ES2208985T3

ES2208985T3 - Procedimiento y mezcla enzimatica para el desbarbado mejorado de articulos de algodon.

Info

Publication number: ES2208985T3
Application number: ES98104349T
Authority: ES
Inventors: Brian Foody; Jeffrey S. Tolan
Original assignee: Iogen Bio Products Corp
Current assignee: Iogen Corp
Priority date: 1997-03-18
Filing date: 1998-03-11
Publication date: 2004-06-16
Anticipated expiration: 2018-03-11
Also published as: CA2232322A1; US5866407A; DE69818726T2; BR9800904A; DK0866165T4; CN1194315A; CN1138889C; EP0866165B1; AR012099A1; EP0866165B2; EP0866165A1; DK0866165T3; CA2232322C; DE69818726D1

Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A UN METODO Y UNA MEZCLA ENZIMATICA ESPECIFICA PARA ELIMINAR EL PELO DE ARTICULOS QUE CONTENGAN ALGODON, BIEN COMO TEJIDO NO ACABADO, BIEN COMO PRENDAS ACABADAS, PARA CREAR UNA SUPERFICIE SUAVE, MINIMIZANDO SIMULTANEAMENTE LA PERDIDA DE RESISTENCIA DEL TEJIDO. DICHO METODO CONSISTE BASICAMENTE EN ELIMINAR MENOS DE APROX. EL 3,0 % DEL PESO INICIAL DEL TEJIDO CON UNA MEZCLA DE ENZIMAS CELULASAS DE TRICHODERMA, QUE COMPRENDE MENOS DE LAS CANTIDADES EXISTENTES EN LA NATURALEZA DE LOS COMPONENTES PROTEINICOS CBHI, CBHII, EGI Y EGIII, Y CONSISTENTE ADEMAS ESENCIALMENTE EN AL MENOS EL 80 % DE ENDOGLUCANASA II (EGII), COMO COMPONENTE PROTEINICO.

Description

Procedimiento y mezcla enzimática para el desbarbado mejorado de artículos de algodón.

Antecedentes de la invención 1. Campo de la invención

Esta invención se refiere a un tratamiento de desbarbado de piezas de tejido de algodón no acabado, o prendas de vestir acabadas, con enzimas celulasa, tratamiento que elimina menos de aproximadamente 3,0% del peso inicial del tejido. Más específicamente, esta invención se refiere a un procedimiento para reducir o prevenir las pérdida de resistencia mecánica del tejido durante el desbarbado empleando ciertas mezclas específicas de celulasa y, preferiblemente, mezclas de enzima celulasa de Trichoderma que constan esencialmente de, como mínimo, 80% de EGII. Se ha descubierto que, con mezclas de enzima enriquecidas en EGII, la eliminación de barbas es más eficiente y que la destrucción del tejido durante el tratamiento con enzimas puede reducirse en aproximadamente 88% en relación con enzimas celulasa comerciales estándar actualmente en uso.

2. Breve descripción de la técnica anterior

Las enzimas celulasa se emplean ampliamente hoy en día para mejorar el aspecto y la suavidad de tejidos y prendas de vestir que contienen algodón. Tal como se usa aquí, el término "artículos de algodón" denota tejidos acabados o no acabados que constan de algodón o mezclas de algodón con otras fibras.

Una aplicación ampliamente extendida de enzimas celulasa es para tratar tejidos que contienen algodón, tales como dril de algodón "lavado a la piedra", en que enzimas celulasa han reemplazado en gran parte los nudos para generar el dril suave, apagado, deseado por los consumidores. Se pueden encontrar más detalles sobre celulasa para lavado de nudos de dril en Enzyme Applications (Industrial), Nielsen y otros, Encyclopedia of Chemical Technology, (Kirk-Othmer Publishers, 1993), vol. 9, págs. 603-604 (a la que en lo que sigue se hará referencia como "Nielsen y otros").

Una segunda amplia aplicación de las enzimas celulasa es para tratar tejidos que contienen algodón con el fin de eliminar pelusa de algodón y fibras superficiales sueltas del tejido, lo que categóricamente implica la eliminación de menos de aproximadamente 3,0% del peso inicial del tejido y, típicamente, menos de 1,0%. Este procedimiento se conoce con varios nombres, como "desbarbado", "biopulido", "bioacabado" y "reforma". Aquí se usará el término "rebarbado" para referirse a todos estos tratamientos del tejido. En el rebarbado, el tratamiento con celulasa iguala la superficie del tejido, lo que, a su vez, imparte mejor suavidad y aspecto, aumentándose así la calidad y el valor del tejido. El tratamiento con celulasa para el rebarbado también ayuda a prevenir la posterior formación de pelotitas de fibras que hacen que las prendas parezcan usadas, y mejora la uniformidad del tejido al eliminar algodón muerto o inmaduro. Se pueden encontrar más detalles de la celulasa para el desbarbado en Nielsen y otros, págs. 595-604. El desbarbado de artículos que contienen algodón es el campo de la presente invención.

A las prendas de algodón se aplican fuerzas de cizallamiento durante la manufactura de las prendas y en el uso repetido, lavados y secados por volteo sucesivos, lo que daña la superficie. Una observación detenida revela la presencia de fibrillas de un tamaño de pocas micras a pocos milímetros. La superficie dañada dispersa la luz, dando un aspecto mate, grisáceo, con un brillo del color y un contraste entre diferentes colores aminorados. Las partículas de polvo también tienden a adherirse a las zonas dañadas, reforzando el aspecto grisáceo. Las fibras dañadas también hacen que la superficie sea más rígida, por lo que disminuye la sensación al tacto o suavidad.

Las enzimas celulasa hidrolizan los enlaces \beta-1,4 expuestos en la celulosa. Esto conduce a la eliminación de fibrillas, que son la parte más expuesta del tejido. Se cree que la eliminación de fibrillas mejora directamente la suavidad de las vestimentas y conduce también a un mejor color y una limpieza mejorada, tanto por eliminar suciedad asociada a las fibrillas como por mejorar la penetración de otros productos de limpieza que se están usando. La eliminación de fibrillas también ayuda inicialmente a prevenir la posterior formación de fibrillas.

Las enzimas celulasa tienen varias ventajas sobre los suavizantes convencionales de tejidos, usados para mejorar la suavidad y el lustre en tejidos de algodón. Los suavizantes convencionales, que principalmente son arcillas o tensioactivos catiónicos, revisten el tejido e imparten una sensación grasa, que es indeseable. Los suavizantes también disminuyen la capacidad de absorber agua, lo que es desventajoso para toallas y artículos similares. Las enzimas son también preferidas desde un punto de vista ambiental.

