ES2220434T3

ES2220434T3 - Indolinas n-sustituidas como agentes estrogenicos.

Info

Publication number: ES2220434T3
Application number: ES00913549T
Authority: ES
Inventors: John William Ullrich
Original assignee: Wyeth LLC
Current assignee: Wyeth LLC
Priority date: 1999-03-04
Filing date: 2000-02-22
Publication date: 2004-12-16
Anticipated expiration: 2020-02-22
Also published as: DE60011401D1; HK1038922A1; AR022798A1; CA2364911A1; TWI220898B; EP1159267A1; EP1159267B1; ATE268754T1; DK1159267T3; DE60011401T2; CN1152861C; WO2000051982A1; AU3497700A; CN1342143A; PT1159267E; JP2002538140A; HK1038922B

Abstract

Compuesto de fórmula: fórmula, p. 20 (I) en el que: R1 es H o bencilo; R2 es H, -OH o -O-bencilo; R3, R4 y R5 se seleccionan independientemente a partir de H, halógeno, ciano, alquilo C1-C6 (de cadena lineal o ramificada), trifluorometilo, -OH o los ésteres C1-C12 (de cadena lineal o ramificada) o éteres alquílicos C1-C12 (de cadena lineal o ramificada o cíclica) de los mismos, o éteres halogenados C1-C6; R6 es H o alquilo C1-C6; R7 es alquilo C1-C6; n es 2 a 3; Y es O o S; y X es fórmula, p. 21, arriba en el que R'' se selecciona a partir de alquilo inferior C1-C6, iguales o distintos, o X es un grupo que se selecciona a partir de: fórmulas, p. 21, medio o una sal de los mismos, aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

Description

Indolinas N-sustituidas como agentes estrogénicos.

La presente invención se refiere a nuevos compuestos de indolina N-sustituida que son útiles como agentes estrogénicos, así como a composiciones farmacéuticas, métodos de tratamiento que utilizan estos compuestos y a procedimientos para preparar los mismos.

Antecedentes de la invención

La estrogenoterapia sustitutiva está bien fundamentada como tratamiento de elección para la prevención, en mujeres, de la osteoporosis. [C. Christiansen, R. Lindsay, Estrogen, Bone Loss and Preservation, Osteoporosis International, 1, 15-21 (1990)]. El problema que plantea el tratamiento con estrógenos sin oposición es que pueden aparecer efectos proliferativos en el útero, que pueden estar asociados a endometriosis y/o cáncer de endometrio. Aunque no está tan claro, la estrogenoterapia sustitutiva sin oposición se ha implicado en un aumento en la incidencia de la formación de tumores de mama. Se han sido utilizados fármacos antiestrogénicos no esteroideos, tales como el tamoxifeno, en el tratamiento del cáncer de mama. Se ha demostrado que el tamoxifeno ejerce un efecto de tipo estrogénico en los huesos de los seres humanos, actuando al mismo tiempo como un antagonista en el tejido uterino. Sin embargo, la demostración de efectos agonistas parciales en el útero es preocupante. Un fármaco antiestrogénico reciente, el raloxifeno, un derivado de benzotiofeno de Lilly, es un antiestrógeno no esteroideo que parece presentar mayor selectividad tisular. Aunque es capaz de proteger el hueso, se ha demostrado que estimula el crecimiento uterino, en modelos animales, en menor medida que el tamoxifeno. Recientemente ha aparecido una revisión de la acción selectiva en los tejidos de los moduladores del receptor de estrógenos. [T. A. Grese y J. A. Dodge en "Ann. Rep. in Med. Chem". J. A. Bristol, Ed. Academic Press, New York, 1996, p.181].

Se ha descrito la utilización de índoles como antagonistas estrogénicos por Von Angerer, Chemical Abstracts, Vol. 99, nº 7 (1983), Resumen nº 53886u. Véase también J. Med. Chem. 1990, 33, 2635-2640; J. Med. Chem. 1987, 30, 131-136. Véase también Ger. Offen., DE 3821148 A1 891228 y WO 96/03375.

El documento EP-A-0 802 183 describe compuestos de 2-fenil-1-[4-(2-aminoetoxi)-bencil]-indol, que son útiles como agonistas estrogénicos selectivos.

Los compuestos descritos en la presente invención poseen moderada capacidad de unión al receptor de estrógenos (ER) y son potencialmente útiles en el tratamiento de la osteoporosis, hipertrofia prostática, cáncer de mama y cáncer de endometrio.

