ES2208330T3

ES2208330T3 - Composiciones para modular la respuesta nmune y para el tratamiento de la enfermedad inflamatoria.

Info

Publication number: ES2208330T3
Application number: ES00932513T
Authority: ES
Inventors: Roger V. Kendall; John Lawson
Original assignee: FoodScience Corp
Current assignee: FoodScience Corp
Priority date: 1999-05-21
Filing date: 2000-05-18
Publication date: 2004-06-16
Anticipated expiration: 2020-05-18
Also published as: MXPA01011924A; EP1183037A2; AU5022300A; US7229646B2; WO2000071140A2; ATE251910T1; US20020018787A1; DE60005947T2; DK1183037T3; WO2000071140A3; US20030180288A1; CA2381441A1; DE60005947D1; EP1183037B1; JP2003500362A; AU777971B2

Abstract

Uso de un componente de N, N-dimetilglicina (DMG) y al menos un componente de extracto de Perna canaliculus (PCE) terapéuticamente activo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedad inflamatoria.

Description

Composiciones para modular la respuesta inmune y para el tratamiento de la enfermedad inflamatoria.

Antecedentes de la invención

Esta invención se refiere al uso de N,N-dimetilglicina (DMG) en combinación con al menos un componente derivado de Perna canaliculus para la fabricación de un medicamento que modula las respuestas inmunes para tratar enfermedades inflamatorias en el hombre o en los animales.

La N,N-dimetilglicina (DMG), que es un aminoácido terciario, es un metabolito intermedio encontrado en niveles bajos en muchos alimentos. Es producida en el cuerpo a partir de colina, y se ha usado como un nutriente no combustible. Los efectos fisiológico y terapéutico potencial de la N,N-dimetilglicina se han evaluado en años recientes. Las referencias en la bibliografía pertenecientes a N,N-dimetilglicina y sus usos potenciales incluyen las siguientes: Graber et al., 1981, J. of Infectious Diseases 143:101-105 (estimulación mediante DMG de la inmunidad tanto humoral como celular); Kendall y Graber, Patente de EE.UU. nº 4.385.068 (trata del alivio con DMG de los efectos de un exceso de radiación sobre el sistema inmune); la 1980 Pacific Slope Biochemical Conference, un documento titulado "Decrease of Lactic Acid Concentration in Blood of Animals Given N,N-Dimethylglycine"; el número de Marzo de 1982 de Equine Practice, un artículo titulado "Effect of a Nutritional Supplement Containing N,N-Dimethylglucine (DMG) on the Racing Standardbred" (DMG aumentó la utilización de oxígeno, y de ese modo disminuyó los niveles de ácido láctico en animales bajo estrés extremo); el número de Noviembre-Diciembre 1982 de Canine Practice, un artículo titulado "A Clinical Evaluation of N,N-Dimethylglycine (DMG) and Diisopropylammonium Dichloroacetate (DIPA) on the Performance of Racing Greyhounds"; el número de Febrero de 1987 de la revista Let's Live, un artículo titulado "Dimethylglycine Update, New Studies Confirm DMG Improves Health" (DMG como agente inmunomodulador); el número de Febrero de 1987 de Health Consciousness, un artículo titulado "N,N-Dimethylglycine and the Immune Response" (DMG como un agente inmunomodulador); 1987 ASM Annual Meeting, un documento titulado "The Effect of DMG on the Immune Response of Rabbits" (DMG como un agente inmunomodulador); el número de Junio 27, 1987 de The Blood Horse, un documento titulado "DMG, Properties and Proprieties" (en seres humanos, la DMG estimuló a las células B a que produjeran un mayor número de respuestas a anticuerpos, y DMG potenció la actividad de células T y macrófagos); Kendall et al., Patente de EE.UU. nº 4.994.492 (tratamiento de melanoma usando DMG); Kendall y Lawson, Patente de EE.UU. nº 5.026.728 (tratamiento de artritis e inflamación usando DMG); Kendall y Lawson, Patente de EE.UU. nº 5.118.618 (uso de DMG para potenciar la producción de anticuerpos).

