ES2234011T3

ES2234011T3 - Productos farmaceuticos de peptidos de administracion oral.

Info

Publication number: ES2234011T3
Application number: ES97915071T
Authority: ES
Inventors: William Stern; James P. Gilligan
Original assignee: Unigene Laboratories Inc
Current assignee: Unigene Laboratories Inc
Priority date: 1996-03-15
Filing date: 1997-03-14
Publication date: 2005-06-16
Anticipated expiration: 2017-03-14
Also published as: BR9708078A; DE69731957D1; DE69731957T2; JP3549542B2; CN1213282A; NO984243L; NO322443B1; EP0929270B1; AU2211197A; CN1197616C; JPH11508606A; HU226692B1; CZ337198A3; EP0929270A4; CA2249744A1; EP0929270A1; HUP9902751A2; KR100498646B1; US6086918A; NO984243D0

Abstract

LA BIODISPONIBILIDAD DE AGENTES ACTIVOS PEPTIDOS QUE DEBEN ADMINISTRARSE POR VIA ORAL SE REALZA GRACIAS A UNA COMPOSICION FARMACEUTICA QUE PROPORCIONA UN OBJETIVO DE LIBERACION DEL PEPTIDO AL INTESTINO EN VIRTUD DE UN VEHICULO PROTECTOR RESISTENTE AL ACIDO QUE TRANSPORTA COMPONENTES DE LA INVENCION A TRAVES DEL ESTOMAGO. ESTA COMPOSICION INCLUYE UN ELEMENTO INCREMENTADOR DE ABSORCION DE UN AGENTE DE REDUCCION DE PH AL PH INTESTINAL LOCAL INFERIOR. SE LIBERAN TODOS LOS COMPONENTES JUNTOS DENTRO DEL INTESTINO CON EL PEPTIDO.

Description

Productos farmacéuticos de péptidos de administración oral.

Antecedentes de la invención Campo de la invención

La presente invención se refiere a productos farmacéuticos de péptidos de administración oral en los que los compuestos activos incluyen una variedad de aminoácidos y al menos un enlace peptídico en sus estructuras moleculares, y a los procedimientos para mejorar la biodisponibilidad de dichos compuestos de péptido activo cuando se administran por vía oral.

Descripción de la técnica relacionada

Numerosas hormonas humanas, neurotransmisores y otros compuestos biológicos importantes tienen péptidos como parte sustancial de sus estructuras moleculares. Muchas enfermedades responden positivamente al aumento del nivel de estos compuestos de péptido en los pacientes. Se puede administrar a los pacientes una cantidad terapéuticamente efectiva de dichos péptidos biológicamente relevantes por diferentes vías. Sin embargo, como se discute de manera adicional a continuación, la administración oral preferida es muy difícil con este tipo de compuesto activo.

La calcitonina de salmón, por ejemplo, es un péptido hormona que disminuye la absorción de calcio del hueso. Cuando se usa para tratar enfermedades relacionadas con el hueso y trastornos del calcio (tales como osteoporosis, enfermedad de Paget, hipercalcemia maligna, y similares), tiene el efecto de ayudar a mantener la densidad del hueso. Se han aislado muchos tipos de calcitonina (calcitonina humana, calcitonina de salmón, calcitonina de anguila, elkatonina, calcitonina porcina, y calcitonina de pollo). No existe homología estructural significativa entre los diversos tipos de calcitonina. Por ejemplo, existe sólo un 50% de identidad entre los aminoácidos que componen la calcitonina humana y los que componen la calcitonina de salmón. No obstante la diferencia en la estructura molecular, la calcitonina de salmón se puede usar en el tratamiento humano de las enfermedades sensibles a la calcitonina que se describen anteriormente.

Los productos farmacéuticos de péptidos usados en la técnica anterior se han administrado frecuentemente mediante inyección o mediante administración nasal. La insulina es un ejemplo de un péptido farmacéutico administrado frecuentemente mediante inyección. Una administración oral más preferida tiende a ser problemática debido a que los compuestos de péptido activo son muy susceptibles a la degradación en el estómago y los intestinos. Por ejemplo, no se cree que la técnica anterior haya informado de una capacidad para alcanzar niveles reproducibles en sangre de la calcitonina de salmón cuando se administra por vía oral. Se cree que es debido a que la calcitonina de salmón carece de estabilidad suficiente en el tracto gastrointestinal, y tiende a transportarse mal hacia la sangre a través de las paredes del intestino. Sin embargo, la administración mediante inyección y nasal es significativamente menos conveniente, e implica una mayor falta de comodidad del paciente que la administración oral. A menudo, esta inconveniencia o falta de comodidad da como resultado un incumplimiento sustancial del paciente con un régimen de tratamiento. De esta manera, existe una necesidad en la técnica de una administración oral más efectiva y reproducible de los productos farmacéuticos de péptidos tales como insulina, calcitonina de salmón y otros, descritos con más detalle en el presente documento.

Los enzimas proteolíticos del estómago y los intestinos pueden degradar los péptidos, volviéndolos inactivos antes de que se puedan absorber en la corriente sanguínea. Cualquier cantidad de péptido que sobreviva a la degradación proteolítica por las proteasas del estómago (que tienen usualmente un pH óptimo ácido) se enfrenta posteriormente a las proteasas del intestino delgado y los enzimas secretados por el páncreas (que tienen usualmente un pH óptimo neutro a básico). Las dificultades específicas presentadas por la administración oral de un péptido como la calcitonina de salmón implican el tamaño relativamente grande de la molécula, y la distribución de carga que presenta. Esto puede hacer más difícil que la calcitonina de salmón penetre la mucosa a lo largo de las paredes del intestino o que cruce la membrana del borde ciliado intestinal hasta la sangre. Estos problemas adicionales pueden contribuir de manera adicional a una biodisponibilidad limitada.

Resumen de la invención

Es de acuerdo con esto un objetivo de la presente invención proporcionar una composición farmacéutica oral terapéuticamente efectiva para liberar de manera segura productos farmacéuticos de péptidos, por ejemplo, agentes péptidos fisiológicamente activos tales como insulina, calcitonina de salmón, vasopresina y otros descritos en el presente documento.

Es un objetivo adicional de la invención proporcionar una composición farmacéutica oral terapéuticamente efectiva para uso en procedimientos terapéuticos para mejorar la biodisponibilidad de dichos péptidos.

Es un objetivo adicional de la invención proporcionar una composición farmacéutica oral terapéuticamente efectiva para uso en los procedimientos de tratamiento de enfermedades relacionadas con el hueso y transtornos del calcio administrando calcitonina de salmón por vía oral.

En un aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica para administración oral de un agente de péptido fisiológicamente activo que comprende:

(A) una cantidad terapéuticamente efectiva de dicho agente de péptido activo;

(B) al menos un agente disminuidor del pH farmacéuticamente aceptable;

(C) al menos un mejorador efectivo de la absorción para estimular la biodisponibilidad del mencionado agente activo; y

(D) un vehículo protector efectivo resistente al ácido para transportar la mencionada composición farmacéutica a través del estómago de un paciente a la vez que previene el contacto entre dicho agente de péptido activo y las proteasas del estómago;

en el que el mencionado agente disminuidor del pH está presente en dicha composición farmacéutica en una cantidad que, si se añadiera la mencionada composición a diez mililitros de una solución acuosa de bicarbonato de sodio 0,1 M, sería suficiente para bajar el pH de dicha solución a no más de 5,5.

Los agentes de péptido activo preferidos incluyen, pero no se limitan a insulina, vasopresina, calcitonina de salmón y otros descritos a continuación, especialmente calcitonina de salmón.

En otro aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica oral terapéuticamente efectiva para uso en un procedimiento para mejorar la biodisponibilidad de un agente de péptido activo terapéutico liberado por vía oral, dicho procedimiento comprende liberar selectivamente el mencionado agente de péptido activo, junto con al menos un agente disminuidor del pH y al menos un mejorador de la absorción, en el intestino de un paciente tras el paso de dicho agente de péptido activo, agente disminuidor del pH y mejorador de la absorción a través de la boca y estómago de dicho paciente bajo la protección de un vehículo protector resistente al ácido que previene sustancialmente el contacto entre las proteasas del estómago y el mencionado agente de péptido.

en el que dicho agente disminuidor del pH y otros compuestos liberados junto con el anterior, se liberan en dicho intestino en una cantidad que, si se añadieran a 10 mililitros de una solución acuosa de bicarbonato de sodio 0,1 M, sería suficiente para bajar el pH de dicha solución a no más de 5,5.