Descripción de la invención

Las indolinas N-sustituidas de la presente invención son agonistas/antagonistas estrogénicos con selectividad tisular, útiles para el tratamiento de enfermedades asociadas a la insuficiencia de estrógenos, e incluyen compuestos de fórmula:

1

en los que:

R_{1} es H o bencilo;

R_{2} es H, -OH o -O-bencilo;

R_{3}, R_{4} y R_{5} se seleccionan independientemente a partir de H, halógeno, ciano, alquilo C_{1}-C_{6} (de cadena lineal o ramificada), trifluorometilo, -OH o los ésteres C_{1}-C_{12} (de cadena lineal o ramificada) o éteres alquílicos C_{1}-C_{12} (de cadena lineal o ramificada o cíclica) de los mismos, o éteres halogenados C_{1}-C_{6}, preferiblemente éteres halogenados C_{1}-C_{3}, incluidos éter trifluorometílico y éter triclorometílico;

R_{6} es H o alquilo C_{1}-C_{6};

R_{7} es alquilo C_{1}-C_{6};

n es 2 a 3;

Y es O o S; y

X es

2

en el que R' se selecciona a partir de alquilo inferior C_{1}-C_{6}, iguales o distintos, o X es un grupo cíclico seleccionado a partir de:

3

o una sal de los mismos, aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

Ejemplos de ésteres C_{1}-C_{12} del grupo OH son el éster alquílico C_{2}-C_{12}, tal como ésteres alquílicos -OC(=O)C_{1}-C_{6}.

Ejemplos de grupos alquílicos son metilo, etilo, n-propilo, isopropilo y n- butilo.

Ejemplos de R_{6} y R_{7} son metilo.

Entre los compuestos más preferidos de la presente invención se encuentran aquellos en los que Y es O. Preferiblemente n es 2. Preferiblemente R_{3}, R_{4} y R_{5} se seleccionan independientemente a partir de H, OH o halógeno. Se entiende que el número de carbonos en los grupos alquílicos de los sustituyentes R_{6} y R_{7} puede seleccionarse de modo independiente de los otros sustituyentes.

La invención incluye sales aceptables formadas a partir de la reacción de adición con ácidos inorgánicos u orgánicos. Son útiles ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico; así como ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido propiónico, ácido cítrico, ácido maleico, ácido málico, ácido tartárico, ácido ftálico, ácido succínico, ácido metanosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácido naftalenosulfónico, ácido camforsulfónico, ácido bencenosulfónico. Se sabe que los compuestos que poseen un nitrógeno básico pueden formar complejos con muchos ácidos distintos (tanto próticos como no próticos) y es generalmente preferida la administración de un compuesto de la presente invención en forma de sal de un ácido de adición. Además, la presente invención incluye sales de amonio cuaternario de los compuestos de la presente memoria, que pueden prepararse haciendo reaccionar las aminas nucleófilas de la cadena lateral con un agente alquilante reactivo adecuado, tal como un haluro de alquilo o haluro de bencilo.

Los compuestos de la presente invención poseen por lo menos un centro asimétrico y, por consiguiente, los compuestos pueden existir y aislarse en varias formas estereoisoméricas ópticamente activas. La presente invención abarca los compuestos de fórmula I en cualquier forma ópticamente activa o mezclas de los mismos, por ejemplo, racematos. Pueden utilizarse técnicas estándar de separación para aislar formas enantioméricas o diastereoméricas particulares. Por ejemplo, una mezcla racémica puede convertirse en una mezcla de diastereoisómeros ópticamente activos por reacción con un único enantiómero de un "agente de resolución" (por ejemplo, por formación de sal diastereomérica o por formación de un enlace covalente). La mezcla resultante de diastereoisómeros ópticamente activos puede separase mediante técnicas estándar (por ejemplo, cristalización o cromatografía) y los diasteroisómeros individuales ópticamente activos pueden tratarse después para eliminar el "agente de resolución", liberando de este modo el enantiómero único del compuesto de la invención. También puede utilizarse cromatografía quiral (utilizando un soporte, eluyente o agente de emparejamiento iónico quiral) para separar mezclas enantioméricas directamente.

Los compuestos de la invención son agonistas estrogénicos parciales y presentan elevada afinidad por el receptor de estrógenos. Sin embargo, a diferencia de lo que sucede con muchos estrógenos, estos compuestos no provocan aumentos en el peso húmedo uterino. Estos compuestos son antiestrogénicos en el útero y pueden antagonizar completamente los efectos tróficos de los agonistas estrogénicos en el tejido uterino. Debido a la selectividad tisular de estos compuestos, son útiles para el tratamiento o la prevención en un mamífero de enfermedades o síndromes causados por, o asociados a, una insuficiencia de estrógenos o un exceso de estrógenos.

Los presentes compuestos tienen la capacidad de comportarse como agonistas estrogénicos, reduciendo el nivel de colesterol y previniendo la osteopenia. Por consiguiente, estos compuestos son útiles en el tratamiento de muchos trastornos que se originan por el exceso o la insuficiencia de estrógenos, entre ellos osteoporosis, hipertrofia prostática, alopecia masculina, cáncer de ovarios, esterilidad, cáncer de mama, cáncer endometrial, enfermedades cardiovasculares, anticoncepción, enfermedad de Alzheimer, disminución de la capacidad cognitiva y otros trastornos del SNC, así como ciertos cánceres como melanoma, cáncer de próstata, cánceres de colon, cánceres del SNC, entre otros. Además, estos compuestos pueden usarse para la hormonoterapia sustitutiva en mujeres posmenopáusicas o en otros estados carenciales de estrógenos donde pueda ser beneficioso el aporte complementario de estrógenos.

