ES2219038T3

ES2219038T3 - 2-(trans-(4-aminociclohexil)amino)purinas 6,9-disustituidas.

Info

Publication number: ES2219038T3
Application number: ES99936074T
Authority: ES
Inventors: Jennifer A. Dumont; Alan J. Bitonti; David R. Borcherding; Norton P. Peet; H. Randall Munson; Patrick W. K. Shum
Original assignee: Aventis Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Aventis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1998-02-26
Filing date: 1999-02-18
Publication date: 2004-11-16
Anticipated expiration: 2019-02-18
Also published as: AP2000001923A0; EE04315B1; EE200000501A; ZA991548B; HUP0100931A3; OA11480A; PT1056745E; IL138044A0; JP2002504553A; RU2191777C2; ATE269332T1; CA2320448C; TW541308B; PL344021A1; WO1999043676A3; AU748178B2; TR200002482T2; KR20010041315A; CZ291604B6; CA2320448A1

Abstract

Un compuesto de la fórmula **(fórmula)** en el que R se selecciona de R2, R2NH- o H2N-R3-, donde R2 se selecciona de alquilo C1-C8 Z se selecciona de fenilo, un heterociclo seleccionado de piperidinilo, piridinilo, isoxazolilo, tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, morfolinilo, piperacinilo, bencimidazolilo, tiazolilo, tiofenilo, furanilo, indolilo, 1, 3-benzodioxolilo, te -25 trahidropiranilo, imidazolilo, tetrahidrotiofenilo, piranilo, dioxanilo, pirrolilo, pirimidinilo, piracinilo, triacinilo, oxa zolilo, purinilo, quinolinilo e isoquinolinilo y cicloalquilo, cada R4 es independientemente hidrógeno o alquilo C1-C4, y n es un número entero 1-8;30 en donde cada alquilo C1-C8 y Z está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, y se seleccionan de Hal, OH y alquilo C1-C4; R3 es alquileno C1-C8; y R1 se selecciona de ciclopentilo e isopropilo, y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

Description

2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]purinas 6,9-disustituidas.

La presente invención se refiere a 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]purinas disustituidas en 6,9 y a métodos para usar las mismas para agentes antineoplásticos o para el tratamiento de la lesión y la degeneración neuronal.

Antecedentes de la invención

La división celular, en células tanto normales como neoplásticas, es un suceso estrechamente controlado que se produce mediante etapas definidas. Las células quiescentes, que no se dividen activamente, están en la fase G_{0}, como las diferenciadas terminalmente, o en un estado de parada temporal. La primera fase es la fase del primer intervalo (G_{1}) durante la cual la célula se prepara para sintetizar DNA. En la fase G_{1} tardía, en lo que se denomina un punto de restricción o punto R, la célula se compromete entra en la fase S durante la cual se produce la síntesis de DNA. Al terminar la fase S, la célula entra en la fase de segundo intervalo (G_{2}) durante la cual la célula se prepara para dividirse, lo que es seguido por la mitosis o fase M.

Experimentos iniciales en la regulación del ciclo celular revelaban la existencia de una proteína llamada "Factor Promotor de la Maduración" (MPF), un heterodímero con actividad de quinasa. Más tarde, la comparación de proteínas identificadas subsiguientemente y sus genes subyacentes revelaba una familia de genes de levadura conocidos como genes de control de la división celular (cdc). Experimentos adicionales demostraban que algunos de los genes de cdc codifican quinasas, y se llamaron más tarde quinasas dependientes de ciclina (cdks). Como resultado de esta reclasificación, algunas proteínas del ciclo celular tienen denominaciones dobles, tales como cdk1 que también se conoce como cdc2. El componente de quinasa del MPF se identifica ahora como p34^{cdc2} y la subunidad reguladora del MPF se denomina ahora ciclina B. Las ciclinas fueron identificadas en primer lugar como proteínas cuyos niveles oscilaban durante el ciclo celular y se degradaban específicamente en la mitosis. Hasta la fecha, se han identificado ciclinas A-I y cdks 1-8 animales. Para complicar más la nomenclatura, se han identificado subtipos de ciclinas y cdks, tales como ciclinas B1 y B2.

La investigación subsiguiente sobre la regulación celular ha demostrado que los estadios de la división celular se alcanzan en parte mediante ciclinas de modulación y quinasas dependientes de ciclinas (cdks). Las ciclinas regulan secuencialmente cdks y se caracterizan por una región de homología de 100 aminoácidos llamada la "caja de ciclina" que está implicada en la unión a un socio de proteína quinasa. Las cdks están estrechamente relacionadas en secuencia y tamaño (35-40 kDa) y se definen como proteína quinasas activadas por subunidades reguladoras de ciclina unidas. Las cdks contienen una hendidura de sitio activo conservada de aproximadamente 300 aminoácidos que es característica de todas las proteína quinasas eucarióticas. Así, tanto las ciclinas como las cdks parecen ser familias de proteínas altamente conservadas.

El aislamiento de ciclinas y cdks individuales ha permitido la identificación adicional de los papeles y las interacciones de cada componente en las transiciones de fase del ciclo celular. Los niveles excesivos de cdks persisten a través del ciclo celular. La activación de cdks se produce durante la síntesis de ciclinas y la unión a la subunidad de cdk catalítica, cuyo resultado es la estimulación de la actividad de serina/treonina quinasa de cdk. La activación completa de cdk requiere la fosforilación sobre un residuo de treonina conservado situado en el bucle T por una quinasa activadora de quinasa dependiente de ciclina (CAK), que es ella misma un complejo de cdk/ciclina compuesto por ciclina H y cdk 7, y una tercera proteína de aproximadamente 32 kDa.

La inactivación del complejo cdk-ciclina puede resultar de la fosforilación de un residuo de treonina y/o tirosina en un sitio de unión a ATP de la cdk o de la unión de una de un número de proteínas inhibidoras endógenas.

En la fase G_{1}, ciclinas de tipo D se unen a varias cdks diferentes, incluyendo cdk2, cdk4, cdk5 y cdk6, pero se asocian lo más comúnmente con cdk4 y cdk6. Se cree que las ciclinas de tipo D actúan como sensores de factores de crecimiento, que conectan la progresión del ciclo celular a entradas externas. Los complejos de ciclina E-cdk2 aparecen en el ciclo celular de los mamíferos después de los complejos de ciclina tipo D-cdk. La síntesis de ciclina E está estrechamente regulada y se produce en la fase G_{1} tardía y la fase S inicial. El complejo de ciclina E-cdk2 es esencial para que la célula comience la replicación de DNA.

Las ciclinas G_{1}, ciclina D y ciclina E, son proteínas producidas transitoriamente, con una semivida de aproximadamente 20 minutos. Se cree que la semivida corta resulta de una secuencia PEST en las regiones C-terminales de estas proteínas, cuya degradación parece estar mediada por la ruta de ubiquitinación.

Las ciclinas G_{2}, ciclina A y ciclina B, son estables a lo largo de la interfase y se destruyen específicamente en la mitosis a través de una ruta de ubiquitinación. Tanto la ciclina A como la ciclina B2 parecen degradarse solo cuando se complejan con su socio de cdk [ciclina A-cdk2 y ciclina A/B-cdk1(cdc2)]. Sin embargo, la destrucción de la ciclina B1 está relacionada con la integridad del aparato mitótico al final de la metafase. Si el huso se ensambla incorrectamente, o los cromosomas se alinean incorrectamente, entonces se evita la destrucción de ciclina B1.

La proteína de retinoblastoma (Rb), una fosfoproteína nuclear de 105 kDa, es un sustrato de complejos de ciclina-cdk de cdks-2, 4 y 6 en fase G_{1} y funciona como uno de los principales controles de comprobación en el ciclo celular a través de fosforilación y desfosforilación cuidadosamente instrumentadas. En G_{0}/G_{1}, la Rb existe en un estado hipofosforilado. A medida que la célula avanza en G_{1} tardía, la Rb se hiperfosforila mediante complejos de ciclina D, lo que inactiva la Rb y conduce a la célula a una fase S que da como resultado el avance del ciclo celular y la división celular. Este estado de hiperfosforilación de Rb permanece en G_{2}. Durante la fase M tardía, la Rb se desfosforila, volviendo así al estado hipofosforilado. La fosforilación de la proteína Rb altera sus características de unión; en el estado hipofosforilado, la Rb se une a y secuestra factores de transcripción específicos, tales como E2F, cuya unión evita la salida de la fase G_{1}. Una vez que las cdks hiperfosforilan la Rb, los factores de transcripción se liberan, lo que a continuación puede activar la transcripción de genes necesarios para la progresión de la fase S, por ejemplo timidina quinasa, myc, myb, dihidrofolato reductasa y DNA polimerasa-\alpha.

La localización de los complejos de ciclina-CDK también es muy sugerente acerca del papel que juega cada complejo en la ruta. Las ciclinas A y E nucleares se unen a p107 y p130, posiblemente debido a que están en el núcleo. La ciclina B1 de mamífero se acumula en el citoplasma en la fase G_{2} y se transloca en el núcleo al principio de la mitosis. La ciclina B se asocia con el aparato del huso, en particular con los extremos del huso, y se cree que la ciclina B-cdc2 quinasa puede estar implicada en la formación del huso a través de componentes fosforilantes del aparato mitótico. Además, la ciclina B1 es parte de un mecanismo de retroalimentación que asegura el montaje correcto del aparato mitótico de la metafase. La ciclina B2 humana está asociada casi exclusivamente con el compartimento de la membrana, y en particular el aparato de Golgi. La ciclina B2-cdc2 está implicada en el desmontaje del aparato de Golgi cuando las células entran en la mitosis.

Cdc-2-ciclina B quinasa es un factor mitótico clave que parece estar altamente conservado y se cree que está implicado en transiciones del ciclo celular en todas las células eucarióticas. La histona H1 es un sustrato para cdc2-ciclina B. La histona H1 se fosforila selectivamente sobre sitios específicos en la mitosis, lo que se cree que es importante para la condensación de cromatina. El complejo cdc2-ciclina B también fosforila lamina, que es responsable de la rotura de la lámina nuclear. La lámina nuclear está constituida por un polímero de subunidades de lamina que están hiperfosforiladas en la mitosis, y esta fosforilación es responsable de su desmontaje. Las laminas son parte de la familia de filamentos intermedios de proteínas, y cdc2-ciclina B fosforila un subgrupo de los sitios fosforilados en la mitosis sobre las unidades de filamentos intermedios citoplásmicos, vimentina y desmina. Así, el complejo cdc2-ciclina B está implicado en la reorganización de la estructura celular en la mitosis.

Además, cdc2-ciclina B está implicado en la reorganización de microfilamentos, a través de la fosforilación de caldesmona no muscular, una proteína de 83 kDa que se une a actina y calmodulina, e inhibe la actividad de actomiosina ATPasa. En la mitosis, la caldesmona es fosforilada por cdc2-ciclina B, lo que debilita su afinidad para la actina y hace que se disocie de los microfilamentos.

Cdc2-ciclina B está implicado en la regulación de filamentos de actomiosina, al desfosforilar la miosina en el anillo contráctil, que divide la célula en dos (citoquinesis). En la metafase, la cadena ligera reguladora de miosina II (MLC) se fosforila en dos sitios principales en el extremo N. Una vez fosforilada, se evita que la miosina interactúe con actina. En la anafase, estos dos sitios se desfosforilan.

Cdc2-ciclina B también juega un papel en la reorganización del compartimiento de la membrana en la mitosis. Por ejemplo, cdc2-ciclina B fosforila rabIAp y rab4p. Cuando rab4p se fosforila con cdc2-ciclina B, se disocia del compartimento de la membrana.

En la mitosis, la mayoría de las formas de transcripción se inhiben. De nuevo, cdc2-ciclina B juega un papel en la inhibición de la transcripción mediada por pol III al fosforilar TFIIIB. Dado que la transcripción mediada por pol I, pol II y pol III comparte varios factores comunes, tales como la proteína que se une a TATA (TBA), es probable que cdc2-ciclina B esté implicado en regular a la baja todas las formas de transcripción en la mitosis.

Dada la importancia de los complejos de ciclina/cdk para activar la división del ciclo celular, están bajo mecanismos reguladores estrechos. Desde su descubrimiento inicial, se ha observado que las ciclinas y las cdks interactúan con otros factores de transcripción y proteínas implicados en una amplia gama de rutas celulares. La cdk7 se ha identificado como un componente en el factor de transcripción IIH (TFIIH), que contiene la actividad de quinasa del dominio C-terminal (CTD) de RNA polimerasa II. Más recientemente, también se ha descubierto que la cdk8 que se asocia con ciclina C fosforila el CTD de RNA polimerasa II, pero no parece poseer actividad de CAK. Así, está claro que las cdks participan en una amplia gama de funciones celulares además de la regulación del ciclo celular. Las proteínas inhibidoras de CDK (CDIs) son proteínas pequeñas que se unen a e inactivan complejos de ciclina-CDK específicos, o CDKs monómeras. Estos inhibidores pueden agruparse en dos familias basadas en similitudes de secuencia y funcionales. La familia de INK4 incluye p15^{INK4B}, p16^{INK4}, p18 y p19 que se unen específicamente a cdk4 y cdk6. p16^{INK4}y p15^{INK4B} contienen cuatro repeticiones de anquirina y, además de compartir homología significativa, son codificadas por genes adyacentes sobre el locus 9p12.

Los altos niveles celulares de p16 dan como resultado la inactivación de cdk4 debido a que p16 se une a complejos de ciclina D-cdk4 y ciclina D-cdk6. El gen para p16^{INK4} (MTS1) se reconoce como un gen supresor de tumores potencial, a medida que se reordena, se suprime o muta en un gran número de líneas celulares tumorales, y en algunos tumores primarios. En un estudio del melanoma hereditario, aproximadamente la mitad de las familias tenían mutaciones de la línea germinal en el gen p16^{INK4}. Rb es un represor de p16^{INK4}. La inactivación de Rb celular, mediante mutación o antígenos virales, se correlaciona con niveles incrementados de p16^{INK4}. p16^{INK4}, p15^{INK4B} y p18 inhiben la unión de ciclina B con cdk4 y cdk6.

La segunda familia de CDIs es la familia Kip/Cip que incluye p21^{Cip1, WAF-1}, p27^{Kip1} y p57^{Kip2}. p27^{Kip1} está presente en células proliferativas en una forma latente o enmascarada. Durante la estimulación, p27^{Kip1} se desenmascara y se une a e inhibe complejos de ciclina-CDK4/6. Las proteínas de la familia Kip/Cip tienen fuerte homología en el extremo N, la región que se une a los complejos de ciclina-cdk. Las proteínas de la familia Kip/Cip se unen preferencialmente a e inhiben complejos de ciclina-cdk implicados en los complejos de las fases G_{1} y S o los implicados en la fase M.

P21 (también conocida como WAF1, Cip1 y Sdi1) es inducida por p53 y forma un complejo ternario con antígeno nuclear celular proliferativo (PCNA), una subunidad de DNA polimerasa \delta en varios complejos de ciclina-CDK2, incluyendo ciclinas A, D1 y E. La expresión de P21^{WAF-1} en células en crecimiento, quiescentes y senescentes se correlaciona con un papel como un regulador negativo de la entrada en la fase S. El mRNA de P21^{WAF-1} se regula al alza a medida que las células se hacen senescentes o quiescentes, y después de la estimulación sérica de células quiescentes, y disminuye a medida que las células entran en la fase S. p21 inactiva complejos de ciclina E-cdk2, ciclina A-cdk2 y ciclinas D1-, D2- y D-cdk4.

