ES2207638T3 - Derivados de guanina 06-substituida, un procedimiento para su preparacio y su utilizacion en el tratamiento de celulas tumorales. - Google Patents
Derivados de guanina 06-substituida, un procedimiento para su preparacio y su utilizacion en el tratamiento de celulas tumorales.Info
- Publication number
- ES2207638T3 ES2207638T3 ES94916373T ES94916373T ES2207638T3 ES 2207638 T3 ES2207638 T3 ES 2207638T3 ES 94916373 T ES94916373 T ES 94916373T ES 94916373 T ES94916373 T ES 94916373T ES 2207638 T3 ES2207638 T3 ES 2207638T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- carbon atoms
- compound according
- alkyl
- ring
- guanine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 97
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 43
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 5
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 70
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 56
- 108010014722 Alkyl and Aryl Transferases Proteins 0.000 claims description 54
- 102000002226 Alkyl and Aryl Transferases Human genes 0.000 claims description 53
- DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N Carmustine Chemical compound ClCCNC(=O)N(N=O)CCCl DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 37
- -1 3-thienylmethyl Chemical group 0.000 claims description 24
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 claims description 21
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 claims description 21
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 21
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 claims description 18
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 16
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 16
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 15
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 12
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 11
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- 125000001188 haloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000002373 5 membered heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 9
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 125000004070 6 membered heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 7
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 claims description 7
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 claims description 7
- YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N Thiophene Chemical group C=1C=CSC=1 YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 5
- 125000005301 thienylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(S1)C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000001951 carbamoylamino group Chemical group C(N)(=O)N* 0.000 claims description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 4
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 4
- RYYIULNRIVUMTQ-UHFFFAOYSA-N 6-chloroguanine Chemical compound NC1=NC(Cl)=C2N=CNC2=N1 RYYIULNRIVUMTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 3
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 claims description 3
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 claims description 3
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- UUPHPERWUMGVIT-UHFFFAOYSA-N (2-amino-7h-purin-6-yl)-trimethylazanium Chemical compound C[N+](C)(C)C1=NC(N)=NC2=C1NC=N2 UUPHPERWUMGVIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 claims description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N Furan Chemical group C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000005605 benzo group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 73
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 45
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 21
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 21
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- KRWMERLEINMZFT-UHFFFAOYSA-N O6-benzylguanine Chemical class C=12NC=NC2=NC(N)=NC=1OCC1=CC=CC=C1 KRWMERLEINMZFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 229960005524 O6-benzylguanine Drugs 0.000 description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 18
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Substances OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 10
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 10
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 7
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 7
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 6
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- 101001102218 Homo sapiens Amidophosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 4
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 4
- 230000001035 methylating effect Effects 0.000 description 4
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 4
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 4
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- XMVOEDCIKAXDHL-UHFFFAOYSA-M (2-amino-7h-purin-6-yl)-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)C1=NC(N)=NC2=C1N=CN2 XMVOEDCIKAXDHL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- BXJHWYVXLGLDMZ-UHFFFAOYSA-N 6-O-methylguanine Chemical compound COC1=NC(N)=NC2=C1NC=N2 BXJHWYVXLGLDMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001459693 Dipterocarpus zeylanicus Species 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 201000006083 Xeroderma Pigmentosum Diseases 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 3
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 3
- IANQTJSKSUMEQM-UHFFFAOYSA-N 1-benzofuran Chemical compound C1=CC=C2OC=CC2=C1 IANQTJSKSUMEQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 125000000824 D-ribofuranosyl group Chemical group [H]OC([H])([H])[C@@]1([H])OC([H])(*)[C@]([H])(O[H])[C@]1([H])O[H] 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 2
- 244000257039 Duranta repens Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N Lomustine Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)NC1CCCCC1 GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 2
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- QXYYYPFGTSJXNS-UHFFFAOYSA-N mitozolomide Chemical compound N1=NN(CCCl)C(=O)N2C1=C(C(=O)N)N=C2 QXYYYPFGTSJXNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229950005967 mitozolomide Drugs 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 150000008223 ribosides Chemical class 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 2
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 2
- NTMYVTSWQJFCPA-UHFFFAOYSA-N (2-tert-butylpyrimidin-5-yl)oxy-ethoxy-propan-2-yloxy-sulfanylidene-$l^{5}-phosphane;[cyano-(4-fluoro-3-phenoxyphenyl)methyl] 3-(2,2-dichloroethenyl)-2,2-dimethylcyclopropane-1-carboxylate Chemical compound CCOP(=S)(OC(C)C)OC1=CN=C(C(C)(C)C)N=C1.CC1(C)C(C=C(Cl)Cl)C1C(=O)OC(C#N)C1=CC=C(F)C(OC=2C=CC=CC=2)=C1 NTMYVTSWQJFCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- WKBQQWDVVHGWDB-UHFFFAOYSA-N 1,3-thiazol-5-ylmethanol Chemical compound OCC1=CN=CS1 WKBQQWDVVHGWDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUKQTRFCDKSEPL-UHFFFAOYSA-N 1-Methyl-2-pyrrolecarboxaldehyde Chemical compound CN1C=CC=C1C=O OUKQTRFCDKSEPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 2-METHOXYETHANOL Chemical compound COCCO XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HZKMBJCDAXLMDN-UHFFFAOYSA-N 2-amino-1,3-thiazole-5-carbaldehyde Chemical compound NC1=NC=C(C=O)S1 HZKMBJCDAXLMDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SURMYNZXHKLDFO-UHFFFAOYSA-N 2-bromopropanedial Chemical compound O=CC(Br)C=O SURMYNZXHKLDFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SEHSPJCWCBQHPF-UHFFFAOYSA-N 2-chloroethyl methylsulfonylmethanesulfonate Chemical compound CS(=O)(=O)CS(=O)(=O)OCCCl SEHSPJCWCBQHPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004105 2-pyridyl group Chemical group N1=C([*])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000006479 2-pyridyl methyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C(=N1)C([H])([H])* 0.000 description 1
- KAZRCBVXUOCTIO-UHFFFAOYSA-N 5-(chloromethyl)furan-2-carbaldehyde Chemical compound ClCC1=CC=C(C=O)O1 KAZRCBVXUOCTIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOEGNKMFWQHSLB-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxymethylfurfural Chemical compound OCC1=CC=C(C=O)O1 NOEGNKMFWQHSLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000000274 Carcinosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100021906 Cyclin-O Human genes 0.000 description 1
- 230000007064 DNA hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 101000897441 Homo sapiens Cyclin-O Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010028400 Mutagenic effect Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 240000004350 Prunus spinosa Species 0.000 description 1
- 235000010829 Prunus spinosa Nutrition 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 150000004703 alkoxides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001347 alkyl bromides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940045719 antineoplastic alkylating agent nitrosoureas Drugs 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000013132 cardiothoracic surgery Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 125000002603 chloroethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])Cl 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical group NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003901 dacarbazine Drugs 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- PVRATXCXJDHJJN-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2,3-dihydroxybutanedioate Chemical compound COC(=O)C(O)C(O)C(=O)OC PVRATXCXJDHJJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- JJTJZFLRKYYGGS-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;methylsulfinylmethane Chemical compound CS(C)=O.CCOCC JJTJZFLRKYYGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- RJGBSYZFOCAGQY-UHFFFAOYSA-N hydroxymethylfurfural Natural products COC1=CC=C(C=O)O1 RJGBSYZFOCAGQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000006138 lithiation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012280 lithium aluminium hydride Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- JGJDORZNOSWWDS-UHFFFAOYSA-N methyl 1,3-oxazole-5-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1=CN=CO1 JGJDORZNOSWWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 231100000324 minimal toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229960005235 piperonyl butoxide Drugs 0.000 description 1
- 229940068918 polyethylene glycol 400 Drugs 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N procarbazine Chemical compound CNNCC1=CC=C(C(=O)NC(C)C)C=C1 CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000624 procarbazine Drugs 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000004189 reticular formation Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- LFQULJPVXNYWAG-UHFFFAOYSA-N sodium;phenylmethanolate Chemical compound [Na]OCC1=CC=CC=C1 LFQULJPVXNYWAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 1
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- CFOAUYCPAUGDFF-UHFFFAOYSA-N tosmic Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)C[N+]#[C-])C=C1 CFOAUYCPAUGDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
- C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
- C07D473/18—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 one oxygen and one nitrogen atom, e.g. guanine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
DERIVADOS DE O 6 -HETARILALKILO- O NAFTILALKILGUANINA DE FORMULA (I) EN DONDE Y ES H, RIBOSILO, DEOXIRIBOSILO, O R''''XCHR'''''', EN DONDE X ES O O S, R'''' Y R'''''' SON ALKILO, O DERIVADOS SUSTITUIDOS DEL MISMO; R'' ES H, O ALKILO O HIDROXIALKILO; R ES (I) UN GRUPO CICLICO QUE TIENE AL MENOS UN ANILLO HETEROCICLICO DE 5 O 6 ELEMENTOS, OPCIONALMENTE CON UN ANILLO CARBOCICLICO O HETEROCICLICO UNIDO AL MISMO, CADA ANILLO HETEROCICLICO TENIENDO AL MENOS UN ATOMO ELEGIDO DE O, N O S, O UN DERIVADO SUSTITUIDO DEL MISMO; O (II) NAFTILO O UN DERIVADO SUSTITUIDO DEL MISMO; Y SALES FARMACEUTICAMENTE ACEPTABLES DEL MISMO, MUESTRAN LA CAPACIDAD DE REDUCIR LA ACTIVIDAD DE ALKILTRANSFERASA (ATASA) O{SUP,6}-ALKILGUANINA. SE DESCRIBE UN PROCESO PARA LA PREPARACION DE LOS COMPUESTOS. LOS COMPUESTOS TIENEN UTILIDAD EN COMBINACION CON AGENTES DE ALKILACION EN EL TRATAMIENTO QUIMIOTERAPEUTICO DE CELULAS TUMORALES.
Description
Derivados de la guanina
O^{6}-substituida, un procedimiento para su
reparación y su utilización en el tratamiento de células
tumorales.
La presente invención se refiere a derivados de
la guanina substituidos en O^{6}, un procedimiento para su
preparación y su utilización en el tratamiento de células tumorales.
En particular, se refiere a derivados de guanina con substituyentes
hetarilalquilos o naftilalquilos en la posición O^{6},
teniendo estos compuestos la capacidad de reducir la actividad
O^{6}-alquilguanina-ADN
alquiltransferasa (ATasa) en las células tumorales.
Se ha sugerido el empleo de derivados de alquil
guanina substituidos en O^{6} con actividad reductora de la
O^{6}-alquilguanina-ADN
alquiltransferasa, con el fin de potenciar la efectividad de los
agentes alquilantes quimioterapéuticos empleados para aniquilar
células tumorales. Existe una evidencia creciente de que en las
células de mamíferos los efectos tóxicos y mutagénicos de los
agentes alquilantes son en gran medida una consecuencia de la
alquilación en la posición O^{6} de la guanina del ADN. La
reparación de la O^{6}-alquilguanina está
mediada por la ATasa, una proteína de reparación que actúa sobre los
residuos de guanina alquilada en O^{6} mediante la
transferencia estequiométrica del grupo alquilo a un residuo de
cisteína en el sitio activo de la proteína de reparación en un
procedimiento de autoinactivación. La importancia de la ATasa en la
protección de las células contra los efectos biológicos de los
agentes alquilantes ha sido demostrado claramente al máximo mediante
la transferencia y expresión de genes de ATasa clonados ó ADNc en
células deficitarias de ATasa: esto confiere resistencia a una
variedad de agentes, principalmente aquellos que metilan o
cloroetilan el ADN. Mientras el mecanismo de aniquilación celular
mediante la O^{6}-metilguanina en células
deficitarias de ATasa no está todavía claro, el aniquilamiento
mediante la O^{6}-cloroetilguanina tiene
lugar a través de la formación reticular entre las cadenas de ADN en
un residuo de citosina en la cadena opuesta por medio de un
intermediario de etanoguanina cíclica, un proceso que es impedido
por la eliminación del grupo cloroetilo mediada por ATasa, o por la
formación de un complejo.
