ES2232687T3 - Composiciones farmaceuticas de tizoxanida y/o nitazoxanida. - Google Patents
Composiciones farmaceuticas de tizoxanida y/o nitazoxanida.Info
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Abstract
Una composición farmacéutica que contiene como agente activo al menos un compuesto seleccionado del grupo constituido por un compuesto de fórmula (I): y un compuesto de fórmula (II) y contiene adicionalmente una cantidad de estabilidad mejorada de un ácido farmacéuticamente aceptable.
Description
Composiciones farmacéuticas de tizoxanida y/o
nitazoxanida.
La presente invención trata de una composición
farmacéutica que contiene como agente activo al menos un compuesto
seleccionado del grupo que consta de la fórmula (I)
y la fórmula
(II)
y contiene adicionalmente al menos
un ácido farmacéuticamente
aceptable.
El agente activo se encuentra preferiblemente en
forma de unas partículas que tienen un tamaño de partícula menor de
200 \mum y un tamaño de partícula medio mayor de 10 \mum.
La invención también trata de las composiciones
farmacéuticas que se estabilizan con al menos un ácido
farmacéuticamente aceptable.
Las composiciones farmacéuticas resultan
particularmente útiles para el tratamiento de las infecciones
oportunistas en las personas con sistemas inmunes comprometidos o
suprimidos, y para el tratamiento de las infecciones de
trematodos.
Existe una necesidad apremiante del desarrollo de
procedimientos para el tratamiento de un número de infecciones
parasitarias y bacterianas en las personas con sistemas inmunes
comprometidos (SIDA, pacientes con cáncer, pacientes ancianos,
envejecidos, con transplante de órganos con fármacos
inmunosupresores). Otro área de interés son las infecciones de
trematodos, en particular en climas tropicales. Existe por tanto
una necesidad de una composición farmacéutica que pueda ser
tolerada incluso por las personas inmunocomprometidas, y que sea
estable durante el almacenamiento incluso en ambientes
tropicales.
Más específicamente, el Toxoplasma gondii
es un protozoo y se encuentra entre las causas más predominantes de
la infección latente del sistema nervioso central en todo el mundo.
Muchas personas sanas se infectan con el parásito, pero normalmente
el sistema inmune mantiene el organismo bajo control. T.
gondii es el patógeno oportunista más común del cerebro en los
pacientes con SIDA. En la actualidad, la toxoplasmosis comienza a
ser un problema mayor no sólo por el SIDA, sino también por el uso
extendido de los fármacos inmunosupresores (por ejemplo, como las
administradas a los pacientes con órganos transplantados). La
toxoplasmosis se trata generalmente con una combinación de
pirimetamina y sulfadiazina. Mientras que los fármacos son
eficaces, no acaban con los quistes del parásito, por lo que el
tratamiento debe continuarse mediante dosis de mantenimiento. La
toxicidad fuerza a menudo el cese del fármaco, en particular en los
inmunosuprimidos, y ocurre una recaída. Las estadísticas no son
buenas, con informes de tasas de mortalidad de alrededor del 70 por
ciento en los pacientes inmunodeficientes y una meddia de
supervivencia de cuatro meses.
La criptosporidiosis es provocada por el parásito
protozoo microbiano Cryptosporidium parvum. En personas con
funciones inmunes normales, la diarrea provocada por C.
parvum puede ser intensa y prolongada, pero es autolimitante.
El los pacientes con SIDA, la diarrea criptosporidial suele tener
un tratamiento de por vida. Se estima que el 15-20
por ciento de los pacientes con SIDA sufren esta enfermedad. Hasta
ahora, no ha habido una terapia consistentemente efectiva o
aprobada para la criptosporidiosis.
El patógeno más frecuentemente identificado en
los pacientes con SIDA es el Enterocytozoon bieneusi, un
parásito microsporidial, que se encontró en cerca de un cuarto de
los pacientes. Ahora parece que este minúsculo parásito puede ser
la causa de una gran proporción de los casos no explicados de la
malabsorción, diarrea y la pérdida vistos en los pacientes enfermos
de VIH. No se conoce un tratamiento eficaz actualmente.
Muchas otras especies de microsporidia infectan a
los pacientes seropositivos, incluyendo Encephalitozoon
hellem y el cuniculi, y una nueva especie denominada
Septata intestinalis. Un informe reciente sugiere que las
infecciones de microsporidia diseminada aumentan en importancia.
La infección del parásito Isospora belli
es clínicamente indistinguible de la criptosporidiosis. Más común
en los climas tropicales, I. belli se ha presentado en menos
del 1% de los pacientes en los Estados Unidos, aunque su incidencia
actual es posiblemente mayor.
El Pneumocystis carinii se ha clasificado
generalmente como un parásito protozoico; algunos estudios indican
que puede ser un hongo, con el que comparte ciertas secuencias
genéticas. El P. carinii infecta normalmente los pulmones
(neumonía de pneumocystis carinii (NPC)). La terapia se muestra
exitosa en alrededor del 40-60% de los pacientes,
con problemas que incluyen la toxicidad del fármaco en particular
en los pacientes inmunocomprometidos. Entre las varias
manifestaciones serias de la infección del virus de
inmunodeficiencia humano (VIH) en los niños, la NPC se destaca por
su alta incidencia, su composición por edades única, y su frecuente
mortalidad. La NPC es la infección oportunista seria más común en
los niños infectados con el VIH; la incidencia de la NPC entre los
niños infectados con el VIH que no reciben profilaxis se estima que
es de al menos 12% en el primer año de vida. Muchos niños mueren
rápidamente tras el desarrollo de la NPC.
El complejo de mycobacterium avium (CMA)
se refiere a las infecciones de una familia de organismos
micobacterianos muy similares, el Mycobacterium avium y
M. intracelulare. Cuando el CMA ocurre en personas no
inmunocomprometidas, lo hace normalmente en forma de infección del
tracto respiratorio. En los pacientes con SIDA, el CMA se disemina
frecuentemente (CMA diseminado o CMAD), y casi cualquier sistema de
órganos puede resultar involucrado. En un estudio reciente, el CMA
bacterial se encontró en el 43% de los pacientes que sobrevivieron
durante dos años tras el diagnóstico del SIDA. No se ha establecido
ninguna terapia convencional para el CMA diseminado. Normalmente se
prescriben combinaciones de fármacos y, si tienen éxito, se
requiere que el tratamiento se continúe de por vida. Se necesita
urgentemente un tratamiento más efectivo.
Los infectados por HIV son particularmente
susceptibles a una infección por Mycobacterium tuberculosis,
y la enfermedad se acelera. Mientras que la tuberculosis
extrapulmonar es infrecuente en los pacientes no infectados con el
VIH, ocurre frecuentemente en personas seropositivas. El CDC ha
publicado directivas para el tratamiento de la TB que se dirigen
hacia el aumento del predominio de la TB resistente a multifármacos
(TB-RMF). La mortalidad entre los pacientes con
SIDA con TB-RMF es muy alta (aproximadamente del
80%) y la progresión de la enfermedad es extremadamente rápida.
Consecuentemente, existe una necesidad urgente
para el desarrollo de un procedimiento para el tratamiento de estas
infecciones tan predominantes, y amenazantes, en personas y
animales.
Existe también una necesidad de un fármaco de
amplia actuación para simplificar el tratamiento de las infecciones
de trematodo. Actualmente, es necesario diagnosticar el patógeno
trematodo específico, y entonces prescribir la terapia de fármaco
específica para ese trematodo. Muchos países poco desarrollados no
están equipados para diagnosticar el trematodo específico. El
desarrollo de un fármaco de amplia actuación podría eliminar el
requerimiento del diagnóstico.
El Schistosoma mansoni, el parásito
flagelado de la sangre, es el agente causante de la
esquistosomiasis, la segunda enfermedad parasitaria tropical más
importante en el hombre (tras la malaria), y la infección trematoda
más importante en el hombre. El Schistosoma haematobium es
otra especie importante que infecta al hombre. Más de 200 millones
de individuos sufren de esquistosomiasis en todo el mundo,
incluyendo varios cientos de miles de personas en los Estados
Unidos.
El Fasciola hepatica, el parásito
flagelado común del hígado, es principalmente una enfermedad en las
ovejas, pero los humanos son hospedantes accidentales. El parásito
consigue sobrevivir en presencia de una respuesta inmune enérgica
del hospedante. Se ha sugerido el bitionol como tratamiento, pero
su uso no está aprobado en los Estados Unidos.
Existe por tanto necesidad de una composición
farmacéutica que sea estable durante el almacenamiento incluso en
ambientes tropicales, y que tenga sea de amplia actuación frente a
los trematodos.
Se ha observado en los estudios en animales y en
los estudios clínicos en humanos que la eficacia de un tratamiento,
usando los compuestos de fórmula (I) y (II) depende del tamaño de
partícula de la sustancia medicamentosa activa y de la estabilidad
de los compuestos.
Las composiciones farmacéuticas descritas son
adecuadas para el tratamiento de las infecciones por trematodos en
humanos y animales causadas por Schistosoma como
Schistosoma mansoni, Schistosoma haematobium, Schistosoma
mekongi, Schistosoma japonicum, Schistosoma intercalatum;
Fasciola como Fasciola hepatica y Fasciola gigantica,
Fasciolopsis biski; y Dricrocoelium dendriticum, Heterophyes
heterophyes, y Metagonimus yokogawa.