El análisis genético de numerosos tumores humanos revela un número desproporcionado de proteínas del ciclo celular alteradas, y es esta aberración lo que se cree que provoca el ciclo celular anormal. Por ejemplo, la ciclina D1 es el proto-oncogén de bcl-1/PRAD1 que está sobreexpresado o desregulado en una variedad de tumores humanos. El gen de ciclina D1/CCND1, situado en el cromosoma 11q13, es amplificado en un número de cánceres, principalmente carcinomas de mama y pulmonar de células no pequeñas. Esto se correlaciona con la observación de que la sobreexpresión de ciclina D1 es una característica común en los tumores con este amplicón de 11q13 específico. El gen para p16 se reordena, se suprime o se muta en un gran número de líneas celulares tumorales, y en algunos tumores primarios. Las mutaciones en cdk4, especialmente una mutación Arg24Cys, se han identificado en dos familias de melanoma hereditario no relacionadas. Esta mutación se encontró en 11/11 de los pacientes con melanoma, 2/17 de los no afectados y 0/5 cónyuges (Zuo, L. y otros, Nature Genetics 12 1996:97-99). Esta mutación tiene un efecto específico sobre el dominio de unión a p16^{INK4a} de cdk4, pero no tiene efecto sobre la capacidad para unirse a ciclina D y formar una quinasa funcional. Como resultado de esta mutación, el complejo de ciclina D/cdk4 es resistente a la inhibición fisiológica normal por p16^{NIK4a}. Otros estudios han demostrado que aproximadamente la mitad de los parientes de melanomas familiares muestran evidencia de conexión con la región del cromosoma 9p21 que contiene el gen p16^{INK4a}. Los tipos de mutaciones de p16^{INK4a} identificados incluyen una mutación sin sentido, mutación del donante de corte y empalme ("splice"), una mutación no identificada que evita la transcripción de p16^{INK4a} y 3 mutantes sin sentido que son incapaces de unirse a cdk4 o cdk6. La sobreexpresión de cdk4 como resultado de la amplificación génica se ha identificado en un estudio de 33 líneas celulares de glioma (He, J. y otros, Cancer Res. 54:5804-5807, 1994). Esta alteración se observó entre los diez casos que tienen genes p16 intactos. El análisis genético de líneas celulares de glioma revelaba que 24 de 32 líneas celulares de glioma tenían una de dos alteraciones genéticas alternativas, cada una de las cuales indica que la actividad de quinasa cdk4 incrementada es importante para el desarrollo de tumores gliales. Cdk4 cartografía el brazo largo del cromosoma 12 y se encuentra sobreexpresada en ciertos tumores debido a su amplificación como un componente de un amplicón que incluye otros genes relevantes, tales como SAS y MDM2. Todas las condiciones anteriores conducen a la activación de cdk4. También se ha presentado la sobreexpresión de ciclinas B1 y E en líneas celulares leucémicas y de tumores sólidos, así como patrones alterados de expresión de ciclina E en cáncer de mama.

La hiperproliferación celular se produce en un número de estados de enfermedad. Las enfermedades hiperproliferativas más comunes son los neoplasmas, que se nombran típicamente de acuerdo con la fuente original del tejido hiperproliferativo. Los neoplasmas se definen como nuevos crecimientos de tejido de animal o de planta que se asemejan más o menos al tejido del que surgen, pero no sirven a una función fisiológica y son de carácter benigno, potencialmente maligno o maligno. Los neoplasmas surgen como resultado de la pérdida de controles normales, conduciendo a un crecimiento no regulado. Las células neoplásticas pueden carecer de diferenciación y adquieren la capacidad de invadir tejidos locales y metastatizarse. Los neoplasmas pueden desarrollarse en cualquier tipo de tejido de cualquier órgano a cualquier edad. La incidencia y el grado de mortalidad de los neoplasmas generalmente se incrementan con la edad, teniendo ciertos neoplasmas una incidencia máxima entre las edades de 60 y 80 (por ejemplo, próstata, estómago y colon). Sin embargo, otros neoplasmas tienen una incidencia máxima desde el nacimiento hasta los 10 años de edad (por ejemplo, leucemia linfoblástica aguda). La dieta, la exposición a carcinógenos, particularmente el uso del tabaco, y las predisposiciones familiares también afectan a la incidencia de neoplasmas particulares.

Las células neoplásticas difieren de las células normales en un número de aspectos importantes, incluyendo la pérdida de diferenciación, la invasividad incrementada y la sensibilidad a fármacos disminuida. Otra diferencia importante es el crecimiento no controlado de células, que se cree que resulta de la pérdida de mecanismos de control celular normales de estas células que están desactivados, desviados o descuidados de otra manera, dejando que las células neoplásticas proliferen sin tener en cuenta los mecanismos de control normales. El neoplasma es una masa anormal de tejido, cuyo crecimiento supera y está descoordinado con el del tejido normal, y persiste de la misma manera excesiva después del cese de los estímulos que provocan el cambio.

Los neoplasmas se clasifican como benignos o malignos. Los neoplasmas benignos exhiben un crecimiento localizado lento que está habitualmente circunscrito debido a su encapsulación por una cápsula de tejido conectivo fibroso. Mientras que los neoplasmas benignos raramente provocan la muerte del organismo, los neoplasmas malignos no tratados tienen una alta probabilidad de destruir el organismo. Los neoplasmas malignos están generalmente no encapsulados, y habitualmente exhiben una velocidad de crecimiento más rápida. Los neoplasmas malignos a menudo invaden tejidos y vasos circundantes y se extienden hasta sitios distantes del cuerpo. Los neoplasmas malignos se describen genéricamente como "cáncer" o "tumores"; el último término indica inflamación.

Los trastornos mieloproliferativos son un grupo de trastornos caracterizados por la proliferación anormal por una o más líneas celulares hematopoyéticas o elementos de tejido conectivo. Cuatro trastornos se incluyen normalmente como trastornos mieloproliferativos: policitemia vera (policitemia primaria; enfermedad de Vaquez), mielofibrosis (metaplasia mieloide agnogénica), leucemia mielógena crónica y trombocitemia primaria (esencial). La leucemia aguda, especialmente la eritroleucemia, y la hemoglobinuria nocturna paroxismal también se clasifican como trastornos mieloproliferativos. Cada uno de estos trastornos se identifica de acuerdo con su característica predominante o sitio de proliferación. Aunque cada uno resulta de la proliferación de diferentes células, se ha mostrado que cada uno está provocado por una proliferación clonal que surge al nivel de una célula madre pluripotente, lo que provoca grados variables de proliferación anormal de precursores eritroides, mieloides y megacariocíticos en la médula ósea. Todos los trastornos mieloproliferativos tienen una tendencia a terminar en leucemia aguda.

Las leucemias son neoplasmas malignos de los tejidos que forman la sangre. Al menos dos virus están asociados con provocar leucemias en seres humanos. El virus de Epstein-Barr está asociado con el linfoma de Burkitt y el virus linfotrópico de células T humanas, también denominado virus de leucemia aguda/linfoma humano (HTLV-1), se ha conectado con algunas leucemias de células T y linfomas. La exposición, especialmente la exposición prolongada, a agentes químicos, tales como benceno y algunos antineoplásticos, o a radiación ionizante, la predisposición genética (por ejemplo, síndrome de Down) y algunos trastornos familiares (por ejemplo, anemia de Fanconi) dan como resultado predisposiciones a leucemias.

El desarrollo de leucemias parece producirse a través de un ciclo de una sola célula a través de dos o más etapas con proliferación y expansión clonal subsiguiente. Las leucemias se clasifican actualmente de acuerdo con su madurez celular; las leucemias agudas son poblaciones de células predominantemente no diferenciadas y las leucemias crónicas son formas celulares más maduras. Las leucemias agudas se dividen además en tipos linfoblástico (ALL, también conocida como leucemia linfocítica aguda) y mieloide (AML, también conocida como mielocítica, mielógena, mieloblástica, mielomonoblástica). Se clasifican además por apariencia morfológica y citoquímica de acuerdo con la clasificación francesa-americana-británica (FAB) o de acuerdo con el tipo y el grado de diferenciación. Las leucemias crónicas se clasifican como linfocítica (CLL) o mielocítica (CML). La CLL se caracteriza por la aparición de linfocitos maduros en la sangre, la médula ósea y los órganos linfoides. La CML se caracteriza por la preponderancia de células granulocíticas de todos los estadios de diferenciación en la sangre, la médula ósea, el hígado, el bazo y otros
órganos.

El síndrome mielodisplástico (MDS) se caracteriza como un trastorno proliferativo clonal en el que una médula ósea normal o hipercelular se asocia con anemia y dismielopoyesis. Células hemapoyéticas que pueden proliferar incluyen formas eritroides, mieloides y megacariocíticas. El MDS es una denominación relativamente nueva de un grupo de trastornos conocidos como preleucemia, anemias refractarias, leucemia mielocítica crónica negativa al cromosoma Ph, leucemia mielomonocítica crónica y metaplasia mieloide agnogénica. El sistema FAB proporciona una clasificación adicional de mielofibrosis.

Los linfomas son un grupo heterogéneo de neoplasmas que surgen en los sistemas reticuloendotelial y linfático. Los principales tipos de linfomas son la enfermedad de Hodgkin y el linfoma no de Hodgkin, así como los más raros linfoma de Burkitt y micosis fungoide. La enfermedad de Hodgkin es una enfermedad crónica con proliferación linforreticular de causa desconocida que puede presentarse en forma localizada o diseminada, y se clasifica además de acuerdo con cuatro perfiles histopatológicos. Los linfomas no de Hodgkin son un grupo heterogéneo de enfermedades que consisten en proliferación neoplástica de células linfoides que habitualmente se diseminan a través del cuerpo. Los términos anteriores, linfosarcoma y sarcoma de células del retículo, se están reemplazando ahora por términos que reflejan la célula de origen y la biología de la enfermedad. La clasificación de Rappaport se basa en la histopatología; en el grado de la diferenciación del tumor y en si el patrón de crecimiento es difuso o nodular. La clasificación de Lukes y Collins se basa en la célula de origen, específicamente si se deriva de células T o células B, es de origen histiocítico (o monocítico) o inclasificable. The International Panel Working Formulation del National Cancer Institute clasifica los linfomas no de Hodgkin usando las clasificaciones anteriores.

El linfoma de Burkitt es un linfoma de células B altamente no diferenciado que tiende a implicar sitios distintos a los nódulos linfáticos y el sistema reticuloendotelial. El linfoma de Burkitt, a diferencia de otros linfomas, tiene una distribución geográfica específica, que sugiere un vector de insecto no identificado y un agente infeccioso. La evidencia apunta al herpes como el virus de Epstein-Barr.

La micosis fungoide es un linfoma de células T crónico poco común que afecta principalmente a la piel y ocasionalmente a los órganos internos.

Las discrasias de células plasmáticas (PCDs), o gammopatía monoclonal, son trastornos caracterizados por la proliferación desproporcionada de un clon de células normalmente implicadas en la síntesis de inmunoglobulinas (Ig) y la presencia de una subunidad de Ig o polipeptídica estructuralmente y electroforéticamente homogénea en suero u orina. Los trastornos pueden ser neoplasmas desde principalmente asintomáticos hasta evidentes y progresivos (por ejemplo, mieloma múltiple). El trastorno resulta de la proliferación desproporcionada de un clon que produce una Ig específica: IgG, IgM, IgA, IgD o IgE.

El mieloma múltiple, también conocido como mieloma de células plasmáticas o mielomatosis, es una enfermedad neoplástica progresiva caracterizada por tumores de células plasmáticas de la médula y sobreproducción de una Ig (IgG, IgA, IgD o IgE) monoclonal intacta o proteína de Bence Jones, que está libre de cadenas ligeras \kappa o \lambda monoclonales. La osteoporosis difusa o las lesiones osteolíticas discretas surgen debido a una sustitución por tumores de células plasmáticas expansivas o un factor activador de osteoclastos secretado por células plasmáticas malignas.

La macroglobulinemia, o macroglobulinemia primaria o de Waldenstrom, es una discrasia de células plasmáticas que implica células B que normalmente sintetizan y secretan IgM. La macroglobulinemia es distinta del mieloma y otras PCDs, y se asemeja a una enfermedad linfomatosa. Muchos pacientes tienen síntomas de hiperviscosidad, fatiga, debilidad, hemorragia de la piel y las mucosas, etc.

Las enfermedades de la cadena pesada son discrasias de células plasmáticas neoplásticas caracterizadas por la sobreproducción de cadenas pesadas de Ig \gamma, \alpha, \mu y \delta homogéneas. Estos trastornos dan como resultado Igs monoclonales incompletas. El cuadro clínico es más como un linfoma que un mieloma múltiple.

El hiperesplenismo es un síndrome en el que la citopenia circulatoria está asociada con esplenomegalia. El tratamiento de pacientes con hiperesplenismo requiere una terapia para la enfermedad subyacente, no la esplenectomía. Las enfermedades linfoproliferativas y mieloproliferativas son algunas, pero no las únicas, causas de hiperesplenismo. Trastornos mieloproliferativos que provocan hiperesplenismo incluyen policitemia vera, mielofibrosis con metaplasia mieloide, leucemia mielógena crónica y trombocitemia esencial. La leucemia linfocítica crónica y los linfomas (incluyendo la enfermedad de Hodgkin) son trastornos linfoproliferativos específicos que pueden provocar hiperesplenismo.

El tejido pulmonar es el sitio para tumores primarios tanto benignos como malignos, así como el sitio de metástasis de cánceres de muchos otros órganos y tejidos. El hábito de fumar cigarrillos provoca un porcentaje aplastante de cánceres de pulmón, estimado en más de 90% de los casos en los hombres y aproximadamente 70% de los casos en las mujeres. La exposición a agentes laborales, tales como amianto, radiación, arsénico, cromatos, níquel, éteres clorometílicos, gas venenoso y emisiones de hornos de coque, también está asociada con los cánceres de pulmón. Los tipos más comunes de cáncer de pulmón son de células escamosas, de células pequeñas y grandes y adenocarcinoma.

Aproximadamente noventa y cinco por ciento de los cánceres de estómago son carcinoma; menos comunes son los linfomas y los leiomiosarcomas. Los carcinomas gástricos se clasifican de acuerdo con su apariencia aproximada; protuberantes, penetrantes (el tumor tiene un límite definido bien circunscrito y puede estar ulcerado) y extensivos u homogéneos, que tiene características de dos de los otros tipos.

Los cánceres pancreáticos pueden ser tumores exocrinos, que son principalmente adenocarcinomas que surgen de células de los conductos en vez de células acinares, o tumores endocrinos, que incluyen insulinoma. Los tumores pancreáticos que producen gastrina que implican células del tipo no \beta o en la pared duodenal pueden provocar síndrome de Zollinger-Ellison, un síndrome marcado por la hipergastrinemia. Algunas otras anormalidades endocrinas, particularmente con los paratiroides o las glándulas pituitaria o adrenal, provocan un trastorno poliglandular conocido como neoplasia endocrina múltiple (MEN). Los tumores de células de los islotes no \beta pueden provocar un síndrome conocido como síndrome de Vipoma, que se caracteriza por una diarrea acuosa masiva prolongada.

Neoplasmas del intestino incluyen tumores del intestino delgado, tumores del intestino grueso y cáncer de colon y recto. Los tumores de intestino delgado benignos pueden surgir de neoplasmas de yeyuno e íleon, incluyendo leiomiomas, lipomas, neurofibromas y fibromas. Los tumores malignos de intestino delgado, tales como adenocarcinomas, son poco comunes, y típicamente surgen en el yeyuno proximal. Los pacientes con enfermedad de Crohn del intestino delgado son más propensos a tales adenocarcinomas que los pacientes con enfermedad de Crohn del colon. En pacientes con enfermedad de Crohn, los tumores tienden a presentarse distalmente en los bucles derivados o inflamados del intestino. Los tumores carcinoides típicamente surgen en el intestino delgado, especialmente en el íleon, y en aproximadamente la mitad de los casos, existen tumores múltiples. El sarcoma de Kaposi, que se presenta frecuentemente en receptores de trasplantes y pacientes con SIDA, tiene una implicación gastrointestinal en aproximadamente la mitad de los casos. Pueden producirse lesiones en cualquier parte del tracto GI, pero habitualmente se encuentran en el estómago, el intestino delgado o el colon proximal.