El empleo de la
O^{6}-metilguanina y la
O^{6}-n-butilguanina para
reducir la actividad de la ATasa ha sido investigado (Dolan y
col., Cancer Res., (1986) 46, pp. 4500;
Dolan y col., Cancer Chemother.
Pharmacol., (1989) 25, pp 103. Los derivados de la
O^{6}-bencilguanina han sido propuestos
para disminuir la actividad de la ATasa con el fin de convertir las
células que expresan la ATasa más susceptibles a los efectos
citotóxicos de los agentes cloroetilantes (Moschel y
col., J. Med. Chem., 1992, 35,
4486). La patente U.S. 5 091 430 y la solicitud de patente
internacional nº WO 91/13898 de Mosche y col.,
describen un método para reducir los niveles de
O^{6}-alquilguanina-ADN
alquiltransferasa en las células tumorales en un anfitrión, el cual
método comprende la administración al anfitrión de una cantidad
efectiva de una composición que contiene derivados de
O^{6}-bencilados de guanina de la siguiente
formula:
en donde Z es hidrógeno,
o
y R^{a} es un grupo bencilo o un grupo bencilo
substituido. Un grupo bencilo puede estar substituido en la posición
orto, meta o para con un grupo substituyente
como p. ej., halógeno, nitro, arilo, tal como fenilo o fenilo
substituido, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4
átomos de carbono, alquenilo de hasta 4 átomos de carbono, alquinilo
de hasta 4 átomos de carbono, amino, monoalquilamino, dialquilamino,
trifluormetilo, hidroxilo, hidroximetilo, y SO_{n}R^{b} en
donde n es 0, 1, 2 ó 3, y R^{b} es hidrógeno, alquilo de 1 a 4
átomos de carbono o arilo. Mi-Young Chae y
col., J. Med. Chem., 1994, 37,
342-347 -publicado después de la fecha de prioridad
de la presente solicitud- describe ensayos sobre análogos de
O^{6}-bencilguanina llevando grupos
substituyentes crecientemente voluminosos sobre el anillo de benceno
en la posición 9. El compuesto nº 6 descrito allí es el
O^{6}-(2-piridilmetil)guanina, la
cual en esta solicitud recibe el nombre de
O^{6}-(2-picolil) guanina. Sin embargo, en
los resultados y descripción en las páginas 342-343
del documento de Chae y col., el compuesto nº 6 no es
destacado como de interés pero se le agrupa entre los "compuestos
que permanecen" los cuales "presentan una actividad
intermedia" (página 343 líneas 12-15 del texto).
Los autores confirman sus primeras observaciones (J.
Med. Chem., 1992, 35 4486) de que solamente los
substituyentes alilo o bencilo en la posición O^{6} de la
guanina inactivaron la ATasa eficientemente (página 343 líneas
21-23 del
texto).
La O^{6}-bencilguanina
tiene limitaciones en su empleo como inactivador de la ATasa. Es más
estable de lo que sería deseable, dando como resultado un tiempo de
larga supervivencia en el animal al cual ha sido administrada.
Tiene un nivel de potencial toxicidad tanto sola como en
combinación con agentes cloroetilantes lo cual es también indeseable
y lo cual puede relacionarse con el tiempo de supervivencia.
Los compuestos de la presente solicitud presentan
diferentes características de inactivación de la ATasa por la
O^{6}-bencilguanina, y en algunos casos la
actividad es hasta 8 veces mayor que la de la
O^{6}-bencilguanina. Se han observado
también diferentes semi-vidas y características de
toxicidad. Por lo tanto, es un objeto de la presente invención el
proporcionar nuevos compuestos útiles para la reducción de la
actividad de la ATasa con el fin de potenciar los efectos de los
agentes quimioterapéuticos tales como los agentes cloroetilantes o
metilantes antitumorales.
Otro aspecto de la invención es el de
proporcionar composiciones farmacéuticas que contienen compuestos
que son útiles para reducir la actividad de la ATasa. Otro objeto de
la presente invención es el de proporcionar un método para la
reducción de la actividad de la ATasa en las células tumorales en un
anfitrión.
En consecuencia, la presente invención
proporciona derivados de guanina
O^{6}-substituidos, de fórmula I:
en
donde
Y es H, ribosil, desoxirribosil, ó R''XCHR''', en
donde X es O ó S, R'' y R''' son alquilo de 1 a 20 átomos de carbono
o derivados substituidos de los mismos que tienen una substitución
con uno o más hidroxilo, alcoxilo de 1 a 20 átomos de carbono,
amino, alquilamino de 1 a 20 átomos de carbono, amido o ureido.
R' es H ó alquilo de 1 a 20 átomos de carbono o
hidroxialquilo de 1 a 20 átomos de carbono;
R es:
(i) un grupo cíclico que tiene por lo menos un
anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros, opcionalmente con un anillo
carbocíclico o heterocíclico fusionado con el mismo, el cual o cada
anillo heterocíclico tiene por lo menos un heteroátomo escogido
entre O, N ó S, ó un derivado substituido del mismo que tiene una
substitución en el (los) anillo(s) heterocíclico(s)
y/o el (los) anillo(s) carbocíclico(s) mediante uno o
más alquilos de 1 a 20 átomos de carbono, alquenilo de 1 a 20 átomos
de carbono, alquinilo de 1 a 20 átomos de carbono, halo, haloalquilo
de 1 a 20 átomos de carbono, nitro, ciano, hidroxialquilo de 1 a 20
átomos de carbono, SO_{n}R'''' en donde R'''' es alquilo de 1 a 20
átomos de carbono y n = 0, 1 ó 2, ó un grupo carboxilo o grupo éster
de fórmula -COOR^{5} en donde R^{5} es H ó alquilo de 1 a 20
átomos de carbono; ó
(ii) naftilo o un derivado substituido del mismo
que tiene la substitución con uno o más de un alquilo de 1 a 20
átomos de carbono, alquenilo de 1 a 20 átomos de carbono, alquinilo
de 1 a 20 átomos de carbono, halo, haloalquilo de 1 a 20 átomos de
carbono, nitro, ciano, hidroxialquilo de 1 a 20 átomos de carbono,
SO_{n}R'''', en donde R'''' es alquilo de 1 a 20 átomos de carbono
y n=0, 1 ó 2, ó un grupo carboxilo o éster de fórmula -COOR^{5} en
donde R^{5} es H ó alquilo de 1 a 20 átomos de carbono;
y las sales farmacéuticamente aceptables de los
mismos.
La presente invención proporciona además
derivados de O^{6}-alquilguanina de fórmula
1:
en
donde:
Y es H, ribosil, desoxirribosil, ó
R''XCHR''',
en donde X es O ó S, R" y R"' son alquilo de
1 a 20 átomos de carbono o derivados substituidos de los mismos que
tienen una substitución con uno o más hidroxilo, alcoxilo de 1 a 20
átomos de carbono, amino, alquilamino de 1 a 20 átomos de carbono,
amido o ureido.
R' es H ó alquilo de 1 a 20 átomos de carbono o
hidroxialquilo de 1 a 20 átomos de carbono;
R es:
(i) un grupo cíclico que tiene por lo menos un
anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros, opcionalmente con un anillo
carbocíclico o heterocíclico fusionado con el mismo, el o cada
anillo heterocíclico con por lo menos un heteroátomo escogido entre
O, N ó S, ó un derivado substituido del mismo que tiene una
substitución en el (los) anillo(s) heterocíclico(s)
y/o el (los) anillo(s) carbocíclico(s) mediante uno o
más alquilo de 1 a 20 átomos de carbono, alquenilo de 1 a 20 átomos
de carbono, alquinilo de 1 a 20 átomos de carbono, halo, haloalquilo
de 1 a 20 átomos de carbono, nitro, ciano, hidroxialquilo de 1 a 20
átomos de carbono, SO_{n}R'''' en donde R'''' es alquilo de 1 a 20
átomos de carbono y n = 0, 1 ó 2, ó
(ii) naftilo o un derivado substituido del mismo
teniendo la substitución con uno o más alquilo de 1 a 20 átomos de
carbono, alquenilo de 1 a 20 átomos de carbono, alquinilo de 1 a 20
átomos de carbono, halo, haloalquilo de 1 a 20 átomos de carbono,
nitro, ciano, hidroxialquilo de 1 a 20 átomos de carbono,
SO_{n}R'''', en donde R'''' es alquilo de 1 a 20 átomos de carbono
y n=0, 1 ó 2,
y las sales farmacéuticamente aceptables de los
mismos.
R puede ser convenientemente un anillo
heterocíclico de 5 ó 6 miembros o un benzo derivado del mismo, en
cuyo caso el grupo O^{6}-alquil guanina
puede estar unido a R, bien en el anillo heterocíclico o bien en el
anillo de benceno.
En versiones preferidas, R es un anillo de 5
miembros que contiene S ó O, con o sin un segundo anillo fusionado
al mismo.
De preferencia, R es un anillo heterocíclico que
tiene por lo menos un átomo de S, con más preferencia, R es un
anillo heterocíclico de 5 miembros que tiene por lo menos un átomo
de S; y con mayor preferencia, R es un anillo de tiofeno o un
derivado substituido del mismo.
Alternativamente, R puede ser un anillo
heterocíclico que tiene por lo menos un átomo de O, en particular,
un anillo heterocíclico de 5 miembros que tiene por lo menos un
átomo de O y más particularmente R puede ser un anillo de furano o
un derivado substituido del mismo.
Como otra alternativa, R puede ser un anillo
heterocíclico que tiene por lo menos un átomo de N, particularmente
R puede ser un anillo heterocíclico de 6 miembros que tiene por lo
menos un átomo de N y en particular R puede ser un anillo de
piridina.
En la definición de R, los substituyentes
preferidos son: halo, haloalquilo, ciano, SO_{n}R'''', en donde
R'''' es alquilo y n=0, 1 ó 2, y un grupo éster de fórmula
-COOR^{5} en donde R^{5} es alquilo.
Un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo contiene
de preferencia de 1 a 10 átomos de carbono y con más preferencia de
1 a 5 átomos de carbono. Halo incluye yodo, bromo, cloro o
flúor.
Ejemplos de compuestos de la invención
(juntamente con compuestos B.4214 y B.4218 no comprendidos por la
presente solicitud), se muestran en la tabla 1.
De los compuestos de la tabla 1, los compuestos
B.4214 y B.4218 no son compuestos de la invención. El compuesto
B.4210 (es decir, el compuesto de fórmula 1 en el cual R es
2-piridilo, R^{1} es H e Y es H) no es un
compuesto preferido de la invención.
Los compuestos particularmente preferidos de la
invención incluyen:
| B.4205 | O^{6}-tienilguanina |
| B.4206 | O^{6}-(3-tienilmetil)guanina |
| B.4212 | O^{6}-piperonilguanina |
| B.4226 | O^{6}-(2-benzo[b]tienilmetil)guanina |
| B.4266 | O^{6}-(2-benzofuranilmetil)guanina |
| B.4275 | O^{6}-(5-tiazolilmetil)guanina, |
y los compuestos substituidos en el anillo
heterocíclico de R con un grupo halo, ciano o éster, incluyendo
| B.4229 | O^{6}-(5-metoxicarbonilfurfuril)guanina |
| B.4269 | O^{6}-(5-bromotenil)guanina |
| B.4273 | O^{6}-(5-cianofurfuril)guanina. |
Otros compuestos preferidos incluyen
| B.4209 | O^{6}-(3-furilmetil)guanina |
| B.4276 | O^{6}-(2-benzo[b]tienilmetil)guanosina |
| B.4277 | O^{6}-(4-picolil)guanina |
Los compuestos más preferidos de la invención son
aquellos que inactivan la Atasa in vitro y/o en células de
mamíferos y/o tumores de xenoinjertos más efectivamente que la
O^{6}-bencilguanina (BeG) y que
sensibilizan las células de mamíferos y/o tumores de xenoinjertos
para los efectos aniquiladores o inhibidores del crecimiento, de las
nitrosoureas y o agentes metilantes, más efectivamente que la BeG.