Las composiciones farmacéuticas también son
efectivas para el tratamiento en los inmunocomprometidos de las
infecciones oportunistas de Cryptosporidium parvum, Isospora
belli, Entercytzoon bieneusi, Encephalitozoon intestinalis,
Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium intracellulare,
Pneumocystis carnii, y Toxoplasma gondii.
La composición farmacéutica puede encontrarse en
una forma adecuada para la administración oral, como en una forma de
dosificación sólida, una suspensión líquida, o una pasta.
Para una mayor comprensión de la naturaleza y los
objetivos de la presente invención debe hacerse una referencia a las
siguientes descripciones detalladas tomándose junto con las figuras
que acompañan en las que:
La fig. 1 muestra el porcentaje de inhibición y
la viabilidad celular del hospedante de la nitazoxanida frente a
E. intestinalis.
La fig. 2 muestra el porcentaje de inhibición y
la viabilidad celular del hospedante de la nitazoxanida frente a
V. corneae.
La fig. 3 muestra el porcentaje de inhibición y
la viabilidad celular del hospedante del albenzadol frente a E.
intestinalis.
La fig. 4 muestra el porcentaje de inhibición y
la viabilidad celular del hospedante del albenzadol frente a V.
corneae.
Las figs. 5 y 6 muestran un gráfico de los
valores de la DO obtenidos para cada pozo de cultivo de T.
gondii frente a la concentración del fármaco en el cultivo.
La fig. 7 es un esquema basado en el ensayo para
la efectividad de la nitazoxanida frente a las micobacterias que
crecen en un extracto húmedo.
La fig. 8 muestra el porcentaje de las partículas
activas que tienen un tamaño menor de \diameter \mum.
La invención se refiere a composiciones
farmacéuticas que contienen como agente activo al menos un compuesto
seleccionado del grupo que consta de:
compuesto de fórmula (I)
y compuesto de fórmula
(II)
y contiene adicionalmente una
cantidad de estabilidad incrementada de un ácido farmacéuticamente
aceptable.
La invención se refiere adicionalmente a una
composición farmacéutica que contenga como agente activo
un compuesto de fórmula II
y un ácido farmacéuticamente
aceptable en una cantidad suficiente para volver el pH de dicha
composición farmacéutica entre 2 y 6 cuando dicha composición
farmacéutica se pone en contacto con agua, en la que dicho agente
activo está en la forma de partículas sólidas, y en la que la razón
del peso del ácido farmacéuticamente aceptable al peso de dichas
partículas sólidas está entre 0,01 y
0,5.
Ejemplos de tales ácidos son: ácido cítrico,
ácido glutámico, ácido succínico, ácido etanosulfónico, ácido
acético, ácido tartárico, ácido ascórbico, ácido metanosulfónico,
ácido fumárico, ácido adípico, ácido málico y mezclas de los
mismos. El ácido cítrico es muy apropiado. La presencia de dicho
ácido incrementa la estabilidad del agente o los agentes
activo/s.
La razón del peso del ácido farmacéuticamente
aceptable frente al peso de dichas partículas sólidas activas está
ventajosamente entre 0,03 y 0,2. Ventajosamente, la cantidad de
ácido es suficiente para ajustar el pH de la suspensión entre 2 y
6, preferiblemente entre 3 y 5, y más preferiblemente entre 3,5 y
4,5.
Las técnicas para la preparación, y los ejemplos
preferidos, de las formas de dosificación sólidas y líquidas de la
composición farmacéutica se revelan en el documento WO/95/28393. Las
composiciones contienen ventajosamente un agente tensoactivo y
posiblemente un derivado del almidón como los descritos en la
patente de Estados Unidos 5.578.621, el contenido del cual se
incorpora en el presente documento mediante una referencia para
describir posibles agentes tensoactivos y derivados del almidón. El
agente tensoactivo tal como se describe en la patente de Estados
Unidos 5.578.621 sirve como agente dispersante.
Tales composiciones farmacéuticas, en formas de
dosificación sólidas o líquidas o como pastas o ungüentos, pueden
contener opcionalmente unos agentes activos adicionales como
antibióticos, antivirales o inhibidores de la bomba de protones.
Mientras no sea ventajoso, también es posible que dichas
composiciones farmacéuticas contengan partículas de sólido activo
de compuestos de la fórmula (I) y/o compuestos de la fórmula (II)
que sean mayores de
200 \mum.
200 \mum.
Las composiciones pueden contener excipientes
conocidos con el propósito de preparar formas adecuadas para la
administración oral.
Ventajosamente, para tener una excelente eficacia
frente a un amplio espectro de parásitos, bacterias, hongos y virus,
el factor de distribución de dichas partículas sólidas activas se
encuentra entre 0,8 y 2, preferiblemente entre 1,1 y 1,9, más
preferiblemente mayor de 1,5, calculándose dicho factor de
distribución mediante la siguiente fórmula;
F_{90%} =
(\diameter _{90%} - \diameter _{10%}) / ((\diameter _{90%} +
\diameter _{10%})
/2)
en la
que
- \bullet
- F_{90%} es el factor de distribución al 90%;
- \bullet
- \diameter_{90%} es el tamaño de partícula máximo de la fracción de partículas correspondiente al 90% de dichas partículas sólidas activas, y
- \bullet
- \diameter_{10%} es el tamaño de partícula máximo de la fracción de partículas correspondiente al 10% de dichas partículas sólidas activas.
Según una realización específica de la invención,
las partículas de un compuesto de la fórmula (I) y/o (II) se
preparan por los procedimientos descritos anteriormente y después
se muelen de modo que menos del 10% de dichas partículas activas
sean mayores de 100 \mum, menos del 50% de dichas partículas sean
mayores de 50 \mum y menos del 10% de dichas partículas sean
menores de 5 \mum en tamaño, estando el tamaño de partícula medio
entre 20 y 50 \mum. Entonces dichas partículas activas se dejan
en forma de granulado usando una mezcla que contiene unas
partículas sólidas activas y al menos un agente de granulación.
Ejemplos del agente de granulación son: polivinilpirrolidona, agua,
alcohol, sucrosa, hidroxil celulosa y mezclas de éstos.
Ventajosamente, se añade al menos un ácido farmacéuticamente
aceptable durante el proceso de granulación.
La invención trata de formas sólidas de
dosificación que contienen una composición de la invención como
comprimidos, comprimidos dispersibles, comprimidos con recubrimiento
protector, matrices, etc. La forma de dosificación de la invención
contiene, por ejemplo:
- \bullet
- partículas sólidas activas con un tamaño de partícula menor de 200 \mum, menos del 10% de dichas partículas tienen un tamaño mayor de 100 \mum, menos del 50% de dichas partículas tienen un tamaño mayor de 50 \mum y menos del 10% de dichas partículas tienen un tamaño menor de 5 \mum, estando el tamaño de partícula medio entre 20 y 50 \mum.
- \bullet
- al menos un agente de granulación;
- \bullet
- al menos un agente humectante;
- \bullet
- al menos un derivado del almidón, y
- \bullet
- al menos un ácido farmacéuticamente aceptable que se adiciona preferiblemente durante el proceso de granulación.
Las formas de dosificación líquidas como las
suspensiones acuosas de la invención contienen, por ejemplo:
- \bullet
- como agente activo, unas partículas sólidas que contienen un compuesto de fórmula (I) y/o un compuesto de fórmula (II) que tiene un tamaño de partícula menor de 200 \mum, menos del 10% de dichas partículas tienen un tamaño mayor de 100 \mum, menos del 50% de dichas partículas tienen un tamaño mayor de 50 \mum y menos del 10% de dichas partículas tienen un tamaño menor de 5 \mum, y
- \bullet
- al menos un agente de granulación;
- \bullet
- al menos un agente humectante;
- \bullet
- al menos un derivado del almidón, y
- \bullet
- al menos un ácido farmacéuticamente aceptable, estando el pH de la suspensión entre 2 y 6, preferiblemente entre 3 y 5, y más preferiblemente entre 3,5 y 4,5;
- \bullet
- al menos un espesante, por ejemplo una goma xanthan, una goma guar, celulosa cristalina, goma carruba, carboximetilcelulosa o una mezcla de éstos.
Las formas de pasta o de ungüento de la invención
adecuadas para la administración oral contienen, por ejemplo:
- \bullet
- como agente activo, unas partículas sólidas que contienen un compuesto de la fórmula (I) y/o un compuesto de la fórmula (II) que tiene un tamaño de partícula menor de 200 \mum, menos del 10% de dichas partículas tienen un tamaño mayor de 100 \mum, menos del 50% de dichas partículas tienen un tamaño mayor de 50 \mum y menos del 10% de dichas partículas tienen un tamaño menor de 5 \mum, y
- \bullet
- al menos un agente tensoactivo;
- \bullet
- al menos un ácido farmacéuticamente aceptable, estando el pH de la suspensión entre 2 y 6, preferiblemente entre 3 y 5, y más preferiblemente entre 3,5 y 4,5;
- \bullet
- al menos un espesante, por ejemplo una goma xanthan, una goma guar, celulosa cristalina, goma carruba, carboximetilcelulosa o una mezcla de éstos.