El uso de preparaciones obtenidas a partir de Perna canaliculus para el efecto terapéutico se extiende al menos veinticinco años atrás desde la mitad de la década de los setenta. Las propiedades nutricionales y terapéuticas de Perna canaliculus liofilizada aliviando los síntomas de artritis fueron dadas a conocer en Croft, 1979, Relief From Arthritis (Thorsons Publishing Group. Rochester, Vermont). Los estudios en experimentos tanto en animales como en seres humanos han dado resultados mixtos, pero indican en su conjunto que ciertos componentes en los mejillones fueron potencialmente útiles aliviando la inflamación y el dolor asociados con la artritis. Algunos de estos estudios son los siguientes: McFarlane, Junio 1975, New Zealand Medical Journal, pág. 569 (se dieron a conocer los resultados de un estudio de los efectos de un producto de Perna canaliculus denominado "Seatone" sobre un pequeño grupo de individuos artríticos); Rainsford y Whitehouse, 1980, Arzeim-Forsch, págs. 2128-2131 (una preparación en polvo liofilizada de mejillón entero que se suministró oralmente a ratas mostró cierta actividad antiinflamatoria modesta en un modelo de artritis reumatoide inducida); Miller y Ormrod, 1980, The New Zealand Medical Journal 92:187 (una fracción bruta de Perna canaliculus tuvo un efecto antiinflamatorio notable cuando se administró mediante inyección intraperitoneal en ratas); Couch et al., 1982, The New Zealand Medical Journal 95:803 (una fracción de Perna canaliculus, que contiene proteína, tuvo un efecto antiinflamatorio); Caughey et al., 1983, European Journal of Rheumatology and Inflammation 6:197 (en un estudio en seres humanos que implica a cuarenta y siete pacientes con artritis reumatoide, no se observó mejora en pacientes a los que se les suministró extracto de mejillón, comparado con pacientes que toman el fármaco antiinflamatorio naproxeno); Gibson et al., 1980 Practitioner 224:955, 93:111 (en ensayos en seres humanos, tanto para artritis reumatoide como osteoartritis, se lograron beneficios significativos después de tres meses con una preparación de Perna canaliculus, incluyendo reducción del dolor y rigidez, y mejora en los ensayos funcionales); Audeval y Bouchart, 1986, Gazette Medicale 93:111 (en ensayos con seres humanos para osteoartritis, el cuarenta por ciento de los sujetos mostró una mejora significativa después de un tratamiento con una preparación de Perna canaliculus); Miller et al., 1993, Agents Actions 38:139 (una fracción acuosa de Perna canaliculus inhibió la inflamación inducida experimentalmente, en ratas); Whitehouse et al., 1997, Inflammopharmacology (un extracto lipídico de Perna canaliculus mostró una actividad antiinflamatoria relacionada con la dosis).

Sumario de la invención

Según esta invención, se ha descubierto que una combinación de N,N-dimetilglicina (DMG) y un componente derivado de Perna canaliculus (denominado aquí como extracto de Perna canaliculus (PCE)), tiene un efecto sinérgico en el tratamiento de la enfermedad inflamatoria. En particular, se ha descubierto que la combinación tiene un efecto sinérgico en el tratamiento de la enfermedad autoinmune, incluyendo lupus eritematoso, y en la modulación de respuestas inmunes a enfermedad inflamatoria. También, según esta invención, se ha descubierto que los perfiles aberrantes de respuesta inmune en seres humanos con artritis reumatoide u osteoartritis se pueden alterar beneficiosamente por la administración de una combinación de DMG y PCE.

Tratamiento, como se usa en este documento, se refiere a la administración terapéutica de los compuestos de la invención para la prevención, mejora o cura de la enfermedad.

Las enfermedades inflamatorias que se pueden tratar según esta invención incluyen enfermedades autoinmunes sistémicas tales como, por ejemplo, lupus eritematoso, artritis reumatoide, y esclerosis múltiple, y enfermedades autoinmunes específicas de órganos tales como, por ejemplo, miastenia grave, enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de Crohn, anemias hemolíticas autoinmunes, diabetes mellitus dependiente de insulina, glomerulonefritis, y fiebre reumática. Otras enfermedades inflamatorias que se pueden tratar según esta invención incluyen otros estados artríticos inflamatorios tales como osteoartritis y artritis gotosa, así como otros estados inflamatorios tales como conjuntivitis, dermatitis, bronquitis, rinitis, etc., provocados por lesión, alergias, infecciones, microorganismos, trauma, o agentes físicos o químicos. Adicionalmente, también se contempla como parte de esta invención el tratamiento de aspectos inflamatorios del asma.

