ES2240958T3 - Metodo para transferir acidos nucleicos a las celulas. - Google Patents
Metodo para transferir acidos nucleicos a las celulas.Info
- Publication number
- ES2240958T3 ES2240958T3 ES92920321T ES92920321T ES2240958T3 ES 2240958 T3 ES2240958 T3 ES 2240958T3 ES 92920321 T ES92920321 T ES 92920321T ES 92920321 T ES92920321 T ES 92920321T ES 2240958 T3 ES2240958 T3 ES 2240958T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- cholesterol
- biodegradable
- toxic
- substantially non
- derivative
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/554—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being a steroid plant sterol, glycyrrhetic acid, enoxolone or bile acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
- C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
- C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Botany (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
UN METODO PARA FACILITAR LA TRANSFERENCIA DE ACIDOS NUCLEICOS A CELULAS, QUE COMPRENDE PREPARAR UNA DISPERSION LIPIDA MEZCLADA DE UN LIPIDO CATIONICO CON UN CO-LIPIDO EN UN DISOLVENTE PORTADOR ADECUADO. EL LIPIDO TIENE UNA ESTRUCTURA QUE INCLUYE UN GRUPO LIPOFILICO DERIVADO DE COLESTEROL, UN ENLACE ARTICULADOR, UN BRAZO SEPARADOR QUE INCLUYE DE 1 A 20 ATOMOS DE CARBONO EN UNA CADENA ALQUILO LINEAL RAMIFICADA O NO, Y UN GRUPO AMINO CATIONICO ELEGIDO DEL GRUPO CONSISTENTE EN GRUPOS AMINO PRIMARIOS, SECUNDARIOS, TERCIARIOS Y CUATERNARIOS. EL METODO COMPRENDE ADEMAS ADICIONAR LOS ACIDOS NUCLEICOS A LA DISPERSION PARA FORMAR UN COMPLEJO. LAS CELULAS SON ENTONCES TRATADAS CON EL COMPLEJO. TAMBIEN SE DESCRIBE UN NUEVO ANFIFILO CATIONICO UTIL PARA ESTE PROPOSITO.
Description
Método para transferir ácidos nucleicos a las
células.
La presente invención se refiere a métodos para
facilitar la transferencia de ácidos nucleicos a las células, y a
nuevos anfífilos catiónicos útiles para este propósito.
Se sabe que algunos, pero no todos los anfífilos
catiónicos, facilitan la transferencia de ADN a las células, es
decir, la transfección. Si bien el mecanismo de esta actividad aún
no está claro, probablemente implique la unión de complejo de
ADN/lípido con la superficie celular vía el exceso de cargas
positivas en el complejo. El complejo unido a la superficie celular
probablemente se internaliza y el ADN se libera hacia el citoplasma
de la célula desde un compartimiento endocítico. No se sabe cómo el
ADN liberado se traslada hacia el núcleo.
Un anfífilo catiónico contiene los siguientes
cuatro importantes elementos estructurales:
grupo lipófilo - Enlazador - Brazo Espaciador -
Grupo amino
El grupo amino está positivamente cargado a pH
neutro. Puede ser un grupo amonio primario, secundario, terciario o
cuaternario. El brazo espaciador usualmente es un resto hidrófilo de
2 a 15 átomos que conecta el grupo amino con el grupo lipófilo vía
el enlazador. El enlazador bien es un éter, éster, amida o bien un
enlace hidrolizable.
El grupo lipófilo es un resto hidrófobo que
permite la inserción del anfífilo catiónico en las membranas de la
célula o liposoma. Cumple la función de anclaje para que el grupo
amonio catiónico se una a la superficie de una célula o
liposoma.
Biochem.Biophys.Acta, 1982, vol 684; Nº1, pp
12-20 se refiere a análogos de colesterol para
incorporación en vesículas. Estos análogos son aminas primarias que
tienen un enlazador -NH-C(=O)-* y un espaciador de
etoxietano, y no están entre los compuestos de interés de acuerdo
con la presente invención. La publicación internacional
US-A-4.544.545 describe liposomas
formados con colesterol químicamente modificado que se tornan así
más específicos para acumulación rápida y preferencial in
vivo en un órgano deseado específico. Los derivados de
colesterol descritos muestran una amina primaria con un enlazador
-NH-C(=O)-O-* y un espaciador
(CH_{2})_{5}; estos derivados no son parte de la presente
invención. Si bien la publicación internacional
US-A-4.544.545, columna 3, líneas
47-51 menciona la incorporación de material genético
a los liposomas, no conduce con obviedad, a la persona experimentada
en la técnica, al uso de dichos liposomas en un método para
facilitar la transferencia de ácido nucleico a células mamíferas, ya
que la publicación internacional
US-A-4.544.545 se refiere a
liposomas adaptados para reconocimiento específico de órganos. En la
publicación US-A-4.544.545 no se
describe la transfección. La publicación internacional
WO-A-8800824 se refiere a liposomas
que contienen componentes de lípidos positivamente cargados
adaptados para usos oftálmicos en los cuales los liposomas se
proveen como gotas para el ojo del paciente. Los derivados de
lípidos se enlazan con el colesterol a través de un átomo de oxígeno
o nitrógeno. La publicación
WO-A-8800824 no describe los
enlazadores del tipo -NH-C(=O)-* o
-N-C(=)- * ni en los que el átomo de carbono es el
átomo enlazador como en -O-(O=)C-. J. Biol. Chem., Vol. 265, Nº 21,
1990, pp. 12404-12409 investiga el efecto de sulfato
de colesterol y compuestos relacionados sobre la fusión del virus
Sendai con neutrones y modelos biológicos. El derivado de colesterol
descrito es una amina cuaternaria con un enlazador
a-NH-C(=O)- * y un espaciador
(CH_{2})_{2}, que no es parte de la presente invención.
Polym. Commun., 1987, vol. 28, Nº 1, páginas 16-19,
describe derivados de colesterol de amonio cuaternario que forman
vehículos de lípidos. Estos compuestos amino cuaternarios tienen
-(C=O)-O * y un espaciador (CH_{2})_{10}
y no son parte de los compuestos reivindicados. J. Chem. Soc,
Chem.Commun., 1988, Nº 15, pp. 1037-1038 publica un
estudio piezoeléctrico de la conducta de adsorción molecular de
modelos simples de alcoholes hidrófobos, incluyendo películas de
capas múltiples de lípidos sintéticos o colesterol. J. Med. Chem.,
1984, Vol.27, Nº5, pp.659-664 publica la síntesis de
ésteres de (ácido aminobotiri (GABA)), incluyendo el colesteril
éster de GABA. Se reseña que el éster es activo para cambiar la
actividad motora de ratas.
La patente estadounidense 4.958.013 muestra
distintas fórmulas de oligonucleótidos modificados con colesterol
que son intermedios químicos para oligonucleótidos modificados que
se anclarán a las membranas. Los compuestos son oligonucleótidos
modificados con colesterilo que son aminas secundarias con un
enlazador -NH-C(=O)-O- * y un
espaciador (CH_{2})_{n}, en el que n es 2 ó 6, los cuales
no se incluyen en la presente invención.
Ninguna de estas referencias revela derivados de
colesterol que tengan las propiedades de ser sustancialmente no
tóxicos, biodegradables, formar una dispersión acuosa estable con un
lípido neutro y facilitar la transfección de ácido nucleico.
El cloruro de
N-[1-(2,3-dioleoxiloxi)propil]-N,N,N-trimetilamonio
(DOTMA) es el primer anfífilo catiónico que exhibe la actividad de
transfección. Su grupo lipófilo es una doble cadena, grupo alifático
C18:1. Contiene un grupo amonio cuaternario conectado al grupo
lipófilo vía un brazo espaciador de 3 carbonos con dos enlazadores
de éter. Si bien la molécula es eficaz en la transfección, no es
biodegradable y es bastante tóxica para las células.
Otra serie de anfífilos catiónicos utilizada en
la transfección consiste en detergentes de amonio cuaternario. Los
detergentes de cadena simple (como bromuro de cetiltrimetilamonio) o
de cadena doble (como bromuro de dimetildioctadecilamonio) exhiben
actividad para transfectar células animales. El grupo amino en estos
anfífilos es cuaternario y está conectado al grupo lipófilo sin el
brazo espaciador o los enlazadores. Otro detergente de cadena
simple, estearilamina, contiene un grupo amino primario conectado a
una cadena simple C18:0 sin un brazo espaciador o enlazador. Este
grupo de anfífilos es también tóxico para las células.
Se han reseñado otros dos grupos de anfífilos
catiónicos para transfección. El primer grupo contiene dos cadenas
C18:1 como el grupo lipófilo. Ambos grupos contienen un grupo amonio
cuaternario, pero varía la estructura del brazo espaciador. En el
primer caso, el grupo trimetilamonio está directamente conectado a
las dos cadenas C18:1 vía un brazo espaciador de 3 carbonos y enlace
éster. El anfífilo,
1,2-dioleoxi-3-(trimetilamonio)propano,
(DOTAP) es un análogo próximo a DOTMA. En otros casos, como
1,2-dioleoil-3-(4'-trimetilamonio)
butanoil-sn-glicerol, DOBT, o
colesteril (4'-trimetilamonio) butanoato, ChOTB, el
grupo trimetilamonio está conectado vía un brazo espaciador de
butanoilo ya sea al grupo de cadena doble (para DOTB) o colesterilo
(para ChOTB). Otros anfífilos, es decir, éster de colina de
1,2-dioleoil-3-succinil-sn-glicerol
(DOSC) y éster colina de hemisuccinato de colesterilo, ChOSC,
contienen un resto colina como el grupo amonio cuaternario que está
conectado al grupo de cadena doble (para DOSC) o colesterilo (para
ChOSC) vía un brazo espaciador de succinilo. Las actividades de
transfección de estos anfífilos en general son débiles.
Incluso se ha reseñado también otra clase de
anfífilos, denominada "lipopoliamina". El grupo amonio es
L-5-carboxiespermina que contiene 2
grupos amonio primarios y 2 secundarios. Dos ejemplos de esta
lipopoliamina son dioctadecilamidologlicilespermina, DOGS, y
dipalmitoil fosfatidiletanolamidoespermina, DPPES. El grupo
catiónico está conectado a dos cadenas dobles diferentes, grupo
lipófilo C16:0 vía un brazo espaciador amidoglicilo (para DOGS) o
fosforiletanolamina (para DPPES). Estos compuestos son especialmente
eficientes en la transfección de las células endocrinas primarias
sin toxicidad celular.
También se ha reseñado un reactivo de
lipopolilisina para transfección. El reactivo contiene un resto
polilisina como el grupo amonio que está conectado a un fosfolípido
(N-glutarilfosfatidiletanolamina). Por lo tanto, el
brazo espaciador es la cadena lateral de lisina y el grupo principal
del fosfolípido. El grupo lipófilo es un grupo de doble cadena,
C18:1 que se conecta al brazo espaciador vía dos enlaces éster. Si
bien el reactivo es eficiente en la transfección y no es tóxico para
las células, la actividad requiere raspar las células tratadas. Esto
definitivamente no es un paso conveniente y no se puede efectuar en
experimentos in vivo.
Un reactivo de transfección ideal debería exhibir
un alto nivel de actividad de transfección sin raspado ni ninguna
otra manipulación mecánica o física de las células o los tejidos. El
reactivo no debería ser tóxico o debería ser mínimamente tóxico en
las dosis eficaces. Debería ser también biodegradable para evitar
cualquier efecto adverso en el largo plazo sobre las células
tratadas.
Muchos reactivos que satisfacen estos criterios
contienen un enlazador que es hidrolizable en la célula. Por
ejemplo, DOBT y DOSC, contienen ambos enlazadores de éster, se
pueden metabolizar y catabolizar en otras especies de lípidos en las
células tratadas. No obstante, los anfífilos catiónicos que
contienen enlazadores de éster no son estables cuando se conservan
en una disolución acuosa. Esto probablemente se deba a una reacción
de hidrólisis catalizada por base mediada por el grupo amino del
anfífilo.
Otro factor clave en la toxicidad celular de los
anfífilos catiónicos consiste en sus efectos inhibidores sobre la
actividad de la proteína cinasa C (PKC). La PKC es una enzima clave
que cumple una función crucial en la transducción de señal celular.
Los anfífilos catiónicos inhiben la actividad de la PKC imitando al
inhibidor endógeno, esfingosina. La actividad de la PKC es también
importante para la vía de endocitosis celular que es propensa a
implicarse en la acción de los anfífilos catiónicos para facilitar
la entrada de ADN a las células. Se ha publicado recientemente que
un activador de PKC, forbolmiristatoacetato, puede estimular la
eficacia de la transfección de ADN mediada por los precipitados de
fosfato de calcio.
Por lo tanto, los inventores de la presente han
sintetizado una serie de nuevos anfífilos catiónicos y detectado sus
actividades para inhibir la PKC. Existen varios anfífilos que
exhiben actividades inhibidoras débiles hacia la PKC, que son
particularmente adecuados para transfecciones. Además, se han
preparado reactivos catiónicos con un enlazador de carbamoilo, a fin
de superar el problema de la inestabilidad en la disolución. La
estabilidad del enlace en disolución acuosa es mucho mayor que
aquella del enlace éster, y es incluso hidrolizable en la
célula.
En resumen, la presente invención provee un
método para facilitar la transferencia de ácidos nucleicos a las
células. El método comprende preparar una dispersión de lípidos
mixta de un lípido catiónico con un co-lípido en un
disolvente vehículo adecuado, como agua destilada o disolución
salina normal. El lípido catiónico tiene una estructura que incluye
un grupo lipófilo derivado de colesterol, un enlazador, un brazo
espaciador, incluyendo entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20
átomos de carbono en una cadena de alquilo lineal ramificada o no
ramificada, y un grupo amino catiónico. El grupo amino se selecciona
entre el grupo que consiste en grupos amino primarios, secundarios,
terciarios y cuaternarios. El método comprende también añadir los
ácidos nucleicos a la dispersión para formar un complejo. Las
células se tratan luego con el complejo.
En una realización preferida de la invención, la
dispersión tiene partículas con un diámetro promedio de
aproximadamente 150 nm. El lípido catiónico preferiblemente se
selecciona entre el grupo que consiste en yoduro de
colesteril-3\beta-carboxilamidoetilentrimetilamonio,
yoduro de
1-dimetilamino-3-trimetilamonio-DL-2-propil-colesterilcarboxilato,
colesteril-3\beta-carboxiamidoetilenamina,
yoduro de
colesteril-3\beta-oxisuccinamidoetilentrimetilamonio,
yoduro de
1-dimetilamino-3-trimetilamonio-DL-2-propilcolesteril-3\beta-oxisuccinato, yoduro de 2-[(2-trimetilamonio)-etil-metilamino] etil-colesteril-3\beta-oxisuccinato, 3\beta[N-(N',N'-dimetilaminoetano)-carbamoil]colesterol y 3\beta-[N-(polietilenimi-
na)-carbamoil]colesterol En una realización preferida, el co-lípido es un fosfolípido neutro o ácido que preferiblemente se puede seleccionar entre el grupo que consiste en fosfatidil colina y fosfatidil etanolamina.
1-dimetilamino-3-trimetilamonio-DL-2-propilcolesteril-3\beta-oxisuccinato, yoduro de 2-[(2-trimetilamonio)-etil-metilamino] etil-colesteril-3\beta-oxisuccinato, 3\beta[N-(N',N'-dimetilaminoetano)-carbamoil]colesterol y 3\beta-[N-(polietilenimi-
na)-carbamoil]colesterol En una realización preferida, el co-lípido es un fosfolípido neutro o ácido que preferiblemente se puede seleccionar entre el grupo que consiste en fosfatidil colina y fosfatidil etanolamina.
Además, la presente invención provee también un
lípido catiónico sustancialmente no tóxico, sustancialmente no
hidrolizable para facilitar la transferencia de ácidos nucleicos a
las células. El lípido comprende un grupo lipófilo derivado de
colesterol, un enlazador, un brazo espaciador que incluye
aproximadamente 1 a aproximadamente 20 átomos de carbono en una
cadena de alquilo lineal ramificada o no ramificada, y un grupo
amino catiónico. El grupo amino se selecciona entre el grupo que
consiste en grupos amino primarios, secundarios, terciarios o
cuaternarios.
El lípido catiónico preferentemente se selecciona
entre el grupo que consiste en yoduro de
colesteril-3\beta-carboxiamidoetilentrimetilamonio,
yoduro de
1-dimetilamino-3-trimetilamonio-DL-2-propil-colesterilcarboxilato,
coles-teril-3\beta-carboxiamidoetilenamina,
yoduro de
colesteril-3\beta-oxisuccinamidoetilentrimetilamonio,
yoduro de
1-dimetil-amino-3-trimetilamonio-DL-2-propil-colesteril-3\beta-oxisuccinato,
yoduro de
2-[(2-trimetilamonio)etilmetil-amino]etil-colesteril-3\beta-oxisuccinato,
3\beta[N-(N(N',N'dimetilaminoetano)-carbamoil]-colesterol
y
3\beta[N-(polietilenimina)-carbamoil]colesterol.
La presente invención se entenderá por referencia
a los siguientes Ejemplos, siempre que se consideren junto con los
dibujos en los que:
La Figura 1 es el esquema sintético para análogos
de colesteril carboxilato;
la Figura 2 es el esquema sintético para análogos
de colesteril hemisuccinato;
la Figura 3 es el esquema sintético para análogos
de colesteril formato;
la Figura 4 es un gráfico del efecto de
diferentes co-lípidos sobre la actividad de
transfección de una dispersión de lípido catiónico en células
L929;
la Figura 5 es un gráfico del efecto de la
relación de co-lípido a lípido catiónico de la
presente invención sobre la actividad de transfección en células
L929;
la Figura 6 es un gráfico del efecto de la dosis
de lípido sobre la actividad de transfección en células L929;
la Figura 7 es un gráfico del efecto de dosis de
ADN sobre la actividad de transfección de la dispersión de lípidos
en células L929;
la Figura 8 es una representación de un gel que
muestra la formación de complejo de ADN con la dispersión de lípido
catiónico; y
la Figura 9 es un gráfico de la eficacia de la
transfección y de la toxicidad de un lípido catiónico de la presente
invención.
Con el fin de facilitar una mayor comprensión de
la presente invención, los siguientes Ejemplos se exponen
principalmente con propósitos de ilustrar ciertos detalles más
específicos de los mismos.
Se adquirieron Colesterol (99 + % grado),
colesterol hemisuccinato, 1,1'-carbonildiimidazol de
Sigma Chemical Co., St. Louis, MO. Se obtuvieron magnesio en polvo -
50 mesh (99 + %), tionilbromuro (97%),
1,3-propanosulfona (99%), yodometano (99%),
trans-1,2-dicloroetileno (98%),
M,M-dimetilanilina (99%),
N,N-dimetiletilendiamina (95%),
1,3-bis-dimetilamino-2-propanol
(97%), 2-{[2-(dimetilamino)etil]metilamino}etanol
(98%) de Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI. Se obtuvieron
colesteril cloroformato (95%) y polietilenimina de Fluka. El
metanol, diclorometano y acetonitrilo fueron disolventes de grado
HPLC. Todos los otros químicos y disolventes, a menos que se
especifique lo contrario, fueron de grado reactivo.