Los compuestos preferidos deben también tener en comparación con la
BeG, una reducida toxicidad para los tejidos normales y/o a todo el
organismo cuando se emplean en combinación con dichos agentes. Los
compuestos preferidos no deben ser por sí mismos tóxicos o mostrar
más que una mínima toxicidad a las dosis requeridas para inactivar
la ATasa, ni cualquier producto de hidrólisis de un compuesto
preferido químicamente inestable debe ser tóxico. Aunque la
invención no está limitada a ninguna teoría, los compuestos
preferidos pueden necesitar ser menos estables que la BeG de forma
que experimentan una degradación química espontánea poco tiempo
después de lograr la máxima inactivación de la ATasa: de esta forma
cualquier acción de procesos metabólicos que podrían actuar sobre el
agente para generar especies tóxicas sería minimizado. Los
compuestos preferidos deben ser menos capaces de sensibilizar la
médula espinal humana u otros tipos de células normales a los
efectos tóxicos de los agentes alquilantes de forma que no exacerben
la toxicidad conocida o generen nuevas toxicidades de estos agentes,
en tejidos humanos normales.
Compuestos preferidos de la invención incluyen
aquellos que tienen un valor I_{50} relativamente bajo en la Tabla
4 adjunta (p. ej., debajo de 1,0 \muM, más particularmente debajo
de 0,04 \muM) y/o que tienen una semivida relativamente corta en
tampón I (representando las condiciones para un ensayo in
vitro) y/o solución salina tamponada con fosfato (PBS)
(representando las condiciones en un medio fisiológico) en la Tabla
4 adjunta (p. ej., menos de 20 horas en tampón 1 ó menos de 16 horas
en PBS).
Una semivida relativamente corta puede
considerarse como un indicador de que un compuesto de la invención
sería menos estable que la
O^{6}-bencilguanina debido a la reactividad
de RR'CH- y tendería a disociarse por hidrólisis en un medio
fisiológico.
La influencia del grupo RR'CH- en los compuestos
de fórmula I permitiéndoles actuar como inhibidores de la ATasa, se
determina mediante factores electrónicos, estéricos y
fisicoquímicos. Los factores estéricos pueden relacionarse con la
naturaleza del entorno del sitio receptor de la cisteína en la
ATasa. De preferencia R' es H. Un carbono secundario unido al
O^{6} (como en los compuestos DL, B.4214 ó B.4217) se ha
encontrado que reduce en gran manera la actividad inactivadora,
probablemente debido al volumen del substituyente.
De preferencia, el grupo cíclico en R no tiene un
grupo metilo en la posición vecina (como en B.4222) aunque la
influencia de la substitución vecina es evidentemente mucho menor
cuando R es heterocíclico que en los isómeros de naftilo B.4213 y
B.4265.
Factores fisicoquímicos tales como la
estabilidad, solubilidad y reparto en agua/lípido, son importantes
para la selección de compuestos para emplear in vivo y
afectan a la formulación, absorción y transporte, por ejemplo. La
selección de compuestos puede también ser influenciada por su
distribución diferencial en diferentes tejidos.
Una versión de la invención proporciona una
composición farmacéutica que contiene compuestos de fórmula I, en
donde Y, R y R' son como se ha definido más arriba, o una sal
farmacéuticamente aceptable de los mismos, y un excipiente
farmacéuticamente aceptable. Opcionalmente la composición puede
también contener un agente alquilante tal como un agente
cloroetilante o metilante.
En otra versión, la presente invención
proporciona un método para reducir la actividad de ATasa en un
anfitrión, el cual método comprende la administración al anfitrión
de una cantidad efectiva de una composición que contiene un
compuesto de fórmula I en donde Y, R y R' son como se ha definido
más arriba, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, más
particularmente una composición farmacéutica como se ha definido más
arriba. Este método puede alternativamente definirse como un método
de reducir la actividad reparadora del ADN inducida por ATasa, en un
anfitrión.
La invención proporciona además un método para el
tratamiento de células tumorales en un anfitrión que comprende la
administración al anfitrión de una cantidad efectiva de una
composición que contiene un compuesto de fórmula I, en donde Y, R y
R' son como se ha definido más arriba o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo, más particularmente una composición
farmacéutica como se ha definido más arriba, y administrando al
anfitrión una cantidad efectiva de una composición que contiene un
agente alquilante. El método puede emplearse para el tratamiento de
neoplasmas incluyendo aquellos que son conocidos por ser sensibles a
la acción de un agente alquilante, p. ej., el melanoma y glioma y
otros cuya resistencia al tratamiento con agentes alquilantes sólo
puede ser vencida mediante el empleo de un inactivador de acuerdo
con la invención.
La invención proporciona también un procedimiento
para la preparación de compuestos de fórmula I, el cual comprende
los pasos de: reacción del hidruro de sodio con una solución de
RR'CHOH (en donde R y R' son como se ha definido más arriba) en un
disolvente orgánico, de preferencia a temperatura ambiente o por
debajo de ella; adición de cloruro de
2-amino-N,N,N-trimetil-1H-purin-6-aminio
ó
2-amino-6-cloropurina
ribosido; tratamiento de la mezcla de reacción con un ácido débil y
éter; y extracción del producto deseado.
La invención se describe a continuación en
detalle, con referencia a los dibujos adjuntos, en los cuales:
La figura 1 es una gráfica del porcentaje
residual de actividad de la ATasa humana recombinante purificada,
después de la incubación con diferentes concentraciones de varios
inactivadores. Cada punto muestra la media de 3 mediciones. La línea
del 50% de actividad residual se emplea para el cálculo de los
valores I_{50}, es decir la concentración de inactivador necesaria
para producir una reducción del 50% de la actividad ATasa.
La figura 2 son dos gráficas del porcentaje del
crecimiento celular contra la concentración de agente alquilante
(\mug/ml) mostrando el efecto de sensibilización de la
O^{6}-bencilguanina (BeG) y
O^{6}-fenilguanina (B.4205) en dos
diferentes concentraciones (0,1 y 1,0 \muM) en la sensibilización
de células Raji al BCNU. La línea al 90% de crecimiento se emplea
para el cálculo de los valores de D_{90}, es decir la dosis de
BCNU a la cual el crecimiento fue del 90% comparado a los controles
sin tratar, es decir, el 10% de inhibición al crecimiento.
La figura 3 son cuatro gráficos de porcentajes de
crecimiento celular, contra la concentración del agente alquilante
(\muM), mostrando el efecto de BeG y B.4205 a cuatro diferentes
concentraciones (0,1, 0,5, 1,0 y 5,0 \muM) en la sensibilización
de células Raji a la temozolomida.
La figura 4 es una gráfica extrapolada de la
figura 3 de los valores para D_{50} (\muM) (es decir, la dosis
de temozolomida a la cual el crecimiento fue del 50% comparado con
controles sin tratar) contra la concentración del inactivador
(\muM).
La figura 5 son dos gráficas del porcentaje de
crecimiento celular contra la concentración del inactivador,
mostrando el efecto inhibidor del crecimiento de la
O^{6}-furfurilguanina (B.4203) y B.4205 en
células de hamster chinos V79 (RJKO) y una sublínea de la misma
(+120).
La figura 6 son dos gráficas del porcentaje de
crecimiento celular contra la concentración del inactivador,
mostrando el efecto de inhibición del crecimiento de B.4203 y B.4205
en dos subclones de Xeroderma pigmentosum.
La figura 7 son cuatro gráficas de porcentaje de
crecimiento celular contra la concentración del inactivador (\muM)
mostrando el efecto de los productos de degradación de los
inactivadores B.4203, B.4205, B.4212
(O^{6}-piperonil-guanina) y
B.4226
(O^{6}-[2-benzo(b)tienilmetil)guanina)
en el crecimiento de células Raji.
La figura 8 es un diagrama de la actividad ATasa
(fm/mg) contra el tiempo (horas) que muestra la reducción de la
actividad ATasa en xenoinjertos A375 en ratones inmunodeprimidos
para controles sin tratar, controles tratados con aceite de maíz y
extractos tratados con BeG (30 mg/kg) y B.4205 (30 mg/kg).
Las figuras 9-13 son gráficas de
resultados de estudios con xenoinjertos. En cada figura la gráfica
superior muestra el porcentaje de volumen tumoral contra el tiempo
(días) para los xenoinjertos tumorales A375 en ratones
inmunodeprimidos tratados con BCNU solo, con BeG en combinación con
BCNU, y B.4205 en combinación con BCNU. La gráfica inferior de cada
figura muestra el número de ratones supervivientes en cada grupo de
tratamiento contra el tiempo (días) después del tratamiento
ilustrado en la gráfica superior.
Los datos para cada figura son como sigue:
| Figura | Ratones | Concentración de BCNU (mg/kg) | Inactivador (mg/kg) |
| 9 | ASU | Aprox. 15 | 60 |
| 10 | ASU | 25 | 60 |
| 11 | OLAC | 10 | 30 |
| 12 | ASU | 16 | 60 |
| 13 | ASU | 16 | 60 |
La figura 14 son 3 gráficas de porcentaje de
supervivencia contra la concentración de temozolomida (\muM), que
nuestra la supervivencia de células de médula ósea después del
tratamiento con inactivador (10 \muM) ó DMSO (control) en
combinación con dosis crecientes de temozolomida.
Los derivados de la
O^{6}-hetarilalquilguanina que tienen
característica inactivadoras de la ATasa, pueden sintetizarse
adaptando la preparación estándar que se describe a continuación
como apropiada.
Se prepara el cloruro de
2-amino-N,N,N-trimetil-1H-purin-6-aminio,
de acuerdo con el procedimiento descrito por Kiburis y
col., J. Chem. Soc. (C), 1971, 3942.
Detalles y condiciones para la reacción de esta sal cuaternaria con
bencilóxido de sodio (para dar
O^{6}-bencil-guanina) no
descritos en MacCoss, Chen y Tolman, Tetrahedron Lett., 1985, 26,
1815, fueron dados por MacCoss, Tolman, Wagner y Hannah en la
solicitud de patente europea nº 184.473, pero los mismos no fueron
adecuados para la preparación de análogos relativamente sensibles y
los inventores idearon la preparación estándar que figura a
continuación.
Se añade hidruro de sodio (60% en aceite; 0,8 g,
20 mmoles) a una solución de RR'CHOH (56 mmoles,
aproximadamente 5 ml) en DMSO (5 ml) y la mezcla se agita a
temperatura ambiente durante 1 hora. Para alcoholes sólidos o de
alto peso molecular, se emplean hasta 10 ml de DMSO en lugar de 5
ml. Se añade cloruro de
2-amino-N,N,N-trimetil-1H-purin-6-aminio
(2,29 g, 10 mmoles) y se continua agitando durante 1 hora más. El
cambio en el espectro UV es entonces completo (\lambda_{máx} 312
\rightarrow 284 nm) y la solución casi transparente se trata con
ácido acético (1,7 ml). Después de enfriar y diluir con éter (300
ml), la mezcla se deja aparte en reposo (2 horas) y se recoge el
sólido (A) formado. La trituración con agua proporciona el producto.
