ES2212655T3 - Antibioticos de cetolidos. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de la fórmula o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptable, en la que R14 y R15 son H y R12 y R13 se seleccionan, cada uno independientemente, entre H y metilo.

Description

Antibióticos de cetólidos.

Antecedentes de la invención

La invención se refiere a nuevos compuestos macrólidos que son útiles como agentes antibacterianos y antiprotozoicos en mamíferos, incluido el hombre, así como en peces y aves. Esta invención se refiere también a composiciones farmacéuticas que contienen los nuevos compuestos y a métodos para tratar las infecciopnes por bacterias y protozoos en mamíferos, peces y aves mediante administración de los nuevos compuestos a mamíferos, peces y aves que requieren tal tratamiento.

Se sabe que los antibióticos macrólidos son útiles en el tratamiento de un amplio espectro de infecciones bactarianas y protozoicas en mamíferos, peces y aves. Entre tales antibióticos están incluidos varios derivedos de eritromicina A tales como acitromicina, asequible comercialmente y a la que se hace referencia en las patentes de EE.UU. nº. 4.474.768 y nº. 4.517.359, que se incorporan aquí por referencia en su totalidad. Se discuten y reivindican otros antibióticos macrólidos en la solicitud publicada de PCT nº. WO 98/56800 (publicada el 17 de diciembre de 1998), que designa la patente de EE.UU. nº. 5.527.780, concedida el 18 de junio de 1996; solicitud provisional de patente de EE.UU. nº. 60/101263 (presentada el 22 de septiembre de 1998) (nº. del expediente de agente PC 10406; solicitud provisional de patente de EE.UU. nº 60/111.728 (presentada el 10 de diciembre de 1998) (expediente de agente 10494); solicitud publicada de PCT nº. WO 98/01546 (publicada el 15 de enero de 1998); solicitud publicada de PCT nº. WO 98/01571 (publicada el 15 de enero de1998), solicitud publicada de EP nº. 949268 (concedida el 13 de octubre de 199) y patente U.S. 5.747.467 (expedida el 5 de mayo de 1998). Cada una de las anteriores patentes y solicitudes de patentes de EE.UU. y solicitudes de patentes EP y PCT se incorpora aquí en su totalidad por referencia. Al igual que la acitromicina y otros antibióticos macrólidos, los nuevos compuestos macrólidos de la presente invención poseen actividad frente a varias infecciones por bacterias y protozoos que se describen más adelante.

El documento WO 99/25365 describe el uso de cetólidos para preparar composiciones farmacéuticas para prevenir complicaciones trombóticas arteriales relacionadas con la ateroesclerosis.

El documento EP 1004592 describe derivados de eritromicina que son efectivos frente a infecciones tales como legionela y clamidia.

El documento EP 1016669 describe otros derivados de eritromicina que tienen actividad frente a bacterias estafilococos, estreptococos y neumococos.

La presente invención se refiere a compuestos y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de la fórmula:

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en la que R^{12}, R^{13}, R^{14} y R^{15} se seleccionan, cada uno independientemente, entre H, halo, metilo y etilo. Realizaciones más específicas incluyen los compuestos de la fórmula 1 en la que R^{14} y R^{15} son, ambos, H y R^{12} y R^{13} se seleccionan, cada uno independientemente, entre H y metilo. En una realización preferente de los compuestos de fórmula 1, R^{12}, R^{13}, R^{14} y R^{15} son, cada uno, H.

La invención también se refiere a una composición farmacéutica para el tratamiento de una infección bacteriana o una infección protozoica en un mamífero, un pez o un ave, que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula 1 o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptable, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención también se refiere a un método para tratar una infección bacteriana o una infección protozoica, o un trastorno relacionado con una infección bacteriana o protozoica en un mamífero, un pez o un ave, que comprende administrar al mencionado mamífero, pez o ave una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula 1 o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptable.

El término "tratar", tal como se usa aquí, a no ser que se indique lo contrario, significa invertir, aliviar. inhibir, o prevenir, el progreso del trastorno o dolencia al que se aplica tal término, o uno o más síntomas de tal trastorno o dolencia. El término "tratamiento", tal como se usa aquí, se refiere al acto de tratar según se ha definido "tratar" inmediatamente antes.