En otro aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica oral terapéuticamente efectiva para uso en un procedimiento para mejorar la biodisponibilidad de la calcitonina de salmón liberada por vía oral, comprendiendo el mencionado procedimiento liberar selectivamente dicha calcitonina de salmón, junto con al menos un agente disminuidor del pH y al menos un mejorador de la absorción, en el intestino de un paciente tras el paso de dicha calcitonina de salmón, dicho agente disminuidor del pH, y dicho mejorador de la absorción a través de la boca y el estómago del paciente, bajo la protección de un recubrimiento entérico que previene sustancialmente el contacto entre las proteasas del estómago y la mencionada calcitonina de salmón;

en el que dicho compuesto disminuidor del pH se libera por el mencionado vehículo en dicho intestino en una cantidad que, si se añadiera a 10 mililitros de solución acuosa de bicarbonato de sodio 0,1 M, sería suficiente para bajar el pH de dicha solución a no más de 5,5.

Se cree que la presente invención reduce la probabilidad de degradación proteolítica del compuesto de péptido activo protegiendo simultáneamente el péptido del ataque proteolítico mediante (1) las proteasas del estómago (que son usualmente más activas a pH ácido) y (2) las proteasas intestinales o pancreáticas (que son usualmente más activas a pH básico a neutro).

A continuación, se cree que la invención promueve el proceso por el cual el péptido cruza la membrana del borde ciliado intestinal hasta la sangre, a la vez que se continúa protegiendo el péptido de la degradación proteolítica.

Un vehículo protector resistente al ácido protege el agente activo péptido de las proteasas que actúan en medio ácido. Cantidades significativas de ácido (con el que el agente de péptido activo se mezcla) reducen a continuación la actividad de las proteasas que actúan en medio básico o neutro en el intestino (por ejemplo, proteasa luminal o digestiva y proteasas de la membrana del borde ciliado) disminuyendo el pH por debajo del intervalo de actividad óptima de estas proteasas intestinales. Los mejoradores de la absorción de la invención se pueden usar para mejorar el transporte del agente de péptido a través de las capas de mucosa intestinal, a través de la membrana del borde ciliado y hacia la sangre.

El uso simultáneo de los mejoradores de la absorción junto con un compuesto disminuidor del pH, de acuerdo con la invención, proporciona un efecto sinérgico sorprendente sobre la biodisponibilidad, con relación al mejorador de la absorción sólo, o al compuesto disminuidor del pH solo. Comparar la Tabla 4 (infra), formulación I (calcitonina de salmón sola), la Tabla 3, formulación I (calcitonina de salmón y compuesto disminuidor del pH) y la Tabla 4, formulación II (calcitonina de salmón y mejorador de la absorción) con la Tabla 4 formulación III (calcitonina de salmón, compuesto disminuidor del pH, y mejorador de la absorción).

Otras características y ventajas de la presente invención llegarán a ser evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de la invención.

Descripción detallada de la invención

De acuerdo con la invención, se proporciona a los pacientes necesitados de tratamiento con ingredientes de péptidos activos con una composición farmacéutica oral de los anteriores (a una dosificación apropiada), preferible pero no necesariamente en forma de comprimido o cápsula de tamaño ordinario en la industria farmacéutica. Se describen más adelante y con más detalle las dosificaciones y frecuencia de administración de los productos. Los pacientes que se pueden beneficiar son cualquiera de los que sufren de transtornos que responden favorablemente al incremento de los niveles de un compuesto que contiene el péptido. Se puede usar, por ejemplo, calcitonina de salmón oral de acuerdo con la invención para tratar pacientes que sufran de trastornos del calcio o enfermedades óseas. La invención se puede usar, por ejemplo, para tratar la osteoporosis, enfermedad de Paget, hipercalcemia maligna y similares, con calcitonina oral, preferiblemente calcitonina de salmón.

La calcitonina de salmón es un ingrediente activo preferido para uso de acuerdo con la invención por numerosas razones. Por ejemplo, proporciona numerosas ventajas incluso sobre la calcitonina humana, tanto que se usa como agente farmacéutico para pacientes humanos. Entre las ventajas proporcionadas por la utilización de calcitonina de salmón en vez de calcitonina humana para el tratamiento de la osteoporosis humana están el incremento de potencia, la analgesia y el incremento de la vida media. La calcitonina de salmón es más efectiva que la calcitonina humana natural en el tratamiento, debido a que son necesarias menores dosificaciones que con la calcitonina humana. No existe homología sustancial entre la calcitonina de salmón y la humana, con solo un 50% de identidad en las secuencias de aminoácidos de las dos calcitoninas.

Los solicitantes han encontrado que la calcitonina de salmón posee una biodisponibilidad insospechadamente mayor cuando se administra por vía oral de acuerdo con la presente invención que la que se esperaría de su peso molecular. Los solicitantes han descubierto que, en una formulación oral de la invención, la biodisponibilidad de la calcitonina de salmón excede significativamente a la de la hormona paratiroidea, un péptido de peso molecular comparable (34 aminoácidos por PTH frente a 32 por sTC) en los ensayos comparativos internos de los solicitantes.

Sin pretender quedar ligado por teoría alguna, se cree que la composición farmacéutica de la invención supera una serie de barreras naturales diferentes y no relacionadas de biodisponibilidad. Diversos componentes de las composiciones farmacéuticas actúan para superar diferentes barreras mediante mecanismos apropiados para cada una, dando como resultado efectos sinérgicos en la biodisponibilidad de un ingrediente activo péptido. Como se describe a continuación, las propiedades físicas y químicas inherentes de la calcitonina de salmón y otros péptidos hacen que ciertos mejoradores de la absorción sean más efectivos que otros estimulando su biodisponibilidad.

El compuesto péptido activo se puede administrar por vía oral. De acuerdo con la invención, se reduce la degradación proteolítica del péptido por las proteasas del estómago (la mayor parte de las cuales son activas en el intervalo de pH ácido) y las proteasas intestinales o pancreáticas (la mayor parte de las cuales son activas en el intervalo de pH neutro a básico). Los mejoradores de la solubilidad ayudan al paso del agente de péptido activo a través de la barrera epitelial intestinal.

De nuevo, sin pretender quedar ligado por teoría alguna, parece que, de acuerdo con la presente invención, el péptido es transportado a través del estómago bajo la protección de un vehículo protector apropiado resistente al ácido para prevenir sustancialmente el contacto entre la calcitonina de salmón u otro péptido activo y cualquiera de las proteasas del estómago capaz de degradarlo. Una vez la composición farmacéutica de la invención pasa a través del estómago y entra en la región intestinal donde predomina el pH básico a neutro, y donde las proteasas tienen un pH óptimo básico a neutro, el recubrimiento entérico u otro vehículo libera el péptido y el ácido (en estrecha proximidad cada uno del otro).

Se cree que el ácido disminuye el pH local del intestino (donde el agente activo se ha liberado) a niveles por debajo del intervalo óptimo para muchas proteasas intestinales. Esta disminución del pH reduce la actividad proteolítica de las proteasas intestinales, proporcionando de esta manera protección al péptido de la degradación potencial. La actividad de estas proteasas queda disminuida por el ambiente temporalmente ácido proporcionado por la invención. Se prefiere que se proporcione ácido suficiente para que el pH local del intestino disminuya temporalmente a 5,5 o por debajo, de manera preferible 4,7 o por debajo y de manera más preferible 3,5 o por debajo. El ensayo del bicarbonato de sodio descrito a continuación (en la sección titulada "el agente disminuidor del pH") es indicativo de la cantidad de ácido requerida. De manera preferible, las condiciones de pH intestinal reducido persisten durante un periodo de tiempo suficiente para proteger el agente de péptido de la degradación proteolítica hasta que al menos parte del agente de péptido haya tenido la oportunidad de cruzar la pared intestinal en la corriente sanguínea. Para la calcitonina de salmón, los experimentos ha demostrado un T_{máx} de 5-15 minutos para los niveles de calcitonina de salmón en sangre cuando los componentes activos se inyectan directamente en el duodeno, íleon o cólon. Los mejoradores de la absorción de la invención promueven sinérgicamente la absorción del péptido en la sangre mientras prevalezcan las condiciones de actividad proteolítica reducida.

El mecanismo por el cual se cree que la invención lleva a cabo el objetivo de mejorar la biodisponibilidad se ayuda haciendo que los componentes activos de la composición farmacéutica sean liberados conjuntamente de manera simultánea en, tanto como sea posible. Con este fin, se prefiere mantener el volumen de recubrimiento entérico tan bajo como sea posible de forma consistente con proporcionar protección para las proteasas del estómago. De esta manera, es menos posible que el recubrimiento entérico interfiera con la liberación del péptido, o con la liberación de otros componentes muy próximos en el tiempo con el péptido. Se deberá añadir normalmente menos del 30% en peso de recubrimiento entérico respecto del peso del resto de la composición farmacéutica (es decir, los otros componentes de la composición excluyendo el recubrimiento entérico). De manera preferible, éste es inferior al 20% y, de manera más preferible, el recubrimiento entérico se añade entre el 10% y el 20% en peso de los ingredientes sin recubrir.

