ES2235206T3

ES2235206T3 - Utilizacion de lipidos complejos como aditivos estabilizantes de preparados farmaceuticos de mezclas de enzimas digestivas.

Info

Publication number: ES2235206T3
Application number: ES97114330T
Authority: ES
Inventors: Manfred Galle
Original assignee: Solvay Pharmaceuticals GmbH
Current assignee: Abbott Products GmbH
Priority date: 1996-08-28
Filing date: 1997-08-20
Publication date: 2005-07-01
Anticipated expiration: 2017-08-20
Also published as: PL321825A1; JP4593697B2; TR199700872A2; EE9700249A; EP0826375B1; TR199700872A3; NO973940L; ATE284225T1; US5993806A; HK1005224A1; NO973940D0; NZ328616A; CN1199694C; BR9704554A; AU3530997A; AR008807A1; CZ218497A3; EP0826375A3; CN1174743A; DE59712108D1

Abstract

SE DESCRIBE LA UTILIZACION DE LIPIDOS COMPLEJOS, EN PARTICULAR LECITINA, COMO ESTABILIZANTES FRENTE A LA DISMINUCION DE ACTIVIDAD LIPOLITICA BAJO LA INFLUENCIA DE LA HUMEDAD EN PREPARADOS FARMACEUTICOS HIDROSOLUBLES DE MEZCLAS DE ENZIMAS DIGESTIVOS QUE CONTIENEN LIPASAS Y PROTEASAS, EN PARTICULAR MEZCLAS DE ENZIMAS DIGESTIVOS QUE CONTIENEN PANCREATINA, ADECUADOS PARA LA PREPARACION DE SOLUCIONES ACUOSAS PARA LA INTRODUCCION CONTINUADA EN EL TRACTO GASTROINTESTINAL MEDIANTE SONDA.

Description

Utilización de lípidos complejos como aditivos estabilizantes de preparados farmacéuticos de mezclas de enzimas digestivas.

El presente invento concierne a la utilización de lípidos complejos como aditivos que estabilizan contra una disminución de la actividad lipolítica bajo la influencia de la humedad a preparados farmacéuticos solubles en agua de mezclas de enzimas digestivas, que contienen mezclas de proteasas y lipasas, especialmente pancreatina, y que son apropiados para la preparación de soluciones acuosas destinadas a su introducción continua del tracto gastrointestinal mediante sondas. Además, el invento concierne a preparados farmacéuticos solubles en agua de mezclas de enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas, especialmente de mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, los cuales son estabilizados mediante lípidos complejos contra una disminución de la actividad lipolítica bajo la influencia de la humedad, y que son apropiados para la preparación de soluciones acuosas que se pueden introducir en el tracto gastrointestinal en el caso de animales mamíferos o seres humanos mediante sondas.

En el caso de animales mamíferos, especialmente seres humanos, puede aparecer una carencia de enzimas digestivas, provocada por ejemplo por una alteración enfermiza del páncreas como consecuencia de una pancreatitis crónica, una insuficiencia digestiva después de operaciones del estómago, y de enfermedades hepáticas o biliares. Ya es conocido que tales fenómenos de carencia se pueden tratar mediante la administración de mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, que no son propias del cuerpo, tales como p. ej. enzimas del páncreas, especialmente pancreatina, que eventualmente puede contener además adiciones de lipasas. Las enzimas del páncreas son administradas usualmente en forma de preparados sólidos por vía oral. Para que en el caso de la ingestión por vía oral, las mezclas de enzimas administradas no sean desnaturalizadas irreversiblemente de manera indeseada ya en el estómago por el ácido gástrico allí presente y las enzimas proteolíticas, tales como pepsina, es necesario proveer a las mezclas de enzimas de un revestimiento resistente a los jugos gástricos. Tal revestimiento hace posible el paso de las mezclas de enzimas intactas a través del estómago hasta su lugar de acción, es decir el duodeno, en donde por medio de las condiciones desde neutras hasta ligeramente alcalinas que allí predominan es degradada la capa protectora y son liberadas las enzimas. Al
igual que las enzimas del páncreas propias del cuerpo de un ser humano sano, las enzimas aportadas por vía oral pueden desarrollar allí sus efectos enzimáticos, especialmente actividades amilolíticas, lipolíticas así como proteolíticas.

Tales formulaciones sólidas de pancreatina en forma de microgránulos, que pueden ser revestidas con una película resistente a los jugos gástricos, se describen p. ej. en el documento de publicación de solicitud de patente alemana DE-OS 42 27 385.4.

Además, en la bibliografía se describe la utilización de fosfolípidos para la protección de enzimas frente a agentes oxidantes. Así, el documento JP 59 169 491 da a conocer la envoltura o el revestimiento de enzimas puras a considerar por separado en cada caso, por ejemplo de una proteasa, lipasa o amilasa, con un fosfolípido. En la mezcla de enzima/fosfolípido seca obtenida las enzimas están protegidas frente a la oxidación. En particular, como posible estrés de oxidación se indica el contacto de las enzimas con un peróxido.

Para pacientes con insuficiencia digestiva, especialmente pacientes que yacen en la cama con insuficiencia digestiva prolongadamente persistente, tal como por ejemplo insuficiencia crónica del páncreas, sería deseable la administración de las enzimas digestivas que no sean propias del cuerpo también durante un prolongado período de tiempo en forma líquida, por ejemplo por aplicación continua mediante una sonda, en lugar de formas de presentación sólidas.

Las formas de presentación líquidas de mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, especialmente las de pancreatina, no pudieron ser puestas a disposición hasta ahora, puesto que los preparados acuosos líquidos de tales mezclas de enzimas no son estables durante un período de tiempo prolongado. Se pone de manifiesto que especialmente la actividad de las lipasas contenidas en la mezcla disminuye rápidamente en presencia de agua, mediante el ataque proteolítico de las proteasas contenidas también en la mezcla, tales como tripsina o quimiotripsina. Así, dependiendo de las condiciones externas (temperatura, valor del pH) en preparados acuosos de pancreatina se puede llegar en el transcurso de un período brevísimo de tiempo a una amplia pérdida de la actividad de lipasas.

A fin de ser apropiadas para la introducción continua en el tracto gastrointestinal por aplicación mediante una sonda, las soluciones acuosas de mezclas de enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas, especialmente de mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, deben de ser estables durante un período de tiempo de varias horas, por ejemplo de 8 horas. Especialmente, en las soluciones no deben resultar, ni estar contenidas, partículas de ningún tipo, que obstruyan a la sonda. Un requisito esencial planteado a tales soluciones consiste en que debe de conservarse una actividad lo más alta y uniforme que sea posible de todas las enzimas digestivas allí contenidas, durante todo el período de tiempo de la administración. Además, para la aplicación continua por vía gastrointestinal de soluciones apropiadas, es necesario que éstas puedan ser puestas a disposición de un modo exento de crecimiento de los gérmenes, es decir conservadas por ejemplo contra el crecimiento de los gérmenes, preferiblemente en condiciones estériles.

Fue misión del invento, por lo tanto, poner a disposición preparados farmacéuticos solubles en agua de mezclas de enzimas digestivas, que contengan lipasas y proteasas, estabilizados contra la pérdida de actividad lipolítica bajo la influencia de la humedad, que permanezcan estables durante un período de tiempo prolongado en estado disuelto en un medio acuoso.