Una segunda fracción puede obtenerse por evaporación del filtrado
éter-DMSO, y trituración del residuo sucesivamente
con éter y agua. Alternativamente el producto puede extraerse del
sólido (A) con acetonitrilo caliente. Los compuestos recristalizados
muestran por TLC una única mancha
(C_{6}H_{6}-MeOH, 4:1) y se caracterizan
mediante análisis y sus espectros RMN. Frecuentemente, contienen
disolvente procedente de la cristalización. En la Tabla 2 figuran
los puntos de fusión y datos analíticos. Los datos de UV y ^{1}H
RMN vienen dados en la Tabla 3. Los espectros de RMN se midieron en
instrumentos Bruker WP80 ó MSL 300.
Este procedimiento de preparación estándar (con
las variaciones indicadas por símbolos en la Tabla 2) se empleó para
preparar los compuestos que figuran en la relación de las Tablas 2ª
y 3ª. En los compuestos B.4217 y B.4219. R' es metilo; en los
restantes compuestos R' es H. La
O^{6}-bencilguanina y los compuestos
B.4214, B.4218 y B.4231 que figuran en la relación de la Tabla 4 a
continuación fueron también preparados mediante este procedimiento
de preparación estándar con fines analíticos comparativos.
Las variaciones indicadas por los símbolos en la
Tabla 2 son como sigue:
a Se emplearon 5 mmoles de hidruro de
sodio por mmol de sal cuaternaria en la preparación de este
compuesto. Cuando se emplea la cantidad estándar (2 mmoles) puede
recuperarse un 40% de sal cuaternaria después de la reacción.
b Este compuesto se prepara por hidrólisis
del éster metílico B.4229 (145 mg, 0,5 mmoles) en
2-metoxietanol (2,5 ml) y agua (2,5 ml) por
tratamiento con NaOH 2M (2,5 ml) durante 4 horas a temperatura
ambiente. La neutralización con ácido acético (0,32 ml, 5,5
mmoles), suave evaporación, trituración con agua (3 ml) y
filtración, da un sólido el cual por extracción con metanol caliente
proporciona el ácido B.4234.
c Los datos necesarios se basan en el
monohidrato de una mezcla de 4 partes de sal de sodio del ácido y 3
partes del ácido, que necesita 4,3% de Na. Encontrado Na,
4,44%.
d Se emplean 3 mmoles de RCH_{2}OH por
mmol de sal cuaternaria en lugar de los 5,6 mmoles estándar.
e Para alcoholes que son demasiado
sensibles al hidruro de sodio en DMSO a temperatura ambiente, se
prepara RCH_{2}ONa en DMF (2,5 ml a -10ºC; 3 mmoles de
RCH_{2}OH; 2 mmoles de hidruro de sodio). Se añade 1 mmol de sal
cuaternaria después de 15-20 minutos y se continúa
agitando durante 2-3 horas a temperatura
ambiente
f Se extraen los productos con
acetonitrilo.
Se trata una solución de alcóxido preparada como
en el procedimiento estándar de más arriba a partir de hidruro de
sodio (60% en aceite; 120 mg, 3 mmoles) y RR'CHOH (4,6 mmoles) en
DMSO anhidro (2 ml) durante 1 hora, con
2-amino-6-cloropurina
ribosido (302 mg, 1 mmol) y se agita durante 5 minutos a
temperatura ambiente y a continuación, 15 minutos a
60-65ºC. La reacción es entonces completa como
indica el cambio del espectro UV (\lambda_{máx} 311 \rightarrow
284 nm). Enfriando y triturando con éter (100 + 15 ml) y filtrando
se obtiene un sólido que se trata con agua (10 ml). El pH se ajusta
de 11 a 8 pasando CO_{2} durante breve tiempo. La filtración
elimina el material inorgánico y el residuo anhidro se extrae a
temperatura ambiente con metanol (4 porciones de 10 ml conteniendo
cada una, una gota de piridina). La evaporación de casi todo el
metanol y adición de una poca cantidad de éter suministra el
producto casi puro de acuerdo con el análisis TLC
(C_{6}H_{6}-MeOH 4:1). Se recristaliza con
metanol y trazas de piridina, disolviendo y concentrando por debajo
de 40ºC, algunas veces con la adición final de un poco de éter.
Este procedimiento se empleó para preparar los
compuestos que figuran en las tablas 2b y 3b. Las trazas de
impurezas son difíciles de eliminar pero los espectros de RMN
muestran que los nucleósidos son aproximadamente el 90%
puros. Los rendimientos son del orden de 30-40%.
(Tabla pasa a página
siguiente)
Los alcoholes de partida RR'CHOH se prepararon
habitualmente por reducción de los correspondientes aldehidos, a
menudo disponibles comercialmente, mediante borohidruro de sodio. Un
método diferente se empleó para los precursores del éster B.4229 y
el nitrilo B.4273. La sucrosa se convirtió ^{1} mediante el
5-clorometilfurfural en
5-hidroxi-metilfurfural. La
oxidación ^{2} de este aldehido dio el ácido carboxílico el cual
se esterificó mediante el método de Bocchi y
col.,^{3} dando el 5-(hidroximetil)furoato de metilo
^{4} necesario para el B.4229. La oxima ^{5} del aldehido se
deshidrató mediante el método de Carotti y col.,
^{6} ; el producto crudo de la reacción se trató con amoníaco
acuoso concentrado en metanol antes de la extracción con
diclorometano. La destilación proporcionó
5-cianofurfuril alcohol, ^{7} necesario para el
B.4273.
Para el B.4266, la reacción de Vilsmeier ^{8}
del benzofurano suministró el 2-aldehido, el cual se
redujo al alcohol necesario ^{9} mientras que para el B.4226 la
litiación y tratamiento con dimetilformamida dieron el
2-aldehido y a su vez el alcohol ^{10}.
Para el B.4274, se oxidó el tartrato de dimetilo
^{11} a glioxilato de metilo el cual reaccionó ^{12} con el
isocianuro de tosilmetilo para dar el
oxazol-5-carboxilato de metilo
^{13}. Este se redujo mediante hidruro de aluminio y litio
mediante el método de Fallab ^{14} para dar el alcohol^{15}.
Para el B.4275, el bromomalonaldehido ^{16} y
la tiourea suministraron el
2-aminotiazol-5-carboxaldehido
^{17}. La desaminación mediante el nitrilo de amilo ^{17}
seguido de la reducción con borohidruro de sodio dio el
5-hidroximetiltiazol. ^{14} Para el B.4271, se
preparó el 5-azapiperonil alcohol (p.f.
82-84ºC; encontrado C, 54,60; H, 4,58; N, 9,09;
C_{7}H_{7}NO_{3}; exigido C, 54,90; H, 4,61; N, 9,15%), a
partir del correspondiente aldehido. ^{18}
Para el B.4278, se nitró el
1-metilpirrol-2-carboxaldehido
^{19} y se redujo a alcohol ^{20} mediante borohidruro de
sodio.
A título de ejemplo específico, se describe a
continuación la preparación de la
O^{6}-tenilguanina (B.4205):
Una solución de tenil alcohol (3,18 ml, 33,6
mmoles) en DMSO (3 ml) se trató con hidruro de sodio (60% en aceite;
0,48 g, 12 mmoles), agitando cuidadosamente al principio. Después
de 1 hora, se añadió cloruro de
2-amino-N,N,
N-trimetil-1H-purin-6-aminio
(1,37 g, 6 mmoles) y se continuó la agitación 1 hora más. Se añadió
ácido acético (1,0 ml), se enfrió breve tiempo y la mezcla se diluyó
con éter (180 ml). El sólido (2,09 g) se recogió después de
1-2 horas. La evaporación del éter del filtrado y la
destilación del DMSO y exceso de tenil alcohol (p.e. 48.57ºC/0,2 mm)
dejó un residuo el cual por trituración con éter proporcionó una
segunda fracción de sólido (0,36 g). Los sólidos combinados se
malaxaron (trituración) con agua (6 ml), obteniéndose el producto
(1,335 g, 90%), mostrando con una intensa mancha en TLC
(C_{6}H_{6}-MeOH, 4:1) solamente con trazas de
impurezas. La disolución en etanol caliente (30 ml), la
clarificación mediante filtración a través de Celite, y la
concentración (hasta 10 ml) empleando un evaporador rotativo,
suministraron el B.4205 (1,125 g, 71% de material conteniendo 1/3 de
EtOH por mol como solvato).
Pueden prepararse compuestos de fórmula I en la
cual Y es R''XCHR''' (seco-nucleósidos) mediante una
preparación análoga a la reacción de la
O^{6}-bencilguanina con
\alpha-cloro-éteres (MacCoss y
col., Tetrahedron Lett.; solicitud de patente europea
nº 184.473., loc.cit.) o con bromuros de alquilo (p. ej., Kjellberg,
Liljenberg y Johansson, Tetrahedron Lett., 1986, 27, 877;
Moschel, McDougall, Dolan, Stine y Pegg, J. Med. Chem., 1992,
35, 4486).
Componentes típicos del "azúcar"
correspondientes a R''XCHR''', que conducen a los
seco-nucleósidos, se obtienen mediante métodos
descritos en p. ej., McCormick y McElhinney, J. Chem.
Soc., Perkin Trans. 1, 1985, 93; Lucey, McCormick y McElhinney,
J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1990, 795.
Compuestos de fórmula I en la cual Y es ribosilo
o desoxirribosilo (nucleósidos) pueden prepararse mediante métodos
análogos a las síntesis de
O^{6}-bencilguanina ribosido y
2-desoxirribosido (Moschel y col., 1992; ver
Gao, Fathi, Gaffney y col., J. Org. Chem., 1992, 57,
6954; Moschel, Hudgins y Dipple, J. Amer. Chem. Soc., 1981,
103, 5489) (ver preparación de ribosidos más arriba).
La cantidad del compuesto de la presente
invención que hay que emplear, varía de acuerdo con la cantidad
efectiva requerida para el tratamiento de células tumorales. Una
dosificación adecuada es aquella que da como resultado una
concentración del compuesto de la invención en las células tumorales
a tratar, que da como resultado una reducción de la actividad de
ATasa, p. ej., aproximadamente 1-2000 mg/kg, y de
preferencia 1-800 mg/kg, en particular
1-120 mg/kg, antes de la quimioterapia con un agente
alquilante.
La composición farmacéutica de la invención puede
formularse en formas convencionales con excipientes convencionales,
como se describe por ejemplo en la patente WO 91/13898, el contenido
de la cual se incorpora a la presente como referencia. La
composición puede contener el inactivador de acuerdo con la
invención juntamente con un agente alquilante; o la composición
puede comprender dos partes, una que contiene el inactivador y otra
que contiene el agente alquilante. El método de administración de
los compuestos de la invención a un anfitrión puede ser también un
método convencional como se describe en la patente WO 91/13898 por
ejemplo. Para la administración de un inactivador de acuerdo con la
invención a pacientes, la composición farmacéutica puede contener
adecuadamente el inactivador en un vehículo adecuado tal como el
polietilenglicol 400 al 40% en solución salina o en solución salina
o etanol al 3% (en solución salina), para inyección intravenosa, o
en forma de polvo en cápsulas adecuadas para administración
oral.
Los agentes alquilantes pueden administrarse de
acuerdo con técnicas conocidas y en formas convencionales de
administración como se describe en la patente WO 91/13898 por
ejemplo o de preferencia como dosis única inmediatamente después o
hasta 24 horas después pero de preferencia alrededor de 2 horas
después de la administración de agentes de inactivación de ATasa y
también a dosis menores que las empleadas en régimen de tratamiento
estándar. Una reducción de la dosis puede ser necesaria debido a que
los inactivadores serían generalmente anticipados para aumentar la
toxicidad de los agentes alquilantes. Ejemplos de agentes
cloroetilantes incluyen el 1,3 bis
(2-cloroetil)-1-nitrosourea
(BCNU),
1-(2-cloroetil)-3-ciclohexil-1-nitrosourea
(CCNU), fotemustina, mitozolomida y clomesona y los descritos en
McCormick, McElhinney, McMurry y Maxwell J. Chem. Soc. Perkin
Trans. I, 1991, 877 y Bibby, Double, McCormick, McElhinney,
Radacic Pratesi y Dumont Anti-Cancer Drug
Design, 1993, 8, 115. Ejemplos de agentes metilantes incluyen la
temozolida (patente inglesa GB 2 104 522) y la dacarbazina,
procarbazina y estreptozocina.
