura o en la S pura.

Preferiblemente, R_{1} y R_{2} son independientemente seleccionados entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, hidroxialquilo, alquilarilo y arilalquilo. Más preferiblemente, R_{1} y R_{2} son cada uno hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{2}.

Preferiblemente, A es azufre.

Ar es preferiblemente un grupo aromático de cinco miembros substituido o sin substituir. Como ejemplos ilustrativos de substituyentes estables para la especie substituida de Ar se incluyen grupos alquilo tales como metilo, etilo y propilo; grupos alquilo substituidos, tales como trifluorometilo, y halógenos, tales como bromo y cloro.

Son compuestos preferidos de fórmula I los del subgénero definido por la fórmula II:

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donde:

A' es azufre o selenio;

Y es oxígeno o azufre;

C y D son independientemente hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{6} substituido o no substituido, y

R_{1} y R_{2} son independientemente hidrógeno o un resto que forma, junto con el CO_{2} unido, un grupo éster fácilmente hidrolizable. El carbono C6 (asimétrico) está en la configuración R pura o en la configuración S pura.

Preferiblemente, R_{1} y R_{2} son independientemente seleccionados entre hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, hidroxialquilo, alquilarilo y arilalquilo. Más preferiblemente, estos substituyentes son independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{2}. A es preferiblemente azufre. Preferiblemente, Y es azufre. En realizaciones preferidas, C es hidrógeno o metilo y D es hidrógeno o metilo. Como ejemplos ilustrativos de substituyentes adecuados para la especie substituida de C y D se incluyen grupos alquilo tales como metilo y etilo.

Aunque los compuestos están representados en las fórmulas I y II en la forma 4-oxo y se hace referencia a ellos como tales en toda esta descripción, el grupo oxo existe en equilibrio tautomérico con el correspondiente grupo 4-hidroxi. Se entenderá, por lo tanto, que las formas hidroxi tautoméricas también pretenden quedar amparadas por las fórmulas.

Los compuestos de las fórmulas I y II en donde R_{1} y R_{2} son hidrógeno son compuestos antitumorales y antiproliferativos activos. Los compuestos en los que R_{1} y R_{2} son cada uno un resto, preferiblemente un grupo etilo, que forma con el CO_{2} unido un grupo éster hidrolizable, son intermediarios para la formación de formas de ácido glutámico libre de los compuestos y pueden también ser hidrolizados in vivo y actuar así como profármacos.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de las fórmulas I y II incluyen, por ejemplo, sales de metales no tóxicas, tales como sales de metales alcalinos y de metales alcalinotérreos, y sales de amonio substituidas y no substituidas de los compuestos de ácido glutámico de las fórmulas anteriores. Como sales ejemplares se incluyen sales de sodio, potasio, litio, calcio, magnesio y piridinio substituido y no substituido.

La invención se relaciona con métodos de preparación de ambas formas quirales (C6 = átomo de carbono asimétrico) de los compuestos de fórmula I o II. En una realización preferida para preparar formas R ópticamente puras C6 de los compuestos de fórmula I o II, se hace reaccionar al siguiente compuesto de fórmula III:

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en condiciones adecuadas con un compuesto de fórmula IV:

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donde X es un halógeno (bromo, fluoro, cloro o yodo), preferiblemente bromo; B es un aminoácido, preferiblemente dietilglutamato, unido a través de la porción amino para formar una amida, o bien un alcohol C_{1}-C_{6}, preferiblemente alcohol metílico o etílico, unido a través de la porción alcohólica para formar un éster, y Ar es como se ha definido en la fórmula I.

El compuesto de fórmula III puede ser preparado según métodos conocidos en la técnica, tales como los descritos en J. Am. Chem. Soc., Vol. 111 (1989), 7664-7665.

La reacción de los compuestos de las fórmulas III y IV es preferiblemente llevada a cabo en presencia de (i) un catalizador metálico de transición adecuado, preferiblemente paladio, cobre, níquel o una mezcla de dos o más de estos metales, y (ii) una base auxiliar no nucleofílica, preferiblemente una amina substituida (por ejemplo, trietilamina o dietilamina), (iii) en un solvente en el cual al menos uno de los compuestos reaccionantes es al menos parcialmente soluble. La reacción es llevada a cabo en condiciones suficientes para obtener un compuesto de fórmula V:

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donde Ar es como se ha definido en la fórmula I y B es como se ha definido en la fórmula IV.

El compuesto de fórmula V es reducido entonces en condiciones adecuadas para obtener un compuesto de fórmula VI:

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donde Ar es como se ha definido en la fórmula I y B es como se ha definido en la fórmula IV. Preferiblemente, el compuesto de fórmula V es reducido con hidrógeno gaseoso en presencia de un catalizador metálico adecuado, preferiblemente paladio o platino.

El compuesto de fórmula VI reacciona en condiciones adecuadas para obtener un compuesto intermediario de fórmula VII:

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donde Ar es como se ha definido en la fórmula I y B es como se ha definido en la fórmula IV. Preferiblemente, el compuesto de fórmula VI reacciona con un ácido, preferiblemente ácido p-toluensulfónico monohidrato, en un solvente alcohólico, preferiblemente metanol o etanol.

El compuesto de fórmula VII reacciona con un agente sulfonilante, preferiblemente cloruro de p-toluensulfonilo o cloruro de metanosulfonilo, en presencia de una base no nucleofílica, preferiblemente trietil-amina o diisopropiletilamina, para obtener un compuesto intermediario monosulfonilado. Este intermediario reacciona entonces con un nucleófilo nitrogenado, preferiblemente azida sódica, para obtener el compuesto de fórmula VIII:

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La funcionalidad azida del compuesto de fórmula VIII es reducida en condiciones adecuadas, preferiblemente con hidrógeno gaseoso en presencia de un catalizador metálico, y a continuación protegida con un grupo protector de nitrógeno adecuado, preferiblemente t-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo o bencilo, para obtener un compuesto de fórmula IX:

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donde Ar es como se ha definido en la fórmula I, B es como se ha definido en la fórmula IV y R_{4} y R_{5} son independientemente hidrógeno o un grupo protector de nitrógeno adecuado que se elimina fácilmente en presencia de otra funcionalidad sensible. Son grupos protectores de nitrógeno preferidos para R_{4} y R_{5} t_{-}butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo y bencilo.

El compuesto de fórmula IX reacciona entonces en condiciones adecuadas para obtener un compuesto de fórmula X:

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donde A y Ar son como se ha definido en la fórmula I, B es como se ha definido en la fórmula IV, R_{4} y R_{5} son como se ha definido en la fórmula IX y Ac es un grupo acilo, preferiblemente acetilo.

Preferiblemente, el compuesto de fórmula IX reacciona con un agente acilante o sulfonilante, preferiblemente cloruro de metanosulfonilo o cloruro de p-toluensulfonilo, en presencia de una base no nucleofílica, preferiblemente trietilamina o diisopropiletilamina, en un solvente adecuado en el cual es al menos parcialmente soluble al menos uno de los reactivos, para obtener un grupo hidroxi activado. El grupo hidroxi activado es posteriormente desplazado con un nucleófilo adecuado, preferiblemente una sal de tioácido, más preferiblemente tioacetato de potasio, para obtener un compuesto de fórmula X. Alternativamente, el compuesto de fórmula IX es convenientemente convertido en el compuesto de fórmula X usando (i) trifenilfosfina, (ii) azadicarboxilato de dietilo, diisopropilo o dimetilo y (iii) un nucleófilo ácido, preferiblemente ácido tioacético, (iv) en un solvente adecuado.

El compuesto de fórmula X reacciona en condiciones adecuadas para obtener un compuesto de fórmula XI:

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donde A y Ar son como se ha definido en la fórmula I, B es como se ha definido en la fórmula IV, R_{4} y R_{5} son como se ha definido en la fórmula IX y R_{6} es hidrógeno o un resto que forma, junto con el CO_{2} unido, un grupo éster fácilmente hidrolizable, preferiblemente alquilo C_{1}-C_{6}, hidroxialquilo, alquilarilo o aralquilo, más preferiblemente un alquilo

\hbox{C _{1} -C _{2} .}

Preferiblemente, el compuesto de fórmula X es tratado con una base nucleofílica, preferiblemente carbonato de potasio, carbonato de sodio, hidróxido de sodio o hidróxido de potasio, en un solvente alcohólico, preferiblemente metanol, etanol o isopropanol, en presencia de un agente alquilante, preferiblemente cloromalonato de dimetilo o de dietilo, para obtener un compuesto de fórmula XI.

Alternativamente, el compuesto de fórmula X reacciona con una base nucleofílica, preferiblemente carbonato de potasio, carbonato de sodio, hidróxido de sodio o hidróxido de potasio, en un solvente alcohólico, preferiblemente metanol, etanol o isopropanol, para generar el dímero oxidado y obtener un compuesto de fórmula XII:

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donde A y Ar son como se ha definido en la fórmula I, B es como se ha definido en la fórmula IV y R_{4} y R_{5} son como se ha definido en la fórmula IX. El compuesto de fórmula XII reacciona entonces con un agente reductor, preferiblemente borohidruro de sodio, en un solvente alcohólico, preferiblemente metanol o etanol. Se alquila entonces el producto reducido con un agente alquilante adecuado, preferiblemente cloromalonato de dietilo o dimetilo, en presencia de una base no nucleofílica, preferiblemente carbonato de sodio o de potasio, para obtener el compuesto de fórmula XI.

Se trata entonces el compuesto de fórmula XI para eliminar uno o ambos de los grupos protectores R_{4} y R_{5}. Por ejemplo, cuando un grupo protector es t_{-}butoxicarbonilo, el compuesto puede ser tratado con ácido trifluoroacético y luego neutralizado para obtener un compuesto de fórmula XIII:

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donde A y Ar son como se ha definido en la fórmula I, B es como se ha definido en la fórmula IV y R_{6} es como se ha definido en la fórmula XI.

El compuesto de fórmula XIII es entonces convertido en condiciones adecuadas en un compuesto de fórmula XIV:

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donde A y Ar son como se ha definido en la fórmula I y B es como se ha definido en la fórmula IV.

Preferiblemente, el compuesto de fórmula XIII reacciona con un agente alquilante, preferiblemente tetrafluoroborato de trimetil- o tetraetiloxonio, en un solvente adecuado, preferiblemente diclorometano, para formar un éter de lactima intermediario. El éter de lactima intermediario reacciona entonces con guanidina en un solvente alcohólico, preferiblemente metanol, etanol o isopropanol, para formar un compuesto de fórmula XIV. Alternativamente, el compuesto de fórmula XIII puede ser convertido en el compuesto de fórmula XIV por reacción del compuesto de fórmula XIII con un agente tiolante, preferiblemente P_{2}S_{5} o (2,4-bis(4-metoxifenil)-1,3-ditia-2,4-difosfetano-2,4-disulfuro), para formar el intermediario tiolactama. Se alquila entonces el éter con un agente alquilante, preferiblemente yoduro de metilo o tetrafluoroborato de trimetil- o trietiloxonio, y luego con guanidina en un solvente alcohólico, preferiblemente metanol, etanol o isopropanol, para obtener el compuesto de fórmula XIV.

Cuando B es una función alcohólica, de tal manera que el grupo unido a B forma un grupo éster, el compuesto de fórmula XIV puede ser hidrolizado en condiciones básicas para formar un compuesto de fórmula XV:

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donde A y Ar son como se ha definido en la fórmula I.

El compuesto de fórmula XV puede ser acoplado a péptidos por medios bien conocidos para los expertos en la técnica con un clorhidrato de diéster de ácido glutámico para formar un diéster de fórmula XVI:

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donde A, Ar, R_{1} y R_{2} son como se ha definido n la fórmula I, excepto por el hecho de que ni R_{1} ni R_{2} son hidrógeno.

Finalmente, si se desea, el compuesto de fórmula XVI es hidrolizado a la forma de ácido glutámico libre representada en la fórmula I (es decir, que tanto R_{1} como R_{2} son H).

Se pueden usar dos métodos para preparar formas (S) C6 ópticamente puras de los compuestos representados por la fórmula I. El primer método parte del compuesto de fórmula XVII (J. Am. Chem. Soc., Vol. 111 (1989), 7664-7665.

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Este compuesto es el enantiómero del compuesto de fórmula III. El compuesto de fórmula XVII es entonces utilizado de forma análoga a la antes descrita empleando el compuesto de fórmula III y el resto de la síntesis transcurre como se ha descrito antes, dando lugar a un enantiómero de fórmula XVI.

El segundo método para preparar las formas (S) C6 de los compuestos de las fórmulas I y II emplea el compuesto de fórmula VII. El compuesto de fórmula VII reacciona con un grupo protector adecuado, preferiblemente un agente sililante, más preferiblemente cloruro de t-butildimetilsililo, en presencia de una base no nucleofílica, preferiblemente trietilamina, en un solvente adecuado, preferiblemente diclorometano, para obtener un compuesto de fórmula XVIII:

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donde Ar es como se ha definido en la fórmula I, B es como se ha definido en la fórmula IV y R_{7} es un grupo hidroxi-protector adecuado, preferiblemente t-butildimetil-sililo.