Es objeto del invento la utilización de lípidos complejos como aditivos estabilizadores contra una disminución de la actividad lipolítica bajo la influencia de la humedad, en preparados farmacéuticos solubles en agua de mezclas de enzimas digestivas que contengan lipasas y proteasas, especialmente mezclas de enzimas digestivas que contengan pancreatina, los cuales son apropiados para la preparación de soluciones acuosas a la introducción en régimen continuo dentro del tracto gastrointestinal mediante una sonda, eligiéndose los péptidos complejos del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas. Son objeto del invento, además, los preparados farmacéuticos solubles en agua, estabilizados de este modo, de mezclas de enzimas digestivas. Asimismo son objeto del invento estuches para la preparación de soluciones acuosas de mezclas de enzimas digestivas, que sean apropiadas para la aplicación continua mediante sondas.

Los lípidos complejos, que se adecuan conforme al invento como aditivos estabilizadores, son por regla general insolubles en acetona. Entre ellos se cuentan especialmente los fosfolípidos que contienen fósforo y exentos de hidratos de carbono así como los glicolípidos que contienen hidratos de carbono y no contienen fósforo, y sus mezclas. Convenientemente, se utilizan solamente fosfolípidos o mezclas que contengan fosfolípidos y glicolípidos.

Como fosfolípidos, que se pueden utilizar conforme al invento como aditivos estabilizadores a mezclas de enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas, especialmente mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, se adecuan en especial sales de aniones de la fórmula general I

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en la que

R^{1}: significa hidrógeno o un radical alcanoílo con 10 - 25 átomos de carbono, cuyo radical de hidrocarburo puede contener eventualmente 1 - 4 dobles enlaces,

R^{2}: significa hidrógeno o un radical alcanoílo con 10 - 25 átomos de carbono, cuyo radical de hidrocarburo puede contener eventualmente 1 - 4 dobles enlaces, o cuando R^{1} no representa hidrógeno, también puede significar hidrógeno,

R^{3}: significa hidrógeno, un grupo alquilo inferior, el cual puede estar sustituido con amino, trialquilamonio inferior, un grupo carboxilo unido a un átomo de carbono portador de una función amino, o un grupo cicloalquilo sustituido con hidroxi,

R^{4}: significa hidrógeno o una cadena de hidrocarburo con 10 - 25 átomos de carbono, que eventualmente puede contener 1 - 4 dobles enlaces,

A: representa oxígeno o NH,

con un catión fisiológicamente compatible

Como cationes fisiológicamente compatibles se adecuan iones de amonio, iones de metales alcalinos o alcalino-térreos, preferiblemente sodio, potasio o calcio, así como otros cationes univalentes o plurivalentes fisiológicamente compatibles. Si R^{3} contiene un átomo de nitrógeno, éste puede formar un ion de amonio cuaternario, el cual también puede servir como catión, de manera tal que se forman sales internas no cargadas hacia el exterior.

Si en los compuestos de la fórmula I los radicales R^{1} y/o R^{2} representan un radical alcanoílo, éste puede ser lineal o ramificado y está por regla general sin ramificar y contiene 10 - 25 preferiblemente 16 - 20 átomos de carbono. Eventualmente, el radical alcanoílo puede contener hasta 4 dobles enlaces. Como radicales alcanoílo pueden presentarse especialmente radicales de ácidos grasos de cadena larga, tales como ácido nervónico, ácido lignocérico, ácido palmítico, ácido palmitoleico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico, ácido linolénico, ácido araquídico o ácido araquidónico.

Si el sustituyente R^{3} significa o contiene un grupo alquilo inferior, éste puede ser lineal o ramificado y contener especialmente de 1 a 4, preferiblemente de 1 a 2 átomos de carbono. Si R^{3} significa un grupo cicloalquilo sustituido con hidroxi, éste puede contener de 3 a 6 átomos de carbono y estar sustituido con hidroxi una o múltiples veces. Preferiblemente, el grupo cicloalquilo contiene de 5 a 6 átomos de carbono, los cuales en cada caso pueden estar sustituidos con hidroxi.

El radical R^{3}O representa preferiblemente hidroxi o un radical alcoxi que se ha formado por esterificación de un alcohol univalente o plurivalente con el grupo fosfato, estando seleccionado el alcohol univalente o plurivalente entre el grupo que consta de aminoetanol, colina, serina, glicerol y mio-inositol.

Si el radical R^{4} representa una cadena de hidrocarburo, ésta puede ser lineal o ramificada y por regla general no es ramificada y contiene 10 - 25, preferiblemente 12 - 20, de modo especialmente preferido 15 átomos de carbono. Eventualmente, la cadena de hidrocarburo puede contener hasta 4, preferiblemente 2, de modo especialmente preferido 1 doble enlace.

El radical A puede representar oxígeno o el grupo NH.

Como fosfolípidos entran en cuestión preferiblemente ácido fosfatídico (ácido 1,2-diacil-sn-glicerol-3-fosfónico), fosfatidil-colina (1,2-diacil-sn-glicerol-3-fosforil-colina), fosfatidil-etanolamina (1,2-diacil-sn-glicerol-fosforil-etanolamina), fosfatidil-serina (1,2-diacil-sn-glicerol-3-fosforil-serina) y fosfatidil-inosita (1,2-diacil-sn-glicerol-3-fosforil-inosita), y en el caso de que los fosfolípidos procedan de fuentes de origen animal, tal como por ejemplo de un huevo de gallina, también esfígomielina, así como mezclas de estos compuestos. Los mencionados 1,2-diacil-fosfolípidos pueden ser hidrolizados parcialmente en ciertas condiciones, por ejemplo bajo la influencia enzimática de una fosfolipasa. Dependiendo de la naturaleza de la fosfolipasa, en tal caso los radicales R^{1}, R^{2}, R^{3} o también [R^{3}OPO_{2}]- de los 1,2-diacil-fosfolípidos pueden haber sido reemplazados por hidrógeno. Cuando sea hidrolizado por lo menos uno de los mencionados radicales de la molécula por cada molécula de fosfolípido, entonces resultan los denominados liso-fosfolípidos, especialmente liso-fosfatidil-colina, liso-fosfatidil-etanolamina, liso-fosfatidil-inosita, liso-fosfatidil-serina y ácido liso-fosfatídico. También estos liso-fosfolípidos se adecuan como aditivos estabilizadores a mezclas de enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas, especialmente mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, en el sentido del invento.

Como glicolípidos se pueden utilizar sobre todo los denominados fitoglicolípidos, presentes en las plantas, de la fórmula general II

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en la que

R^{5} y R^{6}: independientemente uno de otro, designan en cada caso un radical alcanoílo con 10 - 25 átomos de carbono, cuyo radical de hidrocarburo puede contener eventualmente 1 - 4 dobles enlaces,

\quad: o significan hidrógeno, no pudiendo R^{5} y R^{6} sin embargo representar simultáneamente hidrógeno, y

R^{7}: significa un radical de monosacárido o disacárido, cuyos eslabones sacáridos están seleccionados del grupo que consta de D-fructosilo, D-galactosilo, D-glucosilo y D-manosilo,

así como sus mezclas.

Si en los compuestos de la fórmula II R^{5} y R^{6} representan un radical alcanoílo, éste está ramificado o sin ramificar y por regla general está sin ramificar y contiene 10 - 25, preferiblemente 16 - 20 átomos de carbono. Eventualmente, el radical alcanoílo puede contener hasta 4 dobles enlaces. Como radicales alcanoílo entran en cuestión especialmente radicales de ácidos grasos de cadena larga, tales como los de ácido palmítico, ácido palmitoleico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico, ácido linolénico o ácido araquídico.