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse también en métodos para el tratamiento de la osteopenia, que puede provenir de un desequilibro en la formación de nuevos tejidos óseos de un individuo y de la reabsorción de tejidos viejos, dando lugar a una osteopenia neta. Dichas reducciones del tejido óseo tienen lugar en diversos individuos, especialmente en mujeres posmenopáusicas, mujeres histerectomizadas, personas que reciben, o han recibido, tratamientos prolongados con corticosteroides, personas con disgenesia gonadal y personas que sufren el síndrome de Cushing. También pueden tratarse necesidades especiales de sustitución ósea utilizando estos compuestos en individuos con fracturas óseas, estructuras óseas defectuosas y personas sometidas a cirugía ósea y/o implante de prótesis. Además de los problemas descritos anteriormente, estos compuestos pueden utilizarse en tratamientos para la artrosis, hipocalcemia, hipercalcemia, enfermedad de Paget, osteomalacia, osteohalistéresis, mieloma múltiple y otras formas de cáncer que tienen efectos perjudiciales en los tejidos óseos. Se entiende que el tratamiento de los trastornos aquí mencionados comprende la administración, a un individuo que necesita dicho tratamiento, de una cantidad farmacéuticamente eficaz de uno o más de los compuestos de la presente invención o de una sal de los mismos, aceptable desde el punto de vista farmacéutico. La presente invención también incluye composiciones farmacéuticas que utilizan uno o más de los presentes compuestos y/o las sales de los mismos, aceptables desde el punto de vista farmacéutico, junto con uno o más vehículos, excipientes, etc., aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

Se entiende que la dosis, pauta y forma de administración de estos compuestos variarán según el trastorno y el individuo que se va a tratar, y estarán sujetas al juicio del personal médico encargado. Se prefiere que la administración de uno o más de los compuestos mencionados en la presente memoria comience a una dosis baja y se incremente hasta alcanzar los efectos deseados.

La administración eficaz de estos compuestos puede realizarse a una dosis de aproximadamente 0,1 mg/día a aproximadamente 1.000 mg/día. Preferiblemente, la administración se realizará desde aproximadamente 10 mg/día a aproximadamente 600 mg/día en una dosis única o en dos o más dosis divididas. Dichas dosis pueden administrarse de cualquier forma que sea útil para dirigir los compuestos activos mencionados en la presente memoria al torrente sanguíneo del paciente, incluidas las formas orales, parenterales (entre ellas las inyecciones intravenosas, intraperitoneales y subcutáneas) y transdérmicas. Para los efectos de la presente descripción, se entiende que las administraciones transdérmicas incluyen todas las administraciones a través de la superficie corporal y los revestimientos interiores de los conductos corporales, incluidos los tejidos epiteliales y las mucosas. Dichas administraciones pueden llevarse a cabo utilizando los presentes compuestos, o las sales de los mismos aceptables desde el punto de vista farmacéutico, en lociones, cremas, espumas, parches, suspensiones, disoluciones y supositorios (por vía rectal y vaginal).

Las formulaciones orales que contienen los compuestos activos de la presente invención pueden comprender cualesquiera formas orales utilizadas habitualmente, entre ellas comprimidos, cápsulas, formas para administración bucofaríngea, tabletas, pastillas para chupar y líquidos, suspensiones o disoluciones orales. Las cápsulas pueden contener mezclas del compuesto o compuestos activos con rellenos inertes y/o diluyentes tales como almidones aceptables desde el punto de vista farmacéutico (por ejemplo, almidón de maíz, de patata o de tapioca), azúcares, edulcorantes artificiales, celulosas en polvo, tales como celulosas cristalinas y microcristalinas, harinas, gelatinas, gomas, etc. Pueden prepararse formulaciones útiles para comprimidos por métodos convencionales de compresión, granulación por vía húmeda y granulación por vía seca, utilizando diluyentes, aglutinantes, lubricantes, disgregantes, dispersantes o estabilizantes, aceptables desde el punto de vista farmacéutico, que incluyen, sin limitarse a los mismos, estearato de magnesio, ácido esteárico, talco, lauril sulfato de sodio, celulosa microcristalina, carboximetilcelulosa calcio, polivinilpirrolidona, gelatina, ácido algínico, goma arábiga, goma xantana, citrato de sodio, silicatos complejos, carbonato de calcio, glicina, dextrina, sacarosa, sorbitol, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, lactosa, caolín, manitol, cloruro de sodio, talco, almidones secos y azúcar en polvo. Las formulaciones orales descritas en la presente memoria pueden utilizar formulaciones estándar de retardo o de liberación controlada para alterar la absorción del compuesto o compuestos activos. Las formulaciones de supositorios pueden preparase con materiales tradicionales, entre ellos manteca de cacao, con o sin adición de ceras para alterar el punto de fusión del supositorio, y glicerina. También pueden utilizarse las bases hidrosolubles de supositorios, tales como polietilenglicoles de varios pesos moleculares.

