ES2232018T3 - Kit de diagnostico para prueba y procedimiento para llevar a cabo la misma. - Google Patents

Kit de diagnostico para prueba y procedimiento para llevar a cabo la misma.

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ES2232018T3
ES2232018T3 ES98943805T ES98943805T ES2232018T3 ES 2232018 T3 ES2232018 T3 ES 2232018T3 ES 98943805 T ES98943805 T ES 98943805T ES 98943805 T ES98943805 T ES 98943805T ES 2232018 T3 ES2232018 T3 ES 2232018T3
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Abstract

Kit de diagnóstico de prueba cutánea para comprobar una reacción inmunológica celular frente a la oncoproteína E6 y/o E7 de un tipo de virus del papiloma humano, incluyendo el kit de diagnóstico una cantidad eficaz de la oncoproteína E6 y/o E7 y/o al menos una parte inmunológicamente activa de E6 y/o E7 de un tipo de virus del papiloma humano, así como un aplicador con el que puede aplicarse por vía intracutánea la cantidad eficaz de la oncoproteína o la parte inmunológicamente activa de la misma.

Description

Kit de diagnóstico para prueba y procedimiento para llevar a cabo la misma.
La presente invención se refiere a una prueba cutánea para determinar el estado inmunológico frente a los virus del papiloma humano.
Los virus del papiloma humano (VPH) se relacionan estrechamente con carcinomas malignos del tracto anogenital, especialmente del cuello uterino, de la vulva, del pene y del conducto anal. Los tipos de VPH de alto riesgo ("high-risk"), como por ejemplo, VPH 16, transforman los queratinocitos por medio de las oncoproteínas E6 y E7 virales contenidas en ellos mediante inactivación de las proteínas supresoras de tumores. De esto se deduce que ambas oncoproteínas E6 y E7 participan de manera cooperativa en la inmortalidad (Hawley-Nelson, EMBO J., 8, 3905 (1989)).
En los estadios tumorales avanzados, las células cancerosas transformadas mediante VPH siguen expresando las proteínas virales E6 y E7. Se supone que una reacción inmunológica, inducida mediante vacunación o espontánea, frente a estas proteínas podría conducir a una regresión de los tumores producidos por VPH. Hasta el momento, los pacientes con regresión espontánea de su enfermedad no se estudiaban, porque los estudios de la reacción de defensa in vitro son extremadamente largos y sin embargo, relativamente poco sensibles. No está claro el papel de la respuesta inmunológica celular en caso de vacunas frente a lesiones asociadas con VPH.
La realización de pruebas cutáneas se utiliza parcialmente ya en el ámbito clínico en la alergología y en caso de enfermedades infecciosas (en primera línea para el diagnóstico de la tuberculosis en forma de la conocida prueba de la tuberculina (TINE)). Sin embargo, para las cuestiones virológicas o para la investigación del cáncer no ha habido hasta el momento prácticamente ninguna aplicación específica.
Las pruebas cutáneas también son una herramienta excelente para las cuestiones científicas y son adecuadas para el registro rápido y practicable de reacciones inmunológicas celulares complejas in vivo. En el estado de la técnica se conoce ya una prueba cutánea para el estudio de la reacción inmunológica celular frente al VPH de alto riesgo. Esta primera aplicación de la prueba cutánea para determinar una reacción inmunológica frente a un virus asociado a cáncer se llevó a cabo con la proteína L1 de la cápside del VPH tipo 16 de alto riesgo (modelo de utilidad G9106105.9) y a continuación se aplicó en modelos animales.
También existe un modelo para la prueba cutánea en el caso del ratón; en este sentido, se investigó la reacción inmunológica con un antígeno trasplantado (McLean et al. J. Gen. Virol. 74, 239-245 (1993)).