Los radicales R^{7} representan radicales de monosacáridos o disacáridos, que pueden estar constituidos a base de las moléculas de azúcares D-galactosa, D-glucosa, D-manosa o D-fructosa. De modo especialmente preferido, R^{7} tiene el significado de D-galactosa (entonces se trata de monogalactosil-diglicéridos, MGDG) o de digalactosa (entonces se trata de digalactosil-diglicéridos, DGDG; 1,2-diacil-[\alpha-D-galactosil-(1 \rightarrow 6)-\beta-D-galactosil-(1 \rightarrow 3)]-sn-gliceroles).

Los fosfolípidos de la fórmula general I y los glicolípidos de la fórmula general II poseen en el átomo de carbono central del entramado de base del glicerol en cada caso un centro de quiralidad y pueden estar configurados R ó S. Para la finalidad del invento, se pueden utilizar las formas estereoisómeras individuales de los compuestos de la fórmula I y/o de la fórmula II, así como las correspondientes mezclas.

Para la estabilización, efectuada conforme al invento, de los preparados farmacéuticos de mezclas de enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas, especialmente mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, se han manifestado como favorables aquéllas mezclas de lípidos que se pueden obtener a partir de fuentes naturales y que constituyen mezclas de diferentes fosfolípidos y eventualmente de diferentes glicolípidos. Como ejemplos preferidos de tales mezclas de lípidos naturales se mencionarán las lecitinas. Las fuentes de tales lecitinas naturales pueden ser especialmente plantas, tales como soja, girasol, colza, maíz o cacahuetes, así como animales o productos animales, tales como yema de huevo o sustancia cerebral, pero también microorganismos. Las lecitinas de procedencia natural son obtenibles comercialmente por regla general de diferentes vendedores.

De las lecitinas obtenidas de fuentes vegetales es especialmente apropiada para la finalidad del invento la lecitina de soja, especialmente la lecitina de soja enriquecida con fosfolípidos, tal como por ejemplo lecitina de soja con un contenido en fosfolípidos de aproximadamente 98%, para la finalidad conforme al invento. Las lecitinas vegetales no enriquecidas y sin tratar contienen por regla general una cierta proporción de fitoglicolípidos. Las lecitinas obtenidas de fuentes naturales son mezclas de diferentes fosfolípidos y, en el caso de tratarse de un origen vegetal, también de glicolípidos, cuya composición no es uniforme, sino que puede fluctuar dependiendo de su procedencia. Así, junto con los constituyentes ya mencionados anteriormente pueden estar contenidos además otros fosfolípidos en cantidades secundarias. La Tabla 1 sirve para representar las composiciones promedias de algunas lecitinas de origen natural no enriquecidas y sin tratar, y usuales en el comercio.

TABLA 1

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Los preparados farmacéuticos estabilizados conforme al invento contienen preferiblemente mezclas de enzimas digestivas que poseen un cierto contenido de pancreatina.

Dentro del marco del presente invento se entiende por pancreatina la pancreatina aislada a partir de los páncreas de mamíferos, cuyo contenido en proteasas activas había sido aumentado eventualmente por disociación autolítica de los zimógenos de proteasas contenidos originalmente en ellas.

Preferiblemente, al referirse a las mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina en los preparados farmacéuticos estabilizados conforme al invento, puede tratarse de pancreatina obtenida a partir de los páncreas de mamíferos, especialmente pancreatina de cerdo, que constituye una mezcla de diferentes enzimas digestivas. La pancreatina de animales mamíferos, que se adecua como agente coadyuvante de la digestión para la alimentación humana, especialmente la pancreatina procedente de un páncreas de cerdo, no siempre contiene las lipasas en cantidad suficientes para las necesidades humanas. Por lo tanto, a tales preparados de pancreatina se les pueden añadir lipasas adicionales obtenidas por ejemplo a partir de microorganismos. También las mezclas de pancreatina y lipasas, obtenidas de tal manera, constituyen apropiadas mezclas de enzimas.

En la pancreatina aislada a partir de animales mamíferos, las proteasas, cuando la pancreatina no hubo sido sometida a ningún tratamiento previo adicional, se presentan usualmente en su mayor parte en forma de un precursor proteolíticamente inactivo, el zimógeno. Por lo tanto, puede ser conveniente para finalidades farmacéuticas someter a la pancreatina bruta, que se había obtenido de manera en sí conocida por apropiados procesos de precipitación a partir de un páncreas, todavía a un tratamiento hidrolítico (autolisis). En el caso de este tratamiento, los zimógenos son transformados en proteasas activas. En esta pancreatina previamente tratada por eutolisis (en lo que sigue designada abreviadamente como F-pancreatina) se presenta un contenido especialmente alto de proteasas activas, de modo que estas F-pancreatinas están especialmente expuestas a peligro en lo que se refiere a su actividad lipolítica. La utilización conforme al invento de lípidos complejos se adecua especialmente bien para la estabilización de la actividad lipolítica en preparados farmacéuticos que contienen F-pancreatina. En este contexto, es sorprendente que la estabilización de la actividad de las lipasas no se efectúe por medio de una desactivación de las proteasas activas contenidas en la mezcla y que las mezclas de enzimas estabilizadas de tal modo tengan por consiguiente actividad tanto amilolítica y lipolítica como también proteolítica.

Las mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina en los preparados farmacéuticos que se han de proteger conforme al invento, pueden contener, junto con pancreatina, adicionalmente aquellas lipasas, como las que están contenidas en plantas o microorganismos. Las lipasas procedentes de microorganismos pueden ser aquéllas que se obtienen a partir de bacterias o cultivos de hongos tales como mohos, especialmente de la cepa Rhizopus.

Como adicionales constituyentes proteasas se pueden añadir a las mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina en los preparados farmacéuticos que se han de proteger conforme al invento, todavía otras proteasas animales y vegetales, así como especialmente proteasas obtenibles a partir de microorganismos tales como bacterias o cultivos de hongos tales como mohos, por ejemplo de la cepa Aspergillus.

Las mezclas de enzimas digestivas exentas de pancreatina pueden contener como lipasas las obtenidas a partir de plantas o microorganismos. Las lipasas procedentes de microorganismos pueden ser las que se obtienen a partir de bacterias o cultivos de hongos tales como mohos, por ejemplo de la cepa Rhizopus. Como proteasas contenidas en mezclas de enzimas digestivas exentas de pancreatina entran en cuestión proteasas animales o vegetales, así como especialmente las proteasas obtenibles a partir de microorganismos tales como bacterias o cultivos de hongos tales como mohos, por ejemplo de la cepa Aspergillus.

Los preparados farmacéuticos conformes al invento pueden contener, junto con mezclas de enzimas digestivas y lípidos complejos, eligiéndose los péptidos complejos del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas, adicionalmente sustancias coadyuvantes y/o sustancias aditivas farmacéuticas solubles en agua. Por ejemplo, pueden estar contenidas sustancias de vehículo tales como hidratos de carbono, por ejemplo manita, o proteínas solubles así como agentes conservantes.

Los preparados farmacéuticos de enzimas digestivas que contienen pancreatina en el sentido del invento pueden ser polvos solubles en agua, los cuales, junto con pancreatina, especialmente F-pancreatina, contienen lípidos complejos eligiéndose los péptidos complejos del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas, en una cantidad suficiente para la estabilización de la actividad lipolítica bajo la influencia de la humedad y eventualmente de modo adicional sustancias coadyuvantes y/o aditivas solubles en agua, en sí conocidas.