Tal como se usan aquí, a no ser que se indique lo contrario, los términos o frases "infección(es) bacteriana(s)", "infección(es) protozoica(s)" y "trastornos relacionados con infecciones bacterianas o infecciones protozoicas" incluyen los siguientes: neumonía, otitis media, sinusitis, bronquitis, tonsilitis y mastoiditis relacionadas con infecciones por Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Moraxella Catarrhalis, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, E. aecium, E. casselflavus, S. epidermis, S. haemolyticus o spp Peptoestreptococcus.; faringitis, fiebre reumática y glomerulonefritis relacionada con infección por Streptococcus pyogenes, grupos C y G de estreptococos, Corynebacterium diphteriae, o Actinobacillus haemoliticum; infecciones del tracto respiratorio relacionadas con infección por Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae o Chlamydia pneumoniae; infecciones de la sangre y tejidos, incluidas endocarditis y osteomilits, causadas por S. aureus, S. haemolyticus E. faecalis, E. faecium, E. durans, incluidas cepas resistentes a agentes antibacterianos conocidos tales como, entre otros, \beta-lactamas, vancomicina, aminoglicósidos, quinolonas, cloranfenicol, tetraciclinas y macrólidos; infecciones y abscesos no complicados de la piel y tejido blando y fiebre puerperal relacionada con infección por Staphylococcus aureus, estafilococos coagulasa-negativos, (esto es, S. epidermis, S. haemoliticus, etc.), Streptococcus pyrogenes, Streptococcus agalactiae, grupos de estreptococos C-F (estroptococos de colonia pequeña), Streptococcus viridans, Corynebacterium minutisimum, spp Clostridium., o Bartonella henselae; infecciones agudas, no complicadas, del tracto urinario relacionadas con Staphylococcus aureus, especies de estafilococos coagulasa-
negativa, o spp Enterococcus; uretritis y cervicitis; enfermedades de transmisión sexual relacionadas con infección por Chlamydia trachomatis, Haemophilus ducreyi, Treponema pallidum, Ureaplama urealyticum, o Neisarria gonorrheae; enfermedades por toxinas relacionadas con infecciones por S. aureus (envenenamiento por alimentos y síndrome de shock tóxico), estreptococos de los grupos A, B y C; úlceras relacionadas con infecciones por Helicobacter pylori; síndromes febriles sistémicos relacionados con infecciones por Borrelia recurrentis; enfermedad de Lyme relacionada con infecciones por Borrelia burgdorferi; conjuntivitis, queratitis y dacrocictitis relacionada con infecciones por Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrheae, S. aureus, S. pneumoniae, S. pyrogenes, H. influenzae o spp Listeria; enfermedad de complejo diseminado de Mycobacterium avium (MAC) relacionada con infecciones por Mycobacterium avium o Mycobacterium intracellulare; infecciones causadas por Mycobacterium tuberculosis, M. leprae, M. paratuberculosis, M. kansasii o M. chelonei; gastroenmteritis relacionada con infección por Campylobacter jejuni; gangrena gaseosa relacionada con infección por spp Cryptosporidium; infección odontogénica relacionada con infección por estreptococos viridans; tos persistente relacionada con infección por Bordetella pertussis; gangrena gaseosa relacionada con infección por Clostridium perfriongens o spp Bacteroides; y ateroesclerosis o enfermedad cardiovascular relacionada con infección por Helicobacter pylori o Chlamydia pneumoniae. Entre las infecciones bacterianas e infecciones protozoicas, y trastornos relacionados con tales infecciones, que se pueden tratar o prevenir en animales están incluidas las siguientes: enfermedad respiratoria bovina relacionada con infección por P. haemolytica, P. multocida, Mycoplasma bovis o spp Boredetella; enfermedad entérica vacuna relacionada con infecciones por E. coli o protozoos (esto es, coccidia, cryptosporidia, etc.); mastitis de la vaca lechera relacionada con infecciones por S. aureus, Strep. uberis, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, spp Klebsiella; Corynebacterium o spp Enterococcus; enfermedad respiratoria de porcinos relacionada con infección por A. pleuro, P. multocida o spp Mycoplasma; enfermedad entérica de porcinos relacionada con infección por E. coli, Lawsonia intracellularis, Salmonella o Serpuliona hyodysinteriae; dermatitis queratínica en las patas en vacas, relacionada con infección por spp Fusobacterium; metritis de vacas relacionada con infección por E. coli; verrugas capilares en vacas relacionadas con infección por Fusobacterium necrophorum o Bacteroides nodosus; ojo rosado vacuno relacionado con infección por Moraxella bovis; aborto prematuro de vacas relacionado con infecciones por protozoos (esto es, neosporium); infección del tracto urinario en perros y gatos, relacionada con infección por E. coli; infecciones de la piel y tejido blando en perros y gatos relacionada con infección por S. epidermis, S. intermedius, Staphylococcus de coagulasa-negativa o P. multocida; e infecciones dentales u orales en perros y gatos relacionadas con infecciones por spp Alcaligenes, spp Bacteroides, spp Clostridium., spp Enterobacter., Eubacterium, Peptostreptococcus, Porphyromonas o Prevotella. En "The Sandford Guide To Antimicrobial Therapy", por J. P. Sandofor y otros, (Antimicrobial Therapy, Inc., 1996), se da cuenta de otras infecciones bacterianas y protozoicas, y trastornos relacionados con ellas, que se pueden tratar o prevenir de acuerdo con el método de la presente invención.

La frase "sal(es) farmacéuticamente aceptable(s)", tal como se usa aquí, incluye, a no ser que se indique lo contrario, sales o grupos ácidos o básicos que pueden estar presentes en los compuestos de fórmula 1. Los compuestos de fórmula 1 que son de naturaleza básica son capaces de formar una amplia variedad de sales con varios ácidos orgánicos o inorgánicos. Los ácidos que se pueden usar para preparar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de tales compuestos básicos de fórmula 1 son las que forman sales no tóxicas de adición de ácido, esto es, sales que contienen aniones farmacológicamente aceptables, tales como sales acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, edetato cálcico, camsilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, dihidocloruro, edetato, edisilato, estolato, esilato, etilsuccionato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, hidrobromuro, hidrocloruro, yoduro, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, oleato, oxalato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacto-uronato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietiyoduro y valerato.