Un aspecto de la invención es una composición que comprende una combinación de un componente de DMG y al menos un componente de PCE. El componente de PCE puede ser cualquier componente terapéuticamente activo derivado de la parte comestible del mejillón o sus órganos, que son adecuados para uso en la preparación de suplementos alimentarios o preparaciones farmacéuticas. La invención contempla el uso de componentes sin refinar del mejillón, tales como el mejillón entero, o cualquiera de los extractos terapéuticamente activos del mismo. Como se usa en este documento, un componente de PCE terapéuticamente activo según esta invención es un componente que es efectivo reduciendo la inflamación en animales o en seres humanos, o que tiene efectos inmunomoduladores en seres humanos o en animales. Por ejemplo, se pueden usar varios modelos animales para artritis, que son bien conocidos en la técnica, para determinar la actividad terapéutica de un componente de PCE. Tales modelos incluyen, por ejemplo, artritis inducida por colágeno en ratas o ratones, edema inflamatorio inducido por carragenano en ratas como se describe en Miller et al., 1980, New Zealand Medical Journal 92:667, y artritis inducida en ratas y ratones por inyección de adyuvantes preparados a partir de Mycobacterium tuberculosis seco como se describe en Whitehouse et al., 1997, Inflammopharmacology 5:237-246. La actividad terapéutica de un componente de PCE también se puede determinar evaluando si el componente de PCE es efectivo reduciendo anticuerpos antinucleares, particularmente anticuerpos anti-ADNss o anticuerpos anti-ADNds, en seres humanos con SLE o en el modelo de ratón para SLE, como se describe en los ejemplos. En particular, el PCE puede ser una preparación de mejillón entero que se ha liofilizado y molido tal como, por ejemplo, el producto Sea Mussel disponible de FoodScience Corporation, Essex Junction, Vermont, o el producto Perna disponible de Da Vinci Laboratories, Essex Junction, Vermont. Adicionalmente, también se pueden emplear extractos terapéuticamente activos de Perna canaliculus. Tales extractos terapéuticamente activos se han descrito según lo siguiente: Macrides y Kalafatis, documento PCT/AU95/00485, WO 96/05164 (un extracto lipídico purificado); Whitehouse et al., 1997, Inflammopharmacology 5:237-246 (un extracto lipídico purificado); Kosuge y Sugiyama, Patente de EE.UU. nº 4.801.453 (extracto de mejillón estabilizado); Couch et al., 1982, The New Zealand Medical Journal 95:803 (una fracción proteínica); Miller et al., 1983, Agents Actions 38:139 (una fracción acuosa).

El componente de DMG puede ser N,N-dimetilglicina o una sal farmacológicamente aceptable de la misma. Una composición que contiene tanto DMG como PCE se puede formular como un suplemento farmacéutico o dietético usando técnicas que son bien conocidas en la técnica. Una formulación preferida de la composición es una formulación para la administración oral.

Otro aspecto de esta invención es el uso de un componente de DMG y al menos un componente de PCE terapéuticamente activo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria, que comprende administrar a un animal una combinación tanto de un componente de DMG como de al menos un componente de PCE. Como se usa en este documento, el término animal incluye pero no se limita a mamíferos. Los mamíferos preferidos incluyen seres humanos, caballos, animales de granja y mascotas domésticas. Los componentes de DMG y PCE se pueden administrar mediante la misma vía, o se pueden administrar mediante vías diferentes. Por ejemplo, la DMG y el PCE se pueden administrar ambos oralmente, bien simultáneamente o bien en diferentes momentos. Una vía preferida para la administración de PCE, particularmente mejillón entero molido, es mediante la administración oral. Una vía preferida para la administración de DMG es mediante la administración oral, particularmente como una mezcla con agua. La DMG o el PCE también se pueden administrar mediante inyección intramuscular, inyección intraperitoneal, administración parenteral, etc.