Esta prueba cutánea previamente conocida no abarcaba la respuesta inmunológica humoral frente a una infección por VPH. A diferencia de la defensa celular, el registro de la reacción inmunológica humoral puede llevarse a cabo de manera relativamente fácil en el laboratorio por medio de pruebas serológicas. Se considera como demostrado que los anticuerpos frente a estructuras intactas tridimensionales de la proteína de la cápside del virus pueden neutralizar a los virus del papiloma (Christensen et al. J. Gen. Virol 75, 2271 (1994)). Los anticuerpos frente a las proteínas tempranas E6 y E7 se asocian con tumores malignos del cuello uterino (Jochmus-Kudielka et al. J. Natl. Cancer Inst. 81, 1698 (1989)).
Una vacunación profiláctica con partículas similares a virus ("virus like particles") compuestas por proteínas de la cápside podría reducir de manera preventiva una infección por VPH y el riesgo de cáncer relacionado con ella. Sin embargo, la respuesta inmunológica humoral frente a VPH no desempeña ningún papel en la regresión de lesiones ya existentes. Por tanto, la serología tiene importancia epidemiológica.
En resumen, los experimentos en modelos animales y en pacientes de manera interna muestran que las reacciones inmunológicas celulares frente a las proteínas virales pueden demostrarse mediante realización de pruebas cutáneas. Basándose en los datos, puede suponerse que una reacción inmunológica frente a la proteína L1 de la cápside no se asocia con regresión, ya que en las lesiones avanzadas no se forman ya partículas virales intactas. Por tanto, las proteínas virales E6 y E7 transformantes son una diana probable de una reacción inmunológica "curativa". Por tanto, estos antígenos tumorales son candidatos potenciales para el desarrollo de una vacuna, cuando debe lograrse una efectividad terapéutica además de una eficacia profiláctica mediante las proteínas de la cápside del virus. Se acepta que mediante tal vacunación se activarán las células T citotóxicas y las células T cooperadoras frente a las lesiones genitales persistentemente infectadas.
Sin embargo, hasta el momento no se conoce una prueba in vivo para demostrar el éxito de tal vacunación frente a E6 y/o E7 mediante la reacción de defensa celular mostrada por el sistema inmunológico como reacción frente a la vacunación.
A partir del documento EP-A-0 386 734 se conocen dos regiones inmunógenas de la proteína E7 del virus del papiloma humano de tipo 16 (VPH 16), localizándose una de las regiones inmunorreactivas aguas abajo del nucleótido 595 y la otra región inmunorreactiva aguas abajo del nucléotido 667 del genoma del VPH 16.
El documento EP-A-0 451 550 se refiere a epítopos serológicamente activos de las proteínas E4, E6, E7 y L1 del virus del papiloma humano (VPH) 16, así como a péptidos que contienen tales epítopos y al uso de estos péptidos para la producción de una vacuna y un kit de diagnóstico.
Por tanto, es tarea de la invención la preparación de una prueba con la que puede determinarse de manera sencilla el estado inmunológico frente a las proteínas E6 y/o E7 de los virus del papiloma in vivo. Esta tarea se soluciona según la invención mediante la preparación del kit de diagnóstico para pruebas cutáneas según la reivindicación 1 independiente, así como el uso según la reivindicación 10 independiente. Otros aspectos y conformaciones ventajosos de la invención resultan de las reivindicaciones dependientes y de la descripción.
La prueba cutánea según la invención también puede utilizarse para comprobar las regresiones espontáneas de precursores de carcinomas por virus del papiloma (CIN).
En otro aspecto, la prueba cutánea según la invención también puede utilizarse en el campo de la investigación para estudiar mecanismos en la regresión de lesiones dependientes de VPH.
A continuación se describe la presente invención mediante un ejemplo, en el que se muestra la principal aptitud de la prueba cutánea para la revisión de los resultados exitosos tras la vacunación mediante pacientes no vacunados que, sin embargo presentaban en parte regresiones espontáneas de los carcinomas del cuello uterino y precursores de los mismos y por tanto, una propiedad que se equiparaba al resultado exitoso tras la vacunación. Para la prueba cutánea, se utilizaron péptidos sintéticos frente a E6 o E7 de VPH 16. Con respecto al uso de proteínas o proteínas de fusión naturales, éstos presentan la ventaja de que podía descartarse una contaminación con ADN, ya que los péptidos sintéticos están libres con absoluta seguridad de contaminación problemática con ADN.