Tumores del intestino grueso incluyen pólipos del colon y el recto. Los pólipos son una masa de tejido que surge de la pared intestinal y sobresale dentro de la luz. Los pólipos se clasifican sobre la base de su histología como adenomas tubulares, adenomas tubulovellosos, adenomas vellosos, pólipos hiperplásticos, hamartomas, pólipos juveniles, carcinomas polipoides, pseudopólipos, lipomas, leiomiomas y tumores incluso más raros.

Los tumores malignos también pueden surgir en el anorrecto. Estos son carcinoma epidermoide (de células escamosas) del anorrecto que comprende de aproximadamente tres a cinco por ciento de los cánceres rectales y anales.

En los países occidentales, los cánceres de colon y recto son secundarios a cáncer de pulmón dando cuenta de más casos nuevos cada año. En los EE.UU. de A., aproximadamente 75.000 personas murieron de estos cánceres en 1989; aproximadamente 70% se presentó en el recto y el colon sigmoide, y 95% eran adenocarcinomas.

Los neoplasmas del hígado incluyen neoplasmas benignos, que son relativamente comunes pero a menudo no están detectados, y neoplasmas malignos. El adenoma hepatocelular es el neoplasma hepático benigno más importante. Los hemangiomas pequeños asintomáticos se producen en de uno a cinco por ciento de los adultos. Los adenomas de los conductos biliares y otros neoplasmas mesenquimales también se producen, pero son relativamente raros. Los neoplasmas malignos del hígado son la forma más común de tumor hepático, y el hígado es un sitio frecuente de metástasis transmitidas por la sangre, habitualmente a partir de tumores primarios de pulmón, mama, colon, páncreas y estómago. La incidencia del carcinoma hepatocelular está conectada con el virus de la hepatitis B crónica en ciertas partes de África y el sureste de Asia. En Norteamérica, Europa y otras áreas de baja preponderancia, la mayoría de los pacientes tienen cirrosis subyacentes. El carcinoma fibrolamelar es una variante distante del carcinoma hepatocelular con morfología característica de hepatocitos malignos enredados en tejido fibroso lamelar. El carcinoma fibrolamelar afecta habitualmente a adultos relativamente jóvenes, y no tiene asociación con cirrosis preexistente, infección crónica por virus de la hepatitis B u otros factores de riesgo conocidos. Otras enfermedades malignas primarias del hígado incluyen colangiocarcinoma (un tumor que surge del epitelio biliar intrahepático), hepatoblastoma (que es uno de los cánceres más comunes en niños) y angiosarcoma (que está asociado con la exposición industrial a cloruro de vinilo). La leucemia y los trastornos afines pueden implicar a tejidos hepáticos, y sin embargo ser el resultado de infiltración con células anormales.

Los síndromes de neoplasia endocrina múltiple (MEN) son un grupo de enfermedades familiares genéticamente claras que implican hiperplasia adenomatosa y formación de tumores malignos en varias glándulas endocrinas. Se han identificado tres síndromes claros. El Tipo I (MEN-I) se caracteriza por tumores de las glándulas paratiroides, los islotes pancreáticos y la pituitaria. El Tipo II (MEN-II) se caracteriza por carcinoma medular del tiroides, feocromocitoma e hiperparatiroidismo. El Tipo III (MEN-III) se caracteriza por neuromas mucosales múltiples, carcinoma medular de tiroides y feocromocitoma.

El síndrome carcinoide está provocado habitualmente por tumores carcinoides intestinales metastáticos que secretan una cantidad excesiva de sustancias vasoactivas, incluyendo serotonina, bradiquinina, histamina, prostaglandinas y hormonas polipeptídicas. Los niveles anormales de estas sustancias provocan una variedad de síntomas, a menudo rubor cutáneo episódico, cianosis, calambres abdominales, diarrea y enfermedad cardíaca valvular.

Los neoplasmas del hueso y las articulaciones pueden ser benignos o malignos. Los tumores benignos del hueso incluyen osteocondromas (exostosis osteocartilaginosas), que son los tumores óseos benignos más comunes en niños entre las edades de 10 y 20 años, condromas benignos (que están situados dentro del hueso), que se producen lo más comúnmente en niños y adultos jóvenes entre las edades de 10 y 30 años, condroblastoma (que surge en una epífisis), que es raro, pero más común en niños entre las edades de 10 y 20 años, condromixofibromas, osteoma osteoide, tumores de células gigantes y lesiones fibromatosas. Los tumores malignos primarios del hueso incluyen sarcoma osteogénico (osteosarcoma), que es el segundo tumor óseo primario más común, fibrosarcomas, histiocitoma fibroso maligno, condrosarcomas, condrosarcoma mesenquimal, tumor de Ewing (sarcoma de Ewing), linfoma maligno del hueso, mieloma múltiple y tumor maligno de células gigantes.

Los cánceres primarios de otros tejidos pueden metastatizarse al tejido óseo. Los más comunes son los carcinomas que surgen en la mama, el pulmón, la próstata, el riñón y el tiroides.

Los neoplasmas del sistema nervioso central (SNC) se clasifican generalmente de acuerdo con el órgano. Los neoplasmas intracraneales primarios se subdividen en seis clases: tumores de (1) la calavera; (2) las meninges; (3) los nervios craneales; (4) la neuroglía y el epéndimo; (5) la glándula pituitaria o pineal y (6) los de origen congénito. Los neoplasmas de calavera incluyen osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma y osteitis deformante. Los neoplasmas de las meninges incluyen meningioma, sarcoma y glomatosis. Los neoplasmas de los nervios craneales incluyen glioma del nervio óptico y schwannoma de los nervios craneales octavo y quinto. Los neoplasmas de la neuroglía incluyen gliomas y ependimomas. Los neoplasmas de la pituitaria o el cuerpo pineal incluyen adenoma y pinealoma de pitiutaria. Los neoplasmas de origen congénito incluyen craneofaringioma, cordoma, germinoma, teratoma, quiste dermoide, angioma y hemangioblastoma.

Los neoplasmas de la médula espinal son lesiones que comprimen la médula espinal o sus raíces, surgiendo del parénquima de la médula, las raíces, las meninges o las vértebras. Los neoplasmas de médula espinal primarios son mucho menos comunes que los tumores intracraneales. Las lesiones metastáticas son comunes y muchas surgen de carcinomas del pulmón, la mama, la próstata, el riñón, el tiroides o linfoma.

Los neoplasmas genitourinarios se producen en cualquier edad y en ambos sexos; sin embargo, dan cuenta de aproximadamente 30% de cáncer en los hombres y 4% en las mujeres. El adenocarcinoma de próstata da cuenta de un número significativo de enfermedades malignas en hombres de más de 50 años. Se cree que el adenocarcinoma de próstata está relacionado con hormonas y su patología es típicamente glandular. El carcinoma del riñón, el adenocarcinoma, es sólo aproximadamente uno a dos por ciento de cánceres de adulto, pero la mayoría de los tumores sólidos de riñón son malignos. Los tumores de Wilms, un adenomiosarcoma embrionario de los riñones, se producen fetalmente y a menudo no se diagnostican durante varios años. Los neoplasmas de pelvis renal y de uréter son histológicamente similares. Los neoplasmas de la vejiga urinaria pueden ser inducidos por carcinógenos urinarios conocidos tales como colorantes de anilina, y el más común es el carcinoma de células transicionales, el menos común es el carcinoma de células escamosas. Neoplasmas genitourinarios más raros incluyen carcinoma de la uretra y el pene. Los neoplasmas de los testículos dan cuenta de la mayoría de las enfermedades malignas sólidas en hombres por debajo de 30 años. La mayoría de los tumores testiculares malignos surgen de la célula germinal primordial y se clasifican de acuerdo con el tipo de célula implicado.

El cáncer de mama es el cáncer más común en las mujeres. En los EE.UU. de A., el riesgo acumulativo para mujeres de todas las edades de desarrollar cáncer de mama es aproximadamente 10%, pero el de morir de la enfermedad es sólo aproximadamente 3,6%. Sin embargo, el riesgo se incrementa con la edad, una historia familiar de cáncer de mama, la exposición a radiación e incluso la dieta está implicada en un riesgo superior.

Los cánceres de mama se tipifican habitualmente para el análisis de receptores de estrógenos y progesterona. Aproximadamente dos tercios de los pacientes tienen tumores de mama positivos a receptores de estrógenos (ER+). Se cree que los tumores que son positivos a progesterona tienen receptor de estrógenos funcional y la presencia de ambos receptores da una mayor probabilidad de una respuesta favorable al tratamiento endocrino que la presencia de solo un receptor. La terapia endocrina, habitualmente tamoxifeno, se prefiere en los tumores positivos a receptores de estrógenos. Los estrógenos y los andrógenos también son eficaces, pero menos favorables debido a efectos secundarios no deseables inducidos por niveles superiores de estas hormonas y otras formas de tratamiento endocrino. El cáncer de mama puede metastatizarse a casi cualquier órgano del cuerpo, pero los sitios más comunes de metástasis son el pulmón, el hígado, el hueso, los nódulos linfáticos y la piel.

El carcinoma lobular in situ (LCIS) o neoplasia lobular se encuentra lo más frecuentemente en mujeres premenopáusicas. El carcinoma ductal in situ (DCIS) se produce en mujeres tato pre- como post-menupáusicas. El DCIS forma una masa palpable. El LCIS y el DCIS dan cuenta de aproximadamente 90% de todos los cánceres de mama. Las formas más raras, las lesiones medulares y tubulares, tienen un pronóstico algo mejor.

Los neoplasmas ginecológicos más comunes son los carcinomas endometriales, que están cuartos en frecuencia después de los cánceres de mama, colorrectal y los cánceres de pulmón en las mujeres. Los carcinomas endometriales se caracterizan por su graduación clínica, variando de in situ en el estadio 0 hasta metástasis hasta órganos distantes en el estadio IVB. Los carcinomas endometriales producen típicamente estrógeno y los sistemas de tratamiento actuales son cirugía y terapia con progesterona.

Los cánceres ováricos dan cuenta de aproximadamente 18% de todos los neoplasmas ginecológicos. Aproximadamente 80% de los cánceres malignos ováricos surgen del epitelio ovárico y se clasifican de acuerdo con su histología. Los tumores también pueden surgir de células terminales o estroma.

El carcinoma vulvar da cuenta de aproximadamente 3-4% de todos los neoplasmas ginecológicos. El carcinoma vulvar se presenta habitualmente después de la menopausia y aproximadamente 90% son carcinomas de células escamosas. Aproximadamente 4% son carcinomas de células basales y el resto incluyen carcinomas intraepiteliales, adenocarcinoma de la glándula de Bartholin, fibrosarcoma y melanoma.

El carcinoma vaginal da cuenta de aproximadamente 1% de las enfermedades malignas ginecológicas, con una incidencia máxima en edades de aproximadamente 45 a 65 años. Aproximadamente 95% de los carcinomas vaginales son carcinoma de células escamosas. El carcinoma primario de oviducto es raro y típicamente se extiende directamente o mediante el sistema linfático.

La enfermedad trofoblástica o los neoplasmas de origen trofoblástico pueden seguir a un embarazo intra- o extra-uterino. Un embarazo degenerativo da como resultado un lunar hidatidiforme de los que aproximadamente 80% son benignos.

Los neoplasmas pueden surgir en el canal auditivo y afectar a la audición. También surgen ceruminomas, son típicamente malignos a pesar de que parecen benignos histológicamente y se tratan mediante extirpación quirúrgica. Los carcinomas de células basales y células escamosas se desarrollan frecuentemente en el oído externo como resultado de la exposición regular al sol, y también se tratan típicamente mediante extirpación quirúrgica. El oído medio puede ser el sitio de carcinomas de células escamosas. Pueden surgir paragangliomas no cromafínicos en el hueso
temporal.

El tumor maligno más común en la nariz y los senos paranasales es el carcinoma de células escamosas; menos comunes son carcinomas císticos adenoides y mucoepidermoides, tumores mixtos malignos, adenocarcinomas, linfomas, fibrosarcomas, osteosarcomas, condrosarcomas y melanomas.

El carcinoma de células escamosas de la nasofaringe es más comúnmente observado en niños y adultos jóvenes.

Las enfermedades malignas más comunes del tracto respiratorio superior son carcinomas de células escamosas de la lengua y la laringe. Ambos son más comunes en varones y están asociados con el consumo de tabaco y la ingestión de etanol; aproximadamente 85% de los pacientes con cáncer de la cabeza o el cuello tienen una historia de consumo de etanol y tabaco.

En la cabeza y el cuello, aproximadamente 90% de los cánceres son carcinoma de células escamosas (epidermoide). Los melanomas, los linfomas y los sarcomas son formas relativamente raras de cánceres primarios de cabeza y cuello. Los cánceres de cabeza y cuello se clasifican de acuerdo con el tamaño y el sitio de implicación del neoplasma primario; el número y el tamaño de las metástasis hacia los nódulos linfáticos cervicales y la evidencia de metástasis distantes.

Los cánceres oftalmológicos pueden surgir en la piel de los párpados y pueden ser benignos o neoplásticos. Los crecimientos benignos comunes son xantelasmas, que forman placas planas amarillas-blancas de material lipídico subcutáneamente. Los carcinomas de células basales son más comunes; el tratamiento es típicamente la extirpación quirúrgica o la terapia con radiación. Otros tumores malignos menos comunes son carcinomas de células escamosas o de la glándula meibomiana y otros tipos de melanomas. La enfermedad maligna ocular primaria más común es el melanoma maligno del coroides.

También surgen tumores en el tejido cutáneo, e incluyen tumores benignos tales como lunares, lipomas y similares, así como tumores malignos. Aproximadamente 40-50% de los melanomas malignos surgen de melanocitos en los lunares. Los cánceres malignos de piel son carcinomas de células basales o células escamosas y surgen frecuentemente en áreas de la piel expuestas al sol. Son las enfermedades malignas más comunes y la incidencia está creciendo. Enfermedades malignas menos comunes incluyen melanoma maligno, enfermedad de Paget del pezón o sarcoma de Patent y Kaposi extramamario (KS) y linfoma cutáneo de células T (micosis fungoide). La incidencia de KS es creciente como resultado de la incidencia incrementada del SIDA. El KS surge en aproximadamente un tercio de pacientes con SIDA.

Los cánceres orales dan cuenta de aproximadamente 5% de los cánceres en los hombres y 2% de los cánceres en las mujeres. La forma más común de cáncer oral es el carcinoma de células escamosas. La incidencia se incrementa con la edad y los factores de riesgo, particularmente el consumo de tabaco y alcohol.

La cirugía es la forma eficaz más antigua de tratamiento de los neoplasmas. El éxito se alcanza en gran parte si el neoplasma se detecta en sus estadios iniciales y no se ha metastasizado. La radiación también es una terapia importante, y es la terapia favorable de muchos neoplasmas tales como la enfermedad de Hodgkin, linfomas no de Hodgkin en estadios primarios y carcinoma de células escamosas de la cabeza y el cuello. La radiación ha resultado ser muy satisfactoria como un adyuvante de la cirugía y los fármacos antineoplásticos.

Los fármacos antineoplásticos también son útiles en el tratamiento de neoplasmas y se clasifican de acuerdo con su mecanismo de acción. Numerosas combinaciones, típicamente de fármacos antineoplásticos con diferentes mecanismos de acción, han resultado ser una terapia particularmente eficaz, permiten dosis inferiores y frecuentemente minimizan los efectos secundarios negativos. Los fármacos antineoplásticos frecuentemente se dirigen a procesos biológicos fundamentales necesarios para la replicación o el crecimiento celular.

Los agentes alquilantes, tales como mecloretamina y ciclofosfamida, alquilan el DNA y restringen la replicación de DNA.

Los antimetabolitos, que se dirigen a la interrupción de rutas de división celular necesarias, incluyen:

Los antagonistas de folato se unen a deshidrofolato reductasa e interfieren con la síntesis de pirimidina. Los antagonistas de folato son específicos para la fase S. El metotrexato es un antagonista de folato antineoplástico muy comúnmente usado.

Los antagonistas de purina bloquean la síntesis de purina de novo y son específicos para la fase S. La 6-mercaptopurina es un ejemplo de un antagonista de purina.