Para la preparación de polvos solubles en agua, las mezclas de enzimas pueden ser liberadas ampliamente de constituyentes insolubles en agua. Para esta finalidad, un preparado acuoso de F-pancreatina puede ser liberado de materiales sólidos sin disolver mediante procedimientos apropiados, en si conocidos, destinados a la separación de materiales sólidos, por ejemplo por centrifugación o filtración, y las soluciones obtenidas, eventualmente después de haber añadido otras sustancias coadyuvantes y/o aditivas, pueden ser esterilizadas de acuerdo con métodos en sí conocidos, por ejemplo por filtración en condiciones estériles. A continuación, las sustancias constitutivas de las soluciones transparentes, eventualmente estériles, que se han obtenido, se pueden obtener nuevamente como materiales sólidos mediante procedimientos en sí conocidos de secado, por ejemplo por liofilización (secado por congelación). Los preparados obtenidos de esta manera se adecuan para la preparación de soluciones estables a lo largo de varias horas, p. ej. hasta durante ocho horas, eventualmente exentas de crecimiento de gérmenes, que se adecuan para la aplicación continua uniforme por vía gastrointestinal a los pacientes, p. ej. mediante una sonda.

Por una aplicación continua se entiende una administración en lo esencial ininterrumpida de soluciones acuosas que contienen los preparados farmacéuticos conformes al invento, eventualmente estériles, durante un período de tiempo de desde aproximadamente una hora hasta de varias horas, por ejemplo de 8 horas, aproximadamente durante una noche. La aplicación continua de las soluciones puede efectuarse ventajosamente a través de sondas introducidas en el tracto digestivo, por ejemplo en el estómago o en el intestino delgado.

La eficacia de la adición de lecitina es ampliamente independiente de la relación relativa de las lipasas a las proteasas en la mezcla de enzimas. Son apropiadas por ejemplo mezclas de enzimas, en las que la relación de las lipasas a las proteasas totales - medida por la relación de las respectivas actividades que se habían determinado de acuerdo con las estipulaciones de la "Fédération Internationale Pharmaceutique" (a continuación designada abreviadamente por FIP) (véase R. Ruyssen y A. Lauwers, Pharmaceutical Enzymes, Scientific Publishing Company, Gante, 1978, páginas 74-82, citada a continuación como "Lauwers"), y que a continuación se indica en unidades relativas de actividad, abreviadamente por FIP-U/g. puede ser de aproximadamente 5:1 hasta aproximadamente 30:1.

Fundamentalmente, la adición, efectuada conforme al invento, de lípidos complejos, eligiéndose los péptidos complejos del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas a preparados farmacéuticos de mezclas de enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas, especialmente de mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, produce una estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica bajo la influencia de la humedad. Por "humedad" ha de entenderse en lo esencial la humedad acuosa, que puede fluctuar entre un contenido muy pequeño muy humedad del polvo de la mezcla de enzimas digestivas y hasta llegar al de un preparado acuoso de este polvo.

Una adición, conforme al invento, de lípidos complejos, eligiéndose los péptidos complejos del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas se manifiesta, ya al realizar la obtención y la elaboración de las mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, utilizadas en los preparados farmacéuticos, como conveniente para la estabilización de la actividad lipolítica durante aquellas etapas del proceso de preparación u obtención, en las cuales se pueda llegar a la inactivación de las lipasas, tal como por ejemplo un tratamiento en condiciones húmedas de la mezcla de enzimas.

En una solución acuosa de un preparado farmacéutico que contiene una mezcla de enzimas digestivas, el efecto estabilizador de los lípidos complejos añadidos, especialmente de la lecitina, es dependiente, entre otras cosas, también del valor del pH que reina en el preparado. Conforme al invento, se han manifestado como favorables unos valores de pH situados en el margen de pH de 3,5 - 9,0, preferiblemente en el margen de pH de 4,0 - 7,0, de modo especialmente preferido en el margen de pH de 5,0 - 6,5.

Para conseguir una apreciable estabilización de la actividad lipolítica en los preparados farmacéuticos solubles en agua de las mezclas de enzimas digestivas y en las soluciones acuosas para la aplicación mediante una sonda, que se pueden producir a partir de estos preparados, es necesario añadir una determinada cantidad mínima de lípidos complejos, eligiéndose los péptidos complejos del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas. Usualmente, las mezclas de enzimas digestivas utilizadas en los preparados conformes al invento pueden tener un contenido en lipasas de por ejemplo 2.000 hasta 200.000 FIP-U/g, expresado en unidades de actividad, cuando solamente contienen lipasas procedentes de la secreción del páncreas de un mamífero, y un contenido de 2.000 hasta 500.000 FIP-U/g, cuando contienen lipasas procedentes de microorganismos, o bien a solas o bien en combinación con lipasas procedentes del páncreas. Una cantidad de por lo menos 1% en peso de lípidos complejos, referida a la cantidad empleada de una mezcla sólida de enzimas digestivas que contiene pancreatina, por ejemplo una cantidad de 1 hasta 10% en peso, es entonces apropiada para la consecución de una apreciable estabilización. Una adición de mayores cantidades de lípidos complejos es asimismo posible, pero ya no origina ya ninguna mejoría digna de mención de la estabilización de la actividad lipolítica. Así, por ejemplo para la estabilización de mezclas que contienen pancreatina, o bien pancreatina y lipasas adicionales, con lípidos complejos, especialmente lecitina, es apropiada una adición de por lo menos 1% en peso, preferiblemente de 2 a 5% en peso, de modo especialmente preferido de alrededor de 3% en peso.

Con ayuda de la utilización, conforme al invento, de lípidos complejos, eligiéndose los péptidos complejos del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas, las soluciones acuosas que se pueden producir a partir de preparados farmacéuticos de mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, las cuales soluciones tienen tendencia a una rápida disminución de la actividad lipolítica, se pueden estabilizar de tal manera que la actividad lipolítica de las lipasas contenidas en la mezcla disminuya sólo insignificantemente durante un prolongado período de tiempo. Así, la solución acuosa de una F-pancreatina estabilizada por adición de lecitinas tiene después de un período de tiempo de incubación durante 8 horas a la temperatura ambiente, una actividad lipolítica restante, determinada con ayuda del método FIP/Far. Eur., de 85% de la actividad de partida original. En una solución acuosa de F-pancreatina, estabilizada mediante lípidos complejos, se pudo detectar, incluso después de un período de tiempo de incubación de 24 horas, todavía un 50% de la actividad lipolítica inicial determinada con ayuda del método FIP/Far. Eur. Por el contrario, en una solución comparativa no estabilizada, en condiciones por lo demás idénticas, la actividad lipolítica había disminuido después de 8 horas hasta por debajo de 20% de la actividad de partida.

La estabilización efectuada conforme al invento, de preparados farmacéuticos solubles en agua de mezclas de enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas, contra una disminución de la actividad lipolítica en un medio acuoso, abre la posibilidad de abastecer a los pacientes con tales mezclas de enzimas digestivas en forma de una solución acuosa, en régimen continuo, mediante introducción en el tracto gastrointestinal. Las soluciones acuosas empleadas para ello deberán estar naturalmente exentas de crecimiento de gérmenes y preferiblemente deberán ser incluso estériles. Las soluciones exentas de crecimiento de gérmenes pueden ser por ejemplo soluciones en las que mediante adición de agentes conservantes se impide la reproducción de gérmenes autorreproducibles.