Se llevó a cabo en pacientes una prueba cutánea a modo de ejemplo con los antígenos peptídicos para la oncoproteína E7 de VPH 16. Sorprendentemente pudo mostrarse que, en primer lugar, puede registrarse una reacción inmunológica celular frente a la oncoproteína viral E7 de VPH 16 in vivo y en segundo lugar, los péptidos sintéticos pueden reemplazar a las proteínas para la realización de las pruebas cutáneas. En tercer lugar, pudo observarse una asociación de una reacción a la prueba cutánea positiva en el sentido de una hipersensibilidad de tipo retardado ("delayed type hypersensitivity") con regresión de los precursores de cáncer del cuello uterino. Tal correlación no se conocía previamente. La observación respalda la importancia potencial del antígeno E7 de VPH 16 en una vacuna terapéuticamente eficaz y muestra la aplicabilidad de la prueba cutánea según la invención para la determinación del estado inmunológico con respecto a E6 y E7.
Para la realización del ejemplo según la invención, se utilizaron cinco péptidos solapados unos con otros, relativamente largos, cada uno de aproximadamente 30 aminoácidos para la oncoproteína E7 de VPH 16 y un péptido control de secuencia aleatoria de la misma longitud. Se conoce la secuencia para los 98 aminoácidos de la proteína E7 de VPH 16 (Seedorf et al. J. Gen. Virol., 71, 2719 (1990)). Los péptidos se produjeron en el Dep. IHB/AZL ("Department of Immunohaematology and Bloodbank. Akademisch Ziekenhuis", Departamento de inmunohematología y banco de sangre. Hospital universitario) (Leiden, Holanda) en un sintetizador múltiple de péptidos ("multiple peptide synthesizer"). Los péptidos se sintetizaron con ayuda de la tecnología "Fmoc", se hicieron precipitar por medio de éter de ácido trifluoro y se liofilizaron a continuación. La pureza de los péptidos se verificó por medio de cromatografía líquida de alta presión en fase inversa ("reverse phase high pressure liquid chromatography"). Sin embargo, los péptidos de uso con la prueba cutánea según la invención también pueden producirse de otras maneras habituales para los expertos.
Las secuencias para los péptidos individuales probados, indicadas en el código de una letra, fueron:
1. MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYCYEQLND
2. DLYCYEQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRA
3. PAGQAEPDRAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQ
4. CDSTLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIV
5. STHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP
así como del péptido control:
6. SENKELKKAIDGLQGLLLGLRQRIETLEGK
El código de una letra de los aminoácidos se explica, por ejemplo en el Diccionario de Química Römpp ("Römpps Chemie Lexikon"), editorial Georg Thieme Verlag, volumen 1, página 160/161, (1989).
Para la realización de las pruebas cutáneas, después de la verificación de esterilidad y prueba pirógena se disolvieron los péptidos en una concentración de 1 mg/ml en glicerina al 70% y se inyectaron aproximadamente 0,01 ml de esta disolución por vía intracutánea estricta en la dermis más superior y la epidermis de las personas de prueba. Se utilizó cada péptido de manera separada (5 péptidos de E7 de VPH 16 + 1 péptido control). Sin embargo, se entiende que también pueden utilizarse combinaciones de los péptidos entre sí y/o con péptidos correspondientes de E6 de VPH. De manera paralela a la realización de las pruebas cutáneas con antígenos E7 se determinó en general, la situación de defensa inmunológica frente a antígenos de recuerdo ("recall") clásicos con un bloqueo inmunológico, por ejemplo Multitest Mérieux "Sero", sistema de pruebas con 7 antígenos y un control para determinar el estado de la inmunidad mediada por células, producido por el instituto de Viena Institut Wien seroterapéutico GmbH con permiso de Pasteur Merieux S.V., Lión, Francia. Se evaluaron como positivas las reacciones con una formación de pápula de color rojo con al menos 2 mm de diámetro.