El compuesto de fórmula XVIII reaccionacon un agente acilante o sulfonilante, preferiblemente cloruro de metanosulfonilo, para obtener un compuesto de fórmula XIX:

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En la fórmula XIX, Ar es como se ha definido en la fórmula I, B es como se ha definido en la fórmula IV, R_{7} es como se ha definido en la fórmula XVIII y R_{8} es un grupo acilo o sulfonilo, preferiblemente metanosulfonilo.

El compuesto de fórmula XIX reacciona con un reactivo adecuado para eliminar el grupo protector R_{7} y formar un alcohol. Cuando R_{7} es un grupo sililo, un reactivo preferido es una sal de fluoruro, preferiblemente fluoruro de tetrabutilamonio. El alcohol resultante es tratado luego con una base no nucleofílica fuerte, preferiblemente hidruro de sodio o de potasio, para obtener un compuesto de fórmula XX:

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El compuesto de fórmula XX reacciona con un anión que contiene nitrógeno, preferiblemente azida sódica, en presencia de un ácido de Lewis, preferiblemente perclorato de litio o de magnesio, en un solvente adecuado, preferiblemente acetonitrilo, para obtener un compuesto de fórmula XXI:

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El compuesto de fórmula XXI es el enantiómero del compuesto de fórmula VIII. El compuesto de fórmula XXI es procesado de forma análoga a la descrita anteriormente para el compuesto de fórmula VIII para preparar los compuestos de fórmula I que tienen la configuración (S) C6.

Como ejemplos de compuestos de fórmula I preparados según la invención se incluyen: éster dietílico del ácido (2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-6] [1,4]tiazin-6(R)il)etil]tiofeno)-2-L-glutámico); éster dietílico del ácido (2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido(5,4-6] [1,4]tiazin-6(S)il)etil]tiofeno)-2-L-glutámico); ácido 2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-6] [1,4]-tiazin-6(R)il)etil]tiofeno)-2-L-glutámico; ácido 2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-6]-[1,4] tiazin-6(S)il)etil]tiofeno)-2-L-glutámico; éster di-etílico del ácido (2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-te-trahidro-3H-pirimido[5,4-6] [1,4]tiazin-6(R)il)etil]-4-me-tiltiofeno)-2-L-glutámico); éster dietílico del ácido (2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-6] [1,4]tiazin-6(S)il)etil]-4-metiltiofeno)-2-L-glutámico); ácido 2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-6] [1,4]tiazin-6(R)il)etil]4-metiltiofeno)-2-L-glutámico; ácido 2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetra-hidro-3H-pirimido[5,4-6] [1,4]tiazin-6(S)il)etil]-4-metil-tiofeno)-2-L-glutámico; éster dietílico del ácido (2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-6] -[1,4]tiazin-6(R)il)etil]-3-metiltiofeno)-2-L-glutámico); éster dietílico del ácido (2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-6] [1,4)tiazin-6(S)il)-etil]-3-metiltiofeno)-2-L-glutámico); ácido 2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-6] [1,4]-tiazin-6(R)il)etil]-3-metiltiofeno)-2-L-glutámico y ácido 2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido-[5,4-6] [1,4]tiazin-6(S)il)etil]-3-metiltiofeno)-2-L-glutámico.

Los compuestos de las fórmulas I y II y sus sales son particularmente útiles en el tratamiento de hospedadores mamíferos, tales como hospedadores humanos, y en el tratamiento de hospedadores aviares. Estos compuestos producen cualesquiera uno o más entre efectos antiproliferativos, antibacterianos, antiparasitarios, antivíricos, antipsoriásicos, antiprotozoarios, anticoccídicos, antiinflamatorios, inmunosupresores y antifúngicos. Los compuestos son especialmente útiles en la producción de un efecto antitumoral en un hospedador vertebrado que alberga un tumor.

Los compuestos de las fórmulas I y II, así como sus sales farmacéuticamente aceptables, pueden ser incorporados en formas convenientes de dosificación, tales como cápsulas, tabletas y preparaciones inyectables. Dichas preparaciones farmacéuticas pueden ser preparadas siguiendo técnicas convencionales de la química farmacéutica que incluyen etapas tales como mezcla, granulación y compresión cuando sea necesario para formas de tabletas, o de mezcla, rellenado y disolución de los ingredientes según sea apropiado para obtener los productos deseados para administración oral, parenteral, tópica, intravaginal, intranasal, intrabronquial, intraocular, intraaural y rectal.

Se pueden emplear vehículos, diluyentes o excipientes sólidos o líquidos farmacéuticamente aceptables en las composiciones farmacéuticas. Los vehículos sólidos incluyen almidón, lactosa, sulfato de calcio dihidrato, alabastro, sacarosa, talco, gelatina, agar, pectina, acacia, estearato de magnesio y ácido esteárico. Como vehículos líquidos se incluyen jarabe, aceite de cacahuete, aceite de oliva, solución salina y agua. El vehículo o diluyente puede incluir cualquier material de liberación prolongada, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo, solo o con cera. Cuando se usa un vehículo líquido, la preparación puede estar en forma de jarabe, elixir, emulsión, cápsula de gelatina blanda, líquido inyectable estéril (por ejemplo, solución) o suspensión líquida no acuosa o acuosa.

Una dosis de una composición contiene al menos una cantidad fectiva del compuesto activo (es decir, de un compuesto de fórmula I o de una sal del mismo farmacéuticamente aceptable) y está constituida preferiblemente por una o más unidades de dosificación farmacéuticas. Una cantidad efectiva es una cantidad suficiente para inhibir la ruta metabólica del folato y derivar los efectos beneficiosos que resultan de ello, por ejemplo a través de la administración de una o más unidades de dosificación farmacéuticas.

Un ejemplo de dosis diaria para un hospedador vertebrado contiene una cantidad de hasta un gramo de compuesto activo por kilogramo de peso corporal del hospedador, preferiblemente medio gramo, más preferiblemente 100 milígramos, e incluso más preferiblemente aproximadamente 50 milígramos o menos, por kilogramo de peso del hospedador. La dosis seleccionada puede ser administrada a un animal de sangre caliente o mamífero, por ejemplo, un paciente humano que necesite un tratamiento mediado por la inhibición de la ruta metabólica del folato, mediante cualquier método conocido de administración de la dosis, incluyendo: la vía tópica, por ejemplo como ungüento o crema; la oral; la rectal, por ejemplo como supositorio; la parenteral por inyección; o de forma continua por infusión intravaginal, intranasal, intrabronquial, intraaural o intraocular.

Se describen realizaciones preferidas de la invención en los siguientes ejemplos, que se facilitan con fines ilustrativos.

Ejemplo 1 Preparación de ácido 2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-6][1,4]-tiazin-6(R)-il)etil]tiofeno)-2-L-glutámico (15) (a) Preparación de éster etílico del ácido 5-(2,2-dimetil[1,3]dioxolan-4(S)-iletinil)tio-feno-2-carboxílico (1)

32

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Se agitó una solución que contenía 76,61 g (0,60 mol) de 4-etinil-2,2-dimetil[1,3]dioxolano bruto, 100,65 g (0,43 mol) de éster etílico del ácido 5-bromo-tiofeno-2-carboxílico (J. Am. Chem. Soc., Vol. 111 (1989), 7664-7665), 14,84 g (0,01 mol) de tetrakis(tri-fenilfosfina)paladio(0), 4,89 g (0,03 mol) de yoduro de cobre (I) y 119 ml (0,85 mol) de trietilamina en 700 ml de acetonitrilo desgasificado bajo argón durante 18 horas. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida hasta obtener una suspensión espesa, que fue filtrada a través de un filtro de vidrio sinterizado, lavando la torta del filtro con hexanos:EtOAc (20:1) y pequeñas cantidades de CH_{2}Cl_{2}. Se concentró el filtrado a presión reducida y se sometió el residuo resultante a cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con EtOAc (acetato de etilo) al 5-16% en hexanos. El rendimiento de éster etílico del ácido 5-(2,2-dimetil[1,3]dioxolan-4(S)ileti-nil)tiofeno-2-carboxílico (1) era de 74,61 g (62%) como un aceite ámbar.

[\alpha]_{589} +36,6º (c = 0,88, MeOH).

IR (neto) 2986, 2226, 1715, 1451, 1255, 1223, 1096, 1065 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,34 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,42 (s, 3H), 1,53 (s, 1H), 4,03 (dd, 1H, J=6,2, 1,8Hz), 4,34 (dd, 1H, J=6,4, 1,6Hz), 4,34 (c, 2H, J=7,1Hz), 4,95 (dd, 1H, J=6,4, 0Hz), 7,16 (d, 1H, J=3,9Hz), 7,63 (d, 1H, J=3,9Hz).

Análisis calculado para C_{14}H_{16}O_{4}S: C, 59,98; H, 5,75; S, 11,44. Encontrado: C, 59,96; H, 5,71; S, 11,36.

(b) Preparación de éster etílico del ácido 5-[2-(2,2-dimetil[1,3]dioxolan-4(S)-il)etil]tiofeno-2-carboxílico (2)

33

Se agitó un matraz Parr que contenía 75,10 g (268 mmol) del compuesto acetileno (1) y 12,00 g de Pd 5%/C en 500 ml de EtOH (etanol) bajo 45 psi de hidrógeno durante 3 horas. Se filtró la mezcla a través de una almohadilla de Celita (material de tierra de diatomeas) y se concentró el filtrado a presión reducida, obteniéndose 73,25 g (96%) de éster etílico del ácido 5-[2-(2,2-dimetil[1,3]dioxolan-4(S)il)etil]tiofeno-2-carboxílico (2) como un aceite incoloro. Se obtuvo una muestra analítica por cromatografía instantánea en gel de sílice eluyendo con CH_{2}Cl_{2}.

[\alpha]_{589} -12,1º (c = 0,78, MeOH).

IR (neto) 2984, 2938, 2874, 1709, 1462, 1263, 1094, 1069 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,37 (s, 3H), 1,43 (s, 3H), 1,94 (m, 2H), 2,96 (m, 2H), 3,55 (t, 1H, J=7,3Hz), 4,04 (dd, 1H, J=6,1, 1,5Hz), 4,12 (m, 1H), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,82 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,63 (d, 1H, J=4,0Hz).

Análisis calculado para C_{14}H_{20}O_{4}S: C, 59,13; H, 7,09; S, 11,28. Encontrado: C, 59,23; H, 7,14; S, 11,31.

(c) Preparación de éster etílico del ácido 5-(3(S)-4-dihidroxibutil)tiofeno-2-carboxílico (3)

34

A una solución agitada de 65,98 g (232 mmol) del compuesto acetónido (2) en 300 ml de EtOH, se añadieron 17,65 g (93 mmol) de ácido p-toluensulfónico monohidrato. Se calentó la mezcla de reacción a 65ºC durante 3 horas, se concentró a presión reducida y se disolvió de nuevo en EtOH y se continuó agitando. Se repitió este procedimiento hasta que el material de partida (2) hubo desaparecido, según se determinó por "TLC" (cromatografía en capa fina). Se diluyó la reacción bruta con EtOAc, se lavó con NaHCO_{3} saturado, se lavó con NaCl saturado, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. Se recristalizó el residuo con Et_{2}O:hexanos, obteniéndose 49,90 g del diol (3). Se sometieron los licores madre a cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con EtOAc 30-100% en CH_{2}Cl_{2}. Esto dio otros 5,81 g del diol (3) como un sólido blanco de bajo punto de fusión. El rendimiento global del diol (3) fue de 55,71 g (98%).

[\alpha]_{589} -28,7º (c = 0,82, MeOH).

IR (neto) 3393 (amplio), 2936, 1705, 1462, 1287, 1098, 1047 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,2Hz), 1,7 (s amplio, 2H), 1,76 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,48 (dd, 1H, J=7,4, 3,5Hz), 3,68 (dd, 1H, J=7,6, 3,2Hz), 3,77 (m, 1H), 4,32 (c, 2H, J=7,2Hz), 6,82 (d, 1H, J=3,9Hz), 7,63 (d, 1H, J=3,7Hz).

Análisis calculado para C_{11}H_{16}O_{4}S: C, 54,08; H, 6,60; S, 13,12. Encontrado: C, 53,81; H, 6,43; S, 13,37.