El mejorador de la absorción que puede ser un mejorador de la solubilidad y/o un mejorador del transporte (como se describe con más detalle a continuación), ayuda al transporte del agente de péptido desde el intestino a la sangre, y puede promover el proceso de tal manera que este se realiza mejor durante el período de tiempo de pH intestinal reducido y de actividad proteolítica intestinal reducida. Muchos agentes tensioactivos pueden actuar a la vez como mejoradores de la solubilidad y mejoradores del transporte (absorción). De nuevo, sin pretender quedar ligado por teoría alguna, se cree que el mejoramiento de la solubilidad proporciona (1) una liberación más simultánea de los componentes activos de la invención en la porción acuosa del intestino, (2) mejor solubilidad del péptido en, y transportado a través de, una capa mucosa a lo largo de las paredes del intestino. Una vez el ingrediente de péptido activo alcanza las paredes del intestino, un mejorador de la absorción proporciona un transporte mejor a través de la membrana del borde ciliado del intestino hasta la sangre, mediante tanto transporte transcelular como paracelular Como se describe con más detalle a continuación, muchos compuestos preferidos pueden proporcionar ambas funciones. En aquellos ejemplos, las formas de realización preferidas que utilizan ambas funciones pueden hacerlo también añadiendo sólo un compuesto adicional a la composición farmacéutica. En otras formas de realización, mejoradores de la absorción diferentes pueden proporcionar las dos funciones de manera separada.

Se describe de manera separada a continuación cada uno de los ingredientes preferidos de la composición farmacéutica de la invención. Se pueden usar combinaciones de múltiples agentes disminuidores del pH, o múltiples mejoradores, así como usar únicamente un único agente disminuidor del pH y/o un único mejorador. Se discuten también a continuación algunas combinaciones preferidas.

Ingredientes de péptido activo

Los ingredientes de péptido activo que se pueden beneficiar de la administración oral de acuerdo con la invención incluyen cualquier agente terapéutico que sea fisiológicamente activo y tenga una variedad de aminoácidos y al menos un enlace peptídico en su estructura molecular. La inversión suprime, por diversos mecanismos, la degradación de los ingredientes activos por las proteasas que podrían, de otra manera, romper uno o más de los enlaces peptídicos del ingrediente activo. La estructura molecular puede incluir de manera adicional otros sustituyentes o modificaciones. Por ejemplo, la calcitonina de salmón, un agente de péptido activo preferido en el presente documento, se amida en su C terminal. Se puede liberar por vía oral de acuerdo con la invención tanto péptidos naturales como artificiales.

Los compuestos de péptido activo de la invención incluyen, insulina, vasopresina, calcitonina (incluyendo no solo la calcitonina de salmón preferida, así como otras calcitoninas). Otros ejemplos incluyen, péptidos del gen indicador que expresan calcitonina, hormona paratiroidea, factor liberador de la hormona luteneizante, eritropoyetina, activadores del plasminógeno tisular, hormona del crecimiento humana, adrenocorticotropina, diversas interleucinas, encefalina, y similares. Muchos otros son conocidos en la técnica. Se espera que cualquier compuesto farmacéutico que tenga enlaces peptídicos que podrían estar sujetos a rotura en el tracto gastrointestinal podrían beneficiarse de la administración oral de acuerdo con la presente invención debido a la reducción de dicha rotura que se consigue con la presente invención.

Cuando se usa calcitonina de salmón, esta comprende de manera preferible entre 0,02 y 0,2 por ciento en peso relativo al peso total de la composición farmacéutica global (menos el recubrimiento entérico). La calcitonina de salmón está comercialmente disponible (por ejemplo, de BACHEM, Torrence, California). De manera alternativa se puede sintetizar por procedimientos conocidos, algunos de los cuales se describen brevemente a continuación. Otros agentes de péptido activo deberán estar presentes a concentraciones más altas o más bajas dependiendo de las concentraciones en sangre objetivo deseadas para el compuesto activo y su biodisponibilidad en el sistema de administración oral de la invención (se informa de varios en la Tabla 8).

Los precursores de la calcitonina de salmón se pueden fabricar por síntesis química o recombinante, conocidas en la técnica. Los precursores u otros agentes de péptido activo amidados se pueden fabricar de manera similar. Se cree que la producción recombinante tiene un coste efectivo más significativo. Los precursores se convierten en calcitonina de salmón activa mediante reacciones de amidación que son también conocidas en la técnica. Por ejemplo, la amidación enzimática se describe en la Patente de Estados Unidos 4.708. 934 y en las Publicaciones de Patente Europea 0 308 067 y 0 382 403. Se prefiere la producción recombinante tanto para el precursor como para la enzima que cataliza la conversión del precursor en calcitonina de salmón. Dicha producción recombinante se describe en Biotechnology, Vol 11 (1993) pp 64-70, que describe de manera adicional una conversión de un precursor a un producto amidado. El producto recombinante del que se informa es idéntico a la calcitonina de salmón natural, y a la calcitonina de salmón producida usando la solución y la síntesis del péptido químico en fase sólida.

La producción de calcitonina de salmón recombinante preferida (rsCT) puede llevarse a cabo, por ejemplo, produciendo precursor de la calcitonina de salmón extendido a glicina en E coli como una proteína de fusión soluble con la glutatión-S-transferasa. El precursor extendido a la glicina tiene una estructura molecular que es idéntica a la calcitonina de salmón activa excepto en el C terminal (donde la calcitonina de salmón termina en -pro-NH_{2}, el precursor termina en -pro-gly). Una enzima \alpha-amidante descrita en las publicaciones anteriores cataliza la conversión de los precursores en calcitonina de salmón. Esta enzima se produce preferiblemente de forma recombinante, por ejemplo, en células de ovario de Hamster Chino (CHO)) tal como se describe en el artículo de Biotechnology citado anteriormente. Se pueden producir otros precursores de otros péptidos amidados de manera similar. Se pueden producir péptidos que no requieren amidación u otras funcionalidades adicionales de manera similar. Están comercialmente disponibles otros agentes de péptido activo o se pueden producir por técnicas conocidas en la técnica.

El agente disminuidor del pH

La cantidad total de compuesto disminuidor del pH que se va a administrar con cada administración de calcitonina de salmón deberá ser de manera preferible una cantidad que, cuando se libera en el intestino, sea suficiente para bajar sustancialmente el pH local del intestino por debajo del pH óptimo para las proteasas que se encuentran allí. La cantidad requerida variará necesariamente con diversos factores, que incluyen el tipo de agente disminuidor del pH usado (descrito a continuación) y los equivalentes de protones proporcionados por un agente disminuidor del pH dado. En la práctica, la cantidad requerida para proporcionar buena biodisponibilidad es una cantidad que, cuando se añade a una solución de 10 mililitros de bicarbonato de sodio 0,1 M, baje el pH de la solución de bicarbonato de sodio a no más de 5,5, y de manera preferible a no más de 4,7, de manera más preferible a no más de 3,5. En el ensayo anterior pueden usarse los ácidos suficientes para bajar el pH a aproximadamente 2,8 en algunas formas de realización. De manera preferible se usan al menos 300 miligramos, y de manera más preferible al menos 400 miligramos del agente disminuidor del pH en la composición farmacéutica de la invención. Las preferencias anteriores se refieren al peso combinado total de todos los agentes disminuidores del pH cuando se usan dos o más de dichos agentes en combinación. La formulación oral no debería incluir una cantidad de cualquier base que, cuando se libere junto con el compuesto disminuidor del pH, podría evitar que el pH del ensayo del bicarbonato de sodio descrito anteriormente cayera a 5,5 o menos.

El agente disminuidor del PH de la invención puede ser cualquier compuesto farmacéuticamente aceptable que no sea tóxico en el tracto gastrointestinal y sea capaz de liberar iones de hidrógeno (un ácido tradicional) o de inducir un contenido más alto de ión hidrógeno en el medio ambiente local. Puede también ser cualquier combinación de dichos compuestos. Se prefiere que al menos un agente disminuidor del pH usado en la invención tenga un pKa no mayor de 4,2, y de manera preferible no mayor de 3,0. Se prefiere también que el agente disminuidor del pH tenga una solubilidad en agua de al menos 30 gramos por 100 mililitros de agua a temperatura ambiente.

Los ejemplos de compuestos que inducen un contenido más alto de iones hidrógeno incluyen cloruro de aluminio y cloruro de zinc. Los ácidos tradicionales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a sales ácidas de aminoácidos (por ejemplo, clorhidratos de aminoácidos) o derivados de los anteriores. Los ejemplos de estos son las sales ácidas del ácido acetil glutámico, alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, betaína, carnitina, carnosina, citrulina, creatina, ácido glutámico, glicina, histidina, hidroxilisina, hidroxiprolina, hipotaurina, isoleucina, leucina, lisina, metil histidina, norleucina, ornitina, fenil alanina, prolina, sarcosina, serina, taurina, treonina, triptófano, tirosina y valina.

