CZ218497A3 - Použití komplexních lipidů jako stabilizujících přísad pro farmaceutické přípravky směsí zažívacích enzymů - Google Patents

Použití komplexních lipidů jako stabilizujících přísad pro farmaceutické přípravky směsí zažívacích enzymů Download PDF

Info

Publication number
CZ218497A3
CZ218497A3 CZ972184A CZ218497A CZ218497A3 CZ 218497 A3 CZ218497 A3 CZ 218497A3 CZ 972184 A CZ972184 A CZ 972184A CZ 218497 A CZ218497 A CZ 218497A CZ 218497 A3 CZ218497 A3 CZ 218497A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
complex lipids
pancreatin
mixtures
activity
digestive enzyme
Prior art date
Application number
CZ972184A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ295329B6 (cs
Inventor
Manfred Galle
Original Assignee
Solvay Pharmaceuticals Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Solvay Pharmaceuticals Gmbh filed Critical Solvay Pharmaceuticals Gmbh
Publication of CZ218497A3 publication Critical patent/CZ218497A3/cs
Publication of CZ295329B6 publication Critical patent/CZ295329B6/cs

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66Phosphorus compounds
    • A61K31/683Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols
    • A61K31/685Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols one of the hydroxy compounds having nitrogen atoms, e.g. phosphatidylserine, lecithin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46Hydrolases (3)
    • A61K38/465Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46Hydrolases (3)
    • A61K38/48Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06Antihyperlipidemics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