Los antagonistas de pirimidina interfieren con timidilato sintasa para reducir la producción de timidina y son específicos para la fase S. Un antagonista de pirimidina frecuentemente usado es el 5-fluorouracilo.

La citarabina inhibe la DNA polimerasa y es específica para la fase S.

Los alcaloides de plantas incluyen vincas, tales como vinblastina y vincristina, y podofilotoxinas, tales como etopósido. Los alcaloides de plantas son eficaces en la metafase e inhiben la mitosis mediante una variedad de mecanismos incluyendo alterar proteínas microtubulares.

Los antibióticos incluyen doxorrubicina y daunomicina, que se intercalan entre las hebras de DNA para inhibir el desarrollamiento de DNA; bleomicina, que provoca incisiones en las hebras de DNA; y mitomicina, que inhibe la síntesis de DNA al actuar como un alquilador difuncional.

Las nitrosoureas incluyen carmistina y lomustina y alquilan el DNA o hacen carbamoilar aminoácidos en proteínas.

Los iones inorgánicos, tales como cisplatino, provocan inter- e intra-calación de hebras de DNA para inhibir el desarrollamiento de DNA.

Los modificadores de las respuestas biológicas, tales como los interferones, tienen efectos antiproliferativos, pero su papel específico no es conocido. Los interferones incluyen interferón \alpha (leucocito), interferón \beta (fibroblasto) e interferón \gamma (linfocito).

Las enzimas, tales como asparaginasa, también se usan para alterar rutas metabólicas importantes en células cancerosas. La asparaginasa agota las células de asparagina, de la que dependen las células leucémicas. Las hormonas y sus análogos, tales como tamoxifeno, flutamida y progesterona, tienen efectos no específicos pero son útiles para tratar ciertos neoplasmas que se sabe que son sensibles a hormonas, especialmente neoplasmas de mama, ovario y próstata. El tamoxifeno, frecuentemente usado para el tratamiento de neoplasmas de mama, pone a las células en reposo, y se une al receptor de estrógenos. La flutamida, frecuentemente usada en el tratamiento de neoplasmas de próstata, se une al receptor de andrógenos.

Las citoquininas son reguladores del crecimiento de plantas presentes en la naturaleza y artificiales. Las citoquininas naturales tienden a ser inhibidores no específicos de diversas proteína quinasas. Los mecanismos particulares por los que las citoquininas regulan el crecimiento y la división celular todavía están siendo determinados. Los estudios han indicado que las citoquininas pueden incrementar la accesibilidad de la plantilla de DNA, activar RNA polimerasas, afectar a la poliadenilación y la estructura secundaria del mRNA y estimular la formación y la actividad de polirribosomas. Se cree que las citoquininas afectan a la división celular al interactuar con proteínas reguladoras del ciclo celular. Tanto las citoquininas como las quinasas dependientes de ciclina (cdks) actúan en puntos de control múltiples y similares del ciclo celular, por ejemplo en las transiciones G_{1}/S y G_{2}/M y las fases S y M.

La olomoucina, 6-(bencilamino)-2-[(2-hidroxietil)amino-9-metilpurina, fue descubierta en primer lugar como un herbicida. Más recientemente, se ha descubierto que la olomoucina es una citoquinina artificial, que inhibe específicamente algunas cdks, incluyendo p34^{cdc2}/ciclina B quinasas, a una concentración micromolar, pero no tiene efectos sobre otras proteína quinasas principales tales como quinasas dependientes de cAMP y cGMP, y proteína quinasa C. Se ha observado recientemente que la olomoucina tiene buena selectividad para las CDK-ciclina proteína quinasa, pero sólo tiene una actividad inhibidora moderada, con una IC_{50} de aproximadamente 7 \muM. Vesely. J. y otros, Eur. J. Biochem., 1994, 224, 771 786. Una estructura cristalina de 2.4 A de la omoloucina co-cristalizada con cdk2 revelaba que la porción purínica de la olomoucina se une en el bolsillo de unión de ATP conservado, mientras que el grupo bencilamino se extiende a una región del sitio activo único para las cdk2 quinasas.

WO97/16452 describe derivados de 2-amino-6-anilinopurina que tienen actividad inhibidora sobre p34^{cdc2}/ciclina B^{cdc13} quinasa.

La roscovitina, 2-(1-etil-2-hidroxietilamino)-6-bencilamino-9-isopropilpurina, es una purina recientemente sintetizada que se ha observado que tiene actividad hacia algunas quinasas dependientes de ciclinas y que es 10 veces más activa sobre cdk2 y cdc2 que la olomoucina (Meijer, L. y otros, Eur. J. Biochem., 243:527-536, 1997 y PCT/FR96/01905). Meijer y otros presentan que la mayoría de las quinasas no son inhibidas significativamente por roscovitina. Sin embargo, cdc2-ciclina B, cdk2-ciclina A, cdk2-ciclina E y cdk5-p35 son sustancialmente inhibidos con valores de IC_{50} de 0,65, 0,7, 0,7 y 0,2 \muM, respectivamente. En contraste, la roscovitina presentaba valores de IC_{50} de más de 100 \muM para cdk4-ciclina D1 y cdk6-ciclina D2.

Havlicek, L. y otros, J. Med. Chem, (1997) 40:408-412 presentan que la roscovitina, y análogos relacionados sustituidos en las posiciones 2, 6 y/o 9, inhiben p34^{cdc2}-ciclina B quinasas. Ninguno de los análogos tenía valores de IC_{50} superiores al enantiómero (R) de roscovitina, que tenía un valor de IC_{50} de 0,2 \muM. El enantiómero (S) tenía un valor de IC_{50} de 0,8 \muM; la mezcla racémica (R/S) tenía un valor de IC_{50} de 0,65 \muM. Estos autores concluyen que el sustituyente N^{6}-bencílico de la roscovitina era superior a los sustituyentes isopentenílico o ciclohexilmetílico.

The National Cancer Institute (NCI) es una organización desarrollada por el gobierno de EE.UU. dirigida al descubrimiento y el desarrollo de nuevos productos oncológicos terapéuticos. En 1985, el NCI estableció una nueva estrategia de rastreo del cáncer que implica líneas celulares tumorales humanas en un ensayo in vitro como el rastreo de cáncer primario. Un total de 60 líneas celulares tumorales humanas, derivadas de 7 tipos de cáncer (pulmón, colon, melanoma, renal, ovárico, de cerebro y leucemia) se seleccionaron para la inclusión en el grupo del NCI (Grever, M.R. y otros, Seminars in Oncology, 19:1992:622-638).) Los procedimientos usados en los ensayos también se han presentado en la literatura. American Type Tissue Collection (ATCC) actúa como un depositario para estas y otras líneas celulares tumorales. Líneas celulares tumorales humanas útiles incluyen las siguientes:

MCF7: adenocarcinoma de mama humano, dependiente de hormonas;

MDA-MB-231: adenomacarcinoma de mama humano, independiente de hormonas;

HT-29: adenocarcinoma de colon humano, clase II moderadamente bien diferenciada;

HCT-15: adenocarcinoma de colon humano;

A549: carcinoma de pulmón de células no pequeñas humano;

DMS-114: carcinoma pulmonar de células pequeñas humano;

PC-3: adenocarcinoma de próstata humano; independiente de hormonas; y

DU 145: carcinoma de próstata humano, independiente de hormonas.

Skehan, P. y otros, J. Natl. Cancer Inst. 82: 1107-1112, 1990), indican procedimientos útiles para usar tales líneas celulares tumorales para rastrear fármacos antineoplásticos.

Meijer y otros, anteriormente, presentan que la roscovitina inhibe la proliferación del rastreo in vitro orientado para la enfermedad del NCI, es decir, 60 líneas celulares tumorales humanas que comprenden nueve tipos de tumores (leucemia, cáncer pulmonar de células no pequeñas, cáncer de colon, cáncer del sistema nervioso central, melanoma, cáncer ovárico, cáncer renal, cáncer de próstata, cáncer de mama) con un valor de IC_{50} medio de 16 \muM. No se presentaron los resultados de las líneas tumorales individuales.

Dos inhibidores de cdk diferentes, flavopiridol y olomoucina, suprimen la muerte de células PC12 neuronales y neuronas simpáticas en dos sistemas modélicos de supervivencia neuronal (Park y otros, J. Biol. Chem, 271(14):8161-8169, 1996). La concentración de cada una requerida para promover la supervivencia se correlacionaba con la cantidad requerida para inhibir la proliferación. La apoptosis neuronal es un aspecto importante tanto del desarrollo del sistema nervioso como de un componente de la lesión y la enfermedad neuronal.

La línea celular PC12 se derivaba inicialmente de un feocromocitoma medular adrenal de rata. Cuando se hacen crecer en medio que contiene suero, las células PC12 se dividen y se asemejan a precursores de células de cromafina adrenales y neuronas simpáticas. Al añadir factor de crecimiento nervioso (NGF), las células PC12 alcanzan las propiedades fenotípicas de las neuronas simpáticas. Al retirar suero o suero y NGF, las células PC12 tanto simples como neuronalmente diferenciadas sufren apoptosis, que es análoga a la respuesta de las neuronas simpáticas.

El papel de la regulación del ciclo celular en la apoptosis puede demostrarse mediante la eliminación de NGF o suero que da como resultado una progresión descoordinada del ciclo celular y muerte celular a partir de células PC-12 simples. Los inhibidores de cdk no evitaban la muerte de estas células PC-12 simples competentes frente a la proliferación después de la retirada de soporte trófico. Se establece como hipótesis que las neuronas diferenciadas o simpáticas post-mitóticas intentan inapropiadamente el reingreso del ciclo celular después de la eliminación de NGF, lo que da como resultado la muerte celular. Sin embargo, la exposición a flavopiridol u olomoucina que inhiben cdks evitaba la apoptosis en estas células.

Se observan cambios en la actividad de cdks y ciclinas durante la apoptosis de muchos tipos celulares diferentes. La apoptosis inducida por camptotecina o araC de células HL60 está asociada con actividad de cdc2 elevada y actividad de quinasa asociada con ciclina E. La apoptosis inducida por camptotecina de células RKO está asociada con un incremento en la expresión de ciclina D1.

La camptotecina provoca la muerte apoptótica de neuronas corticales cerebrales de rata, Morris y Geller, J. Cell Bol. 134:757-770 (1996). Las células PC12 diferenciadas neuronalmente no proliferativas tratadas con camptotecina mueren en 6 días después del tratamiento, y las neuronas simpáticas de rata cultivadas mueren en 5 días después del tratamiento, incluso en presencia de NGF. Park y otros, J. Neurosci. 17(4):1256-1270 (1997). Sin embargo, la administración de olomoucina o flavopiridol individuales o ambos en presencia o ausencia de camptotecina daba como resultado aproximadamente 30% de muerte celular el día 6. La protección máxima de células PC12, o neuronas simpáticas de rata, de la muerte se observaba con flavopiridol 1 \muM y olomoucina 200 \muM, que son las concentraciones mínimas que inhiben completamente la síntesis de DNA por células PC12 proliferativas. La administración de iso-olomoucina, un análogo inactivo de la olomoucina, no prevenía la muerte celular de células neuronales tratadas con camptotecina.

También se observó que el flavopiridol y la olomoucina protegían contra la muerte neuronal cortical inducida por camptotecina. Park y otros, J. Neurosci. 17(4):1256-1270 (1997). Los valores de IC_{50} de flavopiridol y olomoucina eran 0,1 \muM y 100 \muM, respectivamente. La administración de iso-olomoucina no prevenía la muerte celular de células neuronales tratadas con camptotecina.

Existen varias implicaciones en las observaciones anteriores. Es bien reconocido que los pacientes tratados con radiación o agentes antineoplásticos experimentan efectos secundarios no deseables, incluyendo desarrollo de nuevos neoplasmas o apoptosis celular no deseable. Por ejemplo, algunos pacientes tratados con araC de dosis alta para la leucemia refractaria desarrollan un síndrome de toxicidad cerebral, caracterizado por pérdida de neuronas de Purkinje. Winkelman y Hinges, Ann Neurol. 14:520-527 (1983) y Vogel y Horouipian, Cancer 71:1303-1308 (1993). Se ha presentado que los pacientes tratados con cis-platino desarrollan neuropatías periféricas. Wallach y otros, J. Fla Med. Assoc. 79:821-822 (1992) y Mansfield y Castillo, AJNR Am. J. Neuroradiol. 15:1178-1180 (1994). En vista de estas observaciones, la co-administración o la administración única de los presentes compuestos en el tratamiento de neoplasmas reducirá o impedirá la apoptosis celular, en particular el daño neuronal causado por el tratamiento con agentes antineoplásticos o radiación.

La enfermedad cerebrovascular es la causa más común de incapacitación neurológica en los países occidentales. Los principales tipos específicos de enfermedad cerebrovascular son la insuficiencia cerebral debida a perturbaciones transitorias del flujo sanguíneo, infarto, hemorragia y malformación arteriovenosa. La apoplejía indica generalmente lesiones isquémicas. Una apoptosis neuronal no deseable se produce en la enfermedad cerebrovascular. El tratamiento con inhibidores de cdks puede ser un sistema para evitar la lesión y la degeneración neuronal en tales casos.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona nuevos compuestos de la Fórmula (I)

1

en la que R se selecciona del grupo que consiste en R2, R2NH- o H_{2}N-R3-, en donde

R2 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C_{1}-C_{8} y

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en donde Z se selecciona del grupo que consiste en fenilo, heterociclo seleccionado de piperidinilo, piridinilo, isoxazolilo, tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, morfolinilo, piperacinilo, bencimidazolilo, tiazolilo, tiofenilo, furanilo, indolilo, 1,3-benzodioxolilo, tetrahidropiranilo, imidazolilo, tetrahidrotiofenilo, piranilo, dioxanilo, pirrolilo, pirimidinilo, piracinilo, triacinilo, oxazolilo, purinilo, quinolinilo e isoquinolinilo, heterociclilo y cicloalquilo, cada R4 es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4}, y n es un número entero 1-8;

en donde cada alquilo C_{1}-C_{8} y Z está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes y que se seleccionan del grupo que consiste en Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4};

R3 es alquileno C_{1}-C_{8}; y

R1 se selecciona del grupo que consiste en ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

La presente invención proporciona un método para inhibir la progresión del ciclo celular. Más específicamente, la presente invención proporciona un método para inhibir cdk-2.

La presente invención también proporciona un método para evitar la apoptosis en células neuronales. Un método particularmente preferido de la presente invención es evitar la apoptosis de células neuronales inducida por agentes antineoplásticos o resultante de una enfermedad cerebrovascular. Otra realización preferida de la presente invención es el método para evitar la apoptosis inducida por el agotamiento de oxígeno. Una invención más preferida proporciona un método para evitar la enfermedad cerebrovascular inducida por apoptosis. Otra invención preferida proporciona un método para evitar la apoptosis inducida por apoplejía o infarto.

La presente invención proporciona un método para inhibir el desarrollo de neoplasmas. La presente invención proporciona un método para tratar a un paciente que sufre un estado de enfermedad neoplástica, que comprende administrar un compuesto de la fórmula proporcionada. Se prefiere que la cantidad administrada sea una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula. Un método preferido de la presente invención administra un solo compuesto de la fórmula proporcionada. Alternativamente, un método preferido de la presente invención administra una cantidad de un compuesto de la fórmula junto con otros agentes antineoplásticos. Además, la presente invención proporciona una composición que comprende una cantidad ensayable de un compuesto de Fórmula (I) mezclada o asociada de otro modo con un portador inerte. La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad inhibidora eficaz de un compuesto de Fórmula (I) mezclada o asociada de otro modo con uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables.