La presente invención proporciona asimismo procedimientos para preparar los compuestos de fórmula (I), que comprenden las etapas siguientes:

a) alquilar un compuesto de fórmula:

4

en el que R_{2}, R_{2}, R_{3}, R_{6} y R_{7} son como se ha definido anteriormente, con un compuesto de fórmula:

5

en el que n, R_{4}, R_{5}, Y y X son como se ha definido anteriormente, para dar un compuesto de fórmula I;

o

b) hacer reaccionar un compuesto de fórmula

6

en el que Y, R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6} y R_{7} son como se ha definido anteriormente y hal representa un halógeno, por ejemplo cloro o bromo, con una amina de fórmula:

(V)H-X

en la que X es como se ha definido anteriormente, para dar un compuesto de fórmula (I),

o

c) desbencilar un compuesto de fórmula I en el que R_{1} es bencilo opcionalmente sustituido y/o R_{2} es benciloxi opcionalmente sustituido, para dar un compuesto de fórmula I en el que R_{1} es hidrógeno y/o R_{2} es hidroxi,

o

e) esterificar un compuesto de fórmula I en el que por lo menos uno de R_{3}, R_{4} o R_{5} es hidroxi, para formar un derivado éster del mismo.

Los métodos para llevar a cabo el procedimiento a) \rightarrow e) anterior son conocidos en la materia y/o se ilustran en los siguientes esquemas.

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse por métodos conocidos en la materia. Por ejemplo, la indolina de partida o matriz puede prepararse siguiendo los métodos generales de los Esquemas 1 y 2 siguientes.

Esquema 1

\vskip1.000000\baselineskip

7

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\newpage

Esquema 2

8

La síntesis de los compuestos de la presente invención puede realizarse mediante desprotonación, seguida de alquilación, de la estructura matriz 1 o 6 utilizando la sal de sodio de la hexametildisilil-amida y la cadena lateral deseada. (Esquemas 1 y 2).

9

Ejemplo nº 1

Compuesto nº 1 en el esquema 1

5-benciloxi-3,3-dimetil-2-fenil-2,3-dihidro-1H-indol

Se utilizaron los dihidroindoles protegidos 1 y 6, mostrados anteriormente, como estructura matriz para sintetizar los compuestos 3 (Ejemplo nº 3), 5 (Ejemplo nº 6), 8 (Ejemplo nº 9) y 10 (Ejemplo nº 11). Estas estructuras matrices se prepararon utilizando el método general descrito por Letcher, R. M. et. al., J. Chem. Soc. Perkin Trans., 1993, Vol.1, pp. 939-944. Por ejemplo, la estructura matriz 1 se preparó a partir de 4-benciloxifenilhidracina e isobutirofenona.

10

A una solución de 4-benciloxifenilhidracina HCl (2,5 g, 11,7 mmol) e isobutirofenona (2,1 g, 14,0 mmol) en 20 ml de tolueno se le añadió ácido acético (cat) y la solución resultante se sometió a reflujo con eliminación azeotrópica de H_{2}O durante 14 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró. El semisólido resultante se recogió en ácido acético y se sometió a reflujo durante 12 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró. El residuo semisólido se recogió en éter y se neutralizó con K_{2}CO_{3}. La capa de éter se secó y se concentró. La imina sólida resultante se disolvió en THF-MeOH (6:1), se enfrió 0ºC y se le añadió NaBH_{4} (0,53 g, 13,2 mmol). La solución se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 0,5 horas. La mezcla de reacción se vertió en HCl al 15% y se alcalinizó con K_{2}CO_{3}. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó con NaSO_{4} y se concentró. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (SiO_{2}, hexano-acetato de etilo (9: 1). La estructura matriz deseada, 1, se aisló en forma de semisólido de color anaranjado (2,9 g, 75%): ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta d 0,7 (s, 3H), 1,4 (s, 3H), 3,85 (br. s. 1H), 4,8 (s. 1H), 5,0 (s, 2H), 6,62 (d, 1H), 6,67 (s, 1H), 6,8 (dd, 1H), 7,3-7,5 (m, 10H); ^{13}C-RMN (CDCl_{3}) \delta 24,3 (q),26,3 (q), 45,5 (s), 71,0 (t), 74,9 (d), 110,4 (d), 110,9 (d), 113,0 (d), 127,4, 127,5 127,6, 127,8, 128, 128,5 (d), 137,6 (s), 139,7 (s), 139,9 (s), 143,4 (s), 152,9 (s); IR (película) 3390, 3040, 2980, 1490, 1050 cm^{-1}; espectro de masas m/e 330 (M+1); CHN calculado para C_{23}H_{23}NO

\vskip1.000000\baselineskip

11

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo nº 2

Compuesto nº 2 en el esquema 1

5-benciloxi-3,3-dimetil-2-fenil-1-[4-(2-piperidin-1-iletoxi)-bencil]-2,3-dihidro-1H-indol