Otros ejemplos de compuestos disminuidores del pH útiles incluyen ácidos carboxílicos tales como acetilsalicílico, acético, ascórbico, cítrico, fumárico, glucurónico, glutárico, glicérico, glicocólico, glioxílico, isocítrico, isovalérico, láctico, maleico, oxaloacético, oxalosuccínico, propiónico, pirúvico, succínico, tartárico, valérico y similares.

Otros agentes disminuidores del pH útiles que pueden no denominarse usualmente "ácidos" en la técnica, pero que pueden sin embargo ser útiles de acuerdo con la invención son los ésteres de fosfato (por ejemplo, fructosa 1, 6 difosfato, glucosa 1, 6 difosfato, ácido fosfoglicérico, y ácido difosfoglicérico). Se puede usar también CARBOPOL® (marca registrada de BF Goodrich) y polímeros tales como policarbofil para disminuir el pH.

Se puede usar cualquier combinación de agente disminuidor del pH que consiga el nivel de pH requerido no superior a 5,5 en el ensayo del bicarbonato de sodio descrito anteriormente. Una forma de realización preferida utiliza como el al menos uno de los agentes disminuidores del pH de la composición farmacéutica un ácido seleccionado entre el grupo constituido por ácido cítrico, ácido tartárico y una sal ácida de un aminoácido.

Cuando el agente de péptido activo es calcitonina de salmón, ciertas relaciones de agente disminuidor del pH a calcitonina de salmón han probado ser especialmente efectivas. Se prefiere que la relación en peso de agente disminuidor del pH a calcitonina de salmón exceda de 200:1, de manera preferible de 800:1 y de manera más preferible de 2000:1.

El mejorador de la absorción

Los mejoradores de la absorción están presentes de manera preferible en una cantidad que constituya entre 0,1 y 20,0 por ciento en peso, relativa al peso total de la composición farmacéutica (excepto el recubrimiento entérico), Los mejoradores de la absorción preferidos son agentes tensioactivos que actúan a la vez como mejoradores de la solubilidad y como mejoradores de la absorción. Hablando de manera genérica, los "mejoradores de la solubilidad" mejoran la capacidad de los componentes de la invención de solubilizarse bien en el medio ambiente acuoso en el que originalmente se liberan o en el medio ambiente lipófilo de la capa mucosa que recubre las paredes del intestino, o en ambos. Los "mejoradores del transporte (absorción)" (que son frecuentemente los mismos agentes tensioactivos usados como mejoradores de la solubilidad) son aquellos que facilitan la simplicidad con la que cada agente de péptido cruza la pared del intestino.

Uno o más mejoradores de la absorción pueden realizar sólo una función (por ejemplo, la solubilidad), o uno o más mejoradores de la absorción pueden realizar solo las otras funciones (por ejemplo, la absorción), dentro del alcance de la invención. Es también posible tener una mezcla de varios compuestos algunos de los cuales proporcionan solubilidad mejorada, alguno de los cuales proporcione absorción mejorada y/o alguno de los cuales realice ambas. Sin pretender quedar ligado por teoría alguna, se cree que los mejoradores de la absorción pueden actuar por (1) aumentando el desorden de la región hidrófoba de la membrana exterior de las células del intestino, permitiendo el incremento del transporte transcelular; o (2) lixiviando proteínas de membranas dando como resultado el incremento del transporte transcelular; o (3) ampliando el radio de poro entre las células para aumentar el transporte paracelular.

Se cree que los agentes tensioactivos son útiles como mejoradores de la solubilidad y como mejoradores de la absorción, Por ejemplo, los detergentes son útiles (1) solubilizando todos los componentes activos rápidamente en el medio ambiente acuoso donde se liberan originalmente, (2) mejorando la lipofilia de los componentes de la invención especialmente el agente del péptido activo, ayudando a su paso en y a través de la mucosa del intestino, (3) mejorando la capacidad del agente del péptido activo normalmente polar para cruzar la barrera epitelial de la membrana del borde ciliado; y (4) incrementando el transporte transcelular o paracelular tal como se ha descrito anteriormente.

Cuando se usan los agentes tensioactivos como mejoradores de la absorción, se prefiere que estén en forma de polvos de flujo libre para facilitar el mezclado y la carga de las cápsulas durante el procedimiento de fabricación. Debido a las características inherentes de la calcitonina de salmón y otros péptidos (por ejemplo su punto isoeléctrico, peso molecular, composición de aminoácidos, etc), ciertos agentes activos superficiales interactúan mejor con ciertos péptidos. Por otra parte, algunos pueden interactuar de forma no deseable con las porciones cargadas de la calcitonina de salmón y evitar su absorción, dando así como resultado de manera no deseable una disminución en la biodisponibilidad. Se prefiere, cuando se intenta aumentar la biodisponibilidad de la calcitonina de salmón u otros péptidos, que cualquier agente tensioactivo usado como mejorador de la absorción se seleccione entre el grupo constituido por (i) agentes tensioactivos aniónicos que sean derivados del colesterol (ácidos biliares), (ii) agentes tensioactivos catiónicos (por ejemplo, acil carnitinas, fosfolípidos y similares), (iii) agentes activos superficiales no iónicos (especialmente aquellos que tienen regiones de hidrocarburos lineales) junto con neutralizadores de cargas negativas. Los neutralizadores de cargas negativas incluyen, pero no se limitan a, acil carnitinas, cloruro de cetil piridinio, y similares. Se prefiere también que el mejorador de la absorción sea soluble a pH ácido, de manera particular en el intervalo de 3,0 a 5,0.

Una combinación especialmente preferida que ha trabajado bien con calcitonina de salmón mezcla agentes tensioactivos catiónicos con agentes tensioactivos aniónicos que sean derivados del colesterol, que sean ambos solubles a pH ácido.

Una combinación particularmente preferida es un ácido biliar soluble en ácido junto con un agente tensioactivo catiónico. Una acil carnitina y un éster de sacarosa es una buena combinación. Cuando se usa sólo un mejorador de la absorción concreto, se prefiere que éste sea un agente tensioactivo catiónico. Las acil carnitinas (por ejemplo, lauroil carnitina), fosfolípidos y ácidos biliares, son de manera particular buenos mejoradores de la absorción, especialmente la acil carnitina. Se usan también los tensioactivos aniónicos que sean derivados del colesterol en algunas formas de realización. Es el propósito de estas preferencias evitar interacciones con el agente de péptido que interfiera con la absorción del agente de péptido en la sangre.

Para reducir la probabilidad de dichos efectos secundarios, los detergentes preferidos, cuando se usan como mejoradores de la absorción de la invención, son bien biodegradables o reabsorbibles (por ejemplo, compuestos biológicamente reciclables tales como ácidos biliares, fosfolípidos, y/o acil carnitinas), preferiblemente biodegradables. Se cree que las acil carnitinas son particularmente útiles para mejorar el transporte paracelular. Cuando se usa un ácido biliar (u otro detergente aniónico desprovisto de hidrocarburos lineales) en combinación con un detergente catiónico, la calcitonina de salmón se transporta mejor tanto hacia como a través de la pared del intestino.

Los mejoradores de la absorción preferidos incluyen (a) salicilatos tales como salicilato de sodio, 3-metoxisalicilato, 5-metoxisalicilato y homovanilato, (b) ácidos biliares tales como taurocólico, taurodeoxicólico, deoxicólico, cólico, glicólico, litocolato, quenodeoxicólico, ursodeoxicólico, ursocólico, dehidrocólico, fusídico, etc.; (c) tensioactivos no iónicos tales como éteres polioxietilenados (por ejemplo, Brij 36T, Brij 52, Brij 56, Brij 76, Brij 96, Texaphor A6, Texaphor A14, Texaphor A60, etc.), p-t.octil fenol polioxietilenos (Triton x-45, Triton X-100, Triton X-114, Triton X-305, etc.) nonilfenoxipolioxietilenos (por ejemplo la serie de Igepal CO), ésteres de sorbitán polioxietilenado (por ejemplo, Tween-20, Tween-80, etc.); (d) tensioactivos aniónicos tales como lisolecitina y lisofosfatidiletanolamina, (f) acil carnitinas, acil colinas y acil aminoácidos tales como lauroil carnitina, miristoil carnitina, palmitoil carnitina, lauroil colina, miristoil colina, palmitoil colina, hexadecil lisina, N-acil fenilalanina, N-acil glicina, etc.; (g) fosfolípidos solubles en agua tales como diheptanoil fosfatidilcolina, dioctil fosfatidilcolina, etc.; (h) glicéridos de cadena media que sean mezclas de mono-, di- y triglicéridos que contengan ácidos grasos de longitud de cadena media (ácidos caprílico, cáprico y láurico); ácido etilén-diaminotetracético; (j) tensioactivos catiónicos tales como cloruro de cetil piridinio; (k) derivados de ácidos grasos de polietilén glicol tales como Labrasol, Labrafac, etc; y (l) alquil sacáridos tales como lauril maltósido, lauroil sacarosa, miristoil sacarosa, palmitoil sacarosa, etc.