Los compuestos de fórmula 1 que son de naturaleza ácida son capaces de formar sales de base con varios cationes farmacológicamente aceptables. Los ejemplos de tales sales incluyen las sales de metales alcalinos y alcalinotérreos y, en particular, las sales sódicas y potásicas.

La presente invención incluye también todas las formas radiactivamente marcadas de los compuestos de fórmula 1 y sus sales farmacéuticamente aceptables, en las que el marcador radiactivo se selecciona entre ^{3}H, ^{11}C y ^{14}C. Tales compuestos marcados radiactivamente son útiles como herramientas para investigación o diagnosis.

Ciertos compuestos de fórmula 1 pueden tener centros asimétricos y, por tanto, existir en diferentes formas enantiómeras. Esta invención se refiere al uso de todos los isómeros ópticos y estereoisómeros de los compuestos de fórmula 1 y sus mezclas. En particular, la invención incluye los isómeros E y los Z del grupo -OR^{1} (en el que X^{2} es =NOR^{1}) conectado al nitrógeno del resto de oxima en el C-9 del anillo de macrolido de fórmula 1.

La presente invención incluye también compuestos marcados isotópicamente, y sus sales farmacéuticamente aceptables, que son idénticos a los indicados en la fórmula 1, pero diferenciados por el hecho de que uno o más átomos están reemplazados por un átomo que tiene una masa atómica o un número de masa diferente de la masa atómica o el número de masa usualmente encontrado en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en los compuestos de la presente invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor o cloro, tales como ^{2}H, ^{3}H, ^{13}C, ^{14}C, ^{15}N, ^{18}O, ^{17}O, ^{36}S, ^{18}F y ^{36}Cl, respectivamente. Los compuestos de la presente invención, sus prefármacos y las sales farmacéuticamente aceptables de los mencionados compuestos o los mencionados prefármacos que contienen los antes mencionados isótopos y/u otros isótopos de otros átomos están dentro del ámbito de la presente invención. Ciertos compuestos de la presente invención marcados isotópicamente, por ejemplo, aquéllos en los que se han incorporado ^{3}H y ^{14}C, son útiles en los ensayos de distribución de fármacos y/o tejido sustrato. Son particularmente preferidos los isótopos hidrógeno tritiado, esto es, ^{3}H, y ^{14}C por su fácil preparación y detectabilidad. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio, ^{2}H, puede aportar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, aumento de la semivida in vivo o exigencias de dosis menores y, por tanto, tales isótopos pueden ser preferidos en algunas circunstancias. Por lo general, los compuestos de fórmula 1 de esta invención, marcados isotópicamente y sus prefármacos se pueden preparar por procedimientos descritos en los Esquemas y/ en Ejemplos y Preparaciones que se presentan más adelante sustituyendo un reactivo no marcado isotópicamente con un reactivo marcado isotópicamente disponible con facilidad.

Esta invención abarca también composiciones farmacéuticas y métodos para tratar infecciones bacterianas mediante administración de prefármacos de compuestos de la fórmula 1. Los compuestos de fórmula 1 que tienen grupos amino, amido, hidroxi o carboxílicos libres pueden convertirse en prefármacos. Los prefármacos incluyen compuestos en los que un resto de aminoácido, o una cadena de polipéptido de dos o más restos de aminoácido (por ejemplo, dos, tres o cuatro) está unido covalentemente mediante una unión amida o éster a un grupo libre amino, hidroxi o ácido carboxílico de compuestos de fórmula 1. En los restos de aminoácidos están incluidos, aunque no únicamente, los 20 aminoácidos que se presentan en la naturaleza designados comúnmente por tres símbolos de letras y también están incluidos 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, 3-metilhistidina, norvalina, \beta-alanina, ácido \gamma-aminobutírico, citrulina, homocisteína, homoserina, ornitina y metioninasulfona. También están incluidos tipos adicionales de prefármacos. Por ejemplo, se pueden derivatizar grupos carboxilo libres como amidas o ésteres de alquilo. Se pueden derivatizar grupos hidroxi libres usandogrupos hemisuccinatos, ésteres fosfato, dimetilaminoacetatos y fosforiloximetiloxi- carbonilos (relación que no es limitativa), según se indica en Adevanced Drug Delivery Reviews 1996, 19, 115. También están incluidos prefármacos carbamato de grupos hidroxi y amino, como lo están los prefármacos carbonato, ésteres sulfonato y ésteres sulfato de grupos hidroxi. También se abarca la derivatización de grupos hidroxi como (aciloxi)metil y (aciloxi)etil éteres en los que el grupo acilo pueden ser un éster alquílico, opcionalmente sustituido con grupos con funcionalidad éter, amina y ácido carboxílico y otros, o en los que el grupo acilo es un éster de un aminoácido de los descrito antes. Se describen prefármacos de este tipo en J. Med. Chem., 1996, 39, 10. También se pueden derivatizar aminas libres como amidas, sulfonamidas o fosfonamidas. Todos estos restos de prefármacos pueden incorporar grupos que incluyen funcionalidades éter, amina y ácido carboxílico y otras.

Descripción detallada de la invención

La preparación de los compuestos de la presente invención se ilustra en los Esquemas siguientes.