Las formas de pasta o ungüento para aplicación
tópica o intravaginal contienen, por ejemplo:
- \bullet
- como agente activo, unas partículas sólidas que contienen un compuesto de fórmula (I) y/o un compuesto de fórmula (II) que tiene un tamaño de partícula menor de 200 \mum, menos del 10% de dichas partículas tienen un tamaño mayor de 100 \mum, menos del 50% de dichas partículas tienen un tamaño mayor de 50 \mum y menos del 10% de dichas partículas tienen un tamaño menor de 5 \mum, y
- \bullet
- al menos un agente tensoactivo;
- \bullet
- al menos un ácido farmacéuticamente aceptable, estando el pH de la suspensión entre 2 y 6, preferiblemente entre 3 y 5, y más preferiblemente entre 3,5 y 4,5;
- \bullet
- alcohol cetílico y/o derivados de glicérido y/o del propilenglicol;
- \bullet
- al menos un espesante, por ejemplo una goma xanthan, una goma guar, celulosa cristalina, goma carruba, carboximetilcelulosa o una mezcla de éstos.
Un procedimiento para el tratamiento de
infecciones comprende la administración de una composición
farmacéutica que contenga, como agente activo, al menos un compuesto
seleccionado del grupo que consta de la
desacetil-nitazoxanida de fórmula (I):
y la nitazoxanida de fórmula
(II):
Nitazoxanida (NTZ), el compuesto de fórmula (II),
es el nombre genérico para la
2-(acetoliloxi)-N-(5-nitro-2-tiazolil)
benzamida, un compuesto sintetizado primero por Rossignol y Cavier
en 1975. 2 mg de nitazoxanida se pueden disolver en 1 ml de DMSO.
La nitazoxanida se absorbe fácilmente de manera oral.
Hasta ahora no ha habido evidencia de que los
compuestos de fórmula (I) y/o (II) pudieran ser ampliamente
efectivas frente a las infecciones por trematodos, o de que fueran
lo suficientemente no tóxicas para ser toleradas incluso por las
personas inmunocomprometidas.
La preparación y ciertos usos de la nitazoxanida
se revela en la patente de Estados Unidos 3.950.351, así como en
publicaciones del presente inventor. La
desacetil-nitazoxanida, el compuesto de fórmula (I),
es referida a veces como tizoxanida o d-NTZ, y es
un metabolito de la nitazoxanida.
En el documento WO 95/28393, el presente inventor
revela un procedimiento para la fabricación de un compuesto puro de
fórmula (II), así como del uso de la composición que contiene una
mezcla de los compuestos de fórmula (I) y (II).
Ahora se ha observado que las partículas sólidas
de los compuestos de fórmula (I), compuestos de fórmula (II), o de
mezclas de éstos que tengan un tamaño de partícula entre 170 y 520
\mum (tamaño de partícula medio = 352 \mum) tienen una eficacia
muy limitada cuando se administran oralmente en animales o en
humanos. La eficacia de tales partículas es inferior a la de los
productos farmacéuticos existentes y por tanto inaceptable para
propósitos administrativos o comerciales.
También se ha observado en los perros que la
administración de una única dosis de 50 miligramos por kilogramo de
partículas sólidas del compuesto de fórmula (I) y del compuesto de
fórmula (II) que tengan un tamaño de partícula menor de 5 \mum,
provoca reacciones adversas severas en los animales.
Ahora se ha descubierto que para tener un
tratamiento eficaz y seguro de las infecciones provocadas por los
parásitos, bacterias, hongos y virus en humanos y animales, la
composición farmacéutica, en forma de dosificación sólida o en una
suspensión acuosa, debe contener la dosis efectiva del agente activo
en la forma de partículas sólidas que tengan un tamaño de partícula
menor de 200 \mum y que contengan un compuesto de la fórmula (I)
y/o un compuesto de la fórmula (II), siendo el tamaño de partícula
medio de las partículas sólidas activas mayor de 10 \mum.
La presencia de un alto contenido de partículas
del agente activo que tienen un tamaño mayor de 200 \mum con
respecto al contenido de partículas que tienen un tamaño entre 5 y
200 \mum reduce significativamente la actividad quimioterápica de
los compuestos. Preferiblemente, las composiciones farmacéuticas de
la invención no contienen más de 5% en peso de partículas sólidas
activas con un tamaño mayor de 200 \mum. Más preferiblemente, las
composiciones farmacéuticas de la invención no contienen
sustancialmente partículas sólidas activas con un tamaño mayor de
200 \mum.
La presencia de un alto contenido de partículas
de un agente activo que tengan un tamaño menor de 5 \mum con
respecto al contenido de partículas que tienen un tamaño entre 5 y
200 \mum pueden provocar efectos adversos en animales o en
humanos. Además, se ha observado que las partículas que tienen un
tamaño menor de 5 \mum se absorben más rápidamente del tracto
gastro-intestinal a la sangre, y por tanto no son
tan efectivas frente a los parásitos, bacterias, hongos y virus que
viven normalmente en el tracto gastrointestinal de animales y
humanos.
Los científicos especializados no pudieron
predecir que el tamaño de partícula del compuesto de fórmula (I) y
el compuesto de fórmula (II) tendría un impacto tan significativo
en su actividad antimicrobiana en los animales y en las personas.
Por ejemplo, en los estudios llevados a cabo por el inventor, los
compuestos antiparasitarios como el albendazol, el mebandazol, la
niclosamida, el prazicuantel y el metronidazol no han demostrado
una diferencia tan marcada en la actividad antiparasitaria en
animales y en humanos que fuera dependiente de su tamaño de
partícula. Además, un científico especializado no podría predecir
que los tamaños de partícula del compuesto de la fórmula (I) y el
compuesto de la fórmula (II) tendrían un impacto tan adverso sobre
la capacidad de los animales y de las personas para tolerar la
administración de dichos agentes activos.
El/los compuesto(s) de fórmula (I) y (II)
pueden administrarse mediante una forma de dosificación sólida o en
una suspensión acuosa, y se prefiere que la composición farmacéutica
contenga la dosis efectiva del agente activo en forma de partículas
sólidas de fórmula (I) y/o (II) que tengan un tamaño de partícula
menor de 200 \mum, siendo el tamaño medio de dichas partículas
sólidas activas mayor de 10 \mum según se determina mediante un
contador Coulter® LS 100. Este equipo usa una luz de láser a 750 nm
para partículas de un tamaño entre 0,4 y 900 \mum de diámetro
mediante difracción de la luz. Las muestras se miden en agua con
una pequeña cantidad de Triton X-100 para aumentar
la capacidad del agua y desflocular el polvo.
Ventajosamente, el tamaño de partícula medio de
dichas partículas sólidas activas está entre 10 y 100 \mum,
preferiblemente entre 20 y 50 \mum. Los ejemplos de las
composiciones preferidas son:
- \bullet
- una composición para la que menos del 10% en peso de dichas partículas sólidas activas tengan un tamaño de partícula mayor de 100 \mum;
- \bullet
- una composición para la que al menos el 50% en peso de dichas partículas sólidas activas tengan un tamaño de partícula menor de 50 \mum;
Ventajosamente, el tamaño de partícula medio de
dichas partículas sólidas activas está entre 10 y 100 \mum,
preferiblemente entre 20 y 50 \mum. De acuerdo con la realización
preferida de la composición, menos del 10% de dichas partículas
sólidas activas tienen un tamaño de partícula menor de 5 \mum.
El agente o los agentes activos usados en forma
de dosificación sólida o en suspensión es ventajosamente una mezcla
de partículas sólidas de los compuestos de la fórmula (I) y de
fórmula (II) con un tamaño de partícula menor de 200 \mum, el
contenido en peso del compuesto de fórmula (I) con respecto al peso
de los compuestos de fórmula (I) y de fórmula (II) de dicha mezcla
está comprendido entre 0,5 y 20%, preferiblemente entre 0,5 y
10%.
Los compuestos puros y secos de fórmula (I) y los
compuestos puros y secos de fórmula (II) se muelen y se separaron
por tamaños mediante una rejilla de malla.
Tras la molienda, las partículas del compuesto de
fórmula (I), de fórmula (II) y mezclas de éstos tienen la
distribución por tamaño de partícula que se da en la fig. 8. La
fig. 8 muestra el porcentaje de partículas que tienen un tamaño
menor de \diameter \mum.
A partir de dicha figura, se deduce que:
- \bullet
- menos del 10% en peso de las partículas tienen un tamaño de partícula menor de aproximadamente 5 \mum.
- \bullet
- menos del 10% en peso de las partículas tienen un tamaño de partícula mayor de aproximadamente 70 \mum.
- \bullet
- el tamaño de partícula medio es de aproximadamente 40 \mum;
- \bullet
- el factor de distribución de las partículas es de alrededor de 1,73, calculándose dicho factor de distribución mediante la siguiente fórmula:
F_{90%} =
(\diameter _{90%} - \diameter _{10%}) / ((\diameter _{90%} +
\diameter _{10%})
/2)
en la
que
- \bullet
- F_{90%} es el factor de distribución al 90%;
- \bullet
- \diameter_{90%} es el tamaño de partícula máximo de la fracción de partículas correspondiente al 90% de dichas partículas sólidas activas, y
- \bullet
- \diameter_{10%} es el tamaño de partícula máximo de la fracción de partículas correspondiente al 10% de dichas partículas sólidas activas.