Oblast techniky j | cnsoa 1 * »
Předložený vynález se týká použití komplexních lipidů jako | stabilizujících přísad proti vlhkostí způsobovanému po^lfé^ug 2 0 lipolytické aktivity ve vodě rozpustných farmaceutických | , T'2 přípravků směsí zažívacích enzymů, kteréžto přípravky,xjlisah.ú4.í™™~ proteaso/1ipasové směsi, zejména pankreatin a které jsou vhodné pro přípravu vodných roztoků pro kontinuální zavádění do gastrointestinálního traktu pomocí sond. Dále se vynález týká ve vodě rozpustných farmaceutických přípravků z lipasy a proteasy obsahujících směsí zažívacích enzymfl, zejména z pankreatin obsahujících směsí zažívacích enzymů, které jsou stabilizované komplexními lipidy proti vlhkostí způsobovanému poklesu lipolytické aktivity a které jsou vhodné pro přípravu vodných roztoků, zavádítelných do gastrointestinálního traktu savců nebo lidí pomocí sond.
Dosavadní stav techniky
U savců, zejména lidí, může nastat nedostatek zažívacích enzymů například vyvoláním chorobnými změnami pankreatu na základě chronické pankreatidy, zažívací nedostatečnosti po operacích žaludku, onemocněních jater nebo žlučníku. Je již známo, že takovéto nedostatkové jevy je možno léčit podáváním pankreatin obsahujících směsí zažívacích enzymů, který nejsou tělu vlastní, např. pankreasových enzymů, zejména pankreatinu, které případně ještě mohou obsahovat lipasové přísady.
Pankreasové enzymy se obvykle podávají orálně ve formě pevných přípravků. Aby se při orálním podávání podané směsi enzymů nežádoucím způsobem nevratně neznehodnotily již v žaludku tam přítomnými žaludečními kyselinami a proteolytickými enzymy jako je pepsin, je třeba směsi enzymů opatřit povlakem, který je odolný vůči žaludečním štávám. Takovýto povlak umožňuje průchod intaktních směsí enzymů žaludkem až do místa jejich působení.
do dvanáctera!ku, kde se tam panujícími neutrálními až lehce alkalickými podmínkami enzymy uvolní- Tak jako tělu vlastní pankreasové enzymy zdravého člověka, mohou i orálně podané enzymy projevit svůj enzymatický účinek, zejména amylolytickou, lipolytickou a proteolytickou aktivitu.
Takovéto, proti žaludečním štávám odolným filmem potážitělně, pevné pankreatinové formulace ve formě mikropilulek, popisuje např. dokument DOS 42 27 385.4.
Pro pacienty se zažívací nedostatečností, zejména pro pacienty upoutané na lflžko s déle trvající zažívací nedostatečností jako například chronickou nedostatečností pankreatu, by bylo žádoucí místo pevných podávačích forem podávat tělu nevlastní zažívací enzymy i po delší dobu v tekuté formě, například kontinuální aplikací pomocí sondy.
Kapalné podávači formy pankreatin obsahujících směsí zažívacích enzymů, zejména penkreatinu, nebyly dosud dány k dispozici, nebot kapalné vodné přípravky takovýchto enzymových směsí nejsou dlouhodobě stabilní- Ukazuje se, že zejména aktivita ve směsi obsažených lipas v přítomnosti vody rychle klesá následkem proteolytického napadení ve směsi rovněž obsažených proteas jako je trypsin nebo chymotrypsin. Tak může, v závislost na vnějších podmínkách Cteplotě, hodnotě pH), ve vodných pankreatinových přípravcích během krátké doby dojít k dalekosáhlé ztrátě lipasové aktivity.
Podstata vynálezu
Aby byly vhodné pro kontinuální zavádění do gastrointestinálního traktu aplikací pomocí sondy, musí vodné roztoky lipasy a proteasy obsahujících směsí zažívacích enzymů, zejména pankreatin obsahujících směsí zažívacích enzymů, být stabilní po dobu několika hodin, například 8 hodin. Zejména v roztocích nesmějí vznikat nebo být obsaženy žádné částečky, které ucpávají sondu. Podstatným požadavkem na takovéto roztoky je.
aby zůstala po celou dobu podávání zachována pokud možno vysoká a trvalá aktivity všech tam obsažených zažívacích enzymů. Dále je pro roztoky vhodné pro kontinuální gastrointestinální aplikaci nutné, aby byly k dispozici bez růstu zárodků, tedy například byly konzervované proti růstu zárodků, výhodně aby byly steří lni.
Úkolem vynálezu tedy bylo dát k dispozici proti vlhkostí způsobovanému poklesu lipolytické aktivity stabilizované, lipasy a proteasy obsahující, ve vodě rozpustné farmaceutické přípravky ze směsí zažívacích enzymů, které, rozpuštěny ve vodném médiu, zůstávají stabilní po delší dobu.
Předmětem vynálezu je použití komplexních lipidů jako stabilizujících přísad proti vlhkostí způsobovanému poklesu lipolytické aktivity ve vodě rozpustných farmaceutických přípravků z lipasy a proteasy obsahujících směsí zažívacích enzymů, zejména z pankreatin obsahujících směsí zažívacích enzymů, které jsou vhodné pro přípravu vodných roztoků pro kontinuální zavádění do gastrointestinálního traktu pomocí sond. Předmětem vynálezu jsou dále takovéto stabilizované, ve vodě rozpustné farmaceutické přípravky ze směsí zažívacích enzymů- Rovněž předmětem vynálezu jsou soupravy pro přípravu pro kontinuální soudovou aplikaci vhodných vodných roztoků směsí zažívacích enzymů.
Komplexní lipidy, které jsou podle vynálezu vhodné jako stabilizační přísady, jsou zpravidla nerozpustné v acetonu. Patří k nim zejména fosfor obsahující a bezuhlohydrátové fosfolipidy, uhlohydráty obsahující a bezfosfořové glykolipidy a jejich směsi. Účelně se používají jenom fosfolipidy nebo směsi s obsahem fosfolipidů a glykolipidů.
Jako fosfolipidy, které mohou být použity podle vynálezu jako stabilizační přísady k směsím zažívacích enzymů s obsahem lipas a proteas, zejména k pankreatin obsahujícím směsím zažívacích enzymů, jsou zejména vhodné soli aniontfl obecného vzorce I,
Θ O
R’ 1 R2 i O—P—-OR3 I
1 o 1 1 A i 1 O 1
1 H—C- 1 1 —c— 1 1 -c—H i
R* 1 H 1 H
kde
R1 znamená vodík nebo alkanoylový zbytek s 10 až 25 uhlíkovými atomy, jehož uhlovodíkový zbytek může případně obsahovat 1 až 4 dvojné vazby,
R2 znamená vodík nebo alkanoylový zbytek s 10 až 25 uhlíkovými atomy, jehož uhlíkový zbytek mflže případně obsahovat 1 až 4 dvojné vazby, nebo, jestliže R4 nezastupuje vodík, také mflže znamenat vodík,
R3 znamená vodík, nižší alkylovou skupinu, která mflže být substituovaná skupinou amino, nižší trialkylamonio, karboxylovou skupinou, vázanou na uhlíkový atom nesoucí aminofunkci nebo hydroxy substituovanou cyk1oa1ky1skup i nou,
R4 znamená vodík nebo uhlovodíkový řetězec s 10 až 25 uhlíkovými atomy, který mflže případně obsahovat 1 až 4 dvojné vazby,
A zastupuje kyslík nebo NH, s fyziologicky snesitelným kationtem.
Jako fyziologicky snesitelné kationty jsou vhodné lonty amonné, kationty alkalického kovu nebo prvku alkalických zemin výhodně sodíku, draslíku nebo vápníku, jakož i další fyziologicky snesitelné jedno- nebo vícemocné kationty. Pokud R3 obsahuje dusíkový atom, mflže tento tvořit kvarterní amonný iont, který může rovněž sloužit jako kationt, takže se vytvoří na vnějšek nenabité vnitřní soli.
Pokud ve sloučeninách obecného vzorce I zastupují R1 a/nebo R2 alkanoylové zbytky, tak tyto mohou mít řetězec nerozvětvený nebo rozvětvený, zpravidla je nerozvětvený a obsahuje 10 až 25, výhodně 16 až 20 uhlíkových atomůPřípadně může alkanoylový zbytek obsahovat až 4 dvojné vazby. Jako alkanoylové zbytky se mohou vyskytovat zejména zbytky mastných kyselin s dlouhým řetězcem jako je kyselina nervonová, kyselina lignocerová, kyselina palmitová, kyselina palmitoleinová, kyselina stearová, kyselina olejová, kyselina linolová, kyselina linolenová, kyselina arachová nebo kyselina arach i don ová.
Pokud je substituent R3 nižší alkylová skupina nebo ji obsahuje, může mít řetězec nerozvětvený nebo rozvětvený a obsahovat zejména 1 až 4, výhodně 1 až 2 uhlíkové atomyPokud R3 znamená skupinou hydroxy substituovanou cykloalkylovou skupinu, tak tato může obsahovat 3 až 6 uhlíkových atomů a být jedno- nebo vícenásobně substituována hydroxy. Výhodně obsahuje cykloalkylová skupina 5 až 6 uhlíkových atomů, které mohou být případně substituované hydroxy.
Zbytek R30 představuje výhodně hydroxy nebo alkoxyzbytek, vzniklý esterifikací jedno- nebo vícemocného alkoholu fosfátovou skupinou, přičemž jedno- nebo vícemocný alkohol je vybraný ze skupiny, která se skládá z ethanolaminu, cholinu, šeřinu, glycerinu a myo-inositolu.
Pokud zbytek R4 je uhlovodíkový řetězec, tak tento může být nerozvětvený nebo rozvětvený a zpravidla je nerozvětvený a obsahuje 10 až 25, výhodně 12 až 20, ještě výhodněji 15 uhlíkových atomů- Případně může uhlovodíkový řetězec obsahovat až 4, výhodně 2, ještě výhodněji 1 dvojnou vazbu.
Zbytek Λ může být kyslík nebo NH-skupina.