Las pruebas cutáneas se realizaron en un total de 19 pacientes con lesiones premalignas o malignas dependientes de VPH. Con una probabilidad del 50% aproximadamente, tales enfermedades se deben al VPH tipo 16, en otro 40% de los casos deben considerarse otros tipos de VPH de alto riesgo:
Doce pacientes con neoplasias intraepiteliales cervicales de alto grado (CIN III), de las que 4 presentaban indicio de regresión en el momento del estudio (regresión espontánea de Pap III D a Pap II).
Siete pacientes con carcinomas del cuello uterino.
Por tanto, se probaron 19 pacientes, de las cuales 4 presentaban regresión y 15 progresión del tumor.
Como personas de control se utilizaron dos hombres sin indicio de infección por VPH 16.
Adicionalmente, se estudiaron serológicamente las personas a las que se les había realizado la prueba cutánea, por medio de ELISA con partículas similares a virus (VLP) como antígeno en busca de anticuerpos neutralizantes frente a VPH 16 según el método habitual para los expertos. Los estudios serológicos no son necesarios para la propia prueba cutánea específica, sin embargo se realizaron en el ejemplo para ampliar la importancia científica de los resultados. El material de frotis o de biopsia de las lesiones se almacenó a -80ºC para una posterior tipificación del virus por medio de PCR, anteriormente se estudió con dot blot (ViraType, Digene Diagnostics, Silver Spring, MD) en busca de VPH 6/11, 16/18 y 31/33/35. Se construyó un banco de linfocitos para los estudios complementarios in vitro.
Las pacientes que presentaban regresión (4/4) mostraron una reacción inmunológica de moderada (1 caso) a fuerte (3 casos) frente a péptidos solos de la oncoproteína E7. En el caso de las 15 pacientes que presentaban progresión y de las dos personas control, no se encontró ninguna clara reactividad en la prueba cutánea. La evolución de la reacción a la prueba cutánea fue claramente retardada en comparación con una reacción a la tuberculina clásica. Por eso, las mejores lecturas fueron posibles en general una semana después de la realización de la prueba. En ningún caso se produjeron reacciones con el péptido control.
Las reacciones se documentaron mediante fotografía, se realizó una biopsia de una reacción y se estudió histológicamente. De manera similar a lo ya observado en el caso de pruebas cutáneas anteriores con L1, se encontró un infiltrado linfocítico que pareció compatible con una reacción de hipersensibilidad de tipo retardado. Se encontraron anticuerpos frente a L1 de VPH 16 en 4 de las 7 pacientes con carcinoma del cuello uterino y sólo en una paciente con CIN. Por tanto, en resumen, la comprobación de anticuerpos frente a VLP de L1 de VPH 16 se asoció de manera evidente más bien con una progresión, mientras que una reacción inmunológica celular frente a E7 de VPH 16 en la prueba cutánea se asoció con la regresión de lesiones precancerosas del cuello uterino.
Los resultados documentan la eficacia de la prueba cutánea para la comprobación sensible de una reacción inmunológica celular frente a E7 de VPH 16, que se asociaba en los casos estudiados con una regresión espontánea de una lesión precursora de cáncer asociada a VPH.
Como con la prueba cutánea descrita se englobó una reacción inmunológica que se asoció con regresión de lesiones precursoras de cáncer, la prueba cutánea puede utilizarse como instrumento para el control de un resultado exitoso tras la vacunación frente a E6 y/o E7. También es posible una detección de amplia aplicación por medio de la realización de la prueba cutánea para aclarar los mecanismos de una regresión tumoral inmunológicamente mediada. Debido al gasto extremadamente elevado para los experimentos in vitro, en un gran número de pacientes no es posible el estudio de una inmunidad celular mediante estudios de laboratorio. En el marco de los estudios de vacunación futuros con una vacuna hipotéticamente eficaz desde el punto de vista terapéutico frente al carcinoma del cuello uterino mediante inmunización frente a la proteína tumoral E7 de VPH 16, la prueba cutánea según la invención es un método ideal, porque es practicable y sensible, para comprender la respuesta deseada del sistema inmunológico a la vacunación.