Los ejemplos específicos de dichas composiciones
se revelan en las siguientes tablas.
\vskip1.000000\baselineskip
Solución de azúcar caliente o una película
protectora que se pulveriza en los comprimidos o granulado que
contienen 500 mg de agente activo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Las composiciones farmacéuticas de la invención
son composiciones que tienen un amplio espectro de acción sobre los
parásitos, las bacterias, los hongos y los virus, especialmente
cuando se administran oralmente.
La eficacia y la seguridad de las composiciones
farmacéuticas descritas anteriormente fueron excelentes en los
animales y en las personas. Específicamente, en los estudios
clínicos en personas, se ha observado que la eficacia de las
composiciones farmacéuticas descritas anteriormente eran
significativamente más efectivas en el tratamiento de las
infecciones parasitarias que las mismas formulaciones al usar un
compuesto activo que tiene tamaños de partículas entre 170 y 520
\mum (tamaño de partícula medio = 352 \mum), incluso cuando las
partículas de mayor tamaño se administraron a pacientes en dosis
hasta tres veces mayores y durante periodos de tiempo más largos.
Los ejemplos de las relaciones de recuperación obtenidas se muestran
a continuación en la tabla 6.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Para cada uno de los parásitos que aparecen en la
tabla 6, las relaciones de recuperaciones proporcionales fueron
significativamente mejores en los pacientes tratados con partículas
activas entre 5 y 200 \mum que en aquellos tratados con partículas
activas con un tamaño que varía entre 170 \mum y 520 \mum, con
una trascendencia estadística en cada caso que es p< 0,02 (usando
una prueba X^{2} convencional). Este fue el caso incluso aunque la
dosis del agente activo con un tamaño de partícula mayor fuese mayor
y la duración del tratamiento fuera a menudo más largo que las del
administrado a los pacientes que recibían composiciones
farmacéuticas del agente activo con tamaños de partículas menores de
200 \mum. No se informó de ningún efecto nocivo serio en ningún
grupo de pacientes.
También se observaron en las pruebas en animales
resultados similares a los descritos anteriormente para los estudios
en humanos.
Además, las reacciones adversas observadas en
perros tras la administración oral de una única dosis de 50
miligramos por kilogramo de compuesto de fórmula (I) y compuesto de
fórmula (II) no han sido observadas en los estudios extensivos en
los animales al usar un compuesto de fórmula (I) y un compuesto de
fórmula (II) con un tamaño de partícula entre 5 y 200 \mum (media
> 10 \mum), incluso cuando la misma dosis o una dosis mayor de
los compuestos se administró diariamente durante un periodo de 90
días más.
Por otra parte, dichas composiciones eran
estables (incluso cuando se sometían a temperaturas de 40ºC y un 65%
de humedad durante seis meses o, en el caso de las suspensiones
líquidas, cuando se suspendían en agua bajo estas condiciones
durante 3 meses) por tanto se aseguraba que los ingredientes activos
no se degradasen y que las composiciones mantuviesen su eficacia
durante un periodo de tiempo tras su preparación que es adecuado
para propósitos medicinales y comerciales.
A continuación, se demostrará la eficiencia de
las composiciones farmacéuticas.
En un ensayo clínico preliminar, 30 pacientes con
SIDA y con diarrea criptosporidial crónica fueron tratados oralmente
con entre 500 y 2000 mg de nitazoxanida diariamente. Si la diarrea
continuaba, los pacientes recibían hasta 2000 mg al día de
nitazoxanida durante cuatro semanas adicionales.
Veintiocho personas completaron dos o más semanas
de terapia y 16 de ellos fueron evaluados mediante una respuesta
terapéutica en la octava semana de tratamiento. En este último
grupo, 12 personas tuvieron una reducción del 50 por ciento o más en
la frecuencia del movimiento intestinal diario y 10 individuos
mostraron una marcada reducción o la erradicación del parásito en
las heces, siendo indetectable el organismo en cuatro personas. Seis
pacientes cumplieron los criterios clínicos y parasitológicos en
beneficio.
Los pacientes que recibieron unas dosis diarias
más elevadas del fármaco durante periodos de tiempo más largos
tenían más probabilidad de tener una respuesta positiva.
Un estudio de nitazoxanida para la diarrea
criptosporidial relacionada con el SIDA documentó un descenso de los
movimientos intestinales entre las personas que tomaban 500, 1000,
1500 ó 2000 mg del fármaco diariamente. Los participantes del ensayo
tenían un recuento de CD4+ medio de 42 células/mm^{3} (intervalo
de 0-303 células/mm^{3}), una media de 6,7
movimientos intestinales diarios durante una media de 15 meses,
oocistos de Cryptosporidium parvum en las heces, y ningún
otro patógeno entérico aparente. En casi todos los pacientes falló
la terapia con azitromicina o paromomicina.
Tras 23 semanas, 9 de 13 tuvieron una respuesta
clínica completa (de uno a tres presentaron predominantemente
movimientos intestinales a diario), y 4 de los 13 tuvieron una
respuesta clínica parcial (un descenso de al menos un 50 por ciento
en los movimientos intestinales diarios o un cambio en la
consistencia de las heces de modo que se formaron en al menos el
75%). Hacia el final del estudio, 8 de 11 habían erradicado por
completo el parásito y los otros tres tenían reducciones
sustanciales en los niveles de oocistos. Hay una tendencia hacia
mejores respuestas con dosis de 1000 mg diarios o mayores y con
terapia más prolongada. Dos participantes en el ensayo tenían
erupciones de piel urticáricas; más del 90 por ciento respetaron el
régimen de estudio durante más de cuatro semanas.
La nitazoxanida se disolvió en dimetilsulfóxido
(DMSO) estéril y se analizó frente a monocapas celulares infectadas
de oocistos de C. parvum intactos en concentraciones de 100
\mug/ml, 10 \mug/ml, 1 \mug/ml y 0,1 \mug/ml. Un segundo
ensayo se llevó a cabo con la nitazixanida analizada a las
concentraciones adicionales de 20, 2, 0,2 y 0,02 \mug/ml. Estas
concentraciones se alcanzaron mediante diluciones en serie con un
medio de DMEM completo para lograr una concentración final de DMSO
de 0,5%. El medio del control también contenía 0,5% de DMSO.
El experimento utilizó un cultivo de células de
células MDBKF5D2 que creció en cámaras de 7 mm, y como
Cryptosporidium parvum: oocistos GCH1, 5 x 10^{4} por pozo,
y se llevó a cabo para comparar la paramomicina (control positivo)
frente a la nitazoxanida (fármaco experimental). Los materiales
incluían suero de conejo con esporozoito inmune
anti-Cryptosporidium parvum (0,1%) y anticuerpo de conejo y
cabra conjugado con fluorescencia
(1%).
(1%).
200 \mul de un medio que contiene nitazoxanida
a concentraciones de 100, 10, 1 y 0,1 \mug/ml y los controles
apropiados se introdujeron en dos pozos de una placa de 96 pozos que
contenía las monocapas celulares de MBDKF5D2 confluentes y dos pozos
sin monocapas. El fármaco se incubó en las monocapas a 37ºC y 8% de
CO_{2}. A las 24 horas (ensayo 1) y a las 48 horas (ensayo 2), se
añadieron MTS (disolución de Owen) y PMS a cada pozo en
concentraciones de 333 \mug/ml y 25 \muM respectivamente. La
placa se volvió a colocar en el incubador en la oscuridad para
desarrollarse durante dos horas. A las dos horas, se transfirieron
100 \mul de cada sobrenadante a una nueva placa de microtiter y se
leyó en el lector de ELISA a 490 nm. Los resultados se grabaron y se
analizaron. El porcentaje de toxicidad se calculó restando la
densidad óptica media (DO) de los sobrenadantes del fármaco a la
densidad óptica media (DO) de los sobrenadantes del medio de control
(sin fármaco), dividiéndolo por la DO del medio de control y
multiplicándolo por 100.
\frac{\text{DO
del medio - DO del fármaco}}{\text{DO del medio}} x
100
5 x 10^{4} oocistos de C. parvum por
pozo se incubaron en nitazoxanida (100, 20, 10, 2, 1, 0,2, 0,1 y
0,02 \mug/ml) a 37ºC (8% de CO_{2}) en monocapas celulares de
MDBKF5D2 confluentes. El nivel de infección en cada pozo se
determinó y analizó mediante un ensayo de inmunofluorescencia entre
las 24 y las 48 horas. El porcentaje de inhibición se calculó
restando el recuento de parásitos medio/10 campos en los pozos del
ensayo del fármaco al recuento de parásitos medio/10 campos en el
medio de control (sin fármaco), dividido por el recuento del control
del medio, y después multiplicándolo por 100.
\frac{\text{Recuento del medio de
control - recuento del ensayo del fármaco}}{\text{Recuento del
medio de control}} x
100
- Ensayo 1: 24 horas.
\newpage
- Ensayo 2: 48 horas.