La DMG y el PCE usados en esta invención se pueden emplear en mezcla con excipientes convencionales, es decir sustancias vehículo orgánicas o inorgánicas farmacéuticamente aceptables adecuadas para aplicación parenteral, entérica (por ejemplo, oral), que no afecten de forma perjudicial al compuesto activo. Los vehículos farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen pero no se limitan a agua, disoluciones salinas, alcoholes, goma arábiga, aceites vegetales, alcoholes bencílicos, polietilenglicoles, gelatina, hidratos de carbono tales como lactosa, amilosa o almidón, estearato de magnesio, talco, ácido silícico, parafina viscosa, aceite de perfume, monoglicéridos y diglicéridos de ácidos grasos, ésteres de ácido graso con pentaeritritol, hidroximetilcelulosa, polivinilpirrolidona, etc. Las preparaciones farmacéuticas se pueden esterilizar y, si se desea, mezclar con agentes auxiliares tales como, por ejemplo, lubricantes, conservantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, sales para influir en la presión osmótica, tampones, agentes colorantes, agentes saborizantes y/o sustancias aromáticas, y similares, que no afecten de forma perjudicial al compuesto activo. Otros vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen disoluciones acuosas, excipientes no tóxicos, que incluyen sales, conservantes, tampones, y similares, según se describe, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª ed. (1990), Mack Publishing Co., Easton, PA, cuyos contenidos se incorporan aquí como referencia. El pH y la concentración exacta de los diversos componentes de la composición farmacéutica se ajustan según la experiencia normal en la técnica. Véase Gilman et al. (eds.) (1990) Goodman and Gilman's: The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8ª ed., Pergamon Press. La DMG y/o PCE también se pueden combinar, cuando se desee, con otros agentes activos, incluyendo PCE o DMG,
respectivamente.

Las composiciones farmacéuticas se preparan preferiblemente y se pueden administrar en unidades de dosificación. Las unidades de dosificación sólidas son comprimidos, cápsulas y supositorios. Para el tratamiento del sujeto, dependiendo de la actividad del compuesto, de la manera de administración, de la naturaleza y gravedad del trastorno, de la edad y peso corporal del paciente, son necesarias dosis diarias diferentes. En ciertas circunstancias, sin embargo, pueden ser apropiadas dosis diarias mayores o menores. La dosis diaria media de los compuestos de esta invención, cuando se usan para tratar una enfermedad inflamatoria o para modular la respuesta inmune, son típicamente las siguientes: para DMG, la dosis diaria media es generalmente de alrededor de 1 a alrededor de 500 mg/kg/día, preferiblemente alrededor de 10 a alrededor de 100 mg/kg/día, más preferiblemente alrededor de 2 a alrededor de 30 mg/kg/día; para PCE, cuando el PCE comprende mejillón entero molido, la dosis diaria media es generalmente alrededor de 1 a alrededor de 500 mg/kg/día, preferiblemente alrededor de 10 a alrededor de 100 mg/kg/día, más preferiblemente alrededor de 20 a alrededor de 60 mg/kg/día. Para los componentes de PCE distintos de mejillón entero molido, la dosis diaria media puede variar, pero se puede determinar fácilmente por el experto en la técnica. La dosis diaria se puede administrar como una sola dosis por día, o como una pluralidad de dosis divididas por día. La dosis diaria también se puede administrar en una base no diaria, tal como, por ejemplo, cada segundo o tercer día, con tal de que se logre una dosis diaria media como se describe anteriormente.

La combinación de PCE y DMG se puede administrar concurrente o alternativamente con otros tratamientos terapéuticos empleados convencionalmente para tratar la enfermedad inflamatoria. Por ejemplo, para el tratamiento de lupus eritematoso, artritis reumatoide, y osteoartritis, el PCE y la DMG se pueden administrar en combinación con agentes antiinflamatorios, que incluyen tanto agentes corticosteroides tales como, por ejemplo, prednisona o metilprednisolona, como agentes antiinflamatorios no esteroideos, tales como, por ejemplo, salicilatos e ibuprofeno. Para el tratamiento de lupus eritematoso, por ejemplo, los compuestos de esta invención también se pueden administrar en combinación con fármacos contra la malaria, que incluyen, por ejemplo, hidroxicloroquinona, o en combinación con quimioterapias citotóxicas, que incluyen, por ejemplo, azatioprina y ciclofosfamida.

Otro aspecto de esta invención es el uso de un componente de DMG y al menos un componente de PCE terapéuticamente activo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de lupus eritematoso sistémico, que comprende administrar una combinación de DMG y PCE. En una realización preferida, la administración de la combinación reduce la concentración en suero de anticuerpos antinucleares tales como, por ejemplo, anticuerpos antinucleares que se unen a cromatina, nucleosomas, complejos de histona/ADN, histonas, ADN de doble hebra (ADNds), ADN de una sola hebra (ADNss), ARN de doble hebra (ARNds), ARN de una sola hebra (ARNss), y ARN de transferencia (ARNt). Preferiblemente, se reduce la concentración en suero de anticuerpos anti-ADNss y/o anti-ADNds.