En la Figura 1 se muestra un esquema sintético
para análogos de colesteril carboxilato.
Se disolvió colesterol, (25 g, 64,6 mmol) en 10
ml de dimetilanilina (78,9 mmol) y 5 ml de cloroformo. Mientras se
agitaba con hielo, se añadieron lentamente pequeñas cantidades de
tionil bromuro (6 ml, 77,6 mmol) disueltas en 20 ml de cloroformo
frío durante un período de 15 minutos. Después de completar la
adición de tionil bromuro, la mezcla se agitó durante 2 horas
adicionales a temperatura ambiente. La disolución resultante se
vertió en 200 ml de etanol enfriado con hielo al 95% y se dejó en
hielo durante 2 horas hasta completar la cristalización. El producto
se filtró y se lavó con 25 ml de etanol enfriado con hielo al 95%.
Se recuperó una pequeña cantidad de producto del filtrado con la
adición de 75 ml de agua destilada y luego se refrigeró. Finalmente,
el producto se recristalizó a partir de 120 ml de acetona,
produciendo 21,8 g de colesteril bromuro (rendimiento, 75%) con un
punto de fusión de 93-95ºC (lit
97-98ºC). La identidad del producto se confirmó con
espectrometría de masas (EI), la cual demostró un pico intenso con
un m/z de 448, correspondiente al ión molecular (M^{+}º) de
colesteril bromuro. Además, se observó la característica del patrón
de peso molecular del bromuro de los dos isótopos diferentes de
bromo (79Br:81Br, 1:1).
Se llevó a cabo la síntesis de
colesteril-3\beta-carboxilato,
usando una reacción Grignard. Todos los materiales de vidrio se
secaron en estufa a 110ºC durante toda la noche. En un matraz de
tres cuellos de 500 ml, preparado para reflujo, se preparó una
disolución nueva de yoduro de metilmagnesio, tratando 9 g de
magnesio en polvo en estufa de vacío (110ºC) en 100 ml de éter
dietílico anhidro con 10 ml de yoduro de metilo. Después de que cesó
la reacción vigorosa, se añadió lentamente colesteril bromuro (25 g,
56 mmol), disuelto en 100 ml de éter dietílico anhidro, a la
disolución de yoduro de metilmagnesio durante un período de tres
horas. La disolución se sometió a reflujo durante 36 horas con el
calor suficiente requerido para llevar el éter dietílico a una
ebullición. Después de enfriar, el reactivo Grignard se añadió a
dióxido de carbono sólido finamente molido y, después de 1 hora, el
complejo se hidrolizó por tratamiento con ácido sulfúrico 1 M
enfriado con hielo. Después de extraer el esteroide con éter
dietílico (3 x 250 ml), la capa etérea se lavó con tiosulfato sódico
10 mM (3 x 50 ml) para eliminar un color anaranjado persistente.
Después de separar la capa de agua, la capa de éter se lavó con agua
destilada y se filtró para eliminar un residuo insoluble. La capa de
éter se secó posteriormente sobre sulfato de magnesio anhidro y se
dispuso en un evaporador giratorio para producir una suspensión
oleosa blanca amarillenta. La trituración con pentano produjo 8,6 g
de colesteril-3\beta-carboxilato
(rendimiento, 37%) como un polvo fino con un punto de fusión de
212-215ºC (lit 218-220ºC). La
espectrometría de masas (EI) mostró un m/z de 414 de ión molecular
(M+º). El producto se caracterizó por RMN de 2 protones. El
producto se liofilizó durante toda la noche para producir un
material de inicio anhidro para las reacciones de acilación.
La acilación de colesteril carboxilato se llevó a
cabo bajo una atmósfera de nitrógeno o argón seco en un recipiente
de vidrio secado en estufa. El colesterol carboxilato (2 g, 4,8
mmol) se suspendió en 5 ml de diclorometano (grado HPLC en tamices
moleculares 4 A). Se añadió un exceso molar 1,5 de
1,1'-carbonildiimidazol (CDI, 1,2 g) disuelto en 15
ml de diclorometano a la suspensión de colesteril carboxilato en
volúmenes pequeños con agitación intermitente. Cuando cesó la
reacción, la disolución se agitó durante toda la noche.
Posteriormente se añadió N,N-dimetiletilendiamina (5
ml, 43,2 mmol) y la disolución resultante se agitó durante 36 horas
a temperatura ambiente. Se eliminó el diclorometano por evaporación
giratoria, después de lo cual la reacción se enfrió repentinamente
con un volumen pequeño de agua destilada. El esteroide acilado se
extrajo con éter dietílico (4 x 50 ml). Posteriormente, las
fracciones de éter combinadas se retroextrajeron con agua destilada
(3 x 50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y evaporaron
girando a presión reducida. El residuo se trituró luego con pentano
y el producto se recogió en un embudo de vidrio sinterizado. Se
obtuvo un polvo voluminoso (1,7 g, 73% rendimiento) y se descubrió
que era puro por TLC (Rf=0,72), usando cloroformo:metanol:agua
(65:25:4,v/v/v) como el disolvente revelador. El producto
proporcionó un punto de fusión de 167-169ºC. La
espectrometría de masas (FAB+) mostró un pico intenso a un m/z de
485, que corresponde al ión molecular protonado (M+H)^{+}º.
El producto se caracterizó por RMN de protones.
La cuaternización del Compuesto III se llevó a
cabo usando yoduro de metilo y bicarbonato de potasio. En resumen,
se disolvió 1 g (2,1 mmol) del compuesto III en 40 ml de metanol en
presencia de 2 g (20 mmol) de bicarbonato de potasio y 2 ml (32,1
mmol) de yoduro de metilo. La reacción se agitó durante 24 horas a
temperatura ambiente. El disolvente se eliminó posteriormente al
vacío y el bicarbonato restante se neutralizó con HCl 1 M hasta que
la disolución produjo una lectura del pH de 7. Se eliminó el agua
por liofilización y al producto se le extrajeron las impurezas de
sales inorgánicas, usando un volumen pequeño de metanol enfriado con
hielo. Después de evaporar el disolvente, el producto se
recristalizó a partir de etanol absoluto y se purificó
adicionalmente sobre una columna de fase inversa, usando un
gradiente de acetonitrilo/0,1% ácido trifluoroacético (100% a 85%
acetonitrilo en 60 minutos). Se demostró que el polvo era puro por
TLC (Rf=0,10) usando cloroformo:metanol:agua (65:25:4 v/v/v) como el
disolvente revelador. Se demostró que se fundía con la
descomposición a aproximadamente 190ºC, y tenía un ión molecular con
un m/z de 500 (M^{+}º) de acuerdo con la espectrometría de masas
(FAB^{+}). El producto se caracterizó por RMN de protones.
Se llevó a cabo la acilación usando
colesteril-3\beta-carboxilato
activado con CDI análogo al método descrito para el compuesto III,
excepto que el nucleófilo fue
2,3-bis-dimetilamino-2-propanol
(8 ml, 47,6 mmol). Después de la adición del nucleófilo, la reacción
se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. Se eliminó el
diclorometano y el residuo oleoso restante se disolvió en
cloroformo. Las impurezas se precipitaron con un gran volumen de
éter de petróleo (punto de ebullición, 35-60ºC). El
filtrado se pasó por un evaporador giratorio hasta secarse, se
volvió a disolver en pentano y se filtró nuevamente una vez. Después
de secar, el material soluble en pentano se secó y se redisolvió en
un volumen pequeño de éter dietílico y se añadió a un gran volumen
de éter dietílico:acetonitrilo caliente (30:70, v/v). El producto se
cristalizó a -20ºC después de permitir que se evaporara parte del
éter. La espectrometría de masas (FAB+) produjo un m/z de 543 para
el ión molecular protonado (M+H)+º. El producto se caracterizó por
RMN de protones.
El compuesto V de metoyoduro se preparó
sometiendo suavemente a reflujo el compuesto V (0,5 g, 0,9 mmol) y
yoduro de metilo (2 ml, 32,1 mmol) en 20 ml de etanol durante una
hora. Después de enfriar, el precipitado (0,5 g, rendimiento 79%) se
recristalizó dos veces a partir de metanol absoluto. El producto se
fundió con la descomposición a aproximadamente 232ºC y se pasó una
sola vez por una placa de TLC (Rf=0,22) usando
cloroformo:metanol:agua (65:25:4, v/v/v) como el disolvente
revelador. El producto tuvo un ión molecular con un m/z de 557
(M^{+}º) con FAB+ espectrometría de masas, consistente con la
alquilación de uno de los dos posibles sitios de amina terciaria. El
producto se caracterizó por RMN de protones.
A una disolución de etilendiamina (5,11 g, 85
mmol) en 20 ml de diclorometano, se le añadió gota a gota una
disolución de colesteril carboxilato activado con CDI (0,7 g, 1,7
mmol) en 5 ml de diclorometano durante un período de 1,5 h. Cuando
se había completado la adición de esterol activado, la reacción se
agitó durante 48 horas bajo nitrógeno. Después de eliminar el
disolvente a presión reducida, el residuo se disolvió en
cloroformo:metanol (2:1, v/v) y se extrajo con agua (3 x 50 ml). La
fase de cloroformo posteriormente se secó con sulfato de sodio
anhidro, se eliminó el disolvente y el residuo se purificó por TLC
preparativa, usando cloroformo:metanol:agua (65:25:4, v/v/v) como el
disolvente revelador. Se recogió la banda a aproximadamente Rf =
0,3, se extrajo con cloroformo:metanol (1:1, v/v) y se secó a
presión reducida. El producto (0,65 g, rendimiento, 81%) se pasó por
un único sitio (Rf = 0,33) y se fundió con descomposición a
aproximadamente 194ºC. La espectrometría de masas (FAB+) produjo un
m/z de 457 para el ión molecular protonado (M+H)+. El producto se
caracterizó por RMN de protones.
En la Figura 2, se representa un esquema que
describe las distintas etapas para producir análogos de colesterol
hemisuccinato.
La síntesis del compuesto VIII requirió primero
la acil imidazolida de colesteril hemisuccinato, que se preparó
haciendo reaccionar colesterol hemisuccinato con
N,N-carbonildiimidazol (CDI), tal como se describió
para la síntesis del compuesto III. En resumen, al colesterol
hemisuccinato (2 g, 4,1 mmol), suspendido en 5 ml de diclorometano,
se le añadió 1,5 equivalentes de CDI (1 g) disueltos en 15 ml de
diclorometano. La disolución se agitó durante toda la noche, tras lo
cual se añadió N,N-dimetiletilendiamina (5 ml, 43,2
mmol). Posteriormente se eliminó el diclorometano por evaporación
giratoria, se añadió agua destilada y el esterol acilado se extrajo
con éter dietílico (4 x 50 ml). Posteriormente, las fracciones de
éter se lavaron con agua destilada (3 x 50 ml) y se secaron sobre
sulfato de sodio anhidro. El éter se eliminó por evaporación
giratoria. El producto se lavó con 200 ml de pentano, y las
impurezas menores se eliminaron usando TLC sobre gel de sílice
preparativa. Después de revelar con cloroformo:metanol:agua
(65:25:4), v/v/v) la banda presente se recogió en aproximadamente un
Rf = 0,80 y se extrajo con cloroformo/metanol (2:1 v/v). El residuo
se purificó adicionalmente usando cloroformo: acetato de etilo (1:1,
v/v) como el segundo disolvente de revelación. Se extrajo la banda
en aproximadamente Rf = 0,2 con cloroformo/metanol (2:1 v/v). El
producto liofilizado se pasó una sola vez por TLC con un Rf de 0,75,
usando cloroformo:metanol:agua (65:25:4, v/v/v) como el disolvente
revelador y tuvo un punto de fusión de 119-111ºC. La
espectrometría de masas (FAB+) mostró un m/z de 557 que
correspondería al ión molecular protonado (M+H)^{+}º. El
producto se caracterizó por RMN de protones.
La cuaternización del compuesto VIII se llevó a
cabo con yoduro de metilo en etanol absoluto, tal como se describió
anteriormente para la síntesis del compuesto VI. Permitiendo que la
disolución se enfríe hasta temperatura ambiente, se produjo 0,5 g
(80% rendimiento) de la sal de amonio cuaternario. Posteriormente,
el producto se recristalizó a partir de etanol absoluto, produciendo
un polvo blanco fino que se fundió con descomposición a
aproximadamente 196ºC. El producto se pasó una sola vez por TLC (R =
0,43), usando cloroformo:metanol:agua (65:25:4) como el disolvente
revelador. La espectrometría de masas (FA+) indicó un ión molecular
con un m/z de 572 (M_{+}º). El producto se caracterizó por RMN de
protones.
La acilación se llevó a cabo usando colesteril
hemisuccinato activado con CDI de acuerdo con el procedimiento
descrito anteriormente para el compuesto V. Después de la adición de
1,3-bi-dimetilamino-2-propanol
(7 ml, 41,6 mmol), la mezcla se agitó durante 72 horas, después de
lo cual se eliminó el disolvente al vacío. El producto, extraído del
residuo con éter dietílico (3 x 75 ml), produjo un aceite después de
la eliminación del éter. La adición de pentano precipitó impurezas
adicionales; después de la evaporación giratoria, el aceite
resultante no se pudo cristalizar exitosamente usando una variedad
de disolventes o por liofilización. La espectrometría de masas (FA+)
indicó un ión molecular protonado con un m/z de 616
(M+H)^{+}º. El producto se caracterizó por RMN de
protones.
La metilación del compuesto X se llevó a cabo
usando el método descrito previamente (Ejemplo VI). Después de 1
hora, la disolución se enfrió y el metiyoduro se recristalizó dos
veces a partir de metanol absoluto para producir cristales con forma
de aguja que se fundieron con descomposición a aproximadamente
222ºC. El producto se pasó una sola vez por una placa de TLC (R =
0,17) usando cloroformo:metanol:agua (65:25:4, v/v/v) como el
disolvente revelador. La espectrometría de masas (FA+) indicó un ión
molecular con un m/z de 629 (M^{+}º) consistente con la metilación
de 1 de uno de 2 sitios posibles de amina terciaria. El producto se
caracterizó por RMN de proto-
nes.
nes.
La síntesis del compuesto XII fue análoga a la
del método descrito para la acilación del compuesto VIII, excepto
que
2-{[2-dimetilamino)etil]-metilamino}etanol
(7 ml, 42,0 mmol) fue el alcohol de amino utilizado como el
nucleófilo. Después de la extracción con éter dietílico, el producto
se secó liofilizando y se purificó adicionalmente por TLC
preparativa, usando cloroformo:metanol:agua (65:25:4, v/v/v).
Después de recoger la banda presente a R = 0,80 y extraer con
cloroformo:metanol, (2:1, v/v), el residuo se purificó
adicionalmente usando cloroformo:acetato de etilo (1:1; v/v) como el
segundo disolvente revelador por TLC. Se recogió la banda que estaba
presente a aproximadamente R = 0,2 y se extrajo la sílice con
cloroformo:metanol (2:1, v/v). El producto, que se pasó una sola vez
por de una placa de TLC, (R = 0,72) usando cloroformo:metanol:agua
(65:25:4 v/v/v) como el disolvente revelador produjo un punto de
fusión de 50-52ºC. La espectrometría de masas (FA+)
demostró un ión molecular protonado con un m/z de 615
(M+H)^{+}º. El producto se caracterizó por RMN de
protones.
La acilación del compuesto XII (0,5 g, 0,8 mmol)
se llevó a cabo bajo condiciones de reflujo con yoduro de metilo en
etanol absoluto, tal como se describió en el Ejemplo VI. El
precipitado se recristalizó dos veces a partir de metanol absoluto y
se tiñó sobre una placa de TLC (R = 0,22) usando
cloroformo:metanol:agua (65:25:4; v/v/v) como el disolvente
revelador. Los cristales se fundieron con descomposición a
aproximadamente 172ºC. La espectrometría de masas (FA+) produjo un
m/z de 629 para el ión molecular (M^{+0}) consistente con la
metilación de únicamente uno de dos sitios posibles de amina
terciaria. El producto se caracterizó por RMN de protones.
En la Figura 3, se muestra el esquema para la
síntesis de análogos de colesteril formato.
El compuesto XIV se sintetizó mezclando una
disolución de colesteril cloroformato (0,5 mmol) en cloroformo con
una disolución de N,N-dimetiletilendiamina (9,1
mmol) en cloroformo en un baño de etanol en hielo seco. El
disolvente y la amina sin reaccionar se eliminaron in vacuo.
El compuesto XIV se purificó mediante dos recristalizaciones
sucesivas en etanol. (Rendimiento, 65%) La TLC
(cloroformo:metanol=65:35) mostró una sola mancha (R = 0,37) cuando
se reveló con yodo. El producto se caracterizó por RMN de
protones.
La síntesis del compuesto XV fue similar a
aquella del compuesto XIV. El colesterol cloroformato (0,1 mmol) y
la polietilenimina 600 (6 g) se mezclaron en cloroformo en un baño
de etanol en hielo seco. Después de que se eliminó el material
volátil de la mezcla de reacción in vacuo, el producto bruto
sólido se dializó en agua destilada 4L durante 3 días (tiempo
durante el cual se cambió el agua varias veces). Finalmente, el
producto se liofilizó hasta secarse, proporcionando un rendimiento
estimado de 81%. El compuesto XV se pasó una sola vez por TLC
(cloroformo:metanol=65:35).
Los derivados de colesterol catiónico se
mezclaron con un fosfolípido en disolución de cloroformo en
diferentes relaciones molares. El disolvente se eliminó por
evaporación bajo una corriente de gas N_{2} y se disecó in
vacuo durante por lo menos 30 minutos. La película de lípido
seco se hidrató en tampón Hopes 20 mM, Ph 7,8, durante toda la
noche. La suspensión se sonicó en un sonicador del tipo baño
(Laboratory Supplies, Hicksville, NY) para generar dispersiones de
partícula pequeña (diámetro promedio = 150 nm).