(d) Preparación de éster etílico del ácido 5-(3(S)-hidroxi-4-p-tolilmetanosulfoniloxibutil)tiofeno-2-carboxílico (4)

35

A una solución helada de 45,42 g (186 mmol) del diol (3) y 31,1 ml (223 mmol) de trietilamina en 400 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 38,99 g (204 mmol) de cloruro de p-toluensulfonilo. Se retiró el baño de hielo y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 18 horas y se vertió en HCl 0,5 N y se separaron las capas resultantes. Se volvió a extraer la capa acuosa con CH_{2}Cl_{2}. Se lavaron las capas orgánicas combinadas con NaCl saturado, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía instantánea en gel de sílice, primeramente con EtOAc 4-100% en CH_{2}Cl_{2} hasta que eluyó el producto (4) y luego con MeOH 0-10% en EtOAc para eluir el diol (3) de partida. Esto produjo 7,43 g de diol (3) y 49,23 g (66%) del monotosilato (4) como un aceite de color claro, que solidificó en reposo.

[\alpha]_{589} -8,2º (c = 0,74, MeOH).

IR (neto) 3507 (amplio), 2947, 1705, 1462, 1362, 1287, 1177, 1098 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=6,9Hz), 1,78 (m, 2H), 2,46 (s, 3H), 2,95 (m, 2H), 3,90 (m, 2H), 4,03 (m, 1H), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,78 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,36 (d, 2H, J=8,2Hz), 7,61 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,79 (d, 2H, J=8,2Hz).

Análisis calculado para C_{18}H_{22}O_{6}S_{2}: C, 54,25; H, 5,57; S, 16,09. Encontrado: C, 54,13; H, 5,57; S, 16,17.

(e) Preparación de éster etílico del ácido 5-(4-azido-3(S)-hidroxibutil)tiofeno-2-carboxílico (5)

36

A una solución agitada de 42,94 g (108 mmol) del tosilato (4) en 250 ml de DMF (N,N-dimetilformamida), se añadieron 31,52 g (485 mmol) de azida sódica. Se calentó la solución bajo argón durante 4 horas a 80ºC. Se enfrió la mezcla de reacción y se vertió en 600 ml de NaCl saturado y se separó el aceite resultante. Se extrajo la solución acuosa tres veces con Et_{2}O. Se combinaron los extractos de Et_{2}O con el aceite y se lavaron una vez con NaCl, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron, obteniéndose 33,0 g de la azida (5) como un producto bruto, que era lo suficientemente puro como para ser usado en la etapa siguiente (f). Se obtuvo una muestra analítica de la azida (5) por cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con CH_{2}Cl_{2}-EtOAc (20:1), para producir un aceite incoloro.

[\alpha]_{589} -18,8º (c = 0,84, MeOH).

IR (neto) 3345 (amplio), 2926, 2099, 1705, 1539, 1460, 1281, 1094 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,1Hz, 1,85 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 3,79 (m, 1H), 4,32 (c, 2H, J=7,1Hz), 6,82 (d, 1H, J=3,6Hz), 7,63 (d, 1H, J=4,0Hz).

Análisis calculado para C_{11}H_{15}N_{3}O_{3}S_{2}: C, 49,05; H, 5,61; N, 15,60; S, 11,90. Encontrado: C, 48,89; H, 5,70; N, 15,37; S, 12,02.

(f) Preparación de éster etílico del ácido 5-(4-terc-butoxicarbonilamino-3(S)-hidroxibutil)-tiofeno-2-carboxílico (6)

37

Se agitó un matraz Parr que contenía 32,70 g (121 mmol) de la azida bruta (5), 27,83 g (127 mmol) de dicarbonato de diterc-butilo, 4,5 g de Pd 5%/C y 300 ml de THF bajo H_{2} a 30 psi. Se mantuvo la reacción exotérmica a una presión por debajo de 45 psi. Al cabo de 2 horas, se filtró la mezcla bruta a través de una almohadilla de Celita y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con EtOAc 6-50% en CH_{2}Cl_{2}. Se obtuvieron así 35,04 g (84%) del producto (6) como un aceite incoloro.

[\alpha]_{589} -24,8º (c = 0,86, MeOH).

IR (neto) 3391 (amplio), 2980, 1723, 1674, 1537, 1462, 1368, 1283, 1171, 1096 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,45 (s, 9H), 1,81 (m, 2H), 2,94-3,07 (m, 3H), 3,26 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 4,32 (c, 2H, J=7,1Hz), 4,9 (s amplio, 1H), 6,82 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,62 (d, 1H, J=4,0Hz).

Análisis calculado para C_{16}H_{25}NO_{5}S: C, 55,95; H, 7,34; N, 4,08; S, 9,34. Encontrado: C, 55,89; H, 7,42; N, 4,13; S, 9,45.

(g) Preparación de éster etílico del ácido 5-(4-terc-butoxicarbonilamino-3(S)-metanosulfonil-oxibutil)tiofeno-2-carboxílico (7)

38

A una solución helada de 34,34 g (100 mmol) del alcohol (6) y 20,9 ml (150 mmol) de trietilamina en 250 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 9,3 ml (120 mmol) de cloruro de metanosulfonilo. Después de 30 minutos, se vertió la mezcla de reacción en HCl 0,5 N y se separaron las capas. Se lavó la capa orgánica con NaHCO_{3} saturado y luego con NaCl saturado, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. Esto produjo 38,36 g (91%) del mesilato (7) en forma de un aceite amarillo, el cual solidificó en reposo. Se usó este material bruto (7) en la etapa siguiente (h) sin mayor purificación.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,44 (s, 9H), 2,09 (m, 2H), 3,00 (m, 2H), 3,08 (s, 3H), 3,34-3,56 (m, 2H), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,79 (m, 1H), 4,95 (t amplio, 1H), 6,82 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,62 (d, 1H, J=3,8Hz).

(h) Preparación de éster etílico del ácido 5-(3(R)-acetilsulfanil-4-terc-butoxicarbonil-aminobutil)tiofeno-2-carboxílico (8)

39

A una solución agitada de 38,36 g (91,0 mmol) del mesilato bruto (7) en 650 ml de acetona, se añadieron 41,57 (364 mmol) de tioacetato de potasio. Después de 14 horas, el mesilato de partida (7) había desaparecido, según se pudo determinar por TLC, y la mezcla de reacción era de un color rojo-marrón y espesa con precipitado. Se filtró la mezcla de reacción bruta y se lavó el precipitado filtrado con acetona y Et_{2}O hasta que se volvió de color beige. Se concentró el filtrado a presión reducida hasta un volumen de 500 ml, se diluyó con EtOAc, se lavó con NaCl saturado, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. Se purificó el aceite bruto por cromatografía instantánea en 250 g de gel de sílice, eluyendo con hexanos:EtOAc (1:1), para eliminar las impurezas de color basal. El rendimiento era de 39,77 g (109%) del tioacetato (8) como un aceite rojo, el cual fue usado en la etapa (i) sin mayor purificación. Se obtuvo una muestra analítica por cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con hexanos:EtOAc (1:1), produciendo un aceite incoloro.

[\alpha]_{589} +7,6º (c = 0,66, MeOH).

IR (neto) 3376, 2978, 2932, 1712, 1684, 1520, 1462, 1263, 1171, 1094 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,44 (s, 9H), 1,90 (m, 1H), 2,04 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,95 (m, 2H), 3,36 (m, 2H), 3,60 (m, 1H), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,78 (t amplio, 1H), 6,78 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,61 (d, 1H, J=3,7Hz).

Análisis calculado para C_{18}H_{27}NO_{5}S_{2}: C, 53,84; H, 6,78; N, 3,49; S, 15,97. Encontrado: C, 53,79; H, 6,87; N, 3,38; S, 15,85.

(i) Preparación de éster dimetílico del ácido 2-[1-(terc- butoxicarbonilaminometil)-3(R)-(5-etoxicarboniltiofen-2-il)propilsulfanil] malónico (9)

40

A una solución helada agitada de 39,77 g (99,0 mmol) del tiolacetato bruto (8) y 13,91 ml (109,0 mmol) de cloromalonato de dimetilo en 350 ml de MeOH, se añadieron 27,38 g (198,1 mmol) de carbonato de potasio. Después de 3 horas a 0ºC, se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 2 horas, hasta que hubo desaparecido el material de partida (8) (TLC). Después de verter en H_{2}O y de extraer con EtOAc (3x), se lavaron las capas orgánicas combinadas con NaCl saturado, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a presión reducida, produciendo 49,80 g de un disulfuro bruto. A una solución agitada de 11,44 g (15,96 mmol) de este disulfuro en EtOH bajo argón, se añadieron 1,81 g (47,85 mmol) de borohidruro de sodio. Después de 4 horas, se apagó la mezcla de reacción con HCl 0,5 N, se diluyó con EtOAc y se lavó con más HCl 0,5 N. Se lavó la capa orgánica dos veces con NaCl saturado, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida, para obtener 10,88 g de una mezcla bruta de tiol/disulfuro, que fue disuelta en MeOH desgasificado. Se añadieron a esta solución, agitando al mismo tiempo, 5,79 ml (45,36 mmol) de cloromalonato de dimetilo y 8,36 g (60,49 mmol) de carbonato de potasio. Después de agitar durante 30 minutos bajo argón, se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc, se lavó dos veces con NaCl saturado, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo resultante por cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con hexanos:EtOAc (3:1). Esto dio 4,20 g del disulfuro, que fue reciclado, y 6,96 g (45%) del malonato deseado (9) como un aceite amarillo claro.

[\alpha]_{589} +31,9º (c = 0,64, MeOH).

IR (neto) 3397, 2978, 2938, 1759, 1715, 1505, 1454, 1275, 1165, 1093, 1020 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,46 (s, 9H), 1,86 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 3,04 (m, 3H), 3,31 (m, 2H), 3,81 (s, 6H), 4,24 (s, 1H), 4,34 (c, 2H, J=7,0Hz), 5,13 (s amplio, 1H), 6,83 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,64 (d, 1H, J=3,7Hz).

Análisis calculado para C_{21}H_{31}NO_{8}S_{2}: C, 51,51; H, 6,38; N, 2,86; S, 13,10. Encontrado: C, 51,29; H, 6,45; N, 2,78; S, 13,01.

(j) Preparación de éster metílico del ácido 6-[2-(5-etoxicarboniltiofen-2-il)etil]-3(R)-oxo-tiomorfolina-2-carboxílico (10)

41

A una solución helada de 29,18 g (59,60 mmol) del malonato (9) en 225 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 35 ml de ácido trifluoroacético. Al cabo de 1 hora a 0ºC, la mezcla de reacción no mostró material de partida por TLC. Se diluyó la mezcla de reacción con CH_{2}Cl_{2} y se lavó de forma continua con NaHCO_{3} saturado, asegurándose de que la capa acuosa fuera alcalina. Se lavó la capa orgánica con NaCl saturada, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. Se disolvió la amina bruta resultante en MeOH y se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Se eliminaron los volátiles a presión reducida. Se sometió la lactama bruta resultante a cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con CH_{2}Cl_{2}:EtOAc (2:1). Esto produjo 17,74 g (83%) del producto deseado (10) como un aceite ámbar.

[\alpha]_{589} +30,9º (c = 0,92, MeOH).

IR (neto) 3314, 3242, 2951, 1732, 1660, 1462, 1294, 1157, 1096, 1009 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,94 (m, 2H), 2,95-3,25 (m, 2H), 3,42-3,67 (m, 3H), 3,79 y 3,82 (s, s, 3H), 4,14 y 4,25 (s, s, 1H), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,23 (m, 1H), 6,82 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,63 (d, 1H, J=3,7Hz).

Análisis calculado para C_{15}H_{19}NO_{5}S_{2}: C, 50,40; H, 5,36; N, 3,92; S, 17,94. Encontrado: C, 50,33; H, 5,38; N, 3,82; S, 17,90.

(k) Preparación de éster metílico del ácido 6-[2-(5-etoxicarboniltiofen-2-il)etil]-3(R)-metoxi-5,6-dihidro-2H-[1,4] tiazina-2-carboxílico (11)

42

A una solución agitada de 11,799 g (33,01 mmol) de la lactama (10) en 70 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 6,835 g (46,21 mmol) de tetrafluoroborato de trimetiloxonio. Después de agitar durante 18 horas bajo argón a temperatura ambiente, se había consumido toda la lactama de partida. Se enfrió entonces la mezcla de reacción y se añadió K_{2}CO_{3} acuoso al 50% hasta que el pH se volvió alcalino. Se filtró el KBF_{4} y se separaron las capas. Se volvió a extraer la capa acuosa con CH_{2}Cl_{2}. Se lavaron las capas orgánicas combinadas con NaCl saturado, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a presión reducida, obteniéndose 11,55 g (94%) del éter de lactima bruto (11), que fue usado en la etapa siguiente sin mayor purificación.