Se logran los siguientes efectos sobre la respuesta inmune, o cualquier combinación de los mismos: una disminución en los niveles del suero de interleuquina 6 (il- 6), una disminución en los niveles del suero de interleuquina 10 (il-10), un aumento en los niveles del suero del factor \alpha de necrosis tumoral (TNF-\alpha), o una disminución en la concentración de linfocitos CD8^{+} en la sangre. Estos efectos contrarrestan típicamente perfiles aberrantes inmunes observados en la enfermedad inflamatoria. Un efecto preferido es una disminución en los niveles del suero de il-10 o una disminución en los linfocitos CD8^{+} en la sangre.

Otro aspecto de esta invención es un kit que contiene una combinación de formulaciones de DMG y PCE, en el que la formulación de PCE comprende al menos un componente de PCE terapéuticamente activo. Se prefiere particularmente un kit que contiene tanto formulaciones de DMG como de PCE, que sean útiles para la administración oral, preferiblemente como suplementos dietéticos. Un kit proporcionaría típicamente una dosis diaria media de PCE o DMG como se describe anteriormente.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 es una gráfica que muestra las comparaciones de ganancia de peso para ratones de control y para ratones tratados con DMG, PCE, o una combinación de DMG y PCE.

La Figura 2 es una gráfica que compara concentraciones de citoquinas, incluyendo il-4, il-6, il-10, y TNF-\alpha, en ratones de control y en ratones tratados con DMG, PCE, o una combinación de DMG y PCE.

La Figura 3 es una gráfica que compara niveles de población linfocítica, incluyendo linfocitos que tienen marcadores CD4, CD8, y CD19, en ratones de control y en ratones tratados con DMG, PCE, o una combinación de DMG y PCE.

La Figura 4 es una gráfica que compara concentraciones de anticuerpos anti-ADN de doble hebra, en ratones de control y en ratones tratados con DMG, PCE, o una combinación de DMG y PCE. Se realizaron dos experimentos (nº 1) y (nº 2).

La Figura 5 es una gráfica que compara concentraciones de anticuerpos anti-ADN de una sola hebra, en ratones de control y en ratones tratados con DMG, PCE, o una combinación de DMG y PCE.

La Figura 6 es una gráfica que compara poblaciones linfocíticas en sujetos humanos sanos con poblaciones linfocíticas en sujetos humanos con osteoartritis o artritis reumatoide. Las poblaciones celulares que se midieron incluyen células T totales (células T), células T auxiliares (Th) (CD4^{+}), células T citotóxicas (Tc) (CD8^{+}), células B (B) (CD19^{+}), y células asesinas naturales (NK). Dentro de una subpoblación, las columnas con diferentes índices en la parte superior (es decir, a y b) son significativamente diferentes (p \leq 0,01).

La Figura 7 es una gráfica que compara concentraciones de citoquinas en sujetos humanos sanos con concentraciones de citoquinas en sujetos humanos con osteoartritis o artritis reumatoide. Dentro de una subpoblación, las columnas con diferentes índices en la parte superior (es decir, a y b) son significativamente diferentes (p < 0,01).

Sin elaboración adicional, se cree que el experto en la técnica puede, usando la descripción precedente, utilizar la presente invención en su extensión más completa. Las siguientes realizaciones específicas preferidas se han de entender, por lo tanto, como meramente ilustrativas, y no limitativas del resto de la descripción.

Ejemplos

En los siguientes ejemplos, todas las partes y porcentajes son en peso excepto que se indique de otro modo.

Ejemplo 1 Preparación de un componente de PCE terapéuticamente activo

Se prepara una formulación terapéuticamente activa de Perna canaliculus liofilizando la parte comestible del mejillón y moliéndolo hasta un polvo. El producto se formula en cápsulas con los excipientes de alfalfa, celulosa y estearato de magnesio.

Ejemplo 2 Tratamiento de lupus eritematoso sistémico con una combinación de DMG y extracto PCE

El lupus eritematoso sistémico (SLE) se considera como la enfermedad autoinmune prototípica. El SLE se caracteriza por diversos grados de gravedad, dando las formas más suaves una urticaria cutánea menor y dolor de las articulaciones, y dando las formas graves glomerulonefritis, enfermedad compleja inmune, alargamiento grave de los nódulos linfáticos, y fallo de múltiples órganos. El SLE se caracteriza además por el desarrollo de autoanticuerpos frente a componentes citoplásmicos y nucleares. Además de los síntomas clínicos, la presencia de anticuerpos antinucleares es un signo distintivo de la enfermedad, y su presencia es una indicación importante en el diagnóstico de la enfermedad (Tan, 1989, Adv. Immunology 44:93). Los ratones MRI-lpr son un modelo aceptado y bien documentado para SLE (Cohen y Eisenberg, 1991, Ann. Rev. Immunol. 9:203; Kotzin, 1996, Cell 85:303). Estos ratones desarrollan un defecto genético homocigótico en el receptor de Fas-TNF relacionado con la apoptosis. La proteína Fas es una ruta importante para la inducción de apoptosis, y la proteína Fas es responsable de la eliminación de linfocitos. Estos ratones producen un amplio espectro de autoanticuerpos frente a proteínas nucleares y citoplásmicas, y los ratones MRI-lpr mueren de síntomas clásicos del tipo lupus.