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Esquema 1

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Esquema 2

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Esquema 2 (continuación)

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Esquema 2 (continuación)

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Esquema 3

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La preparación de los compuestos de la presente invención se ilustra en los Esquemas anteriores. Los materiales de partida y/o compuestos finales de fórmula 1 en los que R^{10} es un resto diferente de etilo, dentro de la definición de R^{10} dada antes, pueden prepararse como se describe en las solicitudes publicadas de PCT WO 98/01571 (Biotica Tech. Ltd. y Pfizer Inc.) y WO 98/01546 (cedida a Biotica Tech. Ltd.). Otros métodos específicos que tratan de la síntesis de los compuestos de la presente invención son considerados en la publicación de solicitud de patente internacional PCT número WO 98/38199 (publicada el 3 de septiembre de 1998), publicación de solicitud de patente internacional PCT número WO 98/56800 (publicada el 17 de diciembre de 1998), solicitud de patente provisional de EE.UU, número 60/101.263 (presentada el 22 de septiembre de 1998), solicitud de patente provisional de EE.UU. número 60/111.728 presentada el 10 de diciembre de 1998), solicitud de patente europea número EP 487.411 y solicitud de patente europea número EP 799.833. En los Esquemas anteriores, todos los sustituyentes son lo definido para la fórmula 1 en los que antecede, a no ser que se indique lo contrario.

Los materiales de partida pueden requerir o no requerir una protección apropiada del grupo funcional antes de que puedan efectuarse varias modificaciones, y la desprotección después de haber efectuado las modificaciones deseadas. Los grupos protectores más comúnmente usados para los restos amino en los compuestos macrólidos de esta invención son grupos benciloxicarbonilo (Cbz) y t-butiloxicarbonilo (Boc). Generalmente, los grupos hidroxilo se protegen como acetatos, carbonatos de Cbz o con un grupo trialquilsililo. El grupo C-2'-hidroxilo es un grupo hidroxilo potencialmente reactivo entre los numerosos grupos hidroxilo presentes en los compuestos macrólidos del tipo aquí reivindicado. El grupo C-2' hidroxilo se protege selectivamente tratando el compuesto con un equivalente de anhídrido acético en diclorometano en ausencia de una base externa. Este procedimiento convierte selectivamente el grupo
C-2' hidroxilo en el correspondiente acetato. El grupo protector de hidroxilo puede eliminarse por tratamiento del compuesto con metanol a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 0ºC-40ºC a 65ºC durante de 10 a 48 horas. Otros métodos de protección selectiva y desprotección son familiares a los expertos en la técnica.

En cuanto al Esquema 1, el compuesto de la fórmula 5 en la que R^{11} es un grupo halo y todos los otros sustituyentes son lo definido antes, pueden prepararse tratando el compuesto de fórmula 4 con una base tal como hidruro sódico, hidruro potásico, hexametildisilazida potásica (KHMDS), piridina, carbonato sódico o diisoppropilamida de litio, preferiblemente KHDMS, y un agente de halogenación tal como N-fluorobencenosulfoimida, SELECTFLUOR^{MC} (comercializado por Air Products and Chemicals, Inc., Allentown, Pensilvania, EE.UU.) para fluoración, tribromuro de piridinio o bromuro de cianógeno para bromación o hexacloroetano para cloración, en un disolvente tal como N,N-dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF), CH_{2}Cl_{2} o N-metilpirrolidona, o una mezcla de los anteriores disolventes, preferiblemente DMF. La temperatura de reacción, que depende mucho del reactivo usado, puede ser de -78ºC a 60ºC. En esta etapa, R^{8} preferiblemente es un grupo protector de hidroxi tal como un grupo acetilo, un grupo bencilo o un grupo trialquilsililo. Para obtener el compuesto de fórmula 6, la desprotección del C-2'-hidroxi se puede efectuar usando metanol si R^{8} es un grupo acetilo, hidrogenación si R^{8} es un grupo bencilo, o un anión fluoruro tal como fluoruro de tributilamonio si R^{8} es un grupo trialquilsililo. El compuesto de fórmula 6 corresponde al compuesto de fórmula 1 en la que R^{8} es H.

El Esquema 2 ilustra un método para preparar los compuestos de la presente invención introduciendo el grupo R^{11} en una etapa temprana de la síntesis de los compuestos finales. En la etapa 1 del Esquema 2, se puede introducir un grupo R^{11} halo esencialmente de acuerdo con el mismo procedimiento descrito para el Esquema 1. En la etapa 2 del Esquema 2, el compuesto de fórmula 9 puede prepararse tratando el compuesto de fórmula 8 con una base tal como 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) y 1,1'-carbonildi-imidazol (CDI) en cloruro de metileno. El tratamiento del compuesto de fórmula 9 con hidrazina en acetonitrilo a aproximadamente 60ºC proporciona el carbazato cíclico de fórmula 10. El tratamiento del compuesto de fórmula 10 con O-alquilhidroxiamina en etanol proporciona la oxima de fórmula 11. Una aminación reductora con un aldehído apropiado de la fórmula R^{2}-C(O)H y la desprotección, si se desea, del grupo C-2' hidroxi proporciona el compuesto de la fórmula 12, que corresponde al compuesto de la fórmula 1 en la que X^{1} es -NH- y X^{2} es =NOR^{1}. El compuesto de fórmula 10 también puede convertirse en un compuesto de la fórmula 14 en la que X^{1} es -NH-, según se indica en la etapa 4' del Esquema 2, por tratamiento del compuesto de fórmula 10 con un heterociclo apropiado, tal como un imidazol sustituido, y un aldehído \alpha,\beta-insaturado, tal como acroleína, en ácido acético, a lo que sigue la reducción con borohidruro sódico.