En una etapa de un típico tratamiento de desbarbado durante la manufactura de tejido para prendas de vestir (usualmente, teñido), se añaden agua, tampones, detergentes y enzimas a un tambor rotatorio de teñido por chorro, horizontal o vertical, una lavadora automática u otro dispositivo que proporciona agitación y cizallamiento al tejido. Típicamente, el tratamiento es de 15 a 120 minutos a 35º-60ºC a un pH de 4 a 6,5. Usualmente, la relación de licor a tejido es de entre 2,5:1 y 6:1 en peso. La cantidad de enzima celulasa añadida corresponde, típicamente, a una actividad de la celulasa de 1.000 a 200.000 unidades CMC por kilogramo de tejido, según el procedimiento de Ghose (1987) de ensayo de celulasa. Después del tratamiento, frecuentemente la enzima se destruye calentando la solución a 70ºC durante 10 minutos. El tejido se saca de la máquina, se seca y se prepara en rodillos, a veces después de un secado adicional. En la patente U.S. nº. 5.232.851, en la columna 1, se encuentra un resumen de publicaciones que describen detalles de tratamientos convencionales con celulasas para el desbarbado de tejidos de algodón durante la manufactura.

Para un tratamiento de desbarbado durante una etapa en lavado con máquina, la celulasa se incluye en una mezcla de detergente con muchos otros ingredientes. Los otros ingredientes pueden incluir otras enzimas tales como proteasas, lipasas y celulasas, así como tensioactivos, tampones, coadyuvantes de detergencia, blanqueadores, agentes antirredepósito, abrillantadores ópticos, antioxidantes y solubilizantes.

Clarkson y otros, en la patente U.S. nº. 5.290.474 (a la que se hará referencia como "Clarkson 474") describen otra mezcla convencional de detergente que contiene enzimas celulasa. Típicamente, el tratamiento es de 15 a 60 minutos a 20ºC-70ºC y un pH de 7 a 9,5. La relación de licor a tejido, en peso, usualmente es de entre 2,5:1 y 10:1. La cantidad de enzima celulasa añadida típicamente corresponde a un actividad de celulasa de aproximadamente 200 a 40.000 unidades CMC por kilogramo de tejido, según el procedimiento de Ghose (1987) de ensayo de celulasa.

Las enzimas celulasa se usan para el desbarbado de tejidos de algodón y mezclas de algodón y fibras artificiales, incluidas las de liocell, rayón, poliéster, acrílicas, nailon y acetato de celulosa. Se ilustran más detalles en Clarkson 474, en la columna 7. El tratamiento con celulasa se realiza en tejidos y prendas de vestir cosidas que comprenden material hecho de algodón o mezclas de algodón, con o sin un acabado resinoso. El desbarbado con celulasa se puede realizar con tejidos de como mínimo 40% de algodón en peso. Sin embargo, los resultados son más acusados y económicos si el contenido de algodón es de más de 60% en peso y los mejores resultados se obtienen si el contenido de algodón es de más de 75% en peso.

Las enzimas celulasa de un género particular de hongos de madera en descomposición, Trichoderma, se usan a menudo en aplicaciones de desbarbado. Las celulasas de Trichoderma se prefieren en procesamiento textil y lavandería por su acción muy potente frente al algodón y otras formas de celulosa. Los productos de celulasa de Trichoderma son adquiribles comercialmente de Iogen Corporation of Ottawa, Ontario, Canadá; Genencor International; Novo Nordisk; Enzyme Development Company y otros. Las celulasas comerciales tales como Iogen Cellulase son denominadas celulasas "naturales" o "completas" porque contienen la mayoría, si no es la totalidad, de los seis componentes naturales de celulasa más importantes: celobiohidrolasa I (CBHI), celobiohidrolasa III (CBHII), endoglucanasa I (EGI), endoglucanasa II (EGII), endoglucanasa III (EGIII) y endoglucanasa V (EGV).

El uso ampliamente extendido de las celulasas completas para desbarbado atestigua la utilidad de estas enzimas. Sin embargo, una desventaja de tales celulasas completas en tratamientos de desbarbado es que causan una pérdida significativa de la resistencia mecánica del tejido. Véase Clarkson y otros, patente U.S. nº. 5.246.853 (en lo que sigue, "Clarkson 853"). La pérdida de resistencia mecánica deriva de la acción de la celulasa frente a la celulosa en el cuerpo principal del tejido, y no de la deseada acción frente a pelusa o barbas. Una pérdida excesiva de resistencia mecánica puede causar al tejido daños tales como picaduras de alfiler o manchas en zonas gastadas. La disminución de la pérdida de resistencia mecánica solventaría estos problemas. Además, la disminución de la pérdida de resistencia mecánica permitiría lograr tejidos con el aspecto y la suavidad deseadas en tejidos con una resistencia mecánica mayor que la alcanzable actualmente. Esto daría por resultado nuevos productos valiosos para la industria y el consumidor.

Los esfuerzos para disminuir la pérdida de la resistencia mecánica por la celulasa de Trichoderma se han centrado en las propiedades de las enzimas individuales que comprende la celulasa de Trichoderma.

El género Trichoderma produce naturalmente una mezcla de aproximadamente dos docenas de diferentes tipos de enzimas celulasa, que individualmente son conocidas como componentes. Se han identificado varios de los más importantes de estos componentes y se les han asignado nombres, incluidos los de celobiohidrolasa I (CBHI), celobiohidrolasa II (CBHII), endoglucanasa I (EGI), endoglucanasa II (EGII), endoglucanasa III (EGIII) y endoglucanasa V (EGV).

Cada una de las enzimas celulasa de Trichoderma ha sido clasificada en una familia apropiada de no más de 40 familias reconocidas de enzimas hidrolasa. La clasificación está basada en la secuencia de aminoácidos que comprende las enzimas y la estructura tridimensional, según describen Claessens y Henrissat, Specificity Mapping of Cellulolytic Enzimes: Classification into Families of Structurally Related Proteins Confirmed by Biochemical Analysis, en Protein Science, vol. 1, págs. 1293-1297 (1992). En la Tabla 1 se resumen las propiedades aproximadas, la clasificación, referencias de las secuencias de aminoácidos y proporción de proteína de celulasa total en la enzima natural de varios componentes de celulasa de Trichoderma.

TABLA 1 Componentes de celulasa de Trichoderma

Enzima	Pesor	Punto	Familia	Referencia	Concentración,
	molecular	isoeléctrico			%
CBHI	63.000	4,3	7	A	50-60
CBHII	58.000	6,0	6	B	15-18
EGI	53.000	4,6	7	C	12-15
EGII	50.000	5,3	5	D	9-11
EGIII	25.000	7,4	12	E	0-3
EGV	23.000	3,7	45	F	0-3

Referencias

A. Shoemaker y otros, Molecular Cloning Of Exo-Cellobiohydrolase I Derived From Trichoderma Reesie Strain L27. BIO/TECHNOLOGY, vol. 1, pág. 691-696 (1983).