Se usaron ratones MRI-lpr para estudiar los efectos de una combinación de DMG y PCE en componentes del sistema inmune y sobre la progresión de la enfermedad de SLE. Se dividieron cuarenta ratones MRI-lpr en cuatro grupos de diez ratones cada uno: un grupo de control, un grupo tratado con PCE, un grupo tratado con DMG, y un grupo tratado con PCE más DMG. Al grupo de control se le suministró comida estándar para ratones, y agua. Al grupo de DMG se le suministró comida estándar para ratones, y agua, mezclado con 34 mg/l de DMG (AANGAMIK® DMG, FoodScience Corporation, Essex Junction, Vermont). Al grupo de PCE se le suministró una mezcla de comida para ratones más PCE, y agua. Al grupo de la combinación de PCE más DMG se le suministró una mezcla de PCE y comida para ratones, y agua más DMG. El suplemento de PCE usado en los estudios fue un producto que contiene mejillón Perna canaliculus entero molido, liofilizado (Perna, FoodScience Corporation, Essex Junction, Vermont). A los ratones se les suministró alimento y agua a placer. Se estima que los ratones, con un intervalo de tamaños de 30-50 gramos, consumieron alrededor de 1-3 mg/día de DMG y 2-6 mg/día de PCE. Los ratones se pesaron semanalmente, y se recogieron 100 \mul de sangre vía sangrado orbital en una base semanal. La sangre recogida se centrifugó, y se recuperó el suero y se almacenó a -20ºC para análisis al final del experimento de doce semanas. Tras doce semanas, los ratones se sacrificaron, y se recolectaron los bazos, riñones, e hígados. Cuando los ratones se sacrificaron, también se recogió sangre vía una punción cardíaca. Se recogió el suero y se almacenó como se describe anteriormente. Los bazos se procesaron, y las células recuperadas se cuantificaron por citometría de flujo usando anticuerpos fluorescentes anti-CD4, anti-CD8 y anti-CD19 (Pharmingen, San Diego, CA). Los niveles de citoquinas en el suero, y los niveles de anticuerpos anti-ADN de una sola hebra y de doble hebra, en el suero, se determinaron usando un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA).

Los animales cuyas dietas se suplementaron con PCE solo, o la combinación de DMG con PCE, experimentaron una mayor ganancia de peso que los animales del control o los tratados con DMG, indicando que los ratones tratados con la combinación no se vieron afectados adversamente por el tratamiento (Figura 1). Se observó una disminución significativa en las células T CD8^{+} con animales alimentados con la combinación estándar de DMG y PCE, con una tendencia hacia niveles más bajos en animales alimentados sólo con PCE (Figura 3). También se observó una tendencia hacia menores porcentajes de célula B CD19^{+} con animales tratados con DMG más PCE, mientras que los animales tratados con PCE solo tuvieron niveles de células B CD19^{+} comparables con los del control. No se pudo detectar ningún efecto de la DMG sola sobre niveles de células T CD8^{+} o células B CD19^{+} (Figura 3).

También se examinaron los efectos en la producción de citoquinas en ratones tratados con la combinación de DMG más PCE. Como se muestra en la Figura 2, los animales tratados con la combinación de DMG más PCE mostraron niveles significativamente menores de il-6 en el suero que los animales de control o los animales tratados con DMG sola. Aunque los animales tratados con DMG o PCE solo tuvieron niveles significativamente menores de il-6 que los animales de control, los animales tratados con una combinación de los dos tuvieron incluso niveles menores. Los animales tratados con DMG más PCE también mostraron niveles significativamente menores de il-10 en el suero que los animales del control o los animales tratados con DMG o PCE solo. Estos cambios en los niveles de citoquinas en el suero son indicativos de un desplazamiento desde una respuesta Th2 a una respuesta Th1. El aumento significativo, en los niveles del suero del factor de necrosis tumoral (TNF), en animales tratados con DMG más PCE, también es indicativo de este desplazamiento desde una respuesta Th2 a una respuesta Th1.