(l) Preparación de éster etílico del ácido 5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-b]tiazin-6 (R)-il)etil]tiofeno-2-carbo-xílico (12)

43

Se preparó una solución de etóxido de sodio disolviendo 0,845 g (36,75 mmol) de sodio metálico en etanol absoluto desgasificado bajo argón. Se añadieron a esta solución 3,63 g (38,00 mmol) de clorhidrato de guanidina. Después de agitar durante 15 minutos, se añadió una solución de 4,55 g (12,25 mmol) del éter de lactima (11) en EtOH absoluto desgasificado y se calentó la mezcla a reflujo durante 1 hora. Se neutralizó la reacción enfriada con HCl 0,5 N, se diluyó con EtOAc y se extrajo repetidamente. Se lavaron las capas de EtOAc combinadas con NaCl saturado, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a presión reducida. Se suspendió el residuo sólido en EtOH caliente, se enfrió y se filtró, produciendo 1,75 g (33%) del producto deseado (12) como un sólido amarillo claro (p.f. 166ºC, forma espuma).

[\alpha]_{589} +57,7º (c = 0,62, DMSO).

IR (KBr) 3349 (amplio), 2926, 1701, 1640, 1603, 1537, 1458, 1344, 1285, 1096 cm^{-1}.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,23 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,80 (m, 2H), 2,82- 3,00 (m, 2H), 3,15-3,52 (m, 3H), 4,21 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,00 (s, 2H), 6,64 (s, 1H), 6,95 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,59 (d, 1H, J=3,7Hz), 10,04 (s, 1H).

HRMS calculado para C_{15}H_{18}N_{4}O_{3}S_{2}: (M+Na^{+}) 389,0718. Encontrado: 389,0731.

(m) Preparación de ácido 5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-b] [1,4]-tiazin-6(R)-il)etil]tiofeno-2-carboxílico (13)

44

Se agitó una solución de 1,152 g (3,14 mmol) del éster (12) en 10 ml de NaOH 1 N a temperatura ambiente durante 2 horas. Se filtró la mezcla de reacción para eliminar un material amarillento. Se acidificó el filtrado con HCl concentrado y luego con HCl 2 N a un pH de 3 y se recogió el precipitado resultante, se lavó con una pequeña cantidad de H_{2}O y se secó. Se obtuvieron así 894 mg (84%) del ácido deseado (13) como un sólido de color blanco sucio (p.f. 283-285ºC, con descomposición).

[\alpha]_{589} +71,0º (c = 0,60, NaOH 1 N).

IR (KBr) 3256 (amplio), 2942, 1707, 1641, 1612, 1464, 1364, 1105 cm^{-1}.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,72 (m, 1H), 1,89 (m, 1H), 2,81-3,04 (m, 2H), 3,16-3,52 (m, 3H - parcialmente obscurecido por H_{2}O), 6,08 (s, 2H), 6,68 (s, 1H), 6,92 (d, 1H, J=4,0Hz), 7,52 (d, 1H, J=3,7Hz), 10,12 (s, 1H), 12,80 (s amplio, 1H).

Análisis calculado para C_{13}H_{14}N_{4}O_{3}S_{2}\cdot0,60 H_{2}O: C, 44,71; H, 4,39; N, 16,04; S, 18,36. Encontrado: C, 44,67; H, 4,37; N, 16,00; S, 18,25.

(n) Preparación de éster dietílico del ácido 2-{5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-b] [1,4]tiazin-6(R)-il)etil]tiofeno}-2-L-glutámico (14)

45

A una solución agitada de 278 mg (0,82 mmol) del ácido (13), 117 mg (0,87 mmol) de 1-hidroxibenzo-triazol, 150 ml (0,87 mmol) de N,N-diisopropiletilamina y 207 mg (0,87 mmol) de diclorhidrato del éster dietílico del ácido L-glutámico en 8 ml de DMF, se añadieron 165 mg (0,87 mmol) de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida. Se agitó la mezcla de reacción bajo argón durante 18 horas y se vertió luego en una solución de NaCl saturada helada. Se recogió el precipitado gomoso y se extrajo el filtrado acuoso dos veces con CH_{2}Cl_{2}. Se lavaron el precipitado y los extractos de CH_{2}Cl_{2} combinados dos veces con NaCl saturado y se secaron después (MgSO_{4}). Se eliminó el solvente a presión reducida y se purificó el residuo resultante por cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con CH_{2}Cl_{2}:MeOH (10:1). Esto dio 282 mg (65%) del glutamato deseado (14) como un sólido blanco (p.f. 108-112ºC).

[\alpha]_{589} +35,0º (c = 0,68, DMSO).

IR (KBr) 3343 (amplio), 2930, 1732, 1634, 1545, 1450 1344, 1207,1024 cm^{-1}.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,13 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,14 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,91 (m, 4H), 2,37 (t, 2H, J=7,3Hz), 2,89 (m, 2H), 3,23 (m, 2H), 3,49 (m, 1H), 4,00 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,06 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,34 (m, 1H), 6,01 (s, 2H), 6,63 (s, 1H), 6,90 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,66 (d, 1H, J=3,7Hz), 8,60 (d, 1H, J=7,3Hz), 10,07 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{22}H_{29}N_{5}O_{6}S_{2}\cdot1,0H_{2}O: C, 48,78; H, 5,77; N, 12,93; S, 11,84. Encontrado: C, 48,77; H, 5,72; N, 12,81; S, 11,73.

(o) Preparación de ácido 2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-b] [1,4]-tiazin-6(R)-il)etil]tiofeno)-2-L-glutámico (15)

46

Se agitó una solución de 5,068 g (9,68 mmol) del glutamato (14) en 35 ml de NaOH 1 N a temperatura ambiente durante 3,5 horas. Se acidificó la mezcla de reacción con HCl concentrado y luego con HCl 2 N hasta un pH de aproximadamente 3. Se recogió el precipitado resultante por filtración, se lavó con H_{2}O y se secó a vacío, para obtener 4,486 g (99%) del ácido deseado (15) como un sólido de color blanco sucio (p.f. 191-194ºC, forma espuma).

[\alpha]_{589} +61,9º (c = 0,65, NaOH 1 N).

IR (KBr) 3389, 3235, 3086, 2924, 1701, 1624, 1545, 1340, 1148 cm^{-1}.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,70-2,04 (m, 4H), 2,29 (t, 2H, J=7,3Hz), 2,90 (m, 2H), 3,13-3,53 (m, 3H - parcialmente obscurecido por H_{2}O), 4,29 (m, 1H), 6,30 (s, 2H), 6,77 (s, 1H), 6,89 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,66 (d, 1H, J=3,7Hz), 8,50 (d, 1H, J=8,1Hz), 10,30 (s amplio, 1H).

Análisis calculado para C_{18}H_{21}N_{5}O_{6}S_{2}\cdot1,80 H_{2}O: C, 43,24; H, 4,96; N, 14,01; S, 12,83. Encontrado: C, 42,88; H, 4,61; N, 13,75; S, 12,60.

Evaluación biológica y bioquímica del Compuesto (15)

Se modificó el método de ensayo de la GAR-transformilasa (GARFT) de Young y col., Biochemistry, vol. 23 (1984), 3979-3986, y se utilizó como se describe a continuación. Se prepararon mezclas de reacción que contenían el dominio catalítico de la GARFT humana, 0-250 nM de compuesto de ensayo, 20 \muM de glicinamida ribonucleótido (GAR), 10 ó 20 \muM de N^{10}-formil-5,8-didesazafo-lato (FDDF), 50 mM de HEPES-KOH (pH 7,5) y 50 mM de KCl. Se inició la reacción con adición de enzima a una concentración final de 11 nM, seguido de monitorización del aumento de absorbancia a 294 nm a 20ºC (\varepsilon_{294} = 18,9 mM^{-1} cm^{-1}).

Se determinó la constante de inhibición de la GARFT (K_{i}) a partir de la dependencia de la velocidad catalítica en estado estacionario con respecto al inhibidor y a la concentración de substrato. Se determinó el tiempo de inhibición observado como competitivo con respecto a FDDF por la dependencia de la K_{i} aparente (K_{i,app}) con respecto a la concentración de FDDF y se vio que estaba descrito por K_{i,app} = K_{i} + (K_{i} + (K_{i}/K_{m}) [FDDF]. Se determinó la constante de Michaelis para FDDF, K_{m}, independientemente por la dependencia de la velocidad catalítica con respecto a la concentración de FDDF. Se ajustaron los datos para las determinaciones de K_{m} y K_{i} por métodos no lineales a la ecuación de Michaelis o a la ecuación de Michaelis para inhibición competitiva, según resultara apropiado. Se analizaron los datos resultantes de la inhibición de la fuerte unión y se determinó la K_{i} ajustando los datos a la ecuación de fuerte unión de Morrison, Biochem. Biophys. Acta, Vol. 185 (1969), 269-286, por métodos no lineales. Se determinó que el compuesto (15) tenía una K_{i} GARFT de 3 nM.

Ejemplo 2 Preparación de éster etílico del ácido 5-(4-terc-butoxicarbonilamino-3(R)-hidroxibutil)-tiofeno-2-carboxílico (21) (a) Preparación de éster etílico del ácido 5-[4-(terc-butildimetilsilaniloxi)-3(S)-hidroxibutil]tiofeno-2-carboxílico (16)

47

A una solución helada agitada de 0,946 g (3,87 mmol) del diol (3) y 0,81 ml (5,81 mmol) de trietilamina en 10 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 0,701 g (4,65 mmol) de cloruro de terc-butildimetilsililo. Se retiró el baño de hielo y se agitó la reacción a temperatura ambiente. Después de agitar durante 24 horas, se añadieron 117 mg (0,78 mmol) adicionales de cloruro de ter-butildimetilsililo y 0,16 ml (1,16 mmol) de trietilamina. Después de agitar durante 5 días a temperatura ambiente, se diluyó la mezcla de reacción con más CH_{2}Cl_{2} se lavó luego secuencialmente con HCl 0,5 N, NaHCO_{3} saturado y NaCl saturado. Se secó la capa orgánica (MgSO_{4}) y se eliminó el solvente a presión reducida. Se purificó el residuo bruto resultante por cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con EtOAc 0-20% en CH_{2}Cl_{2}. Se obtuvieron así 1,252 g (90%) del producto deseado (16) como un aceite incoloro.

[\alpha]_{589} -26,6º (c = 0,82, MeOH).

IR (neto) 3486 (amplio), 2953, 2930, 2859, 1709, 1462, 1259, 1096 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 0,07 (s, 6H), 0,90 (s, 9H), 1,36 (t, 3H, J=7,2Hz), 1,78 (m, 2H), 2,96 (m, 2H), 3,43 (m, 1H), 3,64 (m, 2H), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,82 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,62 (d, 1H, J=4,0Hz).

Análisis calculado para C_{17}H_{30}O_{4}SSi: C, 56,94; H, 8,43; S, 8,94. Encontrado: C, 56,74; H, 8,43; S, 8,89.

(b) Preparación de éster etílico del ácido 5-[4-(terc-butildimetilsilaniloxi-3(S)-metanosulfoniloxibutil]tiofeno-2-carboxílico (17)

48

A una solución helada agitada de 23,19 g (64,68 mmol) del alcohol (16) y 13,5 ml (96,86 mmol) de trietilamina en 200 ml de CH_{2}Cl_{2}, se añadieron 6,0 ml (77,52 mmol) de cloruro de metanosulfonilo. Después de 30 minutos a 0ºC, se calentó la mezcla de reacción hasta la temperatura ambiente. Después de otros 30 minutos, se diluyó la mezcla de reacción con CH_{2}Cl_{2} y se lavó después secuencialmente con HCl 0,5 N, NaHCO_{3} saturado y NaCl saturado. Se secó la capa orgánica (MgSO_{4}) y se eliminó el solvente a presión reducida, obteniéndose 26,61 g (94%) del mesilato deseado (17) como un aceite incoloro, el cual fue usado en la etapa siguiente sin mayor purificación.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 0,11 (s, 3H), 0,13 (s, 3H), 0,92 (s, 9H), 1,39 (t, 3H, J=7,0Hz), 2,08 (m, 2H), 3,03 (m, 2H), 3,10 (s, 3H), 3,80 (m, 2H), 4,36 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,75 (m, 1H), 6,88 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,66 (d, 1H, J=3,7Hz).

(c) Preparación de éster etílico del ácido 5-(4-hidroxi-3(S)-metanosulfoniloxibutil)tiofeno-2-carboxílico (18)

49

A una solución agitada de 26,56 g (60,83 mmol) de alcohol protegido (17) en 200 ml de THF (tetrahidrofurano), se añadieron 67 ml (67,00 mmol) de una solución 1,0 M de fluoruro de tetrabutilamonio en THF. Después de agitar durante 1,5 horas a temperatura ambiente, se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc y se lavó con HCl 0,5 N. Se volvió a extraer la capa acuosa con EtOAc. Se lavaron las capas orgánicas combinadas dos veces con NaCl saturado, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con EtOAc 0-20% en CH_{2}Cl_{2}. Esto dio 12,465 g (64%) del producto deseado (18) como un aceite incoloro, el cual solidificó con el reposo.