B. Chen y otros, Nucleotide Sequence and Deduced Primary Structure Of Cellobiohydrolase II From Trichoderma Reesie. BIO/TECHNOLOGY, vol. 5, pág. 274-278 (1987).

C. Penttila y otros, Homology Between Cellulase Genes Of Trichoderma Reesei: Complete Nucleotide Sequence Of The Endoglucanase I Gene. GENE col. 45, pág. 253-263 (1986).

D. Saloheimo y otros, EGIII, A New Endoglucanase From Trichoderma Reesei: Characterization Of Both Gene And Enzyme. GENE, vol. 63, pág. 11-21 (1988).

E. Ward y otros, patente U.S. nº. 5.475.101.

F. Saloheimo y otros, A Novel, Small Endoglucanase Gene, EgI5, From Trichoderma Reesei Isolated By
Expression In Yeast, MOLECULAR MICROBIOLOGY, vol. 61, 1090-1097.

Debe señalarse que la nomenclatura usada en la Tabla 1 es la utilizada corrientemente en este campo y refleja ciertos cambios de la nomenclatura anterior. Por ejemplo, el componente "EGII" se ha denominado incorrecta y extensamente "EGIII" en trabajos de referencia anteriores. Véase, por ejemplo, la discusión en el trabajo de Stalbrand y otros, Applied and Environmental Microbiology, vol. 61, pág. 1090-1097 (1995).

Un enfoque seguido por investigadores de la técnica anterior en búsqueda de la disminución de la pérdida de resistencia mecánica debida a tratamientos de desbarbado ha sido producir lo que se conoce como "versión truncada" de componentes de celulasa.

La mayor parte de los componentes de celulasa comprenden un dominio de núcleo catalítico y un dominio de unión de celulosa separados por un conector flexible que está constituida por varios aminoácidos. Se ha dado cuenta de técnicas para escindir el dominio de núcleo o el dominio de unión. También se ha dado cuenta de técnicas para usar cepas de Trichoderma con ADN modificado, de manera que se codifique sólo una porción deseada de la celulasa. Véase el documento de patente publicado WO 95/16782, Fowler y otros (denominado en lo que sigue "Fowler 782"). También se ha dado cuenta del uso de enzimas proteasa para escindir una porción deseada de una enzima. Véase Woodward y otros, Biotechnol. Appl. Biochem., vol. 19, pág. 141-153 (1994).

Estas celulasas truncadas no han resuelto los problemas de pérdida de resistencia mecánica en el desbarbado, según han señalado Kumar y otros, en Optimizing the Use of Cellulase Enzymes in Finishing Celulosic Fabrics, 1995 AATCC Conference, Atlanta, pág. 238 (en lo que sigue, "Kumar y otros"). Este trabajo compara los comportamientos en el desbarbado (o "bioacabado" como aparece en él el término) entre la Standard Whole Cellulase ("celulasa entera estándar", que contiene los seis componentes importantes de celulasa) y las dos nuevas celulasas. Se dice que una nueva celulasa es una "celulasa ácida modificada" (esto es, una celulasa truncada preparada usando procedimientos de Fowler 782) y no revela disminución alguna de la pérdida de resistencia mecánica del tejido durante el desbarbado en comparación con la celulasa entera estándar.

Un segundo enfoque para disminuir la pérdida de resistencia mecánica del tejido durante los tratamientos de desbarbado ha sido escoger mezclas de componentes de celulosa que ofrecen ventajas respecto a la mezcla natural. Usando técnicas bien conocidas de ingeniería genética o procesamiento de proteínas (descritas en Clarkson 853) se puede alterar las cantidades relativas de componentes de celulasa presentes.

Bjork y otros, patente U.S. nº. 5.120.463 (en lo que sigue, "Bjork 463") y el documento de patente publicado WO/ 93/22428, de Clarkson y otros (en lo que sigue Clarkson 428), indican que una enzima celulasa enriquecida en componentes CBHI tendrá una menor pérdida de resistencia mecánica, así como un comportamiento superior, en cuanto a suavizar y mejorar la sensación al tacto de los tejidos de algodón, que la celulasa cuando están presentes sus endoglucanasas. La mezcla de enzima con el mejor comportamiento presentado por Bjork 463 es 96% de CBHI, 2% de EGI y 2% de EGII (véase Tabla 3 del Ejemplo 3), con 500 ppm de CBHI y 10 ppm de EGI y EGII, divididos por igual. Esta mezcla también se indica en la Fig. 1 de la memoria como "Bjork 463-óptima". Se señala un comportamiento muy mediocre para una mezcla que es 45% de EGI, 45% de EGII y 10% de CBHI. Esta mezcla, que se indica que constan de 10 ppm de CBHI y 100 ppm divididas entre EGI y EGII, también se indica en la Fig. 1 de la memoria como "Bjork 463-poor".

Los hallazgos de Bjork 463 están soportados por los de Cavaco-Paulo y Rios, Analysis of the Mecanical Properties of Cellulase Treated Fabrics, (1996 AATCC Conference, Nashville), en pág. 129.

Clarkson y otros, patente U.S. nº. 5.525.507, y Clarkson 853 presentan una composición particular de enzima de celulasa para tratar tejido de algodón para lograr una sensación al tacto y suavidad intensificadas, mejora del color y un aspecto de lavado a la piedra. Se señala que esa composición particular de enzima necesariamente ha de estar exenta de componentes del tipo CBHI (columna 2, línea 57). En una realización preferente, se indica que la enzima ha de estar sustancialmente exenta de componentes CBHII. En una segunda realización preferente se indica que la enzima necesariamente ha de tener, como mínimo, 10% de componentes endoglucanasa. En una tercera realización preferente, se señala que la enzima ha de tener, como mínimo, 20% de componentes endoglucanasa.

Clarkson 853 aportó los mejores resultados con una mezcla que era 50% de EGI, 37% de EGII y 13% de EGIII. Esa mezcla se indica en la Fig. 1 de la memoria como "Clarkson 853 óptima" y se describe por Clarkson 853 como "privada de CBHI y CBHII" dentro del Ejemplo 16. Las proporciones necesarias de endoglucanasas en esa mezcla considerada antes se determinó que eran las siguientes: En Clarkson 853, en el Ejemplo 13, se indica que las proporciones de componentes de celulasa en la mezcla natural eran CBHI 45-55%, CBHII 13-15%, EGI 11-13%, EGII 8-11%, EGIII 1-4%. En el Ejemplo 16, la enzima preferida se dice que tiene eliminada la totalidad de CBHI y CBHII. Si se eliminan CBHI y CBHII de la mezcla total y las concentraciones medias de las enzimas restantes se normalizan en total a 100%, el resultado será el que se ha señalado.