En algunas formas de realización preferidas, y sin pretender quedar ligado por teoría alguna, se incluyen agentes de intercambio iónico catiónicos (por ejemplo, detergentes) para proporcionar una mejora de la solubilidad por otros mecanismos posibles. De manera particular, pueden evitar la unión de la calcitonina de salmón u otros agentes de péptido activo a la mucosa. Los agentes de intercambio iónico catiónicos preferidos incluyen cloruro de protamina o cualquier otro policatión.

Otros ingredientes opcionales

Se prefiere que una barrera soluble en agua separe el agente disminuidor del pH del vehículo protector resistente al ácido. En algunos de los ejemplo que siguen, se usa una cápsula farmacéutica convencional con el objetivo de proporcionar esta barrera. En la técnica se conocen muchas barreras solubles en agua e incluyen, pero no se limitan a, hidroxipropil metil celulosa y gelatinas farmacéuticas convencionales.

En algunas formas de realización preferidas, se incluyen otros péptidos (tales como albúmina, caseína, proteína de soja, otras proteínas animales o vegetales y similares) para reducir la absorción no específica (por ejemplo, la unión del péptido a la barrera mucosa intestinal), disminuyendo por tanto la concentración necesaria del costoso agente de péptido activo. Cuando se añade, el péptido está de manera preferible entre 1,0 y 10,0 por ciento en peso relativo al peso de la composición farmacéutica total (excluyendo el vehículo protector). De manera preferible, este segundo péptido no es fisiológicamente activo y es de manera preferible un péptido comestible tal como un péptido de semilla de soja o similar. Sin pretender quedar ligado por teoría alguna, este segundo péptido puede también incrementar la biodisponibilidad, actuando como un secuestrante de proteasas que compite deseablemente con el agente de péptido activo por la interacción con la proteasa El segundo péptido puede ayudar también al paso del compuesto activo a través del hígado.

Todas las composiciones farmacéuticas de la invención pueden incluir también de manera opcional diluyentes farmacéuticos comunes, glicantes, lubricantes, cápsulas de gelatina, conservantes, colorantes y similares en su tamaños y cantidades conocidos usuales.

El vehículo protector

Es adecuado cualquier vehículo que proteja a la calcitonina de salmón de las proteasas del estómago y se disuelva a continuación de manera que los otros ingredientes de la invención se puedan liberar en el intestino. Muchos de tales recubrimientos entéricos se conocen en la técnica, y son útiles de acuerdo con la invención. Los ejemplos incluyen acetato ftalato de celulosa, succinato de hidroxipropil metiletil celulosa, ftalato de hidroxipropil metil celulosa, carboxil metietil celulosa y copolímero de metil metacrilato y ácido metacrílico. En algunas formas de realización se incluyen el péptido activo, los mejoradores de la absorción tales como los mejoradores de la solubilidad y/o absorción, y compuesto(s) disminuidor(es) del pH en un jarabe protector lo suficientemente viscoso para permitir el paso protegido de los componentes de la invención a través del estómago.

Se pueden aplicar recubrimientos entéricos adecuados para proteger el agente del péptido de las proteasas del estómago, por ejemplo, en cápsulas después de que los componentes restantes de la invención se hayan cargado en el interior de la cápsula. En otras formas de realización, el recubrimiento entérico se recubre en la cara externa de un comprimido o se recubre en la superficie externa de partículas de componentes activos que se prensan a continuación en forma de comprimido, o se cargan en el interior de una cápsula que se recubre de manera preferible con un recubrimiento entérico.

Es muy deseable que todos los componentes de la invención se liberen desde el vehículo, y se solubilicen el medio ambiente intestinal tan simultáneamente como sea posible. Se prefiere que el vehículo libere los componentes activos en el intestino delgado, donde es menos probable que los mejoradores de la absorción que incrementan el transporte transcelular o paracelular causen efectos secundarios indeseables, que si los mismos mejoradores de la absorción se liberan posteriormente en el cólon. Se enfatiza, sin embargo, que se cree que la presente infección es efectiva en el cólon así como en el intestino delgado. Se conocen en la técnica numerosos vehículos, de manera adicional a los descritos anteriormente,. Es deseable (especialmente para optimizar cómo se liberan e forma simultánea los componentes de la invención) mantener baja la cantidad de recubrimiento entérico. De manera preferible, se añade no más del 30% en peso de recubrimiento entérico especto del peso del resto de la composición farmacéutica (siendo el "resto" de la composición farmacéutica excluyente del propio recubrimiento entérico). De manera más preferible, se añade menos del 20%, especialmente entre el 12% y 20% respecto del peso de la composición sin recubrir. El recubrimiento entérico deberá ser de manera preferible suficiente para evitar la rotura de la composición farmacéutica de la invención en HCl 0,1 N durante al menos dos horas, siendo capaz a continuación de permitir la liberación completa de todos los contenidos de la composición farmacéutica dentro de los treinta minutos siguientes a que el pH haya aumentado a 6,3 en un baño de disolución en el que dicha composición está girando a 100 revoluciones por minuto.

Otras preferencias

Se prefiere que la relación en peso de agente(s) disminuidor(es) del pH a mejorador(es) de la absorción esté entre 3:1 y 20:1, de manera preferible 4:1-12:1, y de manera más preferible 5:1-10.1. El peso total de todos los agentes disminuidores del pH y el peso total de todos los mejoradores de la absorción en una composición farmacéutica dada se incluye en las relaciones preferidas anteriores. Por ejemplo, si una composición farmacéutica incluye dos agentes disminuidores del pH y tres mejoradores de la absorción, las relaciones anteriores se calcularán sobre el peso combinado total de los tres mejoradores de la absorción.

Se prefiere que el agente disminuidor del pH, el agente de péptido activo y el mejorador de la absorción (si son compuestos únicos o una variedad de compuestos en cada categoría) se dispersen de manera uniforme en la composición farmacéutica En una forma de realización, la composición farmacéutica comprende gránulos que incluyen un ligante farmacéutico que tiene el agente de péptido activo, el agente disminuidor del pH y el mejorador de la absorción dispersos de manera uniforme en el interior del mencionado ligante. Los gránulos preferidos pueden también estar constituidos de un núcleo de ácido, rodeado por una capa uniforme de ácido orgánico, una capa de mejorador y una capa de péptido que está rodeada por otra capa de ácido orgánico. Los gránulos se pueden preparar a partir de una mezcla acuosa constituida por ligantes farmacéuticos tales como polivinil pirrolidona o hidroxipropil metil celulosa, junto con los agentes disminuidores del pH, los mejoradores de la absorción y los agentes del péptido activo de la invención.

Procedimiento de fabricación

Una composición farmacéutica preferida de la invención incluye una cápsula de gelatina tamaño OO rellena con 0,25 mg de calcitonina de salmón, 400 mg de ácido cítrico granular (disponible por ejemplo de Archer Daniels Midland Corp.), 50 mg de ácido taurodeoxicólico (disponible por ejemplo de SIGMA), y 50 mg de lauroil carnitina (SIGMA).

Todos los ingredientes son de manera preferible para inserción eventual en la cápsula de gelatina, y son de manera preferible polvos que se pueden añadir a una mezcladora en cualquier orden. Posteriormente, la mezcladora se pone en marcha durante aproximadamente cinco minutos hasta que los polvos están completamente mezclados entre sí. A continuación, los polvos mezclados se cargan en el extremo ancho de las cápsulas de gelatina. A continuación se añade el otro extremo de la cápsula, y la cápsula se cierra de golpe. Se pueden añadir 500 o más de dichas cápsulas a un dispositivo para recubrimiento (por ejemplo, Vector LDCS 20/30 Laboratory Development Coating System (disponible de Vector Corp., Marion, Iowa)).

Una solución de recubrimiento entérico se fabrica como sigue. Se pesan 500 gramos de EUDRAGIT L30 D-55 (un copolímero de ácido metacrílico con éster metílico de ácido metacíclico, un recubrimiento entérico disponible de RÖHM Tech Inc., Maidan, Mass.). Se añaden 411 gramos de agua destilada, 15 gramos de trietil citrato y 38 gramos de talco. Esta cantidad de recubrimiento será suficiente para recubrir aproximadamente 500 cápsulas de tamaño OO.

Las cápsulas se pesan y colocan en el tambor de la máquina de recubrir. La máquina se enciende para hacer girar el tambor (que contiene ahora las cápsulas) a 24-28 rpm. La temperatura del pulverizador de entrada es de manera preferible de aproximadamente 45ºC. Las temperaturas de salida son de manera preferible de aproximadamente 30ºC. La temperatura de las cápsulas sin recubrir es de manera preferible de aproximadamente 25ºC. El caudal de aire es de aproximadamente 38 pies cúbicos por minuto (1,08 m^{3} por minuto).