Descripción detallada de la invención

La presente invención proporciona nuevos compuestos de la Fórmula (I)

2

R2 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C_{1}-C_{8} y

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en donde Z se selecciona del grupo que consiste en fenilo, heterociclo según se define anteriormente y cicloalquilo, cada R4 es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4} y n es un número entero 1-8;

en donde cada alquilo C_{1}-C_{8} y Z está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, seleccionados del grupo que consiste en Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4};

R3 es alquileno C_{1}-C_{8}; y

R1 se selecciona del grupo que consiste en ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

También dentro del alcance de la Fórmula (I) están nuevos compuestos de la Fórmula (Ia)

3

en la que R es R2 en donde

R2 es alquilo C_{1}-C_{8}, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, seleccionados del grupo que consiste en Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4};

R1 se selecciona del grupo que consiste en ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

También dentro del alcance de la Fórmula (I) están nuevos compuestos de la Fórmula (Ib)

4

en la que R es R2,

R2 es

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en donde Z es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, seleccionados del grupo que consiste en Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4}; cada R4 es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4} y n es un número entero 1-8;

R1 se selecciona del grupo que consiste en ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

También están dentro del alcance de la Fórmula (I) nuevos compuestos de la Fórmula (Ic)

5

en la que R es R2,

R2 es

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en donde Z es heterociclo según se define anteriormente, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, seleccionados del grupo que consiste en Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4}. Cada R4 es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4} y n es un número entero 1-8;

R1 se selecciona del grupo que consiste en ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

También están dentro del alcance de la Fórmula (I) nuevos compuestos de la Fórmula (Id):

6

\vskip1.000000\baselineskip

en la que R es R2,

R2 es

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en donde Z es cicloalquilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, seleccionados del grupo que consiste en Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4}; cada R4 es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4} y n es un número entero 1-8;

R1 se selecciona del grupo que consiste en ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

También están dentro del alcance de la Fórmula (I) nuevos compuestos de la Fórmula (Ia')

7

en la que R es R2NH- en donde

R1 se selecciona del grupo que consiste en ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

También están dentro del alcance de la Fórmula (I) nuevos compuestos de la Fórmula (Ib')

8

en la que R es R2NH-,

R2 es

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en la que Z es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, seleccionados del grupo que consiste en Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4}; cada R4 es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4} y n es un número entero 1-8;

R1 se selecciona del grupo que consiste en ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

También están dentro del alcance de la Fórmula (I) nuevos compuestos de la Fórmula (Ic')

9

en la que R es R2NH-,

R2 es

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en donde Z es heterociclo según se define previamente, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, seleccionados del grupo que consiste en Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4}; cada R4 es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4} y n es un número entero 1-8;

R1 se selecciona del grupo que consiste en ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

También están dentro del alcance de la Fórmula (I) nuevos compuestos de la Fórmula (Id')

10

en la que R es R2NH-,

R2 es

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

R1 se selecciona del grupo que consiste en ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

También están dentro del alcance de la Fórmula (I) nuevos compuestos de la Fórmula (Ie)

11

en la que R es NH_{2}N-R3-, en donde

R3 es alquileno C_{1}-C_{8}; y

R1 se selecciona del grupo que consiste en ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

Según se usa aquí, el término "heterociclo" significa cualquier resto de anillo cerrado en el que uno o más de los átomos del anillo son un elemento distinto al carbono e incluye, pero no se limita a, los siguientes: piperidinilo, piridinilo, isoxazolilo, tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, morfolinilo, piperacinilo, bencimidazolilo, tiazolilo, tiofenilo, furanilo, indolilo, 1,3-benzodioxolilo, tetrahidropiranilo, imidazolilo, tetrahidrotiofenilo, piranilo, dioxanilo, pirrolilo, pirimidinilo, piracinilo, triacinilo, oxazolilo, purinilo, quinolinilo e isoquinolinilo.

Según se usa aquí, el término "alquilo C_{1}-C_{4}" se refiere a un radical hidrocarbilo de cadena lineal o ramificada, saturado o insaturado, de uno a cuatro átomos de carbono, e incluye, pero no se limita a, los siguientes: metilo, etilo, propilo, isopropilo, 1-propenilo, 2-propenilo, n-butilo, isobutilo, butilo terciario, sec-butilo, 1-butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo y similares.

Según se usa aquí, el término "alquilo C_{1}-C_{8}" se refiere a un radical hidrocarbilo de cadena lineal o ramificada, saturado o insaturado, de uno a ocho átomos de carbono, e incluye, pero no se limita a, los siguientes: metilo, etilo, propilo, isopropilo, 1-propenilo, 2-propenilo, n-butilo, isobutilo, butilo terciario, sec-butilo, 1-butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo, pentilo, neopentilo, hexilo, heptilo, octilo y similares.

Según se usa aquí, el término "alquileno C_{1}-C_{8}" se refiere a un radical hidrocarbileno de cadena lineal o ramificada, saturado o insaturado, de uno a ocho átomos de carbono, e incluye, pero no se limita a, los siguientes: metileno, etileno, propileno, isopropileno, 1-propenileno, 2-propenileno, n-butileno, isobutileno, butileno terciario, sec-butileno, 1-butenileno, 2-butenileno, 3-butenileno, pentileno, neopentileno, hexileno, heptileno, octileno y similares.

Según se usa aquí, el término "cicloalquilo" se refiere a un resto alicíclico saturado o insaturado que contiene de tres a ocho átomos de carbono e incluye, pero no se limita a, los siguientes: ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo y similares.

Según se usa aquí, el término "Hal" se refiere a un resto de halógeno e incluye restos de fluoro, cloro, bromo y yodo.

Según se usa aquí, el término "isómero óptico" o "isómeros ópticos" se refiere a cualquiera de las diversas configuraciones estereoisómeras que pueden existir para compuestos dados de Fórmula (I).

Según se usa aquí, el término "hidrato" o "hidratos" se refiere al producto de reacción de una o más moléculas de agua con un compuesto de Fórmula (I) en el que el enlace H-OH no se separa e incluye monohidratos así como multihidratos.

Según se usa aquí, el término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere al producto de reacción de una o más moléculas de cualquier ácido orgánico o inorgánico atóxico con los compuestos de Fórmula (I). Ácidos inorgánicos ilustrativos que forman sales adecuadas incluyen ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico y fosfórico y sales metálicas ácidas tales como monohidrogenoortofosfato sódico e hidrogenosulfato potásico. Ácidos orgánicos ilustrativos que forman sales adecuadas incluyen ácidos mono-, di- y tri-carboxílicos. Ilustrativos de tales ácidos son, por ejemplo, ácido acético, ácido glicólico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido malónico, ácido succínico, ácido glutárico, ácido fumárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido benzoico, ácido hidroxibenzoico, ácido fenilacético, ácido cinámico, ácido salicílico, ácido 2-fenoxibenzoico y ácidos sulfónicos tales como ácido metanosulfónico, ácido trifluorometanosulfónico y ácido 2-hidroxietanosulfónico.

Los compuestos de Fórmula (I) pueden prepararse utilizando procedimientos y técnicas bien conocidos y apreciados por el experto en la especialidad. Un esquema sintético general para preparar estos compuestos se indica en el Esquema A en el que todos los sustituyentes, a no ser que se indique otra cosa, son como se definen previamente.

Esquema A

12

En el Esquema A, etapa a, se hace reaccionar 2,6-dicloropurina (1) con el alcohol apropiado de estructura 2 para dar el correspondiente compuesto de 2,6-dicloropurina sustituido en 9 de estructura 3 usando técnicas y procedimientos bien conocidos para un experto normal en la especialidad.

Por ejemplo, la 2,6-dicloropurina (1) puede hacerse reaccionar con el alcohol apropiado de estructura 2 en presencia de trifenilfosfina y azodicarboxilato de dietilo en un disolvente aprótico anhidro adecuado, tal como tetrahidrofurano. Los reaccionantes se agitan típicamente juntos a temperatura ambiente durante un período de tiempo que varía de 5 horas a 5 días. La 2,6-dicloropurina sustituida en 9 resultante de estructura 3 puede recuperarse de la zona de reacción mediante métodos extractivos como es conocido en la especialidad o, más típicamente, la 2,6-dicloropurina sustituida en 9 resultante de estructura 3 se recupera mediante la retirada de disolvente seguido por cargar directamente sobre una columna de gel de sílice y eluir con un disolvente adecuado, tal como cloruro de metileno, o una mezcla de disolventes, tal como una mezcla de hexano y acetato de etilo. La 2,6-dicloropurina sustituida en 9 en bruto de estructura 3 puede purificarse a continuación mediante cromatografía o puede usarse en la siguiente etapa sin
purificación.

En la etapa b, la funcionalidad 6-cloro de la 2,6-dicloropurina sustituida en 9 de estructura 3 se hace reaccionar con una amina apropiada de estructura 4 para dar el correspondiente compuesto de 6-amino-2-cloropurina sustituida en 9 de estructura 5.

Por ejemplo, la 2,6-dicloropurina sustituida en 9 de estructura 3 puede hacerse reaccionar con la amina apropiada de estructura 4 en un disolvente polar anhidro adecuado tal como metanol. Los reaccionantes se agitan típicamente juntos a temperaturas de reflujo durante un período de tiempo que varía de 30 minutos a 3 días. La 6-amino-2-cloropurina sustituida en 9 resultante de estructura 5 se recupera de la zona de reacción mediante métodos extractivos que son conocidos en la especialidad, o, si la 6-amino-2-cloropurina sustituida en 9 de estructura 5 precipita en solución, puede recuperarse mediante filtración.

En la etapa c, la funcionalidad 2-cloro de la 6-amino-2-cloropurina sustituida en 9 de estructura 5 se hace reaccionar con 1,4-ciclohexanodiamina (6) para dar el compuesto correspondiente de Fórmula I.

Por ejemplo, la 6-amino-2-cloropurina sustituida en 9 apropiada de estructura 5 puede hacerse reaccionar con un exceso molar de 1,4-ciclohexanodiamina (6). Los reaccionantes se ponen típicamente en un tubo de presión, se sellan y se calientan a una temperatura de aproximadamente 80ºC a aproximadamente 150ºC durante un período de tiempo que varía de 30 minutos a 3 días. El compuesto resultante de Fórmula I se recupera de la zona de reacción mediante métodos extractivos que son conocidos en la especialidad y puede purificarse mediante cromatografía.

Materiales de partida para usar en los procedimientos sintéticos generales esbozados en el Esquema A están fácilmente disponibles para un experto normal en la especialidad.

Los siguientes ejemplos presentan síntesis típicas como las descritas en el Esquema A. Se entiende que estos ejemplos son ilustrativos solamente y no pretenden limitar el alcance de la presente invención de ningún modo. Según se usa aquí, los siguientes términos tienen los significados indicados: "g" se refiere a gramos; "mmol" se refiere a milimoles; "ml" se refiere a mililitros; "pe" se refiere a punto de ebullición; "ºC" se refiere a grados Celsius; "mm Hg" se refiere a milímetros de mercurio; "\mul" se refiere a microlitros; "\mug" se refiere a microgramos y "\muM" se refiere a micromolar.

Ejemplo 1 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(3-yodobencilamino)-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa a

2,6-Dicloro-9-ciclopentilpurina

Disuélvanse ciclopentanol (260 mg, 3,02 mmol), 2,6-dicloropiridina (680 mg, 3,60 mmol) y trifenilfosfina (950 mg, 3,60 milimoles) en THF seco (20 ml) y enfríese hasta 0ºC. Añádase azodicarboxilato de dietilo (570 \mul, 3,60 mmol) gota a gota durante un período de 15 minutos bajo una atmósfera de nitrógeno. Agítese la solución resultante durante 60 horas a temperatura ambiente. Evapórese el disolvente a vacío, cárguese directamente sobre un columna de gel de sílice y elúyase con cloruro de metileno para dar el compuesto del epígrafe como una mezcla en bruto.

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-(3-yodobencil)amino)-9-ciclopentilpurina

Disuélvanse 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina (620 mg, en bruto), hidrocloruro de 3-yodobencilamina (810 mg, 3,00 mmol) y trietilamina (835 \mul, 6,00 mmol) en etanol seco (20 ml). Caliéntese a reflujo durante 15 horas, enfríese y fíltrese el sólido para dar el compuesto del epígrafe como un sólido blanco (680 mg).

^{1}H-NMR (Me_{2}SO-d_{6} + D_{2}O, \delta): 8,27 (s, 1H, purina H-8), 7,74 (s, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,39 (d, 1H), 7,16 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,62 (s ancho, 2H), 2,15 (m, 2H), 1,90 (m, 4H), 1,70 (m, 2H);

CIMS (NH_{3}) 454 (MH^{+}), 328.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(3-yodobencilamino)-9-ciclopentilpurina

Mézclense 2-cloro-6-(3-yodobencil)amino)-9-ciclopentilpurina (130 mg, 0,287 mmol) y 1,4-ciclohexanodiamina (2,00 g, exceso) en un tubo de presión, séllense y caliéntese hasta 140ºC durante 18 horas. Enfríese la mezcla de reacción, añádase CH_{2}Cl_{2} (40 ml) y lávese con H_{2}O (2 x 20 ml). Séquese (MgSO_{4}), evapórese el disolvente a vacío y purifíquese mediante cromatografía en gel de sílice (10:1:gotas de CH_{2}Cl_{2}/MeOH/NH_{4}OH) para dar el compuesto del epígrafe (140 mg, 92%). Conviértase en la sal de hidrocloruro.

^{1}H-NMR (Me_{2}SO-d_{6} + D_{2}O, \delta): 7,83 (d, 1H), 7,71 (s, 1H, purina H-8), 7,60 (s, 1H), 7,38 (d, 1H), 7,14 (t, 1H), 4,63 (m, 3H), 3,62 (m, 1H), 2,99 (m, 1H), 1,50-2,20 (m, 14H), 1,10-1,50 (m, 2H);

CIMS (NH_{3}) 532 (MH^{+}).

Ejemplo 2 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-indolil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(3-indolil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(3-indolil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, triptamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

\newpage

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-indolil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-indolil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(3-indolil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 459 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,47.

Ejemplo 3 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(butilamino)-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-(butilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-(butilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, n-butilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(butilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(butilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-(butilamino)-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 466 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,45.

Ejemplo 4 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(3,4-metilendioxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[2-(3,4-metilendioxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[2-(3,4-metilendioxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 3,4-metilendioxifenetilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(3,4-metilendioxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(3,4-metilendioxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[2-(3,4-metilendioxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 464 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,28.

\newpage

Ejemplo 5 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-aminobutil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(4-aminobutil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(4-aminobutil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 1,4-diaminobutano y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-aminobutil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-aminobutil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(4-aminobutil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 387 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,10.

Ejemplo 6 Dihidrocloruro de (S)-2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(\alpha-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(\alpha-metilbencil)-amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(\alpha-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, (S)-\alpha-metilbencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(\alpha-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(\alpha-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(\alpha-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 420 (MH^{+}); Rf (min.) = 0,42.

Ejemplo 7 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(3-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(3-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 3-(etilamino)piridina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

\newpage

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(3-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 421 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,13.

Ejemplo 8 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-piridil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(4-piridil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(4-piridil)metilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 4-aminometilpiridina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-piridil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-piridil)metilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(4-piridil)metilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 407 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,13.

Ejemplo 9 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[3-(4-morfolinil)propilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[3-(4-morfolinil)propilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[3-(4-morfolinil)propilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 3-aminopropilmorfolina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[3-(4-morfolinil)propilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[3-(4-morfolinil)propilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[3-(4-morfolinil)propilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 443 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,11.

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Ejemplo 10 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(3,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(3,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 3,4-diclorobencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(3,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 474 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,34.

Ejemplo 11 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(3-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(3-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 3-metilbencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(3-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 420 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,29.

Ejemplo 12 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(2-piridil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[2-(2-piridil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[2-(2-piridil)etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2-
(etilamino)piridina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

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Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(2-piridil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(2-piridil)etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[2-(2-piridil)etilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 421 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,13.

Ejemplo 13 Trihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(4-morfolinil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[2-(4-morfolinil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[2-(4-morfolinil)etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2-aminoetilmorfolina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Trihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(4-morfolinil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara trihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(4-morfolinil)etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[2-(4-morfolinil)etilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 429 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,08.

Ejemplo 14 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-hidroxietilhidracino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[2-hidroxietilhidracino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[2-hidroxietilhidracino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2-hidroxietilhidracina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-hidroxietilhidracino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-hidroxietilhidracino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[2-hidroxietilhidracino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 375 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,15.