A una solución de 5-benciloxiindolina 1 (0,2 g, 0,61 mmol) y etoxibencilbromuro de piperidina 11 (0,18 g, 0,61 mmol) en 3 ml de THF a -78ºC se le añadieron 1,53 ml, (1,53 mmol, 1 M, NaHMDSA-THF, 2,5 eq.). La mezcla de reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La reacción se vertió después en agua, se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó con MgSO_{4} y se concentró. El producto se purificó por cromatografía rápida (EtOAc al 15% /hexano), para dar la indolina N-alquilada deseada 2 en forma de espuma amarilla.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 0,79 (s, 3H), 1,34 (s, 3H), 1,4(m, 2H), 1,6(m, 4H), 2,5(m, 4H), 2,8 (t, 2H), 3,82 (d, AB q, 1H), 4,1 (t, 2H), 4,2 (s,1H), 4,25 (d, AB q, 1H), 5,0 (s, 1H), 6,33 (d, 1H), 6,6 (dd, 1H), 6,7 (dd, 1H), 6,8 (d, 2H), 7,2 (d, 2H), 7,3-7,45 (m, 10H); ^{13}C-RMN (CDCl_{3}) \delta 24,18 (t), 25,05 (q), 25,9 (t), 26,0 (q), 44,5 (s), 51,5, 55,0, 57,9, 65,9, 70,9 (t), 80,5 (d), 109,0, 110,7, 112,5, 114,4, 127,53, 127,55, 127,7, 128,1, 128,5, 128,6 (d), 130,6, 137,6, 137,7, 140,4, 145,3, 152,6, 157,72 (s); espectro de masas m/e 547(M+1).

\vskip1.000000\baselineskip

12

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo nº 3

Compuesto nº 3 en el esquema 1

3,3-dimetil-2-fenil-1-[4-(2-piperidin-1-iletoxi)-bencil]-2,3-dihidro-1H-indol-5-ol

A una solución de la indolina N-alquilada 2 (0,14 g, 0,26 mmol) en 8 ml (THF/EtOH-AcOH, 5:2:1) se le añadieron 0,14 g (Pd al 10% /C) seguido por 0,25 ml de ciclohexadieno (10 eq.) La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 7 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se concentró. El residuo se recogió en EtOAc, se lavó con NaHCO_{3}. La capa orgánica se secó con MgSO_{4} y se concentró. El producto se purificó por cromatografía rápida (MeOH al 8% -cloruro de metileno), para dar la fenolindolina deseada 3.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 0,65 (s, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,3-1,5 (m, 6H), 2,4 (m, 6H), 2,65 (m, 2H), 3,7 (d, AB q, 1H), 4,1 (m, 1H), 4,25 (d, AB q, 1H), 6,28 (d, 1H), 6,4 (dd, 1H), 6,5(S, 1H), 6,8(d, 2H), 7,1(d, 2H), 7,3-7,45 (m, 5H), 8,6 (S, 1H); espectro de masas m/e 457 (M+1).

Ejemplo nº 4

Compuesto nº 3 (Sal de HCl) en el esquema 1

3,3-dimetil-2-fenil-1-[4-(2-piperidin-1-iletoxi)-bencil]-2,3-dihidro-1H-indol-5-ol(HCI)

Una solución de la fenolindolina 3 (0,043 g, 0,11 mmol) en 2 ml de Et_{2}O- THF (4-1) se trata con 1,2 eq (HCl 1 M /Et_{2}O). La mezcla de reacción se agita después durante 2 horas y se concentra para dar la sal de HCl deseada.

Ejemplo nº 5

Compuesto nº 4 en el esquema 1

1-[4-(2-acepan-1-iletoxi)-bencil]-5-benciloxi-3,3-dimetil-2-fenil-2,3-dihidro-1H-indol

Se prepara como se ha descrito anteriormente para el compuesto 2.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 0,8 (s. 3H), 1,35 (s. 3H), 1,65 (m, 8H), 2,8 (m, 9H), 3,0 (t. 2H), 3,8 (A-B q, 1H), 4,1 (t. 2H), 4,2 (s, 1H), 4,3 (AB q, 1H), 4,95 (s, 2H), 6,35 (d, 1H), 6,65 (dd, 1H), 7,5 (s, 1H), 6,85 (d. 2H), 7,2 (d, 2H), 7,25-7,5 (m, 10H); espectro de masas m/e 561(M+1).

Ejemplo nº 6

Compuesto nº 5 en el esquema 1

1-[4-(2-acepan-1-iletoxi)-bencil]-3,3-dimetil-2-fenil-2,3-dihidro-1H-indol-5-ol

Se prepara como se ha descrito anteriormente para el compuesto 3.