En el ejemplo anterior, los péptidos utilizados se disolvieron en glicerina al 70%. Se prefiere la glicerina, ya que presenta una viscosidad adecuada para la aplicación intracutánea y además, tiene acción desinfectante. Sin embargo, según la invención también pueden utilizarse otros disolventes adecuados, posiblemente debido al comportamiento en dilución de un péptido, éste debe disolverse en una disolución especialmente adaptada. También pueden añadirse otros aditivos a los disolventes según la invención, como emulgentes, quelantes, agentes de desinfección, entre otros.
La prueba cutánea puede llevarse a cabo mediante inyección intracutánea de una cantidad eficaz de antígeno de E6 y/o E7 disuelto, por medio de una aguja. Además, el kit de diagnóstico contenía una o varias ampollas, agujas y cánulas. Según la invención, también es posible y se prefiere el uso de aplicadores desarrollados especialmente para las pruebas cutáneas, como por ejemplo, las cabezas con puntas de prueba del Multitest "SERO" de Sero-Merieux (véase anteriormente) o las cabezas para la prueba de la tuberculina (TINE). Por tanto, el kit de diagnóstico según la invención puede contener ampollas con antígeno(s) y/o aplicadores.
En el ejemplo anterior se describió el modo de acción de la prueba cutánea según la invención mediante E7 de VPH 16. Sin embargo, también puede utilizarse E6. También es posible aplicar la prueba cutánea mediante el uso de E6 y/o E7 de otros tipos de VPH para identificar una respuesta inmunológica frente a estas cepas. Finalmente, debido al grado cercano de parentesco de los diferentes tipos de VPH, también es posible aprovechar las reacciones cruzadas entre diferentes tipos de VPH para introducir simultáneamente una prueba cutánea universal frente a los diferentes tipos de VPH.
La cantidad de antígenos que es necesario aplicar para tener una reacción inmunológica visible depende de diferentes factores. Por tanto, según la invención puede situarse entre 0,01 y 10 \mug, preferiblemente entre 0,05 y 5 \mug de antígeno por aplicación. En este sentido, para la combinación de disoluciones de antígeno debe tenerse en cuenta que sólo una parte de la disolución llega a la zona intracutánea, mientras que otra parte puede perderse sobre la piel del examinado o permanecer en la ampolla de disolución.
(1) DATOS GENERALES:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE: MediGene AG
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
CALLE: Lochhamer Str. 11
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CIUDAD: Munich
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
ESTADO FEDERADO: Baviera
\vskip0.500000\baselineskip
(E)
PAÍS: Alemania
\vskip0.500000\baselineskip
(F)
CÓDIGO POSTAL: 81927
\vskip0.500000\baselineskip
(G)
TELÉFONO: +49-89-8956320
\vskip0.500000\baselineskip
(H)
TELEFAX: +49-89-89563220
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE: Dr. Reinhard Hoepfl
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
CALLE: Anichstr. 35
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CIUDAD: Innsbruck
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
PAÍS: Austria
\vskip0.500000\baselineskip
(F)
CÓDIGO POSTAL: 6020
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Kit de diagnóstico para prueba cutánea y procedimiento para llevar a cabo la misma
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
CANTIDAD DE SECUENCIAS: 6
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
FORMATO LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
SOPORTE DE DATOS: disco flexible (Floppy disk)
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
ORDENADOR: PC Compatible IBM
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS / MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
SOFTWARE: Patentin Release nº 1.0, versión nº 1.30 (EPA)
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 30 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: no conocida
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: fragmento interno
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln}
\sac{Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 30 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: no conocida
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: fragmento interno
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Glu Asp}
\sac{Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 30 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: no conocida
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: fragmento interno
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr}
\sac{Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 30 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: no conocida
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: fragmento interno
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile}
\sac{Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 28 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: no conocida
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: fragmento interno
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr}
\sac{Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS DE LA SEQ ID NO: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 30 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
FORMA DE LA CADENA:
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: no conocida
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: fragmento interno
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Glu Asn Lys Glu Leu Lys Lys Ala Ile Asp Gly Leu Gln Gly Leu}
\sac{Leu Leu Gly Leu Arg Gln Arg Ile Glu Thr Leu Glu Gly Lys}

Claims (19)

1. Kit de diagnóstico de prueba cutánea para comprobar una reacción inmunológica celular frente a la oncoproteína E6 y/o E7 de un tipo de virus del papiloma humano, incluyendo el kit de diagnóstico una cantidad eficaz de la oncoproteína E6 y/o E7 y/o al menos una parte inmunológicamente activa de E6 y/o E7 de un tipo de virus del papiloma humano, así como un aplicador con el que puede aplicarse por vía intracutánea la cantidad eficaz de la oncoproteína o la parte inmunológicamente activa de la misma.