Ejemplo 15 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-cloro)bencilamino]-9-(2-propil)purina

Esquema A

Etapa a

2,6-Dicloro-9-(2-propil)purina

Se prepara 2,6-dicloro-9-(2-propil)purina a partir de 2,6-dicloropurina e isopropanol esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa a, pero sustituyendo el ciclopentanol por isopropanol.

Esquema A

Etapa b

Cloro-6-[(3-cloro)bencilamino]-9-(2-propil)purina

Se prepara 2-cloro-6-[(3-cloro)bencilamino]-9-(2-propil)purina a partir de 2,6-dicloro-9-(2-propil)purina, 3-clorobencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-cloro)bencilamino]-9-(2-propil)purina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-cloro)bencilamino]-9-(2-propil)purina a partir de 2-cloro-6-[(3-cloro)bencilamino]-9-(2-propil)purina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 414 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,44.

Ejemplo 16 Dihidrocloruro de (R)-2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(\alpha-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(\alpha-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(\alpha-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, (R)-\alpha-metilbencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

CIMS (NH_{3}) 420 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,27.

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Ejemplo 17 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(2-tiofenometilamino)-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-(2-tiofenometilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-(2-tiofenometilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2-tiofenometilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(2-tiofenometilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(2-tiofenometilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-(2-tiofenometilamino)-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 412 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,43.

Ejemplo 18 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(2-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(2-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2-clorobencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(2-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 440 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,28.

Ejemplo 19 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-bencimidazolil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(2-bencimidazolil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(2-bencimidazolil)metilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2-(metilamino)bencimidazol y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

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Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-bencimidazolil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-bencimidazolil)metilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(2-bencimidazolil)metilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 372 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,4.

Ejemplo 20 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(octilamino)-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-(octilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-(octilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, n-octilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(octilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(octilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-(octilamino)-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 428 (MH^{+}); Rf (min.) = 4,23.

Ejemplo 21 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(4-fenilbutilamino)-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-(4-fenilbutilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-(4-fenilbutilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 4-fenilbutilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(4-fenilbutilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(4-fenilbutilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-(4-fenilbutilamino)-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 448 (MH^{+}); Rf (min.) = 4,09.

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Ejemplo 22 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(ciclohexil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(ciclohexil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(ciclohexil)metilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, aminometilciclohexano y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(ciclohexil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(ciclohexil)metilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(ciclohexil)metilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 412 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,33.

Ejemplo 23 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-(3-metil-4-hidroxi)butil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(3-(3-metil-4-hidroxi)butil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(3-(3-metil-4-hidroxi)butil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2-(2-hidroximetil)butilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-(3-metil-4-hidroxi)butil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-(3-metil-4-hidroxi)butil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(3-(3-metil-4-hidroxi)butil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 404 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,15.

Ejemplo 24 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[3-(fenil)propilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[3-(fenil)propilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[3-(fenil)propilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 3-aminopropilbenceno y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

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Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[3-(fenil)propilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[3-(fenil)propilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[3-(fenil)propilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 434 (MH^{+}); Rf (min.) = 0,49.

Ejemplo 25 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[5-(hidroxi)pentil]amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[5-(hidroxi)pentil]amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[5-(hidroxi)pentil]amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 5-hidroxipentilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[5-(hidroxi)pentil]amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[5-(hidroxi)pentil]amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[5-(hidroxi)pentil]amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 402 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,25.

Ejemplo 26 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(pentilamino)-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-(pentilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-(pentilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, pentilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(pentilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(pentilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-(pentilamino)-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 386 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,52.

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Ejemplo 27 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(4-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(4-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 4-clorobencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(4-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 440 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,29.

Ejemplo 28 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(metilamino)-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-(metilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-(metilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, hidrocloruro de metilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(metilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(metilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-(metilamino)-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 330 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,15.

Ejemplo 29 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(3-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(3-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 3-clorobencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

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Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(3-clorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 440 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,30.

Ejemplo 30 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-tetrahidropiranil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(2-tetrahidropiranil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(2-tetrahidropiranil)metilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2-aminoetiltetrahidropirano y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-tetrahidropiranil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-tetrahidropiranil)metilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(2-tetrahidropiranil)metilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 414 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,39.

Ejemplo 31 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(2-tetrahidropiranil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(4-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 4-(etilamino)purina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(4-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 421 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,13.

Ejemplo 32 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-(2-propil)purina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-(2-propil)purina

Se prepara 2-cloro-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-(2-propil)purina a partir de 2,6-dicloro-9-(2-propil)purina (véase el Ejemplo 15 para la preparación), ciclopropilmetilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-(2-propil)purina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-(2-propil)purina a partir de 2-cloro-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-(2-propil)purina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 344 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,25.

Ejemplo 33 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(etilamino)-9-ciclopentilpurina Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-(etilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-(etilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, hidrocloruro de etilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(etilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(etilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-(etilamino)-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 472 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,46.

Ejemplo 34 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, aminometilciclopropano y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

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Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 370 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,21.

Ejemplo 35 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-fenetilhidracino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[2-fenetilhidracino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[2-fenetilhidracino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2-feniletilhidracina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-fenetilhidracino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-fenetilhidracino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[2-fenetilhidracino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 435 (MH^{+}); (min.) = 3,54.

Ejemplo 36 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-metilbutil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(3-metilbutil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(3-metilbutil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 3-metilbutilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-metilbutil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-metilbutil)amino]-9-ciclopentilpurina a
partir de 2-cloro-6-[(3-metilbutil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 386 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,53.

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Ejemplo 37 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(butil)amino]-9-(2-propil)purina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(butil)amino]-9-(2-propil)purina

Se prepara 2-cloro-6-[(butil)amino]-9-(2-propil)purina a partir de 2,6-dicloro-9-(2-propil)purina (véase el Ejemplo 15 para la preparación), butilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(butil)amino]-9-(2-propil)purina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(butil)amino]9-(2-propil)purina a partir de 2-cloro-6-[(butil)amino]-9-(2-propil)purina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 346 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,33.

Ejemplo 38 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(2-furanometilamino)-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-(2-furanometilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-(2-furanometilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, furfurilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(2-furanometilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(2-furanometilamino)-9-ciclopentilpurina a
partir de 2-cloro-6-(2-furanometilamino)-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 396 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,38.

Ejemplo 39 Trihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-(2-imidazolil)propil)amino]-9-(2-propil)purina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(3-(2-imidazolil)propil)amino]-9-(2-propil)purina

Se prepara 2-cloro-6-[(3-(2-imidazolil)propil)amino]-9-(2-propil)purina a partir de 2,6-dicloro-9-(2-propil)purina (véase el Ejemplo 19 para la preparación), 3-(2-imidazolil)propilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

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Esquema A

Etapa c

Trihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-(2-imidazolil)propil)amino]-9-(2-propil)purina

Se prepara trihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-(2-imidazolil)propil)amino]-9-(2-propil)purina a partir de 2-cloro-6-[(3-(2-imidazolil)propil)amino]-9-(2-propil)purina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 398 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,01.

Ejemplo 40 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-cloro-2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(4-cloro-2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(4-cloro-2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 4-cloro-2-fluorobencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-cloro-2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-cloro-2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(4-cloro-2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 458 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,31.

Ejemplo 41 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(hexilamino)-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-(hexilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-(hexilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, n-hexilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(hexilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(hexilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-(hexilamino)-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 400 (MH^{+}); Rf (min.) = 4,03.

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Ejemplo 42 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2-fluorobencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 424 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,22.

Ejemplo 43 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(fenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[2-(fenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[2-(fenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2-aminoetilbenceno y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(fenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(fenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[2-(fenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 420 (MH^{+}); Rf (min.) = 0,43.

Ejemplo 44 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(propilamino)-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-(propilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-(propilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, n-propilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

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Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(propilamino)-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(propilamino)-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-(propilamino)-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 358 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,31.

Ejemplo 45 Trihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(bencilamino)-9-(2-propil)purina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-(bencilamino)-9-(2-propil)purina

Se prepara 2-cloro-6-(bencilamino)-9-(2-propil)purina a partir de 2,6-dicloro-9-(2-propil)purina (véase el Ejemplo 15 para la preparación), bencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(bencilamino)-9-(2-propil)purina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(bencilamino)-9-(2-propil)purina a partir de 2-cloro-6-(bencilamino)-9-(2-propil)purina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 380 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,34.

Ejemplo 46 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[3-(1-imidazolil)propilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[3-(1-imidazolil)propilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[3-(1-imidazolil)propilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 1-(3-aminopropil)imidazol y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[3-(1-imidazolil)propilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[3-(1-imidazolil)propilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[3-(1-imidazolil)propilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 424 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,13.

Ejemplo 47 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[bencilamino]-9-ciclopentilpurina Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[bencilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[bencilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, bencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[bencilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[bencilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[3-(1-imidazolil)propilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 406 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,23.

Ejemplo 48 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(2,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(2,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2,4-diclorobencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(2,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 474 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,34.

Ejemplo 49 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2,2,2-trifluoroetilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[2,2,2-trifluoroetilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[2,2,2-trifluoroetilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, hidrocloruro de 2,2,2-trifluoroetilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

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Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2,2,2-trifluoroetilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2,2,2-trifluoroetilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[2,2,2-trifluoroetilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 398 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,33.

Ejemplo 50 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(4-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(4-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 4-fluorobencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(4-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 424 (MH^{+}); Rf (min.) = 2,24.

Ejemplo 51 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-yodobencil)amino]-9-(2-propil)purina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(3-yodobencil)amino]-9-(2-propil)purina

Se prepara 2-cloro-6-[(3-yodobencil)amino]-9-(2-propil)purina a partir de 2,6-dicloro-9-(2-propil)purina (véase el Ejemplo 15 para la preparación), 3-yodobencilamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-yodobencil)amino]-9-(2-propil)purina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-yodobencil)amino]-9-(2-propil)purina a partir de 2-cloro-6-[(3-yodobencil)amino]-9-(2-propil)purina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 506 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,53.

Ejemplo 52 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2,2,2-trifluoroetilhidracino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[2,2,2-trifluoroetilhidracino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[2,2,2-trifluoroetilhidracino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 2,2,2-trifluoroetilhidracina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2,2,2-trifluoroetilhidracino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2,2,2-trifluoroetilhidracino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[2,2,2-trifluoroetilhidracino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 413 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,28.

Ejemplo 53 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-hidroxipropil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(3-hidroxipropil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(3-hidroxipropil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 3-amino-1-propanol y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-hidroxipropil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-hidroxipropil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(3-hidroxipropil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 374 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,17.

Ejemplo 54 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(5-hidroxi-1,5-dimetilhexil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(5-hidroxi-1,5-dimetilhexil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(5-hidroxi-1,5-dimetilhexil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 6-amino-2-metil-2-heptanol y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

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Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(5-hidroxi-1,5-dimetilhexil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(5-hidroxi-1,5-dimetilhexil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(5-hidroxi-1,5-dimetilhexil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 444 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,37.

Ejemplo 55 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-hidroxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(4-hidroxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(4-hidroxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, hidrocloruro de triamina y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-hidroxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-hidroxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(4-hidroxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 436 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,38.

Ejemplo 56 Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(8-aminooctil)amino]-9-ciclopentilpurina

Esquema A

Etapa b

2-Cloro-6-[(8-aminooctil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara 2-cloro-6-[(8-aminooctil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2,6-dicloro-9-ciclopentilpurina, 1,8-diaminooctano y trietilamina esencialmente como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa b.

Esquema A

Etapa c

Dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(8-aminooctil)amino]-9-ciclopentilpurina

Se prepara dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(8-aminooctil)amino]-9-ciclopentilpurina a partir de 2-cloro-6-[(8-aminooctil)amino]-9-ciclopentilpurina esencialmente como se describe en el Ejemplo 1, Esquema A, etapa c.

CIMS (NH_{3}) 443 (MH^{+}); Rf (min.) = 3,30.

El término "estado de enfermedad neoplástica", según se usa aquí, se refiere a un estado o condición anormal caracterizado por la proliferación descontrolada. Estados de enfermedad neoplástica incluyen leucemias, carcinomas y adenocarcinomas, sarcomas, melanomas y tipos mixtos de neoplasmas.

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Las leucemias incluyen, pero no se limitan a, leucemias linfoblástica aguda, linfocítica crónica, mieloblástica aguda y mielocítica crónica.

Los carcinomas y adenocarcinomas incluyen, pero no se limitan a, los del cuello uterino, la mama, la próstata, el esófago, el estómago, el intestino delgado, el colon, el ovario y los pulmones.

Los sarcomas incluyen, pero no se limitan a, oesteromas, osteosarcoma, lipoma, liposarcoma, hemangiomas y hemangiosarcoma.

Los melanomas incluyen, pero no se limitan a, melanomas amelanóticos y melanóticos.

Tipos mixtos de neoplasmas incluyen, pero no se limitan a, carcinosarcoma, tipo tisular linfoide, retículo folicular, sarcoma celular y enfermedad de Hodgkins.

El término "cantidad terapéuticamente eficaz" de un compuesto de la fórmula (I) se refiere a una cantidad que es eficaz, con la administración simple o múltiple al paciente, para controlar el crecimiento del neoplasma o metástasis del neoplasma o evitar la apoptosis. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula variará de acuerdo con la edad, el peso, el tipo de neoplasma que ha de tratarse, la combinación de otros agentes antineoplásticos y otros criterios bien conocidos por los expertos en la especialidad usando pruebas y procedimientos clínicos y de laboratorio estándar. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto variará de acuerdo con el tipo de células susceptibles a la apoptosis, la localización del infarto, así como la edad, el peso y otros criterios bien conocidos por los expertos en la especialidad.

El término "controlar el crecimiento" del neoplasma se refiere a frenar, interrumpir, obstaculizar o detener el crecimiento del neoplasma o metástasis del neoplasma. El término "controlar el crecimiento" del neoplasma también se refiere a destruir la neoplasia o metástasis de la neoplasia

Una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula es la cantidad que es eficaz, con la administración simple o múltiple a un paciente, para proporcionar un efecto antineoplástico o para prevenir la apoptosis. Un "efecto antineoplástico" se refiere al frenado, la interrupción, la prevención o la destrucción del crecimiento adicional de células neoplásticas.

Una cantidad antineoplástica eficaz de un compuesto de la fórmula puede ser fácilmente determinada por un médico asistente, como un experto en la especialidad, mediante el uso de técnicas conocidas y al observar resultados obtenidos bajo circunstancias análogas. Al determinar la cantidad eficaz, un número de factores es considerado por el médico asistente, incluyendo, pero no limitados a, la especie de mamífero; su tamaño, edad y salud general; la enfermedad específica implicada, el grado o la implicación o la gravedad de la enfermedad; la respuesta del paciente individual; el compuesto particular de la fórmula administrada; el modo de administración; las características de biodisponibilidad de la preparación administrada; el régimen de dosis seleccionado; el uso de medicación concomitante y otras circunstancias pertinentes.

Una realización adicional de la presente invención incluye un método para el tratamiento profiláctico de un paciente con riesgo de desarrollar un estado de enfermedad neoplástica, que comprende administrar una cantidad antineoplástica profilácticamente eficaz de un compuesto de la fórmula. El término "un paciente con riesgo de desarrollar un estado de enfermedad neoplástica" se refiere a un paciente que, debido a una predisposición genética identificada a neoplasmas, tuvo o tiene actualmente neoplasmas, exposición a agentes carcinógenos, dieta, edad u otros factores de riesgo asociados con el desarrollo de estados de enfermedad neoplástica. Pacientes de riesgo preferidos para desarrollar un estado de enfermedad neoplástica incluyen pacientes que son positivos a virus oncogénicos, están en remisión de un tratamiento previo de neoplasma o neoplasmas, usan productos de tabaco o han sido expuestos previamente a carcinógenos tales como amianto, o son positivos a diversos marcadores genéticos neoplásticos.