^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta 0,6 (5, 3H), 1,15 (S, 3H), 1,4 (m, 8H), 2,6 (m, 4H), 2,7 (m, 2H), 3,55 (ABq, 1H), 3,8 (7, 2H), 3,9 (S, 1H), 4,05 (ABq, 1H), 6,15 (d, 1H), 6,25 (d, 1H), 6,35 (S, 1H), 6,7 (D, 2H), 7,0 (d, 2H), 7,2-7,4 (m, 5H), 8,5 (S, 1H); espectro de masas m/e 471 (M+1).

Ejemplo nº 7

Compuesto nº 6 en el esquema 2

5-benciloxi-2-(4-benciloxifenil)-3,3-dimetil-2,3-dihidro-1H-indol

El compuesto del título se preparó utilizando el método general descrito por Letcher, R. M. et. al., J. Chem. Soc. Perkin Trans., 1993, Vol.1, pp. 939-944, (Véase el Ejemplo nº 1, anterior) a partir de 4-benciloxifenilhidracina y (4-benciloxi)-fenilisopropil-cetona.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 0,7 (s, 3H), 1,35 (s, 3H), 3,85 (br. s,1H), 4,5 (S,1H), 5,0 (s, 2H, 5,1 (s, 2H), 6,6 (d, 1H), 6,7 (s, 1H), 6,75 (s, 1H), 6,95 (d, 2H), 7,25-7,5 (m, 12H). ^{13}C-RMN (CDCl_{3}) d 24,2, 26,2 (q), 45,5 (s), 70,0, 71,0 (t), 74,5 (d), 109,4, 110,9, 112,9, 114,3, 127,5, 127,6, 127,8, 127,9, 128,5, 128,6, (d), 132,2, 137,04, 137,6, 139,8, 143,4, 152,9, 158,3 (s); espectro de masas m/e 436 (M+1).

\newpage

Ejemplo nº 8

Compuesto nº 7 en el esquema 2

5-benciloxi-2-(4-benciloxi-fenil)-3,3-dimetil-1-[4-(2-piperidin-1-iletoxi)-bencil]2,3-dihidro-1H-indol

Se prepara como se ha descrito anteriormente para el compuesto 2.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 0,75 (s, 3H), 1,2 (s, 3H), 1,6 - 1,8 (m, 6H), 2,75 (t. 2H), 3,2-3,85 (m, 4H), 4,05 (t. 2H), 4,7 (br. s, 1H), 4,35 (br. s 2H), 5,0 (s, 2H), 5,1 (s, 2H), 6,3 (d, 2H), 6,5 (m, 2H), 6,6 (d, 2H), 6,85 (d. 2H), 6,95 (d, 2H), 7,05 (d, 2H), 7,2-7,5 (m, 8H), 7,5 (br. s. 1H).

Ejemplo nº 9

Compuesto nº 8 en el esquema 2

2-(4-hidroxifenil)-3,3-dimetil-1-[4-(2-piperidin-1-iletoxi)-bencil]-2,3-dihidro-1H-indol-5-ol

Se prepara como se ha descrito anteriormente para el compuesto 3.

^{1}H-RMN (DMSO) \delta 0,75 (s, 3H), 1,2 (s, 3H), 1,6 - 1,8 (m, 6H), 2,75 (t. 2H), 3,2-3,85 (m, 4H), 4,05 (t. 2H), 4,7 (br. s, 1H), 4,35 (br. s 2H), 6,3 (d. 2H), 6,5 (m, 2H), 6,6 (d, 2H), 6,85 (d. 2H), 7,05 (d, 2H), 7,5 (br. s. 1H); espectro de masas m/e 473 (M+1).

Ejemplo nº 10

Compuesto nº 9 en el esquema 2

5-benciloxi-2-(4-benciloxifenil)-3,3-dimetil-1-[4-(2-acepan-1-iletoxi)-bencil]-2,3-dihidro-1H-indol

Se prepara como se ha descrito anteriormente para el compuesto 2.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 0,8 (s, 3H), 1,35 (s, 3H), 1,6-1,8 (m, 6H), 2,8 (br. s, 4H) 3,1 (t, 2H), 3,8 (AB q,1H), 4,1 (t. 3H), 4,25 (AB q. 1H), 4,95 (s, 2H), 5,1 (s, 2H), 6,3 (d, 1H), 6,6 (d, 1M), 6,75 (s, 1H), 6,8 (d, 2H), 6,95 (m, 3H), 7,1 (d, 1H), 7,2 (d, 2H), 7,3 (m, 8H), 7,55 (d, 1H), 8,1 (d, 1H).

Ejemplo nº 11

Compuesto nº 10 en el esquema 2

1-[4-(2-acepan-1-iletoxi)-bencil]-2-(4-hidroxifenil)-3,3-dimetil-2-fenil-2,3-dihidro-1H-indol-5-ol

Se prepara como se ha descrito anteriormente para el compuesto 3.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 0,8 (s, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,6 (t, 2H), 1,7(m, 4H), 3,1(m, 2H), 3,3-3,5 (m, 4H), 4,2 (t, 2H), 4,3-4,5 (m 2H), 6,7 (d, 4H), 6,8 (d, 4H) 6,9 (d, 2H), 2,1 (d, 2H), 7,3 (br. S, 1H).