Conforme al invento se pone a disposición un estuche para la preparación de soluciones acuosas de mezclas de enzimas digestivas, exentas de gérmenes, que han sido estabilizadas contra la disminución de la actividad lipolítica, y que son apropiadas para la introducción en régimen continuo dentro del tracto gastrointestinal mediante una sonda cuyo estuche está caracterizado porque contiene como constituyentes:

a): un preparado farmacéutico sólido, soluble en agua, exento de crecimiento de gérmenes, de una mezcla de enzimas digestivas que contiene lipasas y proteasas, la cual eventualmente puede contener una cantidad de lípidos complejos, que se eligen del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas, que sea suficiente para la estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica de la solución acuosa que se ha de preparar,

y

b): una cantidad, suficiente para la preparación de la solución acuosa, de un disolvente acuoso exento de crecimiento de gérmenes, el cual junto con agua puede contener sales y sustancias coadyuvantes fisiológicamente compatibles, y, en el caso de que en el preparado farmacéutico sólido mencionado en el apartado a) no esté contenida ninguna cantidad de lípidos complejos que sea suficiente para una estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica de la solución acuosa que se ha de preparar, contiene adicionalmente una cantidad de lípidos complejos que es suficiente para la estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica de la solución acuosa que se ha de preparar.

Especialmente, el preparado sólido a) utilizado en el estuche, puede constituir una mezcla de enzimas digestivas, liofilizada, que contiene lipasas y proteasas, la cual contiene eventualmente lípidos complejos. Preferiblemente, la mezcla de enzimas digestivas consiste en una mezcla de enzimas digestivas que contiene pancreatina.

Las soluciones acuosas, que están exentas del crecimiento de gérmenes, se pueden obtener por adición de agentes conservantes en sí conocidos, por ejemplo parabenos. Las soluciones estériles, que también constituyen soluciones exentas de crecimiento de gérmenes, se pueden obtener mediante procedimientos de esterilización en sí conocidos, por ejemplo mediante la filtración en condiciones estériles.

Los lípidos contenidos en el estuche pueden presentarse preferiblemente como aditivos ya contenidos en la mezcla de enzimas digestivas (componente a)). Con el fin de preparar un polvo de la mezcla de enzimas digestivas, que ya contenga los lípidos complejos, por ejemplo una solución de los lípidos complejos, eventualmente exenta de crecimiento de gérmenes, se puede mezclar con una solución de la mezcla de enzimas digestivas, eventualmente exenta de crecimiento de gérmenes, y a continuación se puede secar según procedimientos en sí conocidos, por ejemplo de liofilización. Con el fin de obtener a partir de ello una solución aplicable mediante sondas, el polvo que contiene los lípidos complejos así como la mezcla de enzimas digestivas, se puede mezclar con el disolvente asimismo contenido en el estuche, eventualmente en condiciones pobres en gérmenes o exentas de gérmenes. Sin embargo, los lípidos complejos pueden presentarse también ya disueltos en el disolvente (componente b)), por ejemplo como un coloide. Con el fin de
obtener soluciones aplicables por sondas, en este caso la solución acuosa que contiene los lípidos complejos o el coloi-
de, se puede mezclar, eventualmente en condiciones estériles, con la mezcla de enzimas digestivas (componente a)).

Ejemplos de realización 1. Estabilización de la actividad lipolítica de soluciones acuosas de pancreatina mediante lecitina de soja

Con el fin de determinar las diferentes modificaciones de la actividad lipolítica con y sin adición de lípidos complejos en preparados acuosos de pancreatina, se prepararon previamente correspondientes muestras y se incubaron a 30ºC. A partir de las muestras de incubación se determinó la modificación en función del tiempo de las actividades de lipasas de acuerdo con el método de la "Fédération Internationale Pharmaceutique/Europeaan Pharmacopeia" (a continuación designado abreviadamente por FIP/Ph.Eur., véase Lauwers, páginas 74 - 82). En este método patrón de determinación, la muestra que ha de ser investigada en cuanto a actividad lipolítica se hace actuar en condiciones hidrolíticas sobre triglicéridos de aceite de oliva y se valoran los ácidos carboxílicos que se liberan con hidróxido de sodio al valor de pH de 9. La actividad de lipasas de la muestra es determinada en tal caso mediante la comparación de la velocidad, con la que la muestra hidroliza una emulsión de aceite de oliva, con la velocidad, con la que una suspensión de un polvo de referencia de páncreas hidroliza al mismo substrato en las mismas condiciones.

1.1. Investigación de la estabilidad de lipasas sin adición de lecitina

Se disolvieron 79,35 mg de una F-pancreatina liofilizada, soluble en agua, con una actividad lipolítica de 50.473 FIP-U/g, en 4,0 ml de agua purísima enfriada por hielo (Nanopur® de la entidad Barnstead), el valor del pH se ajustó a 6,2 con CHl 1 N, y a continuación la tanda se completó con agua purísima hasta 5,0 ml. A partir de esta tanda se extrajo inmediatamente una muestra para la determinación de la actividad de partida lipolítica ("muestra de cero minutos"). La tanda restante se incubó a 30ºC en un baño de agua. Para la toma de muestras, la tanda se mezcló bien a fondo, la muestra se extrajo con una pipeta apropiada y se diluyó inmediatamente con un disolvente para lipasas, enfriado por hielo, de manera tal que para la determinación de las lipasas estaban a disposición entre 0,5 y 1,5 ml de una solución de investigación con una actividad lipolítica de 8 hasta 16 FIP-U. Como disolvente para lipasas se utilizó, según FIP/Ph.Eur., una solución de 10,0 g de NaCl, 6,06 g de tris-(hidroximetil)-aminometano (designado a continuación abreviadamente como "TRIS") y 4,9 g de anhídrido de ácido maleico en 900 ml de agua purísima, cuyo valor de pH había ajustado a pH 7 con lejía de sosa 4 N, y que a continuación había sido completado con agua purísima hasta 1.000 ml.

Con el fin de determinar la evolución en el curso del tiempo de la actividad de lipasas se extrajeron, después de 15, 30, 60, 120 y 180 minutos, muestras adicionales a partir de la tanda regulada termostáticamente y se determinó en ellas, en cada caso en el transcurso de 30 minutos, la actividad de lipasas de acuerdo con el método de FIP/Ph. Eur. (Lauwers, página 78).

La actividad de lipasas en unidades de FIP-U/ml, determinada en la "muestra de cero minutos", se estableció como valor de 100%, y los valores de actividad medidos durante el período ulterior de incubación se refieren porcentualmente a este valor. Los resultados se exponen en la Tabla 2.

1.2. Investigación de la estabilidad de lipasas con adición de lecitina

Para la preparación de una solución de lecitina se empastaron primeramente 100 mg de lecitina de soja (contenido en fosfolípidos aproximadamente 98%, de la entidad Roth) a la temperatura ambiente con un poco de agua purísima y luego se completaron hasta 20,0 ml. La mezcla se irradió con ultrasonidos bajo agitación durante aproximadamente 2 minutos hasta conseguir una solución coloidal homogénea. Luego se disolvieron 80,0 mg de una F-pancreatina soluble en agua, liofilizada, con una actividad lipolítica de 54.694 FIP-U/gramo en 4,0 ml de agua purísima y el valor del pH en la solución se ajustó a 6,2 con HCl 1 N. Se añadieron 0,4 ml de la solución de lecitina (2,5% de lecitina, referido al polvo empleado de F-pancreatina) y la tanda se completó hasta 5,0 ml con agua purísima enfriada por hielo, mediando buena mezcladura a fondo. La toma de muestras y la determinación de las actividades lipolíticas en los respectivos períodos de tiempo de incubación se efectuaron tal como se ha descrito en el apartado 1.1. Los resultados se exponen en la Tabla 2.