[\alpha]_{589} -4,3º (c = 0,78, MeOH).

IR (neto) 3520, 2982, 2940, 1705, 1684, 1462, 1345, 1287, 1173, 1098 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 2,09 (m, 2H), 3,01 (m, 2H), 3,12 (s, 3H), 3,80 (m, 2H), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,81 (m, 1H), 6,86 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,63 (d, 1H, J=3,7Hz).

Análisis calculado para C_{12}H_{18}O_{6}S_{2}: C, 44,70; H, 5,63; S, 19,89. Encontrado: C, 44,75; H, 5,70; S, 19,82.

(d) Preparación de éster etílico del ácido 5-(2(R)-oxiraniletil)tiofeno-2-carboxílico (19)

50

A una solución helada agitada de 559 mg (1,73 mmol) del mesilato (18) en 10 ml de THF se añadieron 76 mg (1,90 mmol) de una dispersión al 60% de hidruro de sodio (NaH) en aceite mineral. Después de 1 hora, se retiró el baño de hielo y se agitó la reacción a temperatura ambiente. Después de agitar durante 18 horas, se añadieron otros 35 mg (0,88 mmol) de una dispersión al 60% de NaH. Después de 4 días de agitación, se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc, se lavó con HCl 0,5 N y luego con NaCl saturado, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. Se sometió el residuo bruto resultante a cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con CH_{2}Cl_{2}. En consecuencia, se obtuvieron 322 mg (82%) del epóxido deseado (19) como un aceite incoloro.

[\alpha]_{589} +19,6º (c = 1,14, MeOH).

IR (neto) 2984, 1707, 1460, 1283, 1262, 1092 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,80-2,05 (m, 2H), 2,51 (dd, 1H, J=4,8, 2,6Hz), 2,78 (dd, 1H, J=4,8, 4,1Hz), 2,99 (m, 3H), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,82 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,63 (d, 1H, J=3,7Hz).

Análisis calculado para C_{11}H_{14}O_{3}S: C, 58,38; H, 6,24; S, 14,17. Encontrado: C, 58,49; H, 6,29; S, 14,06.

(e) Preparación de éster etílico del ácido 5-(4-azido-3(R)-hidroxibutil)tiofeno-2-carboxílico (20)

51

A una solución agitada de 200 mg (0,88 mmol) del epóxido (19) en 10 ml de CH_{3}CN, se añadieron 296 mg (1,33 mmol) de perclorato de magnesio. Al cabo de 10 minutos, la mezcla de reacción se hizo homogénea y se añadieron 144 mg (2,21 mmol) de azida sódica. Se calentó la mezcla de reacción a 75ºC. Después de 18 horas, se añadieron 25 mg (0,39 mmol) de azida sódica y se continuó agitando durante 18 horas más. Se enfrió la mezcla de reacción y se diluyó con EtOAc y se lavó luego con NaCl saturado. Se volvió a extraer la capa acuosa con EtOAc. Se lavaron las capas orgánicas combinadas con NaCl saturado, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con EtOAc 20-25% en hexanos. Esto produjo 187 mg (79%) de la azida (20) como un aceite incoloro.

[\alpha]_{589} +18,9º (c = 0,62, MeOH).

IR (neto) 3462 (amplio), 2982, 2936, 2101, 1705, 1682, 1462, 1269, 1096 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,85 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,30 (m, 2H), 3,79 (m, 1H), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,82 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,63 (d, 1H, J=3,7Hz).

Análisis calculado para C_{11}H_{15}O_{3}S: C 49,05; H, 5,61; N, 15,60; S, 11,90. Encontrado: C, 48,97; H, 5,64; N, 15,51; S, 11,97.

(f) Preparación de éster etílico del ácido 5-4-terc-butoxicarbonilamino-3(R)-hidroxibutil)-tiofeno-2-carboxílico (21)

52

Se agitó vigorosamente una solución de 144 mg (0,53 mmol) de la azida (20), 14 mg de Pd 5%/C y 128 mg (0,59 mmol) de dicarbonato de diterc-butilo en 10 ml de THF bajo 1 atmósfera de H_{2} durante 18 horas. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celita y se eliminó el solvente bajo presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con EtOAc 9-20% en CH_{2}Cl_{2}. Esto dio 166 mg (90%) del producto deseado (21) como un aceite incoloro.

[\alpha]_{589} +26,3º (c = 0,76, MeOH).

IR (neto) 3378 (amplio), 2980, 2934, 1715, 1682, 1516, 1462, 1294, 1099 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,33 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,44 (s, 9H), 1,79 (m, 2H), 2,22 (s amplio, 1H), 3,04 (m, 3H), 3,25 (m, 1H), 3,73 (m, 1H), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,81 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,62 (d, 1H, J=3,7Hz).

Análisis calculado para C_{16}H_{25}NO_{5}S: C, 55,95; H, 7,34; N, 4,08; S, 9,34. Encontrado: C, 55,88; H, 7,35; N, 4,01; S, 9,40.

(g) Preparación de éster etílico del ácido 5-(4-terc-butoxicarbonilamino-3(R)-metanosulfonil-oxibutil)tiofeno-2-carboxílico (22)

53

Partiendo del alcohol (21), se preparó el compuesto (22) con un rendimiento bruto del 94% según el procedimiento general descrito para el compuesto (7).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,45 (s, 9H), 2.07 (m, 2H), 3,00 (m, 2H), 3,06 (s, 3H), 3,37-3,50 (m, 2H), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,78 (m, 1H), 4,91 (t amplio, 1H), 6,84 (d, 1H, J=4,0Hz), 7,62 (d, 1H, J=4,0Hz).

(h) Preparación de éster etílico de ácido 5-(3(S)-acetilsulfanil-4-terc-butoxicarbonil-aminobutil)tiofeno-2-carboxílico (23)

54

Partiendo del mesilato (22), se preparó el compuesto (23) con un rendimiento del 86% según el procedimiento general descrito para el compuesto (8).

[\alpha]_{589} -4,9º (c = 0,61, MeOH).

IR (neto) 3374, 2978, 2932, 1715, 1695, 1518, 1460, 1264, 1171, 1096 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,44 (s, 9H), 1,90 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,95 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 3,59 (m, 1H), 4,31 (2H, c, J=7,0Hz), 4,74 (t amplio, 1H), 6,79 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,62 (d, 1H, J=3,7Hz).

Análisis calculado para C_{18}H_{27}NO_{5}S_{2}: C, 53,84; H, 6,78; N, 3,49; S, 15,97. Encontrado: C, 53,75; H, 6,86; N, 3,43; S, 16,07.

(i) Preparación de éster dimetílico de ácido 2-[1-(terc-butoxicarbonilaminometil)-3(S)-(5-etoxicarboniltiofen-2- il)propilsulfanil]malónico (24)

55

A una solución agitada de 8,44 g (21,0 mmol) de tioacetato (23) y 3,22 ml (25,2 mmol) de cloromalonato de dimetilo en 75 ml de metanol desgasificado a 0ºC, se añadieron 5,81 g (42,0 mmol) de carbonato de potasio. Se dejó agitar a la reacción, bajo una atmósfera de Ar, durante 1 h a 0ºC y luego durante 1,5 h a temperatura ambiente, se vertió en NaCl saturado y se extrajo dos veces con EtOAc. Se lavó la capa orgánica combinada dos veces más con una solución saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4}) y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo resultante por cromatografía instantánea en gel de sílice, eluyendo con hexanos:EtOAc (3:1). Esto produjo 9,678 g (94%) del malonato deseado (24) como un aceite amarillo.

[\alpha]_{589} -32,8º (c = 0,67, MeOH).

IR (neto) 3395 (amplio), 2978, 1755, 1715, 1699, 1462, 1261 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,44 (s, 9H), 1,86 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 3,02 (m, 3H), 3,31 (m, 2H), 3,79 (s, 6H), 4,23 (s, 1H), 4,33 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,81 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,62 (d, 1H, J=3,7Hz).

Análisis calculado para C_{21}H_{30}NO_{8}S_{2}: C, 51,51; H, 6,38; N, 2,86; S, 13,10. Encontrado: C, 51,58; H, 6,42; N, 2,79; S, 13,01.

(j) Preparación de éster etílico del ácido 6-[2-(5-butoxicarboniltiofen-2-il)etil]-3(S)-oxo-tiomorfolina-2-carboxílico (25)

56

Partiendo del malonato (24), se preparó el compuesto (25) con un rendimiento del 86% según el procedimiento general descrito para el compuesto (10).

[\alpha]_{589} -30,5º (c = 1,01, MeOH).

IR (neto) 3320, 3229, 2951, 1738, 1703, 1669, 1460, 1281 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,91-2,04 (m, 2H), 2,95-3,25 (m, 2H), 3,42-3,65 (m, 3H), 3,79 y 3,82 (s, s, 3H), 4,13 y 4,25 (s, s, 1H), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,26 (m, 1H), 6,82 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,64 (d, 1H, J=3,7Hz).

Análisis calculado para C_{15}H_{19}NO_{5}S_{2}: C: 50,40; H, 5,36; N, 3,92; S, 17,94. Encontrado: C, 50,47; H, 5,34; N, 3,95; S, 17,84.

(k) Preparación de éster etílico del ácido 6-[2-(5-butoxicarboniltiofen-2-il)etil]-3(S)-metoxi-5,6-dihidro-2H-[1,4] tiazina-2-carboxílico (26)

57

Partiendo de la lactama (25), se preparó el compuesto (26) con un rendimiento bruto cuantitativo según el procedimiento general descrito para el compuesto (11) y se utilizó en la siguiente etapa sin purificación.

(l) Preparación de éster etílico del ácido 5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-b] tiazin-6(S)-il)etil]tiofeno-2-carboxílico (27)

58

Partiendo del éter de lactima (26), se preparó el compuesto (27) con un rendimiento del 45% según el procedimiento general descrito para el compuesto (12) (p.f. 181-184ºC).

[\alpha]_{589} -59,7º (c = 0,38, DMSO).

IR (KBr) 3335, 2926, 1705, 1632, 1593, 1456, 1335, 1260 cm^{-1}.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,23 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,72 (m, 1H), 1,88 (m, 1H), 2,81-3,00 (m, 2H), 3,16-3,52 (m, 3H), 4,22 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,00 (s, 2H), 6,65 (s, 1H), 6,96 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,60 (d, 1H, J=3,7Hz), 10,04 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{15}H_{18}N_{4}O_{3}S_{2}\cdot0,4H_{2}O\cdot0,5 EtOH: C, 48,44; H, 5,54; N, 14,12; S, 16,17. Encontrado: C, 48,69; H, 5,52; N, 14,07; S, 16,00.

(m) Preparación de ácido 5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-b] [1,4]-tiazin-6(S)-il)etil]tiofeno-2-carboxílico (28)

59

Partiendo del éster (27), se preparó el compuesto (28) con un rendimiento del 98% según el procedimiento general descrito para el compuesto (13) (p.f. 258-261ºC, con descomposición).

[\alpha]_{589} -81,3º (c = 0,63, NaOH 1 N).

IR (KBr) 3254 (amplio), 2918, 1692, 1635, 1458, 1352, 1101 cm^{-1}.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,72 (m, 1H), 1,89 (m, 1H), 2,80-3,03 (m, 2H), 3,16-3,52 (m, 3H -parcialmente obscurecido por H_{2}O), 6,09 (s, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,92 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,52 (d, 1H, J=3,7Hz), 10,20 (s, 1H), 12,80 (s amplio, 1H).

HRMS calculado para C_{13}H_{14}N_{4}O_{3}S_{2}: (M+Na^{+}) 361,0405. Encontrado: 361,0390.

(n) Preparación de éster dietílico de ácido 2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-b] [1,4]tiazin-6(S)-il)etil]tiofeno)-2-L-glutámico (29)

60

Partiendo del ácido (28), se preparó el compuesto (29) con un rendimiento del 60% según el procedimiento general descrito para el compuesto (14) (p.f. 105-110ºC, con formación de espuma).

[\alpha]_{589} -55,5º (c = 0,53, DMSO).

IR (KBr) 3345, 2930, 1734, 1653, 1636, 1541, 1456, 1345 cm^{-1}.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,12 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,14 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,75-2,03 (m, 4H), 2,37 (t, 2H, J=7,4Hz), 2,88 (m, 2H), 3,17 (m, 2H), 3,47 (m, 1H), 4,01 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,07 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,34 (m, 1H), 6,00 (s, 2H), 6,64 (s, 1H), 6,89 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,65 (d, 1H, J=3,7Hz), 8,60 (d, 1H, J=7,3Hz), 10,05 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{22}H_{29}N_{5}O_{6}S_{2}\cdot1,0 H_{2}O: C, 48,78; H, 5,77; N, 12,93; S, 11,84. Encontrado: C, 48,73; H, 5,74; N, 12,96; S, 11,92.