Ejemplo nº 12

Compuesto nº 11 en el esquema 2

1-[2-(4-clorometil-fenoxi)-etil]-piperidina

Este material se prepara a partir del aminoalcohol 1-[2-(4-hidroximetilfenoxi)-etil]-piperidina mediante tratamiento con cloruro de tionilo en THF a 0ºC. El sólido resultante se utiliza sin purificación ulterior.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 1,7-1,9 (m, 6H), 2,5 (br. s, 4H), 2,7 (t, 2H), 4,1 (t, 2H), 4,6 (s, 2H), 6,9 (d, 2H), 7,3 (d, 2H). 12,1 (br s, 1H).

Ejemplo nº 13

Compuesto nº 12 en el esquema 2

1-[2-(4-clorometilfenoxi)-etil]-acepano

Este material se prepara a partir del aminoalcohol 1-[2-(4-hidroximetilfenoxi)-etil]azapina mediante tratamiento con cloruro de tionilo en THF a 0ºC. El sólido resultante se utiliza sin purificación ulterior.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 1,7 (m, 2H), 1,9 (m, 4H), 2,2 (m, 2H), 3,1 (m, 2H), 3,4 (7,2H), 3,6 (t. 2H), 6,9 (d, 2H), 7,3 (d, 2H), 12,5 (1H).

Ensayo de fijación a receptores

Objetivo: Identificar compuestos que compiten con 17\beta-estradiol por la unión al receptor de estrógenos (ER). La forma más comúnmente aceptada de acción estrogénica se realiza a través de su proteína receptora de alta afinidad. Los compuestos que demuestran tener capacidad de unión al ER pueden regular de esta forma los procesos fisiológicos asociados a la acción estrogénica.

Procedimiento: Preparación de receptores: Se cultivan células CHO que sobreexpresan el receptor de estrógenos en placas de 150 mm^{2} en DMEM + carbón recubierto con dextrano al 10%, suero bovino fetal tratado. Las placas se lavan dos veces con PBS y una vez con Tris-HCI 10 mM, pH 7,4, EDTA 1 mM. Las células se recogen raspando la superficie y después se coloca la suspensión de células en hielo. Las células se rompen con un homogenizador de tejidos manual, equipado con un motor, utilizando dos pasadas de 10 segundos. La preparación cruda se centrifuga a 12.000 x g durante 20 minutos, seguido por una centrifugación de 60 minutos a 100.000 x g, para obtener un citosol exento de ribosomas. A continuación se congela el citosol y se almacena a -80ºC. La concentración de proteína del citosol se calcula utilizando el ensayo BCA con BSA como proteína patrón de referencia.

Condiciones del ensayo de fijación

El ensayo de competición se realiza en una placa de 96 pocillos (poliestireno*) que fija <2,0% del [^{3}H]-17\beta-estradiol total añadido, y se toma cada punto de medida por triplicado. Se reparten partes alícuotas de 100 \mug /100 \mul de la preparación de receptores por pocillo. Se añade una dosis saturante de [^{3}H]-17\beta-estradiol 2,5 nM + competidor (o tampón) en un volumen de 50 \mul, en la competición preliminar, cuando se evalúan concentraciones de competidor de 100x y 500x. Para la determinación de la CI_{50}, cuando se evalúan 12 concentraciones de competidor, sólo se utiliza [^{3}H]-17\beta-estradiol 0,8 nM. La placa se incuba a temperatura ambiente durante 2,5 h. Al final de este período de incubación se añaden a cada pocillo 150 \mul de carbón recubierto con dextrano y enfriado con hielo (5% de carbón activado recubierto con 0,05% de dextrano de 69 K) y la placa se centrifuga inmediatamente a 900 x g durante 5 minutos a 4ºC. A continuación se extraen 200 \mul de la solución sobrenadante para recuento por centelleo. Las muestras se cuentan hasta 2% o 10 minutos, lo que tenga lugar antes.

*Dado que el poliestireno absorbe una pequeña cantidad de [^{3}H]-17\beta-estradiol, se incluyen pocillos que contienen radiactividad y citosol, pero que no han sido tratados con carbón, para cuantificar la cantidad de isótopo disponible. Asimismo, se tratan con carbón pocillos que contienen radiactividad, pero no citosol, para calcular las DPM no eliminables de [^{3}H]-17\beta-estradiol. Se emplearon placas de 96 pocillos Corning #25880-96 por haberse demostrado que fijan la cantidad mínima de estradiol.

Análisis de los resultados

Las cuentas por minuto (CPM) de radiactividad se convierten automáticamente a desintegraciones por minuto (DPM) por el contador de centelleo Beckman LS7500 utilizando un conjunto de patrones atenuados, para generar el valor de H# para cada muestra. Para calcular el % de fijación de estradiol en presencia de una cantidad 100 ó 500 veces mayor de competidor, se aplica la siguiente fórmula:

((DPM de la muestra-DPM no eliminadas por carbón)/(DPM del estradiol-DPM no eliminadas por carbón)) x 100% = % de fijación de estradiol

Para la generación de las curvas de CI_{50}, se representa el % de fijación frente a la concentración de compuesto. Las CI_{50} se generan para compuestos que muestran >10% de competición a una concentración de competidor de 500x.