En el ensayo 1, la nitazoxanida en
concentraciones de 10, 1 y 0,1 produce unos niveles de inhibición
parasitaria de 94,4, 77,2 y 51,8%, respectivamente, y unos niveles
de toxicidad celular de 65,1, 8,3 y 19,3% respectivamente. Aunque la
inhibición de la infección parasitaria ocurre casi al completo a 10
\mug/ml, se evidenció un rango de elevada toxicidad. A 1 \mug/ml
de nitazoxanida, la inhibición parasitaria y la toxicidad celular se
compararon favorablemente con la paramomicina a concentración de 2
mg/ml (77,2% de inhibición parasitaria y 8,3% de toxicidad para la
nitazoxanida a 1 \mug/ml en comparación con el 51% de inhibición
parasitaria y el 22,8% de toxicidad celular para la paromomicina a 2
mg/ml).
En el ensayo 2, el fármaco se modificó para
obtener una mejor distribución de la dosis con menor toxicidad.
Consecuentemente, los cultivos permanecieron viables durante 48
horas en lugar de las 24 horas del ensayo 1. La incubación durante
48 horas claramente dio como resultado una mayor toxicidad celular
relativa como resulta evidente tras el examen de la paramomicina en
ambos ensayos. La concentración de 20 \mug/ml de nitazoxanida
seguía siendo muy tóxica a las 48 horas de incubación aunque la
monocapa celular parecía continuar intacta. Es posible que la
elevada toxicidad que debe afectar la función celular también afecte
a la/el infección/desarrollo parasitario. A 2 \mug/ml de
nitazoxanida, hubo una inhibición considerable de la infección
parasitaria con una toxicidad celular relativamente baja. Otras
diluciones también produjeron una inhibición significativa y una
baja toxicidad. A concentraciones de fármaco de 2 \mug/ml, una
toxicidad celular moderada y una actividad inhibidora del 94,90%
indican que la nitazoxanida a 2 \mug/ml es superior a la
paramomicina para una infección de C. parvum in vitro a 2
mg/ml (por ejemplo una concentración 1000 veces mayor).
Se probaron existencias de nitazoxanida y
desacetil-nitazoxanida (NTZ y NTZdes) frente a
oocistos de C. parvum intactos y monocapas celulares
infectadas de esporocitos enquistadas a concentraciones de 10, 1,
0,1 y 0,01 \mug/ml. Cada compuesto se disolvió en dimetil
sulfóxido (DMSO) al 100% y se diluyó hasta las concentraciones
deseadas con DMEM esteril. Cada concentración de nitazoxanida y de
los controles del medio contenían 0,025% de DMSO de manera
constante.
El experimento usó un cultivo celular de células
MDBKF5D2 cultivadas en cámaras de 7 mm, y como Cryptosporidium
parvum: oocistos GCH1, 5 x 10^{4} por pozo, y se llevó a cabo
para comparar la paramomicina (control positivo) frente a la
nitazoxanida (fármaco experimental). Los materiales incluían suero
de conejo con esporozoito inmune anti Cryptosporidium parvum
(0,1%) anticuerpo de conejo y cabra conjugado con
fluorescencia.
200 \mul de un medio que contiene una solución
de nitazoxanida a las concentraciones mencionadas anteriormente y
los controles apropiados se introdujeron en dos pozos de una placa
de 96 pozos que contenía las monocapas celulares de MBDKF5D2
confluentes y dos pozos sin monocapas. El fármaco se incubó en las
monocapas a 37ºC y 8% de CO_{2}. A las 48 horas, se añadieron MTS
(disolución de Owen) y PMS a cada pozo en concentraciones de 333
\mug/ml y 25 \muM respectivamente. La placa se volvió a colocar
en el incubador es la oscuridad para el desarrollo durante dos
horas. A las 2 horas, se transfirieron 100 \mul de cada
sobrenadante a una nueva placa de microtiter y se leyó en el lector
de ELISA a 490 nm. Los resultados se grabaron y se analizaron. El
porcentaje de toxicidad se calculó restando la densidad óptica media
(DO) de los sobrenadantes del fármaco a la densidad óptica media
(DO) de los sobrenadantes del medio de control (sin fármaco),
dividiéndolo por la DO del medio de control y multiplicándolo
por
100.
100.
\frac{\text{DO
del medio - DO del fármaco}}{\text{DO del medio}} x
100
Los resultados de citotoxicidad se asignaron de
la manera siguiente: 0,5% de toxicidad = 0, 6-25%
de toxicidad = 1, 26-50% de toxicidad = 2,
51-75% de toxicidad = 3 y 76-100%
de toxicidad = 4. De manera convencional, valores de citotoxicidad
de 0 ó 1 se consideran niveles aceptables de toxicidad. Valores de
toxicidad de 2, 3 ó 4 se consideran niveles de toxicidad elevados
para la monocapa celular.
5 x 10^{4} oocistos de C. parvum por
pozo se incubaron en las concentraciones de nitazoxanida antes
mencionadas a 37ºC (8% de CO_{2}) en monocapas celulares de
MDBKF5D2 confluentes. El nivel de infección en cada pozo se
determinó y analizó mediante un ensayo de inmunofluorescencia entre
las 24 y las 48 horas. El porcentaje de inhibición se calculó
restando el recuento de parásitos medio/campo en los pozos del
ensayo del fármaco al recuento de parásitos medio/campo en el medio
de control (sin fármaco), dividido por el recuento del control del
medio, y después multiplicándolo por 100.
\frac{\text{Recuento del medio de
control - recuento del ensayo del fármaco}}{\text{Recuento del
medio de control}} x
100
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
- Ensayo de oocistos de C. parvum (48 horas).
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
\begin{minipage}[t]{145mm} Conc. - \mu g/ml; Parásito -
recuento de parásito medio/campo (12 campos analizados); % Inhib -
Porcentaje de inhibición de la infección parasitaria; % Tox -
porcentaje de toxicidad celular por el
fármaco.\end{minipage} \cr}
Se puede observar a partir de lo anterior que la
actividad inhibidora de la NTZdes fue la misma que la de la NTZ del
ejemplo II.
Tanto la nitazoxanida como la desacetil
nitazoxanida fueron igualmente efectivas in vitro frente a
Cryptosporidium parvum cuando se comprobaron en paralelo
obteniéndose unas inhibiciones del 98 y 94% con 10 y 1 \mug/ml
para cada compuesto respectivamente, Para la nitazoxanida 1
\mug/ml fue la concentración más baja que dio más del 90% de
inhibición, mientras que el 50% de inhibición se puede obtener con
menores concentraciones de nitazoxanida como 0,2, 0,1 y 0,02
\mug/ml. En la misma condición experimental la paromomicina usada
como control positivo fue 2.000 veces menos efectiva con
concentraciones inhibitorias que varían entre 51 y 83% a una
concentración de 2.000 \mug/ml.
Se añadieron células 2RK-13
(línea de células del riñón del conejo) a unas placas de cultivo de
24 pozos en una concentración de 2,6 x 10^{5} células por pozo
(medio 1,0 ml; RPMI 1640 con L-glutamina 2 mM y
suero de bovino fetal inactivado térmicamente al 5%). Los platos se
incubaron a 37ºC en un incubador de CO_{2} durante la noche,
tiempo durante el cual los pozos confluyeron (con una duplicación,
se estimarían 5 x 10^{5} células por pozo).
Se añadieron organismos Septata
intestinalis (tejido derivado del cultivo) a las células
hospedantes en una relación de 3:1 comparadas con las células
hospedantes estimadas o a 15 x 10^{6} organismos por pozo. Esta
relación dio como resultado que aproximadamente el 50% de las
células hospedantes resultaron infectadas.
Los fármacos se disolvieron en DMSO, agua o
metanol (dependiendo de la solubilidad) para generar muestras de
1,0 mg/ml. Las muestras se almacenaron a -70ºC. Las disoluciones
usadas en los experimentos se hicieron en un medio de cultivo del
tejido completo. Todas las diluciones se probaron en un pozo por
triplicado.
El medio se cambió en un periodo de tiempo de 3 a
4 días (conteniendo fármacos recientemente diluidos).
En el sexto día (después de añadir los parásitos
y los fármacos), se examinan las células para su toxicidad. Las
células de control a las que se les dio fármacos pero sin parásitos
se examinaron para la confluencia, la morfología de las células, y
la presencia de células muertas o flotantes. Las células incubadas
con parásitos sólo se examinan para confirmar que los parásitos son
infecciosos (es decir, presencia de vacuolas parasitóforas). Las
células que incuban los parásitos y los fármacos se evalúan para la
toxicidad de la célula hospedante y los números relativos de
vacuolas parasitóforas (es decir, alta, media, o baja).
En el décimo día, se añadieron 100 \mul de SDS
al 10% (0,5% de concentración final) a los pozos de cultivo para
desestabilizar las membranas de las células hospedantes y provocar
la liberación de la microsporidia. El número total de parásitos
presentes en cada pozo se determinó al contar una alícuota en un
hemacitómetro. Los resultados se expresan como porcentaje de
inhibición (relativo a las células infectadas a las que no se les
suministró el fármaco).
Los resultados se muestran en las figuras
1-4.
La nitazoxanida y la desacetil nitazoxanida se
probaron frente a parásitos, y más específicamente, una cepa RH de
Toxoplasma gondii, mantenida por pasajes en serie en los
ratones. Los cultivos de células de fibroblastos MRC5
(Bio-Merieux, Francia) cultivados en microplacas de
96 pozos fueron inoculados con T. gondii. 200 taquizoitos
recientemente recolectados se añadieron en cada pozo de cultivo,
excepto en los 8 pozos de control (control negativo). Tras 4 horas
de incubación, se añadieron las diluciones del fármaco en los
cultivos.