TABLA 2 Variación de las actividades lipolíticas en soluciones acuosas de pancreatina con y sin adición de lecitina

2

2. Estabilización de la actividad lipolítica de preparados acuosos de pancreatina durante un período de tiempo de 8 horas

En preparados acuosos de pancreatina aparecen pérdidas en la actividad lipolítica, dependiendo de diferentes factores, tales como temperatura, valor del pH y actividad proteolítica de las proteasas contenidas. Por adición de lípidos complejos, tales como lecitina, la actividad de lipasas puede ser estabilizada claramente a 25ºC durante una incubación a lo largo de 8 horas. En el experimento siguiente, se compararon por lo tanto durante 8 horas las actividades lipolíticas en suspensiones y soluciones acuosas de F-pancreatina en cada caso con y sin adición de lípidos complejos.

2.1. Preparación de las tandas de incubación

Como comparación se investigaron soluciones transparentes de pancreatina y suspensiones transparentes de pancreatina a base de F-pancreatina con y sin adición de lecitina.

Se produjeron los siguientes preparados acuosos:

a) Soluciones de pancreatina sin lecitina

: Se disolvieron en agua purísima enfriada por hielo 77,5 mg de un polvo de F-pancreatina liofilizado, soluble en agua, tal como se describe en el apartado 1.1, siendo ajustado el valor del pH a 6,2 con HCl 1 N.

b) Solución pancreatina con lecitina

: Se mezclaron 81,0 mg de un polvo de F-pancreatina, liofilizado, soluble en agua, tal como se describe en el apartado 1.2 después de haber ajustado el valor del pH a 6,2, con 0,94 ml de una solución de lecitina y se completaron hasta 5,0 ml con agua purísima enfriada por hielo.

c) Suspensión de pancreatina sin lecitina

: Se agitaron 2,0 g de F-pancreatina en 100 ml de agua purísima enfriada por hielo durante 30 minutos. Se obtuvo una suspensión turbia.

d) Suspensión de pancreatina con lecitina

: Se mezclaron 2,0 g de F-pancreatina con 100 mg de lecitina de soja (entidad Roth) y se agitaron durante 30 minutos en 100 ml de agua purísima enfriada por hielo. Se obtuvo una suspensión turbia.

2.2 Realización del experimento

A partir de las soluciones y respectivamente suspensiones enfriadas por hielo, que se prepararon en el apartado 2.1, se extrajeron, inmediatamente después de su preparación, muestras para la determinación de la actividad lipolítica de partida ("muestras de cero minutos"). Luego, el resto de las tandas se incubó en tubos de ensayo durante 8 horas a 25ºC. Durante este período de tiempo se tomaron otras muestras después de 30 minutos, y a continuación cada hora. La toma de muestras, la dilución y la determinación de la actividad de lipasas se efectuaron en principio tal como se describe en el aparato 1.1, pero la temperatura del experimento, a diferencia de la prescripción anterior, fue ahora de 25ºC.

La actividad del lipasas (indicada en FI-U/ml) de las "muestras de cero minutos" de una tanda de incubación fue establecida como valor de 100% y los valores de actividad, medidos durante el ulterior período de tiempo de incubación, se refirieron porcentualmente a este valor. Los resultados están reproducidos en las siguientes Tablas 3 y 4.

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(Tabla pasa a página siguiente)

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3

3. Estabilización de una lipasa microbiana frente a una proteasa microbiana por adición de lípidos complejos

En el experimento siguiente se puso de manifiesto que también la actividad de lipasas microbianas se podría estabilizar en presencia de proteasas microbianas activas mediante la adición de lípidos complejos. Para ello, se prepararon tres soluciones de investigación, las cuales contenían respectivamente lipasa microbiana, lipasa microbiana más proteasa microbiana, así como lipasa microbiana con una adición de lecitina más proteasa microbiana. A continuación, se determinaron las actividades lipolíticas en estas soluciones de investigación y se compararon entre sí mediante una tabla.

3.1. Preparación previa de las soluciones de investigación

Se prepararon las siguientes soluciones:

a) Solución de lipasa

: Se disolvieron 245 mg de una lipasa procedente de Rhizopus oryzae (Lipase 7-AP 15, Amano Pharmaceutical Co., LTD Nagoya, Japon), con una actividad de 170.000 FIP-U/g, en 50 ml de una solución de cloruro de sodio al 1%, enfriada por hielo.

b) Solución de proteasa

: Se disolvieron 390 mg de una proteasa procedente de Aspergillus (Prozyme 6; Amano Pharmaceutical Co., LTD Nagoya, Japon), con una actividad de 7.600 FIP-U/g, en 25 ml de una solución de cloruro de sodio al 1%, enfriada por hielo.

c) Solución de lecitina

: Se recogió 1 g de una lecitina (lecitina pura de soja con un contenido en fosfolípidos de aproximadamente 98%, de la entidad Roth) en 40 ml de agua purísima ("Nanopure®" de la entidad Barnstead) y se disolvió para formar un coloide durante aproximadamente 2 minutos con ultrasonidos mediando sacudimiento.

A partir de estas soluciones se prepararon en un baño de hielo las siguientes soluciones de incubación con un volumen total de 5 ml:

TABLA 5 Soluciones de incubación para la determinación de la actividad de lipasa de Rhizopus

4

El valor del pH de todas las soluciones de incubación fue, después de la preparación, de 6,5 a 37ºC.

3.2. Realización del experimento

A partir de las soluciones de incubación I, II y III, enfriadas por hielo, se extrajeron, inmediatamente después de su preparación, muestras para la determinación de las actividades de partida ("muestras de cero minutos"), el resto de las tres tandas se incubó en tubos de ensayo a 37ºC en un baño de hielo.

Para la toma de muestras, la tanda se mezcló bien a fondo, la muestra se extrajo con una apropiada pipeta y se diluyó inmediatamente con un disolvente para lipasas, enfriado por hielo, tal como se describe en el apartado 1.1. De estas soluciones de muestras se extrajeron en cada caso determinadas cantidades (caracterizadas con "X" en la Tabla 6) y se diluyeron hasta 5 ml con una solución al 1% de cloruro de sodio. De estas soluciones de investigación se emplearon en cada caso 0,5 ml en el ensayo de actividad de lipasas.

TABLA 6 Cantidades extraídas de muestras para la preparación de las soluciones de investigación

5

3.3. Determinación de la actividad de lipasa de Rhizopus

La actividad catalítica de la lipasa procedentes de Rhizopus se midió por determinación de la cantidad de ácidos grasos libres, que se habían formado a lo largo de un definido período de tiempo a pH 7,0 y 37ºC a partir de una emulsión de aceite de oliva en presencia de 0,025% de taurocolato de sodio. Con el fin de garantizar que hubieran sido abarcados todos los ácidos grasos, se efectuó a continuación una valoración hasta pH 9,0. Una determinación del valor a ciegas por valoración de la emulsión de substrato sirvió para la averiguación de sustancias valorables, que no se han formado por la actividad de lipasas.

La actividad de lipasa procedente de Rhizopus de una sustancia sometida a investigación fue determinada mediante la comparación de la velocidad, con la que una suspensión de la sustancia hidrolizaba a una emulsión de aceite de oliva, con la velocidad, con la que una suspensión de un patrón de referencia de lipasa de Rhizopus hidrolizaba a la misma emulsión de aceite de oliva en las mismas condiciones

Reactivos 1. Agua

Se utilizó agua purísima "Nanopure®" de la entidad Barnstead. Ésta es designada a continuación como "agua purísima".