Los virus oncogénicos son los virus asociados con cánceres. Por ejemplo, el sarcoma de Rous de los pollos, el papiloma de Shope de los conejos, el virus de la leucemia de múridos son virus que se reconoce que tienen un papel en el desarrollo de diversos cánceres. El papilomavirus humano está asociado con el cáncer genital. El virus contagioso de moluscos está asociado con tumores contagiosos de moluscos. El virus JC, un papovirus humano, está asociado con trastornos del sistema reticuloendotelial tales como leucemia y linfoma. Retrovirus humanos tales como virus linfotróficos de células T humanos (HTLV) tipos 1 y 2 están asociados con algunas leucemias y linfomas humanos. Los virus de inmunodeficiencia humana (HIV) tipos 1 y 2 son las causas del SIDA. El virus de Epstein-Barr se ha asociado con diversas enfermedades malignas, incluyendo carcinoma nasofaríngeo, linfoma de Burkitt africano y linfomas en receptores de trasplantes de órganos inmunosuprimidos.

Los marcadores genéticos son tales como mutaciones, reordenaciones y similares en BRCA 1, bcl-1/PRAD1, ciclina D1/CCND1, p16, cdk4, especialmente una mutación Arg24Cys, p16^{INK4a}. Los marcadores genéticos están asociados con predisposiciones a diversos neoplasmas. Por ejemplo, las alteraciones en el gen BRCA 1 están asociadas con un riesgo superior de cáncer de mama y ovárico. Otros marcadores genéticos incluyen alteraciones en el gen MMSC1, que interactúa con el gen del cáncer de cerebro y próstata MMCA1, en el gen CtIP, que está conectado al gen BRCA1 en el cáncer de mama y ovárico, se une al gen BRCA1 y está conectado a la ruta del oncogen E1A, y en el gen MKK3, que es un gen de control del ciclo celular que actúa como un supresor de tumores en el cáncer de tumor al activar la apoptosis. Los pacientes con riesgo de desarrollar un estado de enfermedad neoplástica también incluyen pacientes que sobreexpresan diversas proteínas del ciclo celular, incluyendo cdk4, ciclinas B1 y E. Pacientes con riesgo de desarrollar un estado de enfermedad neoplástica incluyen aquellos con niveles elevados de marcadores tumorales. Marcadores tumorales conocidos incluyen antígeno específico de la próstata (PSA) y factor de crecimiento similar a insulina 1 (IFG-1) plasmático, que son marcadores para el cáncer de próstata. Las proteínas de la matriz nuclear (NMPs) están asociadas con la presencia de cáncer, particularmente cánceres de vejiga y colon.

Se espera que una cantidad eficaz de un compuesto de la fórmula varíe de aproximadamente 25 nanogramos por kilogramo de peso corporal al día (ng/kg/día) a aproximadamente 500 mg/kg/día. Cantidades eficaces preferidas de un compuesto de la fórmula son de aproximadamente 1 \mug/kg/día a aproximadamente 500 \mug/kg/día. Una cantidad más preferida de un compuesto de la fórmula es de aproximadamente 1 \mug/kg/día a aproximadamente 50 \mug/kg/día.

Un compuesto de la fórmula puede administrarse de cualquier forma o modo que haga al compuesto biodisponible en cantidades eficaces. Los compuestos de la fórmula pueden administrarse por rutas orales o parenterales. Los compuestos de la fórmula pueden administrarse oralmente, subcutáneamente, intramuscularmente, intravenosamente, transdérmicamente, intranasalmente, rectalmente, ocularmente y similares. Se prefiere la administración oral. Un experto en la especialidad de la preparación de formulaciones farmacéuticas puede determinar fácilmente formas apropiadas de un compuesto de la fórmula al determinar características particulares del compuesto, la enfermedad que ha de tratarse, la fase de la enfermedad, la respuesta de otros pacientes y otras circunstancias pertinentes.

Un compuesto de la fórmula puede combinarse con portadores, excipientes u otros compuestos para preparar composiciones de un compuesto de la fórmula. Una composición de la fórmula comprende un compuesto de la fórmula mezclado o asociado de otro modo con uno o más portadores inertes. Las composiciones de la fórmula son útiles, por ejemplo, como un medio conveniente para transportes a granel de, o para almacenar, un compuesto de la fórmula. Un portador inerte es un material que no degrada o reacciona covalentemente de otro modo con un compuesto de la fórmula. Un portador inerte puede ser un material sólido, semisólido o líquido. Portadores preferidos son agua, tampones acuosos, disolventes orgánicos y portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables. Los tampones acuosos preferidos proporcionan un intervalo de tamponación en el que un compuesto de la fórmula no se degrada. Intervalos de tamponación preferidos son de aproximadamente pH 4 a aproximadamente pH 9. Disolventes orgánicos preferidos son acetonitrilo, acetato de etilo y hexano.

Una composición farmacéutica de un compuesto de la fórmula comprende un compuesto de la fórmula mezclado o asociado de otro modo con uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables. Un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable puede ser un material sólido, semisólido o líquido que puede servir como un vehículo o un medio para el compuesto de la fórmula. Portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados son bien conocidos por los expertos en la especialidad.

Una composición farmacéutica de un compuesto de la fórmula puede adaptarse para la ruta de administración. Una composición farmacéutica preferida de un compuesto de la fórmula es una tableta, una gragea, una cápsula, un elixir, un jarabe, una pastilla, una goma de mascar, un supositorio, una solución o una suspensión si la ruta de administración es oral, parenteral o tópica.

Una composición farmacéutica oral preferida de un compuesto de la fórmula comprende un compuesto de la fórmula con un diluyente inerte o con un portador comestible. Formas preferidas de composiciones farmacéuticas orales de un compuesto de la fórmula son tabletas, grageas, cápsulas, elixires, jarabes, pastillas, gomas de mascar, soluciones o suspensiones.

Composiciones farmacéuticas preferidas de un compuesto de la fórmula contienen de aproximadamente 4% a aproximadamente 80% del compuesto. Las composiciones farmacéuticas preferidas contienen una cantidad del compuesto de la fórmula de aproximadamente 50 \etag a aproximadamente 500 \mug; una composición farmacéutica más preferida contiene una cantidad del compuesto de la fórmula de aproximadamente 1 \mug a aproximadamente 200 \mug.

Un compuesto de la fórmula puede administrarse solo o en la forma de una composición farmacéutica en combinación con portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables.

Las siguientes abreviaturas se usan aquí: mg, miligramo; \mug, microgramo; \etag, nanogramo; TEA, trietilamina; mmol, milimol; ml, mililitro; C, Celsius; h, hora; TLC, cromatografía en capa fina; CH_{2}Cl_{2}, cloruro de metileno; MeOH, metanol; EtOH, etanol; N, normal; HCl, cloruro de hidrógeno; TFA, ácido trifluoroacético; DIEA, diisopropiletilamina; TA, temperatura ambiente; RT PCR, reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa; HEPES, 4-(2-hidroxietil)-1-(ácido piperacinetanosulfónico); MgCl_{2}, cloruro magnésico; EGTA, ácido etilenglicol-bis(\beta-aminoetiléter)-N,N,N',N'-tetraacético; EDTA, ácido etilendiaminotetraacético; DTT, ditiotreitol; MOI, multiplicidad de infección; NaF, fluoruro sódico; BSA, albúmina de suero bovino; p.o., oral(mente); i.v., intravenosa(mente); s.c., subcutánea(mente).

Ejemplo 57 Ensayo de quinasa 4 dependiente de ciclina

Los valores de IC_{50} para la inhibición de cdk-4 se obtuvieron mediante el siguiente método:

Sustrato

Proteína de fusión de glutationa S-transferasa-retinoblastoma (GST-Rb) (Kaelin, W.G., Jr. y otros, Cell 64: 521-532, 1991) se obtuvo del Dr. William Kaelin. La GST-Rb se preparó mediante transformación de E. coli con el plásmido pGEX-Rb (379-928). Las bacterias transformadas se hicieron crecer durante la noche hasta la saturación, a continuación se diluyeron en caldo YT y se incubaron a 37ºC durante 2 h. La proteína fue inducida mediante incubación con isopropiltioglicósido 0,1 mM durante 3 h. Después de la sedimentación mediante centrifugación, las células se sometieron a lisis mediante sonicación en tampón STE (NaCl 0,1 mM, Tris 10 mM, pH 8,0, EDTA 1 mM) que contenía 10% de Sarkosyl. La materia en partículas se retiró mediante centrifugación y el lisado se incubó con glutationa-Sepharose a 4ºC. Las cuentas se lavaron con tampón de quinasa y a continuación se realizó la cuantificación de proteínas teñidas con azul de Coomassie separadas mediante SDS-PAGE usando un patrón de proteína de concentración conocida.

Expresión de cdk4/ciclina D1 en células de insecto

Se clonó quinasa 4 dependiente de ciclina (cdk4) humana mediante RT PCR usando cebadores degenerados basados en la secuencia de aminoácidos publicada (Matsushime, H. y otros, Cell, 71: 323-334, 1992). El cDNA para ciclina D1 humana se clonó mediante RT PCR usando DNA genómico de células MCF-7. La secuencia estaba de acuerdo con la secuencia publicada (Xiong, Y. y otros, Cell, 65: 691-699). Tanto los cDNAs para cdk4 como ciclina D1 se clonaron en pFastBac (Life Technologies) y se produjo DNA de Bacmid recombinante que contenía los cDNAs mediante transposición específica para el sitio usando el sistema de expresión de baculovirus Bac-a-Bac adquirido de Life Technologies (catálogo Nº 10359-016). El DNA de Bacmid se usó para transfectar células de insecto Sf9 para producir virus recombinante. Después de la purificación de calvas del virus, las preparaciones virales se amplificaron hasta que se alcanzaban reservas de alta concentración. Se determinó que la coexpresión óptima de las proteínas recombinantes se alcanzaba con una MOI de 0,1 tanto para cdk4 como para ciclina D1 72 h después de la infección.

Se prepararon lisados mediante lisis de células Sf9 coinfectadas con cdk4 y ciclina D1 en HEPES 50 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, DTT 1 mM, fluoruro de fenilmetilsulfonilo 0,1 mM, 5 \mug/ml de aprotinina y 5 \mug/ml de leupeptina usando una bomba de Parr bajo una presión de nitrógeno de 500 p.s.i. durante 5 minutos a 4ºC. El material insoluble se determinó a 10.000 x g durante 20 min a 4ºC. Se añadió glicerol al sobrenadante hasta 10% y se almacenó a -80ºC en partes alícuotas.

Ensayo de quinasa

Prehumedézcanse placas filtrantes de 96 pocillos Millipore Multiscreen (filtros Durapore de 0,65 \mum) con 200 \mul de tampón de quinasa (HEPES 50 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, EGTA 1 mM). Se añade GST-Rb (0,5 \mug) unida a cuentas de glutationa-Sepharose en 50 \mul por pocillo y la solución se retira mediante aplicación de vacío. El ensayo contiene HEPES 50 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, EDTA 1 mM, DTT 1 mM, EGTA 1 mM, \beta-glicerofosfato 10 mM, ortovanadato sódico 0,1 mM, NaF 0,1 mM, BSA al 0,25%, ATP 10 \muM y 0,25 \muCi de [\gamma^{33}P]-ATP. Añádanse 0,1 \mug de cdk4/ciclina D1 (lisado de células de insecto) para iniciar el ensayo. Incúbese 30 min a 37ºC. Termínese la acción mediante filtración sobre Millipore Vacuum Manifold. Lávese cuatro veces con TNEN (Tris 20 mM, pH 8,0, NaCl 100 mM, EDTA 1 mM, Nonidet P-40 al 0,5%). Después de secar las placas a temperatura ambiente, las placas filtrantes se pusieron en placas adaptadoras (Packard) y se añadieron a cada pocillo 40 \mul de Microscint-O® (Packard). Se usó película Top Seal A para cubrir las placas antes de contar en un Top Count Scintillation Counter.

Los resultados se proporcionan en la Tabla 1.

Ejemplo 58 Estudios de inhibición de cdk-2

Los valores de IC_{50} para la inhibición de cdk-2 se determinaron mediante el siguiente método:

Ensayo de quinasa 2 dependiente de ciclina Sustratos

GST-Rb como se describe anteriormente para cdk4/ciclina D1.

Expresión de cdk2/ciclina E en células de insecto

Baculovirus recombinantes para cdk2 y ciclina E humana se obtuvieron del Dr. David Morgan en UC, Berkeley (Desai, D. y otros, Molec. Biol. Cell., 3:571-582, 1992). La coexpresión óptima en células de insecto se obtuvo con MOI's de 0,1 y 1,0 para cdk2 y ciclina E, respectivamente, 72 h después de la infección.

Ensayo de quinasa

Las condiciones del ensayo para cdk2/ciclina E eran idénticas a las de cdk4/ciclina D1 incluyendo el sustrato. La concentración de cdk2/ciclina E recombinante en el ensayo era 0,1 \mug por 100 \mul de ensayo. La incubación era durante 30 min a 30ºC.

Los resultados se proporcionan en la Tabla 1.

Ejemplo 59 Procedimiento de ensayo de cdk7/ciclina H Sustrato

Sustrato peptídico H_{2}N-RRR(YSPTSPS)_{4}-COOH basado en la secuencia de CTD de RNA polimerasa II.

Expresión de cdk7/ciclina H en células de insecto

Se clonó cdk7 humana mediante PCR con transcripción inversa. La secuencia estaba de acuerdo con la presentada por Tassan, J.P. y otros, J. Cell Biol. 127: 467-478, 1994 y Darbon, J.M. y otros Oncogene, 9:3127-3138, 1994. El cDNA para la ciclina H también se clonó mediante PCR con transcripción inversa y la secuencia estaba de acuerdo con la presentada por Fisher & Morgan, Cell, 78:713-724, 1994. Se prepararon DNA de Bacmid recombinante y reservas virales como se describe previamente para cdk4 y ciclina D1. La coexpresión óptima se alcanzó con MIO's de 1 y 2 para cdk7 y ciclina H, respectivamente, 48 h después de la infección.

Ensayo de quinasa

El ensayo mide la fosforilación de un sustrato peptídico (basado en el dominio C-terminal de RNA polimerasa II) mediante quinasa 7 dependiente de ciclina que es activada por ciclina H. [\gamma^{33}P]-fosfato es transferido desde [\gamma^{33}P]-ATP hasta el sustrato peptídico por la enzima. El ensayo se efectúa en placas de fondo en V de 96 pocillos, a continuación, después de la terminación, la reacción se transfiere a placas filtrantes de fosfocelulosa Millipore Multiscreen de 96 pocillos. El péptido se retiene sobre la membrana de fosfocelulosa después de lavar con una solución de ácido fosfórico.

Método

El ensayo enzimático se efectúa en placas de fondo en V de 96 pocillos en un volumen total de 100 \mul.

El ensayo contiene ATP 15 \muM, 0,5 \muCi de [\gamma^{33}P]-ATP, Hepes 50 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, EDTA 1 mM, DTT 1 mM, \beta-glicerofosfato 10 mM, ortovanadato sódico 0,1 mM, NaF 0,1 mM, sustrato peptídico 10 \muM. Para iniciar el ensayo, se añaden 0,125 ng de cdk7 y ciclina H (lisado de células de insecto). La incubación es durante 5 min a 24ºC. La reacción se termina mediante la adición de 40 \mul de ácido fosfórico 300 mM frío a cada muestra. El contenido de los pocillos de fondo en V se transfirió a continuación a una placa filtrante de fosfocelulosa de 96 pocillos de Millipore. Después de asentar durante 15 minutos a temperatura ambiente, se aplicó vacío a la capa filtrante y los pocillos se lavaron cuatro veces con 100 \mul de ácido fosfórico 75 mM frío. Después de la retirada del montaje de drenaje inferior, los filtros se secaron completamente, se pusieron en adaptadores de microplacas Multiscreen y se añadieron 40 \mul de Micro-Scint O a cada pocillo. Las placas se cubrieron con película Top-Seal A y se contaron durante 1,5 min usando un Packard Top Count Scintillation Counter.

Los resultados se proporcionan en la Tabla 1.