A continuación se inserta un tubo desde la máquina en la solución de recubrimiento preparada tal como se ha descrito anteriormente. La bomba se enciende para alimentar la solución al dispositivo de recubrimiento El recubrimiento se lleva a cabo a continuación de manera automática. La maquina se puede parar en cualquier momento para pesar las cápsulas para determinar si la cantidad de recubrimiento es suficiente. Usualmente se deja que el recubrimiento transcurra durante 60 minutos. La bomba se apaga a continuación durante cinco minutos mientras la máquina sigue n marcha para ayudar a secar las cápsulas recubiertas. La máquina se puede apagar a continuación. A continuación, el recubrimiento de la cápsula está completo, aunque se recomienda que las cápsulas se sequen al aire durante aproximadamente dos días.

Debido a la biodisponibilidad mejorada proporcionada por la presente invención, se puede mantener relativamente baja la concentración de la costosa calcitonina de salmón en la preparación farmacéutica de la invención. Se muestran ejemplos de formulación específica en los ejemplos infra.

Tratamiento de los pacientes

Cuando se escoge calcitonina de salmón como ingrediente activo para el tratamiento de la osteoporosis, se recomienda la administración periódica. La calcitonina de salmón se metaboliza rápidamente, con una vida media de solo 20-40 minutos a continuación de la administración subcutánea en el hombre. Sin embargo, su efecto beneficioso sobre los osteoclastos es mucho más duradero y puede durar durante más de 24 horas a pesar de la rápida disminución en los niveles sanguíneos. No presenta usualmente niveles de sangre detectables a más de dos horas después de la inyección de calcitonina de salmón a dosificaciones convencionales. De acuerdo con esto, se prefiere la administración periódica de una dosis aproximadamente 5 días por semana. La administración subcutánea de calcitonina de salmón (100 unidades Internacionales) ha dado frecuentemente como resultado una concentración punta en el suero de aproximadamente 250 picogramos por mililitro. La calcitonina de salmón administrada nasalmente (200 unidades Internacionales) ha probado ser efectiva contra la osteoporosis a niveles punta tan bajos como 10 picogramos por mililitro. Algunos pacientes informan de alguna perturbación gastrointestinal a niveles punta altos (por ejemplo a o por encima de 200 picogramos por mililitro). De acuerdo con esto, se prefiere que la punta de calcitonina de salmón en suero esté entre 10 y 150 picogramos por mililitro, de manera más preferible entre 10 y 50 picogramos por mililitro. Los niveles en suero se pueden medir mediante técnicas de radioinmunoensayo conocidas en la técnica. El médico a cargo del paciente puede monitorizar la respuesta del paciente, los niveles en sangre de calcitonina de salmón, o los marcadores derivados de la enfermedad ósea (tales como la piridinolina o deoxipiridinolina urinaria), especialmente durante la fase inicial de tratamiento (1-6 meses). Puede alterar ligeramente la dosificación para tener en cuenta el metabolismo y respuesta individual del paciente.

La biodisponibilidad que se puede alcanzar de acuerdo con la presente invención permite la administración oral de calcitonina de salmón en sangre a los niveles de concentración preferidos identificados anteriormente usando sólo 100-1000 microgramos de calcitonina de salmón por cápsula, de manera preferible 100-400 microgramos, especialmente entre 100 y 200 microgramos.

Se prefiere usar una única cápsula en cada administración, debido a que una única cápsula proporciona mejor liberación simultánea del polipéptido, el agente disminuidor del pH y los mejoradores de la absorción. Esto es muy deseable debido a que el ácido es más capaz de reducir un ataque proteolítico indeseable sobre el polipéptido cuando el ácido se libera en estrecha proximidad de tiempo a la liberación del polipéptido. La liberación casi simultánea se consigue mejor administrando todos los componentes de la invención en forma de una píldora o cápsula única. Sin embargo, la invención incluye también, por ejemplo, dividir la cantidad requerida de ácido y mejoradores entre dos o más cápsulas que se pueden administrar conjuntamente ya que conjuntamente proporcionan la cantidad necesaria de todos los ingredientes. La "composición farmacéutica" tal como se usa en el presente documento incluye una dosificación completa apropiada para una administración particular a un paciente humano, sin tener en cuenta cómo se subdivide, puesto que es para una administración simultánea sustancialmente.

Se muestran a continuación unas series de tablas que muestran el efecto causado sobre la biodisponibilidad, variando ciertos parámetros.

Excepto con relación a los estudios con seres humanos que se informan aquí, las cantidades de ingredientes se pueden variar de aquellos reivindicados en el presente documento para tener en cuenta las diferencias entre los seres humanos y los animales usados en los modelos animales.

TABLA 1 Efecto del pH del tampón sobre la absorción de la calcitonina de salmón en el duodeno de la rata

1

Procedimiento

Se anestesiaron hembras de ratas Wistar (250-275 g) (n = 3 para cada formulación) con ketamina y xilazina antes de la inserción de una cánula en la arteria carótida. La cánula se ajustó a una válvula de tres vías a través de la cual se muestreó la sangre y se reemplazó con suero salino fisiológico. Se hizo una incisión en la línea media de la cavidad abdominal y se inyectaron 0,5 ml de la formulación directamente en el duodeno expuesto. Se ajustó el pH de la formulación mezclando cantidades variables de concentraciones equimolares de ácido cítrico y citrato de sodio. La sangre (0,5 ml) se recogió antes y a 5, 15, 30, 60 y 120 minutos después de la administración de la formulación. Las muestras de sangre se centrifugaron durante 10 minutos a 2660 g y el plasma resultante sobrenadante se almacenó a -20ºC. La concentración de calcitonina en plasma se determinó mediante un radioinmunoensayo competitivo. La biodisponibilidad absoluta (es decir, relativa a una dosis intravenosa de calcitonina) se calculó a partir del área bajo la curva obtenida de las gráficas de la concentración de plasma de calcitonina en función del tiempo.

Resultados y discusión

Cuando el pH del tampón se redujo desde 5 (formulación I) a 4 (formulación II), la biodisponibilidad absoluta aumentó 5 veces entre 0,02% y 0,1%. Cuando el pH se redujo a 3 (formulación III), la biodisponibilidad absoluta aumentó, 4 veces más de manera adicional. Existió un incremento muy pequeño en la biodisponibilidad de la calcitonina cuando el pH se redujo a 2. La biodisponibilidad total de la calcitonina aumentó 32 veces cuando el pH del tampón se redujo desde 5 a 3.

TABLA 2 Efecto de la concentración de ácido cítrico sobre la biodisponibilidad de la calcitonina de salmón en el duodeno de rata

3

Procedimiento

Se administraron las formulaciones constituidas por una cantidad constante de ácido taurodeoxicólico y 2 cantidades diferentes de ácido cítrico en un volumen total de 0,5 ml en los duodenos de las ratas anestesiadas tal como se ha descrito en la leyenda de la Tabla 1. Se incluyó manitol en las formulaciones como un marcador para medir el transporte paracelular. Las muestras de sangre se tomaron a varios tiempos y se analizaron para la calcitonina como se ha descrito anteriormente.

Resultados y discusión

La biodisponibilidad de la calcitonina de salmón administrada en presencia de 9,6 mg de ácido cítrico (I) fue 0,25%, mientras que en presencia de 48 mg de ácido cítrico (II) la biodisponibilidad fue 2,43%. En presencia de una cantidad fijada de ácido taurodeoxicólico la biodisponibilidad de la calcitonina de salmón aumentó casi 10 veces cuando la cantidad de ácido cítrico en la formulación se aumentó sólo 5 veces.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 3 Efecto de los mejoradores en presencia de ácido cítrico sobre la absorción de la calcitonina de salmón en el duodeno de rata

4

Procedimiento

Se administraron las formulaciones constituidas por ácido cítrico, calcitonina y diversas clases de mejoradores en un volumen total de 0,5 ml en los duodenos de las ratas anestesiadas, como se ha descrito en la leyenda de la Tabla 1. Se incluyó el manitol en la formulación V como un marcador para medir el transporte paracelular. Las muestras de sangre se tomaron a varios tiempos y se analizaron para la calcitonina como se ha descrito anteriormente.

Resultados y discusión

En ausencia de un mejorador, la biodisponibilidad absoluta de la calcitonina fue de 0,69%. La inclusión de un fosfolípido soluble en agua (formulación VII) aumento la biodisponibilidad 4,3 veces a 2,97%. El mejorador más efectivo fue el tipo éster de azúcar (formulación V) en el que la biodisponibilidad de la calcitonina fue del 5,83%. El uso de una mezcla de ácido biliar y un detergente catiónico (formulación III), un detergente no iónico (formulación IV) y una acil carnitina (formulación VI) dio como resultado biodisponibilidades intermedias oscilando entre 3,03% y 4,53%. Las diferencias en las biodisponibilidades de la calcitonina en presencia de varios tipos de mejoradores es menor en comparación a cuando sólo está presente el ácido cítrico, sin mejorador, en la formulación.