El plásmido pUCSV2CAT (aproximadamente 5kb de
tamaño) que contiene el gen estructural de E. coli
cloranfenicol acetil transferasa (CAT) impulsado por el promotor
temprano del virus SV40 se utilizó como un modelo para los
polianiones que han de ser distribuidos por las dispersiones de
lípidos catiónicos. El ADN se mezcló con dispersiones de lípidos
catiónicos en 1 ml de medio M199 sin suero o medio McCoy para formar
un complejo de ADN/lípido. Las células de mamíferos cultivadas de
aproximadamente 80-100% de confluencia en una placa
de 6 pocillos se lavaron una vez con medio sin suero. El complejo de
ADN/lípido se añadió a las células lavadas, las cuales se incubaron
a 37ºC durante 5 horas. Las células se lavaron nuevamente y se
añadió el medio que contenía suero. Las células se recogieron
30-72 horas después y se extrajeron para proteínas
celulares. La actividad de CAT en la proteína extraída se midió
usando [^{14}C] cloranfenicol o [^{3}H] acetil CoA como un
sustrato radiomarcado. Una unidad de actividad de CAT se define como
el nmol de sustrato radiomarcado convertido al producto radiomarcado
en un minuto. El contenido proteínico en los extractos celulares se
midió mediante el ensayo Bradford (BIORAD).
Tan rápido como fue posible, se extirparon los
cerebros de 25 ratas Sprague-Dawley
(150-200 g), se lavaron con 100 ml de TRIS 20 mM,
EDTA 1 mM, EGTA 1mM, Ph 7,5, y se homogeneizaron en 150 ml de TRIS
20 mM enfriado con hielo, EGTA 10 mM, EDTA 2 mM, DTT 10 mM, sacarosa
0,25 M, PMSF 2 mM y 100 \mug/ml leupeptina, pH 7,5. El
homogeneizado se centrifugó inmediatamente a 100.000 g durante 40
minutos a 4ºC en un rotor Beckman Ti50.2. Se aplicó el sobrenadante
a una columna de 2,5 X 20 cm de DEAE Sefarosa (flujo rápido) que
contenía 60 ml de resina equilibrada con TRIS 20 mM, EDTA 1 mM, DTT
1 mM, pH 7,5 (tampón A). La columna se lavó con 300 ml de tampón A y
200 ml adicionales de tampón A que contenía KCI 0,03 M. La proteína
cinasa C se eluyó con 500 ml de KCI en gradiente continuo (0,03 -
0,3 M KCI). Se recogieron fracciones con volúmenes de 5 ml. Se
combinaron las fracciones que mostraron dependencia de calcio y
fosfolípido; la concentración de sal se ajustó a 1,5 KCI con la
cantidad apropiada de KCI sólido. La muestra bruta, que contenía KCI
1,5 M, se agitó durante 15 minutos y posteriormente se cargó a una
columna de 1 X 10 cm que contenía 9 ml de Fenil sefarosa equilibrada
con KCI 1,5 M en TRIS 20 mM, EGTA 0,5 mM, DTT 1 mM, pH 7,5 (tampón
B). La columna se lavó con 90 ml de tampón B que contenía KCI 1,5 M.
Se eluyó PKC con un gradiente continuo de 100 ml de KCI (KCI
1,5-0 M). Se recogieron fracciones con volúmenes de
3 ml. La columna se lavó con 50 ml adicionales de tampón B. La mayor
parte de la actividad enzimática se eluyó durante esta etapa. Se
combinaron las fracciones que mostraron dependencia de calcio y
fosfolípido, y se concentraron hasta 4 ml usando una célula de
ultrafiltración Amicon equipada con un filtro YM-10.
La muestra concentrada se cargó a una columna de 2,5 X100 cm que
contenía 400 ml de perlas Sephacryl S-200 HR
equilibradas con tampón B que contenía 10% glycerod (tampón C). Se
recogieron fracciones con volúmenes de 3 ml. Se pasaron
aproximadamente 150 ml de tampón; La PKC se eluyó muy próxima al
vacío de la columna. Se combinaron las fracciones que mostraron
dependencia de calcio y fosfolípido, y se cargaron en una columna de
0,5 x 5 cm que contenía 2,5 ml de polilisina agarosa equilibrada con
tampón C. La PKC se eluyó con un gradiente continuo de 40 ml de KCI
(KCI 0-0,8 M). Se recogieron fracciones con
volúmenes de 1 ml. Las primeras fracciones activas se contaminaron.
Se combinaron las fracciones no contaminadas, se concentraron y se
diluyeron con tampón C para eliminar el alto contenido de sal.
Después de volver a concentrar, la muestra se dividió en porciones
para futuros ensayos, se congeló en nitrógeno líquido y se conservó
a -80ºC. Se volvió a lograr una actividad total después de
congelación y deshielo rápidos. Aún pudieron detectarse indicios de
impurezas (116 k, 66 k y 50 k Mr) cuando el gel se plateó
marcadamente. La enzima proporcionó una actividad específica de 200
nmoles de fosfato incorporado por minuto por miligramo de proteína
cuando se ensayó para fosforilación de histona, usando el ensayo de
micelas mixtas Triton con presencia de 6,5% mol fosfatidilserina,
2,5% mol DAG y 100 \muM calcio. Se observaron actividades
específicas comprendidas entre 30 nmoles/min/mg y 600 nmoles/min/mg
para la PKC, usando el ensayo de micelas mixtas Triton bajo las
mismas condiciones.
Se disolvieron fosfatidilserina y
1,2-dioleína con y sin aditivo en una disolución de
cloroformo/metanol (2:1, v/v). El disolvente se evaporó con una
corriente de nitrógeno y se eliminaron los últimos indicios usando
un vacuodesecador a 40ºC. Las películas de lípido luego se
solubilizaron por la adición de 3% Triton X-100, se
agitaron vigorosamente en vórtex durante 30 segundos y luego se
incubaron a 30ºC durante 10 minutos para permitir el equilibrio. A
25 \mul, se utilizó una alícuota de esta disolución en un volumen
de ensayo final de 250 \mul, que contenía
TRIS-HCl 20 mM, pH 7,5, MgCL_{2}10 mM, 200
\mug/ml histona IIII-S, 100 \muM CaCl_{2}, 10
\muM[\gamma-^{32}P] adenosin 5'
trifosfato, Triton X-100 2,75 mM, con 300 \muM
(6,5 porcentaje en mol) fosfatidil-serina y 107
\muM (2,5 porcentaje en mol 1,2-dioleína. Para
los controles, 25 \mul de EGTA 20 mM reemplazaron el CaCl_{2}.
Para iniciar la reacción, se añadieron 150 ng de proteína. Después
de mezclar por un período breve, los tubos se incubaron durante 10
minutos a 30ºC. La reacción se terminó añadiendo 1 ml de 0,5 mg/ml
BSA frío y 1 ml de ácido tricloroacético al 25% frío. Esta mezcla se
pasó por un filtro GF/C Whatman y se lavó cinco veces con 2 ml de
ácido trifluoroacético al 25%. Después de secar, los filtros se
contaron con 6 ml de fluido de centello ACS.
Ninguno de los derivados de colesterol catiónico
forma por sí mismo una dispersión homogénea estable por sonicación
en un tampón de baja concentración iónica. Se debió añadir un
fosfolípido, ácido o neutro, para formar una dispersión de lípidos
mixta. Por ejemplo, el compuesto VIII requiere un mínimo de 1 parte
de PC o 9 partes del compuesto VIII para formar una dispersión
uniforme. En el caso del compuesto XIV, se requiere una ración
mínima de fosfatidil colina (PC) o fosfatidil etanolamina (PE) para
XIV = 4:6. Dicho lípido no catiónico utilizado en la dispersión se
denomina co-lípido.
Se utilizó ADN plásmido, pUCSV2CAT, como un
compuesto modelo para polianiones, ya que contiene un gen
estructural para la CAT. La eficacia de la administración
intracelular se puede ensayar fácilmente por la expresión de la
actividad de CAT en las proteínas extraídas de las células tratadas.
La Tabla I exhibe la actividad de CAT de células L929 de ratón que
han sido transfectadas con este ADN plásmido, mediadas por distintas
dispersiones de lípidos catiónicos. Además, también se ha medido la
actividad inhibidora de los derivados de colesterol catiónico puros
en dioleína, fosfatidil serina (PS) y proteína cinasa C estimulada
con Ca^{2+}. Esta actividad se expresó como un IC_{50}, que es
la concentración en la cual se inhibió el 50% de la actividad de
PKC. Como se puede observar a partir de la Tabla I, los derivados
con valores IC_{50} bajos, es decir, aquellos inhibidores potentes
de PKC, no fueron un buen vehículo de administración para ADN. Por
ejemplo, los compuestos IV, XI, VI y XIII, todos con un valor
IC_{S0} inferior a 20 \muM, produjeron actividades de CAT
mínimas en las células tratadas. Entre los que dieron origen a altas
actividades de CAT, los derivados con un solo grupo amino terciario
(compuestos VIII, VI y III) fueron más eficaces para suministrar ADN
que los análogos similares que contienen un solo grupo amino
cuaternario (compuestos IX y IV). A su vez, entre los derivados con
el mismo grupo principal amino, aquellos que contenían un brazo
espaciador más largo (compuestos VIII y IX) suministraron una mayor
cantidad de ADN que aquellos que contenían un brazo espaciador más
corto (compuestos X, XI, V, VI y XV), los cuales en general fueron
vehículos de administración menos eficaces.
El compuesto VII merece atención especial.
Contiene únicamente un solo grupo amino primario con un brazo
espaciador corto, incluso así, la actividad de transfección fue
alta.
| Compuesto | IC_{50}(nM) de Inhibición PKC | Actividad Relativa de CAT |
| III | 258 | 18 |
| IV | 12 | 0,7 |
| V | 643 | 2 |
| VI | 11 | 1 |
| VII | 246 | 68 |
| VIII | 191 | 100 |
| IX | 59 | 50 |
| X | 408 | 0,5 |
| XI | 15 | 11 |
| XII | 164 | 19 |
| XIII | 20 | 14 |
| XIV | - | 75 |
| XV | - - | 11 |
Los experimentos descritos en el Ejemplo XXI se
llevaron a cabo con una dispersión de lípidos que contenía un
derivado de colesterol catiónico y un co-lípido,
dioleoil fosfatidiletanolamina (DOPE). Se ha estudiado la función
del co-lípido en la eficacia de la administración.
La Figura 4 muestra los datos de un experimento en el cual el
compuesto VIII se mezcló con una variedad de
co-lípidos diferentes, neutros o ácidos, en una
relación molar de 1:1. Luego se estudió la actividad de la
administración de ADN de estas dispersiones mixtas. Como se puede
observar, solamente la DOPE soportó la actividad de administración
del compuesto VIII. Otros lípidos neutros, tales como dioleoil
fosfatidilcolina (DOPC),
N-metil-DOPE,
N,N-dimetil DOPE exhibieron poca actividad o
ninguna. Ninguno de los lípidos ácidos, como PS y fosfatidilglicerol
(PG) mostraron ninguna actividad.
La relación molar de DOPE y el compuesto VIII en
la dispersión también cumplió una función importante. La Figura 5
muestra la actividad máxima de administración de ADN de la
dispersión, que tuvo lugar cuando la dispersión contuvo
20-50% del compuesto VIII. Las cantidades excesivas
o deficientes del compuesto VIII en la dispersión mixta no
produjeron buena actividad de administración.
Se utilizó una mezcla 1:1 del compuesto VIII y
DOPE para estudiar la relación óptima de dispersión a ADN para la
administración. La Figura 6 muestra los datos de un experimento en
el que se añadieron distintas cantidades de dispersión a una
cantidad fija de ADN (5 \mug) para la transfección. Las
actividades máximas tuvieron lugar en 69-80 nmoles
de dispersión. Luego se utilizaron 70 nmoles de dispersión y se
varió la cantidad de ADN para la transfección (Fig. 7). La curva
acampanada en la figura indica que 5 \mug de ADN produjeron la
actividad máxima. Por lo tanto, la relación óptima de dispersión a
ADN fue 70 nmol de lípido para 5 \mug de ADN.
Se esperaba que los polianiones formaran complejo
con la dispersión de lípido catiónico vía interacciones
electroestáticas. Nuevamente, se utilizó para este estudio una
mezcla 1:1 del compuesto VIII y DOPE. Se caracterizaron los
complejos de dispersión/ADN por electroforesis con gel de agarosa.
Como se muestra en la Figura 8, se sometió a electroforesis 1 \mug
de ADN plásmido como dos bandas ubicadas próximamente en el gel (vía
1), que podían digerirse completamente si se incluía ADNasa en el
tampón de incubación (vía 7). Las mezclas de incubación que
contenían un aumento en las cantidades de dispersión, mostraron una
disminución en las intensidades de las bandas de ADN (vías
2,3,4,5 y 6). Además, todos los ADN libres sin complejo pudieron
digerirse por ADN se, pero se digirió solamente una porción del ADN
con complejo (vías 8,9,10,11 y 12). Estos resultados muestran
claramente que la dispersión de lípidos forma complejos con ADN que
son ya sea de tamaño mayor y/o cargados menos negativamente, de modo
tal que el complejo no penetra en el gel durante la electroforesis.
Además, el complejo es parcialmente resistente a ADNasa, mientras
que el ADN libre, sin complejo, no lo es. Se ha de destacar que en
la relación de dispersión/ADN óptima, prácticamente todo el ADN
formó complejo con los liposomas (no se muestra en la Figura 8).
Esto se estudió usando una dispersión compuesta
por el compuesto XIV y DOPE (3:2, relación molar). Se utilizaron
células A431 de carcinoma epidermoide humano para los experimentos
de transfección. Se mezcló una cantidad fija de ADN (4 \mug) con
una cantidad en aumento de dispersión de lípidos catiónicos o un
reactivo de transfección existente en plaza, Lipofectin, y se añadió
a las células A431 para la transfección (Figura 9). La toxicidad del
tratamiento a las células se midió como la cantidad total de
proteína celular extractable al momento del ensayo de la actividad
de CAT. Como se puede observar a partir de la Figura, las células
tratadas con Lipofectin mostraron un contenido proteínico altamente
reducido, teniendo lugar el 50% de la inhibición a aproximadamente 7
\mug lípido/ml. Las células tratadas con la dispersión que
contenía el compuesto XIV y DOPE exhibieron menos toxicidad; el
IC_{50} tuvo lugar a aproximadamente 25 \mug lípido/ml. La
dispersión nueva de colesterol catiónico también había producido
mayores actividades de CAT que la Lipofectin. Cabe destacar que la
actividad máxima de CAT de las células tratadas con Lipofectin tuvo
lugar en la concentración de Lipofectin de 15 \mug/ml. En esta
concentración, únicamente aproximadamente 12% de las proteínas
celulares totales pudieron recuperarse del cultivo. Por otra parte,
la actividad de CAT máxima de las células tratadas con la dispersión
de colesterol catiónico tuvo lugar a 20 \mug/ml; aproximadamente
80% de la proteína celular total aún permaneció en el cultivo en
esta concentración. Por lo tanto, la actividad de administración de
la nueva dispersión de colesterol catiónico es más potente y es
también menos tóxica para las células tratadas.
Se prepararon dispersiones de lípidos con
distintos derivados de colesterol catiónico y DOPE (aproximadamente
1:1 relación molar). Las actividades de transfección de las
dispersiones se probaron en diferentes momentos después de haber
almacenado las dispersiones a 4ºC en PBS, pH 7,5. De los derivados
mencionados en la Tabla I, solamente las dispersiones que contenían
los compuestos XIV y XV fueron estables después del almacenamiento;
sus actividades de transfección no cambiaron durante por lo menos 2
meses. Por otra parte, las dispersiones compuestas por otros
derivados perdieron actividad al cabo de 2-3 días de
almacenamiento. Los compuestos XIV y XV contienen un enlazador de
carbamoilo, mientras que los otros compuestos contienen un enlace
éster o un enlace amida. Se sabe que los enlaces éster y amida son
más sensibles a hidrólisis que el enlace carbamoilo, particularmente
en presencia de bases. Los derivados catiónicos pueden catalizar la
hidrólisis de los enlaces éster entre sí, lo que conduce a la
inactivación de la actividad de administración. Los compuestos que
contienen enlazadores de carbamoilo son menos sensibles a la
hidrólisis catalizada con base e incluso así pueden ser hidrolizados
por enzimas celulares, es decir, son biodegradables. Esto se
contrapone con el enlace éter no degradable en DOTMA, que es el
ingrediente activo de Lipofectin. Por lo tanto, un enlace carbamoilo
parece ser la mejor opción para el enlazador de los lípidos
catiónicos como vehículo de administración para polianiones.
En las reivindicaciones anejas se exponen varias
de las características de la invención que se cree son
novedosas.
Claims (83)
1. Un derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico, que tiene un grupo
colesterilo, un enlazador seleccionado entre el grupo que consiste
en carbamoil-NH-(CO)-O-*,
carboxiamida-NH-(CO)-*,
éster-O-(CO)-* inverso, en el que el enlazador está
unido por el lado marcado con un asterisco a la posición 3 del grupo
colesterilo y por el otro lado vía el nitrógeno o el carbono, a un
espaciador, teniendo el espaciador 1 a 20 átomos de carbono en una
cadena de alquilo ramificada o no ramificada, que contiene o no, por
lo menos uno de los siguientes heteroátomos: oxígeno o nitrógeno y
estando unido en su otro lado a un grupo amino catiónico
seleccionado entre el grupo que consiste en grupos amino primarios,
secundarios, terciarios y cuaternarios, excepto los compuestos en
los que:
(1) el grupo amino es primario, el enlazador es
-NH-C(=O)-O-* y el espaciador
contiene (i) un grupo
-(CH_{2}-O-CH_{2})_{2}-
o (ii) el espaciador es -(CH_{2})_{2}- o
-(CH_{2})_{5}-,
(2) el grupo amino es secundario, el enlazador es
-NH-C(C=O)-O-* y el
espaciador es -(CH_{2})_{n}-, en el que n es 2 ó 6,
y
(3) el grupo amino es cuaternario, el enlazador
es carbonato -O-C(=O)-O-* o éster
-(CO)-O-*, y el espaciador es
-(CH_{2})_{2}- o -(CH_{2})_{10}-.
2. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 1, en el que el enlazador
---
\uelm{N}{\uelm{\para}{}} --- C(=O) --- O
---es
-NH-C(=O)-O-*.
3. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 1, en el que el enlazador es -NH-C
(=O)-*.
4. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 1, en el que el espaciador comprende por lo menos un
átomo de nitrógeno.
5. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 1, en el que el espaciador comprende un átomo de
oxígeno.
6. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 5, en el que el compuesto es
colesteril-3\beta-oxisuccinamidoetilendimetilamina.
7. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 2, en el que el espaciador es
-(CH_{2})_{2}-.
8. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 2, en el que el grupo amino es terciario.
9. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con las
reivindicaciones 1 a 8, que es un lípido catiónico.
10. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 9, que es una sal de ácido de amonio cuaternario.
11. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 10, en el que la sal es una sal de yoduro.
12. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 9, en el que la sal es una sal de ácido
inorgánica.
13. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 9, que es
3\beta[N-(N',N'dimetil-aminoetano)-carbamoil]-colesterol.
14. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 9, que es
3\beta[N-(polietileno-imina)-carbamoil]-colesterol.
15. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 13 ó 14, que es sal de hidrocloruro.
16. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 13 ó 14, que está libre de disolvente orgánico.
17. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 13 ó 14, que es un sólido seco.
18. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 13, que es cristalino.
19. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 14, que está liofilizado.
20. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 13 ó 14, que es una película seca.
21. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 13 ó 14, que está hidratado.
22. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 21, en un tampón acuoso.
23. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 4, en el que el enlazador es -NH-C
(=O)-O-*
24. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 23, en el que el espaciador comprende un grupo amino
primario.
25. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 23, en el que el espaciador está unido a un grupo
amino seleccionado entre grupos amino primarios y secundarios.
26. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 24, que es
colesteril-3\beta-carboxiamidoetilenamina.
27. El derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico de acuerdo con la
reivindicación 1, que es un polvo, cristalizado o liofilizado.
28. Una dispersión acuosa que comprende un lípido
neutro y un derivado aminado de colesterol biodegradable,
sustancialmente no tóxico que tiene un grupo colesterilo, un
enlazador seleccionado entre el grupo que consiste en carbamoil
-NH-(CO)-O-*, carboxiamida -NH-(CO)-* o éster
-O-(CO)-* inverso, en el que el enlazador está unido por el lado
marcado por un asterisco a la posición 3 del grupo colesterilo y por
el otro lado vía el nitrógeno o el carbono, a un espaciador,
teniendo el espaciador 1 a 20 átomos de carbono en una cadena de
alquilo, ramificada o no ramificada, que contiene o no por lo menos
uno de los siguientes heteroátomos: oxígeno o nitrógeno y estando
unido en su otro lado a un grupo amino catiónico seleccionado entre
el grupo que consiste en grupos amino primarios, secundarios,
terciarios y cuaternarios, excepto los compuestos en los que
el grupo amino es primario, el enlazador es
-NH-C(=O)-O-* y el espaciador es (i)
-(C_{2}H_{5})- o (ii) contiene un grupo
-(CH_{2}-O- CH_{2})_{2}-.
29. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 28, en la que el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico es un lípido catiónico.
30. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 28, en la que en el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico, el enlazador
---
\delm{N}{\delm{\para}{}} --- C(=O) --- O
---*es
-NH-C(=O)-O-*.
31. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 28, en la que en el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico, el enlazador es
-NH-C(=O)-*.
32. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, que tiene un pH alcalino.
33. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que en el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico, el brazo espaciador es
-(CH_{2})_{2}-.
34. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que en el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico, el grupo amino es
terciario.
35. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que el lípido neutro es
fosfatidiletanolamina.
36. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 35, en la que la fosfatidiletanolamina es
dioleoilfosfatidiletanolamina.
37. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico es
3\beta[N-(N',N'-dimetilaminoetano)carbamoil]-colesterol.
38. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 37, en la que el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico es
3\beta[N-(N',N'-dimetilaminoetano)carbamoil]-colesterol
y el lípido neutro es dioleoilfosfatidiletanolamina.
39. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 38, en la que el porcentaje molar del derivado
aminado de colesterol biodegradable, sustancialmente no tóxico en la
dispersión es de 20 a 50%.
40. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 39, en la que el porcentaje molar del derivado
aminado de colesterol biodegradable, sustancialmente no tóxico en la
dispersión es de 50%.
41. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 38, que es en agua destilada, disolución salina
normal o disolución salina tamponada.
42. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 38, en la que las partículas en la dispersión acuosa
tienen un diámetro promedio de aproximadamente 150 nm.
43. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, que comprende ácido nucleico.
44. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 43, en la que el ácido nucleico es ADN.
45. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 44, en la que la dispersión comprende ADN de
mamífero.
46. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 44, en la que el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico es
3\beta[N-(N',N'-dimetilaminoetano)carbamoil]-colesterol.
47. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que en el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico, el espaciador comprende
por lo menos un átomo de nitrógeno.
48. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 47, en la que en el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico, el espaciador comprende un
átomo de oxígeno.
49. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 47, en la que en el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico, el espaciador es
-(CH_{2})_{2}-.
50. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico es una sal de ácido de
amonio cuaternario.
51. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico tiene más de un grupo amino
catiónico.
52. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico tiene un solo grupo amino
terciario.
53. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 52, en la que el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico es
3\beta[N-(N',N'-dimetilaminoetano)carbamoil]-colesterol.
54. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico es
3\beta[N-(polietilenimina)
carbamoil]colesterilo.
55. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico es
3\beta[N-(N',N'-dimetilaminoetano)carbamoil]-colesterol.
56. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que en el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico, el grupo amino es
terciario.
57. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que en el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico, el espaciador comprende un
grupo amino primario.
58. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 29, en la que en el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico, el espaciador está unido a
un grupo amino seleccionado entre grupos amino primarios y
secundarios.
59. La dispersión de acuerdo con la
reivindicación 43, en la que el derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico es
Colesteril-3\beta-Carboxiamidoetilenamina,
Colesteril-3\beta-Oxisuccinamidoetilendimetilamina,
Yoduro de
Colesteril-3\beta-Oxisuccinamidoetilentrimetilamonio,
Sal de Yodo de
1-Dimetilamino-3-Trimetilamonio-DL-2-Propil-Colesteril-3\beta-Oxisuccinato,
2-{[2-(dimetilamino)etil]metilamino}etil-Colesteril-3\beta-Oxisuccinato,
3\beta[N-(N',N'-dimetilaminoetano)-carbamoil]colesterol
o
3\beta[N-(polietilenimina)-carbamoil]colesterol.
60. Un método para facilitar la transferencia de
ácido nucleico a las células mamíferas con una dispersión acuosa que
comprende un lípido neutro, con la excepción de que cuando el lípido
neutro contiene un grupo acilo, es un lípido insaturado, y el
derivado aminado de colesterol biodegradable, sustancialmente no
tóxico que tiene un grupo colesterilo, un enlazador seleccionado
entre el grupo que consiste en
---
\uelm{N}{\uelm{\para}{}} --- C(C=O) --- O
---*-NH-C(=O)-*, y -O-(O=)C-* o
en el que el enlazador está unido por el lado
marcado con un asterisco a la posición 3 del grupo colesterilo y por
el otro lado vía el nitrógeno o el carbono, a un espaciador,
teniendo el espaciador 1 a 20 átomos de carbono en una cadena de
alquilo, ramificada o no ramificada, que contiene o no por lo menos
uno de los siguientes heteroátomos: oxígeno o nitrógeno y estando
unido en su otro lado a un grupo amino catiónico seleccionado entre
el grupo que consiste en grupos amino primarios, secundarios,
terciarios y cuaternarios, en el que el método comprende mezclar
dicha dispersión acuosa con el ácido nucleico, formando así un
complejo de dispersión/ácido nucleico, e incubar las células
mamíferas que se van a transfectar con el complejo, facilitando de
este modo la transferencia del ácido nucleico a las células.
61. El método de acuerdo con la reivindicación
60, en el que el derivado aminado de colesterol biodegradable,
sustancialmente no tóxico es un lípido catiónico.
62. El método de acuerdo con la reivindicación
61, en el que en el derivado aminado de colesterol biodegradable,
sustancialmente no tóxico, el enlazador
---
\uelm{N}{\uelm{\para}{}} --- C(C=O) --- O
---es
-NH-C(=O)-O-*.
63. El método de acuerdo con la reivindicación
61, en el que en el derivado aminado de colesterol biodegradable,
sustancialmente no tóxico, el enlazador es
-NH-C(=O)-*.
64. El método de acuerdo con la reivindicación
61, en el que en el derivado aminado de colesterol biodegradable,
sustancialmente no tóxico, el enlazador es -O-(O=)C-*.
65. El método de acuerdo con la reivindicación
61, en el que la dispersión tiene un pH alcalino.
66. El método de acuerdo con la reivindicación
61, en el que en el derivado aminado de colesterol biodegradable,
sustancialmente no tóxico, el espaciador es
-(CH_{2})_{2}-.
67. El método de acuerdo con la reivindicación
61, en el que en el derivado aminado de colesterol biodegradable,
sustancialmente no tóxico, el grupo amino es terciario.
68. El método de acuerdo con la reivindicación
61, en el que el lípido neutro es fosfatidiletanolamina.
69. El método de acuerdo con la reivindicación
68, en el que la fosfatidiletanolamina es
dioleoilfosfatidiletanolamina.
70. El método de acuerdo con la reivindicación
68, en el que el derivado aminado de colesterol biodegradable,
sustancialmente no tóxico es
3\beta[N-(N',N'-dimetilaminoetano)-
carbamoil]colesterol.
71. El método de acuerdo con la reivindicación
70, en el que el derivado aminado de colesterol biodegradable,
sustancialmente no tóxico es
3\beta[N-(N',N'-dimetilaminoetano)carbamoil]-colesterol
y el lípido neutro es dioleoilfosfatidiletanolamina.
72. El método de acuerdo con la reivindicación
71, en el que el porcentaje molar del derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico en la dispersión es de 20 a
50%.
73. El método de acuerdo con la reivindicación
72, en el que el porcentaje molar del derivado aminado de colesterol
biodegradable, sustancialmente no tóxico en la dispersión es de
50%.
74. El método de acuerdo con la reivindicación
71, en el que la dispersión es en agua destilada, disolución salina
normal o disolución salina tamponada.
75. El método de acuerdo con la reivindicación
71, en el que las partículas en la dispersión acuosa tienen un
diámetro promedio de aproximadamente 150 nm.
76. El método de acuerdo con la reivindicación
61, en el que la dispersión acuosa comprende ácido nucleico.
77. El método de acuerdo con la reivindicación
76, en el que el ácido nucleico es ADN.
78. El método de acuerdo con la reivindicación
77, en el que el ADN es ADN de mamífero.
79. El método de acuerdo con la reivindicación
61, en el que el derivado aminado de colesterol biodegradable,
sustancialmente no tóxico es
3\beta[N-(N',N'dimetilaminoetano)-carbamoil]-colesterol.
80. El método de acuerdo con la reivindicación
79, en el que la dispersión acuosa comprende ácido nucleico.
81. El método de acuerdo con la reivindicación
80, en el que el ácido nucleico es ADN.
82. El método de acuerdo con la reivindicación
81, en el que la dispersión comprende ADN de mamífero.
83. El método de acuerdo con la reivindicación
61, en el que el derivado aminado de colesterol biodegradable,
sustancialmente no tóxico es
Colesteril-3\beta-Carboxiamidoetilenamina,
Colesteril-3\beta-Oxisuccinamidoetilendimetilamina,
Yoduro de
Colesteril-3\beta-Oxisuccinamidoetilentrimetilamonio,
Sal de Yodo de
1-Dimetilamino-3-Trimetilamonio-DL-2-Propil-Colesteril-3\beta-Oxisuccinato,
2-{[2-(dimetilamino)etil]metilamino}etil-Colesteril-3\beta-Oxisuccinato,
3\beta[N-(N',N'-dimetilaminoetano)-carbamoil]colesterol
o
3\beta[N-(polietilenimina)-carbamoil]colesterol.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US751873 | 1991-08-28 | ||
| US07/751,873 US5283185A (en) | 1991-08-28 | 1991-08-28 | Method for delivering nucleic acids into cells |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2240958T3 true ES2240958T3 (es) | 2005-10-16 |
Family
ID=25023883
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES92920321T Expired - Lifetime ES2240958T3 (es) | 1991-08-28 | 1992-08-28 | Metodo para transferir acidos nucleicos a las celulas. |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5283185A (es) |
| EP (1) | EP0663013B1 (es) |
| JP (2) | JP3258661B2 (es) |
| AT (1) | ATE292690T1 (es) |
| AU (1) | AU665029B2 (es) |
| CA (1) | CA2116676A1 (es) |
| DE (1) | DE69233497T2 (es) |
| DK (1) | DK0663013T3 (es) |
| ES (1) | ES2240958T3 (es) |
| SG (1) | SG50630A1 (es) |
| WO (1) | WO1993005162A1 (es) |
Families Citing this family (502)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6509032B1 (en) * | 1991-08-28 | 2003-01-21 | Mcmaster University | Cationic amphiphiles |
| US5693769A (en) * | 1991-12-13 | 1997-12-02 | Transcell Technologies, Inc. | Glycosylated steroid derivatives for transport across biological membranes and process for making and using same |
| US5795870A (en) * | 1991-12-13 | 1998-08-18 | Trustees Of Princeton University | Compositions and methods for cell transformation |
| IL101241A (en) * | 1992-03-16 | 1997-11-20 | Yissum Res Dev Co | Pharmaceutical or cosmetic composition comprising stabilized oil-in-water type emulsion as carrier |
| WO1993019768A1 (en) * | 1992-04-03 | 1993-10-14 | The Regents Of The University Of California | Self-assembling polynucleotide delivery system |
| US6806084B1 (en) * | 1992-06-04 | 2004-10-19 | The Regents Of The University Of California | Methods for compositions for in vivo gene delivery |
| US5981175A (en) * | 1993-01-07 | 1999-11-09 | Genpharm Internation, Inc. | Methods for producing recombinant mammalian cells harboring a yeast artificial chromosome |
| EP1624068A1 (en) * | 1993-06-01 | 2006-02-08 | Life Technologies Inc. | Genetic immunization with cationic lipids |
| US5674908A (en) | 1993-12-20 | 1997-10-07 | Life Technologies, Inc. | Highly packed polycationic ammonium, sulfonium and phosphonium lipids |
| US5928944A (en) * | 1994-02-04 | 1999-07-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method of adenoviral-medicated cell transfection |
| US6075012A (en) * | 1994-02-11 | 2000-06-13 | Life Technologies, Inc. | Reagents for intracellular delivery of macromolecules |
| US6989434B1 (en) * | 1994-02-11 | 2006-01-24 | Invitrogen Corporation | Reagents for intracellular delivery of macromolecules |
| WO1995027478A1 (en) * | 1994-04-12 | 1995-10-19 | The Liposome Company, Inc. | Fusogenic liposomes and methods of making and using same |
| US5866135A (en) * | 1994-04-21 | 1999-02-02 | North American Vaccine, Inc. | Group A streptococcal polysaccharide immunogenic compositions and methods |
| US5777153A (en) * | 1994-07-08 | 1998-07-07 | Gilead Sciences, Inc. | Cationic lipids |
| FR2722506B1 (fr) * | 1994-07-13 | 1996-08-14 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition contenant des acides nucleiques, preparation et utilisations |
| US6468981B1 (en) * | 1994-07-29 | 2002-10-22 | Emory University | Compositions and methods for targeting pharmaceutically active materials to cells containing androgen receptors |
| US5908635A (en) * | 1994-08-05 | 1999-06-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method for the liposomal delivery of nucleic acids |
| US5837533A (en) | 1994-09-28 | 1998-11-17 | American Home Products Corporation | Complexes comprising a nucleic acid bound to a cationic polyamine having an endosome disruption agent |
| EP1179340A3 (en) * | 1994-09-30 | 2003-05-07 | INEX Pharmaceutical Corp. | Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells |
| US5753613A (en) * | 1994-09-30 | 1998-05-19 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells |
| FR2726764B1 (fr) * | 1994-11-14 | 1997-01-31 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Adjuvant pour composition vaccinale |
| US5840710A (en) * | 1994-12-09 | 1998-11-24 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles containing ester or ether-linked lipophilic groups for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| US5910487A (en) * | 1994-12-09 | 1999-06-08 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles and plasmids for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| US6071890A (en) * | 1994-12-09 | 2000-06-06 | Genzyme Corporation | Organ-specific targeting of cationic amphiphile/DNA complexes for gene therapy |
| US5747471A (en) * | 1994-12-09 | 1998-05-05 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles containing steroid lipophilic groups for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| US5719131A (en) * | 1994-12-09 | 1998-02-17 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles containing dialkylamine lipophilic groups for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| US6331524B1 (en) | 1994-12-09 | 2001-12-18 | Genzyme Corporation | Organ-specific targeting of cationic amphiphile / DNA complexes for gene therapy |
| US5650096A (en) * | 1994-12-09 | 1997-07-22 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| US5948767A (en) * | 1994-12-09 | 1999-09-07 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphile/DNA complexes |