El Esquema 3 ilustra la preparación de compuestos de la fórmula 13 que corresponden a compuestos de la fórmula 1 en la que X^{2} es =O. En este procedimiento, el compuesto de fórmula 9 puede prepararse como se ha descrito antes. El compuesto de fórmula 9 puede convertirse en el compuesto de la fórmula 13 en la que X^{1} es O, CR^{4}R^{5} o NR^{4}, por tratamiento del compuesto de fórmula 9 con NH_{2}-X^{1}-R^{2}, en el que X^{1} es O, CR^{4}R^{5} o NR^{4}.

Los compuestos de la presente invención pueden tener átomos de carbono asimétricos. Tales mezclas diastereómeras se pueden separar en sus diastereómeros individuales, sobre la base de sus diferencias fisicoquímicas, por métodos conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, por cromatografía o cristalización fraccionada. Los enantiómeros se pueden separar convirtiendo las mezclas enantioméricas en una mezcla diastereómera por reacción con un compuesto ópticamente activo apropiado (por ejemplo, alcohol), separando los diastereómeros y convirtiendo (por ejemplo, hidrolizando) los diastereómeros individuales en los correspondientes enantiómeros puros. Todos estos isómeros, incluidas las mezclas diatereómeras y los enantiómeros puros, se consideran parte de la invención.

Los compuestos de fórmula 1 que son de naturaleza básica son capaces de formar una amplia variedad de dieferentes sales con varios ácidos inorgánicos y orgánicos. Aunque tales sales deben ser farmacéuticamente aceptables para su administración a animales, a menudo es deseable en la práctica aislar inicialmente el compuesto de fórmula 1 de la mezcla de reacción como una sal farmacéuticamente inaceptables y convertirla luego simplemente en el compuesto base libre por tratamiento con un reactivo alcalino y convertir luego éste en una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácido de los compuestos básicos de esta invención se preparan fácilmente tratando el compuesto básico con una cantidad sustancialmente equivalente del ácido mineral u orgánico escogido en un medio disolvente acuoso o un disolvente orgánico adecuado tal como metanol o etanol. Después de evaporación cuidadosa del disolvente, se obtiene fácilmente la sal sólida deseada. También se puede precipitar la sal de ácido de una solución de la base libre en un disolvente orgánico añadiendo a la solución un ácido mineral u orgánico apropiado.

Los compuestos de la fórmula 1 que son de naturaleza ácida son capaces de formar sales de base con varios cationes farmacológicamente aceptables. Los ejemplos de tales sales incluyen las sales de metales alcalinos y alcalinotérreos y, en particular, las sales sódicas y potásicas. Estas sales pueden prepararse por técnicas convencionales. Las bases químicas que se usan como reactivos para preparar las sales de base farmacéuticamente aceptables de esta invención son las que forman sales de base no tóxicas con los compuestos ácidos de fórmula 1. El grupo de tales sales de base no tóxicas incluye las derivadas de cationes farmacológicamente aceptables tales como sodio, potasio, calcio, magnesio, etc. Estas sales se pueden preparar por tratamiento de los correspondientes compuestos ácidos con una solución acuosa que contiene los deseados cationes farmacológicamente aceptables y evaporando luego a sequedad la solución resultante, preferiblemente a presión reducida. Alternativamente, se pueden preparar también mezclando soluciones de los compuestos ácidos y el deseado alcóxido de metal alcalino en alcanoles inferiores y evaporando a sequedad luego la solución resultante de la misma manera que anteriormente se ha indicado. En cualquier caso, preferiblemente se emplean cantidades estequiométricas de reactivos con el fin de asegurar que la reacción sea completa y obtener rendimientos máximos del producto final deseado.

La actividad de los compuestos de la presente invención frente a patógenos bacterianos y protozoicos se demuestra por la capacidad de los compuestos de inhibir el crecimiento de cepas definidas de patógenos humanos (Ensayo I) o animales (Ensayo II).