TABLA 4 Efecto de la lauroilcarnitina en presencia de varios aditivos sobre la absorción de la calcitonina de salmón en el duodeno de rata

5

Procedimiento

Se administraron formulaciones constituidas por lauroil carnitina, calcitonina y otros varios componentes en un volumen total de 0,5 ml en los duodenos de ratas anestesiadas, tal como se ha descrito en la leyenda de la Tabla 1. Las muestras de sangre se tomaron a varios tiempos y se analizaron para la calcitonina tal como se ha descrito anteriormente.

Resultados y discusión

En ausencia de ácido cítrico o cualquier mejorador (formulación I), la biodisponibilidad absoluta de la calcitonina fue del 0,096%. En presencia de 5 mg de cloruro de lauroilcarnitina (formulación II), la biodisponibilidad aumentó 1,8 veces hasta 0,17%. Cuando se incluyó ácido cítrico con lauroilcarnitina (formulación III), la biodisponibilidad aumento 27 veces más hasta un 4,53%. Una reducción de 5 veces en la cantidad de lauroil carnitina, pero no de ácido cítrico (formulación IV), no redujo significativamente la biodisponibilidad de la calcitonina de salmón. La inclusión de 5 mg de diheptanilfosfatidilcolina en la formulación III para producir la formulación V aumentó la biodisponibilidad ligeramente (1,4 veces). La sustitución de 25 mg de albúmina de suero bovino por ácido cítrico (formulación VI) redujo la biodisponibilidad desde 4,53% (formulación III) a 0,42%. Estos resultados tomados en su conjunto, muestran el efecto sinérgico entre una sustancia disminuidora del pH similar al ácido cítrico y un mejorador similar a la lauroilcarnitina.

TABLA 5 Efecto de la formulación sobre la absorción de la calcitonina de salmón en el duodeno del perro

6

Procedimiento

Se implantaron quirúrgicamente en el duodeno, íleon y cólon de perros macho de sabueso puertos de acceso vascular modificados. Los cuerpos del septum/contenedor de los puertos se implantaron bajo la piel, y se usaron como emplazamientos para administración de las formulaciones de calcitonina. Antes y después de la administración de las formulaciones de calcitonina a los perros conscientes, los puertos se lavaron con 2 ml de la formulación sin calcitonina. La sangre (2 ml) se recogió a través de tubos de angiocatéter en la vena de la pata a t = 30, 15 y 0 antes de la administración de calcitonina y a 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60 y cada 15 minutos después durante 2 horas. Las muestras de sangre se centrifugaron durante 10 minutos a 2600 g y el plasma sobrenadante resultante se almacenó a -20ºC. La concentración de calcitonina en plasma se determinó mediante un radioinmunoensayo competitivo. La biodisponibilidad absoluta (es decir, relativa a una dosis intravenosa de calcitonina) se calculó a partir del área bajo la curva obtenida de las gráficas de la concentración de plasma en función del tiempo.

Resultados y discusión

La biodisponibilidad absoluta de la calcitonina administrada en agua (I) fue del 0,015%. En presencia de 192 mg de ácido cítrico (II) la biodisponibilidad de la calcitonina aumentó 25 veces. La inclusión de 20 mg de ácido taurodeoxicólico en la formulación (III) produjo un incremento adicional de 2,2 veces en la biodisponibilidad absoluta hasta 0,81%. La combinación de un compuesto disminuidor del pH, ácido cítrico, y un mejorador, ácido taurodeoxicólico, dio como resultado un incremento global de 54 veces en la biodisponibilidad absoluta de la calcitonina de salmón.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 6 Efecto de la forma de dosificación y la formulación sobre la biodisponibilidad absoluta de la calcitonina de salmón administrada por vía oral a perros

7

Procedimientos

Las cápsulas de almidón y gelatina se rellenaron con las formulaciones indicadas y se recubrieron durante 60 min tanto con hidroxipropilmetilcelulosa ftalato 50 (I, II, III) (ganancia de 1% en peso) como con Eudragit L 30 D-55 (IV) (ganancia del 10% en peso) en un recubridor de cesta. Se determinó la estabilidad de las cápsulas en HCl 0,1 N en un baño de disolución usando el "procedimiento de cesta". Se dio al menos a 2 perros cada una de las cápsulas indicadas por la boca, y se muestreó y analizó la sangre para la calcitonina de salmón como se ha descrito anteriormen-
te.

Resultados

La biodisponibilidad de 10 mg de calcitonina mezclados con 100 mg de ácido cítrico y 100 mg de ácido taurodeoxicólico y liberados en una cápsula de almidón (I) fue del 0,07%. Cuando se dio la misma formulación a los perros en una cápsula de gelatina (II), la biodisponibilidad de la calcitonina de salmón aumentó al 0,26%. Un aumento de seis veces en la cantidad de ácido cítrico y una reducción del 50% en la cantidad de calcitonina (III) dieron como resultado un aumento de cerca de 3 veces en la biodisponibilidad de la calcitonina.

Cuando se cambió el recubrimiento entérico de hidroxipropilmetilcelulosa ftalato 50 a Eudragit L 30 D-55, un polímero de metacrilato, y la formulación se mantuvo igual (IV), la biodisponibilidad de la calcitonina de salmón aumentó del 0,62% al 1,48%. Cambiar el recubrimiento entérico de hidroxipropilmetilcelulosa ftalato 50 a Eudragit L 30 D-55 dio como resultado un aumento de la estabilidad de la cápsula en HCl 0,1 N. Este incremento en la estabilidad dio como resultado una punta en los niveles de calcitonina, apareciendo en el último punto temporal en la sangre del perro. La inestabilidad de las cápsulas I, II, y III en HCl sugiere que estas cápsulas se abrirían potencialmente en los estómagos de los perros, mientras que la estabilidad mejorada de la cápsula IV sugiere que esta sería completamente estable en los estómagos de los perros y se abriría en los intestinos de los perros. Esto indica que se prefiere una cierta cantidad mínima de recubrimiento entérico. Al mismo tiempo, un recubrimiento demasiado grande puede retrasar la liberación de la calcitonina, liberándose detrás de otros componentes importantes (por ejemplo ácido y detergente). De manera preferible, un recubrimiento entérico añade el 5 a 15% al peso de la composición farmacéutica sin recubrir.

TABLA 7 Farmacocinética de la calcitonina oral (10,5 mg) en seres humanos

8

Procedimientos

Las cápsulas de almidón se rellenaron con 138 mg de ácido cítrico, 105 mg de ácido taurodeoxicólico y 10,5 mg de calcitonina de salmón. Las cápsulas se recubrieron durante 20 min con hidroxipropilmetilcelulosa ftalato 50 en un recubridor de cesta y se almacenaron a 4ºC. Se proporcionó a los sujetos en ayunas 1 cápsula seguida por un vaso de zumo de naranja en la mañana del estudio. Se tomaron muestras de sangre 15 minutos antes de tomar las cápsulas y a los tiempos indicados después de tomar la cápsula de calcitonina. Se determinó la concentración de calcitonina en sangre mediante radioinmunoensayo competitivo. La biodisponibilidad absoluta (es decir, relativa a la dosis intravenosa de calcitonina) se calculó a partir del área bajo la curva obtenida de las gráficas de la concentración de plasma de calcitonina en función del tiempo.

Resultados

Cuando se administraron en solitario 10 miligramos de calcitonina de salmón a seres humanos, dio como resultado niveles no detectables de calcitonina de salmón en el suero. Sin embargo, cuando se proporcionó a los individuos la composición de la invención tal como se describe en la Tabla 7, se detectaron niveles máximos de calcitonina en la sangre entre 30 y 60 minutos después de que los individuos tomaran la cápsula. La concentración máxima de calcitonina en la sangre estuvo comprendida entre 70 y 497 pg/ml. La concentración media punta de calcitonina para los 5 individuos fue de 173 pg/ml a t = 30 min. la biodisponibilidad absoluta osciló entre 0,02 y 0,06 con una población media de 0,03%.

TABLA 8 Efecto del ácido cítrico y la lauroilcarnitina sobre la biodisponibilidad de la vasopresina, calcitonina e insulina en ratas

9

Procedimiento

Se administraron las formulaciones constituidas bien por [arg^{8}]-vasopresina, calcitonina de salmón recombinante o insulina humana y los aditivos indicados en un volumen total de 0,5 ml en los duodenos de las ratas anestesiadas tal como se ha descrito en la leyenda de la Tabla 1. Se tomaron muestras de sangre a varios tiempos, y se analizaron para el péptido indicado tal como se ha descrito anteriormente.