Výhodně přicházejí jako fosfolipidy v úvahu kyselina fosfatidová (kyselina 1,2,-diacy1-sn-glycerol-3-fosforečná), fosfatidylcholin (1,2-diacyl-sn-glycerol-3-fosforylcholin), fosfatidylethanolamin (1,2-diacyl-sn-glycerol-3-fosforylethanolamin), fosfatidylserin (l,2-diacyl-sn-glycerol-3fosforylserin) a fosfatidylinosit (1,2-diacyl-sn-glycerol-3fosforylinosit) a v případě, že fosfolipidy jsou živočišného původu jako například slepicí vejce, tak také sfingomyelin, jakož i směsi těchto sloučenin. Řečené 1,2-diacylfosfolipidy mohou být za určitých podmínek, třeba enzymatickým vlivem fosfolipasy, částečně hydro1yzovány. Podle povahy fosfolípasy mohou být přitom zbytky R1, R2, R3 nebo také [R30P02l~ 1,2-diacylfosfolipidu nahrazeny vodíkem. Jestliže nejméně jeden ze jmenovaných molekulových zbytků na fosfolipldové molekule je hydrolyzován, tak vzniknou takzvané lysofosfolipidy, zejména lysofosfatidylcholin, lysofosfatidylethanolamin, lysofosfatidylinosit, lysofosfatidylserin a kyselina lysofosfatidová- Také tyto lysofosfolipidy jsou vhodné jako stabilizační přísady k lipasy a proteasy obsahujícím směsím zažívacích enzymů, zejména k pankreatin obsahujícím směsím zažívacích enzymů, ve smys1u tohoto vyná1ezu.
Jako glykolipidy mohou být použity především v rostlinách se vyskytující takzvané fytoglykolipidy obecného vzorce II,
Rž R6 R7 i I I o o o
I I I (II)
H—C-C-C—H
I I I
Η Η H kde
R5 a R6 znamená nezávisle na sobě podle okolností alkanoylový zbytek s 1O až 25 uhlíkovými atomy, jehož uhlovodíkový zbytek mfiže mít případně 1 až 4 dvojně vazby nebo je to vodík, přičemž ale R5 a R6 nemohou oba současně znamenat vodík a
R7 znamená mono- nebo disacharidový zbytek, jehož sacharidové stavební kameny jsou vybrány ze skupiny, skládající se z d-fruktosylu, d-galaktosylu, d-glukosylu a d-mannosylu, jakož i jejich směsi.
Pokud ve sloučeninách obecného vzorce II představují R5 a R6 alkanoylový zbytek, tak je tento rozvětvený nebo nerozvětvený a zpravidla je nerozvětvený a obsahuje 10 až 25, výhodně 16 až 20 uhlíkových atomů. Případně mfiže alkanoylový zbytek obsahovat až 4 dvojné vazby. Jako alkanoylové zbytky přicházejí v uvahu zejména zbytky mastných kyselin s dlouhými řetězci jako je kyselina palmitová, kyselina palmitoleinoná, kyselina stearová, kyselina olejová, kyselina linolová, kyselina linolenová nebo kyselina arachová.
Zbytky R7 představují mono- a disacharidové zbytky, které je možno vytvořit z molekul cukrů d-galaktosy. d-glukosy, d-mannosy nebo d-fruktosy. Zvláště výhodně má jako R7 význam d-galaktosa (potom se jedná o monoga1aktosy1-diglycerid, MGDG) nebo digalaktosa (potom se jedná o digalaktosyl-diglycerid, DGDG: 1,2-diacy1-[«-D-galaktosy1-(1 -> 6Ι-β-d-galaktosy1(1 -> 3)1-sn-glycerin).
Fosfolipidy obecného vzorce I a glykolipidy obecného vzorce II mají na středním uhlíkovém atomu glycerinové kostry vždy centrum chirality a mohou mít konfiguraci R- nebo S-. Pro účel vynálezu mohou být použity jednotlivé stereoizomerní formy sloučenin obecného vzorce I a/nebo obecného vzorce II, jakož i odpovídající směsi.
Pro stabilizaci podle vynálezu farmaceutických přípravků z lipasy a proteasy obsahujících směsí zažívacích enzymů, zejména z pankreatin obsahujících směsí zažívacích enzymů se osvědčily jako prospěšné takové lipidové směsi, jak jsou získávány z přírodních zdrojů a které představují směsi různých fosfolipidů a případně různých glykolipidů- Jako výhodné příklady takovýchto přírodních lipidových směsí jsou jmenovány lecithiny. Zdroje takovýchto přírodních lecithinů mohou být zejména rostliny jako sojové boby, slunečnice, řepka, kukuřice nebo arašídy, jakož i živočiši nebo živočišné produkty jako je vaječný žloutek nebo mozková substance, ale také mikroorganismy. Lecithiny přírodního původu dodávají komerčně různí dodavatelé.
Z přírodně získaných lecithinů je pro účely podle vynálezu zejména vhodný sojový lecithin, zejména o fosfolipidy obohacený sojový lecithin jako například sojový lecithin s obsahem fosfolipidů 98 % hmotnostních. Neopracované, neobohacené rostlinné lecithiny obsahují zpravidla určitý podíl fytoglykolipidů- Přírodně získávané lecithiny jsou směsi různých fosfolipidů a v případě rostlinného původu také glykolipidů, jejichž složení není jednotné, nýbrž kolísá v závislostí na jejich původu. Tak vedle shora jmenovaných součástí se v podružném množství mohou vyskytovat ještě další fosfolipidy. Tabulka 1 slouží k tomu, aby znázornila průměrná složení některých neopracováných, neobohacených komerčních lecithinů přírodního původu.
Tabulka 1
I “ ’ ' I
, Složení některých lecithinfl hmotnostní) |
Ίr 1
sojový 1 řepkový , arašídový 1vaječný |
lečithin 1lecithin| 1 1 lecithin |lecithin| 1 1
1fosfatidylcholin 22 i 1 1 37 J 1 I r 23 I I 73 |
|fosfatidylethanolamin 23 1 1 i 29 | 1 1 1 θ 1 I 17 |
1fosfatidylserin 2 i 1 1 I 1 1 i
1fosfatidylinosit 20 I 1 1 14 I 1 1 1 17 1 1 i |
(kyselina fosfatidová 5 1 i 1 1 1 2 i I 1
1sf i ngomyelín i 1 1 ! 1 1 3 |
1fytoglykolipid 13 1 1 1 20 | 1 1 1 38 | 1 o i
|jiné fosfolipidy 12 1 i 1 12 | - 1
L
Podle vynálezu stabilizované farmaceutické přípravky obsahují výhodně pankreatin obsahující směsi zažívacích enzymů.
V rámci předloženého vynálezu se pod termínem pankreatin rozumí pankreatin izolovaný z pankreatu savců, jehož obsah aktivních proteas byl případně zvýšen autolytickým štěpením tam původně obsažených proteasových zymogenů.
Výhodně se může jednat u pankreatin obsahujících směsí zažívacích enzymů ve farmaceutických prostředcích stabilizovaných podle vynálezu o pankreatin získaný z pankreatu savců, zejména o pankreatin z vepřO, který představuje směs různých zažívacích enzymů- Pankreatin ze savců, který se jako pomocný zažívací prostředek hodí pro humánní výživu, zejména pankreatin z pankreatu vepřů, neobsahuje lipasy pro lidské potřeby vždy v dostatečném množství- Proto je možno takovýmto pankreatinovým preparátům přidat dodatečně lipasy získané například z mikroorganismů- Také takto získané pankreatin/ Upasové směsi představují vhodné enzymové směsi V pankreatinu, který je izolován ze savců, jsou obvykle proteasy, nebyl-li pankreatin podroben žádné další předúpravě, z větší části ve formě proteolytického neaktivního předstupně - zymogenu. Proto může být účelné podrobit surový pankreatin pro farmaceutické účely, který jako takový byl získán známým způsobem vhodnými porážkovými procesy z pankreatu, ještě hydrolytickému ošetření (autolýze). Při tomto ošetření se zymogeny převedou na aktivní proteasy. V tomto autolyticky ošetřeném pankreatinu (v následujícím zkráceně označovaném jako F-pankreatin) je zvláště vysoký obsah aktivních proteas, takže tyto F-pankreatiny jsou co do jejich lipolytické aktivity obzvláště ohroženy- Vynálezu odpovídající použití komplexních lipidů je zejména dobře vhodné pro stabilizaci lipolytické aktivity ve farmaceutických přípravcích s obsahem
F-pankreatinu- Přitom je překvapující, že stabilizace Upasové aktivity se neděje desaktivací ve směsi obsažených aktivních proteas a tyto takto stabilizované enzymové směsi vykazují proto jak amylolytickou a 1ipolytickou, tak také proteolytickou aktivitu.
Pankreatin obsahující směsi zažívacích enzymů ve farmaceutických přípravcích chráněných podle vynálezu mohou kromě pankreatinu nádavkem obsahovat takové lipasy, které jsou obsažené v rostlinách nebo v mikroorganismech- Lipasy z mikroorganismů to mohou být ty, které jsou získávané z bakterií nebo houbových kultur jako jsou plísně, například kmene Rhizopus.
Jako přídavné proteasové podíly mohou být k pankreatin obsahujícím směsím zažívacích enzymů ve fannaceutických přípravcích chráněných podle vynálezu přidány ještě jiné živočišné a rostlinné proteasy, jakož i zejména z mikroorganismů jako jsou bakterie nebo houbové kultury jako jsou plísně, například kmene Aspergi Hus, získatelné proteasy.
Směsi zažívacích enzymů bez obsahu pankreatinu mohou jako lipasy obsahovat lipasy z rostlin a mikroorganismů- Lipasy z mikroorganismů mohou být ty, které jsou získávány z bakterií nebo houbových kultur jako jsou plísně, například kmene Rhizopus. Jako proteasy ve směsích zažívacích enzymů bez obsahu pankreatinu přicházejí v úvahu živočišné nebo rostlinné proteasy, jakož i zejména z mikroorganismů jako jsou bakterie nebo houbové kultury jako jsou plísně, například kmene Aspergi11us, získatelné proteasy.
Farmaceutické přípravky podle vynálezu mohou kromě směsí zažívacích enzymů a komplexních lipidů doplňkově obsahovat ve vodě rozpustné farmaceutické pomocné látky a/nebo přídavné látky. Například mohou být obsaženy nosiče jako uhlohydráty, například mannit nebo rozpustné proteiny, jakož i konzervační prostředkyFarmaceutické přípravky z pankreatin obsahujících směsí zažívacích enzymů ve smyslu vynálezu mohou být ve vodě rozpustné prášky, které kromě pankreatinu obsahují zejména F-pankreatin, komplexní lipidy v množství vystačujícím pro stabilizaci lipolytické aktivity za vlhka a případně přídavné, v technice známé, ve vodě rozpustné pomocné a/nebo přídavné látky.