El segundo mejor comportamiento mostrado por Clarkson 853 era una mezcla de 37% de CBHII, 32% de EGI, 24% de EGII y 7% de EGIII. La mezcla aparece en la Fig. 1 como "Clarkson 853 2ª mejor" y se describe por Clarkson 853 como "privada de CBHI". Las proporciones de enzimas en esta mezcla definida antes se indica que son: En Clarkson 853, en el Ejemplo 13, las proporciones de componentes de celulasa en la mezcla natural eran: CBHI 45-55%, CBHII 13-15%, EGI 11-13%, EGII 8-11%, EGIII 1-4%. En el Ejemplo 16, se dice que la segunda mejor enzima estaba privada de CBHI. Si se eliminan CBHI y CBHII de la mezcla total y las concentraciones medias de las enzimas restantes se normalizan en total a 100%, el resultado será el que se ha señalado.

El tercer mejor comportamiento mostrado por Clarkson 853 era una mezcla que era 68% de CBHI, 16% de EGI, 12% de EGII y 4% de EGIII. Esta mezcla figura en la Fig. 1 como "Clarkson 853 3ª mejor" y es descrita por Clarkson 853 como "privada de CBHII". Se determinaron las proporciones de enzimas en esta mezcla definida antes, que resultaron ser: En Clarkson 853, en el Ejemplo 13, las proporciones de los componentes de celulasa en la mezcla natural son CBHI 45-55%, CBHII 13-15%, EGI 11-13%, EGII 8-11%, EGIII 1-4%. En el Ejemplo 16, se dice que la tercera mejor enzima está privada de todo CBHII. Si se elimina CBHII de la mezcla total y las concentraciones medias de las enzimas restantes se normalizan en total a 100%, el resultado será el que se ha señalado.

El peor comportamiento del que ha dado cuenta Clarkson 853 era el de la mezcla natural de celulasa, que también se indica en la Fig. 1 de la memoria (Natural Cellulase).

Clarkson y otros, en la patente U.S. nº. 5.290.474 (en lo que sigue, "Clarkson 474") reivindican el uso de enzimas que contienen como mínimo 40% de EGIII para tratar algodón. En una realización preferente, la enzima está constituida por no más de 5% de componentes CBHI y de como mínimo 70% de EGIII. Clarkson 474 reivindica que esta mezcla de enzimas es ventajosa en cuanto a que puede usarse a pH alcalino (columna 3, línea 58). No hay sugerencia alguna de que estas mezclas de enzimas dan por resultado una pérdida de resistencia mecánica que es menor que la que dan las mezclas consideradas por Clarkson 853.

El único ejemplo de mezclas de celulasa descrito por Clarkson 474 es EGIII sustancialmente pura. Esto se indica en la Fig. 1.

La publicación de patente WO 94/28117, Saloheimo y otros, se refiere a usos para el componente endoglucanasa EGV. Se indica que la enzima es activa a pH alcalino y se recomienda para uso en la industria textil (pág. 16, línea 19). Sin embargo, Saloheimo y otros no describen ni sugieren si esta enzima puede ser superior, en el comportamiento del desbarbado, a otras mezclas o componentes descritos en la técnica anterior.

Kumar y otros describen comportamientos medidos en el desbarbado con celulasa entera estándar, que contiene la totalidad de los componentes principales de la celulasa, y también de dos supuestas "nuevas celulasas". Una de las denominadas nuevas celulasas se dice que es una "endocelulasa enriquecida", pero no se identifican los componentes presentes o eliminados. Kumar y otros indican que la "endocelulasa enriquecida" causa una pérdida menor de resistencia mecánica en el desbarbado que la que causaría la celulosa entera estándar. Sin embargo, no se recomendó esta "endocelulasa enriquecida" para aplicaciones con altas exigencias de abrasión, tales como algodón fuerte y liocell, puesto que se dice que se requieren una dosis alta y tiempo adicional (pág. 243, párrafo central).

Sumario de la invención

Los autores de la presente invención han encontrado, sorprendentemente, que el tratamiento de artículos de algodón con una mezcla de enzima celulasa de Trichoderma que consta esencialmente de como mínimo 80% del componente EGII, ofrece un desbarbado superior con una menor pérdida de resistencia mecánica que otras mezclas de celulasa de Trichoderma. Usando mezclas de enzimas específicas de la presente invención, la eliminación de barbas es más eficiente y la cuantía de la destrucción de tejido durante el tratamiento con enzimas se reduce en 88%, en relación a enzimas celulasa estándar comerciales usadas actualmente para tratar tejidos de algodón. La invención, por tanto, consiste en un procedimiento para tratar tejidos de algodón usando mezclas específicas de celulasa.

Breve descripción del dibujo

La Fig. 1 es un diagrama ternario. La composición de las celulasas de Trichoderma (olvidando la pequeña cantidad de EGV) puede representarse como un diagrama ternario con CBHI y CBHII en un vértice, EGI y EGIII en un segundo vértice y EGII en el tercer vértice. Los puntos que representan composiciones de celulasa de la técnica anterior y los puntos que representan datos de la presente invención están marcados con referencia a la memoria. Para más soporte para la interpretación de la Fig. 1, los solicitantes hacen referencia a los convenios para la lectura de diagramas ternarios conforme lo explica C. Judson King en Separation Processes, (McGraw-Hill, 1980), en la pág. 60. Usando esos convenios, la concentración de una especie se mide a lo largo de la línea desde el vértice marcado con la especie al lado opuesto. La concentración de una especie es 100% en el vértice marcado con una primera especie y disminuye linealmente a lo largo de cualquier línea trazada desde ese punto, alcanzando un valor cero para aquella primera especie donde esa línea corta un vértice o lado opuesto.

Descripción detallada de realizaciones preferentes

Se ha descubierto que artículos de algodón tratado con una mezcla de celulasa de Trichoderma que consta esencialmente de como mínimo 80% de componente EGII, exhiben un aspecto uniforme y con una sensación suave al tacto, con menor pérdida de resistencia mecánica del tejido que artículos tratados con otros preparados de celulosa de Trichoderma. Las mezclas de celulasa de Trichoderma de la invención ofrecen un desbarbado superior con una menor pérdida de la resistencia mecánica que otras mezclas de celulasa de Trichoderma.

En la Fig. 1 se muestran composiciones preferidas de mezclas de celulasa de acuerdo con la presente invención. Para apreciar mejor el ámbito de la presente invención y a los fines de facilitar la práctica de la presente invención, se explicarán ahora o, más en particular, se definirán ciertos términos.

Tal como se usa aquí, el término "artículos de algodón" se refiere a tejidos, bien como piezas sueltas o bien cosidas como prendas, que comprenden algodón o mezclas de algodón, antes o después de ser teñidos y con o sin un acabado resinoso. Por tanto, el término "artículos de algodón" es más amplio que el de "tejido de algodón", como habitualmente se usa en la industria de prendas de vestir para referirse a material o artículos antes de coserlos. El término "artículos" debe verse como una abreviatura taquigráfica de "tejido o prendas de vestir, no acabadas o acabadas" y no tiene connotación de preferencia en lo referente a una práctica preferida de la invención.