El clonado de ADNc y la superexpresión de la
Atada humana ha sido informado anteriormente ^{23}.La purificación
de las proteínas recombinantes se logró bien por cromatografía de
afinidad a través de una columna de ADN-celulosa
como describe Wilkinson y col., ^{25,26}, ó mediante
cromatografía de intercambio iónico de
DEAE-celulosa. Para esta última. la ATasa proteína
se purificó parcialmente mediante precipitación con sulfato de
amonio (30-60%) y se dializó contra 10 mM de
Tris-HCl, pH 7,5, 1 mM de DTT, 2 mM de EDTA, 10% de
glicerina, antes de cargar en la columna de
DEAE-celulosa. A continuación, se eluyó la ATasa
con un gradiente de NaCl 0-0,1 M. La proteína ATasa
humana purificada retuvo la actividad durante más de un año
almacenada a alta concentración a -20ºC en tampón I [50 mM de
Tris/HCl (pH 8,3)/ 3 mM de ditiotreitol/ 1 mM de EDTA] y pudo ser
descongelada y congelada varias veces sin una substancial pérdida de
actividad.
Los compuestos que debían ensayarse se
disolvieron en DMSO hasta una concentración final de 10 mM y se
diluyeron justo antes de ser empleados en tampón I que contenía 1
mg/ml de albúmina de suero bovino (IBSA). La ATasa recombinante se
diluyó en IBSA y se tituló con el fin de que la reacción fuera
conducida por la ATasa y no por el substrato, limitando las
condiciones. En cada ensayo se incubaron cantidades fijas de ATasa
(60-75 fmoles) con cantidades variables de
O^{6}-bencilguanina o del compuesto de
ensayo en un volumen total de 200 \mul de IBSA conteniendo 10
\mug de ADN de timo de vaca a 37ºC durante 1 hora. El substrato de
ADN [^{3}H]-metilado (100 \mul conteniendo 6,7
\mug de ADN y 100 fmoles de
O^{6}-metilguanina) se añadió, y la
incubación continuó a 37ºC durante 1 hora, hasta que la reacción fue
completa. Después de la hidrólisis ácida del ADN como se ha descrito
previamente ^{21}, la proteína [^{3}H]-metilada
se recuperó y cuantificó mediante un contaje de centelleo líquido.
Las muestras se ensayaron típicamente por duplicado y se repitieron
los experimentos varias veces. I_{50} es la concentración de
inactivador necesaria para producir una reducción del 50% en la
actividad de la ATasa.
Se cultivaron células de mamíferos en condiciones
estándar. Por ejemplo, se hicieron crecer células Raji (una línea
celular de linfoblastoides humanos a partir del linfoma de Burkitt),
en un cultivo en suspensión en medio RPMI suplementado con 10% de
suero de caballo. Las células A375M son células de melanoma humano a
partir de las cuales los xeno-injertos descritos
más adelante se establecieron después una inyección subcutánea en
ratones inmunodeprimidos. Las células WiDr son una línea celular de
carcinoma del colon humano: células de Hamster+120 son una sublínea
seleccionada de mitozolomida de una línea celular V79 de
fibroblasto de pulmón de hamster chino, llamada RJKO. Las células
Yoshida son una línea celular de carcinosarcoma de rata y YR_{bus}
es una sublínea de la misma, resistente al busulfan. Las células XP
son un línea celular SV40 de fibroblastos transformados
originalmente de la piel de un paciente de Xeroderma
pigmentosum. Las células pHMGhAT2b son un clon de estas células
que han sido transfectadas con un vector de expresión de células de
mamíferos que contienen el ADNc de ATasa humana, y las células
pHMGla son un clon que ha sido transfectado con el vector de
expresión solamente (es decir, uno que no contiene el ADNc de ATasa
humana). Los sedimentos celulares se resuspendieron en tampón I frío
(4ºC) que contenía 2 \mug/ml de leupeptina y se trataron con
ultrasonidos durante 10 segundos a 12 \mu de distancia de pico a
pico. Después de enfriar en hielo las células se trataron con
ultrasonidos durante 10 segundos más a 18 \mu. Inmediatamente
después del tratamiento con ultrasonidos, se añadieron 0,01
volúmenes de 8,7 mg/ml de fluoruro de fenilmetansulfonilo en etanol,
y el sonicado se centrifugó a 15000 g durante 10 minutos a 4ºC hasta
la formación de un sedimento en forma de bolita de residuos
celulares. El sobrenadante se guardó para la determinación de la
actividad de ATasa (ver más adelante).
Los inactivadores (10 mM en DMSO) se diluyeron
hasta 0,1 mM en tampón I desgasificado precalentado (1 mM de EDTA,
50 mM de Tris pH 8,3) ó PBS (pH 7-7,2). El PBS
(phosphate buffered saline)("solución salina tamponada con
fosfato") es 0,8% de NaCl, 0,02% de KCl, 0,15% de
Na_{2}H_{2}PO_{4}, 0,02% de KH_{2}PO_{4}, pH 7,2. Las
muestras fueron inmediatamente transferidas a un espectrofotómetro
CARY13 (bloque de la cubeta mantenido a 37ºC) y se escanearon a una
longitud de onda apropiada (de acuerdo con las propiedades
espectrales del compuesto) a intervalos de 3-10
minutos durante hasta 80 horas. Los resultados se expresaron como
cambio de porcentaje de absorbancia frente al tiempo y de éstos se
extrapolaron valores de T1/2 (semivida).
Las células se diluyeron a 10^{6}/ml en un
medio de cultivo conteniendo la apropiada concentración de
inactivador o un volumen equivalente de vehículo (DMSO). Después de
la incubación a 37ºC durante 2 horas, las células se recogieron por
centrifugación, se lavaron dos veces con PBS y los sedimentos
celulares en forma de bolita resultantes (entre 1-2
x 10^{7} por bolita) se almacenaron a -20ºC. La actividad ATasa se
determinó como se ha descrito más arriba, se trataron por duplicado
con ultrasonidos los extractos celulares y se expresaron como la
actividad en tanto por ciento restante con respecto a la presente en
los controles no tratados (por ejemplo 350-450 fm/mg
en células Raji). Los valores de I_{50} (es decir, la
concentración de inactivador necesaria para reducir la actividad de
la ATasa en un 50%), se extrapolaron de estos datos.
Se analizó la sensibilización de las células
Raji a los efectos citotóxicos del BCNU y la temozolomida después de
2 horas de pretratamiento con inactivador, empleando un ensayo XTT
^{22}. En resumen, las células se plaquearon a 1000 células/
pocillo en placas de 96 pocillos y se incubaron a 37ºC durante 30
minutos antes de la adición del medio conteniendo o bien la
concentración apropiada de inactivador o bien un volumen equivalente
de vehículo. Después de 2 horas de incubación a 37ºC, se añadió el
medio conteniendo o bien dosis crecientes de BCNU, temozolomida o
bien un vehículo equivalente, y las células se dejaron crecer
durante 6 días. A continuación, se añadió solución de XTT y las
células se incubaron durante 4 horas más a 37ºC. El producto
resultante de la reacción del formazano de color rojo/naranja, se
cuantificó midiendo la absorción a 450 nm en un lector de placas de
microtitulación.
La sensibilización de las células A375M a los
efectos citotóxicos del BCNU se analizó mediante el ensayo
\hbox{MTT ^{24} } que se diferencia del ensayo XTT
descrito más arriba como sigue. Las células A375M (1000 por pocillo)
se dejaron crecer durante 24 horas y a continuación se trataron con
el inactivador y 2 horas más tarde con BCNU. Después de 6 días se
añadió solución de MTT (4 mg/ml) y las células se incubaron durante
3 horas a 37ºC. El medio se aspiró y los cristales resultantes de
formazano de color púrpura se solubilizaron en DMSO (120 \mul) y
se cuantificó la viabilidad celular midiendo la absorción a 540 nm
empleando un lector de placas de microtitulación.
A partir de estos datos se determinó el
porcentaje de crecimiento de las células con respecto al de los
pocillos de control, para un margen de dosis de BCNU o temozolomida
tanto en presencia como en ausencia de inactivador. La
sensibilización de las células Raji al BCNU (D_{90}.C/D_{90}.I)
se determinó dividiendo el D_{90} (es decir, la dosis a la cual se
obtuvo un crecimiento del 90% frente a los controles sin tratar, es
decir, el 10% de inhibición) calculado para los datos empleando el
BCNU solo (D_{90}.C), por los del BCNU más el inactivador
(D_{90}.I). Un valor de uno (1) indica pues, ninguna
sensibilización por el inactivador. La sensibilización de las
células Raji a la temozolomida y la sensibilización de las células
A375M al BCNU se determinaron empleando los correspondientes valores
de D_{50} (es decir, las dosis a las cuales hubo un 50% de
inhibición).
Con el fin de dictaminar los efectos sobre las
células solas, se expusieron células de Xeroderma pigmentosum
y células del hamster chino V79 a concentraciones crecientes (hasta
600 \muM) de inhibidores seleccionados durante 2 horas a 37º. En
algunos casos, los inactivadores se sometieron a una hidrólisis a
37ºC durante 20 horas y a continuación se añadieron a las células
Raji con el fin de dictaminar la extensión a la cual los productos
de descomposición de los agentes podrían inhibir el crecimiento de
las células. Después de 6 días se determinó la extensión del
crecimiento celular como se ha descrito más arriba.
Para el ensayo (GM-CFC) de
células formadoras de colonias granulocitos/macrófagos, se
obtuvieron muestras de médula ósea humana primaria a partir de
pacientes experimentando una cirugía cardiotorácica. Después de la
eliminación de los eritrocitos de las muestras, las células se
plaquearon a 1-2 x 10^{5}/ml en 300mOsM de medio
Iscoves conteniendo 10\muM de inactivador o un volumen equivalente
de DMSO, 20% de suero bovino fetal, 10% de medio 5637 condicionado
como fuente de factores de crecimiento y 0,3% de agar noble, en
cápsulas de Petri de 1 ml conteniendo una dosis apropiada de
temozolomida y se incubaron a 37ºC en una atmósfera de 5% de
CO_{2} y 95% de aire. Después de 9 días, se contaron colonias que
contenían más de 50 células. las colonias representaban células
precursoras del linaje granulocito/macrófago
(huGM-CFC). La supervivencia se expresó como % del
número de colonias a la dosis cero de temozolomida.
Se obtuvieron ratones machos atímicos derivados
de los BALB-C (nu/nu atímicos) con un peso entre
25-35g a partir de una colonia criada en casa, del
Paterson Institute for Cancer Research, Christie Hospital NHS Trust,
Wilmslow Road, Manchester M20 9BX, Inglaterra (ratones ASU). Los
animales fueron estabulados en un ambiente estéril hasta que se
necesitaron para los experimentos). En un experimento, los ratones
se obtuvieron de Harlan-Olac, Harlan UK Limited,
Shaw's Farm, Blackthorn, Bicester, Oxon. OX6 OPT, Inglaterra
(ratones OLAC). Estos ratones pesaron entre 17 y 23 g y
subsiguientemente se encontró que eran más sensibles a los efectos
tóxicos del tratamiento de la combinación (inactivador y BCNU). Por
esta razón se administraron dosis más bajas.
Células A375M (melanoma humano) se hicieron
crecer en DMEM conteniendo 10% de suero fetal bovino. Las células se
prepararon para la inoculación in vivo mediante incubación
con 0,01 de tripsina.