Ensayo I

El Ensayo I, que se describe seguidamente, utiliza metodología y criterios de interpretación convencionales y está diseñado para proporcionar directrices para las modificaciones químicas que pueden conducir a compuestos que salvan mecanismos definidos de resistencia a macrólidos. En el Ensayo I, se reúne un panel de cepas bacterianas para incluir una variedad de especies patógenas diana, incluidos representantes de mecanismos de resistencia a macrólidos que han sido caracterizados. El uso de este panel permite que sea determinada la relación estructura química/actividad con respecto a la potencia, espectro de actividad y elementos o modificaciones estructurales que pueden ser necesarios para obviar los mecanismos de resistencia. En la Tabla siguiente se muestran los patógenos bacterianos que comprende el panel de exploración. En muchos casos, la cepa madre susceptible a macrólidos y la cepa resistente a macrólidos derivada de ella son capaces de proporcionar una estimación más precisa de la capacidad de los compuestos para superar el mecanismo de resistencia. Las cepas que contienen el gen con la designación de erm/A/ermB/ermC son resistentes a los antibióticos de macrólidos, incosamidas y estreptogramina B debido a modificaciobnes (metilación) de moléculas de 23S rRNA por una Erm metilasa, lo que generalmente impide la unión de las tres clases estructurales. Se han descrito dos tipos de eflujo de macrólidos; msrA codifica un componente de un sistema de eflujo en estafilococos que impide la entrada de macrólidos y estreptograminas, mientras que mefA/E codifica una proteína de transmembrana que parece que efluye sólo macrólidos. Puede producirse una inactivación de antibióticos macrólidos y puede ser mediada por una fosforilación del 2'-hidroxilo (mph) o por escisión de la lactona macrocíclica (esterasa). Las cepas se pueden caracterizar usando tecnología convencional de reacción en cadena de polimerasa (PCR) y/o secuenciación del determinante de la resistencia. J. Sutcliffe y otros, "Detection of Erytromycin-Resistant Determinants by PCR", Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 40(11), 2562-2566 (1996), describen el uso de tecnología de PCR en esta aplicación. El ensayo se realiza en bandejas de microtitulación y se interpreta de acuerdo con "Performnce Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests- Sixth Edition; Approved Standard", publicada por el National Commitee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS); se usa la concentración inhibidora mínima (MIC) para comparar cepas. Los compuestos se disuelven inicialmente en dimetilsulfóxido (DMSO) como soluciones madre de
40 mg/ml.

Designación de la cepa.	Mecanismo(s) de resistencia a macrólidos.
Staphylococcus aureus 1116	Cepa madre susceptible
Staphylococcus aureus 1117	ermB
Staphylococcus aureus 0052	Cepa madre susceptible
Staphylococcus aureus 1120	ermC
Staphylococcus aureus 1032	msrA, mph, esterasa
Staphylococcus hemoliticus 1006	msrA, mph
Streptococcus pyogenes 0203	Cepa madre susceptible
Streptococcus pyogenes 1079	ermB
Streptococcus pyogenes 1062	Cepa madre susceptible
Streptococcus pyogenes 1061	ermB
Streptococcus pyogenes 1064	ermB
Streptococcus agalactiae 1024	Cepa madre susceptible
Streptococcus agalactiae 1023	ermB
Streptococcus pneumoniae 1016	Susceptible
Streptococcus pneumoniae 1046	ermB
Streptococcus pneumoniae 1095	ermB
Streptococcus pneumoniae 1175	mefE
Streptococcus pneumoniae 0085	Susceptible
Haemophilus influenzae 0131	Susceptible
Moraxella catarrhalis 0040	Susceptible
Moraxella catarrhalis 1055	Resistencia inmediata a la eritromicina
Escherichia coli 0266	Susceptible

El Ensayo II se utiliza para ensayar la actividad frente a Pasteurella multocida y el Ensayo II se utiliza para ensayar la actividad frente a Pasteurella haemolitica.

Ensayo II

Este ensayo está basado en el método de dilución de líquidos en formato de microlitro. Se inocula una sola colonia de P. multocida (cepa 59A067) en 5 ml de caldo de infusión de corazón en cerebro (BHI). Los compuestos a ensayar se preparan disolviendo 1 mg del compuesto en 125 \mul de dimetilsulfóxido (DMSO). Se preparan diluciones del compuesto a ensayar usando caldo de BHI no inoculado. Las concentraciones del compuesto a ensayar varían de 200 \mug/ml a 0,098 \mug/ml por diluciones seriales al doble. El BHI inoculado con P. multocida se diluye con caldo de BHI no inoculado par hacer una suspensión de 10^{4} células por 200 \mul. Las suspensiones de BHI se mezclan con las respectivas diluciones seriales del compuesto a ensayar y se incuban a 37ºC durante 18 horas. La concentración inhibitoria mínima (MIC) es igual a la concentración del compuesto que presenta una inhibición del 100% del crecimiento de P. multicida, determinada por comparación con el control no inoculado.

Ensayo III

El ensayo está basado en el método de dilución de agar usando un replicador de Steers. Se inoculan en caldo de BHI de dos a cinco colonias aisladas de placas de agar y se incuban durante la noche a 37ºC mientras que se sacude (200rpm). A la mañana siguiente, se inoculan en 3 ml de caldo de BHI recientemente preparado 300 \mul del precultivo de P. haemolitica totalmente crecido y se incuba a 37ºC mientras que se sacude (200 rpm). Se disuelven en etanol las cantidades apropiadas de los compuestos a ensayar y se preparan diluciones seriales al doble: Se mezclan dos ml de la correspondiente dilución serial con 18 ml de agar fundido con BHI y se solidifica. Cuando el cultivo inoculado de P. haemolitica alcanza la densidad estándar McFarland de 0,5, se inoculan aproximadamente 5 \mul de cultivo de P. haemolitica en placas de agar con BHI que contienen varias concentraciones de compuesto a ensayar usando un replicador Steers y se incuba durante 18 horas a 37ºC. Las concentraciones iniciales de compuesto a ensayar varían de 100 a 200 \mug/ml. La MIC es igual a la concentración del compuesto que presenta una inhibición del 100% del crecimiento de P. multicida, determinada por comparación con el control no inoculado.

