ES2241042T3 - Conjugados de polinucleotido inmunoestimulador/ molecula inmunomoduladora. - Google Patents

Conjugados de polinucleotido inmunoestimulador/ molecula inmunomoduladora.

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ES2241042T3 ES97912831T ES97912831T ES2241042T3 ES 2241042 T3 ES2241042 T3 ES 2241042T3 ES 97912831 T ES97912831 T ES 97912831T ES 97912831 T ES97912831 T ES 97912831T ES 2241042 T3 ES2241042 T3 ES 2241042T3
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Abstract

SE PRESENTAN COMPOSICIONES DE CONJUGADOS DE POLINUCLEOTIDOS INMUNOESTIMULADORES/MOLECULAS INMUNOMODULADORAS. ESTAS COMPOSICIONES INCLUYEN UN POLINUCLEOTIDO QUE ESTA UNIDO A UNA MOLECULA INMUNOMODULADORA, LA MOLECULA COMPRENDE UN ANTIGENO Y ADEMAS PUEDE COMPRENDER INMUNOMODULADORES TALES COMO CITOQUINAS Y COADYUDANTES. LA PARTE DEL POLINUCLEOTIDO DEL CONJUGADO INCLUYE AL MENOS UNA SECUENCIA NUCLEOTIDA CONSTITUIDA POR OLIGONUCLEOTIDOS INMUNOMODULADORES (ISS). TAMBIEN SE PRESENTAN PROCEDIMIENTOS PARA MODULAR UNA RESPUESTA INMUNE DESPUES DE LA ADMINISTRACION DE LA PREPARACION QUE CONTIENE EL CONJUGADO POLINUCLEOTIDO/INMUNOMODULADOR A UN ANFITRION VERTEBRADO.

Description

Conjugados de polinucleótido inmunoestimulador/molécula inmunomoduladora.
Ámbito de la invención
Esta invención se refiere a composiciones que comprenden una molécula inmunomoduladora (IMM) que incluye un antígeno, conjugadas con un polinucleótido que contiene o consiste al menos en un oligonucleótido inmunoestimulante (ISS-PN). También se refiere a procedimientos para modular la respuesta inmune de un huésped vertebrado respecto un antígeno.
Historia de la técnica previa relacionada
Convencionalmente, la inmunización de un huésped respecto un antígeno se consigue vacunando repetidamente el huésped con el antígeno. Mientras que la mayoría de las vacunas actuales provocan respuestas de anticuerpos razonables, las respuestas celulares (en particular, de las células citotóxicas de la clase I-restringida del complejo de histocompatibilidad principal) están generalmente ausentes o son débiles. Para muchas enfermedades infecciosas, tales como la tuberculosis o la malaria, las respuestas humorales tienen poco valor protector frente a la infección.
Dada la débil respuesta inmune celular contra los antígenos de proteína, la modulación de las respuestas inmunes contra estos antígenos tiene una importancia clara. La capacidad para modificar las respuestas inmunes contra antígenos proteicos o peptídicos tiene implicaciones en la terapia de tumores, para el tratamiento de alteraciones alérgicas, y para el tratamiento de otras condiciones que pueden conseguirse a través de la inducción de una respuesta inmune celular enérgica.
WO-96/02555 describe oligonucleótidos inmunomoduladores que contienen dinucleótidos CpG no metilados, y utilidades terapéuticas basadas en su capacidad para estimular una respuesta inmune.
Raz et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of USA, Vol. 93; 5141-5145, describen la inducción preferencial de una respuesta inmune Th1 y la inhibición de la formación de anticuerpo IgE específico mediante inmunización con ADN de plásmido.
Raz et al., Arthritis & Rheumatism, Vol. 39, nº 9, página 615, describen el papel potencial de las secuencias de ADN inmunoestimuladoras (ISS) en la inmunización genética y la autoinmunidad.
La presente invención se refiere a composiciones que comprenden un ISS-PN, el cual está conjugado con una IMM (la cual incluye un antígeno) para formar conjugados ISS-PN/IMM. Los conjugados ISS-PN/IMM de la invención son modificadores de la respuesta biológica en el sentido de que modifican la respuesta inmune humoral y celular de un huésped frente a un antígeno.
En consecuencia, la presente invención proporciona una composición inmunomoduladora que comprende una molécula inmunomoduladora, en donde dicha molécula inmunomoduladora comprende un antígeno, en donde el antígeno está conjugado con un polinucleótido inmunoestimulante (ISS-PN), comprendiendo dicho ISS-PN al menos una secuencia inmunoestimulante (ISS) que comprende la secuencia no metilada 5'-citosina, guanina-3', en donde el ISS tiene una longitud de al menos seis nucleótidos, en donde dicho ISS-PN tiende desde 6 hasta aproximadamente 200 nucleótidos de longitud, y en donde el antígeno se selecciona a partir de una antígeno tumoral, un antígeno viral, un alérgeno, o un microorganismo infeccioso.
La invención también proporciona el uso de una composición inmunomoduladora que comprende una molécula inmunomoduladora, en donde dicha molécula inmunomoduladora comprende un antígeno, en donde dicho antígeno está conjugado con un polinucleótido inmunoestimulante (ISS-PN), comprendiendo dicho ISS-PN al menos una secuencia inmunoestimulante (ISS) que comprende la secuencia no metilada 5'-citosina, guanina-3', para la fabricación de un medicamento para potenciar una respuesta de Th1 y/o suprimir una respuesta de Th2 contra el antígeno y/o reducir la producción de IgE estimulada por el antígeno.
Los aspectos preferidos de la invención se definen adicionalmente más abajo en las reivindicaciones adjuntas.
Los componentes ISS-PN/IMM de los conjugados ISS-PN/IMM cooperativamente potencian la magnitud de la respuesta inmune del huésped contra un antígeno hasta un nivel superior al de la respuesta inmune celular del huésped contra el IMM, el antígeno o el ISS solos. Los conjugados ISS-PN/IMM también desplazan la respuesta inmune celular del huésped del fenotipo de linfocito auxiliar del Tipo 2 (Th2) hacia el fenotipo de linfocito auxiliar del Tipo 1 (Th1). Estas respuestas contra los conjugados ISS-PN/IMM son particularmente agudas durante la importante fase temprana de la respuesta inmune del huésped contra un antígeno.
Con estos fines, los conjugados ISS-PN/IMM se suministran mediante cualquier ruta a través de la cual los tejidos del huésped sensibles al antígeno se pongan en contacto con el conjugado ISS-PN/IMM. Los conjugados ISS-PN/IMM administrados de esta forma potencian ambas, las respuestas inmunes humoral (anticuerpo) y celular (del tipo Th1). Por tanto, el uso del procedimiento para potenciar la capacidad de respuesta inmune de un huésped frente a un desafío subsiguiente mediante un antígeno sensibilizante sin inmunización evita el riesgo de una respuesta anafilaxis inducida por la inmunización, mediada por Th2, mediante la supresión de la producción de IgE en respuesta al desafío del antígeno. Un uso especialmente ventajoso para este aspecto de la invención es el tratamiento de respuestas alérgicas localizadas en tejidos diana en donde los alérgenos entran en el cuerpo, tales como la piel y la
mucosa.
La supresión del fenotipo de Th2 de acuerdo con la invención es útil también para reducir la producción de IL-4 e IL-5 estimulada por antígeno. Por tanto, la invención abarca el suministro de conjugados ISS-PN/IMM a un huésped para suprimir el fenotipo de Th2 asociado con la inmunización convencional con antígeno (por ejemplo, para la vacunación o inmunoterapia de alergias).
El desplazamiento hacia un fenotipo de Th1 conseguido de acuerdo con la invención está acompañado por una secreción incrementada de IFN \alpha, \beta y \gamma, así como de IL-12 e IL-18. Cada una de estas citoquinas mejora las defensas inmunes del huésped contra los patógenos intracelulares, tales como los virus. Por tanto, la invención abarca el uso de los conjugados ISS-PN/IMM para su suministro a un huésped para combatir una infección patogénica.
La angiogénesis también está potenciada en el fenotipo de Th1 (ostensiblemente a través de la estimulación mediante IL-12). Por tanto, la invención abarca el suministro de conjugados ISS-PN/IMM a un huésped para estimular la angiogénesis terapéutica para tratar condiciones en las que el flujo sanguíneo localizado juega un rol etiológico significativa, por ejemplo, las retinopatías.
Las composiciones que comprenden conjugados ISS-PN/IMM comprenden un IMM conjugado con un polinucleótido que incluye, o consiste en, al menos una porción oligonucleotídica inmunoestimulante (ISS-ODN). La porción ISS-ODN es un oligonucleótido de ADN o ARN, de hebra única o doble, que tiene al menos 6 bases nucleotídicas, las cuales podrían incluir, o consistir en, un oligonucleósido modificado o una secuencia de nucleósidos modificados.
Las porciones ISS-ODN comprenden, o podrían estar flanqueadas por, una secuencia nucleotídica conteniendo CpG o una secuencia nucleotídica p(IC), la cual podría ser palindrómica. Cuando la porción oligonucleotídica comprende una secuencia CpG, éste podría incluir una estructura hexamérica consistente en 5'-purina, purina, CG, pirimidina, pirimidina-3'. Son ejemplos de tales estructuras hexaméricas AACGTT, AGCGTT, GACGTT, GGCGTT, AACGTC, y AGCGTC.
En un aspecto de la invención, el ISS-PN consiste en un ISS-ODN. Alternativamente, el ISS-PN comprende un ISS-ODN.
En un aspecto de la invención, la pareja IMM del conjugado con el ISS-PN consiste en un antígeno. Tales antígenos se seleccionan a partir del grupo de antígenos consistente en proteínas, péptidos, glicoproteínas, polisacáridos, y gangliósidos.
En otro aspecto de la invención, el IMM pareja del conjugado comprende un antígeno y además comprende una molécula inmunoestimulante seleccionada a partir del grupo de tales moléculas consistente en adyuvantes, hormonas, factores del crecimiento, citoquinas, quimioquinas, ligandos que apuntan a proteínas, y factores trans-activadores.
En otro aspecto de la invención, el conjugado ISS-PN/IMM se modifica para su suministro dirigido mediante, por ejemplo, la unión a un anticuerpo monoclonal, ligando de receptor y/o liposoma.
Se proporcionan composiciones farmacéuticamente aceptables de conjugados ISS-PN/IMM para su uso en la práctica de la invención. Cuando sea apropiado para el curso contemplado de la terapia, los conjugados ISS-PN/IMM podrían suministrarse con agentes antiinflamatorios o inmunoterapéuticos. Por tanto, una composición particularmente útil para su uso en la práctica del procedimiento de la invención es una en la que un agente antiinflamatorio (por ejemplo, un glucocorticoide) se mezcla con, o de conjuga adicionalmente a, un conjugado ISS-PN/IMM.
Los conjugados ISS-PN/IMM pueden proporcionarse también en forma de un equipo que comprende conjugados ISS-PN/IMM y cualesquier medicamentos adicionales, así como un dispositivo para suministrar los conjugados ISS-PN/IMM a un tejido huésped y reactivos para determinar el efecto biológico de los conjugados ISS-PN/IMM en un huésped tratado.
Breve descripción de las ilustraciones
La Figura 1 es una gráfica de datos que demuestran la vigorosa respuesta inmune del tipo-Th1 (según se mide por la producción de IgG2a contra un antígeno IMM) estimulada por ISS-PN/IMM (proporción 1:5) en comparación con los niveles de respuestas similares de Th2 estimuladas por un ISS que contiene, plásmido que codifica el antígeno (pACB-Z); el antígeno solo (\beta-gal); el antígeno mezclado con un ISS (proporción 1:5); el antígeno conjugado con un PN no estimulador (mISS conj.; proporción 1:5); el antígeno en adyuvante (alum) y, para referencia, los niveles de IgG2a en ratones ingenuos (no expuestos). El eje horizontal representa los niveles (unidades/ml) de anticuerpo; el eje vertical representa el número de semanas que siguen a la exposición al antígeno primario.
La Figura 2 es una gráfica de datos que demuestran la vigorosa respuesta inmune del tipo-Th2 (según se mide por la producción de IgG1 contra un antígeno IMM) estimulada por ISS que contiene plásmido que codifica el antígeno (pACB-Z); el antígeno solo (\beta-gal); el antígeno mezclado con un ISS (proporción 1:5); el antígeno conjugado con un PN no estimulador (mISS conj.; proporción 1:5); el antígeno en adyuvante (alum) y, para referencia, los niveles de IgG1 en ratones ingenuos (no expuestos), todos comparados con la vigorosa respuesta inmune del tipo Th1 producida en ratones inmunizados con ISS-PN/IMM (proporción 1:5). El eje horizontal representa los niveles (unidades/ml) de anticuerpo; el eje vertical representa el número de semanas que siguen a la exposición al antígeno primario.
La Figura 3 es una gráfica de datos que demuestran la vigorosa respuesta inmune del tipo-Th1 (según se mide por la producción de IgG2a contra un antígeno IMM) estimulada por ISS-PN/IMM en comparación con los niveles de respuestas similares de Th2 estimuladas el antígeno solo (AgE) y el antígeno conjugado con un PN no estimulador (mISS conj.). Las proporciones de antígeno respecto PN son todas de 1:5. El eje horizontal representa los niveles (unidades/ml) de anticuerpo; el eje vertical muestra los niveles a las 4 semanas después de la exposición al antígeno primario (barras sombreadas), y a las 2 semanas después del desafío secundario con antígeno (barras negras).
La Figura 4 es una gráfica de datos que demuestran los niveles de respuestas inmunes del tipo-Th2 (según se mide por la producción de IgG1 contra un antígeno IMM) estimulada por el antígeno solo (AgE) y el antígeno conjugado con un PN no estimulador (mISS conj.), en comparación con la vigorosa respuesta inmune del tipo Th1 estimulada en ratones inmunizado con ISS-PN/IMM. Las proporciones de antígeno respecto PN son todas de 1:5. El eje horizontal representa los niveles (unidades/ml) de anticuerpo; el eje vertical muestra los niveles a las 4 semanas después de la exposición al antígeno primario (barras sombreadas), y a las 2 semanas después del desafío secundario con antígeno (barras negras).
La Figura 5 es una gráfica de datos que demuestran la supresión de la producción de IgE anti-antígeno (AgE) asociadas con Th2 por parte del ISS-PN/IMM en comparación con los niveles de producción de IgE estimulados por el antígeno (AgE) solo y el antígeno conjugado con un PN no estimulador (mISS conj.). Las proporciones de antígeno respecto PN son todas de 1:5. El eje horizontal representa los niveles (cuentas por minutos; cpm) de anticuerpo; el eje vertical muestra los niveles a las 4 semanas después de la exposición al antígeno primario (barras sombreadas), y a las 2 semanas después del desafío secundario con antígeno (barras negras).
La Figura 6 es una gráfica de datos que demuestran los elevados niveles de producción de interferón \gamma (IFNg) asociados con Th1, estimulados por el ISS-PN/IMM en comparación con los bajos niveles de citoquina de Th1 estimulados por un ISS que contiene, plásmido que codifica el antígeno (pACB-Z); el antígeno solo (\beta-gal); el antígeno mezclado con un ISS; el antígeno conjugado con un PN no estimulador (mISS conj.); el antígeno en adyuvante (alum) y, para referencia, los niveles de IFNg en ratones ingenuos (no expuestos). Las proporciones de antígeno respecto PN son todas de 1:5. El eje horizontal representa los niveles (ng/ml) de citoquina; el eje vertical muestra los niveles a las 4 semanas después de la exposición al antígeno primario (barras sombreadas).
La Figura 7 es una gráfica de datos que demuestran la vigorosa respuesta de linfocitos T citotóxicos (CTL) específica para el antígeno, estimulada por el ISS-PN/IMM en comparación con los niveles de producción de CTL estimulados por un ISS que contiene, plásmido que codifica el antígeno (pACB-Z); el antígeno solo (\beta-gal); el antígeno mezclado con un ISS; el antígeno conjugado con un PN no estimulador (mISS conj.); el antígeno en adyuvante (alum) y, para referencia, los niveles de CTL en ratones ingenuos (no expuestos). Las proporciones de antígeno respecto PN son todas de 1:5. El eje horizontal representa los niveles de lisis celular específica para el antígeno (como porcentaje del control; sin antígeno); el eje vertical muestra los niveles de CTL detectados a diferentes proporciones de efector (antígeno) respecto la diana, desde 0:1 hasta 1:0. La leyenda identifica cómo se trató cada población de células.