Compuestos de referencia

Se han evaluado los compuestos de referencia y los de los Ejemplo n^{os} 4, 6, 9 y 11, y se ha determinado su concentración CI_{50}. La concentración de estos compuestos necesaria para desplazar el 50% del [^{3}H]-17\beta-estradiol es:

Estradiol: 0,08 \muM	Ejemplo nº 4: 0,8 \muM
Tamoxifeno: 4,50 \muM	Ejemplo nº 6: 1,0 \muM
Raloxifeno: 0,04 \muM	Ejemplo nº 9: 0,31 \muM
17\alpha-dihidroequilina 0,15 \muM	Ejemplo nº 11: 0,35 \muM

Claims

1. Compuesto de fórmula:

13

en el que:

R_{1} es H o bencilo;

R_{2} es H, -OH o -O-bencilo;

R_{3}, R_{4} y R_{5} se seleccionan independientemente a partir de H, halógeno, ciano, alquilo C_{1}-C_{6} (de cadena lineal o ramificada), trifluorometilo, -OH o los ésteres C_{1}-C_{12} (de cadena lineal o ramificada) o éteres alquílicos C_{1}-C_{12} (de cadena lineal o ramificada o cíclica) de los mismos, o éteres halogenados C_{1}-C_{6};

R_{6} es H o alquilo C_{1}-C_{6};

R_{7} es alquilo C_{1}-C_{6};

n es 2 a 3;

Y es O o S; y

X es

14

en el que R' se selecciona a partir de alquilo inferior C_{1}-C_{6}, iguales o distintos, o X es un grupo que se selecciona a partir de:

15

o una sal de los mismos, aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que Y es O, o una sal del mismo, aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

3. Compuesto según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que n es 2 y R_{3}, R_{4} y R_{5} se seleccionan independientemente a partir de H, OH o halógeno; o una sal del mismo, aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

4. Compuesto según la reivindicación 1, que es uno de los siguientes:

5-benciloxi-3,3-dimetil-2-fenil-1-[4-(2-piperidin-1-iletoxi)-bencil]-2,3-dihidro-1H-indol;

3,3-dimetil-2-fenil-1-[4-(2-piperidin-1-iletoxi)-bencil]-2,3-dihidro-1H-indol-5-ol;

1-[4-(2-acepan-1-iletoxi)-bencil]-5-benciloxi-3,3-dimetil-2-fenil-2,3-dihidro-1H-indol;

1-[4-(2-acepan-1-iletoxi)-bencil]-3,3-dimetil-2-fenil-2,3-dihidro-1H-indol-5-ol;

5-benciloxi-2-(4-benciloxifenil)-3,3-dimetil-1-[4-(2-piperidin-1-iletoxi)-bencil]2,3-dihidro-1H-indol;

2-(4-hidroxifenil)-3, 3-dimetil-1-[4-(2-piperidin-1-iletoxi)-bencil]-2,3-dihidro-1H-indol-5-ol;

5-benciloxi-2-(4-benciloxifenil)-3,3-dimetil-1-[4-(2-acepan-1-iletoxi)-bencil]- 2,3-dihidro-1H-indol;

o

1-[4-(2-acepan-1-iletoxi)-bencil]-2-(4-hidroxifenil)-3,3-dimetil-2-fenil-2,3-dihidro-1H-indol-5-ol;

o una sal de los mismos, aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

5. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una sal del mismo, aceptable desde el punto de vista farmacéutico, y un vehículo o excipiente aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

6. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir la osteopenia en un mamífero, comprendiendo el método su administración a un mamífero.

7. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir trastornos patológicos o síndromes causados por, o asociados a, una insuficiencia de estrógenos en un mamífero.

8. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir la cardiopatía en un mamífero, comprendiendo el método su administración a un mamífero.

9. Procedimiento para preparar un compuesto de fórmula I según la reivindicación 1, o una sal del mismo, aceptable desde el punto de vista farmacéutico, que comprende una de las siguientes etapas:

a) alquilar un compuesto de fórmula:

16

en el que R_{2}, R_{2}, R_{3}, R_{6} y R_{7} son como se ha definido en la reivindicación 1, con un compuesto de fórmula:

17

en el que n, R_{4}, R_{5}, Y y X son como se ha definido en la reivindicación 1, para dar un compuesto de fórmula I;

o

b) hacer reaccionar un compuesto de fórmula

18

en el que Y, R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6} y R_{7} son como se ha definido en la reivindicación 1 y hal representa un halógeno, por ejemplo cloro o bromo, con una amina de fórmula:

(V)H-X

en la que X es como se ha definido anteriormente, para dar un compuesto de fórmula (I), o

o

10. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su utilización como fármaco.