En una realización preferente, los artículos de algodón constan de algodón o mezclas de algodón con fibras que no son de algodón tales como nailon, acrílicas, poliéster, rayón o liocell, de manera que el contenido en algodón del tejido sea de más de 40% en peso. Más preferiblemente, el contenido de algodón es de más de 60% en peso. Muy preferiblemente, el contenido de algodón es de más de 75% en peso.

El término "tratamiento" se refiere a los tratamientos de desbarbado efectuados durante el proceso de manufactura o en el lavado en máquina posterior. En cualquier caso, el tratamiento se realiza añadiendo los artículos de algodón a una máquina de teñir de chorro, una lavadora u otro dispositivo rotatorio de tambor horizontal o vertical que contiene el artículo, agua, tampón, detergentes, tensioactivos y enzima celulasa, mientras que el tejido se somete a agitación y cizallamiento. Frecuentemente, al tratamiento sigue una enjuagadura con agua para eliminar los productos químicos agotados y los residuos del tejido, incluidas las fibrillas sueltas. Después del tratamiento, se saca el tejido de la máquina y se seca.

Las condiciones de tratamiento usadas en los ejemplos siguientes se cree que son conformes con las utilizadas generalmente en el desbarbado. Cuando el desbarbado tiene lugar en un procedimiento típico de manufactura, el tiempo de tratamiento es de aproximadamente 15 a aproximadamente 120 minutos; la temperatura de tratamiento es de aproximadamente 35ºC a aproximadamente 60ºC; la relación de licor a tejido es de entre aproximadamente 2,5:1 a aproximadamente 10:1 en peso y el pH es de aproximadamente 4,0 a aproximadamente 6,0. Cuando el desbarbado tiene lugar en una lavandería típica, el tiempo de tratamiento es de aproximadamente 10 a 60 minutos, la temperatura de tratamiento es de aproximadamente 20ºC a aproximadamente 70ºC, la relación de licor a tejido es de entre aproximadamente 2,5:1 y aproximadamente 10:1 en peso y el pH es de aproximadamente 7,0 a aproximadamente 9,5.

La cantidad de mezcla de celulasa usada para el desbarbado depende de la concentración de proteína activa en la mezcla de celulasa, la cantidad de artículos de algodón que se está tratando y la cuantía deseada del efecto de desbarbado, el tiempo de tratamiento y otros parámetros bien conocidos por los expertos en la técnica. Cuando se usa para desbarbado en un típico procedimiento de manufactura, la cantidad preferida de mezcla de celulasa de Trichoderma es, por lo general, de entre aproximadamente 2.000 y aproximadamente 100.000 unidades CMC de enzima por kg de tejido y, más preferiblemente, de entre aproximadamente 10.000 y aproximadamente 40.000 unidades CMC por kg de tejido. Cuando se usa para desbarbado en una lavandería típica, la cantidad preferida de mezcla de celulasa de Trichoderma es, por lo general, de entre aproximadamente 200 y aproximadamente 40.000 unidades CMC de enzima por kg de tejido y, más preferiblemente, de entre aproximadamente 1.000 y aproximadamente 10.000 unidades CMC por kg de tejido.

Una opción para controlar la acción de la enzima, que se recomienda aunque no se requiere, es destruir la enzima después del tratamiento calentando la solución a aproximadamente 70ºC durante 10 minutos, añadiendo productos químicos que destruyen la actividad de la enzima o secando inmediatamente el tejido.

Los términos "CBHI", "CBHII", "EGI", "EGII", "EGIII" y "EGV" se refieren a los componentes más predominantes de proteínas conocidos por ser los naturalmente producidos por Trichoderma, y se clasifican según se ha descrito aquí antes, en la Tabla 1.

También se contempla que las mezclas de celulasa modificada de Trichoderma de la presente invención pueden obtenerse a partir de una especie Trichoderma que ha sido modificada genéticamente para sobreproducir, subproducir o no producir uno o más de los componentes CBH o EG usando técnicas generalmente bien conocidas, sugeridas por Bjork 463 y Clarkson 853.

Por tanto, estas endoglucanasas y celobiohidrolasas pueden incluir no sólo enzimas que son parte de la mezcla natural de enzimas celulasa de Trichoderma, sino también mezclas de celulasa modificada tales como proteínas de celulasa truncada que comprenden el dominio de unión o el dominio núcleo de CBHs o EGs, o una porción o derivado de ellas. Véase, en general, Fowler 782.

Otras técnicas contempladas para crear mezclas de celulasa modificada pueden incluir alteraciones del grado de glicosilación, o sustitución(es) de aminoácido(s) en la estructura primaria de las celulasas o celulasas truncadas. También se contempla que cualesquier componentes naturales o modificados de celulasas de Trichoderma, tales como los comentadas en lo que antecede, se produzcan en un microorganismo hospedante modificado que no sea Trichoderma.

El término "proteína total de celulasa" se refiere a la suma total de CBHI, CBHII, EGI, EGII, EGIII, EGV y otros componentes activos de proteínas de celulasa de Trichoderma. Este término excluye enzimas no celulasa tales como amilasa, proteasa, hemicelulasa y lipasa. Este término excluye también proteína de celulasa que todavía puede estar presente pero que ha sido inactivada por calor, químicamente o por otro medio.

El término "preparado de celulasa natural" se refiere a composiciones de celulasa de Trichoderma que típicamente se producen en un cultivo sumergido por el hongo Trichoderma. Los procedimientos para su producción y recuperación están bien documentados en la bibliografía y son ampliamente conocidos por los expertos en la técnica. Entre las fuentes comerciales de estas enzimas figuran Iogen Corporation, Genecor International, Novo Nordisk, Sigma Chemicals y Enzyme Development Corporation.

En la práctica de la invención, al menos 80% de la proteína total de celulasa de las mezclas de celulasa será el componente EGII. En una realización preferente, al menos 90% de la proteína total de celulasa es el componente EGII. En una realización más preferente, al menos 95% de la proteína total de celulasa es el componente EGII.

Varios procedimientos descritos en la bibliografía son útiles para producir las mezclas de enzima celulasa de la presente invención. Por ejemplo, teóricamente, las cepas de Trichoderma pueden modificarse genéticamente para suprimir la producción de los componentes CBHI, CBHII, EGI, EGIII y EGV. Véase Clarkson 474 y Clarkson 428. Alternativamente, los componentes se pueden eliminar o purificar de un preparado de celulasa natural usando cromatografía de intercambio iónico para producir las mezclas deseadas. Esta última técnica se ha ilustrado en particular en los Ejemplos 1 y 2.