2. Solución de goma arábiga

Se disolvieron 110 g de goma arábiga y 12,5 g de cloruro de calcio mediando agitación (durante aproximadamente 3 horas) en agua purísima, se completó hasta 1.000 ml y se centrifugó. La solución se envasó en recipientes de material plástico de 250 ml de capacidad y se almacenó a -20ºC.

Goma arábiga (Acaciae-Gummi, DAB 10/Ph. Eur), cloruro de calcio p.a.

3. Emulsión del substrato

Se emulsionaron en un aparato agitador apropiado con elevado número de revoluciones, 130 ml de aceite de oliva y 400 ml de una solución de goma arábiga (2) durante 15 minutos. La temperatura se mantuvo por debajo de 30ºC. Por lo menos un 90% de las gotitas de la emulsión poseían un diámetro menor que 3 \mum y ninguna de ellas era mayor que 10 \mum. La emulsión se preparó recientemente cada día.

Aceite de oliva (almacenado en un frigorífico), calidad para DAB.

4. Solución al 0,5% (m/v) de taurocolato de sodio

Se disolvieron 0,5 g de taurocolato de sodio (mezcla activadora de lipasas, mezcla de ácidos biliares conjugados entre otros de taurocolato de sodio) con agua purísima hasta 100,0 ml. La solución se preparó recientemente cada
día.

Taurocolato de sodio (mezcla activadora de lipasas), FIP.

5. solución de cloruro de sodio al 1% (m/v) en agua purísima 6. Solución tamponadora pH 4,5

Se disolvieron 2 g de cloruro de sodio y 9,2 g de dihidrogenofosfato de sodio en aproximadamente 950 ml de agua purísima, se ajustaron a pH 4,5 con ácido clorhídrico y se completaron hasta 1.000 ml con agua purísima.

Cloruro de sodio p.a., dihidrogenofosfato de sodio, NaH_{2}PO_{4} X H_{2}O.

7. Lejía de sosa 0,1 N Suspensión de referencia

El patrón de referencia de lipasa procedente de Rhizopus se agitó en una solución tamponadora (6) y se diluyó con una solución de cloruro de sodio (5) hasta tanto que la solución de enzima contuviese de 12 a 18 unidades de actividad de lipasa de Rhizopus FIP-U/ml. En el caso de un patrón con 55.000 FIP-U por 1 g se disolvieron 63 mg en 20 ml de la solución tamponadora (6) en el transcurso de 15 minutos en un baño de hielo. Se diluyeron 10 ml de esta solución con una solución de cloruro de sodio (5) hasta 100 ml en el baño de hielo. Se emplearon en el ensayo 0,5 ml de esta solución.

Patrón de referencia de lipasa de Rhizopus FIP (Fungi-Lipase, patrón FIP).

Soluciones de investigación

Se utilizaron las soluciones de investigación I, II y III.

Realización de los experimentos

En un autovalorador de un sistema de valoración "pH-Stat" de la entidad Radiometer, se ajustó a pH 7,0 el punto final para la valoración con el Ph-Stat. En el recipiente de reacción se introdujeron:

12,0 ml de una emulsión de aceite, FIP (3)

6,5 ml de agua purísima (1)

1,0 ml de una solución de taurocolato de sodio (4).

La mezcla se llevó a 37,0ºC. El valor del pH se ajustó a pH 7,0 con lejía de sosa 0,1 N (7). Después de ello la pureza se ajustó a "0".

La reacción fue iniciada por adición de 0,5 ml de la suspensión de referencia, cuando tenía que medirse el valor de referencia, o de 0,5 ml de la solución de investigación, cuando tenía que medirse la actividad de lipasas en la solución de investigación. Después de 10 minutos, el punto final para la valoración en el pH-Stat se ajustó a pH 9,0. Cuando se hubo llegado al valor de pH 9,0 (este proceso duró menos de 30 segundos), se interrumpió la valoración y se leyó el consumo de lejía de sosa 0,1 N.

Para la determinación de los valores a ciegas, para la suspensión de referencia y para la solución de investigación se ajustaron inmediatamente a pH 9,0 los puntos finales de la valoración en un aparato valorador. Después de haber ajustado manualmente el valor del pH en la tanda de reacción a pH 7,0 y después de haber añadido 0,5 ml de la suspensión de referencia o de la solución de investigación, se valoró inmediatamente a pH 9,0. A partir del consumo leído de lejía de sosa 0,1 N se calculó la actividad de lipasas de Rhizopus en FIP-U/ml de la solución de inves-
tigación.

Las actividades de lipasas iniciales, determinadas en las soluciones de investigación I, II y III en unidades de FIP-U ml, se establecen como valores de 100%. Los valores de actividad medidos durante el subsiguiente período de tiempo de incubación de 1 hora, se refirieron luego en cada caso porcentualmente a estos valores de partida, y se exponen en la Tabla 7.

TABLA 7 Estabilización de la actividad de lipasas de Rhizopus mediante lecitina de soja

6

4. Ejemplo de un preparado farmacéutico

A): Se recogen 20,0 g de F-pancreatina en 400 ml de agua y el valor del pH se ajusta rápidamente a 6,2 por adición de HCl 1 N. En estas condiciones se extrae durante 1 hora a 4ºC. El material sobrenadante transparente, que contiene extracto de pancreatina, se centrifuga a 53.000 xg y se filtra éste a continuación en condiciones estériles a través de un filtro con un tamaño de poros de 2 \mum.

B): Se disuelve 1,0 g de lecitina de soja (al 98% en fosfatidil-colina) en 50 ml de agua y se esteriliza a 140ºC durante 45 minutos en una ampolla de vidrio cerrada por fusión.

C): Se mezclan 400 ml del extracto de pancreatina preparado en A) con 25 ml de la solución de lecitina preparada en B), en frío y mediando condiciones estériles. La mezcla se liofiliza, obteniéndose 16 g de un polvo, que se envasa en condiciones estériles, en porciones cada una de 2,5 g, dentro de frascos para infusión de 100 ml de capacidad.

5. Ejemplos de estuches para la aplicación farmacéutica 5.1. Estuche 1

A): Se recogen 40,0 g de F-pancreatina en 400 ml de agua y el valor del pH se ajusta rápidamente a 6,2 por adición de HCl 1 N. En estas condiciones se extrae durante 1 hora a 4ºC. El material sobrenadante transparente, que contiene el extracto de pancreatina, es centrifugado a 53.000 xg y se filtra éste a continuación en condiciones estériles a través de filtros con un tamaño de poros de 2 \mum. El extracto es envasado mediando condiciones estériles en porciones de 25 ml dentro de frascos para infusión de 100 ml de capacidad y es liofilizado.

B): Se disuelven 2,0 g de lecitina de soja (al 98% en fosfatidil-colina) en 20 ml de agua y se homogeneizan por ultrasonidos. Esta solución coloidal se esteriliza a 140ºC durante 45 minutos en una ampolla de vidrio cerrada por fusión. Se extrae de ésta una porción de 12,5 ml, la cual se mezcla con 1.600 ml de agua esterilizada y se envasa en porciones de 100 ml dentro de frascos para infusión.

Para la aplicación, el contenido en un frasco del material sólido obtenido en A) se disuelve en el contenido en un frasco de la solución obtenida en B).

5.2. Estuche 2

A): Se recogen 40,0 g de F-pancreatina en 800 ml de agua y el valor del pH se ajusta rápidamente a 6,2 por adición de HCl 1 N. En estas condiciones se extrae durante 1 hora a 4ºC. El material sobrenadante transparente, que contiene el extracto de pancreatina, es centrifugado a 53.000 xg, y se desecha el precipitado.