Pro přípravu ve vodě rozpustných prášků mohou být enzymové směsi dalekosáhle zbaveny ve vodě nerozpustných podílů. Za tímto účelem může být vodný přípravek F-pankreatinu pomocí vhodného, v technice známého postupu pro oddělování pevných látek, například odstřeďováním nebo filtrací, zbaven nerozpuštěných pevných látek a získaný roztok, případně po přídavku dalších pomocných a/nebo přídavných látek, známými metodami, například filtrační sterilizací, sterilizován.
V návaznosti mohou být obsažené látky získaného čirého, případně sterilního roztoku známým sušicím postupem, například vymrazovacím sušením, opět získány jako pevné látky. Takto získané přípravky jsou vhodné pro přípravu po více hodin, například až osmi hodin, stabilních roztoků, prostých zárodků, které jsou vhodné pro kontinuální, rovnoměrnou gastrointestinální aplikaci pacientovi, například sondou.
Termínem kontinuální aplikace se rozumí v podstatě nepřerušené podávání vodných, případně sterilních roztoků s obsahem farmaceutických přípravků podle vynálezu po dobu jedné až více hodin, například osmi hodin nebo přes noc. Kontinuální aplikace roztoků může být výhodně uskutečňována zažívacím traktem, například do žaludku nebo do tenkého střeva v1oženou sondou.
Účinnost 1ecithinových přísad je dalekosáhle nezávislá na relativním poměru 1ipasa/proteasa v enzymové směsi. Vhodné jsou například enzymové směsi, ve kterých poměr 1ipasa/celková proteasa - měřeno poměrem příslušných aktivit, které byly stanoveny podle ustanovení instituce Federation Internationale Pharmaceutique“ (nadále označováno zkratkou FIP) (viz R.
Ruyssen a A. Lauvers, Pharmaceutical Enzymes, Scientific Publishing Company, Gent 1978, s. 74 - 82, nadále citováno jako Lauvers) a v následujícím bude udáváno v relativních jednotkách aktivity pod zkratkou FIP-E/g - může být 5=1 až 30:1.
Zásadně působí přísada komplexních lipidů podle vynálezu k farmaceutickým přípravkům z lypasy a proteasy obsahujících směsí zažívacích enzymů, zejména z pankreatin obsahujících směsí zažívacích enzymů, stabilizaci proti vlhkostí způsobovanému poklesu lipolytické aktivity. Termínem vlhkost se má rozumět v podstatě vodná vlhkost, která může být v rozmezí od velmi nepatrného obsahu vlhkosti v prášku směsi zažívacích enzymů až po vodné přípravky z tohoto prášku.
Přísada komplexních lipidů podle vynálezu se prokazuje jako úěelná při získávání a podávání farmaceutických přípravků z pankreatin obsahujících směsí zažívacích enzymů pro stabilizaci lipolytické aktivity již při výrobních nebo získávacích postupech během takových procesních kroků, při nichž může dojít k inatkivaci lipasy, jako například při zpracování enzymové směsi za vlhka.
Ve vodném roztoku farmaceutického přípravku obsahujícího směs zažívacích enzymů je stabilizující účinek přidaných komplexních lipidů, zejména lecithinů, mimo jiné také závislý na hodnotě pH přípravku. Podle vynálezu se prokázaly jako příznivé hodnoty pH v rozmezí pH 3,5 až 9,0, výhodně v oblasti pH 4,0 až 7,0 a ještě výhodněji v oblasti pH 5,0 až 6,5.
Pro docílení patrné stabilizace lipolytické aktivity ve vodných farmaceutických přípravcích ze směsí zažívacích enzymů a z těchto přípravků připravítelných vodných roztoků pro sondovou aplikaci, je nutné přidat určité minimální množství komplexních lipidů- Obvykle mohou použité směsi zažívacích enzymů v přípravcích podle vynálezu vykazovat obsah lipasy, vyjádřený v jednotkách aktivity, například 2-000 až 200-000 FIP-E/g, jestliže obsahují jen lipasy ze sekretu pankreatu savců a od 2.000 do 500.000 FIP-E/g, jestliže obsahují lipasy z mikroorganismů, buď samotné nebo v kombinaci s lipasy z pankreatu. Množství nejméně 1 % hmotnostního komplexních lipidů, vztaženo na nasazené množství pevné směsí zažívacích enzymů s obsahem pankreatinu, například množství od 1 do 10 % hmotnostních, je potom vhodné pro dosažení patrné stabilizace. Přídavek větších množství komplexních lipidů je rovněž možný, nezpůsobuje však už žádné, za zmínku stojící, zlepšení stabilizace lipolytické aktivity. Tak je například pro stabilizaci směsí s obsahem pankreatinu nebo pankreatinu a přídavných lipas s komplexními lipidy zejména vhodný lecithin, přísada nejméně 1 % hmotnostního, výhodně 2 až 5 % hmotnostních a ještě výhodněji 3 % hmotnostní lecithinu.
S pomocí použití podle vynálezu komplexních lipidfl je možno takovéto vodné roztoky farmaceutických přípravků z pankreatin obsahujících směsí zažívacích enzymů, které mají sklon k rychlému poklesu lipolytické aktivity, stabilizovat do té míry, že lipolytická aktivita ve směsi obsažených lipas v delším časovém úseku klesá jen nepatrně. Tak vykazuje vodný roztok přísadou lecithinu stabilizovaného F-pankreatinu po osmihodinové inkubační době při teplotě místnosti lipolytickou zbytkovou aktivitu ve výši 85 % původní výchozí aktivity.
V komplexními lipidy stabilizovaném vodném roztoku F-pankreatinu bylo ještě po 24 hodinové inkubační době dokazatelné 50 % lipolytické výchozí aktivity. Naproti tomu ve srovnávacím roztoku, který nebyl stabilizován, klesla za jinak stejných podmínek lipolytická aktivita po osmi hodinách pod 20 % výchozí aktivity.
Stabilizace podle vynálezu vodných farmaceutických přípravků z lipasy a proteasy obsahujících směsí zažívacích enzymů proti poklesu lipolytické aktivity ve vodném médiu otevírá možnost podávat pacientům směsi zažívacích enzymů takovéhoto druhu ve formě vodných roztoků kontinuálně zaváděním do gastrontestinálního traktu. K tomuto účelu používané vodné roztoky by přirozeně měly být prosté zárodků, výhodně by dokonce měly být sterilní. Roztoky prosté růstu zárodků mohou být například roztoky, v nichž přísada konzervačních činidel zabraňuje množení samomnožitelných zárodků.
Podle vynálezu je dávána k dispozici souprava pro přípravu pro kontinuální zavádění do gastrointestinálního traktu pomocí sondy vhodných vodných, proti poklesu lipolytické aktivity stabilizovaných roztoků prostých zárodků směsí zažívacích enzymů, vyznačující se tím, že jako součásti obsahuje:
a) ve vodě rozpustný, pevný, zárodkůprostý farmaceutický přípravek z lipasy a proteasy obsahujících směsí zažívacích enzymů, který případně může obsahovat dostačující množství komplexních lipidů pro stabilizaci vodných roztoků, které mají být připravovány, proti poklesu lipolytické aktivity, a
b) pro přípravu vodných roztoků postačující množství zárodečného růstu prostého vodného rozpouštědla, které kromě vody může obsahovat fyziologicky snesitelné soli a pomocné látky a, jestliže v ad a) jmenovaných pevných farmaceutických přípravcích není obsaženo postačující množství komplexních lipidfl proti poklesu lipolytické aktivity pro stabilizaci vodných roztoků, které mají být připravovány, doplňkově obsahuje postačující množství komplexních lipidfl pro stabilizování proti poklesu lipolytické aktivity vodných roztoků, které mají být při pravovány.
Zejména může v soupravě použitý pevný přípravek a) být vymrazováním usušená, lipasy a proteasy obsahující směs zažívacích enzymů, která případně obsahuje komplexní lipidy. Výhodně se u směsi zažívacích enzymů jedná o pankreatin obsahující směs zažívacích enzymů.
Vodné roztoky, které jsou prosté růstu zárodků, mohou být uchovány přísadou v technice známých konzervačních prostředků, například parabenu. Sterilní roztoky, které rovněž jsou roztoky prosté růstu zárodků, mohou být uchovány steri 1izačními postupy, které jsou v technice známé, například filtrační steří 1izaci.
Lipidy v soupravě obsažené se mohou výhodně vyskytovat jako ve směsi zažívacích enzymů (součást a)) již obsažené přísady. Pro výrobu prášku směsi zažívacích enzymů, který obsahuje již komplexní lipidy, je například možno smísit roztok komplexních lipidů, případně prostý zárodečného růstu, s roztokem, případně prostým zárodečného růstu, směsi zažívacích enzymů a v návaznosti postupem v technice známým, například vymrazovacím sušením, usušit. Aby se z tohoto získal sondou aplikovatelný roztok, musí komplexní lipidy, jakož i směs zažívacích enzymů obsahující prášek být smíseny se spolu v soupravě rovněž obsaženým rozpouštědlem, případně v podmínkách chudých na zárodky nebo v podmínkách zárodkůprostých. Komplexní lipidy se mohou ale také již vyskytovat v rozpouštědlu (součást b)), například rozpuštěné jako koloid. Aby se získaly sondou aplikovatelné roztoky, musí být v tomto případě komplexní lipidy obsahující vodný roztok nebo koloid, případně za sterilních podmínek, smísen se směsí zažívacích enzymů (součást a)).
Příklady provedení vynálezu
1. Stabilizování lipolytické aktivity vodných pankreatin obsahujících ivztoků sojovým lecithinem.