El tratamiento de los animales con DMG sola dio como resultado mayores niveles de il-10 que en los animales de control, indicando un desplazamiento hacia una respuesta Th2. Aunque la DMG es un potenciador conocido de la producción de anticuerpos, no se sabe si la producción potenciada de anticuerpos observada representa producción patológica de IgG2a. Los niveles de il-10 y TNF-\alpha en el suero fueron comparables en los animales del control y en los animales tratados con PCE solo. Por lo tanto, el tratamiento con DMG más PCE parece que desplaza la respuesta linfocítica de una respuesta Th2 a una respuesta Th1, con una disminución concomitante en la producción de anticuerpos en exceso, incluyendo producción de anticuerpos antinucleares como se expone a continuación.

También se examinaron los niveles de anticuerpos antinucleares en ratones de control y tratados. Tras once semanas de tratamiento, los niveles de anticuerpos anti-ADNds en el suero de animales tratados con DMG más PCE fueron significativamente menores que en los animales del control o en los animales tratados con DMG sola o PCE solo (Figura 4). Incluso de forma más significativa, los niveles de anticuerpos anti-ADNss en el suero de animales tratados con DMG más PCE fueron parejos con los niveles en los animales del control hasta la 7ª semana, cuando se encontró que estas concentraciones en el suero eran menores (Figura 5). Esta diferencia significativa se observó que continuaba hasta que los animales se eutanasiaron tras la 11ª semana. Los niveles en el suero de anticuerpos anti-ADNss en animales de control y en animales tratados con PCE solo continuaron aumentando durante el transcurso del tratamiento. Hacia la 11ª semana, los niveles en el suero en animales tratados con DMG sola parecieron nivelarse.

Ejemplo 3 Comparación de poblaciones linfocíticas en sujetos humanos sanos con poblaciones linfocíticas en sujetos humanos con osteoartritis o artritis reumatoide

Se midieron y compararon poblaciones linfocíticas en sujetos humanos sanos frente a sujetos humanos con osteoartritis o artritis reumatoide (Figura 6). Las poblaciones linfocíticas medidas incluyeron células T totales (células T), células T auxiliares (Th) (células CD4^{+}), células T citotóxicas (Tc) (células CD8^{+}), células B (B), y células asesinas naturales (NK). Las poblaciones celulares se identificaron por tinción externa de linfocitos de sangre entera usando los siguientes anticuerpos: anticuerpos anti-CD3 para células T totales; anticuerpos anti-CD4 para células T auxiliares; anticuerpos anti-CD8 para células T citotóxicas; anticuerpos anti-CD5 y anti-CD19 para células B; anticuerpos anti-CD56 para células asesinas naturales; y anticuerpos anti-CD45 para monocitos. Los anticuerpos se obtuvieron de Caltag Corp. o de Coulter Corp., y se etiquetaron para análisis en un citómetro de flujo EPICs 751 (Coulter F1) con un módulo de adquisición Cicero y un programa de ordenador de análisis cyclops (Ciytomation, CA). Como se muestra por los datos en la Figura 6, se observó un cambio de las células T CD4^{+}/CD8^{+} en ambas enfermedades cuando se compara con controles sanos, con una disminución significativa en el número de las células CD4^{+} en sujetos con cualquiera de las enfermedades, y un aumento significativo en el número de células CD8^{+} en sujetos con cualquiera de las enfermedades.

Ejemplo 4 Comparación de concentraciones de citoquinas en sujetos humanos sanos con concentraciones de citoquinas en sujetos humanos con osteoartritis o artritis reumatoide

Se midieron y compararon los niveles de citoquinas en sujetos humanos sanos frente a sujetos humanos con osteoartritis o artritis reumatoide (Figura 7). Las citoquinas medidas incluyeron gamma-interferón, interleuquina 1-\beta, interleuquina 2, interleuquina 4, interleuquina 6, interleuquina 10 y TNF-\alpha. Las citoquinas se midieron usando kits específicos de ELISA según las instrucciones de los fabricantes (Immunotech, Francia). Los niveles de interleuquina 6 fueron significativamente mayores en sujetos con cualquiera de las enfermedades que en los sujetos del control. Los niveles de TNF-\alpha estaban aumentados significativamente en sujetos con artritis reumatoide comparados con los controles normales, pero no habían aumentado en pacientes con osteoartritis.