Descripción detallada de la invención A. Actividad biológica de los conjugados ISS-PN/IMM
La respuesta inmune estimulada por los conjugados ISS-PN/IMM de la invención difiere de la respuesta inmune de vertebrados a la vacunación convencional, tanto en magnitud como en calidad. En el primer aspecto, la respuesta inmune del huésped contra un antígeno se potencia a un nivel superior al conseguido en la exposición a un ISS-PN o antígeno administrado solos o juntos en una forma no conjugada. Por tanto, un aspecto sorprendente de la invención es que la conjugación de un ISS-PN a un antígeno que contiene IMM produce una sinérgia entre la actividad inmunoestimulante del ISS-PN y la actividad inmunomoduladora del IMM, la cual inmuniza al huésped contra el antígeno más efectivamente de lo que alguien prediría.
Ventajosamente, la respuesta inmune estimulada de acuerdo con la invención difiere de la respuesta inmune de vertebrados frente a la vacunación convencional en que ésta última se desarrolla en un fenotipo de Th2, mientras que la primera se desarrolla en un fenotipo de Th1. En relación a esto, es útil recordar que los linfocitos CD4+ generalmente se agrupan en uno de dos subconjuntos distintos; es decir, las células Th1 y Th2. Las células Th1 secretan principalmente IL-2, IFN\gamma y TNF\beta (de los cuales, los dos últimos median en la activación de macrófagos y la hipersensibilidad del tipo retrasado), mientras que las células Th2 principalmente secretan IL-4 (la cual estimula la producción de anticuerpos IgE), IL-5 (la cual estimula la infiltración de granulocitos en el tejido), IL-6 e IL-10. Estos dos subconjuntos de CD4+ ejercen una influencia negativa el uno en el otro; es decir, la secreción de linfoquinas de Th1 inhibe la secreción de linfoquinas de Th2, y viceversa.
Los factores que se cree que favorecen la activación de Th1 se parecen a los inducidos por una infección viral e incluyen los patógenos intracelulares, la exposición a IFN-\beta, INF-\alpha, IFN-\gamma, IL-12 e IL-18, y la exposición a dosis bajas de antígeno. Las respuestas inmunes del tipo Th1 también predominan en las enfermedades autoinmunes. Los factores que se cree favorecen la activación de Th2 incluyen la exposición a IL-4 e IL-10, la actividad APC por parte de los linfocitos B, y las dosis elevadas de antígeno.
Las células Th1 activas (IFN\gamma) mejoran la inmunidad celular y son, por tanto, de especial valor para responder a infecciones intracelulares, mientras que las células Th2 activas mejoran la producción de anticuerpo y son, por tanto, valiosas para responder a infecciones extracelulares (a riesgo de sucesos anafilácticos asociados con la inducción de producción de anticuerpo IgE estimulada por IL-4). Por tanto, la capacidad de desplazar la respuesta inmune del repertorio de Th1 al de Th2 y viceversa tiene una importancia clínica sustancial para controlar la inmunidad del huésped frente al desafío con antígeno (por ejemplo, en condiciones infecciosas y alérgicas).
Con este fin, los procedimientos de la invención desplazan la respuesta inmune del huésped frente a antígeno sensibilizante hacia un fenotipo Th1 (Ejemplo 1). En consecuencia, la producción de citoquinas asociada con Th2, y la producción de IgE estimulada por el antígeno (Ejemplos II y III) están suprimidas, reduciéndose, por tanto, el riesgo del huésped de inflamación alérgica prolongada y minimizando el riesgo de anafilaxis inducida por el antígeno. La producción de CTL también está estimulada a un grado superior en animales tratados de acuerdo con la invención. Puesto que la producción de CTL está unida al procesamiento de antígeno en las vías del MHC Clase I, la producción incrementada de CTL puede producirse a partir de PN/IMM no estimuladores así como de ISS-PN/IMM (Ejemplo IV).
Aunque la invención no está limitada por ningún mecanismo de acción concreto, es concebible que el PN facilita la captación de antígeno exógeno por parte de células que presentan antígeno para su presentación a través de las vías de procesamiento del MHC Clase I del huésped que normalmente no son estimuladas por el antígeno soluble. Por tanto, el ISS-PN/IMM llevan el antígeno a las vías de procesamiento del MCH Clase I (lo que también podría conseguirse mediante PN/IMM sin actividad ISS), a continuación estimula una cascada de citoquinas en un fenotipo Th1 (a resultas de la actividad ISS). Cualquiera que sea el mecanismo de acción, el uso de ISS-PN/IMM para potenciar la capacidad de respuesta del sistema inmune del huésped frente a un antígeno sensibilizante y el desplazamiento de la respuesta inmune hacia un fenotipo Th1 evita el riesgo de anafilaxis inducida por la inmunización, suprime la producción de IgE en respuesta a un antígeno sensibilizante, y elimina la necesidad de identificar el antígeno sensibilizante para su uso en la inmunización.
En referencia a la invención, la "potenciación de la capacidad de respuesta inmune en un fenotipo Th1" en un huésped tratado con ISS-PN/IMM está evidenciada por:
(1)
una reducción en los niveles de IL-4 medidos antes y después del desafío con el antígeno; o la detección de niveles inferiores (o incluso ausentes) de IL-4 en huéspedes tratados en comparación con un control cebado, o cebado y potenciado, con antígeno;
(2)
un incremento en los niveles de IL-12, IL-18 y/o IFN (\alpha, \beta o \gamma) antes y después del desafío con antígeno; o la detección de niveles superiores de IL-12, IL-18 y/o IFN (\alpha, \beta o \gamma) en un huésped tratado con ISS-PN/IMM en comparación con un control cebado, o cebado y potenciado, con antígeno;
(3)
La producción de anticuerpo IgG2a en un huésped tratado; o
(4)
una reducción en los niveles de IgE específica contra el antígeno según se mide antes y después del desafío con antígeno; o la detección de niveles inferiores (o incluso ausentes) de IgE específica contra el antígeno en un huésped tratado con ISS-PN/IMM en comparación con un control cebado, o cebado y potenciado, con antígeno.
Los procedimientos ilustrativos para determinar tales valores se describen adicionalmente en los Ejemplos.
Por tanto, los conjugados ISS-PN/IMM de la invención proporcionan medios efectivos, relativamente seguros, para estimular una respuesta inmune robusta en un huésped vertebrado contra cualquier antígeno.
B. Conjugados ISS-PN/IMM: Estructura y preparación 1. Estructura raíz del ISS-PN
La base ISS-ODN de los conjugados ISS-PN/IMM de la invención incluye un oligonucleótido, el cual podría ser parte de una construcción nucleotídica mayor, tal como un plásmido. Por tanto, el término "polinucleótido" incluye los oligonucleótidos, los oligonucleótidos modificados, y los oligonucleósidos, solos o como parte de una construcción mayor. El polinucleótido podría ser ADN de hebra única (ADNss), ADN de doble hebra (ADNds), ARN de hebra única (ARNss), o ARN de doble hebra (ARNds).
La porción de polinucleótido puede estar configurada lineal o circularmente, o la porción oligonucleotídica puede contener tanto segmentos lineales como circulares. Las modificaciones de los oligonucleótidos incluyen, pero no se limitan a, las modificaciones de los grupos 3'OH o 5'OH, las modificaciones de las bases de los nucleótidos, las modificaciones del componente azúcar, y las modificaciones del grupo fosfato.
La base oligonucleotídica de los conjugados ISS-PN/IMM podría comprender ribonucleótidos (que contienen ribosa como el único o principal componente azúcar), desoxiribonucleótidos (la desoxiribosa es el principal componente azúcar), o, de acuerdo con el estado de la técnica establecida, podrían incorporarse azúcares modificados o análogos de azúcares en el oligonucleótido de la presente invención. Por tanto, además de la ribosa y desoxiribosa, la porción azúcar podría ser pentosa, desoxipentosa, hexosa, desoxihexosa, glucosa, arabinosa, xilosa, lixosa, y un grupo ciclopentilo "análogo" de azúcar. El azúcar podría estar en forma de piranosil o de furanosil. En los oligonucleótidos modificados de la presente invención, el grupo azúcar es preferiblemente el furanósido de ribosa, desoxiribosa, arabinosa, o 2'-O-metilribosa, y el azúcar podría unirse a las bases heterocíclicas respectivas en la configuración anomérica I ó J. La preparación de estos azúcares o análogos de azúcares, y los respectivos "nucleósidos" en donde tales azúcares o análogos están unidos a la base heterocíclica (base del ácido nucleico) se conoce por sí misma, y no es necesario describirla aquí, excepto hasta el punto en que tal preparación podría pertenecer a cualquier ejemplo específico.
El derivado de fósforo (o grupo fosfato modificado) al cual podría unirse la porción azúcar o análogo de azúcar en los oligonucleótidos modificados de la presente invención podría ser un monofosfato, difosfato, trifosfato, alquilfosfato, alcanofosfato, fosfotioato, fosforoditioato, o similares. La preparación de los análogos de fosfato mencionados más arriba, y su incorporación en los nucleótidos, nucleótidos modificados, y oligonucleótidos, es también conocida por sí misma y no necesita ser descrita aquí.
Las bases heterocíclicas, o bases de ácidos nucleicos, las cuales se incorporan en las bases oligonucleotídicas de los conjugados ISS-PN/IMM, podrían ser las principales bases purínicas y pirimidínicas que ocurren de forma natural, (a saber, uracilo o timidina, citosina, adenina y guanina, tal como se ha mencionado más arriba), así como modificaciones que ocurren de forma natural y sintéticamente de dichas bases principales. Los especialistas en la técnica reconocerán que un número elevado de nucleósidos "sintéticos" no naturales, que comprenden varias bases heterocíclicas y varios grupos azúcares (y análogos de azúcares), han pasado a estar disponibles en la técnica previa, de tal forma que la base oligonucleotídica de los conjugados ISS-PN/IMM podría incluir una o varias bases heterocíclicas distintas de las cinco bases principales que son componentes de los ácidos nucleicos que existen de forma natural. No obstante, preferiblemente, la base heterocíclica en la base del oligonucleótido de los conjugados ISS-PN/IMM se selecciona de entre los grupos uracil-5-ilo, citosin-5-ilo, adenin-7-ilo, adenin-8-ilo, guanin-7-ilo, guanin-8-ilo, 4-aminopirrolo [2,3-d] pirimidin-5-ilo, 2-amino-4-oxopirolo [2,3-d] pirimidin-5-ilo, 2-amino-4-oxopirrolo [2,3-d] pirimidin-5-ilo, en donde las purinas es unen a las porciones azúcares de los oligonucleótidos en la posición 9, las pirimidinas a través la posición 1, la pirrolopirimidinas a través de la posición 7, y la pirazolopirimidinas a través de la posición 1.
Estructuralmente, la raíz oligonucleotídica del componente ISS-PN del ISS-PN/IMM es una secuencia no codificante, la cual podría incluir al menos un motivo CpG no metilado. La posición relativa de cualquier secuencia CpG en el ISS-PN con actividad inmunoestimulante en ciertas especies de mamíferos (por ejemplo, roedores) es la 5'-CG-3' (es decir, la C está en la posición 5' respecto la G en la posición 3'). El PN/IMM puede obtenerse convenientemente sustituyendo la citosina en el dinucleótido CpG con otro nucleótido: una sustitución particularmente útil es con una guanina para formar PN conteniendo el dinucleótido GpC.
Se conocen algunos oligonucleótidos ISS (ISS-ODN). En tales ISS-ODN, el motivo CpG está flanqueado por al menos dos nucleótidos de purina (por ejemplo, GA o AA) y al menos dos nucleótidos de pirimidina (5'-purina-purina-[C]-[G]-pirimidina-pirimidina-3'). Se cree que los ISS-ODN que contienen el motivo CpG estimulan la proliferación de los linfocitos B (ver, por ejemplo, Krieg et al., Nature 374:546-549 (1995)).
La estructura hexamérica del núcleo de los ISS-PN precedentes podría estar flanqueada cadena arriba y/o cadena abajo por cualquier número o composición de nucleótidos o nucleósidos. Sin embargo, los ISS-PN tienen al menos una longitud de 6 bases, y preferiblemente tienen entre 6 y 200 bases de longitud, para mejorar la captación del ISS-PN/IMM en los tejidos diana. Aquéllos con formación ordinaria en la técnica estarán familiarizados con, o podrán identificar fácilmente, secuencias nucleotídicas descritas de ISS-ODN conocidos para referencia en la preparación de ISS-PN. Para facilitar la referencia en este sentido, son especialmente útiles las siguientes fuentes:
Yamamoto, et al., Microbiol. Immunol. 36:983 (1992)
Ballas, et al., J. Immunol. 157:1840 (1996)
Klinman, et al., J. Immunol. 158:3635 (1997)
Sato, et al., Science 273:352 (1996)
Cada uno de estos artículos ilustra el nivel de conocimiento en la técnica concerniente a la composición de nucleótidos de ISS-ODN conocidos.
En particular, los ISS-PN y PN útiles en la invención incluyen aquéllos que tienen las siguientes secuencias nucleotídicas hexaméricas:
1.
para los ISS-PN, los hexámeros que tienen motivos "CpG" o, para los PN, los hexámeros que tienen motivos XpY, en donde X no puede ser C su Y es G, y viceversa; y
2.
las sustituciones de nucleótidos por inosina y/o uracilo en las secuencias hexaméricas anteriores, para su uso como ISS-ODN de ARN.
Por ejemplo, los ISS-PN de ADN útiles en la invención incluyen aquéllos que tienen las siguientes secuencias de nucleótidos hexaméricas:
AACGTT, AGCGTC, GACGTT, GGCGTT, AACGTC,
GACGTC, GGCGTC, AACGCC, AGCGCC, GACGCC, GGCGCC,
AGCGCT, GACGCT, GGCGCT, TTCGAA.
Los ISS-PN basados en ARN útiles en la invención incluyen aquéllos que tienen las siguientes secuencias de nucleótidos hexaméricas:
AACGUU, AACGpI, AACGpC, AGCGUC, AGCGpI, AGCGpC,
GACGCU, GACGCpI, GACGCpC, GACGUU, GACGpI, GACGpC,
GACGUC, GACGpI, GACGpC, y poli(I\cdotC).
El ISS-PN podría incluir o no regiones palindrómicas. Si está presente, un palíndromo podría extenderse sólo hasta un motivo CpG, si está presente, en la secuencia hexamérica del núcleo, o podría abarcar más de la secuencia hexamérica así como de las secuencias nucleotídicas flanqueadoras.
Además, las modificaciones del grupo fosfato del esqueleto (por ejemplo, enlaces entre nucleótidos con metilfosfonato, fosforotioato, fosforoamidato y fosforoditioato) pueden conferir actividad antimicrobiana al ISS-PN y mejorar su estabilidad in vivo, haciéndolos especialmente útiles en aplicacions terapéuticas. Una modificación del grupo fosfato particularmente útil es la conversión a las formas fosforotioato o fosforoditioato del ISS-PN. Además de sus propiedades potencialmente antimicrobianas, los fosforotioatos y fosforoditioatos son más resistentes a la degradación in vivo que sus contrapartidas oligonucleotídicas no modificadas, haciendo los ISS-PN/IMM de la invención más disponibles para el huésped.
2. IMM parejas del conjugado
La base oligonucleotídica del conjugado ISS-PN/IMM está conjugada con un IMM, el cual incluye un antígeno y podría contener además un agente inmunomodulador. Un "antígeno" es una sustancia que es reconocida y unida específicamente por un anticuerpo o un receptor de antígeno de la célula T. Los antígenos incluyen péptidos, proteínas, glicoproteínas y polisacáridos, incluyendo porciones de los mismos y combinaciones de los mismos. Los antígenos pueden ser los hallados en la naturaleza o pueden ser sintéticos.