Pro stanovení různých změn lipolytické aktivity s přísadou a bez přísady komplexních lipidů ve vodných pankreatin obsahujících přípravcích byly připraveny příslušné vzorky a inkubovány při 30°C. Z inkubačních vzorků byly stanoveny časové změny Upasové aktivity podle metody Fédération Internationale Pharmaceutique/European Pharmacopeia” (nadále označováno zkratkou FlP/Ph-Eur-, viz Lauvers, s. 74 - 82). Při této standardní metodě stanovení se nechá vzorek, zkoušený na lipasovou aktivitu, působit na triglycerid olivového oleje a uvolněné karboxylově kyseliny se titrují hydroxiden sodným na hodnotu pH 9. Lipasová aktivita vzorku se při tom stanoví srovnáním rychlosti, jakou vzorek hydrolyzuje emulzi olivového oleje s rychlostí, jakou suspenze pankreasového referenčního prášku hydrolyzuje stejný substrát za stejných podmínek.
1.1 Zlištování lipastwé stability bez přísady lecithínu
79,35 mg ve vodě rozpustného vymrazením usušeného F-pankreatinu s lipolytickou aktivitou 50473 FIP-E/g bylo rozpuštěno ve 4,0 ml ledově chladné vody nejvyšší čistoty (Hanopur<B> firmy Barnstead), hodnota pH byla IN HC1 nastavena na 6,2 a šarže potom doplněna vodou nejvyšší čistoty na 5,0 ml- Z této šarže byl okamžitě odebrán vzorek pro stanovení lipolytické výchozí aktivity (vzorek nulté minuty). Zbývající šarže by1a í nkubována na 30°C vodn ί 1ázn i - Pro odběr vzorku byla šarže dobře promíchána, vzorek odebrán vhodnou pipetou a ihned zředěn ledově chladným Upasovým rozpouštědlem tak, aby stanovení lipasy bylo k dispozici mezi 0,5 a 1,5 ml zkoušeného vzorku s lipolytickou aktivitou od 8 do 16 FIP-E. Jako lipasové rozpouštědlo byl použit podle FIP/Ph.Eur. roztok 10,0 ml NaCl, 6,06 g tris-(hydroxymethyl)-aminomethanu (v následujícím označován zkratkou TRIS) a 4,9 g anhydridu kyseliny maleinové v 900 ml vody nejvyšší čistoty, jehož hodnota pH byla 4 N hydroxidem sodným nastavena na pH 7 a potom byl doplněna vodou nejvyšší čistoty na 1.000 ml.
Pro stanovení časového průběhu lipasové aktivity byly po 15, 30, 60, 120 a 180 minutách odebrány z thermostatované šarže další vzorky a v nich vždy během 30 minut stanovena lipasová aktivita metodou FIP/Ph.Eur. (Lauwers, s. 78).
Zjištěná lipasová aktivita vzorku nulté minuty v jednotkách FIP-E/ml byla vzata jako hodnota 100 % a hodnoty aktivity naměřené během dalších inkubačních dob byly vztaženy procentuálně na tuto hodnotu. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2.
1.2 Zjišťování lipasové stability s přísadou lecithínu
Pro přípravu 1ecithinového roztoku bylo 100 mg sojového lecithínu (obsah fosfolipídu 98 % hmotnostních od firmy Roth) při teplotě místnosti uhněteno nejprve s trochou vody nejvyšší čistoty a potom doplněno na 20,0 ml. Na směs bylo za míchání po 2 minuty až do dosažení homogenního, koloidního roztoku působeno ultrazvukem. Potom bylo rozpuštěno 80,0 mg ve vodě rozpustného, vymrazením vysušeného F-pankreatinu s lipolytickou aktivitou 54694 FIP-E/g ve 4 ml vody nejvyšší čistoty a hodnota pH roztoku nastavena 1 N HC1 na 6,2. Bylo přidáno 0,4 ml leclthlnového roztoku (2,5 % hmotnostních lecithinu, vztaženo na nasazený práškový F-pankreatin) a šarže byla pří dobrém promíchávání doplněna ledově chladnou vodou nejvyšší čistoty na 5,0 ml.
Odběr vzorku a stanovení 1ipolytických aktivit při příslušných inkubačních dobách se provádělo tak, jak je popsáno v bodě 1.1. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2.
Tabulka 2
I Změny 1ipolytických aktivit ve vodných pankreatinových | roztocích s přísadou a bez přísady lecithinu
PH přísada leči th i nu lipolytické aktivity po čase t [min]
T
1 [% hmotnostní] | 1 1 0 i 15 1 1 30 i 1 60 | 120 I 1 180 i ι I
i i 6,2 1 — | 1 1 1 íoo | 1 69 | 1 1 51 | 1 41 1 | 26 1 1 1 1 21 i I I
I i 6,2 | 2,5 j I 103 | 1 93 | 1 90 1 86 1 | 80 1 1 I 75 |
2- Stabilizování lipolytické aktivity vodných pankreatin obsahujících přípravků v časové· průběhu 8 hodin
Ve vodných pankreatinových přípravcích nastávají, v závislosti na různých faktorech jako je teplota, hodnota pH a proteolytická aktivita obsažených proteas, ztráty lipolytické aktivity. Přísadou komplexních lipidů jako je lecithin může být aktivita lipasy během osmihodinové inkubace při 25°C znatelně stabilizována- V následujícím pokusu byly proto v průběhu 8 hodin srovnávány lipolytické aktivity ve vodných suspenzích a roztocích F-pankreatinu vždy s přísadou a bez přísady komplexních lipidů.
2.1 Příprava inkubační šarže
Pro porovnání byly zkoumány čiré pankreatinové roztoky a pankreatinové suspenze z F-pankreatinu vždy s přísadu a bez přísady lecithinu.
Byly připraveny následující vodné přípravky:
a) Pankreatinový roztok bez lecithinu
V ledově chladné vodě nejvyšší čistoty bylo rozpuštěno
77,5 mg ve vodě rozpustného, vymrazením vysušeného
F-pankreatinového prášku jako je popsáno pod bodem 1.1, přičemž hodnota pH byla nastavena IN HC1 na 6,2b) Pankreatínový roztok s lecithinem
81,0 mg ve vodě rozpustného, vymrazením vysušeného
F-pankreatinového prášku bylo jako je popsáno v bodě 1.2 po nastavení hodnoty pH na 6,2 předmíseno s 0,94 ml 1ecithinového roztoku a doplněno ledově studenou vodou nejvyšší čistoty na 5,0 ml.
c) Pankreatinová suspenze bez lecithinu
2,0 g F-pankreatinu bylo 30 minut mícháno ve 100 ml ledově chladné vody nejvyšší čistoty, získána kalná suspenze.
20d) Pankreatinová suspenze s lecithinem
2,0 g F-pankreatinu bylo předmísemo se 100 mg sojového lecithinu (firmy Roth) a mícháno 30 minut ve 100 ml ledově chladné vody nejvyšší čistoty. Byla získána kalná suspenze.
2.2 Provedení pokusu
Z ledově chladných roztoků respektive suspenzí, připravených podle postupů v bodu 2-1, byly ihned po jejich přípravě odebrány vzorky pro stanovení lipolytické výchozí aktivity (vzorky nulté minuty). Potom byl zbytek šarže ve zkumavkách inkubován 8 hodin při 25°C. Během této doby byly odebrány další vzorky po 30 minutách a následně v hodinových intervalech- Odběr vzorků, zředění a stanovení Upasové aktivity bylo prováděno jak je popsáno v bodu 1.1, pokusná teplota ale nyní byla, na rozdíl od horního předpisu, 25°C.
Lipasová aktivita (udávaná ve FIP-E/ml) vzorku nulté minuty“ určité inkubační šarže byla stanovena jako hodnota 100 % a během dalších inkubačních časů naměřené aktivity byly procentuálně vztaženy na tuto hodnotu. Výsledky jsou zachyceny v následujících tabulkách 3 a 4.
Tabulka 3
Průběh lipolytické stability během 8 hodin v pankreatinových roztocích s přísadou a bez přísady lecithinu
-,-,-p šarže J obsah | pH lecithinu| l$£ hmot. 3 | % lipolytické aktivity po řase t [h]
-j-(-(-!-!-,-( ,
0,51 1
3 4 51 6
a) |6,2
100
721 64 —i-1-1-1—
47| 36| 30| 27| 24
b)
-1—
5,8 |6,2
I_l
100 —1— i 98 —i-1-1-1—
96| 98| 94| 92| 89
I_i_I_I j i
Tabulka 4
Průběh lipolytické stability během 8 hodin v pankreatinových suspenzích s přísadou a bez přísady lecithinu
-1-Γ šarže| obsah J pH lecithinu!
1% hmot.3| % lipolytické aktivity po řase t [hl
-j-,-,-(,-j-(-j-r
0,5Í 1
d) |7.1
100 —i—
721 56 —i-1—
43l 34| 29
251 21
181 16
J7,l
I
100 | 97 —I-1—
92| 84| 77
I_I
721 69
641 60
3- Stabilizování mikrobiální lipasy vůči mikrobiální protease přísadou komplexních lipidů
V následujícím pokusu bylo ukázáno, že také aktivitu mikrobiálních lipas v přítomnosti aktivních mikrobiálních proteas je možno stabilizovat přísadou komplexních lipidů- Pro tento účel byly připraveny tři zkušební roztoky, které obsahovaly mikrobiální lipasy, mikrobiální lipasy plus mikrobiální proteasy, jakož i mikrobiální lipasy s přísadou lecithinů plus mikrobiální proteasy. V návaznosti byly stanoveny lipolytické aktivity v těchto zkušebních roztocích a výsledky pro srovnání uspořádány do tabulek3.1 Příprava zkušebních roztoků
Byly připraveny následující roztoky:
a) Lipasový roztok
245 mg lipasy z Rhizopus oryzae (Lipase 7-AP 15, Amano Pharmaceutical Co., LTD, Hagoya, Japonsko) s aktivitou 170.000 FIP-E/g bylo rozpuštěno v 50 ml ledově chladného roztoku chloridu sodného o koncentraci 1 hmotnostního.
b) Proteasový roztok
390 mg Aspergi1lus-proteasy (Prozyme 6; Amano Pharmaceutical Co., LTD, Hagoya, Japonsko) s aktivitou 7.600 FIP-E/g bylo rozpuštěno ve 25 ml ledově chladného roztoku chloridu sodného o koncentraci 1 % hmotnostního.
c) Leeithinový roztok g lecithinů (čistý sojový lecithin s obsahem fosfolipidů 98 % hmotnostních od firmy Roth) byl předložen do 40 ml vody nejvyšší čistoty (Nanopure<B> od firmy Barnstead) a za přelévání po dobu 2 minut dispergován ultrazvukem na koloid.
Z těchto roztoků byly v ledové lázni připraveny následující inkubační roztoky o celkovém objemu 5 ml:
Tabulka 5
I- I
I Inkubační roztoky pro stanovení Rhizopus-1ipasové aktivity j
1-,-r
1 i nkubačn í | I i pasový roztok 1 proteasový , roztok lecithinovýj roztok 1 I roztok 1 NaCl |
roztok 1 1
1 i | 1 3 ml i i | 2 ml |
1 ii 1 1 3 ml | 1 ml 1 I 1 ml |