Para determinar las cantidades relativas de cada uno de los componentes de celulasa en una mezcla de celulasa, el procedimiento que más comúnmente se utilizaría sería realizar una tanda de gel focalizador isoeléctrico estándar (IEF) y comparar el perfil de proteína con el de patrones purificados de cada componente. Una descripción de este procedimiento se encuentra en el Ejemplo 2. Este procedimiento es suficiente para análisis de rutina de preparados de celulasa, pero no identifica unívocamente las proteínas. La mezcla aquí preferida, 95% de EGII, revela una banda individual de proteína de celulasa con un punto isoeléctrico que está entre aproximadamente 5,0 y 5,6 dependiendo de la precisión del equipo de medida, estando típicamente el punto isoeléctrico en 5,3.

El procedimiento definitivo es determinar la secuencia de aminoácidos de cada una de las proteínas para verificar que casan con las previamente publicadas para los componentes de celulasa entera o truncada de Trichoderma, como figura en las referencias de la Tabla 1. La determinación de las secuencias de aminoácidos se describe en varias referencias familiares a los expertos en la técnica, entre las que está incluida P. Matsudaira, Sequence from Picomole Quantities of Proteins Electroblotted onto Polivinylidene Difluoride Membranes, Journal of Biological Chemistry, vol. 262, pág. 10035-10038 (1987), y K.L. Stone y K.R. Wiliams, High Performance Liquid Chromatographic Peptide Mapping and Amino Acid Analysis in the Subnanomole Range, Journal of Chromatography, vol. 359, pág. 203-212 (1986).

Las mezclas de celulasa de esta invención pueden combinarse con varios coadyuvantes, como lo saben los expertos en la técnica. Por ejemplo, puede ser útil un tensioactivo (aniónico o no iónico) compatible con estos componentes de celulasa. Entre otros materiales posiblemente útiles con estas mezclas de celulasa están incluidos cargas, disolventes, tampones, estabilizadores de enzimas, agentes de control del pH, activantes de enzimas, coadyuvantes de detergencia, otros agentes antirredepósito, etc.

La composición de enzima se puede formular como producto sólido, pudiendo ser el sólido granular, secado por proyección o aglomerado. Alternativamente, la composición de enzima puede formularse como un líquido, un gel o un producto en pasta. Se prefiere aquí un preparado líquido.

Ejemplos de la presente invención

La descripción detallada anterior da cuenta de las composiciones de la invención y los procedimientos para hacer y usar las composiciones en el "desbarbado" de artículos de tejido para prendas de vestir. Los expertos en la técnica, basándose en las consideraciones de la memoria, identificarán otras condiciones de lavado tales como concentración, medidas, pH, temperatura y otras. Los ejemplos específicos siguientes ilustran beneficios y ventajas adicionales de la presente invención.

Ejemplo 1 Enriquecimiento de EGII de una composición de celulasa de Trichoderma

Se ajustaron a pH 7, con hidróxido sódico, aproximadamente 10 litros de un preparado comercial de celulosa de Trichoderma conocida como Iogen Cellulase (comercialmente disponible de Iogen Corporation, Ottawa, Ontario, Canadá), se dializó la preparación a través de una membrana de corte Amicon de un peso molecular 10.000 a una conductividad de 580 microsiemens y se diluyó a una concentración de proteína de 8 mg/ml con un pH de 7. La celulosa se aportó a una columna de 3 litros de resina de intercambio de aniones Q-Sepharose (comercialmente asequible de Pharmacia Biotech, de Uppsala, Suecia). A la columna se añadió un total de 9 litros de aportación. En estas condiciones, los componentes con puntos isoeléctricos bajos (incluidas CBHI, EGI y EGV) se unen a la columna más estrechamente que otros componentes. CBHI y EGI son, por tanto, los componentes más prominentemente unidos. En este momento, la columna se lavó con 9 litros de solución tampón de fosfato sódico 2 mM, pH 7, conductividad de 370 microsiemens. Se recogió el eluyente, se ajustó a pH 4 con ácido clorhídrico y se dializó a una conductividad de 200 microsiemens a través de una membrana de corte Amicon de un peso molecular de 10.000.

La solución resultante tenía eliminada la mayor parte de CBHI y EGI de la mezcla inicial de celulasa, como quedó verificado por la intensidad disminuida de estas bandas en los geles de IEF. Probablemente, también se había eliminado la EGV, aunque la concentración de EGV es tan baja en la mezcla inicial de celulasa que es difícil una estimación cuantitativa de su concentración.

En este punto, se aportó el eluyente dializado (10 g/l de proteína) a una columna de 60 ml de resina de intercambio de cationes S-Sepharose (comercialmente asequible de Pharmacia Biotech.). Se añadió a la columna un total de 60 ml de aportación y se lavó seguidamente con 180 ml de tampón de acetato sódico 2 mM, pH 4. Esta resina fija muy estrechamente los componentes con puntos isoeléctricos más bajos, entre los que estaría incluida EGII. El eluyente de lavado contenía principalmente CBHII así como EGIII y fue desechado.

Se añadió luego a la columna una solución 10 mM de tampón de acetato sódico, pH 4, para desorber la EGII. Los primeros 300 ml de eluyente correspondiente a esta aportación se recogieron en fracciones de 10 ml y luego se analizaron para determinar los componentes exactos presentes, por las etapas del Ejemplo 2.

Ejemplo 2 Análisis e identificación de los componentes de celulasa por IEF

Se usó una técnica estándar de focalización isoleéctrica de gel de poliacrilamida (IEF) para analizar la composición de componentes de celulasa. Este procedimiento se describe en Isoelectric Focusing Principles and Methods, (Pharmacia Fine Chemicals, 1982). Los geles eran de 5% de poliacrilamida y se trataron a pH 3-10. Las proteínas se tiñeron con azul Coomassie y se destiñeron con una mezcla de metanol y ácido acético.

Las muestras analizadas incluían partes alícuotas de las fracciones de 10 ml recogidas en la elución del Ejemplo 1. Estas partes alícuotas se diluyeron con de 2 a 5 mg/ml de proteína. Se analizó también una muestra de 50 microlitros de Iogen Cellulase, como también fueron analizadas muestras enriquecidas de CBHI, CBHII, EGI y EGII y marcadores de puntos isoeléctricos a diferentes puntos isoleléctricos.

La Iogen Cellulase tiene presentes bandas de proteínas en la totalidad de componentes individuales más varias otras proteínas. Las fracciones del eluyente del Ejemplo 1 eran deficientes en CBHI, CBHII, EGI, EGIII y EGV, como lo indicaba la ausencia de bandas correspondientes a estas proteínas en los puntos isoeléctricos de 4,3, 6,0, 4,6, 7,7 y 3,7, respectivamente. En las fracciones del eluyente del Ejemplo 1, sólo era visible una banda de proteína, a un punto isoeléctrico de 5,3. Esta banda corresponde a EGII, como lo indica el punto isoeléctrico y posterior observación de una gran actividad frente a carboximetilcelulosa y una baja actividad frente a papel de filtro.