La nitazoxanida (NTZ) y la desacetil nitazoxanida
(dNTZ) se probaron a concentraciones del intervalo entre 8 x
10^{-4} y 40 mg/l. Los fármacos se disolvieron inicialmente en
DMSO, en unas concentraciones de 2 mg/ml, después se prepararon
diluciones en serie en el medio de cultivo. No se observó ningún
precipitado.
Las diluciones del fármaco se añadieron en los
cultivos (8 pozos para cada dilución) y después las placas de
cultivo se incubaron durante 72 horas. Los cultivos se fijaron
después con metanol frío. La evaluación del crecimiento de T.
gondii se llevó a cabo mediante ELISA usando un anticuerpo anti
T.gondii del conejo marcado con peroxidasa. Los valores de
densidad óptica se grabaron para cada pozo.
Los resultados se presentaron mediante la
representación de los valores de DO obtenidos para cada pozo de
cultivo, frente a la concentración del fármaco en el cultivo. Los
análisis estadísticos consisten en análisis por regresión con un
intervalo de confianza del 95% y la determinación de las curvas
dosis-respuesta, a partir de los valores de DO
generados para cada fármaco.
Una placa se tiñó con Giemsa para examinar el
efecto citopático en los cultivos.
Se realizaron tres experimentos por separado. En
cada experimento, dos placas de cultivo se usaron para cada
compuesto; en cada placa de cultivo, 8 pozos replicados se usaron
para cada concentración de fármaco.
Se obtuvieron resultados similares en los tres
conjuntos de experimentos. Las representaciones gráficas de los
resultados de un experimento representativo para cada fármaco se
muestran en las figuras 5 a, b, c y 6 a, b, c.
No se registró ningún efecto inhibitorio para las
concentraciones del intervalo entre 10^{-4} mg/l y 0,3 mg/l. Un
efecto significativo se registró para concentraciones \geq0,6
mg/l, con una inhibición completa del crecimiento de
Toxoplasma para concentraciones \geq2,5 mg/l. Sin embargo,
se registró una marcada toxicidad en la monocapa celular para
concentraciones \geq2,5 mg/l.
El examen microscópico de la monocapa reveló que
la NTZ, a concentraciones de 1,25 mg/l indujo un efecto citopático
en las células parasitadas, con un agrandamiento de la vacuola
parasitófora y una reducción en el número de parásitos
intracelulares. Mediante análisis por regresión, el 50% de la
concentración inhibitoria podría estimarse en 1,2 mg/l.
Se obtuvieron resultados similares con la
desacetil nitazoxanida : ningún efecto para concentraciones en el
intervalo entre 10^{-4} mg/l y 0,3 mg/l, inhibición para
concentraciones \geq0,6 mg/l, y una marcada toxicidad para
concentraciones \geq2,5 mg/l. El 50% de la concentración
inhibitoria podría estimarse en a 1,2 mg/l.
Los resultados obtenidos se reprodujeron sobre
tres experimentos por separado, con una evaluación del efecto
inhibitorio del fármaco en cultivos repetidos para concentración del
fármaco.
Tanto para la NTZ como para la desacetil NTZ, se
puede observar una marcada inhibición del crecimiento de
Toxoplasma a concentraciones de aproximadamente 1,2 mg/l, con
alteración de la vacuola parasitófora pero sin una marcada
alteración del parásito mismo.
Estos resultados indican que estos fármacos
tienen una buena actividad frente a T. gondii, y que se puede
esperar un efecto terapéutico in vivo en función de la
obtención de una concentración de aproximadamente 1 mg/l en el suero
o los tejidos.
Se encontró que la nitazoxanida tiene una
actividad antimicrobiana frente a los organismos TB. La siguiente
tabla muestra un ensayo para MIC de nitazoxanida y tizoxamida frente
a Mycobacterium intracellular mediante la técnica de dilución
de agar. Estos resultados se basan en varios experimentos, cada uno
de los cuales necesita alrededor de 3 semanas para el procedimiento
de dilución de agar con Middlebrook agar. Los datos obtenidos
indican que la nitazoxanida tiene un MIC frente a la micobacteria de
2 \mug/ml y la tizoxanida tiene un MIC de 4 \mug/ml, usando una
cepa convencional de Mycobacterium intracellular de ATCC,
usando en ensayo de dilución de agar convencional.
| MICs de Nitazoxanida y tizoxanida para Mycobacterium intracellular | |
| MIC | |
| Nitazoxanida | 2 \mug/ml |
| Tizoxanida | 4 \mug/ml |
| \begin{minipage}[t]{130mm} * Los MICs se determinaron mediante una dilución de agar convencional usando agar Middlebrook 7H11 durante 3 semanas. Se usó M. Intracellular ATCC 13950, una cepa convencional, para este experimento.\end{minipage} |
La figura 7 es una gráfica basada en el ensayo de
la efectividad de la nitazoxanida frente a una micobacteria que
crece en un extracto líquido. Usamos el ensayo colorimétricoMTS que
nos permite determinar el crecimiento en 4 horas en lugar de las 3
semanas del método de recuento de agar. Como se puede observar a
partir de los datos en la figura 7, cuando la nitazoxanida se añadió
a las 72 horas después de iniciarse el cultivo, hubo un efecto
inmediato en el crecimiento continuo si se compara con el
crecimiento en el medio de control por separado. La dosis de 3
\mug/ml de nitazoxanida detiene el crecimiento durante las 24
horas siguientes y por tanto hay un crecimiento lento después
durante los 2 días siguientes. La dosis de 50 \mug/ml fue
completamente bacteriostática durante las 144 horas del cultivo.
El efecto de la nitazoxanida se comprobó frente a
Cryptosporidium parvum en ratones infectados
experimentalmente. La nitazoxanida fue suministrada por Romark
Laboratorioes, L. C. en Tampa, Florida.
La dosis humana total (1 g/día durante 7 días es
decir 7 g) se modificó para el uso en ratones según Paget y Barnes.
La dosis humana se multiplicó por 0,0026 para los ratones (que pesan
aproximadamente 20 gramos) para obtener la cantidad total de fármaco
que se necesita para cada hospedante mañana y tarde durante 7 días
consecutivos. Cada ratón recibió 2,6 mg/día (7000 mg x 0,0026/7).
Las dosis se administraron por la boca usando una jeringuilla de
plástico equipada con una aguja de punta redondeada.
Veinte (20) crías de ratones de 2 días de edad se
infectaron mediante la administración oral de 100.000 oocistos de
Cryptosporidium parvum obtenidos a partir de terneros
infectados. Antes de ser administrados a los ratones, los oocistos
se concentraron usando una solución de azúcar según la técnica
descrita por Fayer y Ellis. Se obtuvieron muestras rectales de cada
ratón y se examinaron diariamente usando la modificación de la
técnica del manchado de Niehl-Nellsen descrita por
Graczyk y col. Los desechos de oocistos aparecen en las heces 2 días
después de la infección oral de los animales. El tercer día después
de la infección de los animales, 10 ratones recibieron 1,3 mg de
nitazoxanida, mañana y tarde, durante 7 días consecutivos mientras
que los 10 ratones restantes se mantuvieron como controles sin
tratamiento. Las muestras rectales se obtuvieron diariamente durante
cada uno de los 7 días de tratamiento y durante cada uno de los 7
días siguientes al fin del tratamiento. Los oocistos se suspendieron
en aceite y se contaron por 100 campos bajo un microscopio.
Los resultados mostrados en la siguiente tabla
indican claramente que la nitazoxanida administrada en una dosis
diaria de 2,6 mg/día durante 7 días consecutivos fue efectiva frente
a Cryptosporidium parvum al reducir el número de oocistos en
las heces de los ratones infectados cuando se compararon con los
animales de control. El fármaco de prueba disminuyó los desechos de
oocistos en 6 de los 10 ratones tratados al final del tercer día de
tratamiento. Al final del tratamiento del día 7, hubo una completa
reducción de los desechos de oocistos, todos los animales del
tratamiento mostraron unas pruebas fecal negativo cuando se
compararon con los ratones de control sin tratar. Este efecto duró
al menos durante los 7 días posteriores al tratamiento, como
muestran las pruebas negativas observadas en los días 3 y 7 después
de la finalización del tratamiento.
La nitazoxanida se comparó frente a un
antibiótico de izoniazida. El protocolo usó el BCG (Bacilo de
Calmette y Guerin) como cepa de Micobacterium. La
sensibilidad de esta cepa era la misma que la de M.
tuberculosis, pero esta cepa es mas inocua y por tanto no
requiere un nivel elevado de contención del agente de
tuberculosis.
Se administraron 4 mg/ratón por día en 0,2 ml de
aceite de girasol a los ratones. Los resultados en los ratones
tratados con nitazoxanida eran comparables a los del grupo que
recibió izoniazida.
Se comprobó la eficacia in vitro de la
nitazoxanida y la desacetil-nitazoxanida frente a
Fasciola hepatica.