t 1 ni 1 L. 3 ml j 1 ml j- 1 1 ml | I 1
Hodnota pH všech inkubačních roztoku činila po přípravě
6,5 při 37°C.
3.2 Provedení pokusů
Z ledově chladných inkubačních roztoků I, II, III byly okamžitě po jejich přípravě odebrány vzorky pro stanovení výchozí aktivity (vzorky nulté minuty“), zbytek těchto třech šarží byl inkubován ve vodní lázni při 37°CPro odběr vzorků byla šarže dobře promíchána, vzorek byl odebrán vhodnou pipetou a okamžitě rozředěn ledově chladným Upasovým roztokem, tak jak bylo popsáno v bodu 1.1. Z těchto vzorků byla odebráno vždy určitá množství (v tabulce 6 označeno X“) a zředěno 1 ^-ním roztokem chloridu sodného na 5 ml.
Z těchto zkušebních roztoků bylo vždy nasazeno 0,5 ml v testu Upasové aktivity24
Tabulka 6
Γ Odebrané množství vzorku pro přípravu zkušebního roztoku 1
zkušební -r roztok 1 1 1 X pl zkušebního roztoku odebraného po čase t =
Γ 1 1 0 minut 1 i 1 30 1 minut 1 I 60 m i nut
I r 1 1 150 1 1 1 1 1 160
II 1 1 ! 160 1 1 . I 1 500 i 1000
III Γ i 1 160 1 i I 250 j 250 _1
3.3 Stanovení rhizopus-Upasové aktivity
Katalytická aktivita rhizopus-1ipasy byla měřena stanovením množství volných mastných kyselin, které se vytvořily během definované doby při pH 7,0 a 37°C z emulze olivového oleje v přítomnosti taurocholanu sodného o koncentraci 0,025 % hmotnostních- Aby bylo zaručeno, že budou podchyceny všechny mastné kyseliny, následovala potom titrace až na pH 9,0. Slepý titraění pokus substrátové emulze sloužil pro podchycení titrovatelných substancí, které nevznikly lipasovou aktivitou.
Rhizopus-1ipasová aktivita pokusné substance byla stanovena porovnání rychlosti, kterou suspenze substance hydrolyzovala emulzi olivového oleje s rychlostí, kterou suspenze rhizopus-1ipasového retenčního standardu hydrolyzovala stejnou emulzi olivového oleje za stejných podmínek.
Chemikálie
1. Voda =
Používána byla voda nejvyšší čistoty Nanopure(fi) od firmy Barnstead- V následujícím bude označována jako “voda nejvyšší čistoty2. Roztok arabské gumy:
110 g arabské gumy a 12,5 g chloridu vápenatého bylo za míchání rozpuštěno (3 hodiny) ve vodě nejvyšší čistoty, doplněno na 1-000 ml a odstředěno- Roztok byl naplněn do 250 ml plastikových nádob a skladován při -20°CArabská guma (Acaciae-Gumi, DAB 10/Ph.Eur.), chlorid vápenatý p.a.
3. Substrátová emulze:
130 ml olivového oleje a 400 ml roztoku arabské gumy (viz chemikálie ad 2) bylo emulgováno po dobu 15 minut ve vhodné míchačce s vysokým počtem otáček- Teplota byla udržována pod 30°C. Nejméně 90 % kapek v emulzi mělo průměr menší než 3 nm a žádná nebyla větší než 10 pm. Emulze byla připravována denně nová.
Olivový olej (skladovaný v chladničce, jakosti DAB4. Roztok taurocholanu sodného 0,5 % (m/V):
0,5 g taurocholanu sodného (Upasově aktivní směs, směs konjugovaných kyselin žlučových, mj. tuarocholanu sodného) bylo rozpuštěno vodou nejvyšší čistoty na 100,0 mlRoztok byl připravován denně čerstvý.
Tuarocholan sodný (lipasově aktivní směs), FIP26
5. Roztok chloridu sodného 1 % (m/V) ve vodě neivyšší čistoty
6. Ústojný roztok pH 4.5:
g chloridu sodného a 9.2 g dihydrogenfosforečnanu sodného bylo rozpuštěno v 950 ml vody nejvyšší čistoty, nastaveno kyselinou solnou na pH 4,5 a doplněno vodou nejvyšší čistoty na 1.000 mlChlorid sodný p.a., dihydrogenfosforečnan sodný,
NalfePfti x H2O7. Hydroxid sodný 0,1 N
Referenčni suspenzeRhizopus-1ipasový referenční standard byl zamíchán do ústojného roztoku (chemikálie ad 6) a tak zředěn roztokem chloridu sodného (chemikálie ad 5), až enzymový roztok měl 12 až 18 jednotek rhizopus-1 ipasové aktivity FIP-E/ml. Při standardu 55.000 FIP-E na 1 g bylo rozpuštěno 63 mg ve 20 ml ústojného roztoku (chemikálie ad 6) během 15 minut v ledové lázni. 10 ml tohoto roztoku bylo zředěno v ledové lázni roztokem chloridu sodného (chemikálie ad 5) na 100 ml. K testu by1o nasazeno 0,5 ml tohoto roztoku.
Rhizopus-1ipasový referenční standard FIP (fungi-1 ipasa, FlP-standard).
Zkušebn i roztoky:
Byly použity zkušební roztoky I, II a III.
- 27 Provedení pokusůNa autotitrátoru titračního systému “pH-Stat“ od firmy Radíometer byl koncový bod pro pH-Stat-titraci nastaven na pH 7,0. Do reakční nádoby bylo vloženo:
12,0 ml emulze olivového oleje, FIP (chemikálie ad 3)
6,5 ml vody nejvyšší čistoty (chemikálie ad 1)
1,0 ml roztoku taurocholanu sodného (chemikálie ad 4)
Směs byla zahřáta na 37,0°C. Hodnota pH byla 0,1 H hydroxidem sodným (chemikálie ad 7) nastavena na pH 7,0. Potom byla byreta nastavena na 0”Reakce byla nastartována přídavkem 0,5 ml referenční suspenze, když měla být měřena referenční hodnota, nebo 0,5 ml zkoušeného vzorku, jestliže měla být měřena Upasová aktivita ve zkoušeném vzorku. Po 10 minutách byl koncový bod pro pH-Stat-titraci nastaven na pH 9,0. Když byla hodnota pH 9,0 dosažena (tento proces trval méně než 30 sekund), byla titrace přerušena a byla odečtena spotřeba 0,1 N hydroxidu sodného.
Pro stanovení slepé hodnoty byl pro referenční suspenzi a pro zkoušený vzorek koncový bod titrace na titrátoru nastaven ihned na pH 9,0. Po ručním nastavení hodnoty pH v reakční šarži na pH 7,0 a po přídavku 0,5 ml referenční suspenze nebo zkoušeného roztoku bylo okamžitě titrováno na pH 9,0.
Z odečtené spotřeby 0,1 N hydroxidu sodného byla vypočítána rhizopus-1 ipasová aktivita ve FIP-E/mlVe zkoušených roztocích I, II a III zjištěné výchozí lipasové aktivity v jednotkách FIP-E/ml byly vzaty jako hodnoty 100 Během následující inkubační doby v délce 1 hodiny naměření hodnoty aktivity byly potom vždy procentuálně vztaženy na tuto výchozí hodnotu a jsou uvedeny v tabulce 7.
Tabulka 7
1-1 | Stabilizace aktivity rhihozopus-1ipasy sojovým lecithinem
1 zkoušený roztok | % 1 lipolytické aktivity po t =
1 1 1 Γ 0 min 1 1 30 min i I 60 min
|l 1 roztok 1 i pasy | 100 | 1 100 I • 95
lu -j roztok 1 i pasy -*· proteasy | 1 100 | i 17 | 1 6
im 1 roztok 1 i pasy | s lecithinem -+- proteasouj 100 | 1 94 i 1 84
i_ 1 | L
4. Příklady famaceutického přípravku
A) Vezme se 20,0 g F-pankreatinu ve 400 ml vody a hodnota pH se rychle nastaví přídavkem 1 N HC1 na 6,2. Za těchto podmínek se extrahuje 1 hodinu při 4°C. Čirý, pankreatinový extrakt obsahující produkt se odstředí při 53-000 g a následně se steriluje filtrací filtrem s velikostí pórů 2 jjm.
B) 1,0 g sojového lecithinu (98 % hmotnostních fosfatidylcholinu) se rozpustí v 50 ml vody a v zatavené skleněné ampuli se 45 minut sterilizuje při 140°C.
C) 400 ml pod bodem A) připraveného pankreatinového extraktu se v chladu a za sterilních podmínek smísí s 25 ml pod bodem B) připraveného 1ecithinového roztoku. Směs se vymrazením usuší, přičemž se získá 16 g prášku, který se za sterilních podmínek naplní v dávkách po 2,5 g do infuzních láhví.
5. Příklady pro soupravy pro farmaceutické použití
5.1 Souprava 1
A) 40,0 g F-pankreatinu se vloží do 400 ml vody a hodnota pH se rychle přídavkem 1 N HC1 nastaví na 6,2- Za těchto podmínek se extrahuje 1 hodinu při 4°C. Čirý, pankreatinový extrakt obsahující produkt se odstředí při 53.000 g a následně se sterilně přefiltruje přes s velikostí pórů 2 pm. Extrakt se za sterilních podmínek naplní po 25 ml dávkách do 100 ml infuzních láhví a usuší se vymrazením.
B) 2,0 g sojového lecithinu <98 % hmotnostních fosfatidylcholinu) se rozpustí ve 20 ml vody a homogenizuje se ultrazvukem. Koloidní roztok se v zatavené skleněné ampuli sterilizuje 45 minut při 140°C. Z toho se odebere dávka o velikosti 12,5 ml, která se smísí s 1600 ml sterilizované vody a v dávkách po 100 ml se naplní do infuzních láhví.
Pro použití se obsah jedné láhve s obsahem pevných látek z bodu A) smísí s obsahem roztoku jedné láhve z bodu B) .
5.2 Souprava 2
A) 40,0 g F-pankreatinu se vloží do 800 ml vody a hodnota pH se rychle přídavkem 1 N HC1 nastaví na 6,2. Za těchto podmínek se extrahuje 1 hodinu při 4°C. Čirý, pankreatinový extrakt obsahující produkt se odstředí při 53.000 g a usazenina se zahodíB) 32,0 g mannitu se rozpustí ve 200 ml vody, smísí se pankreatinovým extraktem získaným v bodu A) a spojené roztoky se filtračně sterilizují.
C) 5,0 g sojového lecithinu (98 % hmotnostních fosfatidylcholinu) se rozpustí ve 50 ml vody a homogenizuje se ultrazvukem. Tento koloidní roztok se v zatavené skleněné ampuli sterilizuje 45 minut při 140°C.
D) 1000 ml podle bodu B) získaného pankreatinového extraktu se za sterilních podmínek smísí se 16 ml 1ecithinového roztoku, který byl připraven podle bodu C) a usuší se vymrazením- Získaný prášek se v dávkách po 10,0 g sterilně naplní do 200 ml láhví.
E) Deionizovaná a filtračně sterilizovaná voda se naplní za sterilních podmínek do 200 ml láhví.
Pro použití se obsah jedné láhve s práškem podle bodu D) rozpustí v obsahu láhve naplněné vodou podle bodu E-