La EGII es la única banda principal visible en estas fracciones. Es responsable del 95% de la totalidad de proteína de celulasa presente, siendo el resto CBHI, CBHII, EGI y EGIII. La cuantificación de la concentración de proteína se realiza por densitometría de barrido con láser, tal como usando un escáner Sharp JX 330 con software ImageMaster (comercialmente asequible de Pharmacia Biotech.).

Las fracciones de 10 ml, que principalmente eran de EGII, se combinaron y concentraron por ultrafiltración a 6,5 g/l y luego se almacenaron congeladas. Esta enzima se designó "EGII enriquecida" y se usó para experimentos posteriores.

Ejemplo 3 Eliminación mejorada de finos por EGII enriquecida

Se evaluaron como sigue cuatro preparados de enzimas de celulasa de Trichoderma en cuanto a su comportamiento en aplicaciones de desbarbado:

1. La celulasa EGII enriquecida del Ejemplo 2.

2. Un preparado de celulasa de 50% de EGI, 37% de EGII y 13% de EGIII. Este preparado está exento de CBHI. Este preparado casa con la mejor mezcla de Clarkson 853 según se indica en la Fig. 1. Se determinaron como sigue las proporciones de endonucleasas en esta mezcla: En Clarkson 853, en el Ejemplo 13, las proporciones de componentes de celulasa en la mezcla natural son CBHI 45-55%; CBHII 13-15%; EGI 11-13%, EGII 8-11%; EGIII 1-4%. En el Ejemplo 16, se dice que la enzima mejor y preferida tiene suprimida toda la CBHI y la CBHII. Si se eliminan CBHI y CBHII de la mezcla total y las concentraciones medias de las enzimas restantes se normalizan en total a 100%, el resultado será el que se ha señalado.

3. Un preparado de celulasa con 96% de CBHI, 2% de EGI y 2% de EGII. Este preparado casa con la mejor de las mezclas de que ha dado cuenta Bjork 463. Se determinaron las siguientes proporciones de enzimas en la mezcla: En Bjork 463, en el Ejemplo 3, Tabla III, se dice que la mezcla mejor de enzimas es 500 ppm de CBHI y 20 ppm de EGI más EGII estando éstas en cantidades iguales (véase línea 45). Tal mezcla de 500 ppm de CBHI, 10 ppm de EGI y 10 ppm de EGII tendrá las proporciones dadas antes.

4. Iogen Cellulase, un producto comercial de celulasa que tiene el conjunto natural de enzimas celulasa en las proporciones descritas en la Tabla 1 y representadas en la Figura 1.

La fase de evaluación para estas cuatro composiciones consistía en dos medidas: (1) eliminación de finos del tejido, lo que es deseable, y (2) destrucción del tejido, lo que es indeseable. En el Ejemplo 3 se discute la eliminación de finos y en el Ejemplo 4 se discute la destrucción de tejido.

La evaluación del desbardado se efectuó como sigue. El tejido constaba de una mezcla no teñida de 60% de Tencel® y 40% de algodón. Tencel es una marca comercial de Courtaulds Ltd. para su línea de tejido de liocel. La superficie del tejido tenía muchas barbas de la manera típica de tal tejido en las etapas intermedias de manufactura. En el fondo de un matraz erlenmeyer de fondo plano, de 250 ml, se puso una pieza circular de tejido de 7,8 cm de diámetro, de 1 gramo de peso. Sobre el tejido se puso un total de 145 bolas de acero de 4,76 milímetros de diámetro (peso total, 63 g). Las enzimas se diluyeron en solución tampón 50 mM de citrato (pH 4,8) tal que a 6 g de tampón se añadieron 7,5 mg de proteína. La solución de enzima/tampón se precalentó a 50ºC en baño de agua, luego se añadió al tejido. Se sacudieron los matraces a 225 rpm durante una hora en una mesa rotatoria de sacudidas New Brunswick. En este punto, se filtró el contenido de los matraces sobre papel de filtro de fibra de vidrio que se había pesado previamente. Se quitaron las bolas de acero y el papel de filtro se lavó tres veces con agua desionizada. Luego se secó el papel de filtro durante 90 minutos a 100ºC en horno. La cantidad recogida de finos se determinó restando el peso inicial del papel de filtro del peso final y expresando luego el resultado como porcentaje del peso inicial del tejido.

Los resultados se presentan en la Tabla 2. La celulasa enriquecida EGII liberó más finos del tejido que las celulasas de Clarkson 853, Clarkson 428 o la enzima comercial Iogen. La ventaja de la eliminación de finos por EGII enriquecida sobre las otras enzimas se puso también de manifiesto en la inspección visual del tejido. Al eliminar más finos del tejido, la EGII enriquecida produce un aspecto más uniforme, más aceptable que las otras enzimas ensayadas. Alternativamente, se puede lograr un nivel dado de eliminación de finos con menos EGII enriquecida que con las otras enzimas, lo que da por resultado un tratamiento de desbarbado más económico.

TABLA 2 Resultados del desbarbado con EGII enriquecida y otras enzimas

Enzima	Finos eliminados
	% del peso inicial el tejido
A 7,5 mg/g de tejido EGII enriquecida, 95% de EGII	0,80

Clarkson 853	0,45

50% de EGI, 37% de EGII, 13% de EGIII Clarkson 428	0,05

90% de CBHI, 5% de EGI, 5% de EGII Iogen Cellulase	0,65

45-55% de CBHI, 13-15% de CBHII, 11-13% de EGI,
8-11% de EGII, 1-4% de EGIII

Ejemplo 4 Destrucción aminorada de fibras por lelulasa EGII enriquecida

La segunda parte de la evaluación de enzimas es la medida de la destrucción del tejido durante el desbarbado. Esta evaluación se realiza usando la cantidad de enzima (mg por gramo de tejido) - para cada uno de las cuatro mezclas de enzimas a ensayar - que alcanzará una eliminación "total" de finos (usualmente aproximadamente 0,6% en peso del peso inicial del tejido) y midiendo luego la cantidad del azúcar glucosa producida para deducir cuánta fibra de tejido se había destruido. Idealmente, una eliminación de 0,6% del peso inicial del tejido corresponde a eliminar sólo los finos indeseables, con poca o ninguna destrucción adicional de fibra dentro de la estructura del tejido.

En este ejemplo se usaron las mismas enzimas del Ejemplo 3. Los tratamientos de desbarbado y la recogida de filtrados se realizaron usando las mismas técnicas del Ejemplo 3, excepto que la dosis de cada enzima se escogió de manera que, después del examen, resultó que todos los finos existentes (aproximadamente 0,6% del peso inicial del tejido en las muestras a ensayar) se habían eliminado.