2. Kit de diagnóstico según la reivindicación 1, caracterizado porque la parte de la oncoproteína incluida procede del VPH 16.
3. Kit de diagnóstico según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque la parte inmunológicamente activa del tipo de virus del papiloma humano es al menos un péptido producido sintéticamente.
4. Kit de diagnóstico según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la oncoproteína E7 incluida o la parte inmunológicamente activa de la misma procede o proceden de VPH 16.
5. Kit de diagnóstico según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la oncoproteína incluida o la parte inmunológicamente activa de la misma está disuelta en un disolvente.
6. Kit de diagnóstico según la reivindicación 5, caracterizado porque el disolvente es glicerina al 70%.
7. Kit de diagnóstico según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la cantidad de oncoproteína o la parte inmunológicamente activa es de 0,01 a 10 \mug por carga que debe aplicarse.
8. Kit de diagnóstico según la reivindicación 1, caracterizado porque el aplicador es una aguja.
9. Kit de diagnóstico según la reivindicación 1, caracterizado porque el aplicador es una cabeza de prueba con puntas, tal como se utiliza por ejemplo para la prueba de la tuberculina (TINE) o el Multitest "Sero".
10. Uso de la oncoproteína E6 y/o E7 y/o al menos una parte inmunológicamente activa de E6 y/o E7 de un tipo de virus del papiloma humano para producir un kit de diagnóstico según al menos una de las reivindicaciones 1 a 9 para comprobar una reacción inmunológica celular frente a la oncoproteína E6 y/o E7 de un tipo de virus del papiloma humano.
11. Uso según la reivindicación 10, caracterizado porque la parte incluida de la oncoproteína procede del VPH 16.
12. Uso según la reivindicación 10 u 11, caracterizado porque la parte inmunológicamente activa del tipo de virus del papiloma humano es al menos un péptido producido sintéticamente.
13. Uso según una de las reivindicaciones 10 a 12, caracterizado porque la oncoproteína E7 incluida o la parte inmunológicamente activa de la misma procede o proceden de VPH 16.
14. Uso según una de las reivindicaciones 10 a 13, caracterizado porque la oncoproteína incluida o la parte inmunológicamente activa de la misma está disuelta en un disolvente.
15. Uso según la reivindicación 14, caracterizado porque el disolvente es glicerina al 70%.
16. Uso según una de las reivindicaciones 10 a 15, caracterizado porque la cantidad de oncoproteína o la parte inmunológicamente activa es de 0,01 a 10 \mug por carga que debe aplicarse.
17. Uso según la reivindicación 10, caracterizado porque el kit de diagnóstico comprende además un aplicador con el que puede aplicarse por vía intracutánea la cantidad eficaz de la oncoproteína o de la parte inmunológicamente activa de la misma.
18. Uso según la reivindicación 17, caracterizado porque el aplicador es una aguja.
19. Uso según la reivindicación 17, caracterizado porque el aplicador es una cabeza de prueba con puntas, tal como se utiliza por ejemplo para la prueba de la tuberculina (TINE) o el Multitest "Sero".
ES98943805T 1997-08-27 1998-07-30 Kit de diagnostico para prueba y procedimiento para llevar a cabo la misma. Expired - Lifetime ES2232018T3 (es)

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