| US6383814B1 (en) | 1994-12-09 | 2002-05-07 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| US5939401A (en) * | 1994-12-09 | 1999-08-17 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphile compositions for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| US5767099A (en) * | 1994-12-09 | 1998-06-16 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles containing amino acid or dervatized amino acid groups for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| US5786214A (en) * | 1994-12-15 | 1998-07-28 | Spinal Cord Society | pH-sensitive immunoliposomes and method of gene delivery to the mammalian central nervous system |
| DE59507224D1 (de) * | 1994-12-28 | 1999-12-16 | Max Delbrueck Centrum | Neues cholesterolderivat für den liposomalen gentransfer |
| US6008202A (en) * | 1995-01-23 | 1999-12-28 | University Of Pittsburgh | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
| US5795587A (en) | 1995-01-23 | 1998-08-18 | University Of Pittsburgh | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
| US5830430A (en) | 1995-02-21 | 1998-11-03 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Cationic lipids and the use thereof |
| US20030148968A1 (en) * | 1995-02-28 | 2003-08-07 | Hammond H. Kirk | Techniques and compositions for treating cardiovascular disease by in vivo gene delivery |
| US6752987B1 (en) | 1995-02-28 | 2004-06-22 | The Regents Of The University Of California | Adenovirus encoding human adenylylcyclase (AC) VI |
| EA001616B1 (ru) | 1995-02-28 | 2001-06-25 | Зе Риджентс Оф Зи Юнивесити Оф Кэлифоньэ | Способ лечения болезни сердца, способ лечения недостаточности периферических сосудов и способ ограничения доставки и экспрессии трансгенной конструкции в определенном органе или структуре |
| US5658588A (en) * | 1995-03-31 | 1997-08-19 | University Of Cincinnati | Fibrinogen-coated liposomes |
| FR2732895B1 (fr) * | 1995-04-11 | 1997-05-16 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Utilisation d'un compose amphipathique cationique comme agent de transfection, comme adjuvant de vaccin, ou comme medicament |
| US5859228A (en) * | 1995-05-04 | 1999-01-12 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Vascular endothelial growth factor (VEGF) nucleic acid ligand complexes |
| CA2220950A1 (en) * | 1995-05-26 | 1996-11-28 | Somatix Therapy Corporation | Delivery vehicles comprising stable lipid/nucleic acid complexes |
| US5705385A (en) * | 1995-06-07 | 1998-01-06 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer |
| WO1996040726A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Genta Incorporated | Novel carbamate-based cationic lipids |
| US5981501A (en) * | 1995-06-07 | 1999-11-09 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers |
| US6051429A (en) | 1995-06-07 | 2000-04-18 | Life Technologies, Inc. | Peptide-enhanced cationic lipid transfections |
| US5753262A (en) * | 1995-06-07 | 1998-05-19 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Cationic lipid acid salt of 3beta N- (N', N'-dimethylaminoethane) - carbamoyl!cholestrol and halogenated solvent-free preliposomal lyophilate thereof |
| EP0840744A4 (en) | 1995-06-07 | 1999-03-10 | Genta Inc | CATIONIC LIPIDS BASED ON PHOSPHONIC ACID |
| US7422902B1 (en) | 1995-06-07 | 2008-09-09 | The University Of British Columbia | Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer |
| US5976567A (en) * | 1995-06-07 | 1999-11-02 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer |
| US20030069173A1 (en) * | 1998-03-16 | 2003-04-10 | Life Technologies, Inc. | Peptide-enhanced transfections |
| US6120794A (en) * | 1995-09-26 | 2000-09-19 | University Of Pittsburgh | Emulsion and micellar formulations for the delivery of biologically active substances to cells |
| AUPN741696A0 (en) * | 1996-01-05 | 1996-01-25 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Delivery of nucleic acids ii |
| US20040014709A1 (en) * | 1996-01-08 | 2004-01-22 | Canji, Inc. | Methods and compositions for interferon therapy |
| US6392069B2 (en) | 1996-01-08 | 2002-05-21 | Canji, Inc. | Compositions for enhancing delivery of nucleic acids to cells |
| US5789244A (en) * | 1996-01-08 | 1998-08-04 | Canji, Inc. | Compositions and methods for the treatment of cancer using recombinant viral vector delivery systems |
| US7002027B1 (en) | 1996-01-08 | 2006-02-21 | Canji, Inc. | Compositions and methods for therapeutic use |
| FR2744453B1 (fr) * | 1996-02-05 | 1998-07-10 | Transgene Sa | Composes lipopolyamines, compositions pharmaceutiques en comprenant, vecteurs de transfert d'acide nucleique et procede de preparation |
| PT888379E (pt) * | 1996-03-01 | 2001-05-31 | Centre Nat Rech Scient | Compostos analogos a familia dos amidinios composicoes farmaceuticas que os contem e suas aplicacoes |
| FR2751972B1 (fr) * | 1996-07-30 | 1998-09-04 | Centre Nat Rech Scient | Composes apparentes a la famille des amidiniums, compositions pharmaceutiques les contenant et leurs applications |
| FR2745569B1 (fr) * | 1996-03-01 | 1998-05-07 | Centre Nat Rech Scient | Composes apparentes a la famille des amidiniums, compositions pharmaceutiques les contenant et leurs applications |
| US6432635B1 (en) | 1996-03-21 | 2002-08-13 | Helsinki University Licensing Ltd. Oy | Cystatin B mutants |
| WO1997039019A1 (en) * | 1996-04-12 | 1997-10-23 | University Of Pittsburgh | Novel cationic cholesteryl derivatives containing cyclic polar groups |
| US6258792B1 (en) | 1996-04-12 | 2001-07-10 | University Of Pittsburgh | Cationic cholesteryl derivatives containing cyclic polar groups |
| DE69727384T2 (de) * | 1996-05-24 | 2004-11-04 | IC-VEC Ltd. | Polykatonische sterin-derivate zur transfektion |
| US5935936A (en) * | 1996-06-03 | 1999-08-10 | Genzyme Corporation | Compositions comprising cationic amphiphiles and co-lipids for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| WO1998013026A1 (en) * | 1997-06-10 | 1998-04-02 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphile compositions for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| AU736143B2 (en) * | 1996-06-10 | 2001-07-26 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphile compositions for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| US6093816A (en) * | 1996-06-27 | 2000-07-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Cationic lipids |
| CA2259179C (en) * | 1996-07-03 | 2008-09-23 | University Of Pittsburgh | Emulsion formulations for hydrophilic active agents |
| US6750010B1 (en) | 1996-08-23 | 2004-06-15 | The Regents Of The University Of California | Methods for treating bipolar mood disorder associated with markers on chromosome 18p |
| DK0941066T3 (da) * | 1996-08-26 | 2004-02-23 | Transgene Sa | Kationisk lipid-nukleinsyre-komplekser |
| JP2001503258A (ja) * | 1996-10-18 | 2001-03-13 | バレンティス・インコーポレーテッド | 遺伝子発現および搬送系および用途 |
| EP0956301A2 (en) * | 1996-10-18 | 1999-11-17 | Valentis Inc. | Il-12 gene expression and delivery systems and uses |
| DE69735382T2 (de) * | 1996-11-04 | 2006-11-30 | Qiagen Gmbh | Kationische reagenzien zür transfektion |
| US5877220A (en) * | 1997-03-06 | 1999-03-02 | Genta, Incorporated | Amide-based oligomeric cationic lipids |
| US20030229040A1 (en) * | 1997-03-21 | 2003-12-11 | Georgetown University | Cationic liposomal delivery system and therapeutic use thereof |
| US6126965A (en) * | 1997-03-21 | 2000-10-03 | Georgetown University School Of Medicine | Liposomes containing oligonucleotides |
| US7262173B2 (en) * | 1997-03-21 | 2007-08-28 | Georgetown University | Chemosensitizing with liposomes containing oligonucleotides |
| US5925628A (en) * | 1997-03-31 | 1999-07-20 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| US5912239A (en) * | 1997-04-04 | 1999-06-15 | Genzyme Corporation | Imidazole-containing cationic amphiphiles for intracellular delivery of therapeutic molecules |
| US5981275A (en) * | 1997-04-14 | 1999-11-09 | Genzyme Corporation | Transgene expression system for increased persistence |
| US5948878A (en) * | 1997-04-15 | 1999-09-07 | Burgess; Stephen W. | Cationic polymers for nucleic acid transfection and bioactive agent delivery |
| FR2762787B1 (fr) * | 1997-04-30 | 2000-10-06 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Composition vaccinale anti-helicobacter comprenant un adjuvant de type th1 |
| CA2287976A1 (fr) * | 1997-04-30 | 1998-11-05 | Bruno Guy | Composition vaccinale anti-helicobacter comprenant un adjuvant de type th1 |
| FR2762788B1 (fr) * | 1997-04-30 | 2000-10-06 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Composition vaccinale anti-helicobacter pour usage par voie systemique sous-diaphragmatique |
| US5948925A (en) * | 1997-05-06 | 1999-09-07 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles containing linkers derived from neutral or positively charged amino acids |
| US5952516A (en) * | 1997-05-08 | 1999-09-14 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles containing multiplesteroid lipophilic groups |
| US5942634A (en) * | 1997-05-09 | 1999-08-24 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles for cell transfections |
| AU733310C (en) * | 1997-05-14 | 2001-11-29 | University Of British Columbia, The | High efficiency encapsulation of charged therapeutic agents in lipid vesicles |
| US6635623B1 (en) | 1997-06-13 | 2003-10-21 | Baylor College Of Medicine | Lipoproteins as nucleic acid vectors |
| US20050096288A1 (en) * | 1997-06-13 | 2005-05-05 | Aragene, Inc. | Lipoproteins as nucleic acid vectors |
| FR2765877B1 (fr) * | 1997-07-10 | 1999-09-10 | Oreal | Composition comprenant une dispersion aqueuse de vesicules lipidiques a base de carbamates a chaine cholesteryle, utilisation notamment en cosmetique et nouveaux composes |
| US20030073640A1 (en) * | 1997-07-23 | 2003-04-17 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Novel compositions for the delivery of negatively charged molecules |
| US6395713B1 (en) | 1997-07-23 | 2002-05-28 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for the delivery of negatively charged molecules |
| US6110745A (en) * | 1997-07-24 | 2000-08-29 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Preparation of lipid-nucleic acid particles using a solvent extraction and direct hydration method |
| US20020058795A1 (en) * | 1997-09-08 | 2002-05-16 | Russ J. Mumper | Hydrophobic glycosylamine derivatives, compositions, and methods for use |
| IL135578A0 (en) | 1997-10-29 | 2001-05-20 | Genzyme Corp | Compositions and methods for treating lysosomal storage disease |
| US5998482A (en) * | 1997-11-10 | 1999-12-07 | David; Sunil A. | Use of synthetic polycationic amphiphilic substances with fatty acid or hydrocarbon substituents as anti-sepsis agents |
| TWI239847B (en) | 1997-12-02 | 2005-09-21 | Elan Pharm Inc | N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease |
| US7964192B1 (en) | 1997-12-02 | 2011-06-21 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Prevention and treatment of amyloidgenic disease |
| US7179892B2 (en) | 2000-12-06 | 2007-02-20 | Neuralab Limited | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| US20010003580A1 (en) * | 1998-01-14 | 2001-06-14 | Poh K. Hui | Preparation of a lipid blend and a phospholipid suspension containing the lipid blend |
| FR2774394B1 (fr) * | 1998-01-30 | 2002-04-26 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composes transfectants sensibles aux conditions reductrices, compositions pharmaceutiques les contenant, et leurs applications |
| JP2002501762A (ja) | 1998-01-30 | 2002-01-22 | アバンテイス・フアルマ・エス・アー | 還元性条件に感受性のトランスフェクション用組成物、該組成物を含有する医薬組成物及びそれらの用途 |
| FR2777017B1 (fr) * | 1998-04-02 | 2002-08-23 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux agents de transfert d'acides nucleiques, compositions les contenant et leurs applications |
| EP1068188A1 (fr) * | 1998-04-02 | 2001-01-17 | Aventis Pharma S.A. | Nouveaux agents de transfert d'acides nucleiques, compositions les contenant et leurs applications |
| JP2969181B1 (ja) | 1998-05-18 | 1999-11-02 | 農林水産省蚕糸・昆虫農業技術研究所長 | カイコ等の昆虫に対するウイルスの感染、増殖方法 |
| FR2781160B1 (fr) | 1998-07-03 | 2000-08-18 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Utilisation d'un compose amphipathique pour adjuver un vaccin sous-unitaire |
| WO2000011181A1 (en) | 1998-08-20 | 2000-03-02 | Connaught Laboratories Limited | NUCLEIC ACID MOLECULES ENCODING INCLUSION MEMBRANE PROTEIN C OF $i(CHLAMYDIA) |
| US6693087B1 (en) | 1998-08-20 | 2004-02-17 | Aventis Pasteur Limited | Nucleic acid molecules encoding POMP91A protein of Chlamydia |
| US6686339B1 (en) * | 1998-08-20 | 2004-02-03 | Aventis Pasteur Limited | Nucleic acid molecules encoding inclusion membrane protein C of Chlamydia |
| EP1109924A2 (en) * | 1998-09-09 | 2001-06-27 | Genzyme Corporation | Methylation of plasmid vectors |
| US6135976A (en) | 1998-09-25 | 2000-10-24 | Ekos Corporation | Method, device and kit for performing gene therapy |
| NZ512244A (en) | 1998-11-12 | 2003-12-19 | Invitrogen Corp | Polycationic transfection reagents for introducing anions into a cell |
| CA2361201A1 (en) * | 1999-01-28 | 2000-08-03 | Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. | Composition and method for in vivo and in vitro attenuation of gene expression using double stranded rna |
| DE60036698T2 (de) * | 1999-05-03 | 2008-07-24 | Sanofi Pasteur Ltd., Toronto | Chlamydia-antigene und entsprechende dna-fragmente und deren verwendungen |
| KR20010069179A (ko) * | 1999-05-28 | 2001-07-23 | 박종상 | 유전자 전달용 양이온성 리피드 및 그 제조방법 |
| UA81216C2 (en) | 1999-06-01 | 2007-12-25 | Prevention and treatment of amyloid disease | |
| US20010048940A1 (en) * | 1999-06-18 | 2001-12-06 | Jennifer D. Tousignant | Cationic amphiphile micellar complexes |
| FR2797188A1 (fr) * | 1999-08-04 | 2001-02-09 | Univ Paris Nord Laboratoire De | Composes lipidiques cationiques et leurs utilisation pour le transfert de substances d'interet therapeutique chargees negativement |
| CA2388337C (en) | 1999-10-22 | 2013-01-08 | Aventis Pasteur Limited | Method of inducing and/or enhancing an immune response to tumor antigens |
| EP1233671A4 (en) * | 1999-11-29 | 2005-11-02 | Mirus Corp | COMPOSITIONS AND METHODS OF DISPOSING MEDICAMENTS USING AMPHIPHILIC BINDING MOLECULARS |
| GB9930533D0 (en) * | 1999-12-23 | 2000-02-16 | Mitsubishi Tokyo Pharm Inc | Nucleic acid delivery |
| EP1255822A2 (en) * | 1999-12-27 | 2002-11-13 | The Regents Of The University Of California | Modified adenylylcyclase type vi useful in gene therapy for congestive heart failure |
| US20030229037A1 (en) * | 2000-02-07 | 2003-12-11 | Ulrich Massing | Novel cationic amphiphiles |
| EP1383793B1 (en) | 2000-03-29 | 2011-10-19 | DGI BioTechnologies, L.L.C. | Insulin and igf-1 receptor agonists and antagonists |
| US20030027246A1 (en) * | 2000-03-31 | 2003-02-06 | Artur Pedyczak | Immunogenic peptides derived from prostate-specific membrane antigen (PSMA) and uses thereof |
| US7189705B2 (en) | 2000-04-20 | 2007-03-13 | The University Of British Columbia | Methods of enhancing SPLP-mediated transfection using endosomal membrane destabilizers |
| EP1792995A3 (en) | 2000-05-08 | 2007-06-13 | Sanofi Pasteur Limited | Chlamydia secretory locus orf and uses thereof |
| DK1282702T3 (da) * | 2000-05-10 | 2007-04-02 | Sanofi Pasteur Ltd | Immunogene polypeptider, som er kodet af KAGE-minigener, og anvendelser deraf |
| US20040204379A1 (en) * | 2000-06-19 | 2004-10-14 | Cheng Seng H. | Combination enzyme replacement, gene therapy and small molecule therapy for lysosomal storage diseases |
| ES2284681T3 (es) * | 2000-08-25 | 2007-11-16 | Aventis Pasteur Limited | Epitopos de oligosacaridos del nucleo de lipopolisacaridos de maemophilus influenzae como vacunas para la prevencion de infecciones por haemophilus influenzae. |
| US20040142474A1 (en) * | 2000-09-14 | 2004-07-22 | Expression Genetics, Inc. | Novel cationic lipopolymer as a biocompatible gene delivery agent |
| US6696038B1 (en) | 2000-09-14 | 2004-02-24 | Expression Genetics, Inc. | Cationic lipopolymer as biocompatible gene delivery agent |
| KR100381512B1 (ko) * | 2000-09-21 | 2003-04-26 | 굿젠 주식회사 | 유전자 및 생물학적 활성 약물 전달용 양이온성 지질과이의 용도 |
| KR100373845B1 (ko) * | 2000-09-21 | 2003-02-26 | 굿젠 주식회사 | 유전자 및 생물학적 활성 약물 전달용 양이온성 지질과이의 제조방법 |
| KR100373844B1 (ko) * | 2000-09-21 | 2003-02-26 | 굿젠 주식회사 | 유전자 및 생물학적 활성 약물 전달용 양이온성 지질과이의 제조방법 |
| FR2814958B1 (fr) * | 2000-10-06 | 2003-03-07 | Aventis Pasteur | Composition vaccinale |
| CA2325088A1 (en) * | 2000-12-01 | 2002-06-01 | Fusogenix Inc. | Novel membrane fusion proteins derived from poikilothermic reovirus |
| PE20020574A1 (es) | 2000-12-06 | 2002-07-02 | Wyeth Corp | Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta |
| US20020188023A1 (en) * | 2000-12-12 | 2002-12-12 | Michael Jorgensen | Compound |
| EP1669366A1 (en) * | 2000-12-12 | 2006-06-14 | Mitsubishi Chemical Corporation | Lipids comprising an aminoxy group |
| RU2290409C2 (ru) * | 2000-12-12 | 2006-12-27 | Митсубиси Кемикэл Корп. | Способ получения соединений, композиция для приготовления лекарственного средства |
| CA2369944A1 (en) * | 2001-01-31 | 2002-07-31 | Nucleonics Inc. | Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell |
| DE10109898A1 (de) | 2001-02-21 | 2002-09-05 | Novosom Gmbh | Lipide mit veränderlicher Ladung |
| US6613534B2 (en) | 2001-03-20 | 2003-09-02 | Wake Forest University Health Sciences | MAP-2 as a determinant of metastatic potential |
| US20030096414A1 (en) * | 2001-03-27 | 2003-05-22 | Invitrogen Corporation | Culture medium for cell growth and transfection |
| JP2004535388A (ja) * | 2001-04-30 | 2004-11-25 | ターゲティッド ジェネティクス コーポレイション | 脂質含有薬物送達複合体およびそれらの生成方法 |
| WO2002087541A1 (en) * | 2001-04-30 | 2002-11-07 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Lipid-based formulations for gene transfer |
| US20040143104A1 (en) * | 2001-08-08 | 2004-07-22 | Wadsworth Samuel C. | Methods of treating diabetes and other blood sugar disorders |
| EP1572885A2 (en) * | 2001-08-08 | 2005-09-14 | Genzyme Corporation | Methods for treating diabetes and other blood sugar disorders |
| MXPA04003761A (es) * | 2001-10-22 | 2005-04-08 | Sterrenbeld Biotechnologie North America Inc | Lipidos cationicos anfofilos derivados del colesterol. |