B): Se disuelven 32,0 g de manita en 200 ml de agua, se mezclan con 800 ml del extracto de pancreatina obtenido en A) y las soluciones reunidas se filtran mediando condiciones estériles.

C): Se disuelven 5,0 g de lecitina de soja (al 98% en fosfatidil-colina) en 50 ml de agua y se homogeneizan con ultrasonidos. Esta solución coloidal es esterilizada a 140ºC durante 45 minutos dentro de una ampolla de vidrio cerrada por fusión.

D): Se mezclan 1.000 ml del extracto de pancreatina obtenido en B), mediando condiciones estériles, con 16 ml de la solución de lecitina obtenida en C) y se liofilizan. El polvo obtenido es envasado en condiciones estériles en porciones de 10,0 g dentro de frascos de 200 ml de capacidad.

E): Un agua desionizada y filtrada en condiciones estériles se envasa en condiciones estériles dentro de frascos de 200 ml de capacidad.

Para la aplicación, el contenido en un frasco del polvo obtenido en D) se disuelve en el contenido en un frasco del agua envasada en E).

Claims

1. Utilización de lípidos complejos como aditivos que estabilizan contra una disminución de la actividad lipolítica bajo la influencia de la humedad en preparados farmacéuticos solubles en agua de mezclas de enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas, los cuales son apropiados para la preparación de soluciones acuosas destinadas a la introducción continua en el tracto gastrointestinal mediante sondas, eligiéndose los lípidos complejos del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas.

2. Utilización de lípidos complejos según la reivindicación 1, en la que las mezclas de enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas son mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina.

3. Utilización de lípidos complejos según la reivindicación 2, caracterizada porque éstos se emplean como aditivos estabilizadores a preparados farmacéuticos de mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, las cuales, junto a pancreatina, contienen lipasas adicionales, seleccionadas entre el grupo que consta de lipasas vegetales, lipasas bacterianas y lipasas procedentes de cultivos de hongos.

4. Utilización de lípidos complejos según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque como lípidos complejos se utilizan fosfolípidos o mezclas de lípidos que contienen a éstos.

5. Utilización de lípidos complejos según la reivindicación 4, caracterizada porque como fosfolípidos se utilizan sales de aniones de la fórmula general I

7

en la que

R^{2}: significa un radical alcanoílo con 10 - 25 átomos de carbono, cuyo radical de hidrocarburo puede contener eventualmente 1 - 4 dobles enlaces, o cuando R^{1} no representa hidrógeno, también puede significar hidrógeno,

A: representa oxígeno o NH,

con cationes fisiológicamente compatibles, o sus mezclas.

6. Utilización de lípidos complejos según la reivindicación 5, caracterizada porque en los fosfolípidos de la fórmula general I, el radical R^{3} está seleccionado del grupo que consta de hidrógeno, aminoetilo, colilo, serilo, glicerilo o mio-inositilo.

7. Utilización de lípidos complejos según la reivindicación 6, caracterizado porque se utilizan fosfolípidos tomados del grupo que consta de ácido fosfatídico, fosfatidil-colina, fosfatidil-serina, fosfatidil-etanol-amina, fosfatidil-inosita y esfingomielina, o mezclas de lípidos que contienen a éstos.

8. Utilización de lípidos complejos según la reivindicación 1, caracterizada porque como lípidos complejos se utilizan lecitinas procedentes de soja, colza, maíz, girasol, cacahuetes, huevo de gallina o microorganismos.

9. Utilización de lípidos complejos según la reivindicación 8, caracterizada porque como lípidos complejos se utilizan lecitinas procedentes de soja.

10. Utilización de lípidos complejos según una de las reivindicaciones 2 a 9, caracterizada porque los lípidos se añaden a la pancreatina empleada en los preparados farmacéuticos ya al obtenerse ésta o al tratarla para la estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica, durante etapas del proceso que están vinculadas con un tratamiento en condiciones húmedas.

11. Preparados farmacéuticos solubles en agua, de mezclas de enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas, los cuales son apropiados para la preparación de soluciones acuosas destinadas a la introducción continua en el tracto gastrointestinal mediante aplicación por una sonda, caracterizados porque contienen una cantidad de lípidos complejos según una de las reivindicaciones 1 a 9, que es suficiente para la estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica bajo la influencia de la humedad.

12. Preparados farmacéuticos según la reivindicación 11, caracterizados porque las mezclas de enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas consisten en mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina.

13. Preparados farmacéuticos según la reivindicación 12, caracterizados porque las mezclas de enzimas digestivas contienen, junto a pancreatina, lipasas adicionales seleccionadas del grupo que consta de lipasas vegetales, lipasas bacterianas y lipasas procedentes de cultivos de hongos.

14. Preparados farmacéuticos según una de las reivindicaciones 11 a 13, caracterizados porque contienen una cantidad tal de lípidos complejos, que se estabiliza la actividad lipolítica de soluciones acuosas de los preparados de manera tal, que la actividad de partida lipolítica de una solución acuosa disminuye en a lo sumo 20% durante un período de tiempo de 8 horas, determinándose la actividad lipolítica con ayuda del método según FIP/Far. Eur.

15. Preparados farmacéuticos según la reivindicación 14, caracterizados porque contienen una cantidad tal de lípidos complejos que la actividad lipolítica de partida de soluciones acuosas de los preparados disminuye en a lo sumo 50% durante un período de tiempo de 24 horas, determinándose la actividad lipolítica con ayuda del método según FIP/Far.Eur.

16. Preparados farmacéuticos según una de las reivindicaciones 11 a 13, caracterizados porque contienen lípidos complejos para la estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica en una concentración de 1 a 10% en peso, preferiblemente de 2 a 5% en peso, referida a la mezcla de enzimas digestivas.

17. Preparados farmacéuticos según una de las reivindicaciones 11 a 16, caracterizados porque la pancreatina contenida en ellos es pancreatina previamente tratada por autolisis.

18. Estuche para la preparación de soluciones acuosas de mezclas de enzimas digestivas exentas de crecimiento de gérmenes, estabilizadas contra la disminución de la actividad lipolítica, que son apropiadas para la introducción continua en el tracto gastrointestinal mediante sondas, caracterizado porque contiene como constituyentes:

a): un preparado farmacéutico sólido, soluble en agua, exento de crecimiento de gérmenes, de una mezcla de enzimas digestivas que contiene lipasas y proteasas, la cual eventualmente puede contener una cantidad de lípidos complejos según una de las reivindicaciones 1 a 9, que sea suficiente para la estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica de la solución acuosa que se ha de preparar,

y

b): una cantidad, suficiente para la preparación de la solución acuosa, de un disolvente acuoso exento de crecimiento de gérmenes, el cual junto con agua puede contener sales y sustancias coadyuvantes fisiológicamente compatibles y, en el caso de que en el preparado farmacéutico sólido mencionado en el apartado a) no esté contenida ninguna cantidad de lípidos complejos que sea suficiente para una estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica de la solución acuosa que se ha de preparar, contiene adicionalmente una cantidad de lípidos complejos según una de las reivindicaciones 1 a 9, que es suficiente para la estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica de la solución acuosa que se ha de preparar.

19. Estuche según la reivindicación 18, caracterizado porque el preparado sólido a) constituye una mezcla de enzimas digestivas, liofilizada, que contiene lipasas y proteasas, la cual contiene eventualmente lípidos complejos.

20. Estuche según la reivindicación 19, caracterizado porque la mezcla de enzimas, liofilizada, contiene pancreatina.