La F. hepatica madura se recuperó de los
canales biliares de 3 hígados de terneros declarados insalubres
debido a la fasciolosis en el Veterinary Medical Diagnostic
Laboratory en el Hardy's Meat Packers, Bunkie, LA. Los parásitos
flagelados se lavaron en salino estéril durante 1 hora y se
transfirieron a un salino estéril o RPMI (pH 7,4) durante 3 horas
adicionales. Los parásitos flagelados se mantuvieron después en RPMI
estéril-suero de conejo (50:50 v/v) o RPMI estéril
(pH 7,4) durante la noche a 37ºC con 5% de CO_{2}.
Se realizó un cultivo in vitro (37ºC, 5%
de CO_{2}) según una modificación del procedimiento de Ibarra y
Jenkins (Z. Parasitenkd. 70:655-661, 1984). Usando
una técnica estéril, los parásitos flagelados se lavaron dos veces
durante 2-3 minutos en una disolución de sal
equilibrada de Hank's (pH 7,2) y se colocaron individualmente en los
pozos de la placa de cultivo Linbro de seis pozos que contienen 10
ml de alícuotas de las diluciones designadas del fármaco en el medio
de cultivo. El último consistía en RPMI
estéril-suero de conejo 50:50 v/v con sangre de
conejo 2% más 100 ppm de penicilina y 100 ppm de estreptomicina.
Sólo se usaron los parásitos flagelados que tenían una actividad y
una morfología normal.
Las soluciones de reserva de NTZ o su metabolito
D-NTZ proporcionado por Romark se disolvieron en
DMSO (2000 \mug/ml) y se diluyeron en el medio de cultivo, usando
matraces aforados de 100 ml, para producir las concentraciones de
fármaco especificadas (100, 50, 25, 10, 5, 3, 1 \mug/ml). Se
incluyeron dos parásitos flagelados de control en cada replicado,
uno en el medio de cultivo no medicado con RBC y uno en el medio de
cultivo no medicado sin
RBC.
RBC.
Los parásitos flagelados se examinaron para ver
los efectos del tratamiento del fármaco según lo evidenciado por la
muerte, alteraciones en la movilidad o cambios morfológicos en
comparación con los parásitos flagelados de control no tratados,
usando un panel iluminado a contraluz y una lente de aumento 3x
luminosa.
Experimento
1
Para D-NTZ, loa parásitos
flagelados en los tratamientos de 50 y 100 \mug estaban moribundos
o muertos al cabo de una hora. Cuatro de los 7 parásitos flagelados
en el tratamiento de 25 \mug estaban moribundos, dos estaban
activos, y uno se mostraba lento al cabo de la primera hora; todos
estaban muertos excepto dos parásitos flagelados lentos a las tres
horas, y sólo un parásito flagelado lento permaneció con vida tras
cuatro horas. Se registró una actividad reducida con 10 \mug a las
1, 3 y 4 horas y todos estaban moribundos o muertos a las 7 horas.
Se percibió una actividad reducida en algunos individuos a las 24
horas en los grupos de 5 \mug y 3 \mug con un principio algo más
lento a 3 \mug; todos estaban muertos en los pozos de tratamiento
de 3 y 5 \mug a las 50 horas, excepto un parásito flagelado lento
en cada grupo. Alguna reducción de la velocidad se registró en el
grupo de 1 \mug a las 42-72 horas y sólo 3
parásitos flagelados activos y uno moribundo permanecían vivos a las
91 horas; a las 115 horas sólo un parásito flagelado lento
permanecía en el grupo de 1 \mug. La mortalidad en el control con
el grupo RBC se observó a las 66 horas (1 parásito flagelado), 91
horas (1 parásito flagelado) y 115 horas (cuatro parásitos
flagelados). En el control sin el grupo RBC, todos estaban vivos en
91 horas y uno había muerto en 115 horas.
Experimento
2
Para NTZ, se registró alguna actividad mayor por
los efectos más tempranos en el recuento de la facilidad de
movimiento y en la mortalidad en los 8 replicados en comparación con
los resultados de la D-NTZ. En los grupos de 100,
50, y 25 \mug todos los parásitos flagelados estaban muertos o
moribundos excepto un parásito flagelado en 1 hora en el grupo de 25
\mug que estaba muerto a las 3 horas. La relación de la reducción
de la dosis en la facilidad de movimiento se observó en cada uno de
los otros grupos medicados empezando en la hora 1. En 10 \mug,
sólo un parásito flagelado sobrevivió a las 16 horas. En el grupo de
5 \mug, sólo 3 parásitos flagelados estaban activos en la hora 6 y
ninguno estaba activo a las 16 horas. Hacia las 23 horas, sólo 2
parásitos flagelados lentos en el grupo de 3 \mug permanecían con
vida; éstos estaban muertos en la hora 41. Para el grupo de 1
\mug, un parásito flagelado murió hacia la hora 16, tres hacia la
hora 41 y cinco hacia la hora 74; tres parásitos flagelados
permanecían activos en la hora 91 y un parásito flagelado tenía
actividad en la hora 115. En el control con el grupo RBC, 7 de 8
parásitos flagelados estaban vivos en la hora 74, 3 estaban vivos en
la hora 91 y dos sobrevivieron en la hora 115. En el control sin el
grupo RBC, 6 de 8 parásitos flagelados tenían actividad en la hora
74, 4 estaban activos en la hora 91 y dos permanecían activos en la
hora 115.
La muerte del parásito flagelado en los grupos de
dosis elevadas (25, 50, 100 \mug) fue rápida y se asoció con una
contracción y un "enrollamiento" ventral. A niveles de
medicación más bajos, la mayoría de los parásitos flagelados
redujeron la velocidad durante un periodo y se volvieron más
sosegados y "achatados" cuando estaban moribundos o morían.
La contaminación llega a ser limitante en los
resultados experimentales en algunos replicados que comienzan en la
hora 91. Para el experimento de D-NTZ, ocurre una
importante proliferación de hongos o bacterias y una mortalidad
asociada en dos placas replicadas hacia la hora 115. Para el
experimento de NTZ, la proliferación y la mortalidad del parásito
flagelado en las todas placas replicadas ocurre hacia la hora 91
(dos replicados), y la hora 115 (5 replicados). Las observaciones de
la hora 139 no se consideraron válidas por la contaminación general
de la mayoría de las placas.
Los experimentos sugieren una fuerte eficacia
parásito-flagelicida de la nitazoxanida con la
comprobación de ambos fármacos. Se observo una mayor actividad
parásito-flagelicida frente a F. hepatica de
la nitazoxanida que de la desacetil-nitazoxanida, el
metabolito principal, que se cree que es activo a nivel
hepático.
La rápida muerte del parásito flagelado ocurre en
1 hora a tasas de medicación in vitro >50 \mug, en 4
horas a 25 \mug y hacia las 6-7 horas a 10
\mug. Diez \mug pueden ser una tasa de suministro del fármaco
objetivo de tratamiento único apropiado si los datos
farmacocinéticos indican que los niveles de tejido se mantienen
durante >6-8 horas tras un tratamiento único.
Se observó una actividad
parásito-flagelicida fuerte hacia las 74 horas (tres
días) para ambos compuestos con las tasa de dosis de 3 y 5 \mug.
Se observó una aproximación a la supervivencia prolongada, pero no
igual que en los parásitos flagelados de control sin medicar a un
nivel de dosis de 1 \mug; el suministro de este nivel de fármaco a
los parásitos flagelados en los tejidos hepáticos entre 3 y 4 días
puede tener por tanto un efecto terapéutico inadecuado en los
parásitos.
La nitazoxanida se comprobó frente a Fasciola
gigantica inmadura y madura en conejos infectados
experimentalmente.
Se recogió metacercariae enquistada de
Fasciola gigantica (MCE) en una hoja de celofán tras
28-35 días de una infección de caracoles L.
calludi de Miracidium fasciola gigantica usando la
técnica descrita por Abdel-Ghany donde los caracoles
fueron expuestos a una luz artificial diariamente, durante 30
minutos, en agua de grifo desclorada limpia. La metacercariae
enquistada resultante (MCE) se conservó a 4ºC en un refrigerador
entre 5 y 8 días bajo la superficie de agua hasta que se usaron para
infectar a los animales experimentales.
Cuarenta (40) conejos Boscat, con un peso entre
1,5 y 2 kg cada uno, se incluyeron en el estudio y se destinaron a
dos grupos de tratamiento de 20 animales.
Los animales del grupo 1 fueron infectados
oralmente con 35-40 metacercariae enquistadas
envueltas en una hoja de lechuga y empujadas hasta la raíz de la
lengua de los animales. Se mantuvieron cerradas las bocas de los
animales manualmente hasta que se tragaron las metacercariae
enquistadas. Estos animales del grupo 1 se usaron para comprobar la
eficacia de la nitazoxanida frente a las etapas inmaduras
(4-5 semanas de edad) de la Fasciola
gigantica.
Los animales del grupo 2 fueron infectados
oralmente como se indica anteriormente con 10-15
metacercariae enquistadas y se usaron para probar la eficacia
de la nitazoxanida frente a los parásitos flagelados precoces
(>10 semanas de edad).
Diez animales del grupo 1 recibieron 35 mg de
nitazoxanida, mañana y tarde, durante 7 días consecutivos 4 semanas
después de su infección en la etapa inmadura del ciclo parasitario.
Los diez animales restantes del grupo 1 se mantuvieron como
controles sin tratamiento.