| US7255874B1 (en) | 2001-12-21 | 2007-08-14 | Closure Medical Corporation | Biocompatible polymers and adhesives: compositions, methods of making and uses related thereto |
| ES2290449T3 (es) | 2002-04-09 | 2008-02-16 | Sanofi Pasteur Limited | Acido nucleico de cea modificado y vectores de expresion. |
| US20040180438A1 (en) | 2002-04-26 | 2004-09-16 | Pachuk Catherine J. | Methods and compositions for silencing genes without inducing toxicity |
| EP1356820A1 (en) | 2002-04-26 | 2003-10-29 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | DNA vaccine combined with an inducer of tumor cell apoptosis |
| CA2487274A1 (en) * | 2002-05-06 | 2003-11-13 | Nucleonics Inc. | Spermine chemically linked to lipids and cell-specific targeting molecules as a transfection agent |
| WO2003097805A2 (en) | 2002-05-15 | 2003-11-27 | California Pacific Medical Center | Delivery of nucleic acid-like compounds |
| EP1519714B1 (en) | 2002-06-28 | 2010-10-20 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Method and apparatus for producing liposomes |
| EP1540004A4 (en) * | 2002-07-31 | 2007-10-03 | Nucleonics Inc | DOUBLE-STRING RNA STRUCTURES AND CONSTRUCTS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF |
| US20060251667A1 (en) * | 2002-08-29 | 2006-11-09 | Chua Kaw Y | Recombinant nucleic acid useful for inducing protective immune response against allergens |
| TW200509968A (en) | 2002-11-01 | 2005-03-16 | Elan Pharm Inc | Prevention and treatment of synucleinopathic disease |
| US8506959B2 (en) | 2002-11-01 | 2013-08-13 | Neotope Biosciences Limited | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
| US20050026859A1 (en) * | 2002-11-12 | 2005-02-03 | John Hilfinger | Methods and compositions of gene delivery agents for systemic and local therapy |
| CA2513072A1 (en) * | 2003-01-09 | 2004-07-29 | Invitrogen Corporation | Cellular delivery and activation polypeptide-nucleic acid complexes |
| US20040138154A1 (en) | 2003-01-13 | 2004-07-15 | Lei Yu | Solid surface for biomolecule delivery and high-throughput assay |
| US20070269891A9 (en) * | 2003-01-13 | 2007-11-22 | Yasunobu Tanaka | Solid surface with immobilized degradable cationic polymer for transfecting eukaryotic cells |
| EP1594512A4 (en) * | 2003-02-11 | 2007-07-11 | Kemia Inc | COMPOUNDS FOR THE TREATMENT OF VIRUS INFECTIONS |
| CA2518475C (en) | 2003-03-07 | 2014-12-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna agents comprising asymmetrical modifications |
| MXPA05010499A (es) | 2003-03-31 | 2006-05-25 | Johnson & Johnson | Particulas lipidicas que tienen un revestimiento lipidico asimetrico y metodo de preparacion de las mismas. |
| ES2702942T3 (es) | 2003-04-17 | 2019-03-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Agentes de ARNi modificados |
| US20070178066A1 (en) * | 2003-04-21 | 2007-08-02 | Hall Frederick L | Pathotropic targeted gene delivery system for cancer and other disorders |
| EP2353389B1 (en) | 2003-04-21 | 2015-11-04 | Epeius Biotechnologies Corporation | Compositions for treating disorders |
| CA2528136A1 (en) * | 2003-06-04 | 2004-12-16 | Canji, Inc. | Transfection agents |
| EP2270162B1 (en) | 2003-06-12 | 2018-10-03 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Conserved hbv and hcv sequences useful for gene silencing |
| CA2532228C (en) | 2003-07-16 | 2017-02-14 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Lipid encapsulated interfering rna |
| WO2005040388A2 (en) * | 2003-08-22 | 2005-05-06 | Nucleonics Inc. | Eukariotic expression systems for expression of inhibitory rna in multiple intracellular compartments |
| EP1664316B1 (en) * | 2003-09-15 | 2012-08-29 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Polyethyleneglycol-modified lipid compounds and uses thereof |
| CA2550583C (en) * | 2003-10-08 | 2013-01-15 | Sanofi Pasteur, Inc. | Modified cea /b7 vector |
| WO2005039558A1 (en) * | 2003-10-24 | 2005-05-06 | Transgene S.A. | Targeted delivery of therapeutically active compounds |
| US20050107318A1 (en) * | 2003-11-17 | 2005-05-19 | Samuel Wadsworth | Methods of treating diabetes and other blood sugar disorders |
| CA2555989A1 (en) * | 2004-02-24 | 2005-09-01 | Innogenetics N.V. | Method for determining the risk of developing a neurological disease |
| US7303881B2 (en) * | 2004-04-30 | 2007-12-04 | Pds Biotechnology Corporation | Antigen delivery compositions and methods of use |
| WO2005108981A1 (en) | 2004-05-12 | 2005-11-17 | The Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research | A method of cell isolation |
| CA2569664C (en) | 2004-06-07 | 2013-07-16 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Lipid encapsulated interfering rna |
| JP4764426B2 (ja) | 2004-06-07 | 2011-09-07 | プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド | カチオン性脂質および使用方法 |
| DK1766077T3 (da) | 2004-06-21 | 2012-07-16 | Univ Leland Stanford Junior | Differentielt udtrykte gener og veje i bipolar forstyrrelse og/eller alvorlig depressiv forstyrrelse |
| EP1773857A4 (en) * | 2004-07-02 | 2009-05-13 | Protiva Biotherapeutics Inc | THE IMMUNE SYSTEM STIMULATING SIRNA MOLECULES AND APPLICATIONS THEREOF |
| US20060051405A1 (en) * | 2004-07-19 | 2006-03-09 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions for the delivery of therapeutic agents and uses thereof |
| EA013752B1 (ru) | 2004-08-09 | 2010-06-30 | Элан Фармасьютикалз, Инк. | Предупреждение и лечение синуклеинопатических и амилоидогенных заболеваний |
| DE602005024015D1 (de) | 2004-08-23 | 2010-11-18 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Expressionskonstrukte mit mehreren rna-polymerase-iii-promotoren |
| DE602005027479D1 (de) | 2004-09-24 | 2011-05-26 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Targeting von zwischenprodukten zur gegenstrangreplikation von einzelstrangigen viren durch rnai |
| US8809287B2 (en) * | 2004-11-15 | 2014-08-19 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Compositions and methods for altering Wnt autocrine signaling |
| CA2587411A1 (en) * | 2004-11-17 | 2006-05-26 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Sirna silencing of apolipoprotein b |
| US7964571B2 (en) | 2004-12-09 | 2011-06-21 | Egen, Inc. | Combination of immuno gene therapy and chemotherapy for treatment of cancer and hyperproliferative diseases |
| EP2316942B1 (en) | 2004-12-22 | 2021-04-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Conserved hbv and hcv sequences useful for gene silencing |
| GB0507997D0 (en) * | 2005-02-01 | 2005-05-25 | Powderject Vaccines Inc | Nucleic acid constructs |
| EP3782655A1 (en) | 2005-05-17 | 2021-02-24 | Amicus Therapeutics, Inc. | A method for the treatment of pompe disease using 1-deoxynojirimycin and derivatives |
| US20060286082A1 (en) * | 2005-06-20 | 2006-12-21 | Kurzweil Raymond C | Systems and methods for generating biological material |
| AU2006261599B2 (en) | 2005-06-24 | 2011-10-06 | The Walter & Eliza Hall Institute Of Medical Research | Therapeutic pro-apoptotic BH3-like molecules and methods for generating and/or selecting the same |
| US20100119525A1 (en) * | 2005-08-01 | 2010-05-13 | Mount Sinai Schoool Of Medicine Of New York University | Method for extending longevity using npc1l1 antagonists |
| US20070031512A1 (en) * | 2005-08-03 | 2007-02-08 | Amcol International Corporation | Virus-interacting layered phyllosilicates and methods of inactivating viruses |
| US20100272769A1 (en) * | 2005-08-03 | 2010-10-28 | Amcol International | Virus-, Bacteria-, and Fungi-Interacting Layered Phyllosilicates and Methods of Use |
| US20080184618A1 (en) * | 2005-08-03 | 2008-08-07 | Amcol International | Virus-Interacting Layered Phyllosilicates and Methods of Use |
| US20070054873A1 (en) * | 2005-08-26 | 2007-03-08 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Glucocorticoid modulation of nucleic acid-mediated immune stimulation |
| TW200800235A (en) * | 2005-10-18 | 2008-01-01 | Otsuka Pharma Co Ltd | Carrier composition for nucleic acid transport |
| CN101346393B (zh) * | 2005-11-02 | 2015-07-22 | 普洛体维生物治疗公司 | 修饰的siRNA分子及其应用 |
| AU2006315562C1 (en) | 2005-11-12 | 2013-10-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods for treating depression using NCAM peptide mimetics |
| US7977314B2 (en) | 2005-12-02 | 2011-07-12 | Amorfix Life Sciences Limited | Methods and compositions to treat and detect misfolded-SOD1 mediated diseases |
| WO2007082352A1 (en) | 2006-01-20 | 2007-07-26 | Child Health Research Institute Inc | Method of treatment, prophylaxis and diagnosis of pathologies of the bone |
| US8278483B2 (en) * | 2006-02-07 | 2012-10-02 | Council Of Scientific & Industrial Research | Process for synthesis of glycomimicking cationic amphiphiles |
| GB0606190D0 (en) | 2006-03-28 | 2006-05-10 | Isis Innovation | Construct |
| WO2008042024A2 (en) | 2006-06-01 | 2008-04-10 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Neuroactive fragments of app |
| US7915399B2 (en) * | 2006-06-09 | 2011-03-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Modified siRNA molecules and uses thereof |
| HUE043966T2 (hu) | 2007-02-23 | 2019-09-30 | Prothena Biosciences Ltd | Szinukleinopátiás és amiloidogén betegség megelõzése és kezelése |
| PL2583978T3 (pl) | 2007-02-23 | 2016-07-29 | Prothena Biosciences Ltd Co | Profilaktyka i leczenie chorób synukleinopatycznych i amyloidogennych |
| US8877206B2 (en) | 2007-03-22 | 2014-11-04 | Pds Biotechnology Corporation | Stimulation of an immune response by cationic lipids |
| HUE040417T2 (hu) | 2007-05-04 | 2019-03-28 | Marina Biotech Inc | Aminosavlipidek és alkalmazásuk |
| NZ581542A (en) * | 2007-05-16 | 2012-02-24 | Mat Malta Advanced Technologies Ltd | Treatment and prevention of influenza |
| US20080312174A1 (en) * | 2007-06-05 | 2008-12-18 | Nitto Denko Corporation | Water soluble crosslinked polymers |
| ES2700141T3 (es) | 2007-08-02 | 2019-02-14 | Gilead Biologics Inc | Anticuerpos inhibidores LOXL2 y usos de los mismos |
| US9144546B2 (en) | 2007-08-06 | 2015-09-29 | Clsn Laboratories, Inc. | Nucleic acid-lipopolymer compositions |
| ES2528648T3 (es) | 2007-09-11 | 2015-02-11 | University Of Guelph | Inmunógenos polisacáridos de la Clostridium Difficile |
| CN102099055A (zh) | 2007-10-04 | 2011-06-15 | 津莫吉尼蒂克斯公司 | B7家族成员zB7H6及相关的组合物和方法 |
| EP2217221B1 (en) * | 2007-10-17 | 2018-06-27 | Korea Advanced Institute of Science and Technology | Ldl-like cationic nanoparticles for deliverying nucleic acid gene, method for preparing thereof and method for deliverying nucleic acid gene using the same |
| EP2212350B1 (en) | 2007-10-26 | 2013-08-28 | Governing Council of the University of Toronto | Treating chronic viral infection by targetting TIM-3 |
| EP2217721A4 (en) * | 2007-10-29 | 2013-01-09 | Univ California | OSTEOARTHRITIS-GENE THERAPY |
| WO2009073809A2 (en) | 2007-12-04 | 2009-06-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides |
| EP2231190B1 (en) * | 2007-12-06 | 2012-09-26 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Particulate drug carriers as desensitizing agents |
| RU2559782C2 (ru) | 2007-12-17 | 2015-08-10 | Марфл Аб | Набор для детекции спор, происходящих из микобактерий |
| ES2535419T3 (es) | 2007-12-27 | 2015-05-11 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Silenciamiento de expresión de quinasa tipo polo usando ARN interferente |
| DK2237803T3 (en) | 2007-12-28 | 2015-10-05 | Prothena Biosciences Ltd | Treatment and prophylaxis of amyloidosis |
| CA2721183C (en) | 2008-04-11 | 2019-07-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components |
| EP2281041B1 (en) | 2008-04-15 | 2014-07-02 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Silencing of csn5 gene expression using interfering rna |
| CA2721333C (en) | 2008-04-15 | 2020-12-01 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Novel lipid formulations for nucleic acid delivery |
| EP2276495B1 (en) | 2008-04-17 | 2018-11-21 | PDS Biotechnology Corporation | Stimulation of an immune response by enantiomers of cationic lipids |
| WO2009155100A1 (en) | 2008-05-30 | 2009-12-23 | Yale University | Targeted oligonucleotide compositions for modifying gene expression |
| EP2650014A2 (en) | 2008-06-20 | 2013-10-16 | Wyeth LLC | Compositions and methods of use of ORF1358 from beta-hemolytic streptococcal strains |
| EP2321414B1 (en) * | 2008-07-25 | 2018-01-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Enhancement of sirna silencing activity using universal bases or mismatches in the sense strand |
| CA2740000C (en) | 2008-10-09 | 2017-12-12 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids |
| JP2012505913A (ja) | 2008-10-16 | 2012-03-08 | マリーナ バイオテック，インコーポレイテッド | 遺伝子発現を抑制する治療におけるリポソームによる効率的な送達のプロセスおよび組成物 |
| CA2756070C (en) | 2009-03-27 | 2019-08-20 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Kanamycin antisense nucleic acid for the treatment of cancer |
| WO2010130896A2 (fr) | 2009-05-14 | 2010-11-18 | Sanofi Pasteur | Procédé pour adjuver le lipopolysaccharide (lps) des bactéries à gram-négatif |
| CA2761924C (fr) | 2009-05-14 | 2017-10-31 | Sanofi Pasteur | Vaccin meningocoque a base de lipooligosaccharide (los) provenant de souches modifiees de neisseria meningitidis d'immunotype l6 |
| CA2762095A1 (en) | 2009-05-16 | 2010-11-25 | Kunyuan Cui | Compositions comprising cationic amphiphiles and colipids for delivering therapeutic molecules |
| WO2011019423A2 (en) | 2009-05-20 | 2011-02-17 | Schering Corporation | Modulation of pilr receptors to treat microbial infections |
| US9018187B2 (en) | 2009-07-01 | 2015-04-28 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents |
| US8569256B2 (en) | 2009-07-01 | 2013-10-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents |
| WO2011000107A1 (en) | 2009-07-01 | 2011-01-06 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors |
| US8716464B2 (en) | 2009-07-20 | 2014-05-06 | Thomas W. Geisbert | Compositions and methods for silencing Ebola virus gene expression |
| WO2011017297A2 (en) | 2009-08-03 | 2011-02-10 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Biodegradable delivery system complexes for the delivery of bioactive compounds |
| WO2011019942A2 (en) * | 2009-08-12 | 2011-02-17 | University Of Kansas | Synthetic cholesterylamine-linker derivatives for agent delivery into cells |
| US20110059111A1 (en) | 2009-09-01 | 2011-03-10 | Los Angeles Biomedical Research Institute At Harbor-Ucla Medical Center | Mammalian receptors as targets for antibody and active vaccination therapy against mold infections |
| US9222086B2 (en) | 2009-09-23 | 2015-12-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing genes expressed in cancer |
| GB0918679D0 (en) | 2009-10-23 | 2009-12-09 | Iqur Ltd | Influenza vaccine |
| GB0918782D0 (en) | 2009-10-26 | 2009-12-09 | St Georges Hosp Medical School | A protein as an adjuvant for a vaccine |
| WO2011056682A1 (en) | 2009-10-27 | 2011-05-12 | The University Of British Columbia | Reverse head group lipids, lipid particle compositions comprising reverse headgroup lipids, and methods for the delivery of nucleic acids |
| WO2011067745A2 (en) | 2009-12-06 | 2011-06-09 | Rosetta Green Ltd. | Compositions and methods for enhancing plants resistance to abiotic stress |
| EP2513308B1 (en) | 2009-12-17 | 2017-01-18 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Modulation of pilr to treat immune disorders |
| WO2011088462A2 (en) | 2010-01-18 | 2011-07-21 | Albany Medical College | Alpha-fetoprotein 'ring and tail' peptides |
| WO2011109427A2 (en) | 2010-03-01 | 2011-09-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Improving the biological activity of sirna through modulation of its thermodynamic profile |
| GB201004475D0 (en) | 2010-03-17 | 2010-05-05 | Isis Innovation | Gene silencing |
| WO2011120023A1 (en) | 2010-03-26 | 2011-09-29 | Marina Biotech, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting survivin gene expression uses thereof |
| WO2011133584A2 (en) | 2010-04-19 | 2011-10-27 | Marina Biotech, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting hras gene expression and uses thereof |
| WO2011139843A2 (en) | 2010-04-28 | 2011-11-10 | Marina Biotech, Inc. | Multi-sirna compositions for reducing gene expression |
| WO2011141704A1 (en) | 2010-05-12 | 2011-11-17 | Protiva Biotherapeutics, Inc | Novel cyclic cationic lipids and methods of use |
| US20130123338A1 (en) | 2010-05-12 | 2013-05-16 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Novel cationic lipids and methods of use thereof |
| US8895017B2 (en) | 2010-06-07 | 2014-11-25 | Pfizer Inc. | HER-2 peptides and vaccines |
| US8822642B2 (en) | 2010-06-09 | 2014-09-02 | Zymogenetics, Inc. | Dimeric fusion proteins and related compositions and methods |
| CA2802994A1 (en) | 2010-06-17 | 2011-12-22 | The United States Of America As Represented By The Secretary, National I Nstitutes Of Health | Compositions and methods for treating inflammatory conditions |
| US9006417B2 (en) | 2010-06-30 | 2015-04-14 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Non-liposomal systems for nucleic acid delivery |
| GB201014026D0 (en) | 2010-08-20 | 2010-10-06 | Ucl Business Plc | Treatment |
| US8703824B2 (en) | 2010-09-14 | 2014-04-22 | Council Of Scientific & Industrial Research | Cationic amphiphiles with mannose-mimicking head-groups and a process for the preparation thereof |
| NZ703649A (en) | 2010-12-06 | 2016-08-26 | Penn State Res Found | Compositions and methods relating to proliferative diseases |
| EP2723758B1 (en) | 2011-06-21 | 2018-06-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compostions and methods of use thereof |
| SG11201400916XA (en) | 2011-08-22 | 2014-06-27 | Cangene Corp | Clostridium difficile antibodies |
| ME03008B (me) | 2011-09-19 | 2018-10-20 | Axon Neuroscience Se | Terapija na osnovu proteina i dijagnoza patologije u којој posreduje tau u alcнajмerovoj bolesti |
| SI3366775T2 (sl) | 2011-11-18 | 2025-12-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Modificirana sredstva RNAI |
| EP3730618A1 (en) | 2011-11-18 | 2020-10-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai agents, compositions and methods of use thereof for treating transthyretin (ttr) associated diseases |