(o) Preparación de ácido 2-(5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-b] [1,4]-tiazin-6(S)-il)etil]tiofeno-2-L-glutámico (30)

61

Partiendo del diéster (29), se preparó el compuesto (30) con un rendimiento del 97% según el procedimiento descrito para el compuesto (15) (p.f. 220ºC, con descomposición).

[\alpha]_{589} -57,1º (c = 0,61, NaOH 1 N).

IR (KBr) 3353, 3094, 2926, 1711, 1641, 1605, 1559, 1454, 1400, 1333, 1279, 1080 cm^{-1}.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,70-2,05 (m, 4H), 2,29 (t, 2H, J=7,4Hz), 2,87 (m, 2H), 3,15-3,48 (m, 3H -parcialmente obscurecido por H_{2}O), 4,29 (m, 1H), 6,03 (s, 2H), 6,66 (s, 1H), 6,89 (d, 1H, J=3,7Hz), 7,65 (d, 1H, J=3,7Hz), 8,50 (d, 1H, J=7,7Hz), 10,05 (s, 1H), 12,50 (s amplio, 2H).

Análisis calculado para C_{18}H_{21}N_{5}O_{6}S_{2}\cdot1,4H_{2}O: C, 43,87; H, 4,87; N, 14,21; S, 13,01. Encontrado: C, 43,83; H, 4,78; N, 14,10; S, 12,90.

Ejemplo 3 Preparación de ácido 5-{2-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-b][1,4]-tiazin-6(R)-il)etil]-4-metil- tiofeno}-2-L-glutámico (45) (a) Preparación de éster etílico del ácido 5-(2,2-dimetil[1,3]dioxolan-4(S)-iletinil)-4-metiltiofeno-2-carboxílico (31)

62

Partiendo de 4(S)-etinil-2,2-dimetil[1,3]dioxolano y de éster etílico del ácido 2-bromo-3-metiltiofeno-5-carboxílico, preparado según M. Nemec, Collection Czechoslov. Chem. Commun., se preparó el compuesto (31) con un rendimiento del 67% según el procedimiento general descrito para el compuesto (1).

[\alpha]_{589} +36,7º (c = 1,04, MeOH).

IR (neto) 2986, 2936, 2222, 1711, 1441, 1283, 1244, 1190 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,42 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 4,04 (dd, 1H, J=6,2, 1,8Hz), 4,26 (dd, 1H, J=6,2, 1,8Hz), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,99 (t, 1H, J=6,0Hz), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{15}H_{18}O_{4}S: C, 61,20; H, 6,16; S, 10,89. Encontrado: C, 61,33; H, 6,21 S, 10,78.

(b) Preparación de éster etílico del ácido 5-[2-(2,2-dimetil[1,3]dioxolan-4(S)-il)etil]-3-metiltiofeno-2-carboxílico (32)

63

Partiendo del alquino (31), se preparó el compuesto (32) con un rendimiento del 98% según el procedimiento general descrito para el compuesto (2).

[\alpha]_{589} -12,6º (c = 0,94, MeOH).

IR (neto) 2984, 2936, 2872, 1707, 1456, 1371, 1246, 1069 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,36 (s, 3H), 1,43 (s, 3H), 1,88 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,80-2,91 (m, 2H), 3,55 (dd, 1H, J=6,6, 0,7Hz), 4,03 (dd, 1H, J=5,9, 1,8Hz), 4,12 (m, 1H), 4,31 (c, 2H, J=7,0Hz), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{15}H_{22}O_{4}S: C, 60,37; H, 7,43; S, 10,75. Encontrado: C, 60,42; H, 7,48; S, 10,68.

(c) Preparación de éster etílico del ácido 5-(3(S)-4-dihidroxibutil)-4-metiltiofeno-2-carboxílico (33)

64

Partiendo de dioxolano (32), se preparó el compuesto (33) con un rendimiento del 92% según el procedimiento general descrito para el compuesto (3).

[\alpha]_{589} -24,3º (c = 0,61, MeOH).

IR (KBr) 3264 (amplio), 2924, 1707, 1458, 1447, 1260, 1179, 1074 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,76 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,89 (m, 2H), 3,48 (dd, 1H, J=7,4, 3,3Hz), 3,68 (dd, 1H, J=7,7, 3,3Hz), 3,75 (m, 1H), 4,30 (c, 2H, J=7,0Hz), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{12}H_{18}O_{4}S: C, 55,79; H, 7,02; S, 12,41. Encontrado: C, 55,69; H, 6,99; S, 12,31.

(d) Preparación de éster etílico del ácido 5-(3(S)-hidroxi-4-p-tolilmetanosulfoniloxibutil)-4-metiltiofeno-2-carboxílico (34)

65

Partiendo del diol (33), se preparó el compuesto (34) con un rendimiento del 60% según el procedimiento general descrito para el compuesto (4).

[\alpha]_{589} -5,7º (c = 0,74, MeOH).

IR (neto) 3491 (amplio), 2982, 2928, 1703, 1449, 1360, 1250, 1177 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,71 (m, 2H), 2,13 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,85 (m, 2H), 3,88-4,03 (m, 3H), 4,31 (c, 2H, J=7,0Hz), 7,36 (d, 2H, J=8,1Hz), 7,48 (s, 1H), 7,79 (d, 2H, J=8,4Hz).

Análisis calculado para C_{19}H_{24}O_{6}S_{2}: C, 55,32; H, 5,86; S, 15,55. Encontrado: C, 55,37; H, 5,92; S, 15,48.

(e) Preparación de éster etílico del ácido 5-(4-azido-3(S)-hidroxibutil)-4-metiltiofeno-2-carboxílico (35)

66

Partiendo del tosilato (34), se preparó el compuesto (35) con un rendimiento bruto del 96% según el procedimiento general descrito para el compuesto (5) y se usó sin purificación.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,80 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,83-2,96 (m, 2H), 3,29 (dd, 1H, J=12,1, 7,4Hz), 3,40 (dd, 1H, J=12,1, 3,7Hz), 3,78 (m, 1H), 4,30 (c, 2H, J=7,0Hz), 7,50 (s, 1H).

(f) Preparación de éster etílico del ácido 5-(4-terc-butoxicarbonilamino-3(S)-hidroxibutil)-4-metiltiofeno-2-carboxílico (36)

67

Partiendo de la azida (35), se preparó el compuesto (36) con un rendimiento del 89% según el procedimiento general descrito para el compuesto (6).

[\alpha]_{589} -21,7º (c = 0,71, MeOH).

IR (neto) 3385 (amplio), 2978, 2932, 1715, 1682, 1520, 1454, 1254, 1177, 1073 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,44 (s, 9H), 1,75 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,80-2,94 (m, 2H), 3,08 (dd, 1H, J=14,3, 7,4Hz), 3,28 (dd, 1H, J=14,3, 3,0Hz), 3,74 (m, 1H), 4,30 (c, 2H, J=7,0Hz), 7,49 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{17}H_{27}NO_{5}S: C, 57,12; H, 7,61; N, 3,92; S, 8,97. Encontrado: C, 57,05; H, 7,65; N, 3,96; S, 9,07.

(g) Preparación de éster etílico del ácido 5-(4-terc-butoxicarbonilamino- 3(S)-metanosulfonil-oxibutil)-4-metiltiofeno-2-carboxílico (37)

68

Partiendo del alcohol (36), se preparó el compuesto (37) con un rendimiento del 94% según el procedimiento general descrito para el compuesto (7).

[\alpha]_{589} +7,8º (c = 0,60, MeOH).

IR (KBr) 3362, 2982, 1699, 1680, 1530, 1350, 1278, 1175, 1071 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,45 (s, 9H), 2,01 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,89 (m, 2H), 3,07 (s, 3H), 3,30-3,48 (m, 2H), 4,31 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,80 (m, 1H), 4,95 (t amplio, 1H), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{18}H_{29}NO_{7}S_{2}: C, 49,63; H, 6,71; N, 3,22; S, 14,72. Encontrado: C, 49,72; H, 6,76; N, 3,26; S, 14,82.

(h) Preparación de éster etílico del ácido 5-(3(R)-acetilsulfanil-4-terc-butoxicarbonil-aminobutil)-4-metiltiofeno-2-carboxílico (38)

69

Partiendo del mesilato (37), se preparó el compuesto (38) con un rendimiento del 96% según el procedimiento general descrito para el compuesto (8).

[\alpha]_{589} -2,8º (c = 0,78, MeOH).

IR (neto) 3376, 2978, 2932, 1699, 1516, 1454, 1250, 1173, 1073 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,34 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,44 (s, 9H), 1,80- 2,04 (m, 2H), 2,13 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,85 (m, 2H), 3,38 (m, 2H), 3,60 (m, 1H), 4,30 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,88 (t amplio, 1H), 7,48 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{19}H_{29}NO_{5}S_{2}: C, 54,91; H, 7,03; N, 3,37; S, 15,43. Encontrado: C, 54,97; H, 7,05; N, 3,39; S, 15,32.

(i) Preparación de éster dimetílico del ácido 2-[1-(terc-butoxicarbonilaminometil)-3(R)-(5-etoxicarbonil-3-metiltiofeno-2- il)propilsulfanil]malónico (39)

70

Partiendo del tioacetato (38), se preparó el compuesto (39) con un rendimiento del 90% según el procedimiento general descrito para el compuesto (24).

[\alpha]_{589} +22,7º (c = 0,67, MeOH).

IR (neto) 3397, 2978, 1755, 1714, 1514, 1454, 1250, 1171, 1074 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,34 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,44 (s, 9H), 1,92 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,95-3,40 (m, 5H), 3,80 y 3,82 (s, s, 6H), 4,23 (s, 1H), 4,31 (c, 2H, J=7,0Hz), 5,18 (s amplio, 1H), 7,49 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{22}H_{33}NO_{8}S: C, 52,46; H, 6,61; N, 2,78; S, 12,73. Encontrado: C, 52,56; H, 6,62; N, 2,81; S, 12,71.

(j) Preparación de éster metílico del ácido 6-[2-(5-butoxicarbonil-3-metiltiofen-2-il)etil]-3(R)-oxotiomorfolina-2-carboxílico (40)

71

Partiendo del compuesto (39), se preparó el compuesto (40) con un rendimiento del 87% según el procedimiento general descrito para el compuesto (10) (p.f. 72-73ºC).

[\alpha]_{589} +19,1º (c = 0,67, MeOH).

IR (película fina) 2954, 1738, 1694, 1651, 1464, 1296, 1196, 1074 cm^{-1}.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,90 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,88 (m, 2H), 3,21-3,62 (m, 3H), 3,80 y 3,82 (s, s, 3H), 4,14 y 4,25 (s, s, 1H), 4,31 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,22 (m, 1H), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{16}H_{21}NO_{5}S_{2}: C, 51,73; H, 5,70; N, 3,77; S, 17,26. Encontrado: C, 51,65; H, 5,72; N, 3,73; S, 17,15.

(k) Preparación de éster metílico del ácido 6-[2-(5-etoxicarbonil-3-metiltiofen-2-il)etil]-3(R)-metoxi-5,6-dihidro-2H-[1,4]tiazina-2-carboxílico (41)

72

Partiendo de la lactama compuesto (40), se preparó el compuesto (41) con un rendimiento bruto cuantitativo según el procedimiento general descrito para el compuesto (11) y se usó sin mayor purificación.

(l) Preparación de éster etílico del ácido 5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8- tetrahidro-3H-pirimido[5,4-b]tiazin-6(R)-il)etil]-4-metiltiofeno-2-carboxílico (42)

73

Partiendo del éter de lactima (41), se preparó el compuesto(42) con un rendimiento del 27% según el procedimiento general descrito para el compuesto (12) (p.f. 120-140ºC, con descomposición).

[\alpha]_{589} +57,1º (c = 0,67, DMSO).

IR (KBr) 3337, 2926, 1701, 1653, 1635, 1599, 1449, 1250, 1072 cm^{-1}.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,22 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,60-1,75 (m, 1H), 1,80-1,92 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 2,86 (m, 2H), 3,12-3,52 (m, 3H), 4,20 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,02 (s, 2H), 6,65 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 10,08 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{16}H_{20}N_{4}O_{3}S_{2}\cdot0,8 H_{2}O: C, 48,66; H, 5,51; N, 14,19; S, 16,24. Encontrado: C, 48,77; H, 5,58; N, 14,07; S, 16,16.

HRMS calculado para C_{16}H_{20}N_{4}O_{3}S_{2}: (M+H^{+}) 381,1055. Encontrado: 381,1067.

(m) Preparación de ácido 5-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H- pirimido[5,4-b][1,4]-tiazin-6(R)-il)etil]-4-metiltiofeno-2-carboxílico (43)

74

Partiendo del éster (42), se preparó el compuesto (43) con un rendimiento del 92% según el procedimiento general descrito para el compuesto (13) (p.f. 253ºC, con descomposición).