La actividad in vivo de los compuestos de fórmula 1 se puede determinar por estudios convencionales de protección animal, bien conocidos por los expertos en la técnica y efectuados usualmente con ratones.

Se ponen los ratones en jaulas (10 por jaula) después de su llegada y se deja que se aclimaten durante un mínimo de 48 horas antes de usarlos. Se inoculan los animales intraperitonealmente con 0,5 ml de una suspensión de bacterias 3 x 10^{3} CFU/ml (cepa P. multocida 59A006). Cada experimento tiene como mínimo 3 grupos de control no medicados entre los que está incluido uno infectado con una dosis de provocación 0,1 X y dos infectadas con dosis de provocación 1 X; también se puede usar un grupo de provocación de 10X. Generalmente, en un estudio dado, pueden provocarse todos los ratones dentro de 30-90 minutos, especialmente si, para administrar la provocación, se usa una jeringa repititiva (tal como una jeringa Comwall®). 30 minutos después de que se haya iniciado la provocación, se da el primer compuesto del tratamiento. Puede ser necesaria una segunda persona para comenzar a administrar el compuesto si todos los animales no han sido provocados al final de los 30 minutos. Las vías de administración son la subcutánea o la oral. Las dosis subcutáneas se administran en la piel suelta detrás del cuello, mientras que las dosis orales se dan mediante una jeringa para dar alimentos. En ambos casos, se usa por ratón una dosis de 0,2 ml. Los compuestos se administran 30 minutos, 4 horas y 24 horas después de la provocación. En cada ensayo está incluido un compuesto de control de eficacia conocida que se administra por la misma vía. Los animales se observan diariamente y se registra el número de supervivientes de cada grupo. El control del modelo de P. multocida continúa durante 96 horas (4 días) después de la provocación.

La PD_{50} es la dosis calculada a la que el compuesto ensayado protege de la mortalidad 50% de un grupo de ratones con infección bacteriana que sería letal en ausencia de un tratamiento con fármacos.

Los compuestos de fórmula 1 y sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables (en lo que sigue, "los compuestos activos") pueden administrarse por vía oral, parenteral, tópica o rectal en el tratamiento o prevención de infecciones bacterianas o protozoicas. En general, estos compuestos se administran de forma muy deseable en dosis comprendidas entre aproximadamente 0,2 mg/por kg de peso corporal por día (mg/kg/día) y aproximadamente 200 mg/kg/día en dosis única o en dosis divididas (esto es, de 1 a 4 dosis por día), aunque necesariamente habrá variaciones dependiendo de la especie, el peso y el estado del sujeto que se está tratando y la vía particular de administración escogida. Sin embargo, se emplea muy deseablemente un nivel de dosificación que está en el intervalo de aproximadamente 4 mg/kg/día a aproximadamente 50 mg/kg/día. A pesar de ello, puede haber variaciones dependiendo de la especie del mamífero, pez o ave que se está tratando y su respuesta individual al mencionado medicamento, así como del tipo de formulación farmacéutica escogida y el período de tiempo y el intervalo temporal a los que se realiza tal administración. En algunos casos, unos niveles de dosificación por debajo del umbral inferior del intervalo mencionado pueden ser más que adecuados, mientras que, en otros casos, pueden emplearse unas dosificaciones aún mayores sin causar efectos secundarios perjudiciales, con tal de que tales dosis más altas se dividan primeramente en varios dosis más pequeñas para su administración a lo largo del día.

Los compuestos activos se pueden administrar solos o en combinación con vehículos o diluyentes aceptables por las vías antes indicadas, y tal administración puede efectuarse en dosis únicas o múltiples. Más en particular, los compuestos activos se pueden aplicar en una variedad de formas diferentes de dosificación, esto es, se pueden combinar con varios vehículos inertes farmacéuticamente aceptables en forma de comprimidos, cápsulas, losanges, trociscos, caramelos duros, polvos, aerosoles, cremas, bálsamos, supositorios, jaleas, geles, pastas, lociones, ungüentos, suspensiones acuosas, soluciones inyectables, elixires, jarabes, etc. Tales vehículos incluyen diluyentes o cargas sólidas, medios estériles acuosos y varios disolventes orgánicos no tóxicos, etc. Además, las composiciones farmacéuticas orales se pueden edulcorar y/o saborear adecuadamente. En general, los compuestos activos están presentes en tales formas de dosificación a niveles de concentración de aproximadamente 5,0% a aproximadamente 70% en peso.

Para administración oral, se pueden emplear comprimidos que contienen varios excipientes tales como celulosa microcristalina, citrato sódico, carbonato cálcico, fosfato dicálcico y glicina junto con varios desintegrantes tales como almidón (y, preferiblemente, almidón de maíz, patata o tapioca), ácido algínico y ciertos silicatos complejos y, además, agentes de granulación tales como polivinilpirrolidona, sacarosa, gelatina y goma arábiga. Adicionalmente, a los fines de producir comprimidos, frecuentemente son útiles agentes lubricantes tales como estearato magnésico, laurilsulfato sódico y talco. También pueden utilizarse como cargas en cápsulas de gelatina, composiciones sólidas de un tipo similar; en este aspecto, son materiales preferidos lactosa o azúcar de leche así como polietilenglicoles de alto peso molecular. Cuando se desean suspensiones acuosas y/o elixires para administración oral, el compuesto activo se puede combinar con varios agentes edulcorantes o saboreadores, colorantes y, si se desea, también agentes emulsivos y/o suspensivos junto con diluyentes tales como agua, etanol, propilenglicol, glicerina y varias combinaciones de ellos.