Claims (21)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použití komplexních lipidů jako stabilizujících přísad proti vlhkostí způsobovanému poklesu lipolytické aktivity ve vodě rozpustných farmaceutických přípravků z lipasy a proteasy obsahujících směsí zažívacích enzymů, které jsou vhodné pro přípravu vodných roztoků pro kontinuální zavádění do gastrointestinálního traktu pomocí sond.
  2. 2. Použití komplexních lipidů podle nároku 1, přičemž lipasy a proteasy obsahující směsi zažívacích enzymů jsou pankreatin obsahující směsi zažívacích enzymů.
  3. 3. Použití komplexních lipidů podle nároku 2, vyznačující se tím, že jsou nasazeny jako stabilizující přísady k farmaceutickým přípravkům z pankreatin obsahujících směsí zažívacích enzymů, které vedle pankreatinu obsahují přídavné lipasy, vybrané ze skupiny, která se skládá z rostlinných lipas, bakteriálních lipas a lipas z houbových kultur.
  4. 4. Použití komplexních lipidů podle některého z předchozích nároku 1 až 3,vyznačující se tím, že jako komplexní lipidy se používají fosfolipidy, glykolipidy nebo jejich směsi
  5. 5. Použití komplexních lipidů podle nároku 4, vyznačující se tím, že jako komplexní lipidy se používají fosfolipidy nebo tyto fosfolipidy obsahující lipidové směsi.
  6. 6. Použití komplexních lipidů podle nároku 5, vyznačující se tím, že jako fosfolipidy se používají soli aniontů obecného vzorce I, θ
    Ο
    R’ R2 Ο=ρ—OR3
    I I ι
    Ο Α ο
    I I i
    Η—C-C-C—Η
    I I ι
    R Η Η (I) kde
    R1 znamená vodík nebo alkanoylový zbytek s 10 až 25 uhlíkovými atomy, jehož uhlovodíkový zbytek případně obsahuje 1 až 4 dvojné vazby,
    R2 znamená vodík nebo alkanoylový zbytek s 10 až 25 uhlíkovými atomy, jehož uhlíkový zbytek případně obsahuje 1 až 4 dvojné vazby, nebo, jestliže R1 nezastupuje vodík, také mfiže znamenat vodík,
    R3 znamená vodík, nižší alkylovou skupinu, která je případně substituovaná skupinou amino, nižší trialkylamonio, karboxylovou skupinou vázanou na uhlíkový atom nesoucí aminofunkci nebo hydroxy subst i tuovanou cyk1oalky1skup i nou,
    R4 znamená vodík nebo uhlovodíkový řetězec s 10 až 25 uhlíkovými atomy, který případně obsahuje 1 až 4 dvojné vazby,
    A zastupuje kyslík nebo NH, s fyziologicky snesitelnými kationty nebo jejich směsmi.
  7. 7- Použití komplexních lipidů, podle nároku 6, vyznačující se tím, že ve fosfolίpidech obecného vzorce I je zbytek R3 vybrán ze skupiny, která se skládá z vodíku, aminoethylu, cholylu, serylu, glycerylu nebo myo-inositylu.
  8. 8. Použití komplexních lipidů podle nároku 7, vyznačující se tím, že se používají fosfolipidy ze skupiny, která se skládá z kyseliny fosfatidové, fosfatidyIcholinu, fosfatidylserinu, fosfatidylethanolaminu, fosfatidylinosítu a sfingomyelinu nebo tyto látky obsahujících směsí.
  9. 9. Použití komplexních lipidů podle nároku 4, vyznačující se tím, že jako komplexní lipidy se používají lecithiny ze sojových bobů, řepky, kukuřice, slunečnic, arašídů, slepičích vajec nebo m i kroorgani smů.
  10. 10- Použití komplexních lipidů podle nároku 9, vyznačující se tím, že jako komplexní lipidy se používají lecithiny ze sojových bobů.
  11. 11. Použití komplexních lipidů podle některého z předchozích nároku 2 až 10, vyznačující se tím, že lipidy se přidávají k pankreatinu nasazenému ve farmaceutických přípravcích již při jeho získávání nebo zpracování pro stabilizování proti poklesu lipolytické aktivity během procesních kroků, které jsou spojeny se zpracováním za vlhka.
  12. 12- Ve vodě rozpustné farmaceutické prostředky z lipasy a proteasy obsahujících směsí zažívacích enzymů, které jsou vhodné pro přípravu vodných roztoků pro kontinuální zavádění do gastrointestinálního traktu pomocí sondové aplikace, vyznačující se tím, že obsahují postačující množství komplexních lipidů podle nároků 1 až 10 pro stabilizování proti vlhkostí způsobovanému poklesu lipolytické aktivity .
  13. 13. Farmaceutické přípravky podle nároku 12, vyznačující se tím, že se u lipasy a proteasy obsahujících směsí zažívacích enzymů jedná o pankreatin obsahující směsi zažívacích enzymů.
  14. 14. Farmaceutické přípravky podle nároku 13, vyznačující se tím, že směsi zažívacích enzymů obsahují kromě pankreatlnu přídavné lipasy, vybrané ze skupiny, skládající se z rostlinných lipas, bakteriálních lipas a lipas z houbových kultur.
  15. 15. Farmaceutické přípravky podle některého z nároků 12 až 14, vyznačující se tím, že obsahují takové množství komplexních lipidů, že lipolytická aktivita je stabilizována vodnými roztoky přípravků tak, že lipolytická výchozí aktivita vodného roztoku za dobu 8 hodin poklesne nejvýše o 20 %
  16. 16- Farmaceutické přípravky podle nároku 15, vyznačující se tím, že obsahují takové množství komplexních lipidů, aby lipolytická výchozí aktivita vodných roztoků přípravků za dobu 24 hodin poklesla nejvýše o 50 %.
  17. 17. Farmaceutické přípravky podle některého z nároků 12 až 14, vyznačující se tím, že obsahují komplexní lipidy pro stabilizaci proti poklesu lipolytické aktivity v koncentraci od 1 do 10 t hmotnostních, výhodně od 2 do 5 % hmotnostních, vztaženo na směs zažívacích enzymů
  18. 18- Farmaceutické přípravky podle některého z nároků 12 až 17, vyznačující se tím, že tam obsažený pankreatin je autolyticky upravený pankreatin.
  19. 19- Souprava pro přípravu a kontinuální zavádění do gastrointestinálního traktu pomocí sond, proti poklesu lipolytické aktivity stabilizovaným, zárodečného růstu prostých, vodných roztoků směsí zažívacích enzymů, vyznačující se tím, že jako součásti obsahuj í:
    a) ve vodě rozpustný, pevný, zárodkůprostý farmaceutický přípravek lipasy a proteasy obsahujících směsí zažívacích enzymů, který případně může obsahovat dostačující množství komplexních lipidů podle některého z nároků 1 až 10 pro stabilizaci vodných roztoků, které mají být připravovány, proti poklesu lipolytické aktivity a
    b) pro přípravu vodných roztoků postačující množství zárodečného růstu prostého, vodného rozpouštědla, které kromě vody případně obsahuje fyziologicky snesitelné soli a pomocné látky a, jestliže v ad a) jmenovaných pevných farmaceutických přípravcích není obsaženo postačující množství komplexních lipidů pro stabilizaci vodných roztoků, které mají být připravovány, proti poklesu lipolytické aktivity, doplňkově obsahuje postačující množství komplexních lipidů podle některého z nároků 1 až 10, pro stabilizování vodných roztoků, které mají být připravovány, proti poklesu lipolytické aktivity ,
  20. 20. Souprava podle nároku 19, vyznačující se tím, že pevný přípravek a) představuje vymrazením usušený, lipasy a proteasy obsahující směs zažívacích enzymů, která případně obsahuje komplexní 1ipidy.
  21. 21. Souprava podle nároku 20, vyznačující se tím, že vymrazením usušená směs zažívacích enzymů obsahuje pankreatin.
CZ19972184A 1996-08-28 1997-07-09 Použití fosfolipidů nebo směsí lipidů obsahujících fosfolipidy jako stabilizujících přísad pro farmaceutické přípravky směsí zažívacích enzymů CZ295329B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19634752 1996-08-28
DE19724845A DE19724845A1 (de) 1996-08-28 1997-06-12 Verwendung von komplexen Lipiden als stabilisierende Zusätze zu pharmazeutischen Zubereitungen von Verdauungsenzymgemischen