El término "inmunomodulador" tal como se usa en ésta incluye los efectos inmunoestimulantes así como los inmunosupresores. Los efectos inmunoestimulantes incluyen, pero no se limitan a, aquéllos que directa o indirectamente mejoran las respuestas inmune celular o humoral. Los ejemplos de efectos inmunoestimulantes incluyen, pero no se limitan a, producción incrementada de anticuerpo específico contra el antígeno; activación o proliferación de una población de linfocitos, tal como las células NK, los linfocitos T CD4+, los linfocitos T CD80, los macrófagos, y similares; así como una síntesis incrementada de citoquinas inmunoestimulantes asociadas con Th1, incluyendo, pero no limitándose a, IL-6, IL-12, IL-18, IFN-\alpha, \beta y \gamma, TNF-\alpha, y similares. Los efectos inmunosupresores incluyen aquéllos que directa o indirectamente disminuyen las respuestas inmunes celulares o humorales.
Los ejemplos de efectos inmunosupresores incluyen, pero no se limitan a, una reducción en la producción de anticuerpos específicos contra el antígeno, tal como la producción reducida de IgE; la activación de linfocitos u otras poblaciones celulares que tienen actividades inmunosupresoras, tales como las que resultan en tolerancia inmune; y la síntesis incrementada de citoquinas que tienen efectos supresores sobre ciertas funciones celulares. Un ejemplo de esto es el IFN-\gamma, el cual puede bloquear el cambio de clase inducido por la IL-4 hacia IgE e IgG1, reduciendo por tanto los niveles de estas subclases de anticuerpos.
Por tanto, un "agente inmunomodulador" apropiado para su uso como pareja del conjugado para ISS-PN/IMM puede ser un péptido, tal como un antígeno o citoquina. Cuando la pareja del conjugado ISS-PN/IMM es un péptido, los péptidos apropiados incluyen los péptidos nativos purificados, los péptidos sintéticos, las proteínas recombinantes, los extractos de proteína crudos, los virus atenuados o desactivados, las células, los microorganismos, o los fragmentos de tales péptidos.
Los antígenos proteicos que pueden servir como IMM pareja del conjugado proceden de una amplia variedad de fuentes, incluyendo los alérgenos tales como los pólenes de plantas, las proteínas de ácaros en el polvo, las escamas de animales, la saliva, las esporas de hongos, así como los microorganismos infecciosos. Los ejemplos de estos últimos incluyen los virus atenuados o desactivados, tales como el HIV-1, HIV-2, el de la hepatitis, el herpes simplex, el rotavirus, el virus de la polio, el virus del sarampión, el virus del papiloma humano y bovino, y los virus cerebrales lentos. Para la inmunización contra la formación de tumores, el conjugado puede incluir células tumorales (vivas o irradiadas), extractos de células tumorales, o subunidades de proteínas de antígenos tumorales. Las vacunas para la anticoncepción inmunobasada pueden formarse incluyendo proteínas del esperma como la porción peptídica del conjugado.
Entre las citoquinas apropiadas para su uso como componentes del IMM pareja del conjugado, están las interleukinas (IL-1, IL-2, IL-3, etc.), los interferones (por ejemplo, IFN-\alpha, IFN-\beta, IFN-\gamma), la eritropoyetina, los factores estimuladores de colonias (por ejemplo, G-CSF, M-CSF, GM-CSF) y el TNF-\alpha.
Los IMM parejas del conjugado pueden incluir también secuencias de aminoácidos que median la unión de proteínas a un receptor específico, o que median el apuntamiento contra un tipo celular o tejido específico. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos o fragmentos de anticuerpos; hormonas peptídicas, tales como la hormona del crecimiento humana; y enzimas. Las moléculas co-estimuladoras, tales como la B7 (CD80), las proteínas trans-activadoras, tales como los factores de transcripción, las quimioquinas tales la proteína quimiotáctica del macrófago (MCP), y otros péptidos quimioatractores o quimiotácticos, son también parejas del conjugado útiles basadas en péptidos.
Más específicamente, los antígenos apropiados para su uso como pareja del conjugado ISS-PN/IMM incluyen cualquier molécula capaz de conjugarse con un oligonucleótido y elicitar una respuesta de células B o células T específica para el antígeno. Preferiblemente, los antígenos elicitan una respuesta específica para el antígeno. Una amplia variedad de moléculas son antígenos. Estas incluyen, pero no se limitan a, azúcares, lípidos, autacoides y hormonas, así como macromoléculas tales como los carbohidratos complejos y los fosfolípidos. La moléculas pequeñas podrían necesitar haptenización con objeto de hacerlas antigénicas.
Preferiblemente, los antígenos son péptidos, polisacáridos (tales como los polisacáridos capsulares usados en las vacunas de Haemophilus influenza), gangliósidos y glicoproteínas. El antígeno podría ser un antígeno intacto o un(os) epítopo(s) para célula T del antígeno. Estos pueden obtenerse a través de diversos procedimientos conocidos en la técnica, incluyendo el aislamiento y la síntesis usando procedimientos químicos y enzimáticos. En ciertos casos, tales como para muchos esteroles, ácidos grasos y fosfolípidos, las porciones antigénicas están disponibles comercialmente.
Se conocen, y están disponibles, muchos péptidos y proteínas antigénicas en la técnica; otros pueden identificarse usando técnicas convencionales. Los ejemplos de antígenos conocidos incluyen, pero no se limitan a:
a.
Alérgenos tales como los principales alérgenos de ácaros en el polvo Der pI y Der pII (ver, Chua, et al., J. Exp. Med. 167:175-182 (1988); y, Chua, et al., Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 91:124-129 (1990), los péptidos del epítopo para células T del alérgeno Der pII (ver, Joost van Neerven, et al., J. Immunol. 151:2326-2335 (1993), el altamente abundante Antígeno E (Amb aI) del alérgeno del polen de ambrosía (ver, Rafnar, et al., J. Biol. Chem. 266:1229-1236 (1991), el alérgeno de la fosfolipasa A_{2} (veneno de abeja) y los epítopos para células T en el mismo (ver, Dhillon, et al., J. Allergy Clin. Immunol. 90:42-51 (1992), el polen del abedul blanco (Betvl) (ver, Breiteneder, et al., EMBO 8:1935-1938 (1989), el alérgeno principal Fel dI del gato doméstico (ver, Rogers, et al., Mol. Immunol. 30:559-568 (1993), el polen de árbol (ver, Elsayed et al., Scand. J. Clin. Lab. Invest. Suppl. 204:17-31 (1991) y el polen de la hierba (ver, Malley, J. Reprod. Immunol. 16:173-86 (1989)).
b.
Microorganismos vivos, atenuados o desactivados, tales como el virus de la polio (Jiang et al., J. Biol. Stand. 14:103-9 (1986)), cepas atenuadas del virus de la hepatitis A (Bradley et al., J. Med. Virol. 14:373-86 (1984)), virus del sarampión atenuados (James et al., N. Engl. J. Med. 332:1262-6 (1995)) y epítopos del virus de pertusis (por ejemplos, ACEL-IM-UNE® DTP acelular, Wyeth-Lederle Vaccines and Pediatrics).
c.
Antígenos anticonceptivos tales como la proteína del esperma humano (Lea et al., Biochim. Biophys. Acta 1307:263 (1996)).
Los datos de secuencias publicadas y los procedimientos para aislar y sintetizar los antígenos descritos en estos artículos ilustran el conocimiento en la técnica en relación a fuentes de antígenos útiles. Aquéllos con formación ordinaria en la técnica estarán familiarizados con, o pueden discernir fácilmente, la identidad de otros antígenos útiles para su uso como parejas del conjugado ISS-PN/IMM.
Los péptidos inmunoestimulantes particularmente útiles para su inclusión en el IMM son aquéllos que estimulan las respuestas inmunes de Th1, tales como la IL-12 (Bliss et al., J. Immunol. 156:887-894 (1996)), IL-18, INF-\alpha, \beta y \gamma, o TGF-\alpha. La conjugación de adyuvantes (tales como la hemocianina de la lapa de ojo de cerradura, KLH) al conjugado ISS-PN/IMM puede mejorar aún más la actividad de los conjugados ISS-PN/IMM de la invención.
Otros adyuvantes útiles incluyen la toxina del cólera, el procoleragenoide, la subunidad B de la toxina del cólera, y los polisacáridos de hongos, incluyendo, pero no limitándose a, el schizophyllan, el dipéptido muramil, los derivados del dipéptido muramil, los ésteres de forbol, las microesferas, los lisados bacterianos que no son de Helicobacter pylori, la toxina lábil de Escherichia coli, los polímeros de bloque, las saponinas, y los ISCOM. Para adyuvantes adicionales, aquéllos con formación ordinaria en la técnica podrían dirigirse a, por ejemplo, Azuma, I., "Synthetic Immunoadjuvants: Application to Non-Specific Host Stimulation and Potentiation of Vaccine Immunogenicity", Vaccine 10:1000 (1992); Pockley, A.G. y Montgomery, P.C., "In vivo Adjuvant Effect of Interleukins 5 and 6 on Rat Tear IgA Antibody Responses", Immunology 73:19-23 (1991); Adam, A. y Lederer, E., "Muramyl peptides as Immunomodulators" ISI ATLAS OF SCIENCE 205 (1988); Clements, J.D., et al., "Adjuvant Activity of Escherichia coli Heat-labile Enterotoxin and Effect on the Induction of Oral Tolerance in Mice to Unrelated Protein Antigens", Vaccine 6:269 (1988); Ben Ahmeida, E.T.S., et al., "Immunopotentiation of Local and Systemic Humoral Immune Responses by ISCOMs, Liposomes and FCA: Role in Protection Against Influenza A in Mice", Vaccine 11:1302 (1993); y Gupta, R.K. et al. "Adjuvants-A Balance Between Toxicity and Adjuvanticity" Vaccine 11:290-308 (1993).
Aquéllos con formación ordinaria en la técnica apreciarán que los componentes que no son antígeno del IMM descritos más arriba, también pueden administrarse en forma no conjugada con un conjugado ISS-PN/IMM (solamente antígeno). Por tanto, la co-administración de tales componentes también está abarcada por la invención.
C. Síntesis de conjugados de polinucleótidos 1. Porción del polinucleótido
El ISS-PN puede sintetizarse usando técnicas y equipamiento para la síntesis de ácidos nucleicos, los cuales son bien conocidos en la técnica. Para referencia en relación a esto, consultar, por ejemplo, Ausubel, et al., Current Protocols in Molecular Biology, capítulos 2 y 4 (Wiley Interscience, 1989); Maniatis, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Lab., Nueva York, 1982); las patentes estadounidenses nº 4.458.066 y 4.650.675. Cuando se ensamblan enzimáticamente, las unidades individuales pueden ligarse con una ligasa, tal como la ligasa del ADN o ADN de T4, como se describe en, por ejemplo, la patente estadounidense nº 5.124.246. La degradación del oligonucleótido podría conseguirse a través de la exposición de un oligonucleótido a una nucleasa, como se ilustra en la patente estadounidense nº 4.650.675. Estas referencias se incorporan en ésta por referencia con el único propósito de demostrar el conocimiento en la técnica concerniente a la producción de polinucleótidos sintéticos. Puesto que el ISS-PN no es codificante, no hay preocupación por mantener una pauta de lectura abierta durante la síntesis.
Alternativamente, el ISS-PN podría aislarse a partir de especies microbianas (especialmente micobacterias) usando técnicas bien conocidas en la técnica, tales como la hibridación de ácidos nucleicos. Preferiblemente, tales ISS-PN aislados se purificarán hasta un estado sustancialmente puro; es decir, que estén libres de contaminantes endógenos, tales como lipopolisacáridos. Los ISS-PN aislados como parte de un polinucleótido mayor pueden reducirse a la longitud deseada mediante técnicas bien conocidas en la técnicas, tales como mediante digestión con endonucleasas. Aquéllos con formación ordinaria en la técnica estarán familiarizados con, o pueden averiguar fácilmente, las técnicas apropiadas para el aislamiento, purificación y digestión de polinucleótidos para obtener ISS-ON con uso potencial en la invención.
Los ISS-PN circulares pueden aislarse, sintetizarse a través de procedimientos recombinantes, o sintetizarse químicamente. Cuando el ISS-PN circular se obtiene a través del aislamiento o a través de procedimientos recombinantes, el ISS-PN preferiblemente será un plásmido. La síntesis química de oligonucleótidos circulares menores puede realizarse usando procedimientos de la literatura (Gao et al., Nucleic Acids Res. 23:2025-2029 (1995); Wang et al., Nucleic Acids Res. 22:2326-2333 (1994)).
El ISS-PN también puede contener oligonucleótidos modificados. Estos oligonucleótidos modificados pueden sintetizarse usando transformaciones químicas estándares. La construcción eficiente, basada en soporte sólido, de metilfosfonatos ha sido descrita. Agrawal et al., Tet. Lett. 28:3539-3542 (19). La síntesis de otros oligonucleótidos modificados basados en el fósforo, tales como los fosfotriésteres (Miller et al., JACS 93:6657-6665), fosforamidatos (Jager et al., Biochemistry 27:7247-7246), y fosforoditioatos (Patente estadounidense nº 5.453.496) también ha sido descrita. También pueden usarse otros oligonucleótidos modificados no basados en fósforo (Stirchak et al., Nucleic Acids Res. 17:6129-6141).
La preparación de nucleósidos modificados en la base, y la síntesis de oligonucleótidos modificados usando dichos nucleósidos modificados en la base como precursores, ha sido descrita, por ejemplo, en la patente estadounidense nº 4.910.300, 4.948.882 y 5.093.232. Estos nucleósidos modificados en la base se han diseñado de forma que pueden ser incorporados mediante síntesis química en posiciones terminales o internas de un oligonucleótido. Tales nucleósidos modificas en la base, presentes en posiciones terminales o internas de un oligonucleótido pueden servir como sitios para la unión de un péptido u otro antígeno. Los nucleósidos modificados en su grupo azúcar también han sido descritos (por ejemplo, en las patentes estadounidenses nº 4.849.513, 5.015.733, 5.118.800, 5.118.802) y pueden usarse de forma similar.
Las técnicas para realizar modificaciones del grupo fosfato a oligonucleótidos son conocidas en la técnica y no requieren una explicación detallada. En una de tales técnicas, se prepara un intermediario fosfatotriéster para el producto oligonucleótido diana y se oxida al fosfatotriéster que ocurre de forma natural con yodo acuoso o con otros agentes, tales como aminas anhidras. Los fosforoamidatos de oligonucleótido resultantes pueden tratarse con sulfuro para rendir fosforotioatos. La misma técnica general (exceptuando el paso de tratamiento con sulfuro) puede aplicarse para rendir metilfosfoamiditos a partir de metilfosfonatos. Para más detalles concernientes a las técnicas de modificación de grupos fosfato, aquéllos con formación ordinaria en la técnica podría desear consultar las patentes estadounidenses nº 4.425.732, 4.458.066, 5.218.103 y 5.453.496, así como el Tetrahedron Lett. en 21:4149 (1995), 7:5575 (1986), 25:1437 (1984) y el Journal Am. Chem. Soc. 93:6657 (1987), los descubrimientos de los cuales ilustran el nivel de conocimiento estándar en la técnica concerniente a la preparación de estos compuestos.
2. Uniendo el componente PN al componente IMM
El componente ISS-PN podría unirse a la porción IMM del conjugado en una variedad de formas. El enlace puede hacerse en el extremo 3' o 5' del ISS-PN, o en una base convenientemente modificada en una posición interna del PN. Si el péptido contiene un grupo reactivo apropiado (por ejemplo, un éster de N-hidroxisuccinimido), éste puede hacerse reaccionar directamente con el grupo amino N^{4} de los residuos de citosina. Dependiendo del número y ubicación de los residuos cisteína del ISS-PN, podría conseguirse el marcaje específico de uno o más residuos.
Alternativamente, los oligonucleósidos modificados, tal como se conocen en la técnica, pueden incorporarse en cualquier extremo, o en una posición interna del ISS-PN. Estos pueden contener grupos funcionales bloqueados, los cuales, cuando se desbloquean, son reactivos con una variedad de grupos funcionales, los cuales están presentes sobre, o unidos a, un péptido de interés.