Para administración parenteral se pueden utilizar soluciones de un compuesto activo en aceite de sésamo o cacahuete o en un propilenglicol acuoso. Las soluciones acuosas debe ser tamponadas adecuadamente (preferiblemente, un pH de más de 8) si es necesario y el diluyente líquido primeramente se hace isotónico. Estas soluciones acuosas son adecuadas para inyección intravenosa. Las soluciones oleosas son adecuadas para inyección intraarticular, intramuscular y subcutánea. La preparación de todas estas soluciones en condiciones estériles es realiza fácilmente por técnicas farmacéuticas estándar conocidas por los expertos en la técnica.

Además, también es posible administrar tópicamente los compuestos activos de la presente invención y esto puede hacerse con cremas, jaleas, geles, pastas, parches, ungüentos, etc. de acuerdo con la práctica farmacéutica estándar.

Para administración a animales no humanos, tales como ganado o animales domésticos, los compuestos activos pueden administrarse en el alimento de los animales u oralmente como una poción.

Los compuestos activos se pueden administrar también en forma de sistemas de suministro de liposomas, tales como pequeñas vesículas unilaminares, vesículas grandes unilaminares y vesículas multilaminares. Los liposomas se pueden formar de una variedad de fosfolípidos tales como colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.

También se pueden acoplar los compuestos activos con polímeros solubles como vehículos de fármacos diana. Tales polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamida-fenilo, poli-hidroxietilasparmida-fenol o poli(óxido de etileno)-polilisina sustituida con restos de palmitilo. Además, los compuestos activos se pueden acoplar con una clase de polímeros biodegradables útiles para lograr una liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, ácido poliláctico, ácido poliglicólico, copolímeros de ácido poliláctico y ácido poliglicólico, poli(\varepsilon.caprolactona), ácido poli-hidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales, polihidro-piranos, policianoacrilatos y copolímeros de bloque reticulados o anfipáticos de hidrogeles.

El Ejemplo que se presenta seguidamente ilustra una realización específica de la invención, pero la invención no está limitada en cuanto al ámbito al Ejemplo específicamente presentado. En el Ejemplo siguiente, "Ac" representa un grupo acetilo, "Me" representa un grupo metilo y "Ef" representa un grupo etilo.

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Ejemplo 1

A una solución que contiene el compuesto 30 (en cuya fórmula "Ac" representa un grupo acetilo) (513 mg, 0,58 mmol) en 5,8 ml de DMF a -78ºC se añadieron 1,74 ml de solución 0,5 M de KHDMS en tolueno (0,87 mol). A esta solución se añadió, después de agitar durante 30 minutos a -78ºC, SELECTFLUOR^{MC} (comercializado por Air Products Chemical, Inc., Allentown, Pensilvania, EE.UU.) (236 mg, 0,87 mmol). Después de agitar durante 30 minutos a -78ºC, se añadió SELECTFLUOR^{MC} fresco (27 mg, 0,076 mmol). Después de agitar a la misma temperatura durante otros 30 minutos, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (acetato de etilo) y se lavó con agua y salmuera. Después de secar sobre sulfato sódico y eliminar el disolvente, se obtuvieron 477 mg (93%) de un compuesto que corresponde a la fórmula 31, excepto con C-2'-hidroxi protegido con un grupo acetilo.

Este material se disolvió en 50 ml de MeOH y se calento a 50ºC durante la noche. Después de evaporar el disolvente y cromatografiar sobre SiO_{2}, se obtuvo el compuesto de fórmula 31 (que corresponde al compuesto de la fórmula 2 a la que se ha hecho referencia anteriormente, en la que R^{12}, R^{13}, R^{14} y R^{15} son, cada uno, H). RMN (CDCl_{3}, \delta) 8,93 (1H, d), 8,42 (1H, dd), 8,04 (1H, dd), 7,57 (1H, s), 7,35 (1H, d), 7,24 (1H, dd), 6,13 (1H, s), 4,89 (1H, dd), 4,28 (1H, d), 4,19 (2H, m), 4,07 (1H, d), 3,69 (3H, s), 3,66 (1H, s), 3,56 (1H, m), 3,48 (1H, m), 3,41 (1H, m), 3,24 (1H, m), 2,76 (1H, m), 2,60 (2H, m), 2,57 (3H, s), 2,36 (6H, s), 1,93 (2H, m), 1,74 (3H, d), 1,76-1,20 (6H, m), 1,49 (3H, s), 1,34 (3H, s), 1,27 (3H, d), 1,22 (3H, d), 1,11 (3H, d), 0,98 (3H, d), 0,83 (3H, t).

Claims (5)

1. Un compuesto de la fórmula

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o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptable, en la que R^{14} y R^{15} son H y R^{12} y R^{13} se seleccionan, cada uno independientemente, entre H y metilo.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R^{12}, R^{13}, R^{14} y R^{15} son, cada uno, H.

3. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

4. Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 para uso como medicamento.

5. El uso de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una infección bacteriana o protozoica, o un trastorno relacionado con una infección bacteriana o protozoica.