Ejemplo 60 Procedimiento de ensayo con [^{33}P]SPA de cdk1/ciclina B Sustrato

El ensayo usa un péptido de sustrato biotinilado (biotina-PKTPKKAKKL) derivado del sitio de fosforilación de p34^{cdc2} in vitro de histona H1.

Expresión de cdk1/ciclina B1 en células de insecto

Se clonó cdk1 humana mediante PCR con transcripción inversa. La secuencia estaba de acuerdo con la presentada por Lee, M.G. y Nurse, P. Nature, 327:31-33, 1987. El cDNA para la ciclina H también se clonó mediante RT PCR y la secuencia estaba de acuerdo con la presentada por Pines, J. y Hunter, T., Cell, 58:833-846, 1989. Se prepararon DNA de Bacmid recombinante y reservas virales según se describe anteriormente para cdk4 y ciclina D1. La coexpresión óptima se alcanzó con una MIO de 0,1 tanto para cdk1 como para ciclina B1 a las 48 h después de la infección.

Ensayo de quinasa

El estuche de ensayo para enzima p34^{cdc2} SPA[^{33}P]quinasa se adquirió de Amersham Life Science (Nº de catálogo RPNQ0170) y el procedimiento se realizó como un ensayo de formato de 96 pocillos según se sugiere por el fabricante. Cada ensayo contenía Tris HCl 50 mM, pH 8,0, MgCl_{2} 10 mM, Na_{3}VO_{4} (ortovanadato sódico) 0,1 mM, ATP 0,5 \muM, 0,2 \muCi de ^{33}P-ATP, DTT 2 \muM y péptido biotinilado 0,75 \muM y 3 \mug de lisado de células de insecto con cdk1/ciclina B en un volumen de ensayo total de 100 \mul. La incubación era durante 30 min a 30ºC. La reacción se terminó mediante la adición de 200 \mul de tampón de parada (ATP 50 \muM, EDTA 5 mM, Triton X-100 al 0,1% (v/v) en solución salina tamponada con fosfato)/cuentas SPA revestidas con estreptavidina (2,5 mg/ml). La placa se dejó a temperatura ambiente durante la noche y a continuación se cubrió con un TopSeal de Packard y se contó en un TopCount de Packard. El valor de IC_{50} se determinó ajustando los datos a una curva sigmoidal usando software GraphPad Prism.

Ejemplo 61 Inhibición de tumores in vitro Ensayo de proliferación in vitro

La proliferación de células tumorales se midió usando un ensayo de sulforrodamina B como el descrito en Skehan, P. y otros, J. Natl. Cancer Inst. 82: 1107-1112, 1990. Las células tumorales se recogieron con tripsina-EDTA, las células que excluían azul de tripano se contaron, se añadieron a placas de 96 pocillos y se incubaron durante la noche a 37ºC. Se añadió fármaco a los pocillos después de la dilución en medio de cultivo. Tres días más tarde, el medio se retiró y se repuso con medio que contenía fármaco reciente y se incubó 4 días adicionales. Las células se fijaron a continuación con 0,1 ml de ácido trifluoroacético al 10% durante 60 minutos a 4ºC. Las placas se enjuagaron cinco veces con agua corriente, se secaron al aire y se tiñeron durante 30 minutos con sulforrodamina B al 0,4% en ácido acético al 1% y se secaron al aire. El colorante unido se solubilizó con 0,1 ml de Tris 10 mM (pH 10,5) durante 5 minutos y la absorbancia se midió a 490 nm usando un lector de placas Titertek Multiscan MCC/340.

Alternativamente, se usó el ensayo de proliferación celular CyQUANT para cuantificar la proliferación celular.

Ensayo de proliferación celular CyQUANT

Alternativamente, se usó el ensayo de proliferación celular CyQUANT para cuantificar la proliferación de células tumorales. Las células tumorales se recogieron con tripsina-EDTA, las células que excluían azul de tripano se contaron, se añadieron a placas de 96 pocillos y se incubaron durante la noche a 37ºC. Se añadió fármaco a los pocillos después de la dilución en medio de cultivo. Tres días más tarde el medio se retiró y las placas se congelaron a -80ºC durante al menos 30 minutos. Después de descongelar las placas, se añadieron a cada pocillo 200 \mul de CyQUANT-GR en Cell Lysis Buffer (Molecular Probes Nº C-7026) y se incubaron 3-5 minutos a temperatura ambiente. La fluorescencia de CyQUANT-GR se midió en un lector de microplacas de fluorescencia Fmax de Molecular Devices (excitación 485 nm, emisión 530 nm).

Líneas celulares

MCF7 es un adenocarcinoma de mama humano, dependiente de hormonas (HTB 22);

MDA-MB-231 es un adenocarcinoma de mama humano, independiente de hormonas (HTB 26);

HT-29 es un adenocarcinoma de colon humano, clase II moderadamente bien diferenciado (HTB 38);

HCT-15 es un adenocarbinoma de colon humano (CCL 225);

A549 es un carcinoma pulmonar de células no pequeñas humano (CCL 185);

PC-3 es un adenocarcinoma de próstata humano, independiente de hormonas (CRL 1435); y

DU 145 es un carcinoma de próstata humano, independiente de hormonas (HTB 81).

Todas las líneas celulares se obtuvieron de American Type Tissue Collection, con el número de registro de ATCC entre paréntesis.

Las células MCF-7, MDA-MB-435 y MDA-MB-231 se hicieron crecer en medio esencial mínimo mejorado (Biofluids) sin rojo fenol, complementado con suero bovino fetal al 5%, 0,01 mg/ml de gentamicina y L-glutamina 3 mM. Todas las otras líneas celulares se hicieron crecer en medio RPMI 1640 (Life Technologies) complementado con suero bovino fetal al 5%, 0,01 mg/ml de gentamicina y L-glutamina 3 mM.

Los resultados se proporcionan en la Tabla 1.

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Ejemplo 62 Ensayos in vivo Método para el ensayo de la cápsula subrenal

Ratones desnudos se alojaron en jaulas microaisladoras bajo presión de aire positiva. Los procedimientos quirúrgicos y la dosificación se realizaron en una cabina de flujo laminar. El ensayo de la cápsula subrenal se realizó como se describe en Bogden, A.E., Kelton, D.E., Cobb, W.R. y Esber, H.J. A rapid screening method for testing chemotherapeutic agents against human tumor xenografts. En: D.P. Houchens y A.A. Ovejera (eds.), Proceedings of the Symposium on the Use of Athymic (Nude) Mice in Cancer Research, pp 231-250, Nueva York: Gustav Fischer New York, Inc. 1978. Brevemente, tumores de 400-500 mm^{3} obtenidos de ratones de mantenimiento se cortaron en trozos de 1 mm^{3} y los tamaños se verificaron usando un micrómetro ocular y un microscopio de disección. Después de la exteriorización del riñón, los trozos de tumor se implantaron bajo la cápsula de los riñones de ratones desnudos macho (6-8 semanas de edad) usando un trocar de 13 Ga. Después de la implantación, se midieron los diámetros más largo y más corto del trozo de tumor usando el micrómetro ocular y un microscopio de disección. El riñón se puso de nuevo en la cavidad corporal y la incisión de la pared corporal se cerró con suturas de seda y la incisión de la piel se cerró con grapas para heridas. El tratamiento con fármaco se comenzó el día después de la implantación y continuó durante 12 días, momento en el que los riñones se exteriorizaron de nuevo y el tamaño del tumor se midió como se describe previamente. El volumen del tumor se calculó mediante la fórmula, V = longitud x anchura^{2}/2, según se describe en Houchens, D.P., Ovejera, A.A. y Barker, A.D. The therapy of human tumors in athymic (nude) mice. En: D.P. Houchens y A.A. Ovejera (eds.), Proceedings of the Symposium on the Use of Athymic (Nude) Mice in Cancer Research, pp 267-280, Nueva York: Gustav Fischer New York, Inc. 1978. Los resultados se proporcionan en la Tabla 2.

TABLA 2 Inhibición del crecimiento de tumor de próstata humano PC-3 en ratones desnudos

(Experimento Nº 1 Ensayo de la cápsula subrenal)
Experimento Nº 1		V/V_{0}, mm^{3} (media \pm s.e.m.)	% de T/C^{b}
Sin tratamiento		4,4 \pm 0,8^{a}	100
	1 mg/kg i.p. al día	4,8 \pm 3,1^{a}	109
Ejemplo 1	3 mg/kg i.p. al día	2,0 \pm 1,0^{a}	44
^{a} V/V_{0} = volumen el día 0/volumen el día 12
^{b} % T/C = (volumen medio en animales tratados el día 12/volumen medio en animales de control el día 12) x 100

Claims

1. Un compuesto de la fórmula

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en el que R se selecciona de R^{2}, R^{2}NH- o H_{2}N-R^{3}-, donde R^{2} se selecciona de alquilo C_{1}-C_{8} y

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

Z se selecciona de fenilo, un heterociclo seleccionado de piperidinilo, piridinilo, isoxazolilo, tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, morfolinilo, piperacinilo, bencimidazolilo, tiazolilo, tiofenilo, furanilo, indolilo, 1,3-benzodioxolilo, tetrahidropiranilo, imidazolilo, tetrahidrotiofenilo, piranilo, dioxanilo, pirrolilo, pirimidinilo, piracinilo, triacinilo, oxazolilo, purinilo, quinolinilo e isoquinolinilo y cicloalquilo,

cada R^{4} es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4}, y n es un número entero 1-8;

en donde cada alquilo C_{1}-C_{8} y Z está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, y se seleccionan de Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4};

R^{3} es alquileno C_{1}-C_{8}; y

R^{1} se selecciona de ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R es R^{2}, donde R^{2} es alquilo C_{1}-C_{8}, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, seleccionados de Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4};

R^{1} se selecciona de ciclopentilo e isopropilo, y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R es R^{2}, donde R^{2} es

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en donde Z es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, y se seleccionan de Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4}; cada R^{4} es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4}, y n es un número entero 1-8;

R^{1} se selecciona de ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R es R^{2}, donde R^{2} es

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en donde Z es heterociclo según se define en la reivindicación 1, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, y se seleccionan de Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4}; cada R^{4} es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4} y n es un número entero 1-8;

R^{1} se selecciona de ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R es R^{2}, donde R^{2} es

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en donde Z es cicloalquilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, y se seleccionan de Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4}; cada R^{4} es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4} y n es un número entero 1-8;

R^{1} se selecciona de ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R es R^{2}NH-, donde R^{2} es alquilo C_{1}-C_{8}, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, y que se seleccionan de Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4};

R^{1} se selecciona de ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R es R^{2}NH-, donde R^{2} es

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en donde Z es fenilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, seleccionados de Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4}; cada R^{4} es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4} y n es un número entero 1-8;

R^{1} se selecciona de ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R es R^{2}NH-, donde R^{2} es

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en donde Z es heterociclo según se define en la reivindicación 1, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que son iguales o diferentes, y se seleccionan de Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4}; cada R^{4} es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4}, y n es un número entero 1-8;

R^{1} se selecciona de ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R es R^{2}NH-, donde R^{2} es

\newpage

---

\melm{\delm{\para}{R4}}{(C)}{\uelm{\para}{R4}}

n---Z

en donde Z es cicloalquilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes, y se seleccionan de Hal, OH y alquilo C_{1}-C_{4}; cada R^{4} es independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4}, y n es un número entero 1-8;

R^{1} se selecciona de ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, en el que R es H_{2}N-R^{3}-, donde R^{3} es alquileno C_{1}-C_{8}; y

R^{1} se selecciona de ciclopentilo e isopropilo,

y sus sales farmacéuticamente aceptables, isómeros ópticos e hidratos.

11. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, que se selecciona de

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-butilamino-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-octilamino-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-(3-metil-4-hidroxi)butil)amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(5-hidroxi-1,5-dimetilhexil)amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[5-(hidroxi)pentilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-hidroxipropil)amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(pentilamino)-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(metilamino)-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(etilamino)-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-metilbutil)amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[butilamino]-9-(2-propil)purina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(hexilamino)-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(propilamino)-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2,2,2-trifluoroetilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de (S)-2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(\alpha-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(3-yodobencilamino)-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3,4-diclorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-(trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-metilbencil)-amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-cloro)-bencilamino]-9-(2-propil)purina,

dihidrocloruro de (R)-2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(\alpha-metilbencil)amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-clorobencil)-amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(4-fenilbutilamino)-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[3-(fenil)propilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-clorobenciil)amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-clorobencil)-amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-(trans-(4-aminociclohexil)amino)-6-[(4-cloro-2-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-hidroxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina,

trihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(bencilamino)-9-(2-propil)purina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[bencilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-(trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2,4-diclorobencil)amino)-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino)-6-[(4-fluorobencil)amino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino)-6-[(3-yodobencil)amino]-9-(2-propil)purina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-indolil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(3,4-metilendioxifenil)etilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-(trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-piridil)metilamino]-9-ciclopentilpurina,

trihidrocloruro de 2-(trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[3-(4-morfolinil)propilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-(2-piridil)etilamino]-9-ciclopentilpurina,

trihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino)-6-[2-(4-morfolinil)etilamino)-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino)-6-(2-tiofenometilamino)-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(2-bencimidazolil)metilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino)-6-[(2-tetrahidropiranil)metilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-piridil)-2-etilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(2-furanometilamino)-9-ciclopentilpurina,

trihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(3-(2-imidazolil)propil)amino]-9-(2-propil)purina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-(3-(1-imidazolil)propilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[3-(2-imidazolil)propilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(ciclohexil)metilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-(2-propil)purina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(ciclopropil)metilamino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2,2,2-trifluoroetilhidracino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-hidroxietilhidracino]-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[2-fenetilhidracino)-9-ciclopentilpurina,

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(4-aminobutil)amino]-9-ciclopentilpurina y

dihidrocloruro de 2-[trans-(4-aminociclohexil)amino]-6-[(8-aminooctil)amino]-9-ciclopentilpurina.

12. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para usar como un medicamento.

13. Una composición farmacéutica que contiene un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, mezclado con un portador farmacéuticamente aceptable.

14. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para la preparación de un medicamento para tratar un trastorno hiperproliferativo.

15. Uso de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el trastorno hiperproliferativo es un estado de enfermedad neoplástica.

16. Uso de acuerdo con la reivindicación 15, en el que el estado de enfermedad neoplástica se selecciona de leucemia, carcinoma, adenocarcinoma, sarcoma, melanoma o un neoplasma de tipo mixto.

17. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en el que la leucemia se selecciona de leucemia linfoblástica aguda, leucemia crónica, leucemia mieloblástica aguda y leucemia mieloblástica crónica.

18. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en el que el carcinoma se selecciona de los del cuello uterino, la mama, la próstata, el esófago, el estómago, el intestino delgado, el colon, el ovario y los pulmones.

19. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en el que el adenocarcinoma se selecciona de los del cuello uterino, la mama, la próstata, el esófago, el estómago, el intestino delgado, el colon, el ovario y los pulmones.

20. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en el que el sarcoma se selecciona de oesteroma, osteosarcoma, lipoma, liposarcoma, hemangiomas y hemangiosarcoma.

21. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en el que el melanoma se selecciona de melanoma amelanótico y melanoma melanótico.

22. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en el que el tipo mixto de neoplasma se selecciona de carcinosarcoma, tipo tisular linfoide, retículo folicular, sarcoma celular y enfermedad de Hodgkins.

23. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para la preparación de un medicamento para evitar la apoptosis en células neuronales.

24. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 23, en el que la apoptosis es inducida por un agente antineoplástico.

25. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 23, en el que la apoptosis está inducida por una enfermedad cerebrovascular.

26. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 23, en el que la apoptosis está inducida por apoplejía o infarto.

27. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para la preparación de un medicamento para proteger a las células neuronales de la apoptosis.

28. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para la preparación de un medicamento para proteger a las células neuronales del daño inducido por un agente antineoplástico.

29. Una composición que comprende una cantidad ensayable de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 mezclado o asociado de otro modo con un portador inerte.

30. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad inhibidora de cdk2 eficaz de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 mezclada o asociada de otro modo con uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables.