ES2207645T3 - Sistemas de expresion de mamiferos para genes de envoltura de virus de la hepatitis c. - Google Patents
Sistemas de expresion de mamiferos para genes de envoltura de virus de la hepatitis c.Info
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Abstract
LOS SISTEMAS DE EXPRESION DE MAMIFEROS PARA LA PRODUCCION DE PROTEINAS DE FUSION DEL VCH E1-E2. TALES SISTEMAS DE EXPRESION PROPORCIONAN ALTOS RENDIMIENTOS DE LAS PROTEINAS VCH EXTRACELULARMENTE, Y PERMITEN EL DESARROLLO DEL DIAGNOSTICO, VACUNA Y REACTIVOS TERAPEUTICOS, LOS CUALES CONTIENEN ANTIGENOS ESTRUCTURALES GLICOSILADOS Y ADEMAS PERMITEN EL AISLAMIENTO DEL AGENTE ETIOLOGICO VCH.
Description
Sistemas de expresión de mamíferos para genes de
envoltura de virus de la hepatitis C.
Esta invención se refiere de manera general a
sistemas de expresión de mamífero y, más particularmente, se
refiere a sistemas de expresión de mamífero capaces de generar
proteínas de la envoltura del virus de la hepatitis C (VHC) y a la
utilización de estas proteínas. Estas proteínas de la envoltura del
VHC, denominadas E1 y E2, son fusionadas mediante la eliminación de
un sitio de corte diferente del sitio observado convencionalmente.
Estas proteínas son expresadas en medio de cultivo así como en
células de mamífero.
La hepatitis es una de las enfermedades más
importantes transmitidas desde un donante a un receptor por
transfusión de sangre o de productos sanguíneos, por trasplante de
órganos y por hemodiálisis. Se sabe actualmente que la hepatitis
vírica incluye un grupo de agentes víricos con genes víricos y un
modo de replicación del virus característicos, causando hepatitis
con diferentes grados de gravedad del daño hepático a través de
diferentes vías de transmisión. La hepatitis vírica aguda es
diagnosticada clínicamente por síntomas del paciente bien definidos
incluyendo ictericia, dolor hepático y un nivel elevado de las
transaminasas hepáticas tales como la Aspartato Transaminasa (AST)
y la Alanina Transaminasa (ALT).
Hepatitis No A No B (HNANB) es un término
utilizado por primera vez en 1975 que describía casos de hepatitis
post-transfusión que no estaba causada por el virus
de la hepatitis A ni por el virus de la hepatitis B. Feinstone y
col., New Engl. J. Med. 292:454-457 (1975).
El diagnóstico de la HNANB se realizó primariamente por medio de
exclusión sobre la base del análisis serológico para determinar la
presencia de hepatitis A y de hepatitis B. Actualmente, la HNANB es
responsable del 90% aproximadamente de los casos de hepatitis
post-transfusión. Hollinger y col. en N.R. Rose y
col., eds., Manual of Clinical Immunology, American Society
for Microbiology, Washington, D.C., 558-572
(1986).
Se ha llevado a cabo la identificación de un
supuesto agente no A no B (NANB), el virus de la hepatitis C (VHC).
Kuo y col., Science 244:359-361 (1989); Choo
y col., Science 244:362-364 (1989). El
clonaje y la secuenciación del VHC, reconocido ahora como el agente
primario de la HNANB transmitida parenteralmente, ha fomentado el
interés y los estudios sobre la epidemiología, patogénesis e
historia natural de esta enfermedad. Kuo y col., Science
244:362-364 (1989).
Se han identificado secuencias del VHC que
codifican antígenos que reaccionan inmunológicamente con
anticuerpos presentes en una mayoría de pacientes clínicamente
diagnosticados de HNANB. Sobre la base de la información disponible
y de la estructura molecular del VHC, la composición genética del
virus consta de ARN lineal de hebra sencilla (hebra positiva) de 9,5
kb aproximadamente, y de un marco de lectura abierta (ORF)
traduccional continuo que codifica una poliproteína precursora de
3000 aminoácidos aproximadamente. Esta proteína precursora
experimenta un procesamiento cotraduccional y
post-traduccional, incluyendo corte y glicosilación,
para dar las proteínas estructurales y no estructurales finales.
Houghton y col., Hepatology 14:381-388
(1991). Las proteínas estructurales son identificadas como una
proteína central y las proteínas de la envoltura altamente
glicosiladas E1 de peso molecular 33.000 y E2 de peso molecular
72.000. Hijitaka y col., Gene 88:5547-5551
(1991). La replicación del VHC ocurre poco tiempo después de la
infección del VHC en chimpancés y puede tener lugar un largo periodo
de viremia antes de la aparición de anticuerpos contra las
proteínas del VHC. Shimizu y col., Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 87:3392-6444 (1990); Farci y col., New.
Eng. J. Med. 325:98-104 (1991).
Se ha descrito también la infección por VHC en el
desarrollo de hepatitis crónica, cirrosis y HCC. Genesca y col.,
Semin. Liver Dis. 11:147-164 (1991). La falta
de una respuesta inmune humoral neutralizante eficaz hacia el VHC
puede estar relacionada con la persistencia del virus y el
desarrollo de la enfermedad. Farci y col., Science
258:135-140 (1992).
La disponibilidad de análisis de laboratorio para
el diagnóstico serológico de la infección por el virus de la
hepatitis C ha contribuido a clarificar el papel del VHC en la
etiología de la hepatitis en pacientes que han recibido sangre o
productos sanguíneos, o que han sufrido un trasplante y
experimentado hemodiálisis. La detección de anticuerpos hacia el VHC
en las muestras de los donantes elimina de un 70 a un 80% de sangre
infectada por HNANB del sistema de suministro de sangre. Sin
embargo, aunque los anticuerpos son aparentemente fácilmente
detectables durante el estado crónico de la enfermedad, solamente
el 60% de las muestras de la etapa de HNANB aguda son positivas para
anticuerpos hacia el VHC. H. Alter y col., New Eng. J. Med.
321:1994-1500 (1989).
Aunque están disponibles reactivos y métodos de
ensayo para detectar la presencia de anticuerpos hacia el VHC y/o
de ARN del VHC, algunos individuos seropositivos para anticuerpos
hacia el VHC, así como algunos individuos infectados con el virus
VHC, no son diagnosticados con VHC por estos reactivos y métodos de
ensayo disponibles. Por ejemplo, se sabe que la frecuencia de
infección por VHC es elevada en receptores de trasplante de riñón;
se hipotetiza que la replicación activa del VHC puede tener lugar
en ausencia de anticuerpos hacia el VHC detectables con los kits
actuales. Lau y col., Hepatology
18:1027-1031 (1993). Además, cuando se analizaron
originalmente donantes de sangre potenciales que tenían un elevado
riesgo de infección por VHC con ensayos de cribado serológicos
sensibles, 13 de los 19 analizados fueron detectados con esos
métodos (68%), en comparación con los 19 donantes de sangre que
dieron todos positivos para el ARN del VHC mediante la reacción en
cadena de la polimerasa (PCR). Sugitani y col., The Lancet
339:1018-1019 (1992).
Por tanto, existe la necesidad de desarrollar
reactivos de ensayo y sistemas de ensayo adicionales para
identificar la infección aguda y la viremia que pueda estar
presente, y que no son actualmente detectables por los ensayos de
cribado comercialmente disponibles. Estos reactivos y sistemas de
ensayo son necesarios para ayudar a distinguir entre aquellos
individuos con una infección aguda y persistente, en curso y/o
crónica, y aquellos individuos en los que es probable que sus
infecciones por VHC se resuelvan, y para definir el curso del
pronóstico de la infección por hepatitis NANB con el fin de
desarrollar estrategias preventivas y/o terapéuticas. Además, los
sistemas de expresión que permiten la secreción del estos antígenos
glicosilados serían de ayuda para purificar y fabricar reactivos de
diagnóstico y terapéuticos.
Esta invención proporciona nuevos sistemas de
expresión de mamífero que son capaces de generar niveles elevados
de proteínas del VHC expresadas. En particular, la invención
proporciona la construcción de proteínas de fusión que están
compuestas por la proteína precursora de amiloide (PPA) y E1 y E2
del VHC, que son útiles para producir niveles elevados de expresión
en células de mamífero. Estas construcciones pueden contener
deleciones en los genes de E1 y E2 del VHC que permitan la
producción de una proteína de fusión secretable
PPA-E1-E2 del VHC. Estos sistemas de
expresión exclusivos permiten la producción de niveles elevados de
proteínas del VHC, permitiendo el procesamiento, la glicosilación y
el plegamiento correctos de la(s) proteína(s)
vírica(s) en el sistema. En particular, la presente
invención proporciona los plásmidos pHCV176, pHCV172, pHCV351 y
pHCV425. Una pequeña deleción introducida en el gen de E1 del VHC y
fusionada a E2 del VHC truncado, produce una proteína de fusión que
no puede ser cortada en el sistema de expresión de mamífero
descrito. La proteína de fusión
PPA-E1-E2 del VHC, expresada a
partir de pHCV425 en el sistema de expresión de mamífero de la
invención, puede ser recuperada extracelularmente así como
intracelularmente.
La presente invención proporciona también un
método para detectar un antígeno del VHC o un anticuerpo hacia el
VHC en una muestra de ensayo sospechosa de contener el antígeno del
VHC o el anticuerpo hacia el VHC, en el que la mejora comprende la
puesta en contacto de la muestra de ensayo con un antígeno del VHC
glicosilado producido en un sistema de expresión de mamífero. Se
proporciona también un método para detectar un antígeno del VHC o
un anticuerpo hacia el VHC en una muestra de ensayo sospechosa de
contener un antígeno del VHC o un anticuerpo hacia el VHC, en el
que la mejora comprende la puesta en contacto de la muestra de
ensayo con un anticuerpo producido mediante la utilización de un
antígeno del VHC glicosilado generado en un sistema de expresión de
mamífero. El anticuerpo puede ser monoclonal o policlonal.
La presente invención proporciona además un kit
de ensayo para detectar la presencia de un antígeno del VHC o de un
anticuerpo hacia el VHC en una muestra de ensayo sospechosa de
contener dicho antígeno del VHC o dicho anticuerpo hacia el VHC,
que comprende un recipiente conteniendo un antígeno del VHC
glicosilado producido en un sistema de expresión de mamífero. El kit
de ensayo puede incluir también un recipiente que contenga un
anticuerpo producido mediante la utilización de un antígeno del VHC
glicosilado generado en un sistema de expresión de mamífero. El
anticuerpo proporcionado por los kits de ensayo puede ser
monoclonal o policlonal.
La Figura 1 presenta una representación
esquemática del vector de expresión de mamífero pRc/CMV.
La Figura 2 presenta una representación
esquemática de la posición de los aminoácidos de las proteínas de
fusión PPA-E2 del VHC y PPA-E1 del
VHC expresadas por los vectores de expresión de mamífero pHCV351,
pHCV172, pHCV415 y pHCV416.
La Figura 3 presenta los resultados de un ensayo
de radioinmunoprecipitación (RIPA) obtenidos para las proteínas de
fusión PPA-E1 del VHC expresadas por pHCV172,
pHCV415 y pHCV416 en células HEK-293 utilizando
sueros humanos positivos para el VHC.
La Figura 4 presenta una representación
esquemática de la posición de los aminoácidos de las proteínas de
fusión PPA-E1-E2 del VHC expresadas
por los vectores de expresión de mamífero pHCV418, pHCV419,
pHCV420, pHCV421 y pHCV422.
La Figura 5 presenta los resultados de un RIPA
obtenidos para las proteínas de fusión
PPA-E1-E2 del VHC expresadas por
pHCV418, pHCV419, pHCV420, pHCV421 y pHCV422 en células
HEK-293 utilizando sueros de pacientes humanos con
VHC.
La Figura 6 presenta una representación
esquemática de la posición de los aminoácidos de las proteínas de
fusión PPA-E1-E2 del VHC expresadas
por los vectores de expresión de mamífero pHCV423, pHCV424, pHCV425
y pHCV429.
\newpage
La Figura 7 presenta los resultados de un RIPA
obtenidos para las proteínas de fusión
PPA-E1-E2 del VHC expresadas por
pHCV423, pHCV424, pHCV425 y pHCV429 en células
HEK-293 utilizando sueros de pacientes humanos con
VHC.
La Figura 8 presenta la secuencia del VHC
esencial para el corte de E1-E2 del VHC y para el
epítopo de E1.
La presente invención proporciona modos para
producir proteínas de fusión glicosiladas de E1 y E2 o de
E1-E2 del VHC expresadas en sistemas de expresión
de mamífero. Estas proteínas glicosiladas tienen utilidad
diagnóstica en una variedad de aspectos, incluyendo por ejemplo,
sistemas de ensayo para aplicaciones de cribado y pronóstico. Estas
proteínas de la envoltura del virus VHC expresadas en células de
mamífero permiten también estudios de inhibidores que incluyen la
elucidación de sitios o secuencias específicos para la fijación del
virus y/o de receptores víricos en tipos celulares susceptibles, por
ejemplo en células hepáticas y similares.
La obtención de clones de expresión específicos
desarrollados según se describe en la presente en sistemas de
expresión de mamífero, proporciona antígenos para ensayos de
diagnóstico que pueden facilitar la determinación del estadio de la
infección por VHC, tales como, por ejemplo, infecciones agudas
frente a infecciones en curso o persistentes, y/o infecciones
recientes frente a una exposición pasada. Estos clones de expresión
específicos proporcionan también marcadores de pronóstico para
determinar la resolución de la enfermedad, tales como para
distinguir la resolución de la enfermedad de una hepatitis crónica
causada por el VHC. Se contempla que la seroconversión temprana a
antígenos estructurales glicosilados puede ser detectable mediante
la utilización de proteínas producidas en estos sistemas de
expresión de mamífero. Pueden producirse también anticuerpos,
monoclonales y policlonales, a partir de las proteínas derivadas de
estos sistemas de expresión de mamífero que a su vez pueden ser
utilizados para aplicaciones de diagnóstico, pronóstico y
terapéuticas.
Las proteínas producidas a partir de estos
sistemas de expresión de mamífero, así como los reactivos
producidos a partir de estas proteínas, pueden ser proporcionados
en forma kit con uno o más recipientes tales como viales o
botellas, conteniendo cada recipiente un reactivo separado tal como
un anticuerpo monoclonal, o un cóctel de anticuerpos monoclonales,
o un polipéptido recombinante, envasados como kits de ensayo para
facilitar la realización de los análisis. Otros aspectos de la
presente invención incluyen un polipéptido que contiene un epítopo
del VHC unido a una fase sólida y un anticuerpo hacia un epítopo
del VHC unido a una fase sólida. Están también incluidos métodos
para producir un polipéptido que contenga un epítopo del VHC
mediante la incubación de células huésped transformadas con un
vector de expresión de mamífero que comprenda una secuencia que
codifique un polipéptido que contenga un epítopo del VHC bajo
condiciones que permitan la expresión del polipéptido, y un
polipéptido que contenga un epítopo del VHC producido mediante este
método.
La presente invención proporciona ensayos que
utilizan las proteínas recombinantes proporcionadas por la
invención, así como los anticuerpos descritos en la presente en
varios formatos, cualquiera de los cuales puede emplear un
compuestos generador de una señal que produzca una señal medible en
el ensayo. Se proporcionan también ensayos que no utilizan
compuestos generadores de una señal para proporcionar un medio de
detección. Todos los ensayos descritos detectan generalmente un
antígeno o un anticuerpo, o ambos, e incluyen la mezcla de una
muestra de ensayo con al menos un reactivo proporcionado en la
presente para formar al menos un complejo antígeno/anticuerpo y la
detección de la presencia del complejo. Estos ensayos se describen
con detalle en la presente.
Están incluidas en la presente invención vacunas
para el tratamiento de la infección por VHC que comprenden un
péptido inmunogénico obtenido a partir de un sistema de expresión
de mamífero que contiene genes de la envoltura del VHC según se
describe en la presente. Está también incluido en la presente
invención un método para producir anticuerpos hacia el VHC, que
comprende la administración a un individuo de un polipéptido
inmunogénico aislado que contiene un epítopo del VHC en cantidad
suficiente para producir una respuesta inmune en el individuo
inoculado.
El término "componente corporal que contiene
anticuerpos" (o muestra de ensayo) se refiere a un componente
del organismo de un individuo que es la fuente de los anticuerpos
de interés. Estos componentes son bien conocidos en la técnica.
Estas muestras de ensayo incluyen muestras biológicas que pueden ser
analizadas por los métodos de la presente invención aquí descritos
e incluyen fluidos corporales humanos y animales tales como sangre
completa, suero, plasma, fluido cerebro espinal, orina, fluidos
linfáticos y varias secciones externas de los tractos respiratorio,
intestinal y genitourinario, lágrimas, saliva, leche, glóbulos
blancos sanguíneos, mielomas y similares, fluidos biológicos tales
como sobrenadantes de cultivos celulares, especímenes de tejido
fijados y especímenes celulares fijados.
Después de preparar las proteínas recombinantes
según está descrito por la presente invención, estas proteínas
recombinantes pueden ser utilizadas para desarrollar ensayos únicos
según se describe en la presente para detectar la presencia de un
antígeno del VHC o de un anticuerpo hacia el VHC. Estas
composiciones pueden ser utilizadas también para desarrollar
anticuerpos monoclonales y/o policlonales con una proteína
recombinante específica que se una específicamente al epítopo
inmunológico del VHC. Se contempla también que al menos una
proteína recombinante de la invención puede ser utilizada para
desarrollar vacunas siguiendo métodos conocidos en la técnica.
Típicamente, tales vacunas son preparadas como
inyectables, como soluciones o suspensiones líquidas; pueden
prepararse también formas sólidas adecuadas para la solución o
suspensión en un líquido antes de la inyección. La preparación
puede estar emulsionada, o la proteína puede estar encapsulada en
liposomas. Los ingredientes inmunogénicos activos están a menudo
mezclados con excipientes farmacológicamente aceptables que son
compatibles con el ingrediente activo. Los excipientes adecuados
incluyen, pero no están limitados a, agua, solución salina,
dextrosa, glicerol, etanol y similares; pueden utilizarse también
combinaciones de estos excipientes en varias cantidades. La vacuna
puede contener también pequeñas cantidades de sustancias auxiliares
tales como reactivos humectantes o emulsionantes, agentes
tamponantes de pH y/o adyuvantes que incrementen la eficacia de la
vacuna. Por ejemplo, tales adyuvantes pueden incluir hidróxido de
aluminio,
N-acetil-muramil-L-treonil-D-isoglutamina
(thr-DMP),
N-acetil-normuramil-L-alanil-D-isoglutamina
(CGP 11687, referido también como nor-MDP),
N-acetilmuramiul-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alanina-2-(1'2'-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)-etilamina
(CGP 19835A, referido también como MTP-PE) y RIBI
(MPL + TDM + CWS) en una emulsión de escualeno al
2%/Tween-80®. La eficacia de un adyuvante puede ser
determinada midiendo la cantidad de anticuerpos dirigidos contra un
polipéptido inmunogénico que contiene una secuencia antigénica del
VHC que resultan de la administración de este polipéptido en
vacunas que comprenden también los diferentes adyuvantes.
Las vacunas son administradas normalmente
mediante inyección intravenosa o intramuscular. Formulaciones
adicionales que son adecuadas para otros modos de administración
incluyen supositorios y, en algunos casos, formulaciones orales.
Para los supositorios, los aglutinantes y vehículos tradicionales
pueden incluir, pero no se limitan a, polialquilén glicoles o
triglicéridos. Tales supositorios pueden ser formados a partir de
mezclas que contengan el ingrediente activo en el rango de un 0,5%
aproximadamente hasta un 10% aproximadamente, preferiblemente,
desde un 1% aproximadamente hasta un 2% aproximadamente. Las
formulaciones orales incluyen excipientes normalmente empleados
tales como, por ejemplo, grados farmacéuticos de manitol, lactosa,
almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, celulosa, carbonato
de magnesio y similares. Estas composiciones pueden tener la forma
de soluciones, suspensiones, tabletas, píldoras, cápsulas,
formulaciones de liberación mantenida o polvos y contienen de un
10% aproximadamente a un 95% aproximadamente de ingrediente activo,
preferiblemente desde un 25% aproximadamente hasta un 70%
aproximadamente.
Las proteínas utilizadas en la vacuna pueden ser
formuladas en la vacuna como formas neutras o sales. Sales
farmacéuticamente aceptables tales como las sales de adición de
ácido (formadas con los grupos amino libres del péptido) y que son
formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico o
fosfórico, o con ácidos orgánicos tales como ácido acético, oxálico,
tartárico, maleico y otros conocidos por los expertos en la
técnica. Las sales formadas con los grupos carboxilo libres pueden
derivar también de bases inorgánicas tales como hidróxido de sodio,
potasio, amonio, calcio o férrico y similares, y de bases orgánicas
tales como isopropilamina, trimetilamina,
2-etilamino etanol, histidina procaína, y otras
conocidas por los expertos en la técnica.
Las vacunas son administradas de una forma
compatible con la formulación de dosificación y en cantidades tales
que sean profilácticamente y/o terapéuticamente eficaces. La
cantidad a administrar está generalmente en el rango de 5 micro
gramos aproximadamente a 250 micro gramos aproximadamente de
antígeno por dosis, y depende del sujeto a dosificar, de la
capacidad del sistema inmune del sujeto para sintetizar anticuerpos
y del grado de protección buscado. Las cantidades precisas de
ingrediente activo requeridas para ser administradas pueden
depender también de la opinión del médico y pueden ser exclusivas
para cada sujeto. La vacuna puede ser administrada en un programa de
dosis única o de múltiples dosis. Una dosis múltiple es una en la
cual un curso primario de vacunación puede ser con una a diez dosis
separadas, seguidas por otras dosis administradas a intervalos de
tiempos posteriores requeridas para mantener y/o reforzar la
respuesta inmune, por ejemplo, de uno a cuatro meses para una
segunda dosis y, si es requerido por el individuo, dosis
posterior(es) después de varios meses. El régimen de
dosificación estará también determinado, al menos en parte, por la
necesidad del individuo y dependerá del juicio del médico. Se
contempla que la vacuna que contiene el(los)
antígeno(s) inmunogénico(s) de la envoltura del VHC
puede ser administrada junto con otros agentes inmunorreguladores,
por ejemplo con inmunoglobulinas.
Se contempla que el reactivo empleado para el
ensayo puede ser proporcionado en forma de kit con uno o más
recipientes tales como viales o botellas, conteniendo cada
recipiente un reactivo separado tal como un anticuerpo monoclonal,
o un cóctel de anticuerpos monoclonales, o un polipéptido
(recombinante o sintético) empleado en el ensayo.
Las "fases sólidas" ("soportes
sólidos") son conocidas por los expertos en la técnica pero no
son críticas e incluyen las paredes de los pocillos de una placa de
reacción, tubos de ensayo, esferas de poliestireno, esferas
magnéticas o no magnéticas, tiras de nitrocelulosa, membranas, micro
partículas tales como partículas de látex, tubos de plástico, chips
de vidrio o silicona y glóbulos rojos sanguíneos de carnero son
todos ejemplos adecuados y otros. Los métodos adecuados para
inmovilizar péptidos sobre fases sólidas incluyen interacciones
iónicas, hidrofóbicas, covalentes y similares. Una "fase
sólida", según se utiliza en la presente, se refiere a cualquier
material que sea insoluble, o que puede convertirse en insoluble
mediante una reacción posterior. La fase sólida puede ser elegida
por su capacidad intrínseca para atraer e inmovilizar al reactivo
de captura. Alternativamente, la fase sólida puede retener un
receptor adicional que tenga la capacidad de atraer e inmovilizar
al reactivo de captura. El receptor adicional puede incluir una
sustancia cargada que esté cargada de manera opuesta con respecto al
propio reactivo de captura o con respecto a una sustancia cargada
conjugada al reactivo de captura. Como otra alternativa más, la
molécula de receptor puede ser cualquier miembro de unión
específica que esté unido a la fase sólida y que tenga la capacidad
de inmovilizar al reactivo de captura a través de una reacción de
unión específica. La molécula de receptor permite la unión indirecta
del reactivo de captura a un material de fase sólida antes de la
realización del ensayo o durante la realización del ensayo.
Se contempla, y está dentro del ámbito de la
invención, que la fase sólida pueda comprender también cualquier
material poroso adecuado con porosidad suficiente para permitir el
acceso a los anticuerpos de detección y una afinidad superficial
adecuada para ligar los antígenos. Se prefieren generalmente
estructuras micro porosas, pero pueden utilizarse también materiales
con estructura de gel en el estado hidratado. Tales soportes
sólidos útiles incluyen: carbohidratos poliméricos naturales y sus
derivados modificados sintéticamente, reticulados o sustituidos,
tales como agar, agarosa, ácido algínico reticulado, gomas guar
sustituidas y reticuladas, ésteres de celulosa, especialmente con
ácido nítrico y ácidos carboxílicos, ésteres de celulosa mixtos y
éteres de celulosa; polímeros naturales que contengan nitrógeno,
tales como proteínas y derivados, incluyendo gelatinas reticuladas o
modificadas; polímeros hidrocarbonados naturales tales como látex y
caucho; polímeros sintéticos que pueden ser preparados con
estructuras porosas adecuadas, tales como polímeros de vinilo,
incluyendo polietileno, polipropileno, poliestireno, cloruro de
polivinilo, acetato de polivinilo y sus derivados parcialmente
hidrolizados, poliacrilamidas, polimetacrilatos, copolímeros y
terpolímeros de los policondensados anteriores tales como
poliésteres, poliamidas y otros polímeros, tales como poliuretanos o
poliepóxidos; materiales inorgánicos porosos tales como sulfatos o
carbonatos de metales alcalinotérreos y magnesio, incluyendo
sulfato de bario, sulfato de calcio, carbonato de calcio, silicatos
de álcali y de metales alcalinotérreos, aluminio y magnesio; y
óxidos o hidratos de aluminio o silicona tales como arcillas,
alúmina, talco, caolín, zeolita, gel de sílice o vidrio (estos
materiales pueden ser utilizados como filtros con los materiales
poliméricos anteriores); y mezclas o copolímeros de las clases
anteriores, tales como copolímeros por injerto obtenidos iniciando
la polimerización de los polímeros sintéticos sobre un polímero
natural preexistente. Todos estos materiales pueden ser utilizados
en las formas adecuadas, tales como películas, láminas o placas, o
pueden ser revestidos sobre, o unidos a, o laminados en, vehículos
inertes apropiados tales como papel, vidrio, películas de plástico
o tejidos.
La estructura porosa de la nitrocelulosa tiene
excelentes cualidades de absorción y adsorción para una amplia
variedad de reactivos, incluyendo anticuerpos monoclonales. El
nailon posee también características similares y es también
adecuado. Se contempla que tales soportes sólidos porosos
anteriormente descritos en la presente están preferiblemente en
forma de láminas de un espesor de 0,01 a 0,5 mm aproximadamente,
preferiblemente de 0,1 mm aproximadamente. El tamaño de poro puede
variar dentro de amplios límites, y es preferiblemente de 0,025 a
15 \mum (micras) aproximadamente, especialmente de 0,15 a 15
\mum (micras) aproximadamente. Las superficies de tales soportes
pueden ser activadas por procesos químicos que produzcan la unión
covalente del antígeno o del anticuerpo al soporte. La unión
irreversible del antígeno o del anticuerpo se obtiene, sin embargo,
en general, por adsorción sobre el material poroso mediante fuerzas
hidrofóbicas poco conocidas.
El "reactivo indicador" comprende un
"compuesto generador de una señal" (marca) que es capaz de
generar, y genera, una señal medible detectable por medios externos
conjugada a un miembro de unión específica para el VHC. "Miembro
de unión específica", según se utiliza en la presente, significa
un miembro de un par de unión específica. Esto es, dos moléculas
diferentes donde una de las moléculas se une a la segunda molécula
específicamente por medios químicos o físicos. Además de ser un
anticuerpo miembro de un par de unión específica para el VHC, el
reactivo indicador puede ser también un miembro de cualquier par de
unión específica, incluyendo sistemas de
hapteno-anti-hapteno tales como
biotina o anti-biotina, avidina o biotina, un
carbohidrato o una lectina, una secuencia de nucleótidos
complementaria, una molécula efectora o una molécula receptora, un
cofactor enzimático y un enzima, un inhibidor enzimático o un
enzima, y similares. Un miembro de unión específica inmunorreactivo
puede ser un anticuerpo, un antígeno o un complejo
anticuerpo/antígeno que sea capaz de unirse al VHC como en un ensayo
de sándwich, al reactivo de captura como en un ensayo competitivo o
al miembro de unión específica auxiliar como en un ensayo
indirecto.
Los diferentes "compuestos generadores de
señal" (marcas) contemplados incluyen cromógenos, catalizadores
tales como enzimas, compuestos luminiscentes tales como
fluoresceína y rodamina, compuestos quimioluminiscentes tales como
compuestos de acridinio, fenantridinio y dioxetano, elementos
radioactivos y marcas visuales directas. Ejemplos de enzimas
incluyen fosfatasa alcalina, peroxidasa de rábano picante,
\beta-galactosidasa y similares. La selección de
una marca particular no es crítica, pero será capaz de producir una
señal por sí misma o en conjunción con una o más sustancias
adicionales.
Se contemplan también otras realizaciones que
utilicen otras fases sólidas diferentes y están dentro del ámbito
de esta invención. Por ejemplo, pueden emplearse de acuerdo con la
presente invención procedimientos de captura iónica para separar un
complejo de reacción inmovilizable con un polímero cargado
negativamente, descritos en la Publicación de EP Nº 0 326 100 y en
la Publicación de EP Nº 0 406 473, ambas de las cuales disfrutan de
propiedad común, para llevar a cabo una reacción inmunoquímica en
fase de solución rápida. Un complejo inmune inmovilizable es
separado del resto de la mezcla de reacción mediante interacciones
iónicas entre el polianión cargado negativamente/complejo inmune y
la matriz porosa cargada positivamente previamente tratada, y
detectado mediante la utilización de varios sistemas generadores de
señal previamente descritos, incluyendo los descritos en medidas de
señales quimioluminiscentes según se describe en la Publicación de
EPO Nº 0 273 115 que disfruta de propiedad común.
Además, los métodos de la presente invención
pueden ser adaptados para ser utilizados en sistemas que emplean la
tecnología de micro partículas, incluyendo sistemas automatizados y
semiautomatizados en los que la fase sólida comprende una micro
partícula. Tales sistemas incluyen los descritos en las solicitudes
de EPO N^{os} EP 0 425 633 y EP 0 424 634.
La utilización de microscopía con sonda de
barrido (SPM) para inmunoensayos es también una tecnología a la que
son fácilmente adaptables los anticuerpos monoclonales de la
presente invención. En la microscopía con sonda de barrido, en
particular en la microscopía de fuerza atómica, la fase de captura,
por ejemplo al menos uno de los anticuerpos monoclonales de la
invención, está adherida a una fase sólida y se utiliza un
microscopio con sonda de barrido para detectar los complejos
antígeno/anticuerpo que puedan estar presentes en la superficie de
la fase sólida. La utilización de microscopía de efecto túnel de
barrido elimina la necesidad de marcas que normalmente deben ser
utilizadas en muchos sistemas de inmunoensayo para detectar
complejos antígeno/anticuerpo.
La utilización de SPM para monitorizar reacciones
de unión específica puede tener lugar de muchas maneras. En una
realización, un miembro de una pareja de unión específica
(sustancia específica del analito que es el anticuerpo monoclonal
de la invención) es unido a una superficie adecuada para el
barrido. La fijación de la sustancia específica del analito puede
ser mediante adsorción a una pieza de ensayo que comprende una fase
sólida de una superficie de plástico o metal, siguiendo métodos
conocidos por las personas con experiencia habitual en la técnica.
O, puede utilizarse la unión covalente de una pareja de unión
específica (sustancia específica del analito) a una pieza de
ensayo, pieza de ensayo que comprende una fase sólida de plástico,
metal, silicona o vidrio derivatizados. Los métodos de unión
covalente son conocidos por los expertos en la técnica e incluyen
una variedad de medios para unir irreversiblemente parejas de unión
específica a la pieza de ensayo. Si la pieza de ensayo es silicona
o vidrio, la superficie debe ser activada antes de unir la pareja
de unión específica. Pueden utilizarse compuestos de silano activado
tales como trietoxi amino propil silano (disponible en Sigma
Chemical Co., St. Louis, MO), trietoxi vinil silano (Aldrich
Chemical Co., Milwaukee, WI) y
(3-mercapto-propil)-trimetoxi
silano (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) para introducir grupos
reactivos tales como amino, vinilo y tiol, respectivamente. Tales
superficies activadas pueden ser utilizadas para unir la pareja de
unión directamente (en los casos de amino o tiol) o puede hacerse
reaccionar posteriormente la superficie activada con adaptadores
tales como glutaraldehído, bis(succinimidil)suberato,
SPPD
(9-succinimidil-3-[2-piridilditio]propionato),
SMCC
(succinimidil-4-[N-maleimidometil]ciclohexano-1-carboxilato),
SIAB
(succinimidil-[4-yodoacetil]aminobenzoato) y
SMPB
(succinimidil-4-[1-maleimidofenil]butirato)
para separar la pareja de unión de la superficie. El grupo vinilo
puede ser oxidado para proporcionar un medio de unión covalente.
Puede ser utilizado también como un anclaje para la polimerización
de varios polímeros tales como el ácido poliacrílico, que pueden
proporcionar múltiples puntos de unión para parejas de unión
específica. La superficie amino puede hacerse reaccionar con
dextranos oxidados de diferentes pesos moleculares con el fin de
proporcionar adaptadores hidrofílicos de diferente tamaño y
capacidad. Ejemplos de dextranos oxidables incluyen Dextrano
T-40 (peso molecular 40.000), Dextrano
T-110 (peso molecular 110.000), Dextrano
T-500 (peso molecular 500.000), Dextrano
T-2M (peso molecular 2.000.000) (todos los cuales
están disponibles en Pharmacia, Piscataway, NJ) o Ficoll (peso
molecular 70.000) (disponible en Sigma Chemical Co., St. Louis, MO).
Pueden utilizarse también interacciones de polielectrolitos para
inmovilizar una pareja de unión específica sobre la superficie de
una pieza de ensayo. El método de unión preferido es por medios
covalentes. Después de la fijación de un miembro de unión
específica, la superficie puede ser tratada posteriormente con
materiales tales como suero, proteínas u otros agentes bloqueantes
para minimizar la unión no específica. La superficie puede ser
también escaneada en el lugar de fabricación o en el punto de
utilización con el fin de verificar su idoneidad para los fines del
ensayo. No se anticipa que el proceso de escaneado altere las
propiedades de unión específica de la pieza de ensayo.
Pueden utilizarse proteínas recombinantes para
detectar la presencia de anti-VHC en muestras de
ensayo. Por ejemplo, una muestra de ensayo es incubada con una fase
sólida a la que se ha unido al menos una proteína recombinante.
Éstas se hacen reaccionar durante un tiempo y bajo condiciones
suficientes para formar complejos antígeno/anticuerpo. Después de la
incubación se detecta el complejo antígeno/anticuerpo. Pueden
utilizarse reactivos indicadores para facilitar la detección,
dependiendo del sistema de ensayo elegido. En otro formato de
ensayo, una muestra de ensayo es puesta en contacto con una fase
sólida a la que se ha unido una proteína recombinante producida
según se describe en la presente, y es también puesta en contacto
con un anticuerpo monoclonal o policlonal específico para la
proteína, que ha sido marcada preferiblemente con un reactivo
indicador. Después de la incubación durante un tiempo y bajo
condiciones suficientes para que se formen complejos
anticuerpo/antígeno, la fase sólida es separada de la fase libre, y
la marca es detectada en la fase sólida o en la fase libre como una
indicación de la presencia de anticuerpos hacia el VHC. Se
contemplan otros formatos de ensayo que utilizan las proteínas de
la presente invención. Éstos incluyen la puesta en contacto de una
muestra de ensayo con una fase sólida a la que se ha unido al menos
una proteína recombinante producida en el sistema de expresión de
mamífero, la incubación de la fase sólida y la muestra de ensayo
durante un tiempo y bajo condiciones suficientes para que se formen
complejos antígeno/anticuerpo, y la puesta en contacto posterior de
la fase sólida con un antígeno recombinante marcado.
Está dentro del ámbito de la invención el que
puedan producirse anticuerpos, monoclonales y policlonales,
utilizando como inmunógenos las proteínas de fusión de la
invención. Pueden proporcionarse individualmente los anticuerpos
monoclonales o fragmentos de los mismos para detectar antígenos del
VHC. Pueden utilizarse también juntas combinaciones de los
anticuerpos monoclonales (y fragmentos de los mismos)
proporcionados en la presente como componentes de una mezcla o
"cóctel" de al menos un anticuerpo anti-VHC de
la invención con anticuerpos hacia otras regiones del VHC, teniendo
cada uno diferente especificidad de unión. Por tanto, este cóctel
puede incluir anticuerpos monoclonales que estén dirigidos hacia
proteínas de la envoltura del VHC y otros anticuerpos monoclonales
hacia otros determinantes antigénicos del genoma del VHC. Los
métodos para producir anticuerpos monoclonales o policlonales son
bien conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Kohler y Milstein,
Nature 256:494 (1975); J.G.R. Hurrel, ed., Monoclonal
Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications, CRC Press,
Inc., Boca Raton, FL (1982) y L.T. Mimms y col., Virology
176:604-619 (1990).
El anticuerpo policlonal, o el fragmento del
mismo, que puede ser utilizado en los formatos de ensayo debe
unirse específicamente a una región específica del VHC o a otras
proteínas del VHC utilizadas en el ensayo. El anticuerpo policlonal
utilizado es preferiblemente de origen mamífero; puede utilizarse un
anticuerpo policlonal anti-VHC humano, de cabra, de
conejo o de carnero. Muy preferiblemente, el anticuerpo policlonal
es un anticuerpo policlonal anti-VHC de conejo. Los
anticuerpos policlonales utilizados en los ensayos pueden ser
utilizados solos o como un cóctel de anticuerpos policlonales.
Como los cócteles utilizados en los formatos de ensayo están
compuestos por anticuerpos monoclonales o anticuerpos policlonales
con diferente especificidad por el VHC, serían útiles para
diagnóstico, evaluación y pronóstico de la infección por VHC, así
como para estudiar la diferenciación y la especificidad de las
proteínas del VHC.
En otro formato de ensayo, la presencia de un
anticuerpo hacia el VHC y/o de un antígeno del VHC puede ser
detectada en un ensayo simultáneo, según sigue. Una muestra de
ensayo es puesta en contacto simultáneamente con un reactivo de
captura de un primer analito, donde dicho reactivo de captura
comprende un primer miembro de unión específico para un primer
analito unido a una fase sólida y un reactivo de captura para un
segundo analito, donde dicho reactivo de captura comprende un
primer miembro de unión para un segundo analito unido a una segunda
fase sólida, con el fin de formar de este modo una mezcla. Esta
mezcla es incubada durante un tiempo y bajo condiciones suficientes
para formar complejos reactivo de captura/primer analito y reactivo
de captura/segundo analito. Estos complejos así formados son
puestos en contacto posteriormente con un reactivo indicador que
comprende un miembro de un par de unión específico para el primer
analito marcado con un compuesto generador de una señal y con un
reactivo indicador que comprende un miembro de un par de unión
específico para el segundo analito marcado con un compuesto
generador de una señal, con el fin de formar una segunda mezcla.
Esta segunda mezcla es incubada durante un tiempo y bajo condiciones
suficientes para formar complejos reactivo de captura/primer
analito/reactivo indicador y complejos reactivo de captura/segundo
analito/reactivo indicador. La presencia de uno o más analitos se
determina mediante la detección de una señal generada en conexión
con los complejos formados en una o en ambas fase sólidas como una
indicación de la presencia de uno o más analitos en la muestra de
ensayo. En este formato de ensayo, pueden utilizarse proteínas
derivadas de sistemas de expresión humanos así como anticuerpos
monoclonales producidos a partir de las proteínas derivadas de los
sistemas de expresión de mamífero según se describe en la
presente.
En otro método de detección más, pueden emplearse
los anticuerpos monoclonales producidos utilizando las proteínas de
fusión de la presente invención en la detección del antígenos del
VHC en secciones de tejido fijadas, así como en células fijadas,
mediante análisis inmunohistoquímico. Además, estos anticuerpos
monoclonales pueden ser unidos a matrices similares a Sefarosa
activada con CNBr y utilizados para la purificación mediante
afinidad de proteínas específicas del VHC de cultivos celulares, o
de tejidos biológicos tales como sangre e hígado. Los anticuerpos
monoclonales pueden ser utilizados además para la producción de
anticuerpos quiméricos para uso terapéutico, o para otras
aplicaciones similares.
En otro formato de ensayo alternativo, puede
emplearse uno o una combinación de uno o más anticuerpos
monoclonales producidos mediante la utilización de las proteínas de
fusión de la presente invención, como una sonda competitiva para la
detección de anticuerpos hacia proteínas del VHC. Por ejemplo,
proteínas del VHC, solas o en combinación, pueden ser revestidas
sobre una fase sólida. Una muestra de ensayo sospechosa de contener
anticuerpos hacia un antígeno del VHC es incubada posteriormente
con un reactivo indicador que comprende un compuesto generador de
una señal y al menos un anticuerpo monoclonal durante un tiempo y
bajo condiciones suficientes para que se formen complejos
antígeno/anticuerpo de la muestra de ensayo y el reactivo indicador
con la fase sólida o del reactivo indicador con la fase sólida.
Puede medirse cuantitivamente la reducción de la unión del
anticuerpo monoclonal a la fase sólida. Una reducción medible de la
señal comparada con la señal producida a partir de una muestra de
ensayo que se ha confirmado que es negativa para hepatitis NANB,
indica la presencia de anticuerpos anti-VHC en la
muestra de ensayo.
Aunque la presente invención describe la
preferencia por la utilización de fases sólidas, se contempla que
las proteínas de la presente invención pueden ser utilizadas en
sistemas de ensayo de fase no sólida. Estos sistemas de ensayo son
conocidos por los expertos en la técnica y se considera que están
dentro del ámbito de la presente invención.
La presente invención será ahora descrita por
medio de ejemplos que están destinados a ilustrar, pero no a
limitar, el espíritu y el ámbito de la invención.
Todas las construcciones de expresión de mamífero
se realizaron en el vector pRc/CMV (disponible en Invitrogen, San
Diego, CA), según se muestra en la Figura 1. Sin embargo, se
contempla que pueden utilizarse otros vectores de expresión para
esta construcción y las demás construcciones descritas en la
presente más adelante siguiendo procedimientos estándar conocidos en
la técnica.
El clon pHCV172 (SEC. ID. Nº 2) fue construido
combinando la secuencia de la proteína precursora de amiloide
(PPA), descrita previamente por Kang y col., Nature
325:733-736 (1987), en lugar de la secuencia señal
de la hormona de crecimiento humana de pHCV168 (la secuencia de
ácido nucleico de pHCV168 está presentada como SEC. ID. Nº 3, y la
secuencia de aminoácidos de pHCV168 está presentada como SEC. ID.
Nº 4) y la longitud completa de E1 del VHC, según se muestra en la
Figura 2. Un fragmento HindIII-KpnI de la secuencia
de la PPA fue subclonado inicialmente en los sitios de HindIII y
KpnI de pUC19. Un fragmento HindIII-EcoRI de este
clon fue ligado con un fragmento EcoRI-XbaI de
pHCV168 en los sitios de HindIII y XbaI de pRc/CMV, teniendo como
resultado pHCV172 (SEC. ID. Nº 2).
El clon pHCV415 (SEC. ID. Nº 5), que tiene una
deleción de la región hidrofóbica C-terminal, fue
construido según sigue: el pHCV172 (SEC. ID. Nº 2) fue digerido con
PvuII y HindIII y un fragmento que contenía PPA, y la mayor parte
de E1 fue clonado en los sitios de HindIII y XbaI de pRc/CMV, según
se muestra en la Figura 2. El clon pHCV415 (SEC. ID. Nº 5) tiene
una deleción desde el aminoácido 337 hasta el 383 de E1 del
VHC.
El clon pHCV416 (SEC. ID. Nº 6) fue derivado de
pHCV415 (SEC. ID. Nº 5) eliminando un fragmento
AcyI-AcyI que contenía la secuencia de aminoácidos
hidrofóbica interna 260 a 296 de E1, según se muestra en la Figura
2. El clon pHCV416 (SEC. ID. Nº 6) contiene la secuencia de
aminoácidos del VHC desde el aminoácido 192 hasta el 259 y desde el
297 hasta el 336 del VHC.
El clon pHCV351 (SEC. ID. Nº 7) fue derivado de
pHCV167 (la secuencia del ácido nucleico de pHCV167 está presentada
como SEC. ID. Nº 8 y la secuencia de aminoácidos del pHCV167 está
presentada como SEC. ID. Nº 9). El pHCV167 fue descrito previamente
en la Solicitud de Patente de EE.UU. Nº de Serie 08/144.099. El
pHCV351 (SEC. ID. Nº 7) fue clonado insertando un codon de
terminación después del aminoácido 654 de E2 del VHC, según se
muestra en la Figura 2. Así, este clon carece de residuos
hidrofóbicos C-terminales.
El clon pHCV418 (SEC. ID. Nº 10) fue construido
según sigue: el pHCV172 (SEC. ID. Nº 2) fue digerido con HindIII y
PvuII y se aisló un fragmento que contenía PPA y una secuencia de
E1 (desde el aminoácido 192 al 336). El clon pHCV351 (SEC. ID. Nº
7) fue también digerido con NaeI y XbaI, y se aisló un fragmento
que contenía desde el aminoácido 393 al 654 de E2. Estos fragmentos
fueron clonados entre los sitios de HindIII y XbaI de pRc/CMV, según
se muestra en la Figura 4.
El clon pHCV419 (SEC. ID. Nº 11) fue construido
eliminando una región hidrofóbica interna que residía en un
fragmento AcyI-AcyI del clon pHCV418 (SEC. ID. Nº
10), según se muestra en la Figura 4. De este modo, el pHCV419
(SEC. ID. Nº 11) contiene una secuencia de aminoácidos del VHC desde
el aminoácido 192 hasta el 259, desde el 297 hasta el 336 y desde el
393 hasta el 654.
El clon pHCV176 (SEC. ID. Nº 12) contiene 5281
pares de bases de la mitad 5' de la secuencia del VHC identificada
como SECUENCIA ID Nº 1. Brevemente, ARN aislado del suero o plasma
de un chimpancé (denominado "CO") infectado experimentalmente
con VHC fue transcrito a ADNc utilizando transcriptasa inversa,
empleando cebadores hexaméricos aleatorios o bien cebadores
antisentido específicos derivados de la secuencia del
VHC-1 prototipo. La secuencia ha sido descrita por
Choo y col. (Choo y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA
88:2451-2455 [1991], y está disponible en la base de
datos GenBank, Nº de Acceso M62321). Este ADNc fue luego
amplificado utilizando PCR y ADN polimerasa AmpliTaq®, empleando un
segundo cebador sentido situado 1000-2000
nucleótidos aproximadamente corriente arriba del cebador antisentido
específico, o bien empleando un par de cebadores sentido y
antisentido que flanquean un fragmento de 1000-2000
nucleótidos del VHC. Después de 25 a 35 ciclos de amplificación
siguiendo procedimientos estándar conocidos en la técnica, una
alícuota de esta mezcla de reacción fue sometida a PCR anidada (o
"PCR-2"), en la que se utilizó un par de
cebadores sentido y antisentido situados internamente respecto al
par original de cebadores de la PCR con el fin de amplificar
adicionalmente segmentos génicos del VHC en cantidades suficientes
para el análisis y el subclonaje, utilizando las secuencias de
reconocimiento de endonucleasas presentes en el segundo conjunto de
cebadores de la PCR. De esta manera, se generaron siete fragmentos
de ADN del VHC adyacentes que pudieron ser posteriormente
ensamblados utilizando la estrategia de clonaje genérico. Antes del
ensamblaje, se determinó la secuencia de ADN de cada uno de los
fragmentos individuales y se tradujo a las secuencias de
aminoácidos genómicas presentadas en la SECUENCIA ID. Nº 1. Dos
fragmentos (los fragmentos EcoRI-BglII de 3231 pb y
BglII-XbaI de 2050 pb) de dos clones (pHCV141 [SEC.
ID. Nº 13] y pHCV150 [SEC. ID. Nº 14]) fueron combinados para
generar pHCV176 (SEC. ID. Nº 12). Este método ha sido descrito en
U.S.S.N. 08/144.099, que se incorporó previamente a la presente por
referencia.
El clon pHCV420 (SEC. ID. Nº 15) fue construido
mediante la combinación de tres fragmentos: un fragmento
PvuI-BamHI de pHCV172 (SEC. ID. Nº 2) conteniendo
la mitad 5' del gen de resistencia a ampicilina (sitio de PvuI)
hasta PPA y E1 (sitio de BamHI), un fragmento
PvuI-SalI de pHCV351 (SEC. ID. Nº 7) conteniendo la
mitad 3' del gen de resistencia a ampicilina (sitio de PvuI) hasta
el extremo 3' de E2 (sitio de SalI) y un fragmento
BamHI-SalI de pHCV176 (SEC. ID. Nº 12) conteniendo
la mitad 3' de E1 y la mitad 5' de E2, Figura 4. De este modo, el
pHCV420 (SEC. ID. Nº 15) contiene la secuencia de aminoácidos del
VHC desde el aminoácido 192 hasta el 654.
El clon pHCV421 (SEC. ID. Nº 16) fue derivado de
pHCV420 (SEC. ID. Nº 15) mediante la eliminación de una región
hidrofóbica interna que residía en un fragmento
AcyI-AcyI, según se muestra en la Figura 4.
El clon pHCV422 (SEC. ID. Nº 17) fue derivado
ligando tres fragmentos: un fragmento HindIII-AvaII
que contenía PPA y los aminoácidos 192 a 279 de pHCV420 (SEC. ID.
Nº 15) de la secuencia de E1, un fragmento NaeI-XbaI
que contenía la secuencia de aminoácidos 393 a 654 de E2 procedente
de pHCV351 (SEC. ID. Nº 7) y un fragmento
HindIII-XbaI de pRc/CMV, según se muestra en la
Figura 4.
Los clones pHCV423 (SEC. ID. Nº 18) y pHCV424
(SEC. ID. Nº 19) fueron construidos según sigue: el pHCV421 (SEC.
ID. Nº 16) fue digerido con AvaII y NaeI para eliminar la secuencia
de aminoácidos 337 a 379 de E1 o fue digerido con PvuII y NcoI para
eliminar la secuencia de aminoácidos 337 a 363 de E1, según se
muestra en la Figura 6.
El clon pHCV425 (SEC. ID. Nº 20) fue ensamblado a
partir de tres fragmentos: un fragmento
HindIII-PvuII procedente de pHCV172 (SEC. ID. Nº 2)
que contenía PPA y E1 hasta el aminoácido 336 de la secuencia, un
fragmento NaeI-XbaI de pHCV420 (SEC. ID. Nº 15) que
contenía desde el aminoácido 380 hasta el 383 de E1 y desde el 384
hasta el 654 de E2 y un fragmento HindIII-XbaI de
pRc/CMV, según se muestra en la Figura 6. De este modo, el pHCV425
(SEC. ID. Nº 20) contiene la secuencia de aminoácidos 192 a 336 y
380 a 654 del VHC.
El clon pHCV429 (SEC. ID. Nº 21) fue generado
eliminando un fragmento que contenía la secuencia de aminoácidos
328 a 339 que residía en un fragmento AvaII-BamHI
de pHCV421 (SEC. ID. Nº 16), según se muestra en la Figura 6.
Se utilizó una línea celular primaria de Riñón
Embrionario Humano (HEK) transformada con el adenovirus humano de
tipo 5, denominada HEK-293 (disponible en la
American Type Culture Collection, Rockville, MD), para todas las
transfecciones y los análisis de expresión. Las células
HEK-293 fueron mantenidas en Medio Esencial Mínimo
(MEM) que estaba suplementado con un 10% de suero bovino fetal
(FBS), penicilina, estreptomicina y fungizona.
Se transfectaron 30 \mug aproximadamente de ADN
purificado a células HEK-293 utilizando el
protocolo del fosfato de calcio modificado según está descrito por
Chen y col., Molecular and Cellular Biology
7(8):2745-2752 (1987). La solución de
fosfato de calcio-ADN fue incubada sobre las células
HEK-293 durante 4 a 6 horas aproximadamente. Se
retiró la solución y las células fueron incubadas posteriormente en
MEM durante 24 a 48 horas adicionales. Con el fin de analizar la
expresión de proteínas, las células transfectadas fueron marcadas
metabólicamente con 100 \muCi/ml de metionina marcada con
S-35 y 100 \muCi/ml de cisteína marcada con
S-35 durante 8 a 14 horas. El medio de cultivo fue
retirado y almacenado, y las células fueron lavadas primeramente en
MEM y luego lisadas en solución salina tamponada con fosfato (PBS)
que contenía un 1% de Triton X-100® (disponible en
Sigma Chemical Co., St. Louis, MO), un 0,1% de dodecil sulfato de
sodio (SDS) y un 0,5% de desoxicolato, denominada
PBS-TDS. Estos lisados celulares se dejaron sobre
hielo durante 10 a 15 minutos y posteriormente se clarificaron por
centrifugación a 12.000 x g durante 45 minutos a 4ºC. Se llevaron a
cabo posteriormente ensayos estándar de radioinmunoprecipitación
(RIPAs) en esos lisados celulares y/o en el medio de cultivo
marcados. Brevemente, se incubaron los lisados celulares (150 Fl)
y/o el medio de cultivo marcados (400 \mul) con 3 \mul de suero
de un paciente con VHC, denominado J728, a 4ºC durante una hora. Se
añadió posteriormente Proteína-A Sefarosa, tratada
previamente con lisado de células HEK-293 frío, y
las mezclas se incubaron adicionalmente durante una hora a 4ºC con
agitación. Las muestras fueron luego centrifugadas y las pellas se
lavaron tres veces con tampón PBS-TDS. Las
proteínas recuperadas por inmunoprecipitación fueron eluidas
mediante calentamiento en un tampón de muestra para electroforesis
(Tris-HCl 50 mM, pH 6,8, ditiotreitol [DTT] 100 mM,
SDS 2%, azul bromofenol 0,1% y glicerol 10%) durante seis minutos
en agua hirviendo. Las proteínas eluidas con estándares de peso
molecular marcados con carbono-14 (obtenidos de
Amersham, Arlington Heights, IL) fueron separadas en geles de
poliacrilamida al 13,5%-SDS que fueron tratados posteriormente con
un reactivo fluorográfico tal como Enlightening® (disponible en NEN
[DuPont], Boston, MA), secados bajo vacío y expuestos a una
película de rayos x a -70ºC con pantallas intensificadoras.
La Figura 3 muestra que E1 del VHC de longitud
completa o con una deleción de la región hidrofóbica
C-terminal con PPA (pHCV172 [SEC. ID. Nº 2] o
pHCV415 [SEC. ID. Nº 5] de la Figura 2) no fue capaz de secretar su
producto. La eliminación de una región hidrofóbica interna así como
de una región hidrofóbica C-terminal no era
suficiente para secretar E1 por la secuencia señal de la PPA
(pHCV416 [SEC. ID. Nº 6] en la Figura 2). Por tanto, la fusión de
E1-E1 del VHC con construcciones de PPA fue
analizada para determinar las posibles vías para secretar E1
eficazmente. La Figura 5 muestra que E2 con una deleción
C-terminal fue capaz de secretar su producto al
medio eficazmente utilizando la secuencia señal de la PPA (pHCV351
[SEC. ID. Nº 7] en la Figura 2.
Primeramente, pHCV418 (SEC. ID. Nº 10), pHCV419
(SEC. ID. Nº 11) y pHCV422 (SEC. ID. Nº 17) (Figura 4), carentes
todos del sitio de corte de E1 y E2 del VHC en la secuencia de
aminoácidos 383/384 (Hijikata y col., Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 88:5547-5551 [1991]), fueron analizados para
determinar la secreción de la proteína de fusión
E1-E2. La Figura 5 muestra que E1-E2
podía ser expresada en el medio de cultivo así como en las células.
Además, los materiales secretados parecían estar más glicosilados
en comparación con los materiales expresados en los lisados
celulares. Un segundo grupo de construcciones (pHCV420 [SEC. ID. Nº
15] y pHCV421 [SEC. ID. Nº 16], Figura 4) no contenía ninguna
deleción en el sitio de corte de E1 y E2 en la secuencia de
aminoácidos 383/384. El RIPA de la Figura 5 muestra que E1 y E2
estaban cortadas y que solamente E2 pudo ser secretada al medio. La
Figura 5 muestra también que la expresión de E1 es mucho más eficaz
a partir de pHCV420 (SEC. ID. Nº 5) o de pHCV421 (SEC. ID. Nº 6) en
comparación con la expresión a partir de pHCV172, que no contiene
E2 en el lado 3' de E1. Se hipotetiza que estos tipos de
construcciones de fusión, E2 después de E1, pueden ser una buena
manera de incrementar los niveles de expresión y secretar E1 así
como E2 al medio.
Los clones pHCV423 (SEC. ID. Nº 18), pHCV424
(SEC. ID. Nº 19), pHCV425 (SEC. ID. Nº 20) y pHCV429 (SEC. ID. Nº
21) (Figura 6) fueron construidos para analizar la secreción de E1
así como de E2 a partir de la misma construcción, ya que contenían
el sitio de corte de E1-E2 (aminoácidos 383/384).
Fue sorprendente e inesperado el discernir que dos construcciones
(pHCV423 [SEC. ID. Nº 18] y pHCV425 [SEC. ID. Nº 20]), que
contenían el sitio de corte de E1 y E2 (4 aminoácidos en el extremo
de E1 y la misma E2 que en pHCV420), no cortaban E1 y E2, según se
muestra en la Figura 7. Sin embargo, sus productos fueron
secretados al medio como proteínas de fusión de
E1-E2 (Figura 7). La secuencia
C-terminal de E1 estaba incrementada en los clones
pHCV424 (SEC. ID. Nº 19) y pHCV429 (SEC. ID. Nº 21) en comparación
con pHCV423 (SEC. ID. Nº 18). Por tanto, se eliminaron varias
cantidades de secuencia hidrofóbica C-terminal y una
cantidad constante de secuencia hidrofóbica interna con el fin de
analizar la secreción de E1 y E2 a partir de una misma construcción.
La Figura 7 muestra que los 20 aminoácidos en el extremo de E1 con
E2 producían el corte parcial de E1 y E2. Sin embargo, una
secuencia de 44 aminoácidos (pHCV429 [SEC. ID. Nº 21]) producía el
corte completo de E1 y E2, estimado a partir de la movilidad de E2
en un gel. Aunque E1 expresada a partir de pHCV429 (SEC. ID. Nº 21)
era fácilmente detectada en el lisado celular, la E1 expresada a
partir de pHCV424 (SEC. ID. Nº 19) no fue nunca detectada ni en el
lisado celular ni en el medio. Además, la E1 no fue nunca secretada
a partir de ninguna de las construcciones analizadas en la serie de
clones descrita en la presente. Estos datos demuestran que la
secuencia de aminoácidos 340 a 363 del VHC contiene el epítopo de
E1. Por tanto, no se esperaba que el antígeno E1 del VHC pudiera
ser secretado en un sistema de expresión de mamífero. El clon
pHCV425 (SEC. ID. Nº 20) que contenía la deleción más pequeña en el
extremo C-terminal de E1 (la secuencia mostrada en
la Figura 8 y presentada como SEC. ID. Nº 22) y el sitio de corte
propuesto (aminoácidos 383/384) de E1-E2, secreta
E1 y E2 como una proteína de fusión que consta de la secuencia de
aminoácidos del VHC desde el aminoácido 192 hasta el 336 y desde el
aminoácido 383 hasta el 654.
Los clones pHCV172 (SEC. ID. Nº 2), pHCV176 (SEC.
ID. Nº 12), pHCV351 (SEC. ID. Nº 7) y pHCV425 (SEC. ID. Nº 20) han
sido depositados en la American Type Culture Collection, 12301
Parklawn Drive, Rockville, Maryland, 20852, el 14 de Enero de 1994
bajo los términos del Tratado de Budapest, y se les otorgaron los
Números de Denominación de la ATCC siguientes: al clon pHCV172 se
le otorgó el número de depósito de la ATCC 69533, al clon pHCV176 se
le otorgó el número de depósito de la ATCC 69534, al clon pHCV351
se le otorgó el número de depósito de la ATCC 69535 y al clon
pHCV425 se le otorgó el número de depósito de la ATCC 69536. Los
depósitos señalados serán mantenidos durante un periodo de treinta
(30) años desde la fecha de depósito, o durante cinco (5) años
después de la última solicitud del depósito; o durante la vida
efectiva de la patente de EE.UU., cualquiera que sea su duración.
Estos depósitos y otros materiales depositados aquí mencionados
pretenden ser solamente de utilidad, y no se requieren para
practicar la invención a la vista de las descripciones de la
presente.
Otras variaciones de las aplicaciones de la
utilización de las proteínas y de los sistemas de expresión de
mamífero aquí proporcionados serán obvias para las personas
expertas en la técnica. Por consiguiente, se pretende que la
invención esté limitada solamente de acuerdo con las
reivindicaciones adjuntas.
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE: ABBOTT LABORATORIES
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: SISTEMAS DE EXPRESIÓN DE MAMÍFERO PARA GENES DE LA ENVOLTURA DEL VHC
\vskip0.666000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 22
\vskip0.666000\baselineskip
- (iv)
- DIRECCIÓN PARA CORRESPONDENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- DESTINATARIO: MODIANO JOSIF PISANTY & STAUB
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- CALLE: Baaderstr. 3
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: MUNICH
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- ESTADO:
\vskip0.333000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Alemania
\vskip0.333000\baselineskip
- (F)
- ZIP: 80469
\vskip0.666000\baselineskip
- (v)
- FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: Disco magnético flexible
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- PROGRAMA: PatentIn Release #1.0, Versión #1.25
\vskip0.666000\baselineskip
- (vi)
- DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: 95908700.8
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE REGISTRO: 27 de Enero de 1995
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- CLASIFICACIÓN: C12N 15/51, 15/62, G01N 33/576, A61K 39/29
\vskip0.666000\baselineskip
- (viii)
- INFORMACIÓN SOBRE EL REPRESENTANTE/AGENTE:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: MODIANO Guido y col.