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ218497A3 true CZ218497A3 (cs) 1998-03-18
CZ295329B6 CZ295329B6 (cs) 2005-07-13

Family

ID=26028823

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19972184A CZ295329B6 (cs) 1996-08-28 1997-07-09 Použití fosfolipidů nebo směsí lipidů obsahujících fosfolipidy jako stabilizujících přísad pro farmaceutické přípravky směsí zažívacích enzymů

Country Status (21)

Country Link
US (1) US5993806A (cs)
EP (1) EP0826375B1 (cs)
JP (1) JP4593697B2 (cs)
CN (1) CN1199694C (cs)
AR (1) AR008807A1 (cs)
AT (1) ATE284225T1 (cs)
AU (1) AU722151B2 (cs)
BR (1) BR9704554B1 (cs)
CA (1) CA2213151C (cs)
CZ (1) CZ295329B6 (cs)
DE (2) DE19724845A1 (cs)
DK (1) DK0826375T3 (cs)
EE (1) EE04179B1 (cs)
ES (1) ES2235206T3 (cs)
HU (1) HUP9701437A3 (cs)
NO (1) NO973940L (cs)
NZ (1) NZ328616A (cs)
PL (1) PL190140B1 (cs)
PT (1) PT826375E (cs)
SK (1) SK284639B6 (cs)
TR (1) TR199700872A3 (cs)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6074689A (en) * 1998-03-10 2000-06-13 Immucell Corporation Colonic delivery of protein or peptide compositions
KR100367659B1 (ko) * 2000-05-08 2003-01-14 주식회사 바이넥스 선택적 안정화제의 첨가에 따른 자가분해(autolysis)를 통한 고역가 판크레아틴의 제조방법
GB0019118D0 (en) * 2000-08-03 2000-09-27 Danisco Solid phase glycerolysis
PL204599B1 (pl) * 2000-11-02 2010-01-29 Cilian Ag Enzymy uzyskane z orzęsków i ich zastosowanie
US20030099626A1 (en) * 2001-11-20 2003-05-29 Health Education Corporation Nutrient absorption enhancing compositions and methods
PL1729797T3 (pl) * 2004-03-22 2009-02-27 Abbott Laboratories Gmbh Doustne kompozycje farmaceutyczne produktów zawierających lipazę, a zwłaszcza pankreatynę, zawierające środki powierzchniowo czynne
US7153504B2 (en) * 2004-07-30 2006-12-26 Can Technologies, Inc. Stabilized pancreas product
EP1919293A4 (en) * 2005-07-20 2010-11-17 James S Brophy MODIFICATION OF PARTICLE MORPHOLOGY TO ENHANCE THE FUNCTIONALITY OF A PRODUCT
BRPI0614914A2 (pt) * 2005-07-29 2011-04-19 Solvay Pharm Gmbh processos para a fabricação de pó de pancreatina esterilizada
US11266607B2 (en) 2005-08-15 2022-03-08 AbbVie Pharmaceuticals GmbH Process for the manufacture and use of pancreatin micropellet cores
US9198871B2 (en) 2005-08-15 2015-12-01 Abbott Products Gmbh Delayed release pancreatin compositions
US10072256B2 (en) 2006-05-22 2018-09-11 Abbott Products Gmbh Process for separating and determining the viral load in a pancreatin sample
US20110183050A1 (en) * 2006-07-20 2011-07-28 Brophy James S Modification of particle morphology to improve product functionality
US8444967B2 (en) 2010-07-09 2013-05-21 Master Supplements, Inc. Treatment including prebiotic composition for use with probiotics
US20090130063A1 (en) * 2007-11-15 2009-05-21 Solvay Pharmaceuticals Gmbh Process for separating and determining the viral load in a pancreatin sample
DE102009006594A1 (de) 2009-01-29 2010-08-05 Nordmark Arzneimittel Gmbh & Co. Kg Pharmazeutisches Präparat
JP5970189B2 (ja) 2009-01-29 2016-08-17 ノルドマルク・アルツナイミッテル・ゲゼルシヤフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング・ウント・コンパニー・コマンデイトゲゼルシヤフト 医薬調製物
EP2621476B8 (en) 2010-10-01 2020-12-23 Société des Produits Nestlé S.A. Enteric coated, low-strength pancrelipase formulations
MX2016001593A (es) 2013-08-09 2016-09-29 Allergan Pharmaceuticals Int Ltd Composicion de enzima digestiva adecuada para administracion enterica.
RU2015155470A (ru) * 2013-11-05 2017-08-21 Апталис Фарма Лтд. Высокоэффективные фармацевтические композиции панкреатина
JP2014193909A (ja) * 2014-06-04 2014-10-09 Nordmark Arzneimittel Gmbh & Co Kg 医薬調製物
CN107073084B (zh) * 2014-11-05 2022-03-25 雅培制药股份有限公司 用于生产具有改善的安全特性的具有脂肪酶活性的组合物和适用于药物用途的组合物的方法
US20180028454A1 (en) 2015-02-04 2018-02-01 Abbvie Inc. Pharmaceutical compositions and methods of use thereof to treat pancreatic enzyme insufficiency
DE102015114857A1 (de) 2015-09-04 2017-03-09 Nordmark Arzneimittel Gmbh & Co. Kg Getränk, enthaltend eine pharmazeutische Zusammensetzung
DE102015114862A1 (de) * 2015-09-04 2017-03-09 Nordmark Arzneimittel Gmbh & Co. Kg Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend eine bakterielle Lipase

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3956483A (en) * 1968-10-24 1976-05-11 Wilson Pharmaceutical & Chemical Corporation Preparing pancreatin
US3991180A (en) * 1972-03-06 1976-11-09 Rohm And Haas Company Stabilization of internally administered pancreatic lipase
DE2512746C3 (de) * 1975-03-22 1980-04-24 Kali-Chemie Pharma Gmbh, 3000 Hannover Verfahren zur Herstellung von keimarmem, faserfreiem Pankreatin
GB1603640A (en) * 1977-07-20 1981-11-25 Gist Brocades Nv Enzyme particles
JPS58148814A (ja) * 1982-03-01 1983-09-05 Fujimoto Seiyaku Kk 消化酵素軟カプセル剤
JPS59169491A (ja) * 1983-03-15 1984-09-25 Duskin Franchise Co Ltd 酵素の安定化法
JPH0229950A (ja) * 1988-07-18 1990-01-31 Nec Corp 光ディスク
JP2679852B2 (ja) * 1989-11-29 1997-11-19 株式会社サム研究所 経口及び局所投与用生物活性蛋白組成物
GB9007052D0 (en) * 1990-03-29 1990-05-30 Skua Investments Ltd Pharmaceutical formulations
EP0568606B1 (en) * 1991-01-24 2001-04-18 Martek Corporation Microbial oils and uses thereof
DE4200002A1 (de) * 1992-01-02 1993-07-08 Rudolf V Dipl Chem Dr Noronha Reinigungstablette fuer die zahnprothesen
EP0719133A1 (en) * 1993-09-15 1996-07-03 Unilever Plc Skin care method and composition
JPH09125096A (ja) * 1995-10-30 1997-05-13 Koei Sangyo:Kk 液状天然油脂洗剤

Also Published As

Publication number Publication date
PL321825A1 (en) 1998-03-02
JP4593697B2 (ja) 2010-12-08
TR199700872A2 (xx) 1999-04-21
EE9700249A (et) 1998-04-15
EP0826375B1 (de) 2004-12-08
TR199700872A3 (tr) 1999-04-21
NO973940L (no) 1998-03-02
ATE284225T1 (de) 2004-12-15
US5993806A (en) 1999-11-30
HK1005224A1 (en) 1998-12-31
NO973940D0 (no) 1997-08-27
NZ328616A (en) 1999-01-28
CN1199694C (zh) 2005-05-04
BR9704554A (pt) 1998-09-15
AU3530997A (en) 1998-03-05
AR008807A1 (es) 2000-02-23
EP0826375A3 (de) 2002-08-14
CN1174743A (zh) 1998-03-04
DE59712108D1 (de) 2005-01-13
HUP9701437A2 (hu) 1998-03-30
CA2213151A1 (en) 1998-02-28
PL190140B1 (pl) 2005-11-30
CZ295329B6 (cs) 2005-07-13
EE04179B1 (et) 2003-12-15
HUP9701437A3 (en) 2001-03-28
EP0826375A2 (de) 1998-03-04
PT826375E (pt) 2005-02-28
HU9701437D0 (en) 1997-10-28
DE19724845A1 (de) 1998-03-05
SK284639B6 (sk) 2005-08-04
BR9704554B1 (pt) 2011-12-27
AU722151B2 (en) 2000-07-20
CA2213151C (en) 2008-04-01
SK115997A3 (en) 1998-07-08
DK0826375T3 (da) 2005-01-24
JPH1077236A (ja) 1998-03-24
ES2235206T3 (es) 2005-07-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ218497A3 (cs) Použití komplexních lipidů jako stabilizujících přísad pro farmaceutické přípravky směsí zažívacích enzymů
ES2180541T5 (es) Nueva fosfolipasa a1, procedimiento para su preparacion y uso de la misma.
KR101226787B1 (ko) 포스파티딜세린의 안정화된 제제
SK9292003A3 (en) Novel mixtures of microbial enzymes
Panaiotov Enzymatic reactions at interfaces: interfacial and temporal organization of enzymatic lipolysis
JP2000511766A (ja) リゾホスファチジルコリンの製造方法
CN103140587B (zh) 含2-酰基-溶血磷脂酰丝氨酸的组合物及其制造方法
Sawada et al. Effect of lipid on protoheme ferro-lyase
HIRANO et al. Role of alkaline phosphatase in phosphate uptake into brush border membrane vesicles from human intestinal mucosa
Arai et al. Properties of acid phospholipases in lysosome and extracellular medium of Tetrahymena pyriformis
EP0384976B1 (en) Glycerophospholipid composition having enhanced surface-active properties
HK1005224B (en) Use of complex lipide as stabilizing additives in pharmaceutical formulation of digestive enzyme mixture
JPH01175943A (ja) 腸内で脂質系の物質の吸収を促進する組成物
EP0375785B1 (en) Lipid composition having enough safety and strong surface activity
Bonting et al. Transverse distribution of phospholipids in the vertebrate photoreceptor membrane
ES2283011T3 (es) Enzima proteolitica purificada de purificacion.
JP2007091625A (ja) 血液凝固反応促進剤
Drenthe Topology of phospholipids in rod disk membranes
JP2007106679A (ja) 血液凝固反応促進剤
JPH0620525B2 (ja) 乳化材の製造方法
Bonting et al. Neurochemistry Vol. 1, pp. 3-16. Pergamon Press Ltd. 1980. Printed in Great Britain.
JPH04131082A (ja) 非水系高活性酵素の製造方法
Lopez-Amaya et al. Phospholipases: University of Guelph, Guelph, Ontario, Canada

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20060709