La porción IMM del conjugado puede unirse al extremo 3' del ISS-PN a través de la química de soporte sólido. Por ejemplo, la porción ISS-PN puede añadirse a una porción polipeptídica que se ha sintetizado previamente sobre un soporte (Haralambidis et al., Nucleic Acids Res. 18:493-99 (1990); Haralambidis et al., Nucleic Acids Res. 18:501-505 (1990)). Alternativamente, el PN puede sintetizarse de tal forma que esté conectado a un soporte sólido a través de un eslabón cortable que se extiende desde el extremo 3'. A partir del corte químico del ISS-PN del soporte, se deja un grupo tiol terminal en el extremo 3' del ISS-PN (Zuckermann et al., Nucleic Acids Res. 15:5305-5321 (1987); Corey et al., Science 238:1401-1403 (1987)), o se deja un grupo amina terminal en el extremo 3' del PN (Nelson et al., Nucleic Acids Res. 17:1781-1794 (1989)). La conjugación del PN amino-modificado con los grupos amino del péptido puede realizarse tal como se describe en Benoit et al., Neuromethods 6:43-72 (1987). La conjugación del ISS-PN tiol-modificado con los grupos carboxilo del péptido puede realizarse tal como se describe en Sinah et al., Oligonucleotide Analogues: A Practical Approach (1991) IRL Press.
La porción IMM del conjugado puede unirse al extremo 5' del ISS-PN a través de una amina, un tiol, o un grupo carboxilo que ha sido incorporado en el ISS-PN durante su síntesis. Preferiblemente, mientras el ISS-PN está fijado sobre el soporte sólido, un grupo de enlace que comprende una amina, tiol o carboxilo protegido en un extremo, y un fosforamidito en el otro, se une covalentemente al 5'-hidroxilo (Agrawal et al., Nucleic Acids Res. 14:6227-6245 (1986); Connolly, Nucleic Acids Res. 13:4485-4502 (1985); Coull et al., Tetrahedron Lett. 27:3991-3994 (1986); Kremsky et al., Nucleic Acids Res 15:2891-2909 (1987); Connolly, Nucleic Acids Res. 15:3131-3139 (1987); Bischoff et al., Anal. Biochem. 164:336-344 (1987); Blanks et al., Nucleic. Acids Res. 16:10283-10299 (1988); patentes estadounidenses nº 4.849.513, 5.015.733, 5.118.800, y 5.118.802). A continuación de la desprotección, las funcionalidades amina, tiol y carboxilo latentes pueden usarse para unir covalentemente el PN a un péptido (Benoit et al., Neuromethods 6:43-72 (1987); Sinah et al., Oligonucleotide Analogues: A Practical Approach (1991) IRL Press.
Una porción peptídica puede unirse a una citosina o uracilo modificados en cualquier posición en el ISS-PN. La incorporación de un "brazo de enlace" que posee una funcionalidad reactiva latente, tal como un grupo amina o carboxilo, en el C-5 de la base modificada proporciona un asa para la unión del péptido (Ruth, 4th Annual Congress for Recombinant DNA Research, p. 123).
La unión del ISS-PN a un péptido puede formarse también a través de una interacción no covalente de elevada afinidad, tal como un complejo biotina-estreptoavidina. Por ejemplo, puede unirse un grupo biotinilo a una base modificada de un oligonucleótido (Roget et al., Nucleic Acids Res. 17:7643-7651 (1989)). La incorporación de un grupo estreptoavidina en la porción peptídica permite la formación un complejo unido no covalentemente del péptido conjugado con la estreptoavidina y el PN biotinilado.
La unión del ISS-PN a un lípido puede formarse usando procedimientos estándares. Estos procedimientos incluyen, pero no se limitan a, la síntesis de conjugados oligonucleótido-fosfolípido (Yanagawa et al., Nucleic Acids Symp. Ser. 19:189-192 (1988)), de conjugados oligonucleótido-ácido graso (Grabarek et al., Anal. Biochem. 185:131-135 (1990); Staros et al., Anal. Biochem. 156:220-222 (1986)), y de conjugados oligonucleótido-esterol (Boujrad et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993)90:5728-5731 (1993)).
La unión del ISS-PN a un oligosacárido puede formarse usando procedimientos estándares conocidos. Estos procedimientos incluyen, pero no se limitan a, la síntesis de conjugados oligonucleótidos-oligosacáridos, en donde el oligosacárido es una porción de una inmunoglobulina (O'Shannessy et al., J. Applied Biochem. 7:347-355
(1985)).
Los adyuvantes y citoquinas también podrían unirse genética o químicamente a los conjugados ISS-ODN. Los ejemplos de este tipo de péptido de fusión son conocidos por los especialistas en la técnica y pueden hallarse también en Czerkinsky et al., Infect. Immun. 57:1072-77 (1989); Nashar et al., Vaccine 11:235-40 (1993); y Dertzbaugh y Elson, Infect. Immun. 61:48-55 (1993).
La unión de un ISS-PN circular a un IMM puede formarse de varias formas. Cuando el PN circular se sintetiza usando procedimientos recombinantes o químicos, puede incorporarse un nucleósido modificado (Ruth, en Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach (1991) IRL Press). A continuación puede usarse la tecnología de enlace estándar para conectar el ISS-PN circular al antígeno o péptido inmunoestimulante (Goodchild, Bioconjugate Chem. 1:165 (1990)). Cuando el ISS-PN se aisla, o sintetiza usando procedimientos recombinantes o químicos, el enlace podría formarse activando químicamente, o fotoactivando, un grupo reactivo (por ejemplo, un carbeno, un radical) que se ha incorporado en el antígeno o péptido inmunoestimulante.
Pueden hallarse procedimientos adicionales para la unión de péptidos y otras moléculas a los ISS-PN en C. Kessler: Nonradioactive labeling methods for nucleic acids en L.J. Kricka (ed.) "Nonisotopic DNA Probe Techniques," Academic Press, 1992, y en Geoghegan y Stroh, Bioconjug. Chem. 3:138-146 (1992).
D. Procedimientos y rutas para la administración de ISS-PN/IMM a un huésped 1. Suministro del fármaco
Los ISS-PN/IMM de la invención se administran a un huésped usando cualquier procedimiento disponible y ruta apropiada para suministrar el fármaco, incluyendo los procedimientos ex vivo (por ejemplo, administración de células incubadas o transfectadas con un ISS-PN/IMM), así como las rutas sistémicas o localizadas. No obstante, aquéllos con formación ordinaria en la técnica apreciarán que, en la mayoría de las circunstancias, se preferirán los procedimientos y rutas localizadas que dirigen el ISS-PN/IMM hacia el tejido sensible al antígeno, respecto a las rutas sistémicas de administración, tanto por la inmediatez del efecto terapéutico como por evitar la degradación in vivo.
El punto de entrada en un huésped para muchos antígenos exógenos es a través de la piel o mucosa. Por tanto, los procedimientos y rutas de administración que apuntan a la piel (por ejemplo, para condiciones cutáneas o subcutáneas) o mucosa (por ejemplo, para condiciones respiratorias, oculares, linguales o genitales) serán especialmente útiles. Aquéllos con formación ordinaria en las técnicas clínicas estarán familiarizados con, o pueden averiguar fácilmente, los medios para suministrar el fármaco en la piel o mucosa. No obstante, para una revisión, más abajo se discuten brevemente procedimientos y rutas ilustrativos de administración de fármacos útiles en la invención.
Los medios de administración intranasal son particularmente útiles para tratar la inflamación respiratoria nasal, particularmente la inflamación mediada por antígenos transmitidos desde las fosas nasales hacia la tráquea o bronquiolos. Tales medios incluyen la inhalación de suspensiones en aerosol o la insuflación de las composiciones de polinucleótido de la invención. Los dispositivos nebulizadores apropiados para suministrar las composiciones de polinucleótido a la mucosa nasal, traqueal y bronquiolos son bien conocidos en la técnica, y, por tanto, no serán discutidos aquí con detalle. Para una revisión general en relación a la administración intranasal de fármacos, aquéllos con formación ordinaria en la técnica podrían desear consultar Chien, Novel Drug Delivery Systems, capítulo 5 (Marcel Dekker,
1992).
Las rutas de administración dérmicas, así como las inyecciones subcutáneas, son útiles para tratar las reacciones alérgicas y las inflamaciones de la piel. Los ejemplos de medios para administrar fármacos a la piel son la aplicación tópica de una preparación farmacéutica apropiada, la transmisión transdérmica, la inyección, y la administración epidérmica.
Para las transmisión transdérmica, son procedimientos apropiados los promotores de absorción o la iontoforesis. Para una revisión en relación a tales procedimientos, aquéllos con formación ordinaria en la técnica podrían desear consultar Chien, ver más arriba, en el capítulo 7. La transmisión iontoforética podría conseguirse usando "parches" comercialmente disponibles, los cuales suministran su producto continuamente, mediante pulsos eléctricos, a través de la piel intacta durante períodos de varios días o más. El uso de este procedimiento permite la transmisión controlada de composiciones farmacéuticas en concentraciones relativamente elevadas, permite la infusión de drogas de combinación, y permite el uso simultáneo de un promotor de la absorción.
Un producto de parche de ejemplo para su uso en este procedimiento es el producto con nombre comercial LECTRO PATCH de General Medical Company de Los Angeles, CA. Este producto, electrónicamente mantiene los electrodos del depósito a pH neutro, y puede adaptarse para proporcionar dosis de diferentes concentraciones, para dosificar continuamente y/o para dosificar periódicamente. La preparación y uso del parche debería realizarse de acuerdo con las instrucciones impresas del fabricante que acompañan el producto LECTRO PATCH.
La administración epidérmica esencialmente implica irritar mecánica o químicamente la capa más externa de la epidermis de forma suficiente como para provocar una respuesta inmune contra el irritante. Un dispositivo de ejemplo para su uso en la administración epidérmica emplea una multiplicidad de tynes cortos, de diámetro muy pequeño, los cuales pueden usarse para introducir el ISS-PN/IMM que recubre los tynes al arañar la piel. El dispositivo incluido en el viejo ensayo de tuberculina MONO-VAC fabricado por Pasteur Merieux de Lyon, Francia, es apropiado para su uso en la administración epidérmica de ISS-PN/IMM. El uso del dispositivo es de acuerdo con las instrucciones escritas del fabricante incluidas con el dispositivo; estas instrucciones referidas al uso y administración ilustran el uso convencional del dispositivo. Los dispositivos similares que también podrían usarse en esta realización son aquéllos que se usan actualmente para realizar ensayos de alergia.
La administración oftálmica (por ejemplo, para el tratamiento de la conjuntivitis alérgica) implica la aplicación invasora o tópica de una preparación farmacéutica al ojo. Las gotas para ojos, las cremas tópicas, y los líquidos inyectables son todos ellos ejemplos de formas apropiadas para administrar fármacos al ojo.
La administración sistémica implica la administración tópica invasora o sistémicamente absorbida de preparaciones farmacéuticas. Las aplicaciones tópicas, así como las inyecciones intravenosas e intramusculares son ejemplos de medios comunes para la administración sistémica de fármacos.
2. Parámetros de dosificación
Una ventaja particular de los ISS-PN/IMM de la invención es su capacidad para ejercer su actividad inmunomoduladora incluso en dosis relativamente minúsculas. Aunque la dosificación usada variará dependiendo de los objetivos clínicos a conseguirse, un rango de dosis apropiado es uno que proporciona hasta aproximadamente 1-1000 \mug de ISS-PN/IMM/ml de portador en una única dosis. Alternativamente, puede considerarse que una dosis diana de ISS-PN/IMM es aproximadamente 1-10 \muM en una muestra de sangre del huésped extraída durante las primeras 24-48 horas posteriores a la administración del ISS-PN/IMM. En base a estudios actuales, se cree que los ISS-PN/IMM tienen poca o ninguna toxicidad a estos niveles de dosificación.
En relación a esto, debería destacarse que la actividad antiinflamatoria e inmunoterapéutica del ISS-PN/IMM de la invención es esencialmente dependiente de la dosis. Por tanto, para incrementar la potencia del ISS-PN/IMM en una magnitud de dos, cada dosis única debe doblarse en su concentración. Clínicamente, podría ser aconsejable administrar el ISS-PN/IMM en una dosis baja (por ejemplo, de aproximadamente 1 \mug/ml a aproximadamente 50 \mug/ml), incrementar a continuación la dosis según se necesite para conseguir el objetivo terapéutico deseado.
A la luz de las enseñanzas proporcionadas por este descubrimiento, aquéllos con formación ordinaria en las técnicas clínicas estarán familiarizados con, o pueden averiguar fácilmente, los parámetros apropiados para la administración de los ISS-PN/IMM acordes con la invención.
3. Composiciones de ISS-PN/IMM
Los ISS-PN/IMM se prepararán en una composición farmacéuticamente aceptable para su administración a un huésped. Los portadores farmacéuticamente aceptables preferidos para su uso con el ISS-PN/IMM de la invención podrían incluir las soluciones estériles acuosas o no acuosas, las suspensiones y las emulsiones. Los ejemplos de solventes no acuosos son el propilenglicol, el polietilenglicol, los aceites vegetales tales como el aceite de oliva, y los ésteres orgánicos inyectables tales como el etiloleato. Los portadores acuosos incluyen el agua, las soluciones alcohólicas/acuosas, las emulsiones o suspensiones, incluyendo la solución salina y el medio tamponado. Los vehículos parenterales incluyen los regeneradores de fluidos y nutrientes, los regeneradores de electrólitos (tales como los basados en la dextrosa de Ringer), y similares. También podrían estar presentes los conservantes y otros aditivos tales como, por ejemplo, los antimicrobianos, los antioxidantes, los agentes quelantes, y los gases inertes y similares. Una composición de ISS-PN/IMM también podría liofilizarse usando medios bien conocidos en la técnica, para su subsiguiente reconstitución y uso de acuerdo con la invención.
Los promotores de absorción, los detergentes y los agentes químicos irritantes (por ejemplo, los agentes queratinolíticos) pueden mejorar la transmisión de una composición de ISS-PN/IMM hacia un tejido diana. Para referencia concerniente a los principios generales relativos a la absorción de promotores y detergentes que se han usando exitosamente en la administración mucosal de fármacos orgánicos y basados en péptidos, consultar Chien, Novel Drug Delivery Systems, Ch. 4 (Marcel Dekker, 1992).
En particular, los ejemplos de promotores de la absorción nasal apropiados se detallan en Chien, ver más arriba, en el capítulo 5, tablas 2 y 3; son preferibles los agentes más suaves. Los agentes apropiados para su uso en el procedimiento de esta invención para administración mucosal/nasal se describen también en Chang, et al., Nasal Drug Delivery, "Treatise on Controlled Drug Delivery", capítulo 9 y tabla 3-4B del mismo, (Marcel Dekker, 1992). En Sloan, Use of Solubility Parameters from Regular Solution Theory to Describe Partitioning-Driven Processes, Capítulo 5, "Prodrugs: Topical and Ocular Drug Delivery" (Marcel Dekker, 1992), y en diferentes lugares del texto, se describen agentes apropiados, los cuales se sabe potencian la absorción de fármacos a través de la piel. Todas estas referencias se incorporan en ésta con el único propósito de ilustrar el nivel de conocimiento y capacitación en la técnica concerniente a las técnicas de administración de fármacos.
Un sistema de dispersión coloidal podría usarse para la administración dirigida del ISS-PN/IMM al tejido específico. Los sistemas de dispersión coloidal incluyen los complejos de macromoléculas, las nanocápsulas, las microesferas, las cuentas, y los sistemas basados en lípidos, incluyendo las emulsiones de aceite en agua, micelas, micelas mezcladas, y liposomas. El sistema coloidal preferido de esta invención es un liposoma.
Los liposomas son vesículas de membrana artificiales que son útiles como vehículos de suministro in vitro e in vivo. Se ha mostrado que las vesículas unilamelares grandes (LUV), que oscilan en tamaño desde 0,2-4,0 \mum pueden encapsular un porcentaje sustancial de un tampón acuoso que contenga macromoléculas grandes. El ARN, ADN y los viriones intactos pueden encapsularse dentro del interior acuoso y administrarse a células en una forma biológicamente activa (Fraley, et al., Trends Biochem. Sci., 6:77 (1981)). Además de a las células de mamífero, los liposomas se han usado para la administración de polinucleótidos en plantas, levaduras, y células bacterianas. Para que un liposoma sea un vehículo de transferencia de genes eficiente, debe debería tener presentes las siguientes características: (1) encapsulación de los genes que codifican los polinucleótidos antisentido con elevada eficiencia, a la vez que no se compromete su actividad biológica; (2) unión preferencial y sustancial a una célula diana en comparación con células que no son diana; (3) suministro del contenido acuoso de la vesícula al citoplasma de la célula diana con elevada eficiencia; y (4) expresión precisa y efectiva de la información genética (Mannino, et al., Biotechniques, 6:682 (1988)).