Diez animales del grupo 2 recibieron 35 mg de
nitazoxanida, mañana y tarde, durante 7 días consecutivos 10 semanas
después de su infección en la etapa madura del ciclo parasitario.
Los 10 animales restantes del grupo 2 se mantuvieron como controles
sin tratamiento.
Todos los animales se alimentaron con raciones
secas hasta la finalización del experimento.
Siete días después de la administración de la
última dosis de nitazoxanida, se sacrificaron todos los conejos de
cada grupo. Se examinó la superficie del hígado en busca de la
presencia de surcos migratorios necróticos especialmente en la etapa
inmadura del ciclo parasitario. Estas áreas necróticas se examinaron
usando dos agujas quirúrgicas para extraer los parásitos flagelados
migratorios jóvenes según la técnica descrita por
El-Bahy. Los hígados se cortaron en pequeñas rodajas
especialmente alrededor de los surcos migratorios y se maceraron
bajo un microscopio para extraer los parásitos flagelados
existentes. La cavidad abdominal y las superficies viscerales se
lavaron con agua caliente. Entonces se recogió el agua, se filtró y
se examinó para identificar los parásitos flagelados jóvenes. Todos
los parásitos recogidos así como las partes de ellos se contaron en
los animales tratados y en los no tratados en ambos grupos 1 y 2.
Los parásitos flagelados vivos parecían de color rosa, translúcidos
mostrando tegumentos intactos, fácilmente extraíbles del tejido
hepático usando agua caliente, mientras que los parásitos flagelados
muertos eran de color grisáceo, flácidos y mostraban una superficie
necrótica rota. La eficacia de la nitazoxanida se calculó usando la
fórmula que se indica a continuación.
% eficacia =
\frac{a-b}{a} x
100
Donde
a = el número de parásitos flagelados recuperados
en las heces en los animales de control
b = el número de parásitos flagelados recuperados
en las heces en los animales tratados.
Los resultados del estudio como se indican en la
tabla 7 muestran un marcado descenso en el número de parásitos
flagelados inmaduros recuperados del hígado de los conejos en el
grupo tratado en comparación con el grupo de control. El porcentaje
medio de la reducción se calculó como 46,77% (intervalo:
40-60%).
En la fase precoz de su infección, la
nitazoxanida mostró un efecto completo (100% de reducción) y ningún
gusano pudo ser visto tras el examen del hígado de los conejos
tratados en comparación con los animales de control sin tratar como
se muestra en la tabla 8.
La nitazoxanida administrada como dosis de 70
mg/día durante 7 días consecutivos es moderadamente efectiva frente
a la fase inmadura de Fasciola gigantica y es completamente
efectiva frente a la fase precoz del parásito.
La nitazoxanida se probó frente a Schistosoma
mansoni y Schistosoma hematobium en ratones infectados
experimentalmente.
Cuarenta (40) ratones blancos, con un peso entre
30 y 50 gramos se asignaron a dos grupos de tratamiento de 20
animales por grupo. El primer grupo se infectó con
300-500 Schistosoma mansoni libres de
cercariae activo suspendidos en 0,25 ml de agua destilada y se
administró a cada ratón mediante una inyección intraperitoneal. El
segundo grupo se infectó de la misma manera pero con cercariae de
Schistosoma hemotobium. Estos dos grupos se guardaron durante
un total de 70 días en el laboratorio.
Setenta días después de la infección de los
animales, diez ratones de cada grupo se trataron con nitazoxanida al
administrarles mediante dosis oral de 1,3 mg, mañana y tarde,
durante 7 días consecutivos. Siete días después de la finalización
del tratamiento todos los ratones fueron sacrificados y los gusanos
se extrajeron del hígado de cada animal mediante perfusión usando
agua tibia (37ºC). Los esquistosomas extraídos se contaron para
todos los animales de tratamiento y control. La eficacia de la
nitazoxanida se calculó usando la fórmula indicada a
continuación:
continuación:
% eficacia =
\frac{a-b}{a} x
100
Donde
a = el número de esquistosomas recuperados de las
heces en los animales de control
b = el número de esquistosomas recuperados de las
heces en los animales tratados.
Los resultados que se muestran el las tablas 9 y
10 indican claramente que la nitazoxanida administrada en una dosis
diaria de 2,6 mg/día durante 7 días consecutivos fue más efectiva
frente a Schistosoma hemotobium donde se observó una
reducción del gusano de 82,85% cuando se comparó con los animales
de control mientras que frente a Schistosoma mansoni, la
reducción del gusano sólo alcanzó un 59,91% frente a los ratones de
control. Estos resultados son consistentes con los proporcionados
por Abaza y col. En los pacientes en los que la nitazoxanida no fue
efectiva frente a S. mansoni como se muestra mediante los
recuentos de huevos positivos en el post
tratamiento.
tratamiento.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
Claims (20)
1. Una composición farmacéutica que contiene como
agente activo al menos un compuesto seleccionado del grupo
constituido por
un compuesto de fórmula (I):
y un compuesto de fórmula
(II)
y contiene adicionalmente una
cantidad de estabilidad mejorada de un ácido farmacéuticamente
aceptable.
2. Una composición farmacéutica de acuerdo con la
reivindicación 1, en la que el ácido farmacéuticamente aceptable se
selecciona del grupo constituido por ácido cítrico, ácido glutámico,
ácido succínico, ácido etanosulfónico, ácido acético, ácido
tartárico, ácido ascórbico, ácido metanosulfónico, ácido fumárico,
ácido adípico, ácido málico y mezclas de los mismos.
3. La composición de la reivindicación 2, en la
que el ácido farmacéuticamente aceptable es ácido cítrico.
4. La composición de la reivindicación 2, en la
que el ácido farmacéuticamente aceptable es ácido ascórbico.
5. Una composición farmacéutica que contiene como
agente activo
un compuesto de fórmula II
y un ácido farmacéuticamente
aceptable en una cantidad suficiente para volver el pH de dicha
composición farmacéutica entre 2 y 6 cuando dicha composición
farmacéutica se pone en contacto con agua, en la que dicho agente
activo está en la forma de partículas sólidas, y en la que la razón
del peso del ácido farmacéuticamente aceptable frente al peso de
dichas partículas sólidas está entre 0,01 y
0,5.
6. La composición de la reivindicación 5, en la
que la razón del peso del ácido farmacéuticamente aceptable frente
al peso de dichas partículas sólidas activas está entre 0,03 y
0,2.
7. La composición de la reivindicación 2, en la
que dicha composición está en una forma sólida, y en la que dichas
partículas activas se granulan en la presencia de al menos un agente
de granulación para formar partículas sólidas activas
granuladas.
8. La composición de la reivindicación 5, en la
que dichas partículas antes de la granulación tienen un tamaño de
partícula menor de 200 \mum y un tamaño medio de partícula mayor
de 10 \mum.
9. La composición de la reivindicación 8, en la
que dicho tamaño medio de partícula está entre 10 y 100 \mum.
10. La composición de la reivindicación 7, en la
que dicho agente de granulación se selecciona del grupo que consta
de polivinilpirrolidona, agua, alcohol, sacarosa, hidroxilcelulosa y
mezclas de los mismos.
11. La composición de la reivindicación 7, en la
que en dichas partículas sólidas activas granuladas, la relación
entre peso del ácido farmacéuticamente aceptable/ peso del agente
activo está entre 0,01 y 0,5.
12. La composición de la reivindicación 7, en la
que dicho ácido farmacéuticamente aceptable se selecciona del grupo
constituido por ácido cítrico, ácido glutámico, ácido succínico,
ácido etanosulfónico, ácido acético, ácido tartárico, ácido
ascórbico, ácido metanosulfónico, ácido fumárico, ácido adípico,
ácido málico y mezclas de los mismos.
13. La composición de la reivindicación 2, en la
que dicha composición está en la forma de una suspensión de
partículas sólidas de al menos un compuesto de fórmula I y fórmula
II en un líquido.
14. La composición de la reivindicación 13, en la
que dichas partículas activas antes de formar dicha suspensión se
granulan en la presencia de al menos un agente de granulación para
formar partículas sólidas activas granuladas.
15. La composición de la reivindicación 13, en la
que dicho líquido es agua.
16. La composición de la reivindicación 13, en la
que el pH de dicha suspensión está entre 2 y 6.
17. La composición de la reivindicación 13, en la
que el pH de dicha suspensión está entre 3 y 5.
18. La composición de la reivindicación 2, en la
que dicha composición está en la forma de una pasta que comprende
partículas activas de al menos un compuesto de fórmula I y fórmula
II, un agente humectante, y un espesante.
19. La composición de la reivindicación 18, en la
que dicho ácido farmacéuticamente aceptable se selecciona del grupo
constituido por ácido cítrico, ácido glutámico, ácido succínico,
ácido etanosulfónico, ácido acético, ácido tartárico, ácido
ascórbico, ácido metanosulfónico, ácido fumárico, ácido adípico,
ácido málico y mezclas de los mismos.
20. La composición de la reivindicación 18, en la
que dichas partículas activas tienen un tamaño medio de partícula
menor de 200 \mum, menos del 10% en peso de dichas partículas
tiene un tamaño mayor de 100 \mum, menos del 50% de dichas
partículas tiene un tamaño mayor de 50 \mum, y menos del 10% en
peso de dichas partículas tiene un tamaño menor de 5 \mum.
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