Se inyectaron subcutáneamente células (10^{6})
en 100 \mul de PBS en el flanco de mano derecha de ratones
atímicos nu/nu de 8-10 semanas de edad. Estas
células se dejaron desarrollar en un tumor durante
3-4 semanas para su paso a animales de
experimentación. Bloques tumorales de 2 mm x 2 mm x 2 mm se
implantaron subcutáneamente en el flanco de mano derecha. Estos
animales estuvieron en disposición de ser empleados en los
experimentos del inactivador en 7-10 días.
Ratones Nu/Nu se trataron o bien con 30 ó 60
mg/kg de O^{6}-bencilguanina, ó bien con
B.4205 y el vehículo de control apropiado (i.p.)
60-90 minutos antes de 10-25 mg/kg
de BCNU (i.p.). Se prepararon la
O^{6}-bencilguanina y el B.4205 en forma de
una solución de 5 mg/kg en aceite de maíz y BCNU (2 mg/kg) en PBS +
3% de etanol.
Se efectuaron mediciones de los tumores de
xenoinjertos, cada 1-2 día, por operarios empleando
calibradores digitales. El volumen del tumor se calculó empleando la
fórmula (h x w x 1)\pi/6. Los animales experimentales se
pesaron también cada 1-2 días. Las mediciones
continuaron hasta que los tumores en los animales de control
alcanzaron el máximo volumen permitido (es decir, 1 cm x 1 cm x 1
cm).
Las tablas 4, 5 y 6 muestran los datos físicos,
bioquímicos y en vivo de cada uno de los inactivadores. Los
ensayos que figuran en la relación están descritos en la sección de
métodos.
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
La figura 1 muestra el resultado del ensayo de
inactivación in vitro de la ATasa empleando 4 de los
compuestos. El B.4206 fue algo más efectivo que el BeG pero el
B.4212 y B.4205 fueron considerablemente mejores en las condiciones
empleadas para el ensayo. El 4203 no fue tan efectivo como el
BeG.
La figura 2 muestra que con el 0,1 \muM de
inactivador, el B.4205 fue más efectivo que el BeG en la
sensibilización de las células Raji a los efectos de inhibición del
crecimiento del BCNU: con 1,0 \muM de inactivador, el B.4205 y la
BeG fueron igualmente efectivos a este respecto.
La figura 3 muestra que con 0,1 \muM de
inactivador, el B.4205 fue más efectivo que la BeG en la
sensibilización de las células Raji a los efectos inhibidores del
crecimiento de la temozolomida, pero que como las dosis de los
inactivadores fueron aumentadas, la sensibilización mediante la BeG
resultó más efectiva mientras que mediante el B.4205 permaneció
inalterable. Esta falta de respuesta a la dosis con el B.4205 pero
una clara respuesta a la dosis con la BeG se muestra más claramente
en la figura 4.
La figura 5 muestra que mientras se produjo
alguna inhibición al crecimiento de las células V79 mediante el
B.4203 a dosis en exceso de 100 \muM (es decir, como mínimo 100x
más alto que la dosis I_{50} para este compuesto), no se observó
ningún efecto con el B.4205 hasta la máxima concentración
empleada.
La figura 6 muestra que las células XP fueron
también susceptibles a los efectos inhibidores del crecimiento del
B.4203, pero que estas células fueron más sensibles que las células
V70 a los efectos del B.4205. Sin embargo, las dosis requeridas para
la inhibición del crecimiento fueron por lo menos 100 veces que las
requeridas para la inactivación de la ATasa. Puede aceptarse que los
efectos inherentes a la inhibición del crecimiento de estos
inactivadores no contribuiría detectablemente a la sensibilización
de las células a los efectos inhibidores del crecimiento de los
agentes alquilantes.
La figura 7 muestra que no se produjo ningún
efecto substancial inhibidor del crecimiento en células Raji cuando
se dejó que los compuestos en cuestión experimentaran una hidrólisis
(ver métodos) antes de ser añadidos a las células sin posterior
adición de los agentes alquilantes. Por lo tanto, en estas
condiciones experimentales, no sería de esperar que los productos de
descomposición de los agentes contribuyeran a las inhibiciones del
crecimiento observadas empleando combinaciones de estos agentes y
agentes alquilantes.
Las figuras 8-13 muestran los
resultados del estudio de xenoinjertos con mayor detalle. La
reducción y recuperación de la actividad ATasa después de la
exposición a la O^{6}-bencilguanina ó
B.4205 se midió en extractos (fig. 8) de xenoinjerto del tumor A375,
preparados a partir de tejidos de animales sacrificados 2 ó 24 horas
después de la administración del inactivador. Las figuras
9-13 indican la sensibilización de los xenoinjertos
tumorales del A375 en ratones inmunodeprimidos bien a la
O^{6}-bencilguanina o bien al B.4205 en
combinación con el BCNU como se ha descrito en la sección de
métodos. En cada figura la gráfica superior muestra el aumento de
porcentaje en el volumen del tumor durante el transcurso de tiempo
del experimento. La gráfica inferior muestra el número de animales
de cada grupo de tratamiento y el número de supervivientes después
del tratamiento. Los gráficos muestran que el B.4205 es comparable a
la O^{6}-bencilguanina (BeG) en la
reducción del volumen tumoral y es substancialmente menos tóxico en
combinación con el BCNU que la BeG en combinación con el BCNU. En
pacientes humanos, el melanoma maligno cutáneo se trata con el BCNU,
particularmente en USA (Balch, C.M., Houghton, A. & Peters, L.
(1989) "Cutaneous Melanoma" ("Melanoma cutáneo") en
Cancer: Principles and Practise of Oncology ("Cáncer:
principios y práctica de la oncología"), De Vita, V.T., Helman,
S. & Rosenberg, S.A. (eds.), pp 1499-1542,
Lipincott: Philadelphia) de forma que el xenoinjerto del melanoma
humano crecido en ratones inmunodeprimidos es un sistema de modelo
de animal que es clínicamente altamente importante.
La figura 14 muestra los resultados de los
ensayos sobre la sensibilización de las células de médula ósea
humana para la temozomida como se ha descrito en la sección de
métodos de más arriba. Las células de médula ósea se obtuvieron de
tres pacientes identificados como C, D y E respectivamente. Las
curvas de supervivencia muestran su relación con el efecto
citotóxico del tratamiento combinado inactivador/temozolomida. Es
deseable que este efecto fuera reducido. Los resultados para los
pacientes C & E muestran que el B.4205 tiene un efecto de
sensibilización más pequeño que la
O^{6}-bencilguanina (O^{6}BeG);
para el paciente D no hubo diferencia pero este resultado se
considera como una razonable variación en los ensayos científicos
con material humano.
La tabla 7 muestra el efecto tóxico del
inactivador sólo sobre las células de médula ósea obtenidos de 5
pacientes A-E, incluyendo los mismos pacientes
C-E que en la figura 17. Los resultados para B.4205
son comparables a los de la
O^{6}-bencilguanina. Nótese que las células
del paciente B fueron casi dos veces tan sensibles como, tanto la
BeG como el B.4205, en comparación con las otras muestras.
1) Todos los compuestos han sido ensayados para
determinar su capacidad para inactivar la ATasa recombinante humana
en condiciones estándar en un ensayo in vitro. En estas
condiciones dos de los compuestos (B.4214 y B.4217) no inactivaron
la ATasa hasta la concentración más alta empleada pero éstos fueron
compuestos en los cuales R^{1} es metilo. El resto de los
compuestos inactivaron la ATasa con valores I_{50} en el margen de
0,0045 a 95 \mumolar. Ocho compuestos (B.4205, B.4206, B.4212,
B.4226, B-4266, B.4269, B.4273, B.4275) tuvieron
valores I_{50} menores que los de BeG (tabla 4).
2) Los inactivadores experimentaron una
hidrólisis en solución acuosa a diferentes velocidades (semi vidas
0,17 a > 80 horas) pero esto no estaba relacionado con su
eficiencia como inactivadores de ATasa (tabla 4).
3) Compuestos que fueron eficientes en la
inactiva-ción de ATasa in vitro (I_{50}
< 1,0 \muM) inactivaron también la ATasa en células humanas con
valores I_{50} que fueron en general solamente ligeramente mayores
(media aprox. 1,5 veces) que los encontrados empleando proteína
recombinante en el ensayo in vitro (tabla 4).
4) La ATasa se inactivó con B.4205 en células de
huma-nos, ratas y hamster chinos con una
efectividad similar (valores de I_{50} 0,02-0,03).
Para B.4203 el margen fue de 0,04-0,12. En las
líneas celulares empleadas, el B.4205 y el B.4203 fueron hasta 7
veces más efectivos que la BeG (tabla 5).
5) Los B.4203 y B.4205 fueron tóxicos para las
células XP estudiadas y el B.4203 fue tóxico para las células V79
estudiadas pero solamente a concentraciones que eran por lo menos
100 veces más altas que aquellas en las que se observó una
sensibilización al BCNU (figuras 5 y 6).
6) Compuestos que fueron eficientes en la
inactivación de ATasa in vitro (I_{50} < 1,0 \muM) y
en células Raji (I_{50} < 1,0 \muM) sensibilizaron también
las células Raji y A375M en cuanto a los efectos inhibidores del
crecimiento del BCNU donde éste fue ensayado (tabla 4).
7) A concentraciones de inactivador de 0,1
\muM, el B.4205 fue más efectivo que la BeG en la sensibilización
de células Raji en cuanto a los efectos inhibidores del crecimiento,
de la temozolomida (fig. 3).
8) El ensayo in vitro puede emplearse para
predecir cuáles compuestos son más probablemente más efectivos
sensibilizadores de células de mamíferos en cuanto a los efectos
inhibidores del crecimiento del BCNU y agentes citotóxicos
afines.
9) El B.4205 fue similar o ligeramente más
efectivo que la BeG en la sensibilización de xenoinjertos de
melanoma humano crecidos en ratones inmunodeprimidos en cuanto a los
efectos inhibidores del crecimiento, del BCNU (figuras
9-13).
10) El B.4205 fue tan efectivo como la BeG en la
inactivación de la ATasa en xenoinjertos de melanoma humano crecidos
en ratones inmunodeprimidos (fig. 8).
11) El ensayo in vitro y/o el ensayo de
reducción de la ATasa en el xenoinjerto puede emplearse para
predecir cuáles compuestos son más probablemente efectivos
sensibilizadores de xenoinjertos de melanoma en cuanto a los efectos
inhibidores del crecimiento de BCNU y agentes citotóxicos
afines.
12) En contraste con la BeG, que causó la muerte
de hasta el 70% de los animales tratados, el B.4205 tuvo un efecto
muy pequeño en la sensibilidad de ratones inmunodeprimidos que
llevaban xenoinjertos de melanoma humano en cuanto a los efectos
tóxicos agudos de BCNU en las condiciones empleadas (figs.
9-13).
13) La BeG sensibilizó los GM-CFC
en tres muestras de médula ósea humana ensayadas para determinar los
efectos tóxicos de la temozolomida pero en dos de estas muestras, se
produjo poca o ninguna sensibilización mediante el B.4205. Este
ensayo fue por lo tanto usado para predecir los posibles efectos
mielosupresivos de los inactivadores de ATasa cuando se emplean en
la clínica en combinación con el BCNU y agentes afines (fig.
14).
1. W.N. Haworth and W.G.M. Jones,
J.Chem.Soc., 1944, 667
2. T. Reichstein, Helv. Chim. Acta,
9, 1926, 1066.
3. V. Bocchi, G. Casnati, A.
Dossena and R. Marchelli, Synthesis,
1979, 961.
4. P.A. Finan, J.Chem.Soc.,
1963, 3917; J.A. Moore and J.E. Kelly, J.
Polym. Sci., Polym.Chem.Ed., 22, 1984, 863.
5. J. Kiermayer,
Chemiker-Zeitunq, 19, 1895, 1004.