La composición del liposoma es usualmente una combinación de fosfolípidos, particularmente de fosfolípidos con elevada temperatura de transición de fase, usualmente en combinación con esteroides, especialmente colesterol. También podría usarse otros fosfolípidos u otros lípidos. Las características físicas de los liposomas dependen del pH, fuerza iónica, y de la presencia de cationes divalentes.
Los ejemplos de lípidos útiles en la producción de liposomas incluyen los compuestos fosfatidilio, tales como el fosfatidilglicerol, la fosfatidilcolina, la fosfatidilserina, la fosfatidiletanolamina, los esfingolípidos, los cerebrósidos, y los gangliósidos. Son particularmente útiles los diacilfosfatidilgliceroles, en donde la porción lipídica contiene de 14-18 átomos de carbono, particularmente de 16-18 átomos de carbono, y está saturada. Los fosfolípidos ilustrativos incluyen la fosfatidilcolina de huevo, la dipalmitoilfosfatidilcolina, y la diestearoilfosfatidilcolina.
El apuntamiento de liposomas puede clasificarse en base a sus factores anatómicos y mecánicos. La clasificación anatómica se basa en el nivel de selectividad, por ejemplo, específico para un órgano, específico para una célula, y específico para un orgánulo. La apuntamiento mecánico puede distinguirse en base a si es pasivo o activo. El apuntamiento pasivo utiliza la tendencia natural de los liposomas para distribuirse a células del sistema reticulo-endotelial (RES) en órganos que contienen capilares sinusoidales. El apuntamiento activo, por otra parte, implica la alteración del liposoma acoplando el liposoma a un ligando específico, tal como un anticuerpo monoclonal, un azúcar, un glicolípido, o proteína, o cambiando la composición o tamaño del liposoma con objeto de conseguir apuntar a órganos y tipos celulares distintos de los sitios de localización que ocurren de forma natural.
La superficie del sistema de suministro apuntado podría modificarse de diferentes formas. En el caso de un sistema de suministro liposómico apuntado, pueden incorporarse grupos lipídicos en la bicapa lipídica del liposoma con objeto de mantener el apuntamiento del ligando en asociación estable con la bicapa liposómica. Pueden usarse varios grupos de enlace bien conocidos para unir las cadenas lipídicas al ligando apuntador (ver, por ejemplo, Yanagawa, et al., Nuc. Acids Symp. Ser., 19:189 (1988); Grabarek, et al., Anal. Biochem., 185:131 (1990); Staros, et al., Anal. Biochem., 156:220 (1986) y Boujrad, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:5728 (1993), los descubrimientos de los cuales se incorporan en ésta por referencia solamente para ilustrar el nivel estándar de conocimiento en la técnica concerniente a la conjugación de PN a lípidos). El suministro apuntado de ISS-PN/IMM puede conseguirse también mediante conjugación del ISS-PN/IMM a la superficie de vectores de expresión recombinante virales y no virales, a un antígeno u otro ligando, a un anticuerpo monoclonal o a cualquier molécula que tenga la especificidad de unión deseada.
La co-administración de un fármaco peptídico con un ISS-PN/IMM acorde con la invención podría conseguirse también mediante la incorporación del ISS-PN/IMM en cis o en trans en un vector de expresión recombinante (plásmido, cósmido, virus o retrovirus), el cual codifica cualquier proteína terapéuticamente beneficiosa suministrable mediante un vector de expresión recombinante. Si se desea la incorporación de un ISS-PN/IMM en un vector de expresión para su uso en la práctica de la invención, tal incorporación podría conseguirse usando técnicas convencionales, la cuales no requieren una explicación detallada para alguien con formación ordinaria en la técnica. No obstante, para revisión, aquéllos con formación ordinaria podría desear consultar Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, ver más arriba.
D. En busca de ISS-PN/IMM activos
La confirmación de que un compuesto particular tiene las propiedades de un ISS-PN/IMM útil en la invención puede obtenerse evaluando si el ISS-PN/IMM afecta la secreción de citoquinas y la producción de anticuerpo del isotipo IgG como se describe en la SECCIÓN A.I, más arriba. Los detalles de las técnicas in vitro utiles para realizar tal evaluación se proporcionan en los ejemplos; aquéllos con formación ordinaria en la técnica también conocerán, o podrán averiguar fácilmente, otros procedimientos para medir la secreción de citoquinas y la producción de anticuerpos, a la vez que los parámetros enseñados en ésta.
E. Equipos para su uso en la puesta en práctica de los procedimientos de la invención
La invención también proporciona equipos, para su uso en los procedimientos descritos más arriba. Tales equipos podrían incluir cualquiera o la totalidad de los siguientes: ISS-PN/IMM (conjugado o sin conjugar); un portador farmacéuticamente aceptable (podría mezclarse previamente con el ISS-PN/IMM) o una base de suspensión para reconstituir el ISS-PN/IMM liofilizado; medicamentos adicionales; un vial estéril para cada ISS-PN/IMM y medicamento adicional, o un único vial para las mezclas de los mismos; dispositivo(s) para su uso en el suministro de ISS-PN/IMM a un huésped; reactivos de ensayo para detectar indicios de que se han alcanzado, en los animales tratados, los efectos antiinflamatorios y/o inmunoestimulantes buscados, y un dispositivo de ensayo apropiado.
Los ejemplos que ilustran la práctica de la invención se detallan más abajo. Los ejemplos sólo tienen propósito de referencia, y no deberían considerarse como limitantes de la invención, la cual se define mediante las reivindicaciones adjuntas. Todas las abreviaturas y términos usados en los ejemplos tiene su significado esperado y ordinario a menos que se especifique de otro modo.
Ejemplo I Inducción selectiva de una respuesta Th1 en un huésped después de la administración de un ISS-PN/IMM
En los ratones, los anticuerpos IgG 2A son marcadores serológicos de una respuesta inmune del tipo Th1, mientras que los anticuerpos IgG 1 son indicativos de una respuesta inmune del tipo Th2. Las respuestas Th2 incluyen la clase de anticuerpos IgE asociada con alergia; los antígenos de proteínas solubles tienden a estimular respuestas Th2 relativamente fuertes. Por contra, las respuestas Th1 son inducidas por la unión del antígeno a macrófagos y células dendríticas.
Para determinar qué respuesta, si alguna, se produciría en ratones que recibieran ISS-PN/IMM de acuerdo con la invención, se inmunizaron ocho grupos de ratones Balb/c con 10 \mug de proteína \beta-galactosidasa (conjugada con avidina; Sigma, St. Louis, MO) para producir un fenotipo alérgico modelo. Tal como se detalla en la tabla siguiente, algunos de los ratones recibieron antígeno solo, algunos recibieron un conjugado antígeno-ISS-PN o un conjugado usando un PN mutante, no estimulador, como conjugado del antígeno, y otros recibieron el antígeno en una mezcla no conjugada con un ISS-PN. Los ratones ingenuos se muestran por referencia:
Grupo de ratones Tratamiento con ISS-PN/IMM
1 Ninguno (vacunados con antígeno de \beta-gal)
2 conjugado DY1018-\betaGal (ISS/PN-IMM)
3 conjugado DY1019-\betaGal (PN/IMM)
4 DY1018 mezclado con \betaGal (sin conjugar)
5 \betaGal en adyuvante (alum)
6 ADN de plásmido (ISS-ODN presente pero no expresable con antígeno)
7 ratones ingenuos (sin cebado con antígeno)
DY1018 tiene la secuencia de nucleótidos:
5'-TGACTGTGAACGTTCGAGATGA-3'
con un esqueleto fosfotioato, y DY1019 tiene la secuencia de nucleótidos:
5'-TGACTGTGAAGGTTGGAGATGA-3'
con un esqueleto fosfotioato.
A intervalos de 2 semanas, se midieron cualesquiera IgG 2A e IgG 1 contra la \beta-galactosidasa, presentes en el suero de cada ratón, mediante ensayo inmunoabsorbente unido a enzima (usando anticuerpos específicos para las subclases IgG 1 e IgG 2A) sobre placas de microvaloración recubiertas con el enzima.
Tal como se muestra en la Figura 1, tan sólo los ratones que recibieron el ISS-PN/IMM produjeron títulos elevados de anticuerpos IgG 2A, los cuales incrementaron en número a lo largo de un período de 8 semanas. Tal como se muestra en la Figura 2, la inmunización de los ratones con el propio antígeno o con el PN/IMM indujo la producción de títulos relativamente elevados de anticuerpos IgG. Los datos mostrados en las figuras comprenden los promedios de los valores obtenidos a partir de cada grupo de ratones.
Para evaluar el efecto del tratamiento de un huésped antes y después de un desafío con antígeno secundario, se inmunizaron 3 grupos de ratones Balb/c con 10 \mug de antígeno E (AgE) en alum para producir un fenotipo alérgico modelo y se desafiaron de nuevo con el antígeno, ISS-PN/IMM o PN mutante/IMM (no estimulador) a las 5 semanas después del cebado. Se realizó un ELISA para los anticuerpos IgG1 e IgG2a, tal como se ha descrito, 4 semanas después del cebado (una semana antes del desafío con antígeno secundario) y de nuevo a las 7 semanas (2 semanas después del desafío secundario).
De nuevo, los ratones que recibieron el ISS-PN/IMM generaron una intensa respuesta del tipo Th1 contra el antígeno (IMM) en comparación con los ratones inmunizados con el antígeno y con el PN mutante/IMM (Figura 3), mientras que lo contrario causó una respuesta del tipo Th21 en el mismo ratón (Figura 4).
Estos datos indican que se induce una respuesta Th1 selectiva mediante la administración de un ISS-PN/IMM acorde con la invención, a ambos, un huésped cebado con antígeno (desafío pre-antígeno) y uno desafiado con antígeno.
Ejemplo II Supresión de la respuesta de anticuerpo IgE contra el antígeno mediante inmunización con ISS-PN/IMM
Para demostrar la supresión de IgE conseguida a través de la estimulación de una respuesta inmune celular del tipo Th1 en preferencia a una respuesta inmune celular del tipo Th2, se inmunizaron ratones Balb/c de cinco a ocho semanas de edad con AgE, tal como se ha descrito en el ejemplo anterior.
Las IgE anti-AgE se detectaron usando un radioinmunoensayo en fase sólida (RAST) en una placa de polivinilo de 96 pocillos (una modificación radioisotópica del procedimiento de ELISA descrito en Coligan, "Current Protocols In Immunology", Unidad 7.12.4, volumen 1, Wiley & Sons, 1994), excepto que se usaron anticuerpos policlonales de cabra purificados específicos para cadenas \varepsilon de ratón en vez de anticuerpos específicos para Fab humanos. Para detectar el IgE anti-AgE, se recubrieron las placas con AgE (10 \mug/ml). La concentración de IgE más baja medible mediante el ensayo empleado fue de 0,4 ng de IgE/ml.
Midiendo específicamente las respuesta anti-antígeno por parte de cada grupo de ratones, tal como se muestra en la Figura 5, los niveles de IgE anti-AgE en los ratones inmunizados con ISS-PN/IMM fueron consistentemente bajos, tanto antes como después de la potenciación, mientras que los ratones inyectados con la proteína y el ISS-PN/IMM mutante desarrollaron niveles elevados de anti-AgE después del desafío con antígeno.
Estos datos muestran que los ratones inmunizados con ISS-PN/IMM desarrollaron una respuesta Th1 específica para el antígeno (suprimiendo la respuesta de IgE de Th2) contra el antígeno.
Ejemplo III Niveles de INF\gamma en ratones después de la administración de ISS-PN/IMM
Se inmunizaron ratones Balb/c con \betagal tal como se describe en el Ejemplo 1, y se sacrificaron a continuación 24 horas más tarde. Se recolectaron los esplenocitos procedentes de cada ratón.
Se recubrieron placas de microvaloración de 96 pocillos con anticuerpo anti-CD3 (Pharmingen, La Jolla, CA) a una concentración de 1 \mug/ml de solución salina. El anticuerpo anti-CD3 estimula las células T liberando una señal química que imita los efectos de unirse al complejo del receptor de las células T (TCR). Se lavaron las placas y se añadieron esplenocitos en cada pocillo (4 \times 10^{5}/pocillo) en un medio de RPMI 1640 con un 10% de suero fetal bovino. Los sobrenadantes se obtuvieron a los días 1, 2 y 3.
Los niveles de citoquina de Th1 (INF\gamma) se ensayaron con un ensayo con anticuerpo anti-INF\gamma de ratón (ver, por ejemplo, Coligan, "Current Protocols in Immunology", unidad 6.9.5., volumen 1, Wiley & Sons, 1994). En ratones con un fenotipo Th2 se esperaría niveles relativamente bajos de INF-\gamma, mientras que se esperarían niveles relativamente elevados en ratones con un fenotipo Th1.
Tal como se muestra en la Figura 5, los niveles de secreción de INF-\gamma estimulados por Th1 incrementaron enormemente en los ratones tratados con ISS-PN/IMM, pero se redujeron sustancialmente en cada uno de los otros conjuntos de ratones (en comparación con el control), indicando el desarrollo de un fenotipo del tipo Th2 en los últimos ratones y de un fenotipo Th1 en los ratones tratados con ISS-PN/IMM.
Ejemplo IV Potenciación de las respuestas de CTL mediante ISS-PN/IMM
Se obtuvo una mezcla de linfocitos y se pusieron en contacto con antígeno \beta-gal solo o como parte de las construcciones y mezclas descritas en el Ejemplo I. Tal como se muestra en la Figura 6, la producción de CTL en respuesta al ISS-PN/IMM fue considerablemente mayor que la respuesta al antígeno suministrado en otras formas; incluso dos veces más intensa que en animales tratados con una mezcla no conjugada de ISS-PN y antígeno IMM.
En el experimento, los valores más elevados para los ratones tratados con M-ISS-PN/IMM después del desafío con antígeno, en comparación con los ratones inmunizados convencionalmente, lo más probable es que se deban a las propiedades como portador del DY1019.
Por tanto, la inmunidad a largo plazo mediada por las respuestas inmunes celulares se beneficia mediante el tratamiento acorde con la invención.

Claims (23)

1. Composición inmunomoduladora que comprende una molécula inmunomoduladora, en donde dicha molécula inmunomoduladora comprende un antígeno, en donde el antígeno está conjugado con un polinucleótido inmunoestimulante (ISS-PN), comprendiendo dicho ISS-PN al menos una secuencia inmunoestimulante (ISS) que comprende la secuencia no metilada 5'-citosina, guanina-3', en donde el ISS tiene al menos seis nucleótidos de longitud, en donde dicho ISS-PN tiene de 6 a aproximadamente 200 nucleótidos de longitud, y en donde el antígeno se selecciona de entre un antígeno tumoral, un antígeno viral, un alérgeno o un microorganismo infeccioso.
2. Composición según la reivindicación 1, en donde el alérgeno se selecciona de entre el grupo que consiste en un alérgeno de polen de planta, una proteína de ácaro del polvo, un alérgeno de escama de animal, una alérgeno de saliva, y un alérgeno de espora de hongo.
3. Composición según la reivindicación 2, en donde el alérgeno es el antígeno E Amb aI, el antígeno del polen de ambrosía, o un antígeno de polen de árbol.
4. Composición de la reivindicación 1, en donde el antígeno viral es un antígeno de un virus seleccionado de HIV-1, HIV-2, un virus de la hepatitis, un virus del herpes simplex, un rotavirus, un virus de la polio, un virus del sarampión, y un virus del papiloma humano.
5. Composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el ISS comprende una secuencia palindrómica.
6. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el ISS comprende la secuencia 5'-purina, purina, C, G, pirimidina, pirimidina-3'.
7. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el ISS comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en AACGTT, AGCGTT, GACGTT, GGCGTT, AACGTC, AGCGTC, GACGTC, GGCGTC, AACGCC, AGCGCC, GACGCC, GGCGCC, AACGCT, AGCGCT, GACGCT, GGCGCT y TTCCGA.
8. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el ISS comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en AACGTT, AGCGTT, GACGTT, GGCGTT, AACGTC, AGCGTC, GACGTC, GGCGTC, AACGCC, AGCGCC, GACGCC, GGCGCC, AACGCT, AGCGCT, GACGCT, GGCGCT y TTCCGA, la cual está alterada por una sustitución con uracilo.
9. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el ISS comprende la secuencia TGACTGT
GAACGTTCGAGATGA.
10. Composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el polinucleótido comprende además una modificación del esqueleto en el fosfato.
11. Composición según la reivindicación 10, en donde la modificación del esqueleto en el fosfato es fosforotioato o fosforoditioato.
12. Composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el polinucleótido comprende además al menos un nucleótido modificado.
13. Composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición comprende además una molécula inmunoestimulante seleccionada del grupo que consiste en adyuvantes, hormonas, factores del crecimiento, citoquinas, quimioquinas, ligandos de proteínas de reconocimiento, y factores transactivadores.
14. Composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende además un agente antiinflamatorio.
15. Composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el polinucleótido es lineal.
16. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en donde el polinucleótido es circular.
17. Composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el antígeno no está conjugado covalentemente al polinucleótido.
18. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, en donde el antígeno está conjugado mediante un brazo de enlace con el C-5 de una citosina modificada o una base uracilo del polinucleótido.
19. Composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la molécula inmunomoduladora está unida a un anticuerpo monoclonal.
20. Composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su utilización en un procedimiento de tratamiento.
21. Utilización de una composición inmunomoduladora que comprende una molécula inmunomoduladora, en donde dicha molécula inmunomoduladora comprende un antígeno, en donde el antígeno está conjugado con un polinucleótido inmunoestimulante (ISS-PN), comprendiendo dicho ISS-PN al menos una secuencia inmunoestimulante (ISS) que comprende la secuencia no metilada 5'-citosina, guanina-3', para la fabricación de un medicamento destinado a potenciar una respuesta Th1 y/o suprimir una respuesta Th2 contra el antígeno, y/o reducir la producción de IgE estimulada por el antígeno.
22. Utilización según la reivindicación 21, en donde la molécula inmunomoduladora es como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19.
23. Equipo que comprende la composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19.
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Families Citing this family (322)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030109469A1 (en) * 1993-08-26 2003-06-12 Carson Dennis A. Recombinant gene expression vectors and methods for use of same to enhance the immune response of a host to an antigen
US5849719A (en) * 1993-08-26 1998-12-15 The Regents Of The University Of California Method for treating allergic lung disease
US6727230B1 (en) 1994-03-25 2004-04-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US20030026782A1 (en) * 1995-02-07 2003-02-06 Arthur M. Krieg Immunomodulatory oligonucleotides
US7935675B1 (en) * 1994-07-15 2011-05-03 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6207646B1 (en) * 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6239116B1 (en) * 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6429199B1 (en) 1994-07-15 2002-08-06 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells
WO1997025429A1 (en) 1996-01-04 1997-07-17 Rican Limited Helicobacter pylori bacterioferritin
US20030078223A1 (en) * 1996-01-30 2003-04-24 Eyal Raz Compositions and methods for modulating an immune response
EP0879284B1 (en) * 1996-01-30 2009-07-29 The Regents of The University of California Gene expression vectors which generate an antigen specific immune response and methods of using the same
WO1997032602A1 (en) * 1996-03-08 1997-09-12 The Regents Of The University Of California DELIVERY SYSTEM USING mAb 3E10 AND MUTANTS AND/OR FUNCTIONAL FRAGMENTS THEREOF
ES2241042T3 (es) 1996-10-11 2005-10-16 The Regents Of The University Of California Conjugados de polinucleotido inmunoestimulador/ molecula inmunomoduladora.
EP0855184A1 (en) 1997-01-23 1998-07-29 Grayson B. Dr. Lipford Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination
AU753688B2 (en) * 1997-03-10 2002-10-24 Ottawa Civic Loeb Research Institute Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
WO1998055495A2 (en) * 1997-06-06 1998-12-10 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
EP1374894A3 (en) * 1997-06-06 2004-09-22 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
US20040006034A1 (en) * 1998-06-05 2004-01-08 Eyal Raz Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
US6589940B1 (en) 1997-06-06 2003-07-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
DK1009413T3 (da) * 1997-09-05 2007-06-11 Univ California Anvendelse af immunstimulerende oligonukleotider til forebyggelse eller behandling af astma
ATE356630T1 (de) * 1998-04-03 2007-04-15 Univ Iowa Res Found Verfahren und produkte zur stimulierung des immunsystems mittels immunotherapeutischer oligonukleotide und zytokine
ATE305507T1 (de) * 1998-05-14 2005-10-15 Coley Pharm Gmbh Verfahren zur regulierung der hematopoiese mit hilfe von cpg oligonukleotide
PT1077722E (pt) 1998-05-22 2006-12-29 Coley Pharm Group Inc Produtos e composições para utilização na indução da imunidade mucosal
US6562798B1 (en) * 1998-06-05 2003-05-13 Dynavax Technologies Corp. Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof
CA2333750A1 (en) * 1998-06-23 1999-12-29 Dale T. Umetsu Adjuvant therapy
US20030022854A1 (en) 1998-06-25 2003-01-30 Dow Steven W. Vaccines using nucleic acid-lipid complexes
US6693086B1 (en) * 1998-06-25 2004-02-17 National Jewish Medical And Research Center Systemic immune activation method using nucleic acid-lipid complexes
EP1119375A4 (en) * 1998-10-05 2005-02-02 Regetns Of The University Of C METHODS AND ADJUVANTS FOR STIMULATING MUCOUS IMMUNITY
EP1117433A1 (en) * 1998-10-09 2001-07-25 Dynavax Technologies Corporation Anti hiv compositions comprising immunostimulatory polynucleotides and hiv antigens
WO2000048630A1 (en) 1999-02-17 2000-08-24 Csl Limited Immunogenic complexes and methods relating thereto
US8206749B1 (en) 1999-02-26 2012-06-26 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Microemulsions with adsorbed macromolecules and microparticles
JP4812942B2 (ja) 1999-02-26 2011-11-09 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル ＣＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを用いるＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原殺菌活性の増強
AU4343700A (en) 1999-04-12 2000-11-14 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The Oligodeoxynucleotide and its use to induce an immune response
US6977245B2 (en) 1999-04-12 2005-12-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Oligodeoxynucleotide and its use to induce an immune response
US6558670B1 (en) 1999-04-19 2003-05-06 Smithkline Beechman Biologicals S.A. Vaccine adjuvants
DE60014076T2 (de) 1999-04-19 2005-10-13 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Adjuvans-zusammensetzung, enthaltend saponin und ein immunstimulatorisches oligonukleotid
US6737066B1 (en) * 1999-05-06 2004-05-18 The Immune Response Corporation HIV immunogenic compositions and methods
US6514948B1 (en) * 1999-07-02 2003-02-04 The Regents Of The University Of California Method for enhancing an immune response
CA2380947C (en) 1999-08-19 2011-11-01 Dynavax Technologies Corporation Methods of modulating an immune response using immunostimulatory sequences and compositions for use therein
US6949520B1 (en) * 1999-09-27 2005-09-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon
ATE395930T1 (de) 1999-10-22 2008-06-15 Aventis Pasteur Verfahren zur erregung und/oder verstärkung der immunantwort gegen tumorantigene
US8017742B2 (en) * 1999-11-10 2011-09-13 Japan Science And Technology Agency Gene carrier
US7223398B1 (en) † 1999-11-15 2007-05-29 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory compositions containing an immunostimulatory sequence linked to antigen and methods of use thereof
EP1322655B1 (en) * 2000-01-14 2007-11-14 The Government of the United States of America, as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services Oligodeoxynucleotide and its use to induce an immune response
EP1311288A1 (en) * 2000-01-20 2003-05-21 Ottawa Health Research Institute Immunostimulatory nucleic acids for inducing a th2 immune response
AT409085B (de) * 2000-01-28 2002-05-27 Cistem Biotechnologies Gmbh Pharmazeutische zusammensetzung zur immunmodulation und herstellung von vakzinen
US7585847B2 (en) * 2000-02-03 2009-09-08 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory nucleic acids for the treatment of asthma and allergy
US20040131628A1 (en) * 2000-03-08 2004-07-08 Bratzler Robert L. Nucleic acids for the treatment of disorders associated with microorganisms
US7129222B2 (en) * 2000-03-10 2006-10-31 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US7157437B2 (en) 2000-03-10 2007-01-02 Dynavax Technologies Corporation Methods of ameliorating symptoms of herpes infection using immunomodulatory polynucleotide sequences
US20010046967A1 (en) 2000-03-10 2001-11-29 Gary Van Nest Methods of preventing and treating respiratory viral infection using immunomodulatory polynucleotide
US20020098199A1 (en) 2000-03-10 2002-07-25 Gary Van Nest Methods of suppressing hepatitis virus infection using immunomodulatory polynucleotide sequences
US20030129251A1 (en) * 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
CA2404041A1 (en) 2000-03-28 2001-10-04 The Regents Of The University Of California Methods for increasing a cytotoxic t lymphocyte response in vivo
DK1282702T3 (da) 2000-05-10 2007-04-02 Sanofi Pasteur Ltd Immunogene polypeptider, som er kodet af KAGE-minigener, og anvendelser deraf
AU2001281812B2 (en) * 2000-06-08 2005-04-07 Valneva Austria Gmbh Immunostimulatory oligodeoxynucleotides
AU2001270134B2 (en) 2000-06-22 2006-06-15 University Of Iowa Research Foundation Methods for enhancing antibody-induced cell lysis and treating cancer
WO2002002172A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Univ Jefferson Dna palindrome - oligoguanylic acid compositions and uses thereof
KR100917101B1 (ko) * 2000-08-04 2009-09-15 도요 보세키 가부시키가이샤 플렉시블 금속적층체 및 그 제조방법
US6787524B2 (en) * 2000-09-22 2004-09-07 Tanox, Inc. CpG oligonucleotides and related compounds for enhancing ADCC induced by anti-IgE antibodies
PT1889630E (pt) 2000-10-18 2012-02-29 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacinas compreendendo o antigénio mage ligado a um fragmento da proteína d
DK1328543T3 (da) 2000-10-27 2009-11-23 Novartis Vaccines & Diagnostic Nukleinsyrer og proteiner fra streptococcus-gruppe A & B
JP4188687B2 (ja) * 2000-12-27 2008-11-26 ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション 免疫変調ポリヌクレオチド及びその使用法
FR2823222B1 (fr) 2001-04-06 2004-02-06 Merial Sas Vaccin contre le virus de la fievre du nil
DE60141773D1 (de) * 2001-04-20 2010-05-20 Inst Systems Biology Toll-ähnlichen-rezeptor-5-liganden und verwendungsverfahren
US8703146B2 (en) * 2001-04-20 2014-04-22 Institute For Systems Biology Toll-like receptor 5 ligands and methods of use
JP4188092B2 (ja) 2001-05-21 2008-11-26 インターツェル・アクチェンゲゼルシャフト 免疫促進性オリゴデオキシ核酸分子
ATE490267T1 (de) * 2001-06-05 2010-12-15 Curevac Gmbh Stabilisierte mrna mit erhöhtem g/c-gehalt, kodierend für ein virales antigen
GB0115176D0 (en) 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
CA2451974C (en) 2001-06-21 2014-10-14 Karen L. Fearon Chimeric immunomodulatory compounds and methods of using the same
GB0118249D0 (en) 2001-07-26 2001-09-19 Chiron Spa Histidine vaccines
US7666674B2 (en) 2001-07-27 2010-02-23 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Use of sterically stabilized cationic liposomes to efficiently deliver CPG oligonucleotides in vivo
GB0121591D0 (en) 2001-09-06 2001-10-24 Chiron Spa Hybrid and tandem expression of neisserial proteins
AU2002318944A1 (en) * 2001-08-01 2003-02-17 Coley Pharmaceutical Gmbh Methods and compositions relating to plasmacytoid dendritic cells
JP4607452B2 (ja) 2001-08-07 2011-01-05 ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション 免疫調節性組成物、製剤およびその使用方法
WO2003020884A2 (en) 2001-08-14 2003-03-13 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health And Human Services Method for rapid generation of mature dendritic cells
IL160157A0 (en) 2001-08-17 2004-07-25 Coley Pharm Group Inc Combination motif immune stimulation oligonucleotides with improved activity
AU2002339224B2 (en) 2001-09-14 2008-10-09 Kuros Us Llc Packaging of immunostimulatory substances into virus-like particles: method of preparation and use
AR045702A1 (es) 2001-10-03 2005-11-09 Chiron Corp Composiciones de adyuvantes.
TW200303759A (en) * 2001-11-27 2003-09-16 Schering Corp Methods for treating cancer
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
US8466116B2 (en) 2001-12-20 2013-06-18 The Unites States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Use of CpG oligodeoxynucleotides to induce epithelial cell growth
AU2002366710A1 (en) 2001-12-20 2003-07-09 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of USE OF CpG OLIGODEOXYNUCLEOTIDES TO INDUCE ANGIOGENESIS
EP2572707A3 (en) 2002-02-20 2013-11-06 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Microparticles with adsorbed polypeptide-containing molecules
US20040053880A1 (en) 2002-07-03 2004-03-18 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7576066B2 (en) 2002-07-03 2009-08-18 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7605138B2 (en) 2002-07-03 2009-10-20 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7569553B2 (en) 2002-07-03 2009-08-04 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7807803B2 (en) 2002-07-03 2010-10-05 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
DE10229872A1 (de) * 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
CA2484941A1 (en) 2002-07-24 2004-02-05 Intercell Ag Antigens encoded by alternative reading frame from pathogenic viruses
NZ538628A (en) * 2002-08-12 2008-06-30 Dynavax Tech Corp Immunomodulatory compositions, methods of making, and methods of use thereof
NZ538812A (en) * 2002-08-15 2009-02-28 3M Innovative Properties Co Immunostimulatory compositions and methods of stimulating an immune response
AR040996A1 (es) 2002-08-19 2005-04-27 Coley Pharm Group Inc Acidos nucleicos inmunoestimuladores
GB0220194D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Improved vesicles
EP2402026A3 (en) 2002-09-13 2012-04-18 Intercell AG Method for isolating hepatitis C virus peptides
US8263091B2 (en) 2002-09-18 2012-09-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Method of treating and preventing infections in immunocompromised subjects with immunostimulatory CpG oligonucleotides
MXPA05003049A (es) 2002-09-19 2005-11-17 Us Gov Health & Human Serv Polipeptidos de phlebotomus ariasi, polipeptidos de phlebotomus perniciosus y metodos de uso.
US7179797B2 (en) * 2002-09-27 2007-02-20 Wisconsin Alumni Research Foundation Methods and compositions for treating prostate cancer using DNA vaccines
CA2502268A1 (en) 2002-10-23 2004-05-06 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Methods for vaccinating against malaria
PT2241325E (pt) 2002-10-29 2012-04-12 Coley Pharm Gmbh Utilização de oligonucleótidos cpg no tratamento de infecção com vírus da hepatite c
MXPA05004714A (es) 2002-10-29 2006-03-17 Us Gov Health & Human Serv Polipeptidos de lutzomyia longipalpis y metodos de uso.