| US9035039B2 (en) | 2011-12-22 | 2015-05-19 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing SMAD4 |
| WO2013118120A2 (en) | 2012-02-06 | 2013-08-15 | Rosetta Green Ltd. | Isolated polynucleotides expressing or modulating micrornas or targets of same, transgenic plants comprising same and uses thereof in improving nitrogen use efficiency, abiotic stress tolerance, biomass, vigor or yield of a plant |
| EP2817287B1 (en) | 2012-02-24 | 2018-10-03 | Arbutus Biopharma Corporation | Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof |
| CN104271772A (zh) | 2012-03-29 | 2015-01-07 | 科罗拉多州立大学董事会,公司实体 | 点击核酸 |
| US9127274B2 (en) | 2012-04-26 | 2015-09-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serpinc1 iRNA compositions and methods of use thereof |
| RU2737765C2 (ru) | 2012-05-04 | 2020-12-02 | Пфайзер Инк. | Простатоассоциированные антигены и иммунотерапевтические схемы на основе вакцин |
| CA2876656C (en) | 2012-06-15 | 2023-09-26 | Pds Biotechnology Corporation | Cationic lipid vaccine compositions and methods of use |
| AU2013296321B2 (en) | 2012-08-03 | 2019-05-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Modified RNAi agents |
| CN113144188A (zh) | 2012-09-21 | 2021-07-23 | Pds生物科技公司 | 改进的疫苗组合物和使用方法 |
| IL292159B1 (en) | 2012-12-05 | 2026-04-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | PCSK9 iRNA compositions and methods of using them |
| US10501531B2 (en) | 2013-03-13 | 2019-12-10 | Prothena Biosciences Limited | Tau immunotherapy |
| IL288931B2 (en) | 2013-03-14 | 2025-05-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Compositions comprising a complementary portion of C5 IRNA and methods of using them |
| AU2014236208B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-07-19 | Genvivo, Inc. | Thymidine kinase diagnostic assay for gene therapy applications |
| WO2014152832A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Immusoft Corporation | Methods for in vitro memory b cell differentiation and transduction with vsv-g pseudotyped viral vectors |
| AU2013381866A1 (en) | 2013-03-15 | 2015-09-24 | The Penn State Research Foundation | Compositions and methods including celecoxib and plumbagin relating to treatment of cancer |
| WO2014142995A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | The Penn State Research Foundation | Compositions and methods including leelamine and arachidonyl trifluoromethyl ketone relating to treatment of cancer |
| EA038792B1 (ru) | 2013-05-22 | 2021-10-20 | Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. | КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ RNAi Serpina1 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ |
| KR102234623B1 (ko) | 2013-05-22 | 2021-04-02 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | Ｔｍｐｒｓｓ6 조성물 및 이의 사용 방법 |
| EP3004173B1 (en) | 2013-06-06 | 2018-05-30 | iQur Limited | Single domain antibody display |
| JP6620093B2 (ja) | 2013-07-23 | 2019-12-11 | アービュートゥス バイオファーマ コーポレイションＡｒｂｕｔｕｓ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | メッセンジャーｒｎａを送達するための組成物及び方法 |
| WO2015042564A1 (en) | 2013-09-23 | 2015-03-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating or preventing transthyretin (ttr) associated diseases |
| SG10201804960RA (en) | 2013-12-12 | 2018-07-30 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Complement component irna compositions and methods of use thereof |
| US10119136B2 (en) | 2014-01-09 | 2018-11-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi agents modified at the 4′-C position |
| CN113057959B (zh) | 2014-02-11 | 2024-07-16 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 己酮糖激酶（KHK）iRNA组合物及其使用方法 |
| AU2015218909A1 (en) | 2014-02-19 | 2016-08-04 | Emergent Biosolutions Canada Inc. | Marburg monoclonal antibodies |
| US10821175B2 (en) | 2014-02-25 | 2020-11-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Lipid nanoparticle vaccine adjuvants and antigen delivery systems |
| AU2015264038B2 (en) | 2014-05-22 | 2021-02-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiotensinogen (AGT) iRNA compositions and methods of use thereof |
| KR20170018383A (ko) | 2014-06-11 | 2017-02-17 | 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 | 심혈관 질환의 치료 방법 |
| EP3185896B1 (en) | 2014-06-20 | 2025-04-02 | University of Saskatchewan | Exotoxin/thermolysin compositions and methods and uses for treating or preventing laminitis |
| EP3169310A1 (en) | 2014-07-15 | 2017-05-24 | Life Technologies Corporation | Compositions with lipid aggregates and methods for efficient delivery of molecules to cells |
| IL316808A (en) | 2014-08-20 | 2025-01-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Modified double-stranded RNA materials and their uses |
| WO2016040589A1 (en) | 2014-09-12 | 2016-03-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotide agents targeting complement component c5 and methods of use thereof |
| EP3201338B1 (en) | 2014-10-02 | 2021-11-03 | Arbutus Biopharma Corporation | Compositions and methods for silencing hepatitis b virus gene expression |
| WO2016057693A1 (en) | 2014-10-10 | 2016-04-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhalation delivery of conjugated oligonucleotide |
| TW202503057A (zh) | 2014-10-10 | 2025-01-16 | 美商艾爾妮蘭製藥公司 | 用於抑制hao1(羥酸氧化酶1(乙醇酸鹽氧化酶))基因表現的組合物及方法 |
| WO2016061487A1 (en) | 2014-10-17 | 2016-04-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotide agents targeting aminolevulinic acid synthase-1 (alas1) and uses thereof |
| EP3212794B1 (en) | 2014-10-30 | 2021-04-07 | Genzyme Corporation | Polynucleotide agents targeting serpinc1 (at3) and methods of use thereof |
| KR102545316B1 (ko) | 2014-11-10 | 2023-06-22 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | Ｂ형 간염 바이러스(ｈｂｖ) ｉｒｎａ 조성물 및 그의 이용 방법 |
| JP2017535552A (ja) | 2014-11-17 | 2017-11-30 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． | アポリポタンパク質Ｃ３（ＡＰＯＣ３）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法 |
| US20180066026A1 (en) | 2014-12-17 | 2018-03-08 | Ei Du Pont De Nemours And Company | Modulation of yep6 gene expression to increase yield and other related traits in plants |
| DK3234107T3 (da) | 2014-12-19 | 2022-10-17 | Immusoft Corp | B-celler til in vivo-levering af terapeutiske midler |
| CA2976445A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof |
| US10745702B2 (en) | 2015-04-08 | 2020-08-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the LECT2 gene |
| US10508134B2 (en) | 2015-05-01 | 2019-12-17 | Onl Therapeutics, Inc. | Peptide compositions and methods of use |
| JP6695902B2 (ja) | 2015-05-06 | 2020-05-20 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． | 第ＸＩＩ因子（ハーゲマン因子）（Ｆ１２）、カリクレインＢ、血漿（フレッチャー因子）１（ＫＬＫＢ１）、及びキニノーゲン１（ＫＮＧ１）ｉＲＮＡ組成物及びその使用方法 |
| WO2016197132A1 (en) | 2015-06-04 | 2016-12-08 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Treating hepatitis b virus infection using crispr |
| WO2016201301A1 (en) | 2015-06-12 | 2016-12-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c5 irna compositions and methods of use thereof |
| EP3310918B1 (en) | 2015-06-18 | 2020-08-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotide agents targeting hydroxyacid oxidase (glycolate oxidase, hao1) and methods of use thereof |
| WO2016209862A1 (en) | 2015-06-23 | 2016-12-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glucokinase (gck) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2017011286A1 (en) | 2015-07-10 | 2017-01-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Insulin-like growth factor binding protein, acid labile subunit (igfals) and insulin-like growth factor 1 (igf-1) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2017019891A2 (en) | 2015-07-29 | 2017-02-02 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing hepatitis b virus gene expression |
| WO2017035278A1 (en) | 2015-08-24 | 2017-03-02 | Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. | Polynucleotide nanoparticles for the modulation of gene expression and uses thereof |
| CA2996873A1 (en) | 2015-09-02 | 2017-03-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Programmed cell death 1 ligand 1 (pd-l1) irna compositions and methods of use thereof |
| BR112018004296B1 (pt) | 2015-09-04 | 2020-05-05 | Primatope Therapeutics Inc | anticorpos anti-cd40 humanizados e usos dos mesmos |
| WO2017048620A1 (en) | 2015-09-14 | 2017-03-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotide agents targeting patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) and methods of use thereof |
| KR20180063885A (ko) | 2015-09-24 | 2018-06-12 | 더 유니버시티 오브 노쓰 캐롤라이나 엣 채플 힐 | 전이 감소를 위한 방법 및 조성물 |
| US10149887B2 (en) | 2015-10-23 | 2018-12-11 | Canbas Co., Ltd. | Peptides and peptidomimetics in combination with t cell activating and/or checkpoint inhibiting agents for cancer treatment |
| AU2016353553B2 (en) | 2015-11-09 | 2022-01-20 | The University Of British Columbia | Amyloid beta epitopes and antibodies thereto |
| KR102776187B1 (ko) | 2015-11-09 | 2025-03-07 | 더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아 | 아밀로이드 베타에서의 n-말단 에피토프 및 이에 형태적으로-선택적인 항체 |
| EP3374381A4 (en) | 2015-11-09 | 2019-05-15 | The University Of British Columbia | EPITOPES IN THE AMYLOID-BETA MEDIUM REGION AND CONFORMITY-SELECTIVE ANTIBODIES THEREOF |
| CA3005251A1 (en) | 2015-11-13 | 2017-05-18 | Pds Biotechnology Corporation | Lipids as synthetic vectors to enhance antigen processing and presentation ex-vivo in dendritic cell therapy |
| EP3387129A1 (en) | 2015-12-10 | 2018-10-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | STEROL REGULATORY ELEMENT BINDING PROTEIN (SREBP) CHAPERONE (SCAP) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| MX2018008797A (es) | 2016-01-19 | 2018-11-29 | Pfizer | Vacunas contra el cancer. |
| WO2017147212A1 (en) | 2016-02-22 | 2017-08-31 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for imaging cell populations |
| MX2018013386A (es) | 2016-05-02 | 2019-02-28 | Prothena Biosciences Ltd | Anticuerpos que reconocen tau. |
| PT3452507T (pt) | 2016-05-02 | 2022-12-20 | Prothena Biosciences Ltd | Imunoterapia anti-tau |
| MY198194A (en) | 2016-05-02 | 2023-08-09 | Prothena Biosciences Ltd | Antibodies Recognizing Tau |
| EP3469083A1 (en) | 2016-06-10 | 2019-04-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COMPLEMENT COMPONENT C5 iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF FOR TREATING PAROXYSMAL NOCTURNAL HEMOGLOBINURIA (PNH) |
| CN109563511A (zh) | 2016-06-30 | 2019-04-02 | 阿布特斯生物制药公司 | 用于递送信使rna的组合物和方法 |
| CN109476729A (zh) | 2016-07-18 | 2019-03-15 | 英属哥伦比亚大学 | 淀粉样蛋白β的抗体 |
| EP3500294A4 (en) | 2016-08-22 | 2020-07-29 | Arbutus Biopharma Corporation | ANTI-PD-1 ANTIBODIES, OR THEIR FRAGMENTS, FOR THE TREATMENT OF HEPATITIS B |
| EP3528827A4 (en) | 2016-10-21 | 2020-11-04 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Influenza hemagglutinin protein vaccines |
| US20180125920A1 (en) | 2016-11-09 | 2018-05-10 | The University Of British Columbia | Methods for preventing and treating A-beta oligomer-associated and/or -induced diseases and conditions |
| JP2020500020A (ja) | 2016-11-14 | 2020-01-09 | ノバルティス アーゲー | 融合誘導性タンパク質ｍｉｎｉｏｎに関連する組成物、方法、および治療上の使用 |
| TWI788312B (zh) | 2016-11-23 | 2023-01-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 絲胺酸蛋白酶抑制因子Ａ１ ｉＲＮＡ組成物及其使用方法 |
| WO2018112320A1 (en) | 2016-12-16 | 2018-06-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating or preventing ttr-associated diseases using transthyretin (ttr) irna compositions |
| CA3059446A1 (en) | 2017-04-18 | 2018-10-25 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (hbv) infection |
| KR102784294B1 (ko) | 2017-05-02 | 2025-03-19 | 프로테나 바이오사이언시즈 리미티드 | 타우 인식 항체 |
| EP4295895A3 (en) | 2017-05-11 | 2024-03-27 | Tc1 Llc | Thermal interconnect for implantable blood pump |
| EP3630046B1 (en) | 2017-05-30 | 2024-12-25 | The Board of Regents of the University of Oklahoma | Anti-doublecortin-like kinase 1 antibodies and methods of use |
| US12286469B2 (en) | 2017-07-18 | 2025-04-29 | The University Of British Columbia | Humanized antibodies binding to amyloid-beta (A-beta) |
| EP3461487A1 (en) | 2017-09-29 | 2019-04-03 | Nlife Therapeutics S.L. | Compositions and methods for the delivery of mrna to hepatic cells |
| SG11202002940QA (en) | 2017-11-01 | 2020-04-29 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof |
| WO2019100039A1 (en) | 2017-11-20 | 2019-05-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serum amyloid p component (apcs) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2019113200A1 (en) | 2017-12-05 | 2019-06-13 | Pds Biotechnology Corporation | Methods and compositions comprising cationic lipids for stimulating type 1 interferon genes |
| EP3728281A1 (en) | 2017-12-21 | 2020-10-28 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Chirally-enriched double-stranded rna agents |
| BR112020015308A8 (pt) | 2018-01-29 | 2023-02-07 | Merck Sharp & Dohme | Proteínas f de rsv estabilizadas e usos das mesmas |
| EP3765601A1 (en) | 2018-03-16 | 2021-01-20 | Immusoft Corporation | B cells genetically engineered to secrete follistatin and methods of using the same to treat follistatin-related diseases, conditions, disorders and to enhance muscle growth and strength |
| WO2019245817A1 (en) | 2018-06-19 | 2019-12-26 | Armo Biosciences, Inc. | Compositions and methods of use of il-10 agents in conjunction with chimeric antigen receptor cell therapy |
| GB201811382D0 (en) | 2018-07-11 | 2018-08-29 | Taylor John Hermon | Vaccine |
| EP3833762A4 (en) | 2018-08-09 | 2022-09-28 | Verseau Therapeutics, Inc. | Oligonucleotide compositions for targeting ccr2 and csf1r and uses thereof |
| US20210332367A1 (en) | 2018-09-18 | 2021-10-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | KETOHEXOKINASE (KHK) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| US10913951B2 (en) | 2018-10-31 | 2021-02-09 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Silencing of HNF4A-P2 isoforms with siRNA to improve hepatocyte function in liver failure |
| CU24781B1 (es) | 2018-11-08 | 2026-02-09 | Prothena Biosciences Ltd | Anticuerpos humanizados que reconocen tau |
| WO2020117706A1 (en) | 2018-12-03 | 2020-06-11 | Triplet Therapeutics, Inc. | Methods for the treatment of trinucleotide repeat expansion disorders associated with mlh3 activity |
| WO2020117840A2 (en) | 2018-12-05 | 2020-06-11 | Empirico Inc. | Process to inhibit or eliminate eosinophilic diseases of the airway and related conditions |
| WO2020118307A1 (en) | 2018-12-07 | 2020-06-11 | The Regents Of The Univefisity Of California | Fluorous metal chelates compositions |
| AU2019406186A1 (en) | 2018-12-20 | 2021-07-15 | Praxis Precision Medicines, Inc. | Compositions and methods for the treatment of KCNT1 related disorders |
| WO2020150265A1 (en) | 2019-01-15 | 2020-07-23 | Empirico Inc. | Prodrugs of alox-15 inhibitors and methods of using the same |
| JP7630834B2 (ja) | 2019-03-03 | 2025-02-18 | プロセナ バイオサイエンシーズ リミテッド | タウ認識抗体 |
| WO2020219531A1 (en) | 2019-04-22 | 2020-10-29 | The Penn State Research Foundation | Methods and compositions relating to inhibition of aldehyde dehydrogenases for treatment of cancer |
| AU2020279101B2 (en) | 2019-05-17 | 2025-07-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oral delivery of oligonucleotides |
| IT201900007060A1 (it) | 2019-05-21 | 2020-11-21 | St Superiore Di Sanita | Cellule tumorali ingegnerizzate e loro usi |
| EP3980533A1 (en) | 2019-06-07 | 2022-04-13 | Scribe Therapeutics Inc. | Engineered casx systems |
| IT201900012540A1 (it) | 2019-07-22 | 2021-01-22 | Humanitas Mirasole Spa | Inibitori di CHI3L1 e loro usi |
| EP4013870A1 (en) | 2019-08-13 | 2022-06-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Small ribosomal protein subunit 25 (rps25) irna agent compositions and methods of use thereof |
| EP4051795A1 (en) | 2019-11-01 | 2022-09-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Huntingtin (htt) irna agent compositions and methods of use thereof |
| WO2021100034A1 (en) | 2019-11-19 | 2021-05-27 | Protalix Ltd. | Removal of constructs from transformed cells |
| US12565653B2 (en) | 2019-11-22 | 2026-03-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | ATAXIN3 (ATXN3) RNAi agent compositions and methods of use thereof |
| KR20220115995A (ko) | 2019-12-13 | 2022-08-19 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 인간 염색체 ９ 개방 판독 프레임 72 (C9orf72) iRNA 제제 조성물 및 이의 사용 방법 |
| KR20220141299A (ko) | 2020-01-14 | 2022-10-19 | 신테카인, 인크. | Il2 오르토로그 및 사용 방법 |
| WO2021154941A1 (en) | 2020-01-31 | 2021-08-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c5 irna compositions for use in the treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als) |
| JP2023516904A (ja) | 2020-02-14 | 2023-04-21 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー | Ｈｐｖワクチン |
| EP4114947A1 (en) | 2020-03-05 | 2023-01-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing complement component c3-associated diseases |
| TW202204615A (zh) | 2020-03-26 | 2022-02-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 冠狀病毒ｉＲＮＡ組成物及其使用方法 |
| US12534731B2 (en) | 2020-04-01 | 2026-01-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Alpha-2A adrenergic receptor (ADRA2A) iRNA agent compositions and methods of use thereof |
| EP4133077A1 (en) | 2020-04-07 | 2023-02-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transmembrane serine protease 2 (tmprss2) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4133076A1 (en) | 2020-04-07 | 2023-02-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiotensin-converting enzyme 2 (ace2) irna compositions and methods of use thereof |
| IL297702A (en) | 2020-04-27 | 2022-12-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Apolipoprotein e (apoe) irna agent compositions and methods of use thereof |
| EP4150090A1 (en) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of otoferlin (otof) |
| WO2021231691A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of retinoschisin 1 (rsi) |