6. A. Carotti, F. Campagna and R.
Ballini, Synthesis, 1979, 56.
7. A.J. Floyd, R.G. Kinsman, Y.
Roshan-Ali and D.W. Brown,
Tetrahedron, 39, 1983, 3881
8. V.T. Suu, N.P.
Buu-Hoy and N.D. Xuong,
Bull.Soc.Chim.France, 1962, 1875.
9. T. Reichstein and L. Reichstein
Helv.Chim.Acta, 13, 1930, 1275.
10. H. Takeshita, H. Mametsuka and
H. Motomura. J. Heterocvcl.Chim., 23, 1986,
1211.
11. F.J. Wolf and J. Weijlard,
Oro.Synth.,Coll.Vol.4, 1963, 124.
12. A.M. van Leusen, B.E.
Hoogenboom and H. Siderius, Tetrahedron Lett.,
1972, 2369.
13. A. Maquestiau, R. Flammang and
F.B. Abdelouahab, Heterocycles, 29, 1989,
103.
14. S. Fallab, Helv.Chim.Acta, 35,
1952, 215
15. A.S. Kende, K. Kawamura and
R.J. DeVita, J.Amer.Chem.Soc., 112, 1990,
4070.
16. S. Trofirnenko, J.Orq.Chern.,
28, 1963, 3243.
17. I. Sawhney and J.R.H. Wilson
(Shell Internationale), EP. 395,174, 1989 (Chem.Abs.,
114, 143410s).
18. F. Dallacker, P. Fechter and V.
Mues, Z. Naturforsch., 34b, 1979, 1729.
19. P. Fournari,
Bull.Soc.Chim.France, 1963, 488.
20. L. Grehn, Chem.Scr., 16,
1980, 72.
21. Morten, J.E.N. & Margison,
G.P. (1988) Carcinogenesis 9, 45-49
22. Scudiero, D.A., Shoemaker R.J.,
Paull K.D., Monks A., Tierney S.,
Nofzíger T.H., Currens M.J., Seniff D, &
Boyd M.R. (1988), Cancer Research 48,
4827-4833
23. Fan, C.-Y., Potter, P.M.,
Rafferty, J.A., Watson, A.J., Cawkwell, L.,
Searle, P.F., O'Connor, P.J. and Margison, G.P.
(1991) Nucleic Acids Res. 18, 5723-5727
24. Carmichael J., DeGraff W.G.,
Gazdar A.F., Minna J.D., Mitchell J.B.
(1987). Evaluation of a tetrazolium based semiautomated
colorimetric assay : assessment of chemosensitivity testing. Cancer
Res. 47 : 936-942.
25. Wilkinson, M.C., Potter, P.M.,
Cawkwell, L., Georgiadis, P., Patel, D.,
Swann, P.F. and Margison, G.P. (1989) Nucleic
Acids Res. 17, 8475-8484.
26. Wilkinson, M.C., Cooper, D.P.,
Southan, C., Potter, P.M. & Margison, G.P.
(1990) Nucleic Acids Res., 18, 13-16.
In the specification the abbreviations "1h"
or "2h" etc. mean "1 hour", "2 hours", etc.
Claims (37)
1. Derivados de
O^{6}-alquilguanina de fórmula I:
en
donde
Y es H, ribosil, desoxirribosil, o R''XCHR''', en
donde X es O ó S, R'' y R''' son alquilo de 1 a 20 átomos de carbono
o derivados substituidos de los mismos que tienen una substitución
con uno o más hidroxilos, alcoxilo de 1 a 20 átomos de carbono,
amino, alquilamino de 1 a 20 átomos de carbono, amido o ureido;
R' es H ó alquilo de 1 a 20 átomos de carbono o
hidroxialquilo de 1 a 20 átomos de carbono;
R es:
(i) un grupo cíclico que tiene por lo menos un
anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros, opcionalmente con un anillo
carbocíclico o heterocíclico fusionado con el mismo, el cual o cada
anillo heterocíclico tiene por lo menos un heteroátomo escogido
entre O, N ó S, ó un derivado substituido del mismo que tiene una
substitución en el (los) anillo(s) heterocíclico(s)
y/o el (los) anillo(s) carbocíclico(s) mediante uno o
más alquilos de 1 a 20 átomos de carbono, alquenilo de 1 a 20
átomos de carbono, alquinilo de 1 a 20 átomos de carbono, halo,
haloalquilo de 1 a 20 átomos de carbono, nitro, ciano,
hidroxialquilo de 1 a 20 átomos de carbono, SO_{n}R'''' en donde
R'''' es alquilo de 1 a 20 átomos de carbono y n = 0, 1 ó 2, ó un
grupo carboxilo o grupo éster de fórmula -COOR^{5} en donde
R^{5} es H ó alquilo de 1 a 20 átomos de carbono; ó
(ii) naftilo o un derivado substituido del mismo
teniendo la substitución con uno o más alquilo de 1 a 20 átomos de
carbono, alquenilo de 1 a 20 átomos de carbono, alquinilo de 1 a 20
átomos de carbono, halo, haloalquilo de 1 a 20 átomos de carbono,
nitro, ciano, hidroxialquilo de 1 a 20 átomos de carbono,
SO_{n}R'''', en donde R'''' es alquilo de 1 a 20 átomos de carbono
y n=0, 1 ó 2, ó un grupo carboxilo o éster de fórmula -COOR^{5} en
donde R^{5} es H ó alquilo de 1 a 20 átomos de carbono,
y las sales farmacéuticamente aceptables de los
mismos.
2. Un compuesto de acuuerdo con la reivindicación
1 en donde
Y es H, ribosil, desoxirribosil, ó R''XCHR'''',
en donde X es O ó S, R'' y R'''' son alquilo de 1 a 20 átomos de
carbono o derivados substituidos de los mismos que tienen una
substitución con uno o más hidroxilos, amino, alquilamino de 1 a 20
átomos de carbono, amido o ureido.
R' es como se ha definido en la reivindicación
1;
R es
(i) un grupo cíclico que tiene por lo menos un
anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros, opcionalmente con un anillo
carbocíclico o heterocíclico fusionado con el mismo, el cual o cada
anillo heterocíclico tiene por lo menos un heteroátomo escogido
entre O, N ó S, ó un derivado substituido del mismo que tiene una
substitución en el (los) anillo(s) heterocíclico(s)
y/o el (los) anillo(s) carbocíclico(s) mediante uno o
más alquilos de 1 a 20 átomos de carbono, alquenilo de 1 a 20 átomos
de carbono, alquinilo de 1 a 20 átomos de carbono, halo,
haloalquilo de 1 a 20 átomos de carbono, nitro, ciano,
hidroxialquilo de 1 a 20 átomos de carbono, SO_{n}R'''' en donde
R'''' es alquilo de 1 a 20 átomos de carbono y n = 0, 1 ó 2; ó
(ii) naftilo o un derivado substituido del mismo
teniendo la substitución con uno o más alquilo de 1 a 20 átomos de
carbono, alquenilo de 1 a 20 átomos de carbono, alquinilo de 1 a 20
átomos de carbono, halo, haloalquilo de 1 a 20 átomos de carbono,
nitro, ciano, hidroxialquilo de 1 a 20 átomos de carbono,
SO_{n}R'''', en donde R'''' es alquilo de 1 a 20 átomos de
carbono y n=0, 1 ó 2,
y las sales farmacéuticamente aceptables de los
mismos.
3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 ó 2, en donde R es:
(a) un anillo heterocíclico de 5 ó 6 miembros,
ó
(b) un benzo derivado del mismo, estando el grupo
O^{6}-alquilguanina unido al R en
cualquiera de los dos: bien el anillo heterocíclico o bien el
anillo de benceno.
4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 ó 2 en donde R es un anillo heterocíclico de 5 miembros, que
tiene por lo menos un átomo de S ó un derivado substituido del
mismo como se ha definido en la reivindicación 1 ó 2.
5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 ó 2, en donde R es un anillo de tiofeno o un derivado substituido
del mismo como se ha definido en la reivindicación 1 ó 2
respectivamente.
6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
5, en donde R es un anillo de tiofeno substituido en el anillo con
halo.
7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
6, en donde halo es yodo, bromo, cloro o flúor.
8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 ó 2, en donde R es un anillo de furano o un derivado substituí-do
del mismo como se ha definido en la reivindicación 1 ó 2
respectivamente.
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 ó 2, en donde R incluye un anillo heterocíclico y/o carbocíclico
substituido con halo, haloalquilo de 1 a 20 átomos de carbono,
ciano, SO_{n}R'''' en donde R'''' es alquilo de 1 a 20 átomos de
carbono y n = 0, 1 ó 2, ó -COOR^{5}, en donde R^{5} es alquilo
de 1 a 20 átomos de carbono.
10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 ó 2, en donde R incluye un anillo heterocíclico substituido con
halo, ciano, o un grupo éster de fórmula -COOR^{5}, en donde
R^{5} es alquilo de 1 a 20 átomos de carbono.
11. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones precedentes, en donde R' es H.
12. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 ó 2, el cual es O^{6}-tenilguanina o un
derivado substituido del mismo, que tiene una substitución en el
anillo de tiofeno con un grupo halo, ciano o éster.
13. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
12, el cual es O^{6}-tenilguanina.
14. Un compuesto de acuerdo con la
reivindicación 12, el cual es
O^{6}-tenilguanina con una substitución en
el anillo de tiofeno con halo.
15. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
14, en donde halo es yodo, bromo, cloro o flúor.
16. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es
O^{6}-(3-tienilmetil)guanina.
17. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es O^{6}-piperonilguanina.
18. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es O^{6}-furfurilguanina.
19. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es
O^{6}-(3-furilmetil)guanina.
20. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es
O^{6}-(2-benzo[b]tienilmetil)guanina.
21. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es
O^{6}-(2-benzofuranilmetil)guanina.
22. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es
O^{6}-(5-tiazolilmetil)guanina.
23. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es
O^{6}-(5-metoxicarbonilfurfuril)guanina.
24. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es
O^{6}-(5-bromotenil)guanina.
25. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es
O^{6}-(5-cianofurfuril)guanina.
26. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es
O^{6}-(2-benzo[b]tienilmetil)guanosina.
27. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es
O^{6}-(4-picolil)guanina.
28. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, el cual es
O^{6}-(2-naftilmetil)guanina.
29. Una composición farmacéutica que contiene un
compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones
precedentes y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
30. Una composición farmacéutica de acuerdo con
la reivindicación 29, que contiene además un agente alquilante.
31. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 28, para emplear en un método para la
reducción de la actividad de la
O^{6}-alquilguanina-ADN
alquiltransferasa en un anfitrión.
32. Empleo de un compuesto de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28, en la elaboración de un
medicamento para la reducción de la actividad de
O^{6}-alquilguanina-ADN
alquiltransferasa.
33. Empleo de un compuesto de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28, y un agente alquilante en
la elaboración de una composición farmacéutica de una o dos partes,
para el tratamiento de células tumorales.
34. Empleo, de acuerdo con la reivindicación 32 ó
33, en donde el compuesto de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 28 es la
O^{6}-tenilguanina o un derivado
substituido de la misma que tiene una substitución en el anillo de
tiofeno con un grupo halo, ciano o éster, de fórmula -COOR^{5}, en
donde R^{5} es alquilo de 1 a 20 átomos de carbono.
35. Una composición, de acuerdo con la
reivindicación 30, en donde el agente alquilante se selecciona entre
la 1,3
bis(2-cloroetil)-1-nitrosourea
(BCNU) y la temozolomida.
36. Empleo de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 32 a 34, en donde el agente alquilante se
selecciona entre la 1,3
bis(2-cloroetil)-1-nitrosourea
(BCNU) y la temozolomida.