[\alpha]_{589} +60,7º (c = 0,29, NaOH 1 N).

IR (KBr) 3339 (amplio), 2922, 1641, 1539, 1451, 1346, 1269 cm^{-1}.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,64 (m, 1H), 1,82 (m, 1H), 2,09 (s, 3H), 2,78-2,94 (m, 2H), 3,10-3,55 (m, 3H - parcialmente obscurecido por H_{2}O), 6,10 (s, 2H), 6,69 (s, 1H), 7,42 (s, 1H), 10,15 (s, 1H), 12,75 (s amplio, 1H).

HRMS calculado para C_{14}H_{16}N_{4}O_{3}S_{2}: (M+Na^{+}) 375,0562. Encontrado: 375,0575.

(n) Preparación de éster dietílico del ácido 5-{2-[2-(2-amino-4-oxo- 4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-b][1,4]tiazin-6(R)-il)etil]-4-metiltiofeno}-2-L-glutámico (44)

75

Partiendo del ácido (43), se preparó el compuesto (44) con un rendimiento del 71% según el procedimiento general descrito para el compuesto (15) (p.f. 124ºC, con formación de espuma).

[\alpha]_{589} +33,6º (c = 0,50, DMSO).

IR (KBr) 2996, 2860, 1734, 1653, 1636, 1559, 1456, 1206 cm^{-1}.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,11 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,15 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,75-2,04 (m, 4H), 2,10 (s, 3H), 2,37 (t, 2H, J=7,4Hz), 2,85 (m, 2H), 3,12 (m, 2H), 3,50 (m, 1H), 4,00 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,06 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,31 (m, 1H), 6,01 (s, 2H), 6,65 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 8,53 (d, 1H, J=7,7Hz), 10,08 (s, 1H).

HRMS calculado para C_{23}H_{31}N_{5}O_{6}S_{2}: (M+Cs^{+}) 670,0770. Encontrado: 670,0742.

(o) Preparación de ácido 5-{2-[2-(2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimido[5,4-b][1,4]-tiazin-6(R)-il)etil]-4-metiltiofeno}-2-L-glutámico (45)

76

Partiendo del diéster (44), se preparó el compuesto (45) con un rendimiento del 77% según el procedimiento general descrito para el compuesto (15) (p.f. 210ºC, con descomposición).

[\alpha]_{589} +64,4º (c = 0,45, NaOH 1 N).

IR (KBr) 3341 (amplio), 2928, 1701, 1638, 1536, 1449, 1340 cm^{-1}.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,78-2,05 (m, 4H), 2,10 (s, 3H), 2,28 (t, 2H, J=7,0Hz), 2,82 (m, 2H), 3,45 (m, 3H -parcialmente obscurecido por H_{2}O), 4,25 (m, 1H), 5,98 (s, 2H), 6,65 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 8,38 (d, 1H, J=7,7Hz), 10,05 (s, 1H), 12,5 (s amplio, 2H).

Análisis calculado para C_{19}H_{23}N_{5}O_{6}S\cdot0,7 H_{2}O: C, 46,18; H, 4,98; N, 14,17; S, 12,98. Encontrado: C, 46,13; H, 4,99; N, 14,09; S, 13,02.

Ejemplo 4 Preparación de ácido N-(5-[2-(2-amino-4(3H)oxo-5,6,7,8-tetrahidropirimido [5,6-b]-[1,4]tiazin-6(S)-il)etil]-4-metiltieno-2-il)-L-glutámico (64) (a) Preparación de éster etílico del ácido 5-[2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4(R)-iletinil]-4-metiltiofeno-2-carboxílico (46)

77

Partiendo de 2,2-dimetil-4(R)-etinil-1,3-dioxolano y éster etílico del ácido 5-bromo-4-metiltiofeno-2-carboxílico, se preparó el compuesto (46) con un rendimiento del 57% según el procedimiento general descrito para el compuesto (1).

[\alpha]_{589} -38,3º (c = 0,95, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,36 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,42 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 4,04 (dd, 1H, J=6,3, 8,1Hz), 4,26 (dd, 1H, J=6,3, 8,1Hz), 4,32 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,99 (t, 1H, J=6,3Hz), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{15}H_{18}O_{4}S: C, 61,20; H, 6,16; S, 10,89. Encontrado: C, 61,33; H, 6,20; S, 10,80.

(b) Preparación de éster etílico del ácido 5-(2-[2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4(R)-il]etil)-4-metiltiofeno-2-carboxílico (47)

78

Partiendo del alquino (46), se preparó el compuesto (47) con un rendimiento del 96% según el procedimiento general descrito para el compuesto (2).

[\alpha]_{589} +13,4º (c = 0,72, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,2Hz), 1,36 (s, 3H), 1,43 (s, 3H), 1,79-1,99 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,75-2,96 (m, 2H), 3,55 (dd, 1H, J=7,0, 7,7Hz), 4,04 (dd, 1H, J=5,9, 7,7Hz), 4,08-4,16 (m, 1H), 4,33 (c, 2H, J=7,2Hz), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{15}H_{22}O_{4}S: C, 60,38; H, 7,43; S, 10,74. Encontrado: C, 60,48; H, 7,40; S, 10,69.

(c) Preparación de éster etílico del ácido 5-[3(R)-4-dihidroxibutil]-4-metiltiofeno-2-carboxílico (48)

79

Partiendo del dioxolano (47), se preparó el compuesto (48) con un rendimiento del 89% según el procedimiento general descrito para el compuesto (3).

[\alpha]_{589} +24,4º (c = 0,82, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,73-1,81 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,80-3,00 (m, 2H), 3,48 (dd, 1H, J=7,5, 10,8Hz), 3,68 (dd, 1H, J=3,1, 10,8Hz), 3,71-3,79 (m, 1H), 4,31 (c, 2H, J=7,0Hz), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{12}H_{18}O_{4}S: C, 55,79; H, 7,02; S, 12,41. Encontrado: C, 55,69; H, 7,03; S, 12,48.

(d) Preparación de éster etílico del ácido 5-[3(R)-hidroxi-4-(p-toluensulfoniloxi)butil]-4-metiltiofeno-2-carboxílico (49)

80

Partiendo del diol (48), se preparó el compuesto (49) con un rendimiento del 65% según el procedimiento general descrito para el compuesto (4).

[\alpha]_{589} +7,5º (c = 0,59, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,68-1,79 (m, 2H), 2,13 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,78-2,95 (m, 2H), 3,82-3,94 (m, 2H), 4,03 (dd, 1H, J=1,8, 8,8Hz), 4,31 (c, 2H, J=7,0Hz), 7,36 (d, 2H, J=8,1Hz), 7,48 (s, 1H), 7,79 (d, 2H, J=8,1Hz).

Análisis calculado para C_{19}H_{24}O_{6}S_{2}: C, 55,32; H, 5,86; S, 15,54. Encontrado: C, 55,26; H, 5,87; S, 15,64.

(e) Preparación de éster etílico del ácido 5-[4-(terc-butildimetilsililoxi)-3(S)-hidroxibutil-4-metiltiofeno-2-carboxílico (50)

81

Partiendo del diol (33), se preparó el compuesto (50) con un rendimiento del 95% según el procedimiento general descrito para el compuesto (16).

[\alpha]_{589} -23,5º (c = 1,19, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 0,07 (s, 6H), 0,90 (s, 9H), 1,35 (t, 3H, J=7,1Hz), 1,61-1,81 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,79-3,01 (m, 2H), 3,43 (dd, 1H, J=7,0, 9,6Hz), 3,63 (dd, 1H, J=3,3, 9,6Hz), 3,66-3,71 (m, 1H), 4,31 (c, 2H, J=7,1Hz), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{18}H_{32}O_{4}SSi: C, 58,03; H, 8,66; S, 8,60. Encontrado: C, 57,71; H, 9,14; S, 8,47.

(f) Preparación de éster etílico del ácido 5-[4-(terc-butildimetilsililoxi)-3(S)-(metanosulfoniloxi)butil]-4-metiltio- feno-2-carboxílico (51)

82

\newpage

Partiendo del alcohol (50), se preparó el compuesto (51) con un rendimiento del 84% según el procedimiento general descrito para el compuesto (17).

[\alpha]_{589} +3,9º (c = 1,48, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 0,09 (s, 6H), 0,90 (s, 9H), 1,35 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,97-2,05 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,82-3,01 (m, 2H), 3,07 (s, 3H), 3,68-3,82 (m, 2H), 4,31 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,69-4,77 (m, 1H), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{19}H_{34}O_{6}S_{2}Si: C, 50,64; H, 7,60; S, 14,23. Encontrado: C, 50,54; H, 7,58; S, 14,30.

(g) Preparación de éster etílico del ácido 5-[4-hidroxi-3(S)-(metanosulfoniloxi)butil]-4-metiltiofeno-2-carboxílico (52)

83

Partiendo del éter silílico (51), se preparó el compuesto (52) con un rendimiento del 39% según el procedimiento general descrito para el compuesto (18).

[\alpha]_{589} +14,2º (c = 0,97, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,96-2,12 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,86-2,94 (m, 2H), 3,12 (s, 3H), 3,77 (dd, 1H, J=6,6, 12,5Hz), 3,86 (dd, 1H, J=2,9, 12,5Hz), 4,31 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,78-4,87 (m, 1H), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{13}H_{20}O_{6}S_{2}: C, 46,41; H, 5,99; S, 19,06. Encontrado: C, 46,51; H, 6,04; S, 18,95.

(h) Preparación de éster etílico del ácido 5-[3(R)-4-epoxibutil]-4-metiltiofeno-2-carboxílico (53)

84

Partiendo del mesilato (52), se preparó el compuesto (53) con un rendimiento del 70% según el procedimiento general descrito para el compuesto (19).

[\alpha]_{589} +23,5º (c = 0,80, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,1Hz), 1,74-1,86 (m, 1H), 1,89-2,01 (m, 1H), 2,17 (s, 3H), 2,51 (dd, 1H, J=2,6, 14,8Hz), 2,78 (dd, 1H, J=4,0, 14,8Hz), 2,86-3,00 (m, 3H), 4,31 (c, 2H, J=7,1Hz), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{12}H_{16}O_{3}S: C, 59,98; H, 6,71; S, 13,34. Encontrado: C, 59,90; H, 6,73; S, 13,41.

(i) Preparación de éster etílico del ácido 5-[4-azido-3(R)-hidroxibutil]-4-metiltiofeno-2-carboxílico (54)

85

Partiendo del tosilato (49), se preparó el compuesto (54) con un rendimiento del 91% según el procedimiento general descrito para el compuesto (5).

Partiendo del epóxido (53), se preparó el compuesto (54) con un rendimiento del 79% según el procedimiento general descrito para el compuesto (20).

[\alpha]_{589} +11,0º (c = 0,58, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,2Hz), 1,75-1,84 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,80-3,00 (m, 2H), 3,29 (dd, 1H, J=7,0, 12,3Hz), 3,42 (dd, 1H, J=3,1, 12,3Hz), 3,75-3,83 (m, 1H), 4,31 (c, 2H, J=7,2Hz), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{12}H_{17}N_{3}O_{3}S: C, 50,87; H, 6,05; N, 14,83; S, 11,31. Encontrado: C, 50,94; H, 6,07; N, 14,75; S, 11,22.

(j) Preparación de éster etílico del ácido 5-[4-(terc-butoxicarbonilamino)-3(R)-hidroxibutil]-4-metiltiofeno-2-carboxílico (55)

86

Partiendo de la azida (54), se preparó el compuesto (55) con un rendimiento del 96% según el procedimiento general descrito para el compuesto (6).

[\alpha]_{589} +22,6º (c = 0,66, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,2Hz), 1,45 (s, 9H), 1,72-1,81 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,78-2,99 (m, 2H), 3,09 (dd, 1H, J=7,4, 14,3Hz), 3,29 (dd, 1H, J=2,9, 14,3Hz), 3,70-3,78 (m, 1H), 4,31 (c, 2H, J=7,2Hz), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{17}H_{27}NO_{5}S: C, 57,12; H, 7,61; N, 3,92; S, 8,97. Encontrado: C, 57,05; H, 7,63; N, 3,84; S, 9,07.

(k) Preparación de éster etílico del ácido 5-[4-(terc-butoxicarbonilamino)-3(R)-metanosulfoniloxi)butil]-4-metiltiofeno-2-carboxílico (56)

87

Partiendo del alcohol (55), se preparó el compuesto (56) con un rendimiento del 93% según el procedimiento general descrito para el compuesto (7).

[\alpha]_{589} 7,8º (c = 0,98, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,2Hz), 1,45 (s, 9H), 1,98-2,06 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,86-2,92 (m, 2H), 3,06 (s, 3H), 3,34-3,43 (m, 2H), 4,31 (c, 2H, J=7,2Hz), 4,77-4,84 (m, 1H), 4,92 (amplio, 1H), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{18}H_{29}NO_{7}S: C, 49,64; H, 6,71; N, 3,22; S, 14,72. Encontrado: C, 49,57; H, 6,78; N, 3,28; S, 14,70.