| WO2021231680A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2) |
| WO2021231685A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of transmembrane channel-like protein 1 (tmc1) |
| EP4150087A1 (en) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of gap junction protein beta 2 (gjb2) |
| WO2021231673A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of leucine rich repeat kinase 2 (lrrk2) |
| WO2021231675A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of argininosuccinate synthetase (ass1) |
| WO2021231698A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of argininosuccinate lyase (asl) |
| BR112022023366A2 (pt) | 2020-05-19 | 2023-05-02 | Othair Prothena Ltd | Vacina com múltiplos epítopos para o tratamento de mal de alzheimer |
| AR122534A1 (es) | 2020-06-03 | 2022-09-21 | Triplet Therapeutics Inc | Métodos para el tratamiento de los trastornos de expansión por repetición de nucleótidos asociados con la actividad de msh3 |
| EP4162050A1 (en) | 2020-06-09 | 2023-04-12 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai compositions and methods of use thereof for delivery by inhalation |
| WO2021252649A2 (en) | 2020-06-09 | 2021-12-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Sirna compositions and methods for silencing gpam (glycerol-3-phosphate acyltransferase 1, mitochondrial) expression |
| BR112022026508A2 (pt) | 2020-06-24 | 2023-03-07 | Prothena Biosciences Ltd | Anticorpos que reconhecem sortilina |
| KR20230050336A (ko) | 2020-07-10 | 2023-04-14 | 인스티튜트 내셔널 드 라 싼테 에 드 라 리셰르셰 메디칼르 (인 썸) | 뇌전증을 치료하기 위한 방법과 조성물 |
| EP4192489A4 (en) | 2020-08-05 | 2024-12-11 | Synthekine, Inc. | IL2RB-BINDING MOLECULES AND METHODS OF USE |
| WO2022031885A2 (en) | 2020-08-05 | 2022-02-10 | Synthekine, Inc. | Il10ra binding molecules and methods of use |
| WO2022031884A2 (en) | 2020-08-05 | 2022-02-10 | Synthekine, Inc. | Il2rg binding molecules and methods of use |
| BR112023001723A2 (pt) | 2020-08-05 | 2023-05-02 | Synthekine Inc | Moléculas de ligação à gp130 e métodos de uso |
| US12286482B2 (en) | 2020-08-05 | 2025-04-29 | Synthekine, Inc. | IL10RB binding molecules and encoding nucleic acids |
| WO2022032166A1 (en) | 2020-08-07 | 2022-02-10 | Othair Prothena Limited | Multiepitope vaccine for the treatment of alzheimer's disease |
| WO2022066847A1 (en) | 2020-09-24 | 2022-03-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Dipeptidyl peptidase 4 (dpp4) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4225917A1 (en) | 2020-10-05 | 2023-08-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | G protein-coupled receptor 75 (gpr75) irna compositions and methods of use thereof |
| CA3198823A1 (en) | 2020-10-21 | 2022-04-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating primary hyperoxaluria |
| EP4232582A1 (en) | 2020-10-23 | 2023-08-30 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Mucin 5b (muc5b) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2022115645A1 (en) | 2020-11-25 | 2022-06-02 | Akagera Medicines, Inc. | Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids, and related methods of use |
| TW202237150A (zh) | 2020-12-01 | 2022-10-01 | 美商艾拉倫製藥股份有限公司 | 用於抑制ｈａｏ１（羥基酸氧化酶１（乙醇酸氧化酶））基因表現的方法及組成物 |
| KR20230128289A (ko) | 2020-12-03 | 2023-09-04 | 스크라이브 테라퓨틱스 인크. | 조작된 클래스 2 유형 v crispr 시스템 |
| AU2021403156A1 (en) | 2020-12-18 | 2023-07-13 | Genevant Sciences Gmbh | Peg lipids and lipid nanoparticles |
| TW202245835A (zh) | 2021-02-04 | 2022-12-01 | 美商默沙東有限責任公司 | 用於肺炎球菌結合物疫苗之奈米乳化液佐劑組合物 |
| EP4291654A2 (en) | 2021-02-12 | 2023-12-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Superoxide dismutase 1 (sod1) irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing superoxide dismutase 1- (sod1-) associated neurodegenerative diseases |
| EP4298220A1 (en) | 2021-02-25 | 2024-01-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Prion protein (prnp) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2022192519A1 (en) | 2021-03-12 | 2022-09-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glycogen synthase kinase 3 alpha (gsk3a) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4314296A2 (en) | 2021-03-29 | 2024-02-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Huntingtin (htt) irna agent compositions and methods of use thereof |
| WO2022232343A1 (en) | 2021-04-29 | 2022-11-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Signal transducer and activator of transcription factor 6 (stat6) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4341401A1 (en) | 2021-05-18 | 2024-03-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Sodium-glucose cotransporter-2 (sglt2) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4341405A1 (en) | 2021-05-20 | 2024-03-27 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for adar-mediated editing |
| WO2022256283A2 (en) | 2021-06-01 | 2022-12-08 | Korro Bio, Inc. | Methods for restoring protein function using adar |
| EP4347822A2 (en) | 2021-06-04 | 2024-04-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Human chromosome 9 open reading frame 72 (c9orf72) irna agent compositions and methods of use thereof |
| MX2023014059A (es) | 2021-06-08 | 2024-03-12 | C4 Therapeutics Inc | Terapeuticos para la degradacion de una proteina quiinasa de serina/ treonina mutante. |
| US20230194709A9 (en) | 2021-06-29 | 2023-06-22 | Seagate Technology Llc | Range information detection using coherent pulse sets with selected waveform characteristics |
| EP4363574A1 (en) | 2021-06-29 | 2024-05-08 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for adar-mediated editing |
| WO2023288288A1 (en) | 2021-07-15 | 2023-01-19 | Turn Biotechnologies, Inc. | Synthetic, persistent rna constructs with on/off mechanism for controlled expression and methods of use |
| US20230042860A1 (en) | 2021-07-15 | 2023-02-09 | Turn Biotechnologies, Inc. | Polycistronic expression vectors |
| US20230044997A1 (en) | 2021-07-15 | 2023-02-09 | Turn Biotechnologies, Inc. | Synthetic, persistent rna constructs and methods of use for cell rejuvenation and for treatment |
| AU2022316139A1 (en) | 2021-07-23 | 2024-01-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Beta-catenin (ctnnb1) irna compositions and methods of use thereof |
| JP2024532127A (ja) | 2021-08-19 | 2024-09-05 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー | 熱安定性脂質ナノ粒子およびその使用方法 |
| GB2625500B (en) | 2021-09-21 | 2026-04-01 | Scribe Therapeutics Inc | Engineered CasX repressor systems |
| TW202328449A (zh) | 2021-09-24 | 2023-07-16 | 美商艾拉倫製藥公司 | 微管相關蛋白ＴＡＵ（ＭＡＰＴ）ｉＲＮＡ試劑組合物及其使用方法 |
| US20250295755A1 (en) | 2021-10-22 | 2025-09-25 | Sail Biomedicines, Inc. | Mrna vaccine composition |
| WO2023069603A1 (en) | 2021-10-22 | 2023-04-27 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for disrupting nrf2-keap1 protein interaction by adar mediated rna editing |
| EP4423272A2 (en) | 2021-10-29 | 2024-09-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Huntingtin (htt) irna agent compositions and methods of use thereof |
| CA3238764A1 (en) | 2021-11-23 | 2023-06-01 | Siddharth Patel | A bacteria-derived lipid composition and use thereof |
| EP4452239A1 (en) | 2021-12-20 | 2024-10-30 | Sail Biomedicines, Inc. | Compositions comprising mrna and lipid reconstructed plant messenger packs |
| KR20240126870A (ko) | 2021-12-22 | 2024-08-21 | 캠프4 테라퓨틱스 코포레이션 | 조절 rna들을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 사용한 유전자 전사의 조절 |
| WO2023141314A2 (en) | 2022-01-24 | 2023-07-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Heparin sulfate biosynthesis pathway enzyme irna agent compositions and methods of use thereof |
| US20250302998A1 (en) | 2022-05-09 | 2025-10-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Vectors and methods for in vivo antibody production |
| CA3256897A1 (en) | 2022-05-25 | 2023-11-30 | Akagera Medicines, Inc. | Lipid nanoparticles for the administration of nucleic acids and their methods of use |
| JPWO2023234250A1 (es) | 2022-05-30 | 2023-12-07 | ||
| US20230392188A1 (en) | 2022-06-02 | 2023-12-07 | Perkinelmer Health Sciences, Inc. | Electrophoresis-mediated characterization of dna content of adeno-associated virus capsids |
| WO2023235818A2 (en) | 2022-06-02 | 2023-12-07 | Scribe Therapeutics Inc. | Engineered class 2 type v crispr systems |
| GB2634837A (en) | 2022-06-07 | 2025-04-23 | Scribe Therapeutics Inc | Compositions and methods for the targeting of PCSK9 |
| TW202413643A (zh) | 2022-06-07 | 2024-04-01 | 美商斯奎柏治療公司 | 用於靶向pcsk9的組合物及方法 |
| IL317425A (en) | 2022-06-10 | 2025-02-01 | Camp4 Therapeutics Corp | Methods of modulating progranulin expression using antisense oligonucleotides targeting regulatory RNAs |
| CN120659627A (zh) | 2022-07-29 | 2025-09-16 | 瑞泽恩制药公司 | 用于转铁蛋白受体（tfr）介导的脑和肌肉递送的组合物和方法 |
| EP4569113A1 (en) | 2022-09-15 | 2025-06-18 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | 17b-hydroxysteroid dehydrogenase type 13 (hsd17b13) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4612184A1 (en) | 2022-11-04 | 2025-09-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Calcium voltage-gated channel auxiliary subunit gamma 1 (cacng1) binding proteins and cacng1-mediated delivery to skeletal muscle |
| WO2024102434A1 (en) | 2022-11-10 | 2024-05-16 | Senda Biosciences, Inc. | Rna compositions comprising lipid nanoparticles or lipid reconstructed natural messenger packs |
| KR20250116795A (ko) | 2022-11-14 | 2025-08-01 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 별아교세포로의 섬유아세포 성장 인자 수용체 3-매개된 전달을 위한 조성물 및 방법 |
| EP4627084A1 (en) | 2022-12-01 | 2025-10-08 | Camp4 Therapeutics Corporation | Modulation of syngap1 gene transcription using antisense oligonucleotides targeting regulatory rnas |
| CN121057577A (zh) | 2023-01-27 | 2025-12-02 | 赛欧生物医药股份有限公司 | 经修饰的脂质组合物及其用途 |
| WO2024206676A1 (en) | 2023-03-29 | 2024-10-03 | Scribe Therapeutics Inc. | Compositions and methods for the targeting of lpa |
| WO2024206565A1 (en) | 2023-03-29 | 2024-10-03 | Scribe Therapeutics Inc. | Repressor fusion protein systems |
| PE20252746A1 (es) | 2023-03-29 | 2025-12-05 | Scribe Therapeutics Inc | Composiciones y metodos para el direccionamiento a pcsk9 |
| WO2024200831A1 (en) | 2023-03-30 | 2024-10-03 | Vivadju | Pvax14 nucleic acid in combination with all-trans retinoic acid (atra) and a checkpoint inhibitor for the treatment of cancer |
| WO2024220625A1 (en) | 2023-04-19 | 2024-10-24 | Sail Biomedicines, Inc. | Delivery of polynucleotides from lipid nanoparticles comprising rna and ionizable lipids |
| WO2024220752A2 (en) | 2023-04-19 | 2024-10-24 | Sail Biomedicines, Inc. | Rna therapeutic compositions |
| WO2024220712A2 (en) | 2023-04-19 | 2024-10-24 | Sail Biomedicines, Inc. | Vaccine compositions |
| EP4705330A1 (en) | 2023-05-05 | 2026-03-11 | The Board of Regents of the University of Oklahoma | Variants of adrenomedullin (am) and adrenomedullin 2/intermedin (am2/imd) and methods of use |
| KR20260008117A (ko) | 2023-05-08 | 2026-01-15 | 머크 샤프 앤드 돔 엘엘씨 | 노로바이러스 vp1 항원을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 그의 용도 |
| TW202513091A (zh) | 2023-06-09 | 2025-04-01 | 美商默沙東有限責任公司 | 用於人類乳突病毒疫苗之奈米乳液佐劑組合物 |
| WO2025015335A1 (en) | 2023-07-13 | 2025-01-16 | Korro Bio, Inc. | Rna-editing oligonucleotides and uses thereof |
| WO2025015338A1 (en) | 2023-07-13 | 2025-01-16 | Korro Bio, Inc. | Rna-editing oligonucleotides and uses thereof |
| JP7544425B1 (ja) | 2023-08-01 | 2024-09-03 | ＮＯＶＩＧＯ Ｐｈａｒｍａ株式会社 | 固体粒子分散製剤 |
| KR20260049597A (ko) | 2023-08-04 | 2026-04-14 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | Ctnnb1-관련 질환을 치료하기 위한 방법 및 조성물 |
| WO2025042868A1 (en) | 2023-08-23 | 2025-02-27 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Combinations of heteroarotinoids and glycolytic inhibitors for use as cancer treatments |
| WO2025059113A1 (en) | 2023-09-12 | 2025-03-20 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Treatments for enhancing immune response to clostridioides difficile infections |
| TW202530246A (zh) | 2023-09-15 | 2025-08-01 | 愛爾蘭商歐賽爾普羅希那有限公司 | 細胞穿透劑及其用途 |
| WO2025059486A1 (en) | 2023-09-15 | 2025-03-20 | Prothena Biosciences Limited | Anti-tdp-43 antibodies and uses thereof |
| AU2024341632A1 (en) | 2023-09-15 | 2026-04-23 | Prothena Biosciences Limited | Compositions and methods of reducing immunogenicity and improving stability of antibodies |
| AR133834A1 (es) | 2023-09-15 | 2025-11-05 | Prothena Biosciences Ltd | Agentes de penetración célular y sus usos |
| WO2025085360A1 (en) | 2023-10-16 | 2025-04-24 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Heteroarotinoids and/or cdk4/6 inhibitors for treating human papillomavirus (hpv)-induced dysplasias, warts, and cancer in hpv-infected subjects |
| WO2025096809A1 (en) | 2023-10-31 | 2025-05-08 | Korro Bio, Inc. | Oligonucleotides comprising phosphoramidate internucleotide linkages |
| WO2025106856A1 (en) | 2023-11-15 | 2025-05-22 | Immusoft Corporation | Migratory modified differentiated b cells for cancer therapy |
| WO2025128799A1 (en) | 2023-12-12 | 2025-06-19 | Korro Bio, Inc. | Double-stranded rna-editing oligonucleotides and uses thereof |
| WO2025147573A2 (en) | 2024-01-05 | 2025-07-10 | Immusoft Corporation | Glp-1 expressing modified b cells for the treatment of metabolic disease |
| WO2025169146A1 (en) | 2024-02-09 | 2025-08-14 | Kiniksa Pharmaceuticals, Gmbh | Cd40 antagonist or cd154 antagonist for use in mitigating immune responses in protein and gene therapies |
| WO2025240940A1 (en) | 2024-05-17 | 2025-11-20 | Scribe Therapeutics Inc. | Compositions and methods for the targeting of apolipoprotein c3 |
| WO2025255388A1 (en) | 2024-06-05 | 2025-12-11 | Camp4 Therapeutics Corporation | Modulation of syngap1 gene transcription using antisense oligonucleotides targeting regulatory rnas |
| WO2026050243A1 (en) | 2024-08-26 | 2026-03-05 | Korro Bio, Inc. | Galnac conjugated oligonucleotides for rna editing |
| WO2026050217A2 (en) | 2024-08-27 | 2026-03-05 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Engineered artificial antigen presenting cells and lipid nanoparticles for tumor infiltrating lymphocyte expansion |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4544545A (en) | 1983-06-20 | 1985-10-01 | Trustees University Of Massachusetts | Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting |
| US4897355A (en) * | 1985-01-07 | 1990-01-30 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
| JPH02500360A (ja) * | 1986-07-28 | 1990-02-08 | リポソーム テクノロジー，インコーポレイテッド | 粘膜組織上での高い保持力を有するリポソーム |
| US4958013A (en) * | 1989-06-06 | 1990-09-18 | Northwestern University | Cholesteryl modified oligonucleotides |
-
1991
- 1991-08-28 US US07/751,873 patent/US5283185A/en not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-08-28 CA CA002116676A patent/CA2116676A1/en not_active Abandoned
- 1992-08-28 WO PCT/US1992/007290 patent/WO1993005162A1/en not_active Ceased
- 1992-08-28 JP JP50530293A patent/JP3258661B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-08-28 DE DE69233497T patent/DE69233497T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-08-28 AU AU26565/92A patent/AU665029B2/en not_active Withdrawn - After Issue
- 1992-08-28 EP EP92920321A patent/EP0663013B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-28 AT AT92920321T patent/ATE292690T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-08-28 ES ES92920321T patent/ES2240958T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-28 DK DK92920321T patent/DK0663013T3/da active
- 1992-08-28 SG SG1996007296A patent/SG50630A1/en unknown
-
2001
- 2001-09-27 JP JP2001298141A patent/JP2002153270A/ja not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2116676A1 (en) | 1993-03-18 |
| AU665029B2 (en) | 1995-12-14 |
| JPH07500963A (ja) | 1995-02-02 |
| US5283185A (en) | 1994-02-01 |
| AU2656592A (en) | 1993-04-05 |
| JP2002153270A (ja) | 2002-05-28 |
| EP0663013B1 (en) | 2005-04-06 |
| SG50630A1 (en) | 1998-07-20 |
| WO1993005162A1 (en) | 1993-03-18 |
| ATE292690T1 (de) | 2005-04-15 |
| DK0663013T3 (da) | 2005-08-01 |
| JP3258661B2 (ja) | 2002-02-18 |
| HK1014736A1 (en) | 1999-09-30 |
| EP0663013A1 (en) | 1995-07-19 |
| EP0663013A4 (en) | 1994-11-28 |
| DE69233497T2 (de) | 2006-01-26 |
| DE69233497D1 (de) | 2005-05-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2240958T3 (es) | Metodo para transferir acidos nucleicos a las celulas. | |
| AU738083B2 (en) | Cationic amphiphile/ DNA complexes | |
| US5925628A (en) | Cationic amphiphiles for intracellular delivery of therapeutic molecules | |
| US5935936A (en) | Compositions comprising cationic amphiphiles and co-lipids for intracellular delivery of therapeutic molecules | |
| US6361791B1 (en) | Stable aqueous dispersions including cationic lipids | |
| AU731503B2 (en) | Cationic amphiphile compositions for intracellular delivery of therapeutic molecules | |
| HUT77171A (hu) | Lipopoliaminok mint transzfekciós ágensek, és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények | |
| US6383814B1 (en) | Cationic amphiphiles for intracellular delivery of therapeutic molecules | |
| JP2017014253A (ja) | トランスフェクションエンハンサー要素を含む脂質および脂質集合体 | |
| WO1998051285A2 (en) | Cationic amphiphile formulations | |
| US5948925A (en) | Cationic amphiphiles containing linkers derived from neutral or positively charged amino acids | |
| US5942634A (en) | Cationic amphiphiles for cell transfections | |
| US5912239A (en) | Imidazole-containing cationic amphiphiles for intracellular delivery of therapeutic molecules | |
| WO2000012454A1 (en) | Novel polycationic lipids | |
| US5952516A (en) | Cationic amphiphiles containing multiplesteroid lipophilic groups | |
| Martin et al. | Advances in cationic lipid-mediated gene delivery | |
| AU2006202596B8 (en) | Novel compounds, methods and derivatives | |
| HK1014736B (en) | Method for delivering nucleic acids into cells | |
| US20020013282A1 (en) | Cationic amphipile compositions for interacelluar delivery of therapeutic molecules | |
| AU3018397A (en) | Novel compounds, methods and derivatives | |
| AU716706B2 (en) | Cationic amphiphiles and plasmids for intracellular delivery of therapeutic molecules |