37. Un procedimiento para la preparación de un
compuesto de fórmula I como se ha reivindicado en la reivindicación
1, el cual comprende la reacción de hidruro de sodio con una
solución de RR'CHOH (en donde R y R' son como se ha definido en la
reivindicación 1), en un disolvente orgánico, añadiendo cloruro de
2-amino-N,N,N-trimetil-1H-purin-6-aminio
ó
2-amino-6-cloropurina
ribosido, tratamiento con un ácido débil y éter, y extracción del
producto deseado.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IE930432 | 1993-06-08 | ||
| IE930432 | 1993-06-08 | ||
| GB9410421 | 1994-05-23 | ||
| GB9410421A GB9410421D0 (en) | 1993-06-08 | 1994-05-23 | O (six)-substituted guanine derivatives |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2207638T3 true ES2207638T3 (es) | 2004-06-01 |
Family
ID=26304937
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES94916373T Expired - Lifetime ES2207638T3 (es) | 1993-06-08 | 1994-06-08 | Derivados de guanina 06-substituida, un procedimiento para su preparacio y su utilizacion en el tratamiento de celulas tumorales. |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0702683B8 (es) |
| JP (1) | JP4054057B2 (es) |
| CN (1) | CN1048493C (es) |
| AT (1) | ATE250060T1 (es) |
| AU (1) | AU697977B2 (es) |
| CA (1) | CA2164847C (es) |
| CZ (1) | CZ290951B6 (es) |
| DE (1) | DE69433161T2 (es) |
| DK (1) | DK0702683T3 (es) |
| ES (1) | ES2207638T3 (es) |
| FI (1) | FI955906A7 (es) |
| HU (1) | HU217779B (es) |
| NO (1) | NO313331B1 (es) |
| NZ (1) | NZ266527A (es) |
| PL (1) | PL180681B1 (es) |
| PT (1) | PT702683E (es) |
| RU (1) | RU2154646C2 (es) |
| SK (1) | SK282621B6 (es) |
| WO (1) | WO1994029312A1 (es) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6043228A (en) * | 1993-06-08 | 2000-03-28 | Cancer Research Campaign Technology Limited | O6 -substituted guanine derivatives, a process for their preparation and their use in treating tumor cells |
| US5929046A (en) * | 1994-06-08 | 1999-07-27 | Cancer Research Campaign Technology Limited | Pyrimidine and purine derivatives and their use in treating tumour cells |
| US5525606A (en) | 1994-08-01 | 1996-06-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Substituted 06-benzylguanines and 6(4)-benzyloxypyrimidines |
| DE19618727C2 (de) * | 1996-05-09 | 2000-02-17 | Deutsches Krebsforsch | Herstellung alkylierter Nucleosid-3'-Phosphate |
| WO1998042352A1 (en) * | 1997-03-24 | 1998-10-01 | Glaxo Group Ltd. | Method for treating b-cell tumors with ara-g nucleoside derivatives |
| AU744986B2 (en) * | 1997-07-12 | 2002-03-07 | Cancer Research Technology Limited | Cyclin dependent kinase inhibiting purine derivatives |
| US6060458A (en) * | 1998-02-13 | 2000-05-09 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Oligodeoxyribonucleotides comprising O6 -benzylguanine and their use |
| IL157880A0 (en) * | 2001-04-10 | 2004-03-28 | Ecole Polytech | Methods using o6-alkylguanine-dna alkyltransferases |
| US6984389B2 (en) * | 2002-04-25 | 2006-01-10 | University Of Connecticut Health Center | Using heat shock proteins to improve the therapeutic benefit of a non-vaccine treatment modality |
| AU2003231098A1 (en) | 2002-04-25 | 2003-11-10 | University Of Connecticut Health Center | Using heat shock proteins to improve the therapeutic benefit of a non-vaccine treatment modality |
| BRPI0511064A (pt) * | 2004-05-12 | 2007-12-26 | Bayer Cropscience Gmbh | regulação de crescimento da planta |
| CN100350975C (zh) * | 2005-02-03 | 2007-11-28 | 山东蓝金生物工程有限公司 | 抗癌药物组合物 |
| GB0502573D0 (en) * | 2005-02-08 | 2005-03-16 | Topotarget As | Therapeutic compounds |
| GB0907551D0 (en) * | 2009-05-01 | 2009-06-10 | Univ Dundee | Treatment or prophylaxis of proliferative conditions |
| CN104031048B (zh) * | 2014-05-28 | 2016-03-09 | 北京工业大学 | 一种β-氯乙基亚硝基脲类化合物及其合成方法和用途 |
| CN104031047B (zh) * | 2014-05-28 | 2016-03-09 | 北京工业大学 | 一种具有抗癌活性的氯乙基亚硝基脲及其合成方法 |
| CN107098906B (zh) * | 2017-05-19 | 2020-05-05 | 四川大学 | 苄基鸟嘌呤衍生物及其有机盐类化合物和药物组合物及其应用 |
| AU2019216531A1 (en) | 2018-02-02 | 2020-09-24 | Maverix Oncology, Inc. | Small molecule drug conjugates of gemcitabine monophosphate |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2139107A1 (de) * | 1971-08-04 | 1973-02-15 | Merck Patent Gmbh | Heterocyclisch substituierte adenosinverbindungen |
| AP55A (en) * | 1987-08-15 | 1989-09-26 | The Wellcome Foundation Ltd | Therapeutic Acyclic Nucleosides |
| US5352669A (en) * | 1990-03-13 | 1994-10-04 | The Of The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | O6 -benzylated guanine, guanosine and 2'-deoxyguanosine compounds possessing O6 -alkylguanine-DNA alkyltransferase depleting activity |
-
1994
- 1994-06-08 AT AT94916373T patent/ATE250060T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-06-08 SK SK1547-95A patent/SK282621B6/sk unknown
- 1994-06-08 PT PT94916373T patent/PT702683E/pt unknown
- 1994-06-08 ES ES94916373T patent/ES2207638T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-08 CZ CZ19953233A patent/CZ290951B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-06-08 WO PCT/IE1994/000031 patent/WO1994029312A1/en not_active Ceased
- 1994-06-08 NZ NZ266527A patent/NZ266527A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-06-08 JP JP50154395A patent/JP4054057B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-06-08 DE DE69433161T patent/DE69433161T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-06-08 EP EP94916373A patent/EP0702683B8/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-08 CN CN94193024A patent/CN1048493C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1994-06-08 HU HU9503522A patent/HU217779B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-06-08 PL PL94311950A patent/PL180681B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-06-08 DK DK94916373T patent/DK0702683T3/da active
- 1994-06-08 CA CA002164847A patent/CA2164847C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-06-08 RU RU96102153/04A patent/RU2154646C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-06-08 AU AU68059/94A patent/AU697977B2/en not_active Ceased
-
1995
- 1995-12-07 NO NO19954985A patent/NO313331B1/no unknown
- 1995-12-08 FI FI955906A patent/FI955906A7/fi unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2164847C (en) | 2005-11-15 |
| NO954985L (no) | 1996-02-07 |
| PL180681B1 (pl) | 2001-03-30 |
| NO954985D0 (no) | 1995-12-07 |
| DE69433161T2 (de) | 2004-07-08 |
| NZ266527A (en) | 1999-10-28 |
| AU6805994A (en) | 1995-01-03 |
| NO313331B1 (no) | 2002-09-16 |
| EP0702683B8 (en) | 2004-09-08 |
| WO1994029312A1 (en) | 1994-12-22 |
| CA2164847A1 (en) | 1994-12-22 |
| PL311950A1 (en) | 1996-03-18 |
| FI955906A0 (fi) | 1995-12-08 |
| HUT74574A (en) | 1997-01-28 |
| FI955906A7 (fi) | 1996-02-02 |
| JP4054057B2 (ja) | 2008-02-27 |
| AU697977B2 (en) | 1998-10-22 |
| EP0702683A1 (en) | 1996-03-27 |
| HU217779B (hu) | 2000-04-28 |
| CZ323395A3 (en) | 1996-06-12 |
| RU2154646C2 (ru) | 2000-08-20 |
| CN1145622A (zh) | 1997-03-19 |
| SK154795A3 (en) | 1996-07-03 |
| DE69433161D1 (de) | 2003-10-23 |
| ATE250060T1 (de) | 2003-10-15 |
| CN1048493C (zh) | 2000-01-19 |
| HU9503522D0 (en) | 1996-02-28 |
| DK0702683T3 (da) | 2004-02-02 |
| CZ290951B6 (cs) | 2002-11-13 |
| EP0702683B1 (en) | 2003-09-17 |
| PT702683E (pt) | 2004-01-30 |
| JPH08511773A (ja) | 1996-12-10 |
| SK282621B6 (sk) | 2002-10-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0702683B1 (en) | 06-substituted guanine derivatives, a process for their preparation and their use in treating tumour cells | |
| CA2239968C (en) | Pyrimidine derivatives and guanine derivatives, and their use in treating tumour cells | |
| US5721356A (en) | Orally active adenosine kinase inhibitors | |
| US6211158B1 (en) | Desazapurine-nucleotide derivatives, processes for the preparation thereof, pharmaceutical compositions containing them and the use thereof for nucleic acid sequencing and as antiviral agents | |
| US6069132A (en) | Phosphazole compounds | |
| US9783541B2 (en) | 5′-nucleotidase inhibitors and therapeutic uses thereof | |
| JPH08506343A (ja) | リキソフラノシル誘導体を含むアデノシンキナーゼ阻害物質 | |
| JPH11507387A (ja) | Ｃ−４’修飾アデノシンキナーゼ阻害剤 | |
| US6043228A (en) | O6 -substituted guanine derivatives, a process for their preparation and their use in treating tumor cells | |
| Kelley et al. | Synthesis and structure-activity relationships of 2-substituted-6-(dimethylamino)-9-(4-methylbenzyl)-9H-purines with antirhinovirus activity | |
| Hinshaw et al. | Pyrrolopyrimidine nucleosides. IV. The synthesis of certain 4, 5‐disubstituted‐7‐(β‐d‐ribofuranosyl) pyrrolo [2, 3‐d] pyrimidines related to the pyrrolo [2, 3‐d] pyrimidine nucleoside antibiotics | |
| Lewandowska et al. | Synthesis of 3′-azido-2′, 3′-dideoxy-5-fluorouridine phosphoramidates and evaluation of their anticancer activity | |
| EP1227103B1 (en) | Ring-expanded nucleosides and nucleotides | |
| JPS63287770A (ja) | １−〔２−（ヒドロキシメチル）シクロアルキルメチル〕−５−置換ウラシル類 | |
| Giandinoto et al. | A facile preparation of some novel class II mesoionic xanthine acyclonucleosides | |
| IES940470A2 (en) | O6-substituted guanine derivatives, a process for their preparation and their use in treating tumour cells | |
| Chu | Acyclopyrimidine C‐nucleosides. Synthesis of acyclopseudoisocytidine and its derivatives | |
| Koszytkowska-Stawińska et al. | Synthesis of aza-analogues of Ganciclovir | |
| AU646452B2 (en) | O6-benzylated guanine, guanosine and 2'-deoxyguanosine compounds possessing O6-alkylguanine-DNA alkyltransferase depleting activity | |
| JPH02502912A (ja) | 抗腫瘍性の６‐スルフェンアミド、６‐スルフィンアミドおよび６‐スルホンアミドプリン類、プリンヌクレオシド類、プリンヌクレオチド類、並びに関連化合物類 | |
| Shestakova et al. | Synthesis of acyclic nucleosides based on 1, 2, 4-triazolo [3, 2-c][1, 2, 4] triazin-7-ones | |
| Wang | Synthesis and biochemical studies of ring-expanded (''Fat'') nucleoside analogues containing the imidazo-(4, 5-e)(1, 3) diazepine ring system | |
| Robins et al. | New Inosine and Guanosine Analogs as Inhibitors of Parasitic Infections. | |
| Saheb | The Synthesis of Fluorinated Thymine Analogues as Potential Anticancer Agents |