(l) Preparación de éster etílico del ácido 5-[4-(terc-butoxicarbonilamino)-3(S)-(acetiltio)-butil-4-metiltiofeno-2-carboxílico (57)

88

Partiendo del mesilato (56), se preparó el compuesto (57) con un rendimiento del 92% según el procedimiento general descrito para el compuesto (8).

[\alpha]_{589} +2,8º (c = 0,93, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,34 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,44 (s, 9H), 1,78-1,89 (m, 1H), 1,93-2,04 (m, 1H), 2,13 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,75-2,94 (m, 2H), 3,26-3,45 (m, 2H), 3,56-3,64 (m, 1H), 4,30 (c, 2H, J=7,0Hz), 4,75 (amplio, 1H), 7,48 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{19}H_{29}NO_{5}S_{2}: C, 54,92; H, 7,03; N, 3,37; S, 15,43. Encontrado: C, 54,81; H, 7,09; N, 3,43; S, 15,41.

(m) Preparación de éster dietílico del ácido 2-([1-(terc-butoxicarbonilamino)-4-)-5-etoxicarbonil-3-metiltien-2-il)but-2 (S)-il]tio)malónico (58)

89

Partiendo del tioacetato (57), se preparó el compuesto (58) con un rendimiento del 88% según el procedimiento general descrito para el compuesto (24).

[\alpha]_{589} -23,7º (c = 0,68, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,34 (t, 3H, J=7,1Hz), 1,44 (s, 9H), 1,75- 1,86 (m, 1H), 1,90-1,99 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 2,85-2,97 (m, 2H), 3,00-3,07 (m, 1H), 3,23-3,39 (m, 2H), 3,80 (s, 6H), 3,87 (s, 1H), 4,31 (c, 2H, J=7,1Hz), 5,12 (amplio, 1H), 7,49 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{22}H_{33}NO_{8}S_{2}: C, 52,47; H, 6,60; N, 2,78; S, 12,73. Encontrado: C, 52,49; H, 6,64; N, 2,77; S, 12,64.

(n) Preparación de éster metílico del ácido 6(S)-[2-(5-etoxicarbonil-3-metiltien-2-il)etil]-3-oxo-1,4-tiazina-2-carboxílico (59)

90

Partiendo del malonato (58), se preparó el compuesto (59) con un rendimiento del 88% según el procedimiento general descrito para el compuesto (10).

[\alpha]_{589} 26,2º (c = 0,81, CH_{3}OH).

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,35 (t, 3H, J=7,1Hz), 1,83-2,03 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,83-2,97 (m, 2H), 3,39-3,67 (m, 3H), 3,80-3,82 (s, 3H), 4,14-4,25 (s, 1H), 4,31 (c, 2H, J=7,1Hz), 6,29 (amplio, 1H), 7,50 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{1-}H_{21}NO_{5}S_{2}: C, 51,73; H, 5,70; N, 3,79; S, 17,26. Encontrado: C, 51,56; H, 5,80; N, 3,70; S, 17,09.

(o) Preparación de éster metílico del ácido 6(S)-[2-(5-etoxicarbonil-3- metiltien-2-il)etil]-3-metoxi-1,4-tiazina-2-carboxílico (60)

91

Partiendo de la lactama (59), se preparó el compuesto (60) con un rendimiento bruto cuantitativo según el procedimiento general descrito para el compuesto (11) y se utilizó sin mayor purificación.

(p) Preparación de éster etílico del ácido 5-[2-(2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirimido[5,6-b] [1,4]tiazin-6(S)-il)etil]-4-metiltiofeno-2-carboxílico (61)

92

Partiendo del imidoéter (60), se preparó el compuesto (61) con un rendimiento del 27% según el procedimiento general descrito para el compuesto (12).

[\alpha]_{589} 41,50 (c = 0,66, DMSO).

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,25 (t, 3H, J=7,0Hz), 1,62-1,73 (m, 1H), 1,80-1,91 (m, 1H), 2,13 (s, 3H), 2,79-2,97 (m, 3H), 3,19-3,26 (m, 1H), 3,47-3,55 (m, 1H), 4,22 (c, 2H, J=7,0Hz), 6,05 (s, 2H), 6,68 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 10,10 (s, 1H).

(q) Preparación de ácido 5-[2-(2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirimido[5,6-b][1,4]tiazin-6(S)-il)etil]-4-metiltiofeno-2-carboxílico (62)

93

Partiendo del éster (61), se preparó el compuesto (62) con un rendimiento del 77% según el procedimiento general descrito para el compuesto (13).

[\alpha]_{589} 77,9º (c = 0,58, NaOH 1 N).

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,62-1,73 (m, 1H), 1,79-1,92 (m, 1H), 2,12 (s, 3H), 2,81-2,98 (m, 3H), 3,16-3,26 (m, 1H), 3,50-3,58 (m, 1H), 6,21 (s amplio, 2H), 6,76 (s amplio, 1H), 7,45 (s, 1H), 10,24 (amplio, 1H), 12,76 (amplio, 1H).

Análisis calculado para C_{14}H_{16}N_{4}O_{3}S_{2}\cdot1,4 H_{2}O: C, 44,52; H, 5,02; N, 14,84; S, 16,98. Encontrado: C, 44,60; H, 4,86; N, 14,70; S, 16,92.

(r) Preparación de éster dietílico del ácido N-(5-[2-(2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirimido[5,6-b][1,4]tiazin-6(S)- il)etil]-4-metiltien-2-il)-L-glutámico (63)

94

Partiendo del ácido (62), se preparó el compuesto (63) con un rendimiento del 60% según el procedimiento general descrito para el compuesto (14).

[\alpha]_{589} -54,1º (c = 0,61, DMSO).

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,15 (t, 3H, J=7,1Hz), 1,17 (t, 3H, J=7,1Hz), 1,61-1,72 (m, 1H), 1,77-2,07 (m, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,40 (t, 2H, J=7,5Hz), 2,77-2,94 (m, 3H), 3,18-3,28 (m, 1H), 3,50-3,56 (m, 1H), 4,03 (c, 2H, J=7,1Hz), 4,08 (c, 2H, J=7,1Hz), 4,34 (ddd, 1H, J=5,4, 7,7, 9,6Hz), 6,02 (s, 2H), 3,67 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 8,55 (d, 1H, J=7,7Hz), 10,06 (s, 1H).

Análisis calculado para C_{23}H_{31}N_{5}O_{6}S_{2}\cdot0,5 H_{2}O: C, 50,53; H, 5,90; N, 12,81; S, 11,73. Encontrado: C, 50,56; H, 5,92; N, 12,67; S, 11,54.

(s) Preparación de ácido N-(5-[2-(2-amino-4(3H)-oxo-5,6,7,8-tetrahidropirimido[5,6-b] [1,4]-tiazin-6(S)-il)etil]-4-metiltien-2-il)-L-glutámico (64)

95

Partiendo del diéster (63), se preparó el compuesto (64) con un rendimiento del 85% según el procedimiento general descrito para el compuesto (15).

[\alpha]_{589} 36,8º (c = 0,57, NaOH 1 N).

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,61-1,72 (m, 1H), 1,76-1,92 (m, 2H), 1,99-2,08 (m, 1H), 2,12 (s, 3H), 2,31 (t, 2H, J=7,0Hz), 2,79-2,94 (m, 3H), 3,17-3,28 (m, 1H), 3,49-3,56 (m, 1H), 4,30 (ddd, 1H, J=5,7, 7,7, 9,8Hz), 6,08 (s, 2H), 6,70 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 8,44 (d, 1H, J=7,7Hz), 10,12 (s amplio, 1H), 12,43 (amplio, 2H).

Análisis calculado para C_{19}H_{23}N_{5}O_{6}S_{2}\cdot0,75 H_{2}O: C, 46,09; H, 4,99; N, 14,15; S, 12,95. Encontrado: C, 46,09; H, 4,98; N, 14,01; S, 12,77.

Claims

1. Un compuesto ópticamente puro de fórmula

96

donde:

que tiene la configuración (R).

2. Un compuesto ópticamente puro de fórmula

97

donde:

que tiene la configuración (S).

3. El compuesto ópticamente puro según las reivindicaciones 1 ó 2, donde Ar es un grupo aromático de 5 miembros que tiene un átomo de anillo de azufre.

4. El compuesto ópticamente puro según las reivindicaciones 1 ó 2, donde B es dietilglutamato, metanol o etanol.

5. El compuesto ópticamente puro según la reivindicación 2, donde el compuesto es el éster etílico del ácido 5-(3(S)-4-dihidroxibutil)tiofeno-2-carboxílico.

6. Un método de preparación de un compuesto de fórmula

98

o su enantiómero, donde Ar es un grupo aromático de cinco o seis miembros substituido o no substituido y B esun aminoácido unido a través de la porción amino para formar una amida o un alcohol C_{1}-C_{6} unido a través de la porción alcohólica para formar un éster, consistente en las siguientes etapas:

(a) reacción de un compuesto de fórmula

99

o su enantiómero

100

con un compuesto de fórmula

101

donde X es bromo, fluoro, cloro o yodo y B y Ar son como se ha definido antes, para formar un compuesto de fórmula

102

o su enantiómero, donde Ar y B son como se ha definido antes;

(b) reacción del compuesto de fórmula V o de su enantiómero con un agente reductor para obtener un compuesto de fórmula

103

o su enantiómero, donde Ar y B son como se ha definido antes, y

(c) reacción del compuesto de fórmula VI o de su enantiómero con un ácido para formar el compuesto de fórmula VII o su enantiómero.

7. Un método según la reivindicación 6, donde, en la etapa (a), la reacción es llevada a cabo en presencia de (i) un catalizador metálico de transición que contiene uno o más metales seleccionados entre el grupo consistente en paladio, cobre y níquel y (ii) una base auxiliar no nucleofílica (iii) en un solvente en el que es al menos parcialmente soluble al menos uno de los compuestos reaccionantes.

8. Un método según la reivindicación 6, donde, en la etapa (b), el agente reductor es hidrógeno gaseoso en presencia de un catalizador metálico que contiene paladio o platino.

9. Un método según la reivindicación 6, donde, en la etapa (c), el ácido es ácido p-toluensulfónico monohidrato y la reacción es llevada a cabo en metanol o etanol.

10. Un método según la reivindicación 6, donde, en la etapa (a), reacciona un compuesto de fórmula III.

11. Un método según la reivindicación 6, donde, en la etapa (a), reacciona un compuesto de fórmula XVII.

12. Un método de preparación de un compuesto de fórmula

104

donde A es un átomo de oxígeno, azufre o selenio, Ar es un grupo aromático de cinco o seis miembros substituido o no substituido y R_{1} y R_{2} son independientemente un átomo de hidrógeno o un resto que forma, junto con el CO_{2} unido, un grupo éster fácilmente hidrolizable, consistente en hacer reaccionar un compuesto de fórmula

105

o su enantiómero, donde Ar es un grupo aromático de cinco oseis miembros substituido o no substituido y B es un aminoácido unido a través de la porción amino para formar una amida o un alcohol C_{1}-C_{6} unido a través de la porción alcohólica para formar un éster, para formar un compuesto de fórmula I ópticamente puro.

13. Un método según la reivindicación 12, donde el compuesto de fórmula VII es preparado mediante las siguientes etapas:

(a) reacción de un compuesto de fórmula

106

o su enantiómero

107

con un compuesto de fórmula

108

109

o su enantiómero, donde Ar y B son como se ha definido antes;

(b) reacción del compuesto de fórmula V o de su enantiómero con hidrógeno gaseoso en presencia de un catalizador metálico para obtener un compuesto de fórmula

110

o su enantiómero, donde Ar y B son como se ha definido antes, y

(c) reacción del compuesto de fórmula VI o de su enantiómero con un ácido en un solvente alcohólico para obtener el compuesto de fórmula VII o su enantiómero.

14. Un método según la reivindicación 13, donde, en la etapa (a), la reacción es llevada a cabo en presencia de (i) un catalizador metálico de transición que contiene uno o más metales seleccionados entre el grupo consistente en paladio, cobre y níquel y (ii) una base auxiliar no nucleofílica (iii) en presencia de un solvente en el que es al menos parcialmente soluble al menos uno de los compuestos reaccionantes.

15. Un método según la reivindicación 12, donde Ar es un grupo aromático de 5 miembros que tiene un átomo de anillo de azufre.

16. Un método según la reivindicación 12, donde el compuesto de fórmula I está en configuración (R).

17. Un método según la reivindicación 12, donde el compuesto de fórmula I está en configuración (S).

18. Un método según la reivindicación 12, donde el compuesto de fórmula VII o su enantiómero es el éster etílico del ácido 5-(3(S)-4-dihidroxibutil)tiofeno-2-carboxílico.