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- NÚMERO DE REGISTRO:
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE REFERENCIA/EXPEDIENTE: 699/GM/ms
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- INFORMACIÓN PARA TELECOMUNICACIÓN:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- TELÉFONO: (00392) 86 92 442
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TELEFAX: (00392) 863 860 - (004989) 225 809
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:1:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 3011 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:1:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:2:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 221 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:2:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:3:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4810 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: circular
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 2227..2910
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:3:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:4:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 228 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:4:
\newpage
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:5:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 127 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:5:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:6:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 135 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:6:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:7:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 337 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:7:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:8:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 7106 pares de bases
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: circular
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.666000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 922..2022
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:8:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:9:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 367 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:9: (pHCV167)
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:10:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 434 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:10:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:11:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 397 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:11:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:12:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1648 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:12:
\newpage
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:13:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 967 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:13:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:14:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 687 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:14:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:15:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 490 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:15: (pHCV420)
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:16:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 453 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:16:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:17:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 377 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:17:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:18:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 410 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:18:
\newpage
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:19:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 417 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:19:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:20:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 447 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:20:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:21:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 441 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:21:
\vskip0.666000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID Nº:22:
\vskip0.666000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.333000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 43 aminoácidos
\vskip0.333000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.333000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.333000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.666000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.666000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID Nº:22:
Claims (12)
1. El plásmido pHCV176 (depositado como ATCC
69534 en E. coli).
2. El plásmido pHCV172 (depositado como ATCC
69533 en E. coli).
3. El plásmido pHCV351 (depositado como ATCC
69535 en E. coli).
4. El plásmido pHCV425 (depositado como ATCC
69536 en E. coli).
5. Una proteína de fusión PPA-E1
del VHC expresada por el vector de expresión de mamífero pHCV172
(depositado como ATCC 69533 en E. coli).
6. Una proteína de fusión PPA-E2
del VHC expresada por el vector de expresión de mamífero pHCV351
(depositado como ATCC 69535 en E. coli).
7. Una proteína de fusión
PPA-E1-E2 del VHC expresada por el
vector de expresión de mamífero pHCV425 (depositado como ATCC 69536
en E. coli).
8. Un método para detectar un antígeno del VHC o
un anticuerpo hacia el VHC en una muestra de ensayo sospechosa de
contener el antígeno del VHC o el anticuerpo hacia el VHC, que
comprende la etapa de poner en contacto la muestra de ensayo con
una proteína de fusión de un antígeno de la envoltura del VHC
glicosilada expresada por los vectores seleccionados del grupo que
consta de pHCV172, pHCV351 y pHCV425 según se definieron en las
reivindicaciones 2-4, y en el que dicha proteína de
fusión es producida en un sistema de expresión de mamífero.
9. Un método para detectar un antígeno del VHC o
un anticuerpo hacia el VHC en una muestra de ensayo sospechosa de
contener el antígeno del VHC o el anticuerpo hacia el VHC, que
comprende la etapa de poner en contacto la muestra de ensayo con un
anticuerpo producido mediante la utilización de una proteína de
fusión de un antígeno de la envoltura del VHC glicosilada expresada
por los vectores seleccionados del grupo que consta de pHCV172,
pHCV351 y pHCV425 según se definieron en las reivindicaciones
2-4, y en el que dicha proteína de fusión es
producida en un sistema de expresión de mamífero.
10. Un kit de ensayo para detectar la presencia
de un antígeno del VHC o de un anticuerpo hacia el VHC en una
muestra de ensayo sospechosa de contener dicho antígeno del VHC o
dicho anticuerpo hacia el VHC, que comprende:
un recipiente conteniendo una proteína de fusión
de un antígeno de la envoltura del VHC glicosilada expresada por
los vectores seleccionados del grupo que consta de pHCV172, pHCV351
y pHCV425 según se definieron en las reivindicaciones
2-4, y en el que dicha proteína de fusión es
producida en un sistema de expresión de mamífero.
11. El kit de ensayo de la reivindicación 10, que
comprende además un recipiente conteniendo un anticuerpo producido
mediante la utilización de una proteína de fusión de un antígeno de
la envoltura del VHC glicosilada expresada por los vectores
seleccionados del grupo que consta de pHCV172, pHCV351 y pHCV425
según se definieron en las reivindicaciones 2-4, y
en el que dicha proteína de fusión es producida en un sistema de
expresión de mamífero.
12. Un kit de ensayo para detectar la presencia
de un antígeno del VHC o de un anticuerpo hacia el VHC en una
muestra de ensayo sospechosa de contener dicho antígeno del VHC o
dicho anticuerpo hacia el VHC, que comprende un recipiente
conteniendo un anticuerpo producido mediante la utilización de una
proteína de fusión de un antígeno de la envoltura del VHC
glicosilada expresada por los vectores seleccionados del grupo que
consta de pHCV172, pHCV351 y pHCV425 según se definieron en las
reivindicaciones 2-4, y en el que dicha proteína de
fusión es producida en un sistema de expresión de mamífero.
Applications Claiming Priority (2)
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|---|---|---|---|
| US188281 | 1994-01-28 | ||
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Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040185061A1 (en) * | 1994-07-29 | 2004-09-23 | Innogenetics N.V. | Redox reversible HCV proteins with native-like conformation |
| ES2174957T5 (es) * | 1994-07-29 | 2006-12-16 | Innogenetics N.V. | Proteinas purificadas de envoltura de virus de la hepatitis c para uso diagnostico y terapeutico. |
| WO1996041196A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Abbott Laboratories | Method for detection of antibody to hepatitis c virus second envelope glycoprotein |
| WO1997047358A1 (en) * | 1996-06-11 | 1997-12-18 | Merck & Co., Inc. | Synthetic hepatitis c genes |
| US20050074752A1 (en) * | 1996-06-11 | 2005-04-07 | Merck & Co., Inc. | Synthetic hepatitis C genes |
| EP0947525A1 (en) * | 1998-03-27 | 1999-10-06 | Innogenetics N.V. | Epitopes in viral envelope proteins and specific antibodies directed against these epitopes: use for detection of HCV viral antigen in host tissue |
| AU4335099A (en) * | 1998-06-18 | 2000-01-05 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Surface targeted expression of a modified hepatitis c virus envelope protein |
| US7108855B2 (en) * | 1998-06-24 | 2006-09-19 | Innogenetics N.V. | Purified hepatitis C virus envelope proteins for diagnostic and therapeutic use |
| AU1236801A (en) * | 1999-10-27 | 2001-05-08 | Chiron Corporation | Activation of hcv-specific t cells |
| US7101561B2 (en) | 2000-12-01 | 2006-09-05 | Innogenetics N.V. | Purified hepatitis C virus envelope proteins for diagnostic and therapeutic use |
| US20030215896A1 (en) * | 2001-04-25 | 2003-11-20 | Yueming Li | Gamma secretase substrates and in vitro assays |
| WO2002090572A2 (en) * | 2001-05-09 | 2002-11-14 | Third Wave Technologies, Inc. | Nucleic acid detection in pooled samples |
| WO2003008541A2 (en) * | 2001-07-16 | 2003-01-30 | Eli Lilly And Company | Extracellular junctional adhesion molecules |
| JP5250179B2 (ja) * | 2002-11-08 | 2013-07-31 | ザ アドミニストレイターズ オブ ザ テューレイン エデュケイショナル ファンド | フラビウイルス融合インヒビター |
| EP2460533A3 (en) | 2004-10-18 | 2014-01-08 | Globeimmune, Inc. | Yeast-based therapeutic for chronic hepatitis C infection |
| AU2015234338C1 (en) * | 2006-07-28 | 2017-07-20 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Improved vaccines and methods for using the same |
| WO2009034190A2 (en) * | 2007-09-14 | 2009-03-19 | Genimmune N.V. | Affinity tag |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5523215A (en) * | 1985-03-28 | 1996-06-04 | Chiron Corporation | Enhanced purification and expression of insoluble recombinant proteins |
| GB2212511B (en) * | 1987-11-18 | 1992-01-22 | Chiron Corp | Hepatitis c virus |
| JPH02500880A (ja) * | 1987-11-18 | 1990-03-29 | カイロン コーポレイション | Ｎａｎｂｖの診断用薬およびワクチン |
| US5350671A (en) * | 1987-11-18 | 1994-09-27 | Chiron Corporation | HCV immunoassays employing C domain antigens |
| KR0185373B1 (ko) * | 1989-03-17 | 1999-05-01 | 로버트 피. 블랙버언 | Hcv 폴리단백질에서 유래되는 hcv 아미노산 서열 부분을 포함하는 폴리펩티드 및 그 사용 |
| US5106726A (en) * | 1990-02-16 | 1992-04-21 | United Biomedical, Inc. | Synthetic peptides specific for the detection of antibodies to HCV |
| SK286106B6 (sk) * | 1990-11-08 | 2008-03-05 | Novartis Vaccines & Diagnostics, Inc. | Spôsob vykonávania imunodiagnostickej skúšky na detekciu protilátky proti vírusu hepatitídy C |
| AU2513592A (en) * | 1991-08-21 | 1993-03-16 | Abbott Laboratories | Hepatitis c assay utilizing recombinant antigens to ns1 |
| JP3439209B2 (ja) * | 1992-01-31 | 2003-08-25 | アボツト・ラボラトリーズ | Ｈｃｖ蛋白のための哺乳動物発現システム |
| JPH05344899A (ja) * | 1992-06-11 | 1993-12-27 | Kokuritsu Yobou Eisei Kenkyusho | Ｃ型肝炎ウイルス外被タンパク質の産生法 |
-
1994
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-
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