AU2003304107B2 (en) * 2002-11-01 2008-05-15 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Method of preventing infections from bioterrorism agents with immunostimulatory CpG oligonucleotides
EP1562982B1 (en) 2002-11-15 2010-05-05 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Unexpected surface proteins in neisseria meningitidis
EP2298360A3 (en) * 2002-11-21 2011-07-13 Bayhill Therapeutics, Inc. Methods and immune modulatory nucleic acid compositions for preventing and treating disease
US8853376B2 (en) 2002-11-21 2014-10-07 Archemix Llc Stabilized aptamers to platelet derived growth factor and their use as oncology therapeutics
US10100316B2 (en) * 2002-11-21 2018-10-16 Archemix Llc Aptamers comprising CPG motifs
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
US7354593B2 (en) 2002-12-09 2008-04-08 Merial Limited Coccidial vaccine and methods of making and using same
EP1578954A4 (en) 2002-12-11 2010-08-11 Coley Pharm Group Inc 5'-CPG NUCLEIC ACIDS AND USE METHOD
PT1992635E (pt) 2002-12-23 2012-03-20 Dynavax Tech Corp Oligonucleótidos de sequência imunoestimuladora e métodos de utilização dos mesmos
US8158768B2 (en) 2002-12-23 2012-04-17 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same
JP2006516099A (ja) 2002-12-23 2006-06-22 ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション 分枝状の免疫調節化合物及び該化合物の使用方法
AU2003299994A1 (en) 2002-12-27 2004-07-29 Chiron Corporation Immunogenic compositions containing phospholpid
ES2391770T3 (es) 2003-01-21 2012-11-29 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Uso de compuestos de triptantrina para la potenciación inmune
ATE485056T1 (de) 2003-03-24 2010-11-15 Intercell Ag Verbesserte impfstoffe
US7893096B2 (en) 2003-03-28 2011-02-22 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Use of small molecule compounds for immunopotentiation
AU2004226605A1 (en) * 2003-04-02 2004-10-14 Coley Pharmaceutical Group, Ltd. Immunostimulatory nucleic acid oil-in-water formulations for topical application
JP4850512B2 (ja) * 2003-05-15 2012-01-11 独立行政法人科学技術振興機構 免疫刺激剤
EP1631264B8 (en) 2003-06-02 2017-05-24 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic compositions based on microparticles comprising adsorbed toxoid and a polysaccharide-containing antigen
US20050013812A1 (en) * 2003-07-14 2005-01-20 Dow Steven W. Vaccines using pattern recognition receptor-ligand:lipid complexes
US20060035242A1 (en) 2004-08-13 2006-02-16 Michelitsch Melissa D Prion-specific peptide reagents
CA2536139A1 (en) 2003-09-25 2005-04-07 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid-lipophilic conjugates
GB0323968D0 (en) * 2003-10-13 2003-11-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic compositions
GEP20094767B (en) * 2003-10-30 2009-09-10 Coley Pharm Group Inc C-class oligonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory potency
US20050214316A1 (en) 2003-11-13 2005-09-29 Brown Thomas P Methods of characterizing infectious bursal disease virus
US9090673B2 (en) * 2003-12-12 2015-07-28 City Of Hope Synthetic conjugate of CpG DNA and T-help/CTL peptide
US20050175630A1 (en) * 2003-12-23 2005-08-11 Eyal Raz Immunogenic compositions and methods of use thereof
CA2553805C (en) 2004-01-21 2013-05-21 Merial Limited Improved inactivated feline calicivirus vaccines
WO2005072290A2 (en) * 2004-01-23 2005-08-11 Joslin Diabetes Center Methods of treating, reducing, or preventing autoimmune conditions
US7820175B2 (en) 2004-03-19 2010-10-26 Herbal Spring, Llc Herbal therapy for the treatment of food allergy
TWI235440B (en) * 2004-03-31 2005-07-01 Advanced Semiconductor Eng Method for making leadless semiconductor package
AU2005326144A1 (en) * 2004-06-08 2006-08-03 Coley Pharmaceutical Gmbh Abasic oligonucleotide as carrier platform for antigen and immunostimulatory agonist and antagonist
JP2008504292A (ja) 2004-06-24 2008-02-14 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド 免疫増強用の化合物
WO2006115509A2 (en) 2004-06-24 2006-11-02 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Small molecule immunopotentiators and assays for their detection
KR100958505B1 (ko) * 2004-07-18 2010-05-17 씨에스엘 리미티드 면역자극 복합체 및 향상된 인터페론-감마 반응을 유도하기위한 올리고뉴클레오티드 제제
GB0417494D0 (en) 2004-08-05 2004-09-08 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
JP2008514187A (ja) 2004-09-01 2008-05-08 ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション 先天性免疫応答及び自己免疫疾患の阻害法及び阻害用組成物
DE102004042546A1 (de) * 2004-09-02 2006-03-09 Curevac Gmbh Kombinationstherapie zur Immunstimulation
US9573979B2 (en) 2004-09-24 2017-02-21 Susanne Modrow Modified VP1-capsid protein of parvovirus B19
US7998733B2 (en) 2004-10-05 2011-08-16 Merial Limited Chimeric vectors
ES2616294T3 (es) 2005-01-27 2017-06-12 Children's Hospital & Research Center At Oakland Vacunas de vesículas basadas en GNA1870 para protección de amplio espectro contra enfermedades provocadas por Neisseria meningitidis
AU2006220835B2 (en) 2005-03-04 2012-01-19 Dynavax Technologies Corporation Vaccines comprising oligonucleotides having immunostimulatory sequences (ISS) wherein the ISS are conjugated to antigens and stabilized by buffer conditions and further excipients
JP2008535862A (ja) 2005-04-08 2008-09-04 キメリクス，インコーポレイテッド ポックスウイルス感染の治療のための化合物、組成物および方法
PT1881845E (pt) 2005-04-25 2010-05-31 Merial Ltd Vacinas de vírus nipah
EP2426141B1 (en) 2005-04-29 2014-10-01 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Method for preventing or treating M tuberculosis infection
GB0513421D0 (en) 2005-06-30 2005-08-03 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccines
WO2007004977A1 (en) 2005-07-01 2007-01-11 Index Pharmaceuticals Ab Immunostimulatory method
PL2179737T3 (pl) 2005-07-01 2014-01-31 Index Pharmaceuticals Ab Sposób do modulowania wrażliwości na steroidy
JP2009500412A (ja) * 2005-07-07 2009-01-08 コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド 癌の処置のための、抗ｃｔｌａ−４抗体とｃｐｇモチーフ含有合成オリゴデオキシヌクレオチドとの組み合わせ治療
US20080241184A1 (en) 2005-08-25 2008-10-02 Jules Maarten Minke Canine influenza vaccines
CA2625969A1 (en) 2005-10-28 2007-05-03 Index Pharmaceuticals Ab Composition and method for the prevention, treatment and/or alleviation of an inflammatory disease
US11707520B2 (en) 2005-11-03 2023-07-25 Seqirus UK Limited Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
ES2420829T3 (es) 2005-11-04 2013-08-27 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Vacunas adyuvantadas con antígeno de no virión preparadas a partir de virus de la gripe cultivados en cultivo celular
NZ568211A (en) * 2005-11-04 2011-11-25 Novartis Vaccines & Diagnostic Influenza vaccines including combinations of particulate adjuvants and immunopotentiators
EP1973608A1 (en) 2005-12-14 2008-10-01 Cytos Biotechnology AG Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity
AU2007211334A1 (en) * 2006-02-01 2007-08-09 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Polypeptide-nucleic acid conjugate for immunoprophylaxis or immunotherapy for neoplastic or infectious disorders
WO2007092315A2 (en) * 2006-02-03 2007-08-16 The Regents Of The University Of California Immunostimulation by cpg oligonucleotide-virus complexes
US20080045473A1 (en) * 2006-02-15 2008-02-21 Coley Pharmaceutical Gmbh Compositions and methods for oligonucleotide formulations
NZ571459A (en) 2006-03-29 2011-09-30 Merial Ltd Vaccine against streptococcus equi
US7862821B2 (en) 2006-06-01 2011-01-04 Merial Limited Recombinant vaccine against bluetongue virus
MX2008015529A (es) 2006-06-12 2009-01-13 Cytos Biotechnology Ag Procesos para empacar oligonucleotidos en particulas similares a virus de bacteriofagos de arn.
DE102006035618A1 (de) * 2006-07-31 2008-02-07 Curevac Gmbh Nukleinsäure der Formel (I): GlXmGn, insbesondere als immunstimulierendes Adjuvanz
AU2007280690C1 (en) 2006-07-31 2012-08-23 Curevac Gmbh Nucleic acid of formula (I): GIXmGn, or (II): CIXmCn, in particular as an immune-stimulating agent/adjuvant
PT2468300T (pt) 2006-09-26 2018-01-30 Infectious Disease Res Inst Composição para vacina contendo adjuvante sintético
US20090181078A1 (en) 2006-09-26 2009-07-16 Infectious Disease Research Institute Vaccine composition containing synthetic adjuvant
NZ575437A (en) 2006-09-27 2012-02-24 Coley Pharm Gmbh Cpg oligonucleotide analogs containing hydrophobic t analogs with enhanced immunostimulatory activity
WO2008057529A2 (en) * 2006-11-06 2008-05-15 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Peptide-based vaccine compositions to endogenous cholesteryl ester transfer protein (cetp)
US8252757B2 (en) * 2006-11-09 2012-08-28 Dynavax Technologies Corporation Long term disease modification using immunostimulatory oligonucleotides
CA2671873C (en) 2006-12-12 2018-10-09 Brian Stephen Sproat Oligonucleotides containing high concentrations of guanine monomers
US8455188B2 (en) 2007-01-26 2013-06-04 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Modification of exosomal components for use as a vaccine
HRP20161606T1 (hr) 2007-03-02 2017-01-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Novi postupak i pripravci
EP3486653A1 (en) 2007-05-24 2019-05-22 The United States Government as represented by The Department of Veterans Affairs Treatment of skeletal muscle disorder using ent2
RU2010107199A (ru) * 2007-07-31 2011-09-10 Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити (Us) Конъюгат полипептид-нуклеиновая кислота для иммунопрофилактики или иммунотерапии для неопластических или инфекционных нарушений
TR201802221T4 (tr) 2007-08-13 2018-03-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Aşılar.
KR20100075843A (ko) * 2007-08-21 2010-07-05 다이나박스 테크놀로지 코퍼레이션 인플루엔자 단백질 조성물 및 그 제조 및 사용 방법
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
CA2703931C (en) 2007-10-26 2016-08-16 Dynavax Technologies Corporation Methods and compositions for inhibition of immune responses and autoimmunity
EP3067048B1 (en) 2007-12-07 2018-02-14 GlaxoSmithKline Biologicals SA Compositions for inducing immune responses
EP2176408B9 (en) 2008-01-31 2015-11-11 Curevac GmbH NUCLEIC ACIDS COMPRISING FORMULA (NuGiXmGnNv)a AND DERIVATIVES THEREOF AS AN IMMUNOSTIMULATING AGENTS /ADJUVANTS
ES2557282T3 (es) 2008-03-10 2016-01-25 Children's Hospital & Research Center At Oakland Proteínas quiméricas de unión al factor H (fHBP) que contienen un dominio B heterólogo, y métodos de uso
US8815817B2 (en) 2008-05-15 2014-08-26 Dynavax Technologies Corporation Long term disease modification using immunostimulatory oligonucleotides
AU2009248810B2 (en) 2008-05-23 2013-12-05 The Regents Of The University Of Michigan Nanoemulsion vaccines
MX2010014026A (es) 2008-06-27 2011-02-15 Pfizer Composiciones adyuvantes novedosas.
EP2349209A2 (en) 2008-09-26 2011-08-03 Nanobio Corporation Nanoemulsion therapeutic compositions and methods of using the same
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
RU2559527C2 (ru) 2008-11-28 2015-08-10 Мериал Лимитед Рекомбинантная вакцина от птичьего гриппа и её применение
KR101413844B1 (ko) 2008-12-09 2014-06-30 화이자 백신스 엘엘씨 ＩｇＥ ＣＨ３ 펩티드 백신
WO2010092479A2 (en) 2009-02-10 2010-08-19 Novartis Ag Influenza vaccines with reduced amounts of squalene
JP6008345B2 (ja) 2009-02-27 2016-10-19 東レ株式会社 免疫原性組成物
WO2010115133A2 (en) 2009-04-03 2010-10-07 Merial Limited Newcastle disease virus vectored avian vaccines
CN102481312B (zh) 2009-06-05 2015-07-15 传染性疾病研究院 合成的吡喃葡萄糖脂佐剂
BRPI1014031A2 (pt) 2009-06-16 2018-02-20 Univ Michigan Regents vacinas de nanoemulsão
NZ598356A (en) 2009-07-30 2014-06-27 Pfizer Vaccines Llc Antigenic tau peptides and uses thereof
HUE053237T2 (hu) 2009-08-21 2021-06-28 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Rekombináns madárparamixovírus-vakcina és eljárás elõállítására és alkalmazására
US20110053829A1 (en) 2009-09-03 2011-03-03 Curevac Gmbh Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids
PE20161551A1 (es) 2009-09-03 2017-01-18 Pfizer Vaccines Llc Vacuna de pcsk9
US20130034573A1 (en) 2009-12-22 2013-02-07 Celldex Therapeutics, Inc. Vaccine compositions
CN103260643A (zh) 2009-12-28 2013-08-21 梅里亚有限公司 重组ndv抗原及其用途
US9006218B2 (en) 2010-02-12 2015-04-14 Chimerix Inc. Nucleoside phosphonate salts
US20130197612A1 (en) 2010-02-26 2013-08-01 Jack W. Lasersohn Electromagnetic Radiation Therapy
ES2617743T3 (es) 2010-03-12 2017-06-19 Merial, Inc. Vacunas recombinantes del virus de la lengua azul y sus utilizaciones
GB201005005D0 (en) 2010-03-25 2010-05-12 Angeletti P Ist Richerche Bio New vaccine
ES2910199T3 (es) 2010-03-30 2022-05-11 Childrens Hospital & Res Center At Oakland Proteínas de unión al factor H (fHbp) con propiedades alteradas y métodos de uso de las mismas
EP2575868A1 (en) 2010-06-07 2013-04-10 Pfizer Vaccines LLC Ige ch3 peptide vaccine
US8658603B2 (en) 2010-06-16 2014-02-25 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for inducing an immune response
CN103153346A (zh) 2010-06-16 2013-06-12 戴纳瓦克斯技术公司 使用tlr7和/或tlr9抑制剂的治疗方法
WO2012015979A2 (en) * 2010-07-27 2012-02-02 The Regents Of The University Of California Hmgb1-derived peptides enhance immune response to antigens
CA2801523C (en) 2010-07-30 2021-08-03 Curevac Gmbh Complexation of nucleic acids with disulfide-crosslinked cationic components for transfection and immunostimulation
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
MX350927B (es) 2010-08-26 2017-09-26 Toray Ind Inc Star Composicion inmunogenica.