Los ejemplos precedentes se pueden repetir con éxito similar sustituyendo los agentes reaccionantes y/o condiciones de funcionamiento genérica o específicamente descritos de esta invención por los usados en los ejemplos precedentes.

Sin elaboración adicional, se cree que el experto en la técnica puede, usando la descripción precedente, utilizar la presente invención en su forma más completa. Las realizaciones específicas preferidas precedentes se han de entender por tanto como meramente ilustrativas, y no limitativas del resto de la descripción de ninguna forma.

Claims

1. Uso de un componente de N,N-dimetilglicina (DMG) y al menos un componente de extracto de Perna canaliculus (PCE) terapéuticamente activo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedad inflamatoria.

2. Uso según la reivindicación 1, en el que la enfermedad es una enfermedad autoinmune.

3. Uso según la reivindicación 2, en el que la enfermedad autoinmune es lupus eritematoso.

4. Uso según la reivindicación 3, en el que el medicamento logra una reducción en la concentración en el suero de al menos un anticuerpo antinuclear.

5. Uso según la reivindicación 4, en el que el anticuerpo antinuclear es un anticuerpo anti-ADNds o un anticuerpo anti-ADNss.

6. Uso según la reivindicación 3, en el que al menos un componente de PCE es mejillón entero molido liofilizado.

7. Uso de un componente de DMG y al menos un componente de PCE terapéuticamente activo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad autoinmune.

8. Uso según la reivindicación 1 ó 7, en el que la enfermedad es lupus eritematoso, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, miastenia grave, enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de Crohn, anemia hemolítica autoinmune, diabetes mellitus dependiente de insulina, glomerulonefritis, fiebre reumática, osteoartritis, artritis gotosa, conjuntivitis, dermatitis, bronquitis, rinitis y/o asma.

9. Uso según la reivindicación 7 u 8, en el que el tratamiento da como resultado una disminución en las concentraciones de il-6 en el suero, una disminución en las concentraciones de il-10 en el suero, un aumento en las concentraciones de TNF-\alpha en el suero, o una disminución en las células CD8^{+} en la sangre.

10. Uso según la reivindicación 7 u 8, en el que el tratamiento da como resultado una disminución en la concentración de il-10 en el suero, y una disminución en las células CD8^{+} en la sangre.

11. Uso según la reivindicación 7 u 8, en el que el tratamiento da como resultado una disminución en las células CD8^{+}.

12. Una composición que comprende un componente de DMG y al menos un componente de PCE terapéuticamente activo.

13. Una composición según la reivindicación 12, en la que al menos un componente de PCE comprende mejillón entero molido liofilizado.

14. Una composición según la reivindicación 12, que es adecuada para uso como un suplemento dietético.

15. Un kit que comprende una formulación de DMG y una formulación de PCE, en el que la formulación de PCE comprende al menos un componente de PCE terapéuticamente activo.

16. Un kit según la reivindicación 15, en el que la formulación de DMG y la formulación de PCE son adecuadas para uso como suplementos dietéticos.

17. Un kit según la reivindicación 15, en el que al menos un componente de PCE comprende mejillón entero liofilizado molido.

18. Un kit según la reivindicación 15, en el que la formulación de DMG es adecuada para administración como una mezcla con agua.

19. Una composición según la reivindicación 12, en la que el componente de DMG y al menos un componente de PCE están ambos en una forma adecuada para administración oral.

20. Un kit según la reivindicación 15, en el que el componente de DMG y la formulación de PCE están ambos en una forma adecuada para administración oral.

21. Una composición según la reivindicación 12, en el que la composición está en una forma adecuada para administración oral.

22. Un kit según la reivindicación 15, en el que tanto la formulación de DMG como la formulación de PCE están en una forma adecuada para la administración oral.

23. Uso según una de las reivindicaciones 1, 3, 7, 8, 9 ó 10, en el que el componente de DMG y el componente de PCE se van a administrar oralmente.

24. Uso según una de las reivindicaciones 1, 3, 7, 8 ó 9, en el que la cantidad de componente de DMG a administrar es de 1 a 500 mg/kg/día, y la cantidad de al menos un componente de PCE a administrar es de 1 a 500 mg/kg/día.

25. Uso según una de las reivindicaciones 1, 3, 7, 8 ó 9, en el que la cantidad de componente de DMG a administrar es de 10 a 100 mg/kg/día, y la cantidad de al menos un componente de PCE a administrar es de 10 a 100 mg/kg/día.