Resultados y discusión

En ausencia de cualquier aditivo, la biodisponibilidad de la [arg^{8}]-vasopresina administrada de forma intraduodenal fue del 0,38%. Cuando se añadieron ácido cítrico y lauroilcarnitina a la formulación, la biodisponibilidad de la vasopresina aumentó a 8,1%. La biodisponibilidad de la calcitonina en ausencia de un ácido y un mejorador fue del 0,096%, que fue inferior a la de la vasopresina sin formular. Sin embargo, cuando se incluyeron ácido cítrico y lauroilcarnitina en la formulación, la biodisponibilidad absoluta aumentó 50 veces hasta 4,53%. En ausencia de ácido cítrico, la insulina humana ni siquiera podía disolverse en agua. En presencia de ácido cítrico, todo el péptido se disolvió fácilmente, y la biodisponibilidad absoluta de la insulina humana administrada de forma intraduodenal fue del 0,07%. La biodisponibilidad absoluta de la insulina aumentó 10 veces cuando se incluyó lauroilcarnitina en la formulación. Estos resultados indican que la biodisponibilidad de los péptidos sin formular fue al menos del 0,38% y que la inclusión de un ácido orgánico, tal como el ácido cítrico, y un mejorador, tal como la lauroilcarnitina, aumentó la biodisponibilidad del péptido a como máximo 8,1%.

TABLA 9 Farmacocinética de la calcitonina oral (0,82 mg) en seres humanos

10

Procedimientos

Se rellenaron las cápsulas de gelatina con 473 mg de ácido cítrico, 75 mg de ácido taurodeoxicólico, 75 mg de lauroilcarnitina y 0,82 mg de calcitonina de salmón. Se recubrieron las cápsulas durante 60 min con Eudragit L 30-D55 en un recubridor de cesta y se almacenaron a 4ºC. Se proporcionó una cápsula a los sujetos en ayunas, seguida por un vaso de zumo de naranja en la mañana del estudio. Se tomaron muestras de sangre 15 minutos antes de tomar las cápsulas, y en los tiempos indicados después de tomar la cápsula de calcitonina. Se determinó la concentración de calcitonina en sangre mediante radioinmunoensayo competitivo. Se calculó la biodisponibilidad absoluta (es decir, relativa a una dosis intravenosa de calcitonina) a partir del área bajo la curva obtenida a partir de las gráficas de la concentración de calcitonina en plasma en función del tiempo.

Resultados

Se detectaron niveles máximos de calcitonina en sangre entre 50 y 180 minutos después de que los individuos tomaran la cápsula. La concentración máxima de calcitonina en sangre estuvo entre 211 y 623 pg/ml. La concentración punta media (C_{máx}) de calcitonina para los 5 individuos fue de 411 pg/ml, que es aproximadamente 5-10 veces mayor que el nivel en plasma terapéutico objetivo. La biodisponibilidad absoluta osciló entre 0,14 y 0,68% con una población media de 0,38%. Estos resultados indicaron que incluso cuando el contenido de péptido se redujo aproximadamente 10 veces, la biodisponibilidad de la sCT comparada con la obtenida en la Tabla 7 aumentó 10 veces al sustituir las cápsulas de gelatina por cápsulas de almidón, y usando Eudragit L 30-D55 en vez de hidroximetilcelulosa ftalato como recubrimiento entérico, aumentando la cantidad de ácido cítrico e incluyendo lauroil carnitina en la formulación.

Claims

1. Una composición farmacéutica para administración oral de un agente de péptido fisiológicamente activo que comprende:

(A) una cantidad terapéuticamente efectiva de dicho péptido activo;

(B) al menos un agente disminuidor del pH farmacéuticamente aceptable;

(C) al menos un mejorador de la absorción efectivo para promover la biodisponibilidad de dicho agente activo; y

(D) un vehículo protector resistente al ácido, efectivo para transportar la mencionada composición farmacéutica a través del estómago de un paciente a la vez que evita el contacto entre dicho agente de péptido activo y las proteasas del estómago;

en la que dicho agente disminuidor del pH está presente en la mencionada composición farmacéutica en una cantidad que, si la mencionada composición se añadiera a 10 mililitros de solución acuosa de bicarbonato de sodio 0,1 M, sería suficiente para bajar el pH de dicha solución a no más de 5,5.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el mencionado compuesto disminuidor del pH está presente en una cantidad que, si dicha composición se añadiera a diez mililitros de solución acuosa de bicarbonato de sodio 0,1 M, sería suficiente para bajar el pH de dicha solución a no más de 3,5.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 ó 2, en la que el mencionado vehículo protector está presente en un peso que no sea superior al 30% del peso del resto de dicha composición farmacéutica.

4. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la que el mencionado mejorador de la absorción es un agente tensioactivo, de manera preferible uno que sea absorbible o biodegradable, y especialmente uno seleccionado entre el grupo constituido por acil carnitinas, fosfolípidos y ácidos biliares.

5. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores incluyendo de manera adicional un éster de sacarosa.

6. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la mencionada composición farmacéutica incluye al menos dos mejoradores de la absorción, uno de los cuales es un agente tensioactivo catiónico, y otro del cual es un agente tensioactivo aniónico que es un derivado del colesterol.

7. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende de manera adicional una cantidad de un segundo péptido, efectivo para mejorar la biodisponibilidad de dicho agente de péptido activo.

8. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende de manera adicional una barrera soluble en agua que separa dicho agente disminuidor del pH de dicho vehículo protector.

9. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la mencionada composición está en una forma de dosificación sólida en la que una relación en peso de dicho agente disminuidor del pH a dicho mejorador de la absorción está comprendida entre 3:1 a 20:1.

10. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que dicho agente disminuidor del pH está presente en una cantidad no menor de 300 miligramos.

11. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que dicho agente de péptido es vasopresina.

12. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que dicho agente de péptido es calcitonina de salmón.

13. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que dicho agente de péptido es insulina.

14. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que la mencionada composición es para la administración oral de calcitonina de salmón y comprende:

(A) una cantidad terapéuticamente efectiva de dicha calcitonina de salmón;

(B) al menos un agente disminuidor del pH farmacéuticamente efectivo;

(C) al menos un mejorador de la absorción efectivo para promover la biodisponibilidad de dicha calcitonina de salmón; y

(D) un recubrimiento entérico;

en la que el mencionado agente disminuidor del pH está presente en dicha composición farmacéutica en una cantidad que, si se añadiera a diez mililitros de una solución acuosa de bicarbonato de sodio 0,1 M, sería suficiente para bajar el pH de dicha solución a no más de 5,5.

15. La composición farmacéutica de la reivindicación 14, en la que la relación en peso de dicho agente disminuidor del pH a dicha calcitonina de salmón es al menos de 200:1.

16. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para la administración oral de calcitonina de salmón, que comprende:

(A) una cantidad terapéuticamente efectiva de dicha calcitonina de salmón

(B) al menos un agente disminuidor del pH farmacéuticamente aceptable que tenga un pKa no mayor de 4,2 y una solubilidad en agua no menor de 30 gramos por 100 mililitros de agua a temperatura ambiente;

(C) al menos un mejorador de la absorción efectivo para promover la biodisponibilidad de dicha calcitonina de salmón;

(D) un recubrimiento entérico que esté presente a un peso comprendido entre el 10% y el 20% del peso del resto de dicha composición farmacéutica; y

(E) una barrera soluble en agua que separa dicho agente disminuidor del pH de dicho recubrimiento entérico

en la que dicho agente disminuidor del pH está presente en la mencionada composición farmacéutica en una cantidad que, si dicha composición farmacéutica se añadiera a 10 mililitros de una solución acuosa de bicarbonato de sodio 0,1 M, sería suficiente para bajar el pH de dicha solución a no más de 5,5; y

en la que la mencionada composición farmacéutica comprende gránulos que incluyen un ligante farmacéutico que tenga dicha calcitonina de salmón, dicho agente disminuidor del pH y dicho mejorador de la absorción uniformemente dispersados en el anterior.

17. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para uso como medicamento.

18. Una composición de acuerdo con la reivindicación 17, para uso en el tratamiento de pacientes que sufren de transtornos que responden de manera favorable al aumento de los niveles de un compuesto que contiene el péptido.

19. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, 12, 14, 15, 16, para uso en el tratamiento de un transtorno del calcio o enfermedad ósea, seleccionado de manera particular entre el grupo constituido por osteoporosis, enfermedad de Paget e hipercalcemia maligna.

20. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19, para administración oral.

21. El uso de una composición definida en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de transtornos que respondan de manera favorable al aumento en los niveles de un compuesto que contiene el péptido.

22. El uso de una composición definida en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, 12, 14, 15, 16, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un transtorno del calcio o enfermedad ósea, seleccionado de manera preferible entre el grupo constituido por osteoporosis, enfermedad de Paget e hipercalcemia maligna.

23. El uso de acuerdo con la reivindicación 21 ó 22, en el que el medicamento es para administración oral.