WO2012030720A1 (en) 2010-08-31 2012-03-08 Merial Limited Newcastle disease virus vectored herpesvirus vaccines
RU2013120302A (ru) 2010-10-01 2014-11-20 Модерна Терапьютикс, Инк. Сконструированные нуклеиновые кислоты и способы их применения
US20120114688A1 (en) 2010-11-08 2012-05-10 Infectious Disease Research Institute Vaccines comprising non-specific nucleoside hydrolase and sterol 24-c-methyltransferase (smt) polypeptides for the treatment and diagnosis of leishmaniasis
US20140004142A1 (en) 2011-03-02 2014-01-02 Pfizer Inc. Pcsk9 vaccine
EP2691101A2 (en) 2011-03-31 2014-02-05 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
GB201106357D0 (en) 2011-04-14 2011-06-01 Pessi Antonello Composition and uses thereof
WO2012141984A1 (en) 2011-04-08 2012-10-18 Immune Design Corp. Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses
ES2764079T3 (es) 2011-05-27 2020-06-02 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vacunas genéticas contra el virus Hendra y el virus Nipah
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
SG10201701055WA (en) 2011-09-16 2017-03-30 Ucb Pharma Sa Neutralising antibodies to the major exotoxins tcda and tcdb of clostridium difficile
RU2648950C2 (ru) 2011-10-03 2018-04-02 Модерна Терапьютикс, Инк. Модифицированные нуклеозиды, нуклеотиды и нуклеиновые кислоты и их применение
EP2596806A1 (en) 2011-11-25 2013-05-29 Index Pharmaceuticals AB Method for prevention of colectomy
EP3251691B1 (en) 2011-11-30 2019-11-20 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Recombinant hvt vectors expressing antigens of avian pathogens and uses thereof
CN104114572A (zh) 2011-12-16 2014-10-22 现代治疗公司 经修饰的核苷、核苷酸和核酸组合物
WO2013113326A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen
PL2811981T3 (pl) 2012-02-07 2019-09-30 Infectious Disease Research Institute Ulepszone formulacje adiuwantowe zawierające agonistę TLR4 oraz sposoby ich zastosowania
ES2632429T3 (es) 2012-02-14 2017-09-13 Merial, Inc. Vacunas subunitarias de rotavirus y procedimientos para la fabricación y utilización de las mismas
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
AU2013243948A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9597385B2 (en) 2012-04-23 2017-03-21 Allertein Therapeutics, Llc Nanoparticles for treatment of allergy
KR102136433B1 (ko) 2012-05-16 2020-07-22 이뮨 디자인 코포레이션 Hsv-2 백신
EP2666785A1 (en) 2012-05-23 2013-11-27 Affiris AG Complement component C5a-based vaccine
ES2664069T3 (es) 2012-06-13 2018-04-18 Merial, Inc. Vacunas contra BTV y AHSV de genoma reordenado
PL2866828T3 (pl) 2012-06-27 2018-04-30 Merial, Inc. Atenuowane szczepionki przeciwko streptococcus suis oraz sposoby ich wytwarzania i zastosowania
PL2874656T3 (pl) 2012-07-17 2018-04-30 Merial, Inc. Atenuowane szczepionki przeciw grypie świń oraz ich sposoby wytwarzania i zastosowanie
EP2703483A1 (en) 2012-08-29 2014-03-05 Affiris AG PCSK9 peptide vaccine
NZ706288A (en) 2012-08-30 2016-06-24 Merial Inc Expression of chimeric ksac protein and method of producing soluble proteins by high pressure
US9555098B2 (en) 2012-09-10 2017-01-31 Merial Inc. Attenuated parvovirus vaccine for Muscovy duck parvovirus and goose parvovirus (Derzsys disease)
EP3384927B1 (en) 2012-11-08 2022-07-06 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Attenuated manheimia haemolytica vaccines and methods of making and use
WO2014081507A1 (en) 2012-11-26 2014-05-30 Moderna Therapeutics, Inc. Terminally modified rna
SG11201504841YA (en) 2012-12-18 2015-07-30 Merial Ltd High resolution melt genotyping od ibv, csfv and ndv
WO2014121096A1 (en) 2013-02-01 2014-08-07 Auburn University New modified live flavobacterium strains, stabilized vaccines comprising same, and methods of making and use thereof
BR112015021970A2 (pt) 2013-03-14 2017-07-18 Massachusetts Inst Technology composições à base de nanopartículas
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
EP2978447B1 (en) 2013-03-28 2019-05-08 Infectious Disease Research Institute Vaccines comprising leishmania polypeptides for the treatment and diagnosis of leishmaniasis
CN105188741A (zh) 2013-04-03 2015-12-23 阿勒丁医疗公司 新型纳米颗粒组合物
EP2986303B1 (en) 2013-04-18 2020-02-26 Immune Design Corp. Gla monotherapy for use in cancer treatment
JP2016520077A (ja) 2013-05-15 2016-07-11 ザ ガバナーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ アルバータ Ｅ１ｅ２ｈｃｖワクチン及び使用方法
US9463198B2 (en) 2013-06-04 2016-10-11 Infectious Disease Research Institute Compositions and methods for reducing or preventing metastasis
BR112016003361A2 (pt) 2013-08-21 2017-11-21 Curevac Ag vacina do vírus sincicial respiratório (rsv)
KR101943171B1 (ko) 2013-09-19 2019-01-29 조에티스 서비시즈 엘엘씨 유성 아쥬반트
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
JP2016538829A (ja) 2013-10-03 2016-12-15 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 低密度リポタンパク質受容体をコードするポリヌクレオチド
ES2824402T3 (es) 2013-11-01 2021-05-12 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vacunas atenuadas contra Pasteurella multocida y procedimientos de fabricación y uso de las mismas
US10208102B2 (en) 2013-11-01 2019-02-19 University Of Oslo Albumin variants and uses thereof
ES2806575T3 (es) 2013-11-01 2021-02-18 Curevac Ag ARN modificado con propiedades inmunoestimuladoras disminuidas
WO2015070207A2 (en) 2013-11-11 2015-05-14 The Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of The Army Ama-1 epitopes, antibodies, compositions, and methods of making and using the same
EP3069138B1 (en) 2013-11-15 2019-01-09 Oslo Universitetssykehus HF Ctl peptide epitopes and antigen-specific t cells, methods for their discovery, and uses thereof
WO2015077442A2 (en) 2013-11-20 2015-05-28 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Grass pollen immunogens and methods and uses for immune response modulation
US20160287696A1 (en) 2013-11-20 2016-10-06 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Pan pollen immunogens and methods and uses for immune response modulation
WO2015092710A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Glaxosmithkline Biologicals, S.A. Contralateral co-administration of vaccines
IL310015B2 (en) 2013-12-31 2026-02-01 Access To Advanced Health Inst Single vial formulation
US10195270B2 (en) 2014-02-06 2019-02-05 Japan Science And Technology Agency Peptide/β-1,3-glucan complex and production method thereof and pharmaceutical composition containing peptide/β-1,3-glucan complex
WO2015123291A1 (en) 2014-02-11 2015-08-20 The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Pcsk9 vaccine and methods of using the same
WO2015131053A1 (en) 2014-02-28 2015-09-03 Alk-Abelló A/S Polypeptides derived from phl p and methods and uses thereof for immune response modulation
TR201907352T4 (tr) 2014-03-25 2019-06-21 Merial Inc Atenüe edi̇lmi̇ş histophilus somni i̇çeren i̇mmünoloji̇k bi̇leşi̇mler
CA2936286A1 (en) 2014-04-01 2015-10-08 Curevac Ag Polymeric carrier cargo complex for use as an immunostimulating agent or as an adjuvant
US9713639B2 (en) 2014-05-19 2017-07-25 Merial, Inc. Recombinant spike protein subunit based vaccine for porcine epidemic diarrhea virus (PEDV)
EP4112076A1 (en) 2014-10-10 2023-01-04 The Regents of The University of Michigan Nanoemulsion compositions for preventing, suppressing or eliminating allergic and inflammatory disease
DK3244920T5 (da) 2015-01-16 2024-10-07 Zoetis Services Llc Mund- og klovsyge-vaccine
US10647964B2 (en) 2015-03-05 2020-05-12 Northwestern University Non-neuroinvasive viruses and uses thereof
WO2016183423A1 (en) 2015-05-14 2016-11-17 Merial Inc. Method for porcine circovirus production and pcv2 vaccines
US10751412B2 (en) 2015-05-29 2020-08-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Combination of a PD-1 antagonist and CPG-C type oligonucleotide for treating cancer
DK3313864T3 (da) 2015-06-23 2021-11-01 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Rekombinante virusvektorer indeholdende prrsv minor protein og fremgangsmåder til fremstilling og anvendelse deraf
NZ739260A (en) 2015-06-26 2019-09-27 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Inactivated canine influenza vaccines and methods of making and uses thereof
EP3313866B1 (en) 2015-06-29 2024-11-20 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Compositions and methods for treating cancer and promoting wound healing
WO2017020026A1 (en) 2015-07-30 2017-02-02 Modernatx, Inc. Concatemeric peptide epitopes rnas
WO2017031120A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Merial, Inc. Fcv recombinant vaccines and uses thereof
EP4480544A3 (en) 2015-08-25 2025-03-26 Babita Agrawal Immunomodulatory compositions andmethods of use thereof
FI3355915T3 (fi) 2015-09-29 2024-01-12 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Koirien parvoviruksen (CPV) viruksen kaltaisten hiukkasten (VLP) rokotteet ja niiden käytöt
MX390292B (es) 2015-10-08 2025-03-20 Pasteur Institut Vacuna heterologa atenuada viva para leptospira.
CA3000313A1 (en) 2015-10-08 2017-04-13 The Governors Of The University Of Alberta Hepatitis c virus e1/e2 heterodimers and methods of producing same
EP3364949A4 (en) 2015-10-22 2019-07-31 ModernaTX, Inc. CANCER VACCINES
US10780158B2 (en) 2015-11-16 2020-09-22 Georgia State University Research Foundation, Inc. Tunable vaccine platform against pathogens of the paramyxovirus family
MA42640B1 (fr) 2015-11-23 2021-06-30 Merial Inc Protéines de fusion de dmdv et e2 et leurs utilisations
TWI760322B (zh) 2016-01-29 2022-04-11 美商百靈佳殷格翰動物保健美國有限公司 重組腺病毒載體裝載之fmdv疫苗及其用途
AU2017232546B2 (en) 2016-03-14 2024-05-02 Universitetet I Oslo Engineered immunoglobulins with altered FCRN binding
WO2017158421A1 (en) 2016-03-14 2017-09-21 University Of Oslo Anti-viral engineered immunoglobulins
US10485857B2 (en) 2016-04-07 2019-11-26 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Heartworm vaccine, methods and uses thereof
EA039370B1 (ru) 2016-04-14 2022-01-19 Мериал, Инк. Иммуногенная многодозовая композиция, содержащая антимикробный полиамидный консервант
WO2017201390A1 (en) 2016-05-19 2017-11-23 The Regents Of The University Of Michigan Novel adjuvant compositions
US11780924B2 (en) 2016-06-21 2023-10-10 University Of Oslo HLA binding vaccine moieties and uses thereof
MX2019002178A (es) 2016-08-23 2019-09-18 Glaxosmithkline Biologicals Sa Peptidos de fusion con antigenos enlazados a fragmentos cortos de cadena invariante (cd74).
BR112019004913B1 (pt) 2016-09-16 2022-07-12 Infectious Disease Research Institute Vacinas que compreendem polipeptídeos de mycobacterium leprae para a prevenção, tratamento e diagnóstico de lepra
EP3518966A1 (en) 2016-09-29 2019-08-07 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Compositions and methods of treatment of persistent hpv infection
JOP20190088A1 (ar) 2016-10-21 2019-04-21 Us Agriculture نواقل مؤتلفة للتعبير عن مولدات مضاد فيروس انفلونزا الطيور و استخداماتها
WO2018096396A1 (en) 2016-11-22 2018-05-31 University Of Oslo Albumin variants and uses thereof
EA201991319A1 (ru) 2016-11-30 2019-11-29 Вакцины аттенуированного свиного гриппа и способы их изготовления и применения
GB201620968D0 (en) 2016-12-09 2017-01-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Adenovirus polynucleotides and polypeptides
CN117357642A (zh) 2016-12-14 2024-01-09 勃林格殷格翰动物保健美国公司 表达禽病原体的多种抗原的重组hvt载体及其用途
EP3391903B1 (en) 2017-04-21 2022-02-23 The Pirbright Institute Recombinant gallid herpesvirus 3 vaccines encoding heterologous avian pathogen antigens
AU2018325528A1 (en) 2017-08-31 2020-04-16 Newport Laboratories, Inc. Streptococcus suis vaccines to protect against reproductive, nursery-age, and growing pig diseases and methods of making and use thereof
EP3678699A1 (en) 2017-09-07 2020-07-15 University Of Oslo Vaccine molecules
EP3678698A1 (en) 2017-09-07 2020-07-15 University Of Oslo Vaccine molecules
CA3078223A1 (en) 2017-09-08 2019-03-14 Infectious Disease Research Institute Liposomal formulations comprising saponin and methods of use
US11633471B2 (en) 2018-03-06 2023-04-25 Unm Rainforest Innovations Compositions and methods for reducing serum triglycerides
JP2021526831A (ja) 2018-06-12 2021-10-11 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム アデノウイルスポリヌクレオチド及びポリペプチド
US20210283238A1 (en) 2018-08-07 2021-09-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Novel processes and vaccines
EP3897846A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 GlaxoSmithKline Biologicals SA Methods of inducing an immune response
JP2022520925A (ja) 2019-01-04 2022-04-04 ベーリンガー インゲルハイム アニマル ヘルス ユーエスエイ インコーポレイテッド 弱毒化ボルデテラ・ブロンキセプチカ株、当該弱毒化株を含む経口ワクチン並びに前記の製造及び使用方法
EP3976092A1 (en) 2019-05-25 2022-04-06 Infectious Disease Research Institute Composition and method for spray drying an adjuvant vaccine emulsion
EP4058581A1 (en) 2019-11-15 2022-09-21 Infectious Disease Research Institute Rig-i agonist and adjuvant formulation for tumor treatment
US12533418B2 (en) 2019-11-22 2026-01-27 Glaxosmithkline Biologicals Sa Dosage and administration of a bacterial saccharide glycoconjugate vaccine
CN117120087A (zh) 2020-12-23 2023-11-24 高级健康研究所 茄尼醇疫苗助剂及其制备方法
WO2022147373A1 (en) 2020-12-31 2022-07-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antibody-guided pcsk9-mimicking immunogens lacking 9-residue sequence overlap with human proteins
US12343375B2 (en) 2021-02-09 2025-07-01 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Spray dried formulation of a cholera toxin B subunit variant
EP4313132A1 (en) 2021-03-31 2024-02-07 Vib Vzw Vaccine compositions for trypanosomatids
WO2023081486A1 (en) 2021-11-08 2023-05-11 Nurix Therapeutics, Inc. Toll-like receptor therapy combinations with cbl-b inhibitor compounds

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1234718A (en) 1914-03-21 1917-07-31 Int Harvester Canada Buckle.
ZA695759B (en) * 1968-09-19 1971-03-31 Merck & Co Inc Stimulation of antibody response
US3725545A (en) 1971-02-03 1973-04-03 R Maes Enhancement of antibody production by nucleic acid-polycation complexes
US3906092A (en) 1971-11-26 1975-09-16 Merck & Co Inc Stimulation of antibody response
US5015733A (en) 1983-12-20 1991-05-14 California Institute Of Technology Nucleosides possessing blocked aliphatic amino groups
US5118802A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
US4849513A (en) 1983-12-20 1989-07-18 California Institute Of Technology Deoxyribonucleoside phosphoramidites in which an aliphatic amino group is attached to the sugar ring and their use for the preparation of oligonucleotides containing aliphatic amino groups
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5268365A (en) 1988-03-11 1993-12-07 Rudolph Frederick B Nucleotides, nucleosides, and nucleobases in immune function restoration enhancement or maintenance
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
EP0468520A3 (en) 1990-07-27 1992-07-01 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences
AU705889B2 (en) 1993-08-26 1999-06-03 Regents Of The University Of California, The Method, compositions and devices for administration of naked polynucleotides which encode antigens and immunostimulatory peptides
US6037329A (en) * 1994-03-15 2000-03-14 Selective Genetics, Inc. Compositions containing nucleic acids and ligands for therapeutic treatment
WO1995026204A1 (en) * 1994-03-25 1995-10-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
ATE509102T1 (de) 1994-07-15 2011-05-15 Univ Iowa Res Found Immunomodulatorische oligonukleotide
US5780448A (en) * 1995-11-07 1998-07-14 Ottawa Civic Hospital Loeb Research DNA-based vaccination of fish
EP0879284B1 (en) 1996-01-30 2009-07-29 The Regents of The University of California Gene expression vectors which generate an antigen specific immune response and methods of using the same
ES2241042T3 (es) 1996-10-11 2005-10-16 The Regents Of The University Of California Conjugados de polinucleotido inmunoestimulador/ molecula inmunomoduladora.
EP0855184A1 (en) 1997-01-23 1998-07-29 Grayson B. Dr. Lipford Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination
WO1998037919A1 (en) 1997-02-28 1998-09-03 University Of Iowa Research Foundation USE OF NUCLEIC ACIDS CONTAINING UNMETHYLATED CpG DINUCLEOTIDE IN THE TREATMENT OF LPS-ASSOCIATED DISORDERS
CA2289741A1 (en) 1997-05-19 1998-11-26 Merck & Co., Inc. Oligonucleotide adjuvant
WO1998055495A2 (en) 1997-06-06 1998-12-10 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
DK1009413T3 (da) * 1997-09-05 2007-06-11 Univ California Anvendelse af immunstimulerende oligonukleotider til forebyggelse eller behandling af astma
US7223398B1 (en) 1999-11-15 2007-05-29 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory compositions containing an immunostimulatory sequence linked to antigen and methods of use thereof
CA2404041A1 (en) * 2000-03-28 2001-10-04 The Regents Of The University Of California Methods for increasing a cytotoxic t lymphocyte response in vivo

Also Published As

Publication number Publication date
EP1537877A2 (en) 2005-06-08
US20040006010A1 (en) 2004-01-08
US7208478B2 (en) 2007-04-24
ATE292980T1 (de) 2005-04-15
EP1537877A3 (en) 2005-08-03
US6610661B1 (en) 2003-08-26
US20030232780A1 (en) 2003-12-18
AU4992197A (en) 1998-05-11
WO1998016247A1 (en) 1998-04-23
DE69733020T2 (de) 2006-02-16
DE69733020D1 (de) 2005-05-19
JP2001503254A (ja) 2001-03-13
EP0930893B1 (en) 2005-04-13
CA2268825C (en) 2006-04-18
CA2268825A1 (en) 1998-04-23
JP4111403B2 (ja) 2008-07-02
EP0930893A1 (en) 1999-07-28

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