La cantidad de tejido - además de los finos - destruida también a glucosa se determinó como sigue. A los filtrados se añadió ácido sulfúrico a una concentración de 20 gramos por litro y las soluciones se calentaron a 121ºC en un autoclave de vapor de agua durante 1 hora. Los matraces se enfriaron luego a temperatura ambiente y el pH se ajustó a 5 con solución tampón de citrato sódico. Se midió luego la concentración de glucosa en los filtrados con un dipositivo de HPLC amperiométrica pulsada Dionex (Dionex Co., San Jose, California). La concentración de glucosa se relacionó con el peso inicial de tejido para determinar el porcentaje de conversión a glucosa.

Los ensayos se realizaron con varios niveles de celulasa para establecer el nivel requerido para eliminar finos de cuatro muestras de tejido, cada uno medido para tener aproximadamente 0,6% del peso inicial del tejido como finos. El nivel requerido para EGII enriquecida era de sólo 6,0 miligramos de enzima por gramo de tejido. La enzima de Clarkson 853 requería 9,0 mg/gramo. La enzima de Clarkson 428 requería 45,0 mg/g.m La celulasa Iogen requería 7,2 mg/g. Una vez que se había identificado un nivel de celulasa para un desbarbado total, podía deducirse la cantidad de tajido también destruido a glucosa por ese nivel de celulasa, puesto que, en cada ensayo, la glucosa atribuible a la eliminación de sólo los finos era constante. Los resultados se presentan en la Tabla 3.

La celulasa EGII enriquecida causaba en los ensayos de desbarbado total una destrucción de tejido mucho menor que cualquier otra de las otras tres mezclas de enzima evaluadas: la celulasa comercial, la enzima de Clarkson 853 y la enzima de Clarkson 428. La menor destrucción de tejido por la celulasa EGII enriquecida indica que resulta un tejido más fuerte por tratamiento con EGII que por tratamiento con cualquier otra de las mezclas conocidas.

Para un tratamiento de desbarbado dado, la celulasa EGII enriquecida causa 63% menos destrucción de tejido que las mezclas de celulasa consideradas en Clarkson 853.

Para un tratamiento de desbarbado dado, la celulasa EGII enriquecida causa 80% menos destrucción de tejido que las mezclas de celulasa consideradas en Clarkson 428.

Para un tratamiento de desbarbado dado, la celulasa EGII enriquecida causa 88% menos destrucción de tejido que las mezclas de celulasa usadas para tratamientos comerciales de desbarbado.

TABLA 3 Resultados de desbarbado por celulosa empobrecida y otras enzimas

Enzima	Nivel de	Destrucción de
	celulasa	tejido* % del
	mg/g de tejido	peso inicial
EGII, 95% de EGII	6,0	0,30

Clarkson 853, 50% de EGI, 37%	9,0	0,80
de EGII, 13% de EGIII

Clarkson 428, 90% de CBHI, 5%	45,0	1,50
de EGI, 5% de EGII

Celulasa Iogen	7,2	2,50

* Después de eliminar todos los finos (aproximadamente 0,6% del peso inicial del tejido)

Si bien se han presentado y descrito realizaciones preferentes de la presente invención, la invención ha de definirse sólo por el ámbito de las reivindicaciones anexas, incluido cualquier equivalente de cada elemento de reivindicación enumerada que se le ocurriría a un experto de cualificación corriente, y no fuera excluida por consideraciones de la técnica anterior.

Claims

1. Un procedimiento de desbarbado enzimático de artículos de algodón, consistiendo la mejora en minimizar la pérdida de resistencia mecánica del tejido mientras que se genera un aspecto uniforme de la superficie, mediante tratamiento de los artículos con una composición de enzimas de celulasa de Trichoderma que está constituida por un contenido de proteína de celulasa que como mínimo es de 80% de endoglucanasa II (EGII).

2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la enzima celulasa está constituida por un contenido de proteínas de celulasa que como mínimo es de 95% de EGII.

3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la enzima de celulasa está constituida por una banda individual de proteína de celulosa que tiene un punto isoeléctrico que es de entre 5,0 y 5,6.

4. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la enzima de celulosa está constituida por una banda individual de proteína de celulasa que tiene un punto isoeléctrico que es de aproximadamente 5,3, mientras que exhibe una alta actividad frente a la carboximetilcelulosa y una baja actividad frente a papel de filtro, siendo el desbarbado de artículos de algodón para la eliminación de menos de aproximadamente 3,0% del peso inicial de los artículos de algodón.

5. Una composición de enzima de celulasa de Trichoderma que está constituida por un contenido de proteínas de celulasa que es de, como mínimo, 80% de endoglucanasa II (EGII), para uso en el desbarbado enzimático de artículos de algodón, con el fin de minimizar la pérdida de resistencia mecánica del tejido a la vez que se crea un aspecto uniforme de la superficie de tales artículos.

6. La composición de enzima de acuerdo con la reivindicación 5, que está constituida por un contenido de proteína de calulasa que es de, como mínimo, 95% de EGII.

7. La composición de enzima de acuerdo con la reivindicación 5, que está constituida por una banda individual de proteína de celulasa, que tiene un punto isoeléctrico que es de entre 5,0 y 5,6.

8. La composición de enzima de acuerdo con la reivindicación 7, que está constituida por una banda individual de proteína de celulasa que tiene un punto isoeléctrico que es de aproximadamente 5,3, al tiempo que presenta una elevada actividad frente a la carboximetilcelulosa y una baja actividad frente al papel de filtro y el desbarbado enzimático es para eliminar menos de aproximadamente 3,0% del peso inicial de los artículos de algodón.

9. Un procedimiento para tratar artículos de algodón para crear una superficie uniforme a la vez que se minimiza la pérdida de resistencia mecánica del tejido, que consiste en tratar los artículos con una composición de enzima celulasa de Trichoderma que tiene cantidades aminoradas de los componentes naturales de proteína CBHI, CBHII, EGI y EGIII, de manera que resulte un contenido de proteína de celulasa de, como mínimo, 80% de endonucleasa II (EGII).

10. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 9, en el que el contenido de proteína de celulasa es de, como mínimo, 95% de EGII.

11. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 9, en el que el contenido de proteína de celulasa está constituida por una banda individual de proteína de celulasa, que tiene un punto isoeléctrico que es de entre 5,0 y 5,6.

12. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 11, en el que el contenido de proteína de celulasa está constituida por una banda individual de proteína de celulasa, que tiene un punto isoeléctrico que es de aproximadamente 5,3, al tiempo que presenta una elevada actividad frente a la carboximetilcelulosa y una baja actividad frente al papel de filtro, y el tratamiento de artículos de algodón es para la eliminación de menos de aproximadamente 3,0% del peso